Nos ambientes hospitalares, crescente importância têm sido dada ao estudo dos bioaerossóis, principalmente em áreas onde pacientes suscetíveis a doenças causadas pela exposição a estes elementos estejam internados, como unidades hematológicas e de terapia intensiva. Entre os diferentes métodos utilizados para amostrar o ar no ambiente hospitalar, destaca-se o uso de amostradores que permitem a impactação direta de partículas em placas de ágar, a exemplo do coletor de Andersen®. Estes equipamentos fornecem informações qualitativas e quantitativas quanto à presença de conídios fúngicos nos ambientes avaliados, sendo possível relatar o resultado em unidades formadoras de colônia por metro cúbico de ar. Apesar de diversos estudos terem sido realizados para avaliar a qualidade do ar em ambientes internos, ainda não foi estabelecida uma padronização para níveis aceitáveis de fungos em ambientes não equipados com filtros de alta eficiência (HEPA). Além disso, a concentração de fungos nos ambientes sofre influências de diversas variáveis, incluindo as características físicas das partículas, fatores ambientais e outras situações, como a presença de obras e tipos de filtro de ar condicionado. Neste estudo, avaliou-se a qualidade do ar de duas unidades de terapia intensiva em hospitais universitários de Porto Alegre, no intuito de estudar a quantidade de fungos presentes nestas unidades, correlacionando os achados com variáveis ambientais e com o isolamento de fungos a partir de amostras clínicas. / Increasing importance has been given to the study of bioaerosols in hospital environments, mainly in areas where patients that are susceptible to diseases caused by fungal exposure are admitted, such as in hematological units and in the intensive care. Among the different methods used to sample the air in a hospital environment, emphasis has been put on the use of samplers that allow direct impaction of particles in agar plates such as the Andersen sampler. This equipment provides qualitative and quantitative information regarding the presence of fungal conidia in the environment, providing results in terms of number of colony forming units per m3 of sampled air. However, guidelines on how to interpret fungal concentrations in areas that are not equipped with high efficiency particulate air filters (HEPA) are not available. It is well known the concentration of fungi in the environments is influenced by several variables, including the physical characteristics of the particles, environmental factors and others, such as the presence of construction works and air conditioning filter types. In this study, we evaluated the air quality of three intensive care units in university hospitals in Porto Alegre. Our aim was to study the quantity of fungi present in these units, correlating the findings with environmental variables and the recovery of fungi from clinical samples.

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-07-19T18:24:12Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Ferreira, Ana Linda(DISSERTAÇÃO)CCB2009.pdf: 1144954 bytes, checksum: b5eed6f792e3bf8f3955d20456a59951 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-19T18:24:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Ferreira, Ana Linda(DISSERTAÇÃO)CCB2009.pdf: 1144954 bytes, checksum: b5eed6f792e3bf8f3955d20456a59951 (MD5) Previous issue date: 2009-02-27 / CAPES / A β-Galactosidase de Aspergillus oryzae foi imobilizada covalentemente em Sephadex G-50 revestido com polianilina (Sephadex-PANI), via glutaraldeído e disposta em coluna vertical (2cm x 10 cm). A microscopia eletrônica de varredura e a analise elementar mostrou a superfície rugosa das pérolas do Sephadex alteradas e a presença de nitrogênio respectivamente após o revestimento com PANI. O fluxo da coluna foi testado (0,125-1,25 mL min-1) e 0,8 mL min-1 foi estabelecido como sendo a melhor condição. A atividade da coluna do derivado enzimático (Sephadex-PANI-β-Galactosidase) foi realizada circulando na coluna uma solução de ortho-nitrophenyl-β-galactoside (ONPG; 3 mL) a um fluxo de 0,8 mL min-1 e o derivado enzimático (Sephadex-PANI-β-Galactosidase) apresentou um pH ótimo (4,5) e temperatura ótima (50 °C) semelhante ao da enzima livre. A quantidade de enzima imobilizada e a retenção específica de atividade enzimática comparada com a enzima solúvel foram 100% e 90%, respectivamente. O derivado enzimático foi reutilizado 10 vezes retendo cerca de 100% da atividade inicial e armazenado por aproximadamente dois anos mantendo 90% da sua atividade. A lactose do leite foi parcialmente convertida em glicose e galactose ao ser circulado na coluna de Sephadex-PANI-β-Galactosidase. Assim, a coluna do derivado enzimático (Sephadex-PANI-β-Galactosidase) pode ser proposta para a remoção contínua de lactose do leite. Futuramente, outras enzimas poderão ser covalentemente imobilizadas em colunas de Sephaedx-PANI e usadas em aplicações biotecnológicas. / β-Galactosidase from Aspergillus oryzae was covalently immobilized onto Sephadex G-50 coated with polyaniline (Sephadex-PANI), via glutaraldehyde, and arranged in a vertical column. The scanning electron microscopy and elemental analyses showed the rugose surface of the Sephadex beads altered and the presence of nitrogen, respectively, after PANI coating. The activity of the Sephadex-PANI-β-Galactosidase column (2cm x 10 cm) was assayed by circulating a solution of ortho-nitrophenyl-β-galactoside (ONPG; 3 mL) at a flow rate of 0.8 mL min-1 and its optima pH and temperature were found to be 4.5 and 50 °C, respectively, similar to those estimated for the free enzyme. The amount of immobilized protein and retention of specific enzymatic activity compared with the free enzyme were 100% and 90%, respectively. The enzymatic column was reused 10-times retainning about 100% of its initial activity. When stored for almost two years the derivative retained about 90% of its initial activity. Milk lactose was partially converted to glucose and galactose by circulating it through the Sephadex-PANI-β-Galactosidase column. Therefore, column of Sephadex-PANI-β-Galactosidase can be proposed for the continuos remotion of lactose from milk. Furthermore, other enzymes can be covalently immobilized on Sephaedx-PANI column and applied in biotechnology.

