Orientador : Prof. Dr. Ciro Alberto de Oliveira Ribeiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ecologia e Conservação. Defesa: Curitiba, 24/03/2015 / Inclui referências / Resumo: O rio Iguaçu é o maior do estado do Paraná e o segundo rio urbano mais poluído do Brasil. A avaliação de ecossistemas aquáticos tem utilizado com frequência peixes como bioindicadores de contaminação. No presente estudo, foi utilizada uma espécie de peixe onívora e endêmica da bacia do rio Iguaçu, Astyanax bifasciatus. Biomarcadores são indicadores baseados em respostas mensuráveis, como alterações bioquímicas, celulares, moleculares ou mudanças fisiológicas nas células, fluidos corpóreos, tecidos ou órgãos de um organismo, sendo indicativos da exposição a xenobióticos. Dessa forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar a qualidade da água dos reservatórios presentes ao longo do baixo rio Iguaçu: Foz do Areia, Segredo, Salto Santiago, Salto Osório e Salto Caxias, através do uso de biomarcadores de contaminação ambiental em A. bifasciatus. Os espécimes foram coletados nos períodos de verão e inverno de 2013. Após serem anestesiados, foram obtidos dados biométricos dos peixes para a obtenção do Índice Hepatossomático (IHS) e do Fator de Condição (K). Para as análises bioquímicas, amostras de fígado foram coletadas e congeladas em nitrogênio líquido a fim de avaliar a peroxidação de lipídeos e a atividade da glutationa S-transferase e da catalase. Além disso, foram coletados músculo e cérebro, destinados para análises neurotóxicas, com base na atividade da acetilcolinesterase. Para as análises histopatológicas em fígado, as amostras foram preservadas em ALFAC e analisadas através de microscopia de luz, enquanto as brânquias foram fixadas em glutaraldeído (3%) tamponado em cacodilato de sódio (0,1 M, pH 7,2-7,4) e analisadas por microscopia eletrônica de varredura. A fim de avaliar a genotoxicidade, foi coletado sangue para o Teste de Micronúcleo Písceo e para o Ensaio Cometa. Além disso, análises químicas foram realizadas em água, sedimento e tecido (músculo) para quantificação de metais, e na bile para determinação de hidrocarbonetos policíclicos aromáticos. Os exemplares da espécie A. bifasciatus provenientes dos cinco reservatórios estudados apresentaram alterações medidas através dos biomarcadores que podem ser relacionadas com a baixa qualidade da água, demonstrando que o rio Iguaçu é impactado por xenobióticos, com variações em diferentes épocas do ano. Os resultados deste estudo mostram a importância da ecotoxicologia na avaliação ambiental, e que a integração de diferentes tipos de biomarcadores permite uma visão mais precisa da real situação em que determinado ambiente aquático se encontra. Além disso, os resultados encontrados sugerem a existência de fontes adicionais de contaminação ao longo do baixo rio Iguaçu, e não atribuídas somente à região metropolitana de Curitiba. O rio Iguaçu, além de apresentar unidades de conservação ao longo de seu leito, possui diversas espécies endêmicas, sendo que a manutenção da sua integridade é de extrema importância a sua conservação e manejo. Palavras-chave: biomonitoramento, biomarcadores, Astyanax bifasciatus, rio Iguaçu. / Abstract: Iguaçu river is the largest one in the Paraná state and the second most polluted urban river in Brazil. The studies of aquatic toxicology has frequently used fish as bioindicators of contamination. In the current work was used the species Astyanax bifasciatus, an omnivorous endemic fish species from Iguaçu basin. Biomarkers are indicators based on measurable responses as molecular, biochemical and cellular changes, or even physiological variations in body fluids, tissues or organs, indicating chemical exposure. The aim of the present study was to evaluate the water quality of the reservoirs present along the lower Iguaçu river: Foz do Areia, Segredo, Salto Santiago, Salto Osório and Salto Caxias, through the use of environmental contamination biomarkers in Astyanax bifasciatus. The specimens were collected at the summer and winter of 2013. After anesthesia, the biometric data were measured for obtaining hepatosomatic index (HSI) and the condition factor (K). For the biochemical analyzes, a liver portion was sampled and frozen at liquid nitrogen to assess further lipid peroxidation levels and the glutathione S-transferase and catalase activity. Moreover, muscle and brain were preserved as described above for neurotoxic analysis (acetylcholinesterase activity). To histopathological analyzes in liver, samples were preserved in ALFAC and analyzed by conventional light microscopy, while gills were fixed in glutaraldehyde solution (3%) buffered by cacodilic acid (0.1M, pH 7.2-7.4) and analyzed by scanning electron microscopy JEOL. To assess the genotoxicity, blood was sampled for Piscine Micronucleus test and Comet assay. The chemical analysis were obtained from muscle, water and sediment to metals and in bile to polycyclic aromatic hydrocarbons concentrations. The specimens of A. bifasciatus sampled at the five reservoirs showed some alterations that permit to classify the poor water quality. These results demonstrate that Iguaçu river is impacted by xenobiotics, with variations at different seasons. In addition, the results clearly demonstrated how useful the biomarkers are in the environmental studies, and the integration among them allows a more accurately view of the real situation in the studied area. Furthermore, the results suggest the existence of additional sources of contamination along the river, not only attributed to the Curitiba metropolitan region, as described by governmental reporters. Iguaçu river, besides presenting protected areas along the basin, has several endemic fish species, and the maintenance of its integrity is extremely important to conservation and risk of exposure to fish population and even to human population. Keywords: biomonitoring, biomarkers, Astyanax bifasciatus, Iguaçu river.

Orientadora : Profª Drª Marta Margarete Cestari / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Genética. Defesa: Curitiba, 22/03/2016 / Inclui referências : f. 70-85 / Resumo: O aumento das indústrias juntamente ao crescimento populacional tem elevado de forma considerável os níveis de poluição no meio ambiente e o ambiente aquático é o ecossistema mais suscetível ao despejo de substâncias. Diversas alterações estruturais e fisiológicas podem ser observadas em organismos expostos a altos níveis de contaminação, e atualmente, sabe-se que as exposições a metais, como o chumbo, causam toxicidade em diversas espécies. A utilização de nanopartículas vem crescendo em diversos campos da indústria e da medicina devido a suas características físico-químicas únicas, muito atrativas para o ramo tecnológico. Porém, pouco se sabe sobre os problemas que estes nanomateriais podem causar ao ambiente e aos seres vivos e de sua interação com outros contaminantes. O objetivo desse estudo foi avaliar a toxicidade das nanopartículas de TiO2 (NpTiO2) em baixas doses, isolada e associadas ao chumbo inorgânico (PbII) em peixes da espécie Astyanax altiparanae através de biomarcadores genéticos e bioquímicos. Os animais foram divididos em nove tratamentos: controle negativo; 5 ng/g de NpTiO2; 50 ng/g de NpTiO2; 500 ng/g de NpTiO2; 21 ?g/g de PbII; 5 ng/g de NpTiO2 + 21 ?g/g de PbII; 50 ng/g de NpTiO2 + 21 ?g/g de PbII; 500 ng/g de NpTiO2 + 21 ?g/g de PbII e controle positivo. Os bioensaios foram de 96 horas, via injeção intraperitonial, exceto o controle positivo que foi de 24 horas. Os resultados demonstraram através da análise da atividade das enzimas glutationa S-transferase e superóxido dismutase que ambos os contaminantes tanto isolados quanto em associação podem causar estresse oxidativo nas células de A. altiparanae. O PbII induziu necrose e em consequência a essa citotoxicidade ocorreu uma proliferação celular, aumentando a frequência de eritrócitos policromáticos nos grupos expostos ao PbII sozinho e associado as NpTiO2 nas três doses. O teste do micronúcleo písceo indicou que os contaminantes não tiveram efeito mutagênico, no entanto, houve um aumento no total de alterações morfológicas nucleares totais e do tipo Notched nos tratamentos de 5 ng/g+Pb e 500 ng/g+Pb. Não se observou genotoxicidade no sangue e no fígado utilizando o ensaio cometa. Entretando a maior dose dos contaminantes (500 ng/g de NPTiO2 + 21 ?g/g) causou danos ao DNA no rim, já no cérebro os tratamentos 500 ng/g de NpTiO2 e 5 ng/g + 21 ?g/g de PbII foram genotóxicas, sendo que nesta última, observou-se também o aumento na atividade da acetilcolinesterase, bem como na maior dose de NpTiO2 isolada. Em conclusão, a espécie A. altiparanae demonstrou ser um bom bioindicador, pois respondeu as baixas doses testadas nesse estudo. As NpTiO2 e o PbII demonstraram ter efeitos tóxicos e estes podem ser potencializados quando os contaminantes estão em associação. Palavras-chave: genotoxicidade; citotoxicidade; nanopartículas; dióxido de titânio; chumbo; peixes. / Abstract: The increase of industries with the high population growth has considerably increased pollution levels in the environment and the aquatic ecosystem is the most susceptible to the release of substances. Several physiological and structural changes may be observed in organisms exposed to high levels of contaminants, and currently, it is known that exposure to metals such as lead, cause toxicity in several species. The use of nanoparticles is growing in various fields of industry and medicine due to its unique physical and chemical characteristics, being attractive for the technology industry. However, little is known about the problems that these nanomaterials can cause to the environment and organisms, besides its interaction with other contaminants. The aim of this study was to evaluate the toxicity of TiO2 nanoparticles (NpTiO2) in low doses, isolated and associated with inorganic lead (PbII) in fish species Astyanax altiparanae through genetic and biochemical biomarkers. The animals were separated in nine treatments: negative control; 5 ng / g NpTiO2; 50 ng / g NpTiO2; 500 ng / g NpTiO2; 21 ?g / g PbII; 5 ng / g NpTiO2 + 21 ?g / g PbII; 50 ng / g NpTiO2 + 21 ?g / g PbII; 500 ng / g NpTiO2 + 21 ?g / g PbII and positive control. Bioassays were conducted for 96 hours, with intraperitoneal injection, except for the positive control which was for 24 hours. The results demonstrated that both contaminants either alone or in association can cause oxidative stress in cells of A. altiparanae, through the analysis of the activity of the enzyme glutathione S-transferase and superoxide. The PbII induced necrosis which induced cellular proliferation, increasing the frequency of polychromatic erythrocytes in groups exposed to PbII alone and associated with the NpTiO2 in three doses. The piscine micronucleus test showed that contaminants were not mutagenic, however, there was an increase in total nuclear morphological alterations and Notched in treatments 5 ng / g + Pb and 500 ng / g + Pb. Genotoxicity in blood and liver evaluated through the comet assay was not observed. However, the higher dose of contaminants (500 ng / g NpTiO2 + 21 ?g / g) caused DNA damage in the kidney, and in the brain,treatments of 500 ng / g NpTiO2 and 5 ng / g + 21 ?g / g PbII were genotoxic, as well as presented an increase in the activity of acetylcholinesterase. This increase was also obsevedin the higher dose of NpTiO2 isolated. In conclusion, A. altiparanae proved to be a good bioindicator, since this species respond to the low doses tested in this study. The NpTiO2 and PbII have toxic effects and which were increased by the association of contaminants. Keywords: genotoxicity; cytotoxicity; nanoparticle; titanium dioxide; lead; fish.

