Orientador: Renata de Oliveira Mattos Graner / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-24T14:42:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alves_LiviaAraujo_M.pdf: 2021430 bytes, checksum: 07a84279508cd84bfef41550d34e6ca7 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Streptococcus mutans (SM) é um patógeno oral da cárie dentária e endocardite infecciosa. Para se estabelecer no hospedeiro, SM precisa se adaptar às condições biofísicas e aos fatores de defesa do hospedeiro. Para isto, SM utiliza sistemas reguladores de transcrição de dois componentes (SDC). Dois SDCs, VicRK e CovR, são associados à virulência de SM. O objetivo deste trabalho foi investigar a participação dos reguladores de transcrição gênica VicRK e CovR na evasão de SM ao sistema complemento e fagocitose. Dessa forma, a marcação pelo complemento foi comparada entre os mutantes vicK- e covR- obtidos da cepa SM UA159 (UAvic e UAcov, respectivamente) e UA159, através da incubação com soro humano a 20% ou soro humano livre de C1q (30 min, 37 ?C, 10% CO2). A deposição de C3b sobre a superfície de SM foi analisada também nas cepas cultivadas em meio com 0,1% de sacarose. A quantidade de C3b nas superfícies bacterianas foi determinada através de reações com anticorpos IgG de cabra anti-C3 humano conjugado com FITC e análise de citometria. Bactérias incubadas com PBS foram usadas como controle negativo. O reconhecimento das cepas de SM por anticorpos séricos opsonizantes foi realizado com anticorpos anti-IgG humano conjugado com FITC e anti-IgM humano conjugado com APC. Para análise da fagocitose, as mesmas cepas coradas com FITC foram incubadas com neutrófilos (PMN) por 5 e 30 min. na presença ou ausência de soro humano a 20%; o número de PMN com bactérias fagocitadas foi determinado por citometria de fluxo. A deposição de C3b foi menor em UAcov (10,86%) e em UAvic (7,6%), comparado à UA159 (23,5%). Na presença de sacarose, a marcação por C3b caiu para 10,86% em UA159, e para os mutantes UAcov e UAvic foi reduzida a 6,6 e 3,96%, respectivamente (ANOVA p<0,001). Os mutantes UAcov e UAvic foram menos reativos contra anticorpos IgG e IgM. A fagocitose por PMN foi reduzida em UAcov e UAvic em cerca de 50 a 60% em relação à UA159 nos tempos de 5 e 30 min. (ANOVA p< 0,005). Assim, a inativação dos sistemas VicRK e CovR reduz significativamente a deposição de C3b do complemento e a frequência de fagocitose de SM, indicando que estes SDC regulam genes envolvidos no escape à opsonização pelo complemento / Abstract: Streptococcus mutans (SM) is an oral pathogen of dental caries and infective endocarditis. To get established in host sites, SM needs to adapt to biophysical conditions and host defense factors. To this purpose, SM applies transcriptional regulatory systems of two components (SDC). Two SDCs, VicRK and CovR, have been implicated in SM virulence. The aim of this study was to investigate the role of VicRK and CovR on SM evasion from complement system and phagocytosis by neutrophils (PMN). Thus, complement deposition was compared between vicK- and covR- mutants obtained strain UA159 (UAvic and UAcov, respectively) and the parent UA159 exposed to 20% human serum or human serum depleted of C1q (30 min, 37ºC, 10% CO2). Deposition of C3b on SM surfaces was also analyzed in strains cultivates in the presence of 0.1% sucrose. The amount of C3b on the bacterial surface was determined by reactivity with goat IgG antibody anti-C3 conjugated FITC and flow cytometry analysis. Bacteria incubated with PBS were used as negative control. The reactiveness of SM strains with human serum antibodies was quantified by flow citometry with anti- human IgG- FITC and anti- human IgM-APC antibodies. For analysis of phagocytosis, the strains stained with FITC were incubated with PMN during 5 and 30 min. in the presence or absence of 20% human serum; the number of internalized bacteria by PMN was determined by flow cytometry. The deposition of C3b on UAcov (10.86 %) and UAvic (7.6%) was lower, compared to UA159 (23.5%) (ANOVA p<0,001). In the presence of sucrose, C3b deposition decreased to 10.86 % in UA159, and to 6.6 and 3.96% in UAcov and UAvic , respectively (ANOVA p < 0.001). The UAcov and UAvic mutants were less reactive with IgG and IgM antibodies. The phagocytosis by PMN was 50 to 60% reduced in UAcov and UAvic compared to UA159, respectively at times 5 and 30 min. (ANOVA p < 0.005). Thus, inactivation of CovR and VicRK TCS systems significantly reduces deposition of complement C3b and phagocytosis by PMN in a serum-dependent way, indicating that these SDC regulate genes involved in the evasion of complement to opsonization / Mestrado / Microbiologia e Imunologia / Mestra em Biologia Buco-Dental