MORAES, Heloiza Maria da Silva Oliveira, também é conhecida em citações bibliográficas por: OLIVEIRA, Heloiza Maria da Silva / Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-09-10T21:49:54Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Heloiza Maria da Silva Oliveira Moraes.pdf: 2441845 bytes, checksum: 729eabcd58170c1f8279e2dc1becc442 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-09-17T18:07:36Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Heloiza Maria da Silva Oliveira Moraes.pdf: 2441845 bytes, checksum: 729eabcd58170c1f8279e2dc1becc442 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-17T18:07:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Heloiza Maria da Silva Oliveira Moraes.pdf: 2441845 bytes, checksum: 729eabcd58170c1f8279e2dc1becc442 (MD5) Previous issue date: 2015-04-30 / CNPq / Espécies de Aspergillus são sapróbias presentes no solo ou matéria vegetal em decomposição e dependendo do estado imunológico do hospedeiro, podem causar infecções fúngicas oportunistas, como aspergilose invasiva. Os objetivos deste trabalho foram analisar a variabilidade genética, quantificar melanina e gliotoxina em 57 isolados de A. fumigatus, A. flavus e A. niger de origens ambiental e clínica e estabelecer um modelo experimental de aspergilose pulmonar. Através do uso de marcadores moleculares ISSR, foi avaliada a variabilidade genética entre os isolados. Os isolados de A. flavus, com o uso dos marcadores (GACA)₄ e (GTG)₅, apresentaram agrupamentos em função da origem. O marcador (GTG)₅ foi o que melhor separou os isolados em função da origem clínica ou ambiental, enquanto o marcador (GACA)₄ foi o que mostrou melhor a variabilidade genética entre os isolados. Os conídios de todos os isolados produziram partículas de melanina, a partir de uma sequência de tratamentos com enzimas, agentes desnaturantes e ácido concentrado em alta temperatura, não havendo diferença estatística em função da espécie e do substrato. A análise dos espectros de infravermelho do pigmento produzido por cada isolado mostrou diferenças entre os perfis de melanina. As partículas escuras foram visualizadas em microscopia óptica e eletrônica de varredura. Oito isolados de A. fumigatus produziram gliotoxina nas condições de cultivo e análise estabelecidas, sendo quantificada por cromatografia líquida de alta eficiência, e as concentrações mínima e máxima de 0,039mg/ml e 0,150mg/ml, respectivamente, com destaque para o isolado URM3812. Houve diferença estatística na quantidade de gliotoxina entre isolados da mesma espécie e o substrato de origem. Os isolados de A. flavus e A. niger não produziram gliotoxina nas condições estabelecidas. O modelo experimental foi estabelecido com sucesso utilizando os isolados URM3812, produtor de gliotoxina de origem ambiental e URM6753, não produtor de origem clínica, no qual ambos os isolados foram capazes de reproduzir a doença, não havendo diferenças no dano tecidual. / Aspergillus species are saprophytic present in soil or rotten vegetal material, and depending on the immune status of the host can cause opportunistic fungal infections such as invasive aspergillosis. The objectives of this study were to analyze the genetic variability, quantify melanin and gliotoxin in 57 isolates of A. fumigatus, A. flavus and A. niger environmental and clinical sources and establish an experimental model of pulmonary aspergillosis. The use of molecular markers ISSR evaluated the genetic variability among isolates. The isolates of A. flavus, with the use of the markers (GACA)₄ and (GTG)₅ showed groups according to the origin. The marker (GTG)₅ was the best separated the isolates to the clinical or environmental origin, the marker (GACA)₄ was the best showed the genetic variability among isolates. Conidia of all isolates produced melanin particles, from a sequence of treatments with enzymes, denaturing agents and concentrated acid at high temperature, with no statistical difference depending on the species and the substrate. Analysis of the infrared spectra of the pigment produced by each isolate showed differences in melanin profiles. The dark particles were visualized in light microscopy and scanning electron microscopy. Eight isolates of A. fumigatus produced gliotoxin in growing conditions and analysis determined, and quantified by high performance liquid chromatography, and minimum and maximum concentrations of 0,039mg/ml and 0,150mg/ml, respectively, standing out the isolated URM3812. There was a statistical difference in the amount of gliotoxin among isolates of the same species and the substrate of origin. The isolates of A. flavus and A. niger produced no gliotoxin the established conditions. The experimental model was successfully established using isolated URM3812, gliotoxin producer of environmental origin and URM6753, not producer of clinical origin, in which the isolates were able to reproduce the disease, with no differences in tissue damage.

O cultivo de Aspergillus oryzae IPT-301 em meio líquido foi estudado para avaliar a influência do pH e do suprimento de oxigênio sobre o crescimento fúngico e a formação de pectinases. Definiuse um meio limitante para o crescimento com as seguintes concentrações: farelo de trigo em extrato aquoso, 40g/L; glicose, 5g/L; sulfato de amônio, 5g/L; pectina cítrica (indutor), 20g/L. O indutor foi estudado quanto ao momento de adição ao meio. Com adição em 24h de cultivo, a máxima concentração de biomassa foi atingida em cerca de 70h, quase 48h depois do observado no ensaio controle. A atividade enzimática máxima (27U/mL) foi semelhante à condição de referência (24U/mL), mas a ausência da pectina no início do processo facilitou a mistura e o controle do pH e do oxigênio dissolvido. No caso, reduziram-se a máxima frequência dos agitadores do biorreator (650 para 600rpm) e o período de tempo em que este nível de agitação precisou ser mantido para possibilitar a oxigenação do meio (30h para 12h), o que favoreceria a preservação do micélio. Valores constantes e variáveis de pH do meio foram comparados em ensaios com adição de pectina em 24h e sem controle de oxigênio dissolvido. Verificou-se que o pH constante de 4,0 favoreceu o crescimento, que atingiu 4,5g/L, porém a atividade enzimática foi insignificante (1,4U/mL). Quando o pH decresceu naturalmente até o mínimo de 2,7, foram atingidos concentração de biomassa de 4,0g/L e atividade de pectinases de 24U/mL; na sequência, porém, a atividade baixou para 2U/mL, acompanhando o aumento do pH após 96h de processo. Entretanto, em cultivo em que o pH foi controlado em 2,7 nas horas finais do processo, a atividade enzimática foi preservada. Estes resultados, juntamente com os de ensaios enzimáticos, demonstraram que as pectinases de A. oryzae perdem a estabilidade à medida que o pH aumenta. O ensaio com pH constante em 2,7 foi o único em que a atividade pectinolítica foi superior quando a pectina esteve presente desde o início do cultivo. Possivelmente, a limitação do crescimento celular (máximo de 3,5g/L) favoreceu os mecanismos de transferência e mistura, prolongando a viabilidade celular. Cultivos com pH controlado em 4,0 no período de intenso crescimento celular e em 2,7 para a produção de pectinases (Ensaios T5 e T10) resultaram em elevadas atividades enzimáticas, especialmente quando a pectina foi adicionada em 24h (43U/mL). No caso, as mais efetivas condições de transferência de oxigênio e mistura, aliadas ao pH adequado ao crescimento, permitiram que a biomassa atingisse 6,3g/L e, após a redução do pH a 2,7, a atividade pectinolítica foi incrementada. Ensaios com oxigênio dissolvido em mínimo de 30% da saturação foram conduzidos em duas condições: Ensaio B5 - pH inicial 4,0 e controlado em 2,7 após atingir este valor; Ensaio B6 - pH constante em 4,0 até 24h, seguido de redução para 2,7 e controle neste valor. As concentrações celulares atingidas em B5 (6,0g/L) e em B6 (6,8g/L) foram semelhantes à de T10, mas suas máximas atividades pectinolíticas – 106 e 120U/mL, respectivamente – foram as maiores deste estudo. Estes resultados se deveram, provavelmente, à intensificação do metabolismo fúngico associado à disponibilidade ilimitada de oxigênio. Apesar de o tempo para atingir os picos de biomassa e atividade enzimática ter sido aumentado, a produtividade do Ensaio B6 foi 3,7 vezes maior que a do controle. Os resultados deste trabalho confirmaram que o pH e o suprimento de oxigênio em cultivos de A. oryzae afetam decisivamente tanto o crescimento quanto a produção de pectinases. As condições operacionais definidas possibilitaram a redução do crescimento celular – permitindo, entretanto, a obtenção de atividades enzimáticas elevadas – e, em decorrência, um controle eficiente dos parâmetros estudados. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The cultivation of Aspergillus oryzae IPT-301 in liquid medium was studied to assess the influence of pH and oxygen supply on the fungal growth and the formation of pectinases. A growthlimiting medium was defined with the following concentrations: wheat bran in aqueous extract, 40g/L; glucose, 5g/L; ammonium sulphate, 5g/L; citric pectin (inducer), 20g/L. The inducer was evaluated with respect to the time of addition to the medium. With the addition in 24h of cultivation, maximum biomass concentration was achieved in 70h, almost 48h after reaching the cell growth peak of the control experiment. The maximum enzyme activity (27U/mL) was similar to that of the reference run (24U/mL), but the absence of pectin at the beginning of the process favoured mixing and the control of pH and dissolved oxygen concentration. In this case, the maximum impeller speed in the bioreactor (650 to 600rpm) and the time period that this level of agitation was maintained to provide the best possible medium oxygenation were reduced (30 to 12h), a condition that could favour the preservation of mycelium. Constant and varied medium pH values were evaluated in experiments with the addition of pectin in 24h and without dissolved oxygen concentration control. It was found that a constant pH of 4.0 favoured biomass growth, but the enzyme activity was insignificant (1.4U/mL). When the pH naturally decreased up to a minimum of 2.7, biomass concentration of 4.0g/L and pectinase activity of 24U/mL were attained; in the sequence, however, the activity fell to 2U/mL following the increase of pH observed after 96h. Nevertheless, in the cultivation in which the pH 2.7 was maintained though the final hours of process, the enzyme activity was preserved. These results together with those from enzymatic tests have shown that A. oryzae pectinases loose stability as pH rises. The experiment with constant pH at 2.7 was the only that results in superior pectinase activity with pectin present in the medium from the beginning of the cultivation. Possibly, cell growth limitation (maximum of 3.5g/L) favoured mass transfer and mixing mechanisms and the biomass viability was extended. Cultivations with the pH controlled at 4.0 when the cell growth was more intense and, afterwards, at 2.7 for pectinase production (Experiments T5 and T10) result in high enzyme activities, especially when pectin was added in 24h (43U/mL). In the case, the more effective conditions of oxygen transfer and mixing, allied to the adequate pH for cell growth, allowed that biomass concentration achieved 6.3g/L and, after reducing the pH to 2.7, pectinolytic activity as increased. Experiments with dissolved oxygen concentration at a minimum of 30% of saturation were carried out at two conditions: Experiment B5 - initial pH 4.0 and controlled at 2.7 after reaching this value; Experiment B6 – constant pH up to 24h, followed by reduction to 2.7 and control at this value. The cell concentrations achieved in B5 (6.0g/L) and in B6 (6.8g/L) were similar to that of T10, but their maximum pectinase activities – 106 and 120U/mL, respectively – were the largest in this study. Such results were probably due to the raising fungal metabolism which is associated to the unlimited oxygen availability. Although the time to reach the peaks of biomass and enzyme activity has been increased, the productivity of Experiment B6 was 3.7 times larger than that of the control run. The results of this work have confirmed that, in cultivations of A. oryzae, the pH and the oxygen supply decisively affect both cell growth and pectinase production. The defined operational conditions provided the reduction of cell growth – allowing, however, the achievement of high enzyme activities – and, consequently, an efficient control of the studied parameters.

Orientador: Lucia R. Durrant / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-23T01:26:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Penteado_AnaLuciaPontes_M.pdf: 3527644 bytes, checksum: 81979414cbe26790e215eee48df453fa (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Noventa linhagens de microrganismos isolados das diferentes etapas da Estação de tratamento de efluente (E.T.E.) de uma cervejaria situada na região de Campinas - SP e cinco fungos provenientes da coleção do Laboratório de Sistemática e Fisiologia Microbiana (L.S.F.M.) foram estudados quanto a capacidade de redução da DQO do efluente oriundo do tanque de equalização Ef1. Foram selecionadas três linhagens que apresentaram melhor capacidade de redução de DQO, sendo que duas (Aspergillus niger e Aspergillus fumigatus) pertencem a coleção do L.S.F.M. e uma foi isolada da ETE tendo sido identificada como Bacillus cereus. Foi estudada a influência de diversos fatores tais como: influência do pH inicial do meio de crescimento (Ef1), tamanho de inóculo, adição de (NH4)2S04' tempo de crescimento, associação e imobilização dos fungos A. niger e A. fumigatus na redução da DQO do efluente proveniente do tanque de equalização Ef1. s resultados foram satisfatórios, sendo que a cepa de Bacillus cereus apresentou uma faixa de 58,70 à 84,72% para redução da DQO, já para os fungos Aspergillus niger e Aspergillus fumigatus os resultados foram de 30,00 - 81,81% e de 75,49 - 80,43% respectivamente, nos tempos de crescimento e pH inicial do meio Ef1 de maior eficiência deredução de DQO. A adição de (NH4)2S04 ao efluente Ef1 resultou numa melhora na redução da DQO para todos os microrganismos estudados. A imobilização fúngica de A. fumigatus em espuma de poliuretana foi eficaz no estudo de redução da DQO de efluentes / Abstract: Ninety strains of microorganisms isolated from different stages of a wastewater treatment plant (W.T.P.) of a brewery at Campinas region - São Paulo and tive fungi from the Microbial Physiology Systematic Laboratory (M.P.S.L.) collection were studied in relation to their chemical oxigen demand (COD) reducing capacity of the effluent from the equalization tank Ef1. Three strains that have been shown the best reducing ability were selected, two of which (Aspergillus niger and Aspergillus fumigatus) belonging to the M.P.S.L. and one was isolated from the W.T.P. have been identified as Bacillus cereus. The influence of various factors was studied such as: the initial pH of the growing medium (Ef1), inoculum size, addition of a nitrogen souce, growing time, association and immobilization of the fungi A. niger and A. fumigatus in removing effluent chemical oxygen demand from the equalization tank Ef1. The results were satisfactory. The Bacillus cereus strain shown a range from 58,70 to 84,72% for the COD removing, for the fungi Aspergillus niger and Aspergillus fumigatus the results were from 30,40 to 81,81 % and from 75,49 to 80,43% respectively, at the growing times and initial pH ofthe medium Ef1 which gave the best results in COD removing. The addition of (NH4)ZS04 to the Ef1 effluent resulted in a improvement of COD reduction for all microorganisms studied. In the study of effluents COD reduction, the Aspergillus fumigatus immobilization in polyurethane foam was efficient / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador: Marta Cristina Teixeira Duarte / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-26T00:07:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Possari_CamilaKopezky_M.pdf: 2524622 bytes, checksum: e715e6d4f298fb93b3325792c5427282 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A castanha do Brasil (Bertholletia excelsa H.B.K.) é a segunda mais importante fonte extrativista da floresta amazônica. Desta forma, não são utilizados defensivos químicos e a produção da castanha do Brasil é considerada orgânica tendo sua extração ambientalmente correta, porém este baixo nível tecnológico favorece o crescimento de fungos potencialmente produtores de micotoxinas como os do grupo Aspergillus section flavi. Visando reduzir esta contaminação, uma das possibilidades é a utilização de óleos essenciais, que apresentam propriedades antimicrobianas. Assim, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a atividade antifúngica de 11 óleos essenciais de espécies medicinais e aromáticas sobre cepas aflatoxigênicas de A. flavus, A. nomius e A. arachidicola isoladas de castanha do Brasil. O ensaio de microdiluição mostrou que os óleos que apresentaram melhor atividade antifúngica contra estes os isolados foram Cinnamomum burmannii e Eugenia caryophyllata, com MIC de 250 'mu'g/mL e 500 'mu'g/mL, respectivamente. A inibição do crescimento micelial dos fungos foi melhor quando estes foram submetidos à ação por contato com os óleos essenciais, do que por ação de seus compostos voláteis, sendo as concentrações referentes às de MIC capazes de inibir totalmente o crescimento dos fungos. A produção de aflatoxina por A. flavus foi inibida somente pelo óleo essencial de E. caryophyllata, na concentração de 500 'mu'g/mL. Ensaios in vivo conduzidos com a casca da castanha do Brasil mostraram que o óleo essencial de C. burmannii inibiu o fungo a 500 'mu'g/mL e propiciou maior redução na porcentagem de infecção pelos isolados de A. flavus. Quanto aos isolados de A. nomius e A. arachidicola, a menor porcentagem de infecção foi obtida após tratamento com o óleo essencial de E. caryophyllata na concentração de 1000 'mu'g/mL. Os óleos de E. caryophyllata e C. burmanni mostraram ser alternativas naturais para controle do crescimento de A. flavus, A. nomius e A. arachidicola e da produção de aflatoxinas por A. flavus, através da ação na redução da contaminação fúngica das castanhas do Brasi / Abstract: The Brazil nut (Bertholletia excelsa H.B.K.) is the second most important forest source of the Amazon rainforest. Thus, no chemical pesticides are used and the production of Brazil nuts is considered organic and an environmentally friendly extraction. However, this low technological level favors the growth of potentialy mycotoxin producing fungi such as Aspergillus section flavi. In order to reduce this contamination, one possibility is the use of essential oils that exhibit antimicrobial properties. The objective of this study was to evaluate the antifungal activity of 11 essential oils of medicinal and aromatic species on aflatoxigenics strains of Aspergillus flavus, A. nomius and A. arachidicola isolated from Brazil nuts. The microdilution assay showed that the oils from Cinnamomum burmannii and Eugenia caryophyllata presented the best antifungal activity against all isolates, with MIC of 250 'mu'g/mL and 500 'mu'g/mL, respectively. The inhibition of mycelial growth of the fungi was better when submitted to action by contact than by action of oils volatile compounds, with concentrations of MIC able to completely inhibit the growth of fungi. The aflatoxin production was inhibited only by E. caryophyllata essential oil at a concentration of 500 'mu'g/mL . In vivo assays conducted with shells of Brazil nut showed that the essential oil of C. burmannii at 500 'mu'g/mL provided greater reduction in the percentage of infection by A. flavus isolates. As the isolates of A. nomius and A. arachidicola, the infection rate was lower after the treatment with the essential oil of E. caryophyllata in the concentration of 1000 'mu'g/mL. The essential oils of E. caryophyllata and C. burmannii showed to be natural alternatives for controlling the growth of A. flavus, A. nomius and A. arachidicola and aflatoxin production by A. flavus, through the reduction of the fungal contamination of Brazil nuts / Mestrado / Ciência de Alimentos / Mestra em Ciência de Alimentos

Orientadores: Mauro Faber de Freitas Leitão, Marta H. Taniwaki / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-01T18:54:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Urbano_GiseleRoss_D.pdf: 16661641 bytes, checksum: 68bcfa48d45422fd25cb9c9b0ba1e6b8 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Este trabalho teve como objetivos principais estudar a presença e identificar fungos produtores de ocratoxina A (OTA) em diferentes fases de maturação do café, assim como quantificar a produção da toxina em cafés de terreiros e tulhas. Através de plaqueamento direto verificou-se elevada contaminação fúngica das sementes de café estudadas (100%), com o gênero Aspergillus ocorrendo em níveis de 33,2%, sendo que A. ochraceus e A. niger, representaram 10,3 e 22,9%, respectivamente, das cepas isoladas das sementes de café. Um total de 155 cepas de A. ochraceus e A. niger foram avaliados quanto à capacidade de produção de ocratoxina por Ágar Plug e extração com clorofórmio, constatando-se que 88,1% das cepas de A. ochraceus e 11,5% das cepas de A. niger foram positivas. Na análise de OTA em amostras de cafés de terreiro e tulha, independentemente do cultivar, ano de safra e da região produtora, todas as amostras analisadas, com exceção de uma delas, mostraram níveis de OTA abaixo do limite sugerido pela União Européia (8!-t9/Kg), indicando, portanto, que a ocorrência do problema parece ser bastante restrita e decorrente de falhas muito grosseiras nas práticas de colheita e armazenamento. Também foi avaliada a influência da atividade de água (Aa) na produção de OTA por cepas de A. ochraceus isoladas de frutos de café à 25°C. Primeiramente, desenvolveu-se a isoterma de adsorção de sementes de café, verificando-se a relação entre o teor de umidade no armazenamento e valores correspondentes de Aa. Para verificar a adequacidade do café como substrato para produção de OTA, foram realizados experimentos inoculando-se 108esporos/ml de A. ochraceus e A. niger em cafés mantidos em ambiente saturado de água, incubando-se durante 50 dias à 25°C com amostragem e análises de OTA nos intervalos de 10, 20, 30, 40, 45 e 50 dias. Foram constatados níveis de 59, 64, 117, 213, 245 e 194 !-t9/kg de OTA nos inóculos com A. ochraceus e nos experimentos com A. niger não foi detectada toxina, mesmo após 50 dias de incubação ¿Observação: O resumo, na íntegra poderá ser visualizado no texto completo da tese digital. / Abstract: The main objectives of this research were to study the presence and to identify, ochratoxin (OTA) producing fungi in the coffee at different stages of maturation, as well as to quantify the toxin in coffee during terrace drying and in that stored in barns. By direct plating, a high level of fungi contamination (100%) was found in the coffee beans studied, with the genus Aspergillus representing 33.2%, of which A. ochraceus and A. niger represented 10.3 and 22.9% respectively of the strains isolated from the coffee beans. The capacity to produce OTA was determined in 155 strains of A. ochraceus and A. niger using both agar plug methodology and extraction with chloroform, giving positive results for 88.1% of the A. ochraceus strains and 11.5% of the A. niger strains. The analysis for OTA in the terrace and barn coffee samples studied, showed that, independent of cultivar, year of harvesting or production region, ali the samples analyzed, with the exception of one, showed mycotoxin levels below the limit suggested by the European Common Market (8ug/Kg), thus indicating that the problem is quite restricted and due to severe faults in the harvesting and storage practices. The influence of water activity (Aw) on the production of OTA at 25°C by strains of A. ochraceus isolated from coffee fruits, was also evaluated. The adsorption isotherm of coffee beans was prepared, determining the relation between water content during storage and the corresponding values for water activity. To verify the adequacity of coffee as a substrate to produce OTA, some experiments were realized, by inoculating a standard suspension of A. ochraceus spores in dissecators with saturated water at 25°C during 50 days. The analysis of OTA content were done after 10, 20, 30,40, 45 and 50 days and the results were 59, 64, 117, 213, 245 and 194ug/kg respectively. In cultures of A. niger OTA weren't detected ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations. / Doutorado / Doutor em Tecnologia de Alimentos

Orientador: Yong Kun Park / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-24T09:31:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Contado_JoseLuis_D.pdf: 5265713 bytes, checksum: d8b1e9c15dba1c02f381597ff13b0f09 (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: Frutooligossacarídeos, ou Neosugar, são oligômeros de sacarose, constituídos de uma molécula de glicose unida com 2, 3 ou 4 unidades de frutose por ligação ß-2,1, resultando em estruturas designadas como 1-kestose (GF2), nistose (GF3) e 1f-frutofuranosil nistose (GF4), respectivamente. Sabe-se que os frutooligossacarídeos existem naturalmente em muitos tipos de plantas. Podem também ser obtidos a partir de sacarose através da transfrutosilação catalisada pela enzima ß-frutofuranosidase (E.C.3.2.1.26) de microrganismos. Frutooligossacarídeos têm-se tomado de grande interesse por estimular o crescimento de bifidobactérias benéficas do trato digestivo, diminuir o teor do colesterol total e lipídeos no soro sanguíneo, reduzir a constipação intestinal, e em geral melhorar a saúde humana. Neosugar é uma mistura de frutooligossacarídeos, 1-kestose (GF2), nistose (GF3) e 1f-frutofuranosil nistose (GF4) e é comercialmente produzido a partir de sacarose usando a ß-frutofuranosidase obtida de A. niger. O objetivo deste trabalho foi induzir um mutante de Aspergillus niger, utilizando o reagente N-Metil N' -Nitro N-Nitrosoguanidina (M.N.N.G.) e raios ultravioleta (UV), que produzisse uma ß-frutofuranosidase com maior atividade de transfrutosilação para produção de frutooligossacarídeos do que a linhagem parental e comparar as características das duas enzimas. Uma linhagem mutante (nº 12) de A. niger, obtida pelo tratamento com M.N.N.G.