Orientador : Prof. Dr. Luís Fernando Fávaro / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ecologia e Conservação. Defesa: Curitiba,18/05/2017 / Inclui referências : f. 45-50 / Resumo: A força hidráulica dos rios representa a principal fonte geradora de energia elétrica brasileira, de forma que as hidrelétricas são uma tecnologia consagrada no Brasil para a geração de energia. Apesar de ser considerada uma fonte limpa de energia, as hidrelétricas causam diversos impactos ao meio ambiente, como mudanças no fluxo de água e nas condições limnológicas, além de alterações na composição, estrutura e distribuição espacial das comunidades aquáticas. A Usina Hidrelétrica - UHE Mauá localizada no rio Tibagi, estado do Paraná, Brasil, possui reservatório de 84 km², cujo enchimento foi concluído em 2012. Objetivando caracterizar os parâmetros limnológicos e a ictiofauna no período inicial de operação da UHE Mauá, o estudo abrangeu a estruturação das assembleias relacionada aos fatores abióticos e a estrutura populacional das três espécies mais abundantes, pertencentes ao gênero Astyanax. As coletas dos peixes e dos dados abióticos da água ocorreram sazonalmente, no ano de 2014, em quatro pontos no reservatório e um ponto a jusante da barragem. A análise dos fatores abióticos e das assembleias de peixes resultou em diferença espacial apenas para as assembleias de peixes. Portanto, não foi evidenciado um gradiente ambiental ao longo do reservatório da UHE Mauá, provavelmente devido à instabilidade dos fatores ambientais. Assim, é possível inferir que a diferenciação espacial das assembleias de peixes é uma resposta da biota a fatores ambientais não analisados, como a vazão e a velocidade da água. A análise da estrutura populacional de Astyanax lacustris, Astyanax fasciatus e Astyanax bockmanni permitiu verificar que as três espécies ocorreram em toda a área de estudo, com maior frequência no local mais lêntico do reservatório. Esse resultado evidencia o caráter generalista dessas espécies, a capacidade de adaptação a ambientes lênticos e a tolerância às variações ambientais. Os dados de comprimento total e de peso das três espécies apresentaram diferença espacial, sendo os valores obtidos dentro do reservatório diferentes da jusante da barragem. Essa diferença pode ser reflexo da distinção das condições ambientais entre os locais. Ainda, a segregação dos indivíduos de maior porte na jusante da barragem pode estar relacionada à diminuição da competição. Palavras-chave: antropização, espécies generalistas, estabilização, rio Tibagi, sucessão ecológica. / Abstract: The rivers hydraulic strength is the main Brazilian electrical power source, so that hydroelectric dams are an established technology in Brazil for energy generation. Despite being considered a source of clean energy, dams cause several environmental impacts, such as changes in water flow and limnological conditions, as well as changes in the composition, structure and spatial distribution of aquatic communities. The Mauá hydropower plant is located on the Tibagi River, Paraná state, Brazil, and it has an 84 km² reservoir, which was filled in 2012. In order to characterize the limnological parameters and the fish fauna in the initial period of Mauá hydropower plant operation, the study covered the assemblage structure related to the abiotic factors and the population structure of the three most abundant species, belonging to the genus Astyanax. The fish and the abiotic data of water were collected seasonally in 2014 at four sites in the reservoir and one site downstream. Analysis of abiotic data and fish assemblages resulted in spatial difference only for fish assemblages. Therefore, no environmental gradient was detected along the Mauá reservoir, probably due to the environmental factors instability. Thus, we are able to infer that spatial differentiation of fish assemblages is a biota response to unanalyzed environmental factors such as water flow and velocity. Population structure analysis of Astyanax lacustris, Astyanax fasciatus and Astyanax bockmanni indicated that the three species occurred throughout the studied area, being more frequent in the most lentic site of the reservoir. This result evidences the generalist feature of these species, the capacity of adaptation to lentic environments and the tolerance to environmental variations. The total length and weight data of the three species presented spatial differences, with the reservoir values being different from the downstream. This difference may occur by distinction of environmental conditions between sites. Also, the segregation of larger individuals downstream may be related to the decrease in competition. Key-words: anthropization, ecological succession, generalist species, stabilization, Tibagi River.

