Memoria para optar al Título Profesional de Bioquímico / La colonización del Pacífico se gestó en dos grandes procesos de migración: el primero alrededor de 50.000 a 30.000 años antes del presente, y el segundo hace 5.000 a 1.000 años antes del presente. Este último gran movimiento fue complejo y se ha estudiado integrando evidencias arqueológicas, lingüísticas y genéticas con el propósito de dilucidar incógnitas como las diferentes rutas migratorias propuestas sobre el poblamiento de Oceanía. Entre los modelos de estudios genéticos se han analizado muestras humanas, pero éstas presentan diversas complejidades que limitan el alcance de los estudios con este modelo. Por este motivo, surgen los estudios de especies asociadas a los colonizadores polinésicos, de los cuales se han analizado especies animales y vegetales. Entre estos últimos se encuentra la morera de papel (Broussonetia papyrifera), una planta nativa de Asia e introducida a la región de Oceanía Remota. Debido a su uso como fuente de fibra vegetal para textiles y la importancia cultural que representa, resulta interesante abordar su estudio para aportar a la comprensión de las rutas migratorias en Oceanía Remota. La principal herramienta de los estudios genéticos son los marcadores moleculares, que corresponden a regiones de ADN que presentan cierto grado de variabilidad detectable. En B. papyrifera se han analizado regiones de ADN ribosomal y de ADN de cloroplastos, encontrando ausencia de diversidad en muestras de Oceanía Remota. Una alternativa para este tipo de análisis podría ser el uso de marcadores basados en retrotransposones, los cuales han sido descritos como ubicuos en plantas y como fuente de gran diversidad genética. Entre los marcadores basados en retrotransposones se encuentran los Inter-Retrotransposon Amplified Polymorphisms (IRAP) y Retrotransposon-Microsatellite Amplified Polymorphisms (REMAP), los cuales amplifican regiones entre secuencias de Repeticiones Terminales Largas (LTR), o entre LTR y secuencias microsatélites, respectivamente. Estos marcadores han sido ampliamente empleados en estudios de diversidad genética debido a su facilidad de uso. En base a los antecedentes presentados, se plantea la siguiente hipótesis: “El estudio de B. papyrifera por medio de marcadores moleculares basados en retrotransposones IRAP y REMAP permite detectar diversidad genética presente en muestras obtenidas de Oceanía Remota que no han sido diferenciadas mediante otros marcadores moleculares”. Con el objetivo de caracterizar la diversidad genética de muestras de B. papyrifera provenientes de Oceanía Remota usando marcadores IRAP y REMAP, se seleccionaron partidores a partir de la literatura para el análisis de muestras de B. papyrifera del hábitat nativo y de la región introducida. En primer lugar, se corroboró que las secuencias amplificadas mediante estos marcadores corresponden a retroelementos, caracterizando cinco secuencias amplificadas con un marcador IRAP. Estas secuencias corresponden a dos posibles tipos de elementos TRIM (Terminal-repeat Retrotransposon In Miniature), los cuales son derivados cortos de retrotransposones que conservan algunas regiones características de retroelementos, pero carecen de marcos de lectura abiertos funcionales. En una etapa siguiente se estandarizaron los protocolos IRAP y REMAP para obtener patrones de amplificación óptimos. Además, se ajustaron las condiciones de electroforesis y de captura de imagen. Inicialmente, se probaron 45 combinaciones de partidores IRAP y 36 combinaciones de partidores REMAP con un grupo de cuatro muestras de prueba de Oceanía Remota. A partir de los resultados obtenidos, se seleccionaron cuatro combinaciones REMAP para analizar 55 muestras representativas del banco genómico de B. papyrifera de distintas localidades del Pacífico. Estos análisis mostraron una baja diversidad genética, apoyando la noción de una dispersión clonal de la morera de papel en las distintas islas del Pacífico. Esta información complementa los resultados obtenidos con otros marcadores utilizados en esta y otras especies, y favorecen modelos migratorios como el “tren rápido” o el de la “Triple I”. Esta memoria de título constituye el primer estudio de retrotransposones en B. papyrifera y abre la posibilidad a nuevos trabajos que profundicen el análisis de la dispersión y la diversificación clonal de la morera de papel en Oceanía Remota, considerando que los retroelementos han sido descritos como fuente importante de diversidad en otras especies vegetales / The human colonization of the Pacific occurred in two major stages: the first migration took place about 50,000 to 30.000 years before present, and the second stage occurred more recently, about 5.000 to 1.000 years before present. This latter large movement was complex and has been widely studied gathering archeological, linguistic and genetic evidence in order to elucidate questions such as the different routes proposed for the settlement of Oceania. Human samples have been analyzed using genetic tools, but these present several complexities that limit their scope. Therefore studies centered on human-associated species (known as commensal species) arise. Animal and plant species have been studied, and among the latter, paper mulberry (Broussonetia papyrifera), a plant native from Asia and introduced in the Remote Oceania Region has been used a commensal model species. Due to its use as a fiber source to make textiles and the cultural importance of paper mulberry, it is interesting to address the study of this species to contribute to the understanding of migratory routes in Remote Oceania. Molecular markers are the main tools to analyze DNA regions that present genetic diversity. In B. papyrifera, ribosomal and chloroplast DNA regions have been analyzed, finding no genetic diversity in samples from Remote Oceania. An alternative to approach this kind of analysis could be the use of retrotransposon-based markers, which have been reported as ubiquitous and a major source of genetic diversity in plants. Retrotransposon-based markers are Inter-Retrotransposon Amplified Polymorphisms (IRAP) and Retrotransposon-Microsatellite Amplified Polymorphisms (REMAP), among others. IRAP and REMAP amplify regions between Long Terminal Repeats (LTR), or between LTR and microsatellites, respectively. These markers are easy to apply and have been widely used for genetic diversity studies in different plant species. Based on this background, the following hypothesis is proposed: “The study of B. papyrifera by retrotransposon-based markers IRAP and REMAP allow to detect genetic diversity in samples from Remote Oceania not previously differentiated with others molecular markers”. In order to characterize the genetic diversity of B. papyrifera samples from Remote Oceania by IRAP and REMAP, primers were selected from the literature to analyze samples of B. papyrifera from native and introduced areas. First, we checked that the amplified sequences with these primers were obtained from retroelements. Five sequences amplified with an IRAP marker were characterized and shown to correspond to two types of TRIM (Terminal-repeat Retrotransposon In Miniature) elements, which are short retrotransposon derivatives that have some conserved regions characteristic of retroelements, but lack functional open reading frames. Then, protocols for IRAP and REMAP amplification were standardized in order to obtain optimal amplification patterns. In addition, electrophoresis and image capture conditions were defined. From 45 IRAP and 36 REMAP primer combinations, 4 REMAP combinations showed distinct amplification patterns in a reduced group of B. papyrifera samples from Remote Oceania. The results obtained from the analysis of 55 samples of B. papyrifera using four selected REMAP markers showed little diversity, supporting the notion of a clonal dispersal of paper mulberry among Pacific islands. These results complement data obtained with others markers in paper mulberry and other species, and are consistent with the previously proposed models of human colonization of the Pacific as the “fast train” or the “Triple-I” models. The present work is the first retrotransposon study in B. papyrifera and opens the possibility to further work to analyze the clonal dispersal and diversification of paper mulberry in Remote Oceania, considering that retroelements have been described as an important source of molecular diversity in plant species / Fondecyt

El presente estudio tuvo como objetivo aislar, identificar glicoalcaloides esteroidales de las hojas de Solanum albidum Dunal y Solanum oblongifolium Dunal y evaluar su actividad citotóxica y antimicrobiana; las especies mencionadas fueron colectadas en el departamento de Cajamarca, provincia de San Ignacio. Los glicoalcaloides fueron identificados por el método cromatográfico y espectrofotometría infrarroja; y la cuantificación por titulación potenciométrica automática por punto de inflexión. Para evaluar la actividad citotóxica se empleó el método de desarrollo embrionario en huevos fértiles de erizo de mar (Tetrapigus níger) donde los glicoalcaloides de Solanum albidum Dunal y Solanum oblongifolium Dunal presentaron actividad citotóxica, La evaluación de la actividad antimicrobiana se llevó a cabo mediante el método de recuento en placa con las siguientes cepas Escherichia coli ATCC® 8739, Pseudomonas aeruginosa ATCC® 9027, Salmonella enterica ATCC® 14028, Staphylococcus aureus ATCC® 6538, Aspergillus brasiliensis ATCC® 16404, Candida albicans ATCC® 10231, donde se demostró dicha actividad. / -- The purpose of the present study was to isolate, identify, and assess the content of steroidal glycoalkaloids (SGAs) from leafs of Solanum albidum Dunal and Solanum oblongifolium Dunal belonging to province San Ignacio, Cajamarca. Also, it was determined their citotoxicity and antimicrobial activity. The steroidal glycoalkaloids were identified by means of chromatography and infrared spectrophotometric analyses. The content of steroidal glycoalcaloids was quantified by automatic potentiometric titulation using the inflection point. The citotoxic activity of SGAs was observed in sea urchin embryos Tetrapygus niger. The antimicrobial and antifungal activities were evaluated by using the plate counting method, including the following type strains respectively: Escherichia coli (ATCC 8739), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 9027), Salmonella enterica (ATCC 14028), Staphylococcus aureus (ATCC 6538), Aspergillus brasiliensis (ATCC 16404), and Candida albicans (ATCC 10231), which showed that activity