-UV, foi selecionada por apresentar mais que o dobro da atividade ß-frutofuranosidase que a linhagem parental. Esta linhagem mutante produziu menos conídea em PDA e mostrou-se morfologicamente diferente apresentando colônias bege. A ß-frutofuranosidase extracelular da linhagem mutante foi purificada cerca de 15,8 vezes em relação a enzima bruta sendo obtido 39,2 % de rendimento. A enzima purificada apresentou atividade específica de 4,26 unidades/mg de proteína. A enzima apresentou pH e temperatura ótima de atividade na faixa de 5,5-6,0 e 50-55°C, respectivamente. A enzima mostrou-se estável na faixa de pH 5,0 a 6,0 e a temperaturas inferiores a 55°C. Os valores de km e Vmáx da ß-frutofuranosidase para sacarose foram 0,47 M e 1,02 µmol/ml/min, respectivamente. A atividade enzimática foi inibida com 1 mM de N-bromosuccinimida, ß-mercaptoetanol, HgCl2 e I2, e com 10 mM de AgNO3, após 30 minutos a 55°C. A ß-frutofuranosidase extracelular da linhagem mutante foi purificada cerca de 15,4 vezes em relação a enzima bruta sendo obtido 31,7 % de rendimento. A enzima purificada apresentou atividade específica de 1,66 unidades/mg de proteína. A enzima apresentou pH e temperatura ótima de atividade na faixa de 5,0-6,0 e 50-55°C, respectivamente. A enzima mostrou-se estável na faixa de pH 5,0 a 6,0 e a temperaturas inferiores a 55°C. Os valores de Km e Vmáx da ß-frutofuranosidase para sacarose foram 0,37 M e 1,12 µmol/ml/min, respectivamente. A atividade enzimática foi inibida com 1 mM de N-bromosuccinimida, ß-mercaptoetanol, HgCl2 e I2. e com 10 mM de AgNO3, após 30 minutos à 55°C.O maior rendimento de frutooligossacarídeos (54,41%) em relação aos açúcares totais foi obtido utilizando-se ß-frutofuranosidase e 30% substrato sacarose em tampão citrato-fosfato pH 5,5 após 6 horas de incubação a 55°C. A concentração de substrato e o tempo de incubação são importantes para obter a proporção de GF2/GF3/GF4 desejada / Abstract: Fructooligosaccharides (or Neosugar) are sucrose oligomers, which are composed of glucose attached via a ß-(2-1) linkage to 2, 3 or 4 fructose units. The resulting structures are designated as l-kestose (GF2), nystose (GF3) and lf-fructofuranosylnystose (GF4), respectively. It is known that fructooligosaccharides exist naturally in many kinds of plants. They can also be prepared from sucrose through the transfructosylating action of enzyme ß-fructofuranosidase (E.C. 3.2.1.26) obtained from microorganisms. Fructooligosaccharides have become of major interest due to their growth stimulation of beneficial bifidobacteria in the digestive tract, decrease of total cholesterol and lipid in the serum, relief of constipation, and general improvement of human health. Neosugar is a mixture of the fructooligosaccharides, l-kestose (GF2), nystose (GF3) and 1f-fructofuranosylnystose (GF4), and is commercially produced from sucrose using the enzyme ß-frutofuranosidase enzyme obtained from A. niger ATCC 20611. The objective of this work was to induce a mutant of Aspergillus niger, using M-Methyl N'-Nitro N-Nitrosoguanidine (M.N.N.G.) and ultraviolet ligth (UV) producing higher ß-fructofuranosidase activity for the production of fructooligosaccharides than the parent strain and to study the characteristics of the enzyme. A mutant strain(nº 12) of A. niger, obtained by treatment with M.N.N.G.-UV, was selected, producing 100% more ß-fructofuranosidase than the parent strain. The mutant produced less conidia on PDA and was morphologically different: brownish white colonies. The extracellular ß-fructofuranosidase of the mutant strain was purified about 15.8-fold (40.2% yield) with respect to the crude enzyme preparation, showing a specific activity of 4.26 units/mg protein. It was found that the optimum pH and temperature for activity were 5.5-6.0 and 50-55°C, respectively. The enzyme was stable from pH 5.0 to 6.0 and at temperatures below 55°C. The Km and Vmáx values of the ß-fructofuranosidase for sucrose were 0.47 M and 1.02 µmol/ml/min., respectively. The activity of the enzyme was inhibited by 1 mM by N-bromosuccinimide, ß-mercaptoethanol, HgCl2 and I2, and by 10 mM AgNO3 after 30 minutes at 55°C. The extracellular ß-fructofuranosidase parent strain was purified about 15.4-fold (38.6 % yield) with respect to the crude enzyme preparation showing a specific activity of 1.66 units/mg protein. It was found that the optimum pH and temperature for activity were 5.0-6.0 and 50-55°C, respectively. The enzyme was stable from pH 5.0 to 6.0 and at temperatures below 55°e. The enzyme was stable from pH 5.0 to 6.0 and at temperatures below 55 °e. The Km and Vmax values of the ß -fructofuranosidase for sucrose were 0.37 M and 1.12 µmol/ml/min.., respectively. The activity of the enzyme was inhibited by 1 mM by N-bromosuccinimide, ß-mercaptoethanol, HgCl2 and I2, and by 10 mM AgNO3 after 30 minutes at 55°C. Maximum conversion yeld from sacarose to fructo-oligosaccharides (54.41%) was obtained when added ß-frutofuranosidase in 30% sucrose, at 55°C and pH 5,5, for 6 hrs incubation. The production efficienceis of GF2/GF3/GF4 depending on sucrose concentration and the reaction time / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador: Ranulfo Monte Alegre / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-25T00:32:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rizzatto_MarciaLuzia_M.pdf: 2359270 bytes, checksum: 5478fd798a0355f913b6d8f29070ea82 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: No presente trabalho, estudou-se a produção e produtividade de pectinase por Penicillium italicum IZ 1584 e por Aspergillus niger NRRL 3122 através de fermentação semi-sólida de bagaço de laranja industrialmente processado, em embalagens de polipropileno. Foram feitos ensaios com bagaço de laranja lavado e não lavado. A produção de pectinases com bagaço lavado iniciou-se mais cedo, porém os valores de atividade obtidos com o bagaço não lavado foram maiores para os dois microrganismos, sendo os valores da atividade do P. italicum IZ 1584 (15,1 UIlgMFU) maiores que os do A. niger NRRL 3122 (9,56 UIlgMFU). Em ensaios utilizando bagaço de laranja lavado adicionado de açúcares sacarose, glicose ou frutose, observou-se atividade máxima no meio com sacarose (15,02 UIlgMFU), para o P. italicum IZ 1584, enquanto que os meios com glicose e frutose apresentaram valores próximos de atividade 6,88 UIlgMFU e 6,94 UI/g 1\.1FU, mas menores comparados com o meio com sacarose. O fungo A. niger NRRL 3122 produziu pouca atividade de pectinase nos meios aos quais foram adicionados os açúcares. A atividade máxima foi obtida em meio com glicose (1,98 UI/gMFU), valor próximo do meio com frutose (1,55 UIlgMFU) e o meio com sacarose foi o que apresentou o menor valor de atividade (1,1 UIlgMFU). O fungo P. italicum IZ 1584 mostrou-se mais adequado para a produção de pectinase nos meios de fermentação testados. A produção de pectinase por P. italicum IZ 1584 foi 37% maior que a produção por A. niger NRRL 3122 em bagaço não lavado, 40% em bagaço lavado, 93% em meio com sacarose, 28,8% em meio com glicose e 77,7% em meio com frutose. Em fermentação utilizando misturas de bagaço lavado e não lavado em diferentes proporções, os maiores valores de atividade de pectinase também foram obtidos com o fungo P. italicum IZ 1584. O valor máximo de atividade de pectinase obtido (20,72 UIlgMFU), foi com o meio com 75% de bagaço lavado e 25% de bagaço não lavado, sendo este valor, o maior encontrado neste trabalho / Abstract: The objective of this experimental work was to study the pectinase production and productivity by Penici/lium italicum IZ 1584 and Aspergillus niger NRRL 3122, through solid-state fermentation in a medium containing processed orange bagasse as substrate, in flexible polypropilen packs. The initial experiments studied the medium composed by washed orange bagasse and no washed bagasse as source of carbono The pectinases production with washed bagasse began earlier, however the activity values obtained with no washed bagasse were bigger for the two microorganisms 15.1 UIlgMFU and 9,56 UIlgMFU, respectively, P. italicum IZ 1584 and A. niger NRRL 3122. In the experiments using washed orange bagasse supplemented with sugars (sucrose, glucose or fiutose), a maximum activity was observed in the medium with sucrose (15.02 UIlg MFU) for the P. italicum IZ 1584, while the media with glucose or fiutose presented close values of activity of 6.88 UIlgMFU and 6.94 UIlgMFU, respectively, but they were smaller when compared with the medium with sucrose. The fungus A. niger NRRL 3122 produced small pectinase activity in the media where sugars were added. The maximum activity was obtained in the medium with glucose (1,98 UIlgMFU), with similar value for the medium with fiutose (1.55 UIlgMFU). The medium with sucrose (1.1UI1gMFU), presented the smallest activity value. The fungus P. italicum IZ 1584 showed best pectinase production in the tested fermentation media. The pectinase production by P. italicum IZ 1584 was 370,10 superior to the A. niger NRRL 3122 on no washed bagas se, 40% on washed bagasse, 93% on the medium with sucrose, 28.8% on the medium with glucose and 77% on the medium with frutose. In fermentation using mixtures of washed bagasse and no washed bagasse in different proportions, the biggest values of pectinase activity were also obtained with the fungusP. italicum IZ 1584. The maximum value ofactivity (20.72UI/gMFU) was obtained on a medium with 75% washed bagasse and 25% no washed bagasse. This value was the maximum found in this work / Mestrado / Mestre em Engenharia de Alimentos

Orientador: João Lucio de Azevedo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-25T15:34:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Martens_IngridSchmidt-Hebbel_D.pdf: 7343296 bytes, checksum: 4ce47b2ce62b55b5bca6954dc4e9d09c (MD5) Previous issue date: 1999 / Doutorado