Orientadora: Patricia Pasquali Parise-Maltempi / Banca: Sanae Kasahara / Banca: Tatiane Casagrande Mariguela / Banca: Orlando Moreira Filho / Banca: Mateus Mondin / Resumo: Dentre os Characiformes a família Characidae é o grupo com maior número de espécies da ordem apresentando peixes de pequeno e grande porte. A subfamília Tetragonopterinae, antes considerada como a subfamília com o maior número de espécies foi considerada como um grupo polifilético. A partir de então, somente o gênero Tetragonopterus foi mantido na subfamília e todos os demais gêneros de Tetragonopterinae foram alocados em incertae sedis dentro de Characidae. Muitos exemplares pertencentes a este grupo, já tiveram seus cromossomos estudados, demonstrando que o número diploide mais frequente é 2n=50/2n=52 cromossomos. Outra característica marcante compartilhada por muitas espécies da família é o primeiro par metacêntrico maior do que os demais cromossomos do complemento A. Diante das problemáticas taxonômicas apresentadas na literatura para o grupo incertae sedis e considerando que ainda há muito que ser estudado sobre a citogenética dos mesmos, o presente trabalho constituiu em realizar análises dos cromossomos de espécies dos gêneros Bryconamericus, Piabina, Hyphessobrycon e Astyanax, visando detectar possíveis variações que permitam um melhor entendimento das relações evolutivas entre as populações desses gêneros em incertae sedis. Para tanto, os cromossomos das espécies Bryconamericus stramineus da bacia do rio Iguatemi - MS; Bryconamericus turiuba, Bryconamericus cf. iheringii, Piabina argentea, Hyphessobrycon eques e três populações de Astyanax fasciatus provenientes da bacia do rio Corumbataí - SP; Astyanax abramis do córrego Bento Gomes (MT); Astyanax mexicanus e Astyanax eigenmanniorum provenientes de loja de aquário e duas populações de Astyanax altiparanae ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Among the Characiformes, the Characidae family is the largest group of the order involving large and small fish. The subfamily Tetragonopterinae, previoulsy considered as the subfamily with the greatest number of species was considered as a polyphyletic group. Since then, only the genus Tetragonopterus was kept in the subfamily and all other Tetragonopterinae species were considered as incertae sedis within Characidae. Many specimens belonging this group had been their chromosomes studied, demonstrating that the most frequent diploid number is 2n=50/52 chromosomes. Another striking feature shared by many species of the family is the first metacentric pair larger than the other chromosomes of the complement A. Given the taxonomic problems presented in the literature for the group incertae sedis and considering that much remains to be studied about the cytogenetics of these group, the present work was to perform analysis of chromosomes of the genus Bryconamericus, Piabina, Astyanax and Hyphessobrycon, to detect possible variations that allow a better understanding of evolutionary relationships among populations in these genus in incertae sedis. The chromosomes of Bryconamericus stramineus Iguatemi River basin - MS; Bryconamericus turiuba, Bryconamericus cf. iheringii, Piabina argentea, Hyphessobrycon eques and tree populations of Astyanax fasciatus from Corumbataí River basin - SP; Astyanax abramis from stream Bento Gomes (MT); Astyanax mexicanus and Astyanax eigenmanniorum from aquarium store and two populations of Astyanax altiparanae from the ICMBio-CEPTA - Pirassununga (SP ) and stream Guaçu (MS) were analyzed using classical techniques such as Giemsa staining, Ag-RON, Cband and CMA3 addition to applying the technique of fluorescence ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Eduardo Alves de Almeida / Banca: Camilo Dias Seabra Pereira / Banca: Gustavo O. Bonilla Rodriguez / Resumo: A utilização do praguicida Diuron na agricultura e a sua metabolização no ambiente em compostos potencialmente tóxicos pode comprometer a saúde dos ecossistemas aquáticos e de organismos não alvo ali presentes. O objetivo principal deste estudo avaliou se os metabólitos 3-(3,4-diclorofenil)-3-metilureia (DCPMU), o 3,4-diclorofenilureia (DCPU) e o 3,4- dicloroanilina (DCA) gerados a partir da biotransformação do diuron, geram mais ou menos efeitos que o próprio diuron em parâmetros genotóxicos e bioquímicos em peixes Astyanax sp. Foram realizados testes de toxicidade com o diuron e os metabólitos a fim de obter a CL50 de cada composto. Foi visto que o diuron e o DCA possuem semelhante toxicidade a lambaris, uma vez que seus valores de CL50 foram muito próximos (0,75 e 0,89 mg/L, respectivamente). O valor de CL50 para o DCPMU foi duas vezes maior (1,42 mg/L) e para o DCPU foi de três vezes maior que a do diuron (>3,0 mg/L), o que indica ser o metabólito de menor potencial tóxico. A partir do valor de CL50, realizou-se a exposição dos lambaris a concentrações subletais (CL1= 0,015 mg/L e CL10=0,15 mg/L do diuron) por dois e sete dias para avaliar os parâmetros bioquímicos e genotóxicos desses compostos. A genotoxicidade foi avaliada pelo método do cometa e foi visto que a metabolização do diuron não minimiza os efeitos genotóxicos em lambaris uma vez que os metabólitos DCA, DCPMU e DCPU são capazes de causar lesões no DNA dos peixes. Parâmetros bioquímicos foram avaliados pela medida da atividade de enzimas de biotransformação (EROD e GST), de defesa antioxidante (SOD, GPx e CAT) e ocorrência de peroxidação lipídica (MDA). A atividade da EROD aumentou pela exposição dos lambaris aos três metabólitos em brânquias e fígados. A GST foi inibida pela exposição ao DCA, nas brânquias e pela exposição ao DCPMU e DCPU em brânquias e fígado. A atividade da GST aumentou no fígado de lambaris expostos ao ... / Abstract: Diuron is a pesticide used in the agriculture and its transformation in potential toxic compounds can be harmful to aquatic ecosystem and animals. This work had as main objective discover if the metabolites 3-(3,4-dichlorophenyl)-3-methylurea (DCPMU), 3,4- dichlorofhenylurea (DCPU) and 3,4-dichloroaniline (DCA) produced in the diuron degradation may cause more or less effects than the pesticide in genotoxic and biochemistry parameters in fish. Toxicity tests were performed with the diuron and its metabolites to obtain the LC50. We observed that the diuron and the DCA have similar toxicity to fish observed by the low values of LC50. The DCPMU LC50 is twice higher and DCPU is three times higher than diuron and DCA. It indicating that these metabolites can be less toxic than the others compounds. From LC50 values, fish exposures were performed at LC1 (0.015 mg/L) and LC10 (0.15 mg/L) of diuron concentration by two and seven days. The genotoxicity was measured by comet assay and we observed that the degradation of diuron increase the genotoxic effects, whereas the DCA, DCPMU and DCPU are able to promote DNA damage. Biochemistry parameters were measured by analysis of biotransformation enzymes (EROD and GST), antioxidant defenses (SOD, GPx and CAT) and lipid peroxidation (MDA). EROD activity is increased after all metabolites exposure in both tissues. GST activity is inhibited after DCA gill exposure and DCPMU and DCPU gill and liver exposures. GST activity also is increased after DCA exposure in liver. SOD is induced in all metabolites treatment and GPx to DCPMU and DCPU exposure. CAT activity is increased after DCA exposure and it is inhibited after DCPMU and DCPU exposures in both tissues. CAT is also inhibited after diuron exposure in the liver. The exposure of diuron and its three main metabolites can change biochemistry parameters indicators of oxidative stress in Astyanax sp. in the conditions tested in this study. In general, the ... / Mestre

O rio Iguaçu, caracterizado pelo alto endemismo relacionado à ictiofauna, possui pelo menos 8 espécies do gênero Astyanax: A. sp.A, A. sp. B, A. sp. C, A. sp. D, A. sp. E, A. sp. F e A. altiparanae. A espécie Astyanax sp. D vive em cabeceiras de pequenos rios. Foram feitas análises cromossômicas em A. sp.D de três populações provenientes de dois riachos da margem direita e um da margem esquerda do alto rio Iguaçu. Nas três localidades, os indivíduos analisados apresentaram um número diplóide modal de 50 cromossomos, distribuídos em 2 pares de cromossomos metacêntricos, 12 de submetacêntricos, 3 de subtelocêntricos e 8 de acrocêntricos (NF=84). Não foi detectado dimorfismo sexual cromossômico. Dentro de todas as populações foi verificada uma variação interindividual com relação ao número e localização de bandas heterocromáticas. Ao comparar os blocos C positivos das três localidades, estes se mostraram semelhantes. Através da mensuração das variações cromossômicas estruturais (inversões paracêntricas) identificadas pelo bandamento C, foi possível obter freqüências “alélicas” e “genotípicas” de dois pares cromossômicos polimórficos (18 e 19), sendo que cada par possui dois morfotipos. As freqüências, em todas as localidades, se mostraram concordantes com as proporções esperadas pelo equilíbrio de Hardy-Weinberg. Quando comparadas, as populações apresentaram freqüências “alélicas” e “genotípicas” estatisticamente similares, evidenciando semelhanças populacionais. A estatística-F foi usada para descrever uma possível estruturação entre as populações. Os valores obtidos através da análise de Fs t referente a dois pares cromossômicos polimórficos indicam que não há estruturação populacional, e que as populações provavelmente se comportam como uma só

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-10-12Bitstream added on 2014-06-13T19:25:07Z : No. of bitstreams: 1 ferreiraneto_m_dr_botib.pdf: 962499 bytes, checksum: 9be614144aaf9c5c40be6a9ceca1908b (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Neste estudo, espécimens de Astyanax fasciatus capturados no ribeirão Água de Madalena (bacia do alto rio Paraná) foram analisados citogeneticamente, revelando diferentes números diplóides em indivíduos convivendo em simpatria e sintopia, com números cromossômicos de 46, 48 e 50 cromossomos, sendo identificado ainda um cromossomo B acessório em todos os exemplares portadores da fórmula cariotípica com 46 cromossomos. Os exemplares analisados desta espécie foram submetidos às técnicas citogenéticas básicas de coloração com Giemsa, bandamento C e impregnação por nitrato de Prata e técnicas de citogenética molecular, com marcação por fluorocromos base-específicos, hibridação in situ fluorescente com sondas de DNAr 18S, 5S e As51, com sondas teloméricas (TTAGGG)n e também com a microdissecção cromossômica, que resultou da hibridação in situ fluorescente (FISH) utilizando sondas produzidas a partir dos cromossomos B. A região organizadora de nucléolo (NOR) e os sítios de rDNA 18S e 5S mostraram uma distribuição conservada entre os citótipos 2n=46 e 2n=48 cromossomos, sendo que o citótipo de 2n=50 cromossomos apresentou-se de forma diferente com relação aos sítios de rDNA 18S, os quais se apresentaram localizados em cromossomos diferentes. A distribuição da heterocromatina foi pouco variável entre os três citótipos e a região da NOR mostrou-se CG rica quando submetida ao tratamento com Cromomicina A3. Os resultados obtidos com os marcadores moleculares e de citogenética básica mostraram que parece não ocorrer intercruzamentos envolvendo os exemplares dos diferentes citótipos, uma vez que não foram encontradas fórmulas cromossômicas híbridas entre estes citótipos até o presente. Porém, se estes citótipos compartilham uma série de homologias, como evidenciado na análise dos marcadores cromossômicos, também são encontradas diferenças... / In this study, specimens of Astyanax fasciatus were collected at Água da Madalena stream (Botucatu, São Paulo, Brazil) and analyzed cytogenetically, revealing different diploid numbers of individuals living in sympatry and sintopy with chromosome numbers of 46, 48 and 50 chromosomes, still being identified a chromosome B accessory on all copies bearing the karyotype formula with 46 chromosomes. The specimens of this species analyzed were submitted to cytogenetic techniques basic of Giemsa staining, C-banding and Silver nitrate impregnation and molecular cytogenetic techniques, marked by base-specific fluorochromes, fluorescence in situ hybridization with probes 18S rDNA and 5S As51, telomeric probe (TTAGGG)n and also with the chromosome microdissection, resulting in fluorescence in situ hybridization (FISH) using probes generated from chromosome B. The nucleolus organizer regions (NOR) and sites of 5S and 18S rDNA showed a distribution conserved between cytotypes 2n = 46 and 2n = 48 chromosomes, and the cytotype of 2n = 50 chromosomes presented differently with respect to 18S rDNA sites, which are located on different chromosomes presented. The distribution of heterochromatin was somewhat variable among the three cytotypes and NOR region proved CG rich when subjected to treatment with chromomycin A3. The results obtained with the markers and molecular cytogenetics basic showed that appears not to occur intercrosses involving specimens of different cytotypes since it was not found among these formulas chromosomal hybrid cytotypes to the present. However, if these cytotypes share a number of homologies, as evidenced in the analysis of chromosomal markers are also differences that could be a consequence of chromosomal rearrangements complementary, providing new locations of rDNA sites and causing a consequent differentiation and speciation among copies of different cytotypes... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-08-09Bitstream added on 2014-06-13T20:46:47Z : No. of bitstreams: 1 zaganini_rl_dr_botib.pdf: 2927308 bytes, checksum: 11e49aa72205c405399cf15d738d9d2d (MD5) / Astyanax altiparanae, é uma espécie de pequeno porte e de grande interesse econômico. É considerada uma ótima opção para a piscicultura brasileira por suas características biológicas favoráveis ao cultivo e produção. É amplamente distribuída na bacia do Alto rio Paraná, tanto em número de indivíduos, como também em biomassa. Além de comercialmente interessante, A. altiparanae é um excelente modelo para estudos ecológicos, genéticos e evolutivos. Este trabalho teve como objetivos isolar e caracterizar marcadores moleculares microssatélites para A. altiparanae; testar a transferabilidade dos marcadores desenvolvidos em espécies relacionadas; quantificar a variabilidade genética dentro e entre as populações; verificar a possível estruturação genética das populações e averiguar se a estruturação ou a falta dela pode estar relacionada com atividades antrópicas. O isolamento e a caracterização resultaram em 11 locos polimórficos, que foram testados em dez espécies da mesma família. Apenas para as espécies do mesmo gênero, a transferabilidade foi eficaz. Em etapa posterior, foram selecionados oito locos microssatélites para analisar 419 indivíduos de 13 localidades das principais bacias do Alto rio Paraná. As populações de A. altiparanae apresentaram uma elevada variabilidade genética, e as bacias que apresentaram maior diversidade genética foram a do Tietê, seguida do Paranapanema, Ivinhema e Grande, esta última com a menor diversidade genética encontrada. No geral, não foi detectada estruturação genética, e a distribuição das populações foi relacionada com a atividade antrópica que por vários anos vem misturando os estoques, por razões de repovoamento após a construção de hidrelétricas e por liberação indiscriminada de indivíduos em locais distantes de sua origem durante a pesca esportiva,... / Astyanax altiparanae, is a small species and of large economic interest. It is considered a great option for Brazilian fish-farming by its biological characteristics favorable to the cultivation and production. It is widely distributed in the the Upper Paraná River basin, both in number of individuals, as well as biomass. In addition to commercially interesting A. altiparanae is an excellent model for ecological, genetic and evolutionary studies. This study aimed to isolate and characterize microsatellite markers for A. altiparanae, test the transferability of the markers developed in related species, to quantify the genetic variability within and among populations; verify the possible genetic structure of populations and determine whether the structure or the lack of it may be related to anthropic activities. The isolation and characterization resulted in 11 polymorphic loci, which were tested in 10 species of the same family. Just for the species of the same genus, transferability was effective. In a next step, we selected eight microsatellite loci in the analysis of 419 individuals from 13 localities of the Upper Paraná River main basin. The populations of A. altiparanae showed a high genetic variability in the Upper Paraná River basin, and the basin with the highest genetic diversity were Tietê, then the Paranapanema, Ivinhema, and Grande, the latter one with lower genetic diversity. Overall, it was not detected genetic structure and distribution of populations was related to human activity that for several years has been blending stocks for reasons of restocking after the construction of dams and indiscriminate release of individuals in far places from their origin during sport fishing, widely practiced in the rivers of the Upper Paraná basin. Only populations P3, P4, and G2 showed moderate genetic differentiation, probably because these three locations...(Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-21Bitstream added on 2014-11-10T11:58:40Z : No. of bitstreams: 1 000789670.pdf: 5329509 bytes, checksum: a3824c4502c72a77d4e53b53fdea327f (MD5) / Dentre os peixes da região Neotropical, temos a família Characidae, cujo gênero Astyanax é o mais comum e diversificado, contando com 141 espécies validadas. Estudos com diversas espécies do grupo têm demonstrado um dinamismo populacional particular, que leva à formação de populações geneticamente muito variáveis, além da ocorrência de cromossomos B, que neste gênero apresentam intensos polimorfismos. Estes cromossomos são classificados como elementos adicionais e dispensáveis, e estão presentes em plantas, fungos e animais, de diferentes morfologias e frequência variada. Frente a isso, foram analisadas seis populações distintas de Astyanax bockmanni coletadas nas bacias do rio Tietê e Paranapanema, além de exemplares das espécies A. fasciatus e A. paranae portadores de cromossomos supranumerários. Os estudos se basearam em técnicas citogenéticas clássicas (coloração com Giemsa, impregnação com nitrato de Prata, e bandamento C) e moleculares (hibridação in situ fluorescente e Zoo-FISH, por meio de sondas de DNAr 5S e 18S; genes para as histonas H1, H3; e elementos transponíveis Rex1, Rex3 e Rex6). Também realizamos a microdissecção, amplificação, marcação e hibridação de uma sonda B-específica do cromossomo B acrocêntrico de A. bockmanni, nomeada Babock. Os resultados indicaram que todos os exemplares de A. bockmanni e A. paranae apresentaram de 2n=50 cromossomos. Já A. fasciatus evidenciou 2n=46 cromossomos padrão. Todos os cariótipos das três espécies foram constituídos de cromossomos dos tipos metacêntricos, submetacêntricos, subtelocêntricos e acrocêntricos. Na espécie A. bockmanni (população Alambari), foram observados microcromossomos B acro e metacêntricos. Supranumerários meta, acro e subtelocêntricos observados na espécie A. fasciatus, e cromossomos B do tipo metacêntricos em A. paranae. As seis populações de A. bockmanni apresentaram divergências da heterocromatina ... / Among the fish of the Neotropical region, we have the Characidae family whose genus Astyanax is the most common and diverse, with 141 species validated. Studies with several species of the group have shown a particular population dynamics, leading to the formation of genetically variable populations, besides the occurrence of B chromosomes, which in this genus exhibit intense polymorphisms. These chromosomes are classified as additional elements dispensable, and are present in plants, fungi and animals of varying frequencies and morphologies. So, six distinct populations of Astyanax bockmanni collected in the basins of the Tietê and Paranapanema were analyzed, beyond samples of the species A. fasciatus and A. paranae carriers of supernumerary chromosomes. The studies were based on classical cytogenetic techniques (Giemsa staining, impregnation with silver nitrate, and C-banding), and molecular (fluorescence in situ hybridization FISH and animal by means of 18S and 5S rRNA probes; genes for histones H1, H3, and transposable elements Rex1, Rex3 and Rex6). We also performed microdissection, amplification, marking and hybridization of a B-specific probe acrocentric B chromosome of A. bockmanni, named Babock. The results indicated that all specimens of A. bockmanni and A. paranae presented 2n=50 chromosomes. A. fasciatus showed 2n=46 chromosomes default. All karyotypes of the three species were made up of chromosomes metacentric, submetacentric, subtelocentric and acrocentric types. The species A. bockmanni (Alambari population) were observed B microchromosomes metacentric and acro Supernumerary, were acro and subtelocentric observed in the species A. fasciatus, and the metacentric B chromosomes in type A. paranae. The six populations of A. bockmanni showed differences in the constitutive heterochromatin and multiple NOR except the population Capivara river, which indicated a simple NOR system. Additionally, the 18S rRNA gene revealed ...

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-03Bitstream added on 2014-11-10T11:57:26Z : No. of bitstreams: 1 000791226.pdf: 1902973 bytes, checksum: 9927a38cc35b88c72a4837a5f9faedd4 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A utilização do praguicida Diuron na agricultura e a sua metabolização no ambiente em compostos potencialmente tóxicos pode comprometer a saúde dos ecossistemas aquáticos e de organismos não alvo ali presentes. O objetivo principal deste estudo avaliou se os metabólitos 3-(3,4-diclorofenil)-3-metilureia (DCPMU), o 3,4-diclorofenilureia (DCPU) e o 3,4- dicloroanilina (DCA) gerados a partir da biotransformação do diuron, geram mais ou menos efeitos que o próprio diuron em parâmetros genotóxicos e bioquímicos em peixes Astyanax sp. Foram realizados testes de toxicidade com o diuron e os metabólitos a fim de obter a CL50 de cada composto. Foi visto que o diuron e o DCA possuem semelhante toxicidade a lambaris, uma vez que seus valores de CL50 foram muito próximos (0,75 e 0,89 mg/L, respectivamente). O valor de CL50 para o DCPMU foi duas vezes maior (1,42 mg/L) e para o DCPU foi de três vezes maior que a do diuron (>3,0 mg/L), o que indica ser o metabólito de menor potencial tóxico. A partir do valor de CL50, realizou-se a exposição dos lambaris a concentrações subletais (CL1= 0,015 mg/L e CL10=0,15 mg/L do diuron) por dois e sete dias para avaliar os parâmetros bioquímicos e genotóxicos desses compostos. A genotoxicidade foi avaliada pelo método do cometa e foi visto que a metabolização do diuron não minimiza os efeitos genotóxicos em lambaris uma vez que os metabólitos DCA, DCPMU e DCPU são capazes de causar lesões no DNA dos peixes. Parâmetros bioquímicos foram avaliados pela medida da atividade de enzimas de biotransformação (EROD e GST), de defesa antioxidante (SOD, GPx e CAT) e ocorrência de peroxidação lipídica (MDA). A atividade da EROD aumentou pela exposição dos lambaris aos três metabólitos em brânquias e fígados. A GST foi inibida pela exposição ao DCA, nas brânquias e pela exposição ao DCPMU e DCPU em brânquias e fígado. A atividade da GST aumentou no fígado de lambaris expostos ao ... / Diuron is a pesticide used in the agriculture and its transformation in potential toxic compounds can be harmful to aquatic ecosystem and animals. This work had as main objective discover if the metabolites 3-(3,4-dichlorophenyl)-3-methylurea (DCPMU), 3,4- dichlorofhenylurea (DCPU) and 3,4-dichloroaniline (DCA) produced in the diuron degradation may cause more or less effects than the pesticide in genotoxic and biochemistry parameters in fish. Toxicity tests were performed with the diuron and its metabolites to obtain the LC50. We observed that the diuron and the DCA have similar toxicity to fish observed by the low values of LC50. The DCPMU LC50 is twice higher and DCPU is three times higher than diuron and DCA. It indicating that these metabolites can be less toxic than the others compounds. From LC50 values, fish exposures were performed at LC1 (0.015 mg/L) and LC10 (0.15 mg/L) of diuron concentration by two and seven days. The genotoxicity was measured by comet assay and we observed that the degradation of diuron increase the genotoxic effects, whereas the DCA, DCPMU and DCPU are able to promote DNA damage. Biochemistry parameters were measured by analysis of biotransformation enzymes (EROD and GST), antioxidant defenses (SOD, GPx and CAT) and lipid peroxidation (MDA). EROD activity is increased after all metabolites exposure in both tissues. GST activity is inhibited after DCA gill exposure and DCPMU and DCPU gill and liver exposures. GST activity also is increased after DCA exposure in liver. SOD is induced in all metabolites treatment and GPx to DCPMU and DCPU exposure. CAT activity is increased after DCA exposure and it is inhibited after DCPMU and DCPU exposures in both tissues. CAT is also inhibited after diuron exposure in the liver. The exposure of diuron and its three main metabolites can change biochemistry parameters indicators of oxidative stress in Astyanax sp. in the conditions tested in this study. In general, the ...