Objetivo: Comparar los perfiles de seguridad de la Anfotericina B complejo lipídico y Anfotericina B convencional. Metodología: Se analizaron todas las historias clínicas de pacientes del Hospital Nacional “Edgardo Rebagliati Martins”que recibieron anfotericina B, tanto en terapia confirmada de infecciones fúngicas como en terapia empírica en sospecha de infección fúngica o como medicamento antileishmaniásico durante el periodo comprendido desde el 01 de Agosto del 2011 hasta el 31 de Julio del año 2012. 76 pacientes cumplieron con criterios de inclusión y exclusión. Se evaluó las dosis administradas, las pruebas de laboratorio de cada paciente antes, durante y después del tratamiento, junto con las observaciones registradas por el médico tratante y las notas de enfermería. Resultados: No se encontraron diferencias estadísticas significativas en la efectividad clínica de anfotericina B deoxicolato (48,5%) –AmB– y anfotericina B complejo lipídico (60%) –ABCL– (p-valor 0.421); tampoco se encontraron diferencias en la eficacia clínica (50,0% para AmB vs 66,7% para ABCL, p-valor 0.348). De las reacciones intrínsecas al medicamento, se encontró diferencias estadísticas significativas a nivel de perfil renal en el incremento de creatinina sérica tanto en presencia (79,7% para AmB vs 50% para ABCL, OR 0.25 IC 95% [0.087 – 0.74], p-valor 0.009) como en probabilidad de incremento mayor igual al 20% (p-valor 0.03); sin embargo, no se encontraron diferencias significativas en la presencia de lesión renal aguda (40,6% para AmB y 30% para ABCL, p-valor 0.393). 9,6% de pacientes que utilizaron AmB presentó falla renal (Lesión renal estadío 3/ RIFLE-F). No se encontraron diferencias significativas a nivel de perfil hematológico y hepático. Según los criterios CIOMS modificados, la presencia de hepatotoxicidad fue de 21,7% para AmB y 37,5% para ABCL (p-valor 0.60). Respecto a las reacciones debidas a infusión, se encontraron diferencias significativas en la presencia de náuseas (25,0% para AmB vs 56,5% para ABCL, p-valor 0.006), fiebre (28,1% para AmB vs 52,2% para ABCL, p-valor 0.037), y escalofríos (3,1% para AmB vs 30,4% para ABCL, p-valor 0.001), sin embargo no se encontraron diferencias significativas en la presencia de vómitos, malestar general, hipertensión y flebitis. Conclusiones: Anfotericina B complejo lipídico muestra una eficacia y efectividad comparable al de anfotericina B deoxicolato. Se encontraron diferencias estadísticas significativas en el incremento de creatinina a favor de anfotericina B complejo lipídico. Palabras clave: Anfotericina B deoxicolato, Anfotericina B complejo lipídico, lesión renal aguda, hepatotoxicidad, reacciones adversas. / Objective: To compare the safety profiles of amphotericin B lipid complex and conventional amphotericin B. Methods: It was analyzed the medical records of all patients of "Edgardo Rebagliati Martins" National Hospital who received amphotericin B, both confirmed fungal infections and empirical therapy of suspected fungal infection or as antileishmanial drug during the period from 1 August 2011 until 31 July 2012. 76 patients met inclusion and exclusion criteria. It was evaluated the administered dose, laboratory tests of each patient before, during and after treatment with those recorded observations by the attending physician and nursing notes. Results: No statistically significant differences were found in the clinical effectiveness of amphotericin B deoxycholate (48.5%) - AmB - and amphotericin B lipid complex (60 %) - ABCL -(p - value 0.421), no differences were found in the clinical efficacy (50.0 % vs 66.7 % for AmB for ABCL, p- value 0.348). Of intrinsic drug reactions, statistically significant differences at the level of renal profile was found in the serum creatinine increase both in the presence (79.7% vs 50 % for AmB for ABCL, OR 0.25 95% CI [0.087 to 0.74] , p- value 0.009) and more likely to increase at least 20% (p- value 0.03 ), but no significant differences were found in the presence of acute renal injury (40.6 % for AmB and 30% for ABCL, p- value 0.393). 9.6% of patients using AmB had renal failure (kidney injury stage 3 / RIFLE -F). No significant differences at the level of haematological and liver function were found. According to CIOMS modified criteria, the presence of hepatotoxicity was 21.7% and 37.5% for AmB for ABCL (p- value 0.60). Concerning infusion reactions, there was significant differences in the presence of nausea (25.0% vs 56.5 % for AmB for ABCL, p- value 0.006), fever (28.1% were found for AmB vs 52.2 % for ABCL, p- value 0.037), and chills (3.1% for AmB vs. 30.4 % ABCL, p- value 0.001), however no significant differences were found in the presence of vomiting, malaise, hypertension and phlebitis. Conclusions: Amphotericin B lipid complex shows efficacy and effectiveness comparable to that of amphotericin B deoxycholate. Statistically significant differences in the increase of creatinine in favor of amphotericin B lipid complex were found. Keywords: Amphotericin B deoxycholate, amphotericin B lipid complex, acute renal injury, hepatotoxicity, adverse reactions.

Investiga la resistencia bacteriana al ión mercurio (Hg2+) en 55 cepas de Escherichia coli aisladas de diferentes ambientes marinos de la costa limeña: Bahía de Pucusana, Bahía de Miraflores y Bahía del Callao (Lima-Perú). Se determinan los diferentes serogrupos de las cepas, utilizando sueros polivalentes EPEC, EIEC y EHEC; la resistencia al mercurio es evaluada realizando pruebas de MIC a cloruro de mercurio: 30, 50, 80, 100, 200, 300 y 400 µM/mL disuelto en caldo LB. Se evalúa las cepas mercurio-resistentes frente a antibióticos clínicos por la técnica de difusión en placa usando los siguientes antibióticos en discos: Cloramfenicol (C), 30 µg; Norfloxacina (Nor),10 µg; Amikacina (Ak), 30 µg; Kanamicina (K), 30 µg; Ampicilina (A), 10 µg; Sulfaperazone (Sfp), 30 µg; Tetraciclina (Te), 30 µg; Aztreonam (Az), 30 µg; Ceftazidima (Caz), 30 µg; Gentamicina (Ge), 10 µg; Amoxicilina (Amx), 25 µg; Sulfametoxazol-trimetoprim (Sxt), 25 µg; Ácido Nalidíxico (W), 30 µg; Ciprofloxacina (Cip), 5 µg. El origen de la resistencia al mercurio mediada por plásmidos se comprueba mediante la técnica de curación con SDS (10 % p/v); se realiza la técnica de conjugación de plásmidos tomando la cepa receptora E. coli DH5α. Para la visualización de los plásmidos conjugativos se realiza la técnica de extracción de plásmidos con el método de Lisis Alcalina con SDS en las cepas receptoras mercurio-resistentes. Así mismo se evalúa la presencia del gen merA, que se encuentra en el operón mer, por el método del PCR tomando como DNA molde los plásmidos aislados. Del total de las cepas de E. coli (n=55) estudiadas, el 29,1 % (n=16) resultan ser positivas para los serogrupos EPEC, de éstas: 31,25 % EPEC poliA, 50 % EPEC poliB, 18,75 % EPEC poliC. El 74,54 % (n=41) son resistentes al mercurio en distintas concentraciones, de éstas el 34,15 % son resistentes a antibióticos; se observa la resistencia al mercurio mediada por plásmidos en el 80,5 %. De las cepas mercurio resistentes, el 14,63 % (n=6) muestran ser portadores de plásmidos conjugativos, observándose la presencia de estos en las cepas receptoras mercurio resistentes. Se observa la presencia truncada o aberrante del gen merA en los plásmidos aislados, confirmando la frecuencia del operón mer en el 14,63 % de las cepas mercurio resistentes. / Tesis

El presente estudio tuvo como objetivo aislar, identificar glicoalcaloides esteroidales de las hojas de Solanum albidum Dunal y Solanum oblongifolium Dunal y evaluar su actividad citotóxica y antimicrobiana; las especies mencionadas fueron colectadas en el departamento de Cajamarca, provincia de San Ignacio. Los glicoalcaloides fueron identificados por el método cromatográfico y espectrofotometría infrarroja; y la cuantificación por titulación potenciométrica automática por punto de inflexión. Para evaluar la actividad citotóxica se empleó el método de desarrollo embrionario en huevos fértiles de erizo de mar (Tetrapigus níger) donde los glicoalcaloides de Solanum albidum Dunal y Solanum oblongifolium Dunal presentaron actividad citotóxica, La evaluación de la actividad antimicrobiana se llevó a cabo mediante el método de recuento en placa con las siguientes cepas Escherichia coli ATCC® 8739, Pseudomonas aeruginosa ATCC® 9027, Salmonella enterica ATCC® 14028, Staphylococcus aureus ATCC® 6538, Aspergillus brasiliensis ATCC® 16404, Candida albicans ATCC® 10231, donde se demostró dicha actividad. / The purpose of the present study was to isolate, identify, and assess the content of steroidal glycoalkaloids (SGAs) from leafs of Solanum albidum Dunal and Solanum oblongifolium Dunal belonging to province San Ignacio, Cajamarca. Also, it was determined their citotoxicity and antimicrobial activity. The steroidal glycoalkaloids were identified by means of chromatography and infrared spectrophotometric analyses. The content of steroidal glycoalcaloids was quantified by automatic potentiometric titulation using the inflection point. The citotoxic activity of SGAs was observed in sea urchin embryos Tetrapygus niger. The antimicrobial and antifungal activities were evaluated by using the plate counting method, including the following type strains respectively: Escherichia coli (ATCC 8739), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 9027), Salmonella enterica (ATCC 14028), Staphylococcus aureus (ATCC 6538), Aspergillus brasiliensis (ATCC 16404), and Candida albicans (ATCC 10231), which showed that activity

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-08-27Bitstream added on 2014-06-13T18:44:36Z : No. of bitstreams: 1 ponsoni_k_dr_arafcf_parcial.pdf: 291098 bytes, checksum: ded44be69f5a06409ab135b631b76818 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-10-03T16:24:38Z: ponsoni_k_dr_arafcf_parcial.pdf,Bitstream added on 2014-10-03T16:27:36Z : No. of bitstreams: 2 ponsoni_k_dr_arafcf_parcial.pdf.txt: 9765 bytes, checksum: 6a53e824c7376acd98b390476f4febe5 (MD5) 000706924.pdf: 1415375 bytes, checksum: a00e2e39155c8dd73399a29f7d5fe6bd (MD5) Bitstreams deleted on 2014-10-03T16:33:13Z: 000706924.pdf,Bitstream added on 2014-10-03T16:43:27Z : No. of bitstreams: 2 ponsoni_k_dr_arafcf_parcial.pdf.txt: 9765 bytes, checksum: 6a53e824c7376acd98b390476f4febe5 (MD5) 000706924.pdf: 1415375 bytes, checksum: a00e2e39155c8dd73399a29f7d5fe6bd (MD5) Bitstreams deleted on 2014-10-03T16:48:53Z: 000706924.pdf,Bitstream added on 2014-10-03T16:49:45Z : No. of bitstreams: 1 000706924.pdf: 1415375 bytes, checksum: a00e2e39155c8dd73399a29f7d5fe6bd (MD5) Bitstreams deleted on 2014-10-27T11:47:06Z: 000706924.pdf,Bitstream added on 2014-10-27T11:48:03Z : No. of bitstreams: 1 000706924.pdf: 1415375 bytes, checksum: a00e2e39155c8dd73399a29f7d5fe6bd (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O glicoalcalóide esteroidal solamargina (SM) e sua aglicona solasodina (SD), isolados de frutos de Solanum palinacanthum (juá), foram avaliados in vitro quanto à citotoxicidade, mutagenicidade, atividade antimicrobiana na presença de sistema de metabolização microssomal hepático (fração S9). A viabilidade das linhagens celulares RAW 264.7, SiHa e HepG2 expostas a diferentes concentrações (200 – 6,25 µg/mL) dos alcalóides, na presença ou não da fração S9, foi avaliada após 24 horas pela técnica do MTT-tetrazólio e Vermelho Neutro (VN). A curva dose-resposta indicou que a fração microssomal diminui o efeito citotóxico dos alcalóides para as linhagens RAW e SiHA, entretanto essa atividade foi potencializada para a linhagem HepG2. Atividade antibacteriana para Staphylococcus aures, Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa, através da técnica de microdiluição, demonstrou que a fração S9 potencializou esse efeito para ambos os alcalóides, entretanto a concentração inibitória mínima (CIM) só foi definida para S. aureus (1,0 mg/mL), porém apenas com efeito bacteriostático. O teste de mutagenicidade, realizado pela técnica de AMES, demonstrou efeito mutagênico apenas para a SM na linhagem TA98 na ausência de ativação metabólica nas concentrações acima de 400 µg/mL. Espectrometria de massas foi utilizada para comparar os fragmentos gerados pelos alcalóides após metabolização com a fração S9. A análise espectral evidenciou a presença de diferentes fragmentos, indicando biotransformação dos alcalóides / The steroidal glycoalkaloid solamargine (SM) and its aglycone solasodine (SD), isolated from fruits of Solanum palinacanthum (juá) were evaluated in vitro for cytotoxicity, mutagenicity, antimicrobial activity in the presence of hepatic microsomal metabolizing system (S9 fraction). The viability of RAW 264.7 cell lines, SiHa and HepG2 cells exposed to different concentrations (200 to 6.25 mg/mL) of alkaloids, in the presence or absence of S9 fraction was analyzed after 24 hours using the techniques of the MTT-tetrazolium and Neutral Red (RN). The dose-response curve indicated that the microsomal fraction decreased to cytotoxic of alkaloids lines for RAW and Siha, however this activity has was potentiated to the HepG2. Antibacterial activity Staphylococcus aures, Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa by the microdilution technique, showed that the fraction S9 potentiated the effect to both alkaloids, however the minimum inhibitory concentration (MIC) was defined only for S. aureus (1.0 mg / mL), but without bactericidal effect. The mutagenicity test, performed by the technique of AMES, demonstrated mutagenic effect only for the SM strain TA98 in the absence of metabolic activation at concentrations above 400 mg/mL. Mass spectrometry was used to compare the fragments generated by alkaloids after metabolization with S9 fraction. Spectral analysis showed the presence of different fragments, indicating biotransformation of alkaloids

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T04:30:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 282466.pdf: 9853650 bytes, checksum: bbea26b8767078edc352a095e4d16200 (MD5) / Crustinas são peptídeos antimicrobianos que integram o sistema imune inato dos crustáceos e atuam na defesa destes animais contra infecções, juntamente com outras moléculas imunoefetoras presentes na hemolinfa. O objetivo do presente trabalho foi clonar e expressar, em sistema heterólogo, uma crustina do camarão nativo Farfantepenaeus paulensis para avaliar sua atividade antimicrobiana e produzir anticorpos policlonais para imunolocalizar este peptídeo nas diferentes populações de hemócitos deste peneídeo, assim como em diferentes grupos de crustáceos. Por abordagem molecular, foi possível clonar uma sequência gênica correspondente a uma crustina, com características do subgrupo da crustina I, que denominamos de crusFpau2. A crusFpau2 apresentou 94% de homologia com a única isoforma já descrita em F. paulensis (crusFpau). Esta nova isoforma caracteriza-se por apresentar uma região N-terminal rica em resíduos de glicina, além da região C-terminal com doze resíduos conservados de cisteína, onde se encontra um domínio WAP (whey acidic protein). A crusFpau2 foi expressa em E. coli BL21(DE3)pLysS com peso molecular de 17,3 kDa e foi utilizada para avaliar sua atividade antimicrobiana e produzir anticorpos policlonais em camundongo. A crustina recombinante mostrou-se ativa contra a bactéria Micrococcus luteus. Através de imunomarcação foi possível determinar que as crustinas são produzidas de forma constitutiva apenas nos hemócitos granulares (HGs) de F. paulensis, sendo armazenadas em seus grânulos. Aparentemente, estas proteínas não são processadas no interior dos grânulos e não são secretadas para a hemolinfa. Os anticorpos produzidos contra a crusFpau2 recombinante foram ainda capazes de reconhecer especificamente crustinas nos hemócitos granulares de outros grupos de crustáceos (Litopenaeus vannamei, Macrobrachium potiuna e Callinectes sapidus), mas não no mexilhão marinho Perna perna. Estes resultados sugerem que as crustinas são peptídeos de ocorrência geral em crustáceos. Este é o primeiro trabalho que produziu um peptídeo antimicrobiano a partir de uma espécie nativa brasileira de crustáceos marinhos, além de produzir os primeiros anticorpos contra crustinas até o momento. Estes anticorpos constituem uma ferramenta importante para imunomarcar especificamente populações de hemócitos granulares de crustáceos, além de auxiliar a uma melhor compreensão do sistema imune deste grupo zoológico, que inclui muitas espécies de interesse econômico. Por fim, uma avaliação futura mais detalhada do seu real espectro antimicrobiano poderá revelar o seu potencial promissor como agente terapêutico para aquicultura e saúde humana.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Prtograma de Pós-Graduação em Biotecnologia / Made available in DSpace on 2012-10-23T03:17:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 240183.pdf: 698488 bytes, checksum: 20b2234d82bd9de7fb818bafbded8a81 (MD5) / Peptídeos ou proteínas antimicrobianas (PAM) são componentes do sistema imune inato, presentes na maioria dos seres vivos, que vêm despertando um crescente interesse, uma vez que podem apresentar uma atividade antimicrobiana potente contra um amplo espectro de microrganismos, sendo usualmente atóxicos para células de mamíferos. No presente trabalho, foi investigada a atividade antibacteriana, antifúngica, antiparasitária e hemolítica, assim como a estabilidade em diferentes salinidades, de diferentes peptídeos isolados de animais aquáticos: taquiplesina (Taq), do limulídeo Tachypleus tridentatus, magainina (Mag), do anfíbio Xenopus laevis, clavanina (Clav), do tunicado Styela clava, peneidina (Pen), do camarão Litopenaeus vannamei, mitilina (Mit) do mexilhão Mytilus edulis e o fator anti-lipopolissacarídeo (ALF) do camarão Penaeus monodon. Os diferentes PAM foram testados contra bactérias marinhas do gênero Vibrio, leveduras e fungos filamentosos, de interesse médico e para aqüicultura. Para tanto, estes microrganismos foram incubados em microplacas (96 poços) com diluições seriadas dos diferentes PAM e o crescimento microbiano foi monitorado através de densidade óptica (630nm) e/ou ensaio colorimétrico (INT) no caso de bactérias, determinando-se a concentração mínima inibitória (MIC) e bactericida (MBC) para cada peptídeo. A Mag, Mit, e principalmente a Taq e o ALF (MIC < 1.5 M) apresentaram uma evidente atividade anti-víbrio. Quanto à atividade antifúngica, a Mag e a Taq foram ativas contra a maioria dos fungos testados (com exceção do dermatófito Microsporum canis), enquanto a Clav e Pen não tiveram efeito contra nenhuma espécie avaliada. A Mit e o ALF foram ativos contra fungos do gênero Fusarium de importância para aqüicultura. De modo geral, os PAM investigados neste estudo mostraram uma tendência de diminuir ou perder sua atividade em altas salinidades (> 250mM NaCl), sendo a Taq e a Mit os peptídeos mais estáveis nas diferentes concentrações de NaCl testadas. Curiosamente, todos os PAM utilizados neste estudo perderam sua atividade em presença de água do mar. A atividade antiparasitária dos diferentes PAM foi avaliada contra formas promastigota de Leishmania braziliensis e epi e tripomastigota (infectiva para mamíferos) de Trypanosoma cruzi. Os parasitos foram incubados com diluições seriadas dos diferentes PAM por períodos de 5 a 7h (atividade parasiticida) e de 24 e 72h (atividade antiproliferativa), utilizando um ensaio colorimétrico de viabilidade celular (MTT). A Taq mostrou-se o peptídeo mais potente, inibindo em 100% o crescimento de L. braziliensis e de formas tripomastigota de T. cruzi a partir de 12,5 M. A Pen e a Clav foram ativas somente contra formas tripomastigota de T. cruzi, e a Mit contra L. braziliensis, porém apenas em altas concentrações (100 M). Dos PAM investigados, a Taq e a Mag apresentaram a maior atividade hemolítica em altas concentrações (>12,5 M), sendo que os demais causaram baixas taxas de hemólise (<10%) até 50 M. Os resultados obtidos neste estudo apontam para a Taq como um peptídeo promissor para uso terapêutico em aqüicultura e saúde humana, uma vez que mostrou uma acentuada atividade antimicrobiana e antiparasitária, sendo relativamente pouco hemolítico nas concentrações em que foi ativo e sendo ainda muito estável em diferentes salinidades. Já ALF e a Mit mostraram-se moléculas potencialmente interessantes mais especificamente para aqüicultura.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2008 / Made available in DSpace on 2012-10-23T21:55:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 252767.pdf: 4389713 bytes, checksum: 337433916becf25cfc1cf824772a9c06 (MD5) / O conhecimento sobre os aspectos relacionados à utilização dos antimicrobianos pode subsidiar a elaboração de políticas de utilização, bem como contribuir para a reorientação das estratégias utilizadas no controle desses agentes. Objetivo: Descrever quantitativamente o padrão de consumo de antimicrobianos no Hospital Universitário da Universidade Federal de Santa Catarina, no período de 2000 a 2006. Método: A pesquisa adotou a metodologia ATC/DDD e seguiu o modelo de estudo descritivo, com coleta de dados retrospectiva no período de 2000 a 2006, sendo os resultados expressos em DDD/100 leitos/dia. Os dados de consumo dos antimicrobianos foram obtidos a partir dos registros de dispensação desses medicamentos, disponibilizados pelo Serviço de Farmácia. Os dados referentes à ocupação hospitalar, foram obtidos por meio do Serviço de Prontuário do Paciente. Os valores correspondentes a DDD (dose diária definida) de cada fármaco foram obtidos por meio do Índice ATC/DDD, versão 2007. A análise das tendências de variação no consumo dos antimicrobianos foi realizada por regressão linear simples, e os valores de P <0,05 foram considerados estatisticamente significantes. Resultados: Os resultados mostraram um aumento de 50% no consumo global dos antimicrobianos, passando de 64,3 DDD/100 leitos/dia, em 2000, para 96,8 DDD/100 leitos/dia, em 2006, correspondendo a uma média de 70,58 DDD/100 leitos/dia no período. Os antimicrobianos mais consumidos corresponderam à classe das penicilinas (30,8%), seguidas por cefalosporinas (25,5%) e quinolonas (11,3%). Estes grupos foram responsáveis por 67% do consumo dos antimicrobianos. As demais classes de antimicrobianos utilizadas foram sulfonamidas e antissépticos urinários (6,9%), antifúngicos (5,8%), nitroimidazólicos (4,9%), aminoglicosídeos (4,1%), lincosamidas (4,1%), glicopeptídeos (2,3%), carbapenêmicos (2,2%), macrolídeos (1,1%), tetraciclinas (0,4%), antivirais (0,3%), anfenicóis (0,1%), polimixinas (0,002%) e monobactâmicos (0,001%). O fármaco mais consumido no período de estudo foi a ceftriaxona (6,25 DDD/100 leitos/dia), seguido por ampicilina + sulbactam (5,04 DDD/100 leitos/dia), benzilpenicilina potássica (4,14 DDD/100 leitos/dia), cefazolina (3,78 DDD/100 leitos/dia) e metronidazol de uso parenteral (3,20 DDD/100 leitos/dia). A análise por regressão linear simples mostrou um grupo de 12 fármacos com tendência a aumento no uso e um outro grupo de 12 agentes com tendência à redução de consumo. Conclusões: O consumo de antimicrobianos apresentou oscilações importantes e aumentou expressivamente no período estudado. Diante da importância do uso racional desses agentes, há necessidade de uma reorientação das estratégias adotadas para o controle desses medicamentos, bem como da realização de estudos complementares que possam orientar a implementação de ações voltadas ao monitoramento contínuo dos antimicrobianos no hospital.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Alimentos, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-11-03T03:07:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 335758.pdf: 3974478 bytes, checksum: 8a773095fbca544d3e2f65fe6eec0afc (MD5) Previous issue date: 2015 / As inovações proporcionadas pela redução de tamanho de partículas tornam o estudo de materiais nanométricos de enorme importância. Entre essas propriedades, a ação antimicrobiana de nanopartículas de óxido de zinco (NPs-ZnO) vem se destacando. O objetivo deste trabalho foi incorporar NPs-ZnO em filmes de polietileno de baixa densidade (PEBD) e polietileno de baixa densidade linear modificado com anidrido maleico (PEBDL-AM) e avaliar a atividade antimicrobiana frente às bactérias Bacillus cereus, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa e Salmonella Typhimurium. Os filmes foram incorporados com 10,0; 5,0; 1,0 e 0,5 % de NPs-ZnO por extrusão e por aspersão das NPs-ZnO sobre o filme. As NPs-ZnO foram identificadas como nanobastões com comprimento entre 90,1 e 100,0 nm (10,5 %) e espessura entre 80,1 e 90,0 nm (21 %). As dispersões das nanopartículas em água Milli-Q e os filmes foram avaliados em relação à ação antimicrobiana pelo método de difusão em ágar e diluição em caldo e pelo comportamento do crescimento microbiano. A concentração inibitória mínima e a concentração bactericida mínima das dispersões das NPs-ZnO foram estabelecidas como 0,05 mg/mL e 0,5 mg/mL, respectivamente, para Staphylococcus aureus e Salmonella Thiphymurium. A bactéria Pseudomonas aeruginosa mostrou-se pouco sensível as NPs-ZnO em dispersão ou incorporadas aos filmes. Frente ao Bacillus cereus, as NPS-ZnO não apresentaram efeito antimicrobiano. Os filmes incorporados com NPs-ZnO por extrusão apresentaram superfície lisa e não apresentaram ação antimicrobiana, sugerindo que as NPs-ZnO ficaram aprisionadas no interior da matriz polimérica, não permitindo o contato com os micro-organismos. Efeito bacteriostático foi observado nos filmes incorporados com NPs-ZnO por aspersão frente à Staphylococcus aureus. Frente a Salmonella Typhimurium, o filme de PEBDL-AM incorporado com 10 % de NPs-ZnO apresentou efeito bactericida e o filme de PEBD para mesma concentração reprimiu o crescimento microbiano, porém para as demais concentrações a bactéria mostrou-se pouco sensível. A análise de FTIR dos filmes de PEBDL-AM indica a reação entre as NPs-ZnO e o anidrido maleico presente no polímero. Não foi observada diferença na molhabilidade dos filmes. Este estudo amplia o interesse da aplicação de NPs-ZnO para a garantia da segurança dos alimentos.<br> / Abstract : The innovation provided by the reduction in particle size turned into the study of nanometric materials of great importance. Among these properties, the antimicrobial action of zinc oxide nanoparticles (ZnO-NPs) has been outstanding. The aim of this work was to incorporate ZnO-NPs on films low density polyethylene (LDPE) and linear low density polyethylene modified with maleic anhydride (LLDPE-MA) and evaluate the antimicrobial activity against the bacterias Bacillus cereus, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa and Salmonella Typhimurium. Films were incorporated with 10,0; 5,0; 1,0 e 0,5 % de ZnO-NPs by extrusion and spraying the ZnO-NPs onto the films. ZnO-NPs were identified as nanorods with a length of 90.1 to 100,0 nm (10.5%) and a thickness of 80.1 to 90,0 nm (21%). Dispersions of nanoparticles in Milli-Q and films were evaluated for antimicrobial activity by the disk diffusion and broth dilution and by behavior of microbial growth. The minimum inhibitory concentration and minimum bactericidal concentration of dispersions ZnO-NPs were determined to be 0.05 mg/mL and 0.5 mg/mL, respectively against Staphylococcus aureus and Salmonella Thiphymurium. Bacteria Pseudomonas aeruginosa showed little sensitivity ZnO-NPs in dispersion or incorporated into the films. Against Bacillus cereus, ZnO-NPS showed no antimicrobial effect. The films incorporated ZnO-NPs by extrusion showed smooth surface and showed no antimicrobial action, suggesting that the ZnO-NPs were entrapped within the polymeric matrix, preventing contact with the micro-organisms. Bacteriostatic effect was observed in ZnO-NPs films by spraying against Staphylococcus aureus. Against Salmonella Typhimurium, LLDPE-MA film incorporated with 10,0 % ZnO-NP showed bactericidal effect and LDPE film for same concentration suppressed microbial growth, however for the other concentrations of bacteria showed little sensitive. FTIR analysis of the LLDPE-MA films indicated a reaction between ZnO-NPs and maleic anhydride present in the polymer. No significant difference was observed in the wettability of the films. These results further the interest of the application of ZnO-NPs to food safety.