Orientador: Paulo Cesar Muniz de Lacerda Miranda / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-08-26T08:46:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Naciuk_FabricioFredo_D.pdf: 5766349 bytes, checksum: f8a483081babf6f2f69d11fe85cf43ec (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: No presente trabalho, foi estudada a preparação da 5,8-dimetoxisoquinolina através de um expediente baseado na reação de Pomeranz-Fritsh. Na etapa de ciclização deste protocolo foi empregada a N-(2,5-dimetoxibenzil)-2,2-dimetoxietanamina, além de seus dois derivados com o nitrogênio protegido (grupo tosila ou nosila). O núcleo isoquinolíco foi preparado em quatro etapas, a partir de matérias comercialmente disponíveis, com 90% de rendimento. Posteriormente, a 5,8-dimetoxisoquinolina foi submetida à desproteção oxidativa, mediada por NBS ou ácidos trialoisocianúricos, seguida de uma etapa de aminação/oxidação. Assim, quatro produtos naturais foram preparados: as caulibugulonas A e D em cinco etapas e com rendimentos globais de 50% e 26% respectivamente e as caulibugulonas B e C em seis etapas com rendimentos globais de 31% e 61% respectivamente. Ainda, baseado nos estudos de obtenção das caulibugulonas A-D, foi possível preparar dois intermediários sintéticos, a 6-cloro-7-(fenilamino)isoquinolino-5,8-diona e a 7-(fenilamino)isoquinolino-5,8-diona) com rendimentos de 79% (duas etapas) e 45% (one-pot), respectivamente, a partir da isoquinolina. Na sequência, através de ciclização intramolecular promovida por fonte de paládio, a 5H-pirido[3,4-b]carbazol-5,11(10H)-diona foi preparada com 65% de rendimento a partir da 7-(fenilamino)isoquinolino-5,8-diona (via ativação C-H) ou com 50% de rendimento a partir da 6-cloro-7-(fenilamino)isoquinolino-5,8-diona (via arilação direta). Assim, após reações de metilação/redução, a isoelipticina foi preparada com 18% de rendimento global em nove etapas / Abstract: In the present work, the preparation of 5,8-dimethoxyisoquinoline was studied through an expedient based on the reaction of Pomeranz-Fritsh. In the cyclization step of this protocol was applied to N-(2,5-dimethoxy)-2,2-dimethoxyethanamine in addition to their two derivatives with protected nitrogen (nosyl or tosyl group). The isoquinolic core was prepared in four steps from commercially available materials, with 90% yield. Later 5,8-dimethoxyisoquinoline, was subjected to oxidative deprotection, mediated by NBS or trihaloisocyanuric acids, followed by one amination/oxidation step. Thus, the four natural products have been prepared: caulibugulones A and D in five steps and 50% and 26%, overall yield, respectively, and caulibugulones B and C in six steps with overall yields of 31% and 61% respectively. Also, based on studies by obtaining the caulibugulones A-D, it was possible to prepare two synthetic intermediates: 6-chloro-7-(phenylamino)-isoquinoline-5,8-dione and 7-(phenylamino)-isoquinoline-5,8-dione with 79% (two steps) and 45% (one-pot) yield, respectively, from the isoquinoline. Following, through intramolecular cyclization promoted by a source of palladium, 5H-pyrido[3,4-b]carbazole-5,11(10H)-dione was prepared in 65% yield from 7-(phenylamino)isoquinoline-5,8-dione (via C-H activation) or 50% yield from 6-chloro-7-(phenylamino)-isoquinoline-5,8-dione (via direct arylation). Thus, after methylation/reduction reactions, isoellipticine was prepared in 18% overall yield in nine steps / Doutorado / Quimica Organica / Doutor em Ciências

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:42:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_Miguel_Pinto_de_Oliveira.pdf: 962671 bytes, checksum: 4149d63d44ce0a91f63fbaa9e92fe734 (MD5) Previous issue date: 2008-08-01 / Carvões ativados são muito utilizados no tratamento de águas, no processo de refino de açúcar, na clarificação de efluentes, na purificação de ar, etc. Seu poder adsortivo está associado às características texturais como área superficial, volume e área de microporos. Neste trabalho elaborou-se carvão ativado a partir de caroços de pêssego, que atualmente são descartados no meio ambiente. Avaliou-se o rendimento, densidade, índice de fenol, número de iodo e propriedades texturais em função da temperatura de carbonização dos carvões ativados. Observou-se que a 700°C, na concentração do agente ativador ZnCl2 de 6 mol L-1, e tempo de impregnação de 3 horas, obteve-se um índice de iodo médio de 988 mg de I2 g-1, valor superior aos carvões ativados comercializados no Brasil. Portanto, conclui-se que os caroços de pêssegos podem ser utilizados como precursores para a produção de carvão ativado. / Carvões ativados são muito utilizados no tratamento de águas, no processo de refino de açúcar, na clarificação de efluentes, na purificação de ar, etc. Seu poder adsortivo está associado às características texturais como área superficial, volume e área de microporos. Neste trabalho elaborou-se carvão ativado a partir de caroços de pêssego, que atualmente são descartados no meio ambiente. Avaliou-se o rendimento, densidade, índice de fenol, número de iodo e propriedades texturais em função da temperatura de carbonização dos carvões ativados. Observou-se que a 700°C, na concentração do agente ativador ZnCl2 de 6 mol L-1, e tempo de impregnação de 3 horas, obteve-se um índice de iodo médio de 988 mg de I2 g-1, valor superior aos carvões ativados comercializados no Brasil. Portanto, conclui-se que os caroços de pêssegos podem ser utilizados como precursores para a produção de carvão ativado.

Orientador: Carlos Roque Duarte Correia / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-08-27T10:03:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Azambuja_Franciscode_D.pdf: 29528823 bytes, checksum: e651bbfc392063bea6be92abe74dbcba (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: Neste trabalho, ativações C-H catalisadas por Pd(II) e Rh(III) foram exploradas para a obtenção de moléculas com potencial atividade biológica, em especial 1,1- e 1,2-diariletanos. Para o paládio, foi investigada a hidroarilação de alcinos de Fujiwara como um método rápido, brando e direto para a obtenção de ?-aril-?-heteroaril acrilatos. Inicialmente, o mecanismo desta reação foi estudada através de estudos de espectrometria de massas e ressonância magnética nuclear para elucidar a atuação do catalisador e os fatores envolvidos na estereosseletividade. Após este estudo, as condições reacionais foram reavaliadas para preparação de ?-aril-?-heteroaril acrilatos em bons rendimentos e seletividades. O paládio também foi usado como catalisador de arilações de Heck-Matsuda empregadas como etapa-chave na síntese de anidridos maleicos diarilados, a partir dos quais novos análogos de combretastatina A4 foram preparados. Estes novos análogos e os adutos da hidroarilação de alcinos de Fujiwara foram submetidos a testes de atividade antiproliferativa em células tumorais humanas. De maneira geral, os produtos de Fujiwara apresentaram melhores perfis de atividades, em especial para linhagens de células de rim e ovário, enquanto que os derivados de anidrido maleico diarilado mostraram-se muito pouco ativos para todas as linhagens. Esta ausência de atividade foi atribuída a interações estéreas desfavoráveis detectadas em estudos preliminares de docagem. Por último, ativações C-H catalisadas por 1,2,3,4,5-pentametilciclopentadienilródio(III) ([Cp*Rh(III)]) foram estudadas em dois projetos diferentes, um envolvendo 1,3-diinos e outro com ?-halo/pseudohalocetonas como parceiros de acoplamento, para a obtenção de diversos bis-heterociclos adjacentes e N-heterociclos monossubstituídos, respectivamente, com ênfase à preparação de núcleos isoquinolona / Abstract: New Pd(II) and Rh(III) catalysed C-H activations methods were developed to the obtaining of potential biologically active molecules, particularly 1,1- e 1,2-diarylethanes. With palladium, the Fujiwara¿s hydroarylation of alkynes was investigated as a fast, mild and direct method to the synthesis of ?-aryl-?-heteroaryl acrylates. Initially, the mechanism of this reaction was studied using nuclear magnetic resonance and mass spectrometry to elucidate the catalyst role and the key factors controlling the stereoselectivity. After, the reaction conditions were optimized in order to prepare the ?-aryl-?-heteroaryl acrylates in good yields and selectivities. The palladium was also applied as catalyst to the Heck-Matsuda arylations employed as the key step to the synthesis of non-symmetric diaryl maleic anhydrides. From such compounds new combretastatin A4 analogs were produced. These new compounds and the Fujiwara adducts were tested against several human tumor cells. The results were much better to the Fujiwara products, especially to kidney and ovary tumor cell lines. In contrast, the diaryl maleic anhydrides derivatives showed very low activity for all kinds of cells tested. This absence of activity was attributed to unfavorable steric interactions detected in preliminary docking studies. Last, the C-H activations catalysed by 1,2,3,4,5-pentamethylciclopentadienylrhodium(III) ([Cp*Rh(III)]) were explored in two different projects: 1) the C-H activation/1,3-diyne strategy to the synthesis of adjacent bis-heterocycles and 2) ?-halo/pseudohaloketones as oxidized alkyne equivalents to the selectively preparation of monosubstituted N-heterocycles, in particular the isoquinolone core / Doutorado / Quimica Organica / Doutor em Ciências

A literatura recente sugere que a fadiga mental piora o desempenho de atletas durante testes contrarrelógio (TT) de ciclismo. Assim o objetivo deste estudo foi verificar se a cafeína poderia reverter ou bloquear os efeitos negativos da fadiga mental em um contrarrelógio de 20km (TT20km). Métodos: Doze ciclistas treinados, com experiência em TT há pelo menos 2 anos, e nível de performance > 3 (34.3 ± 6.2 anos; 179.3 ± 5.1 cm; 77.6 ± 6.8 kg; 13.8 ± 4.5 % de gordura corporal; 58.9 ± 6.2 ml.kg-1.min-1; 367.0 ± 32.5 WPEAK), realizaram cinco visitas ao laboratório: 1) PRELIMINAR: para seleção dos sujeitos e familiarização com os instrumentos; 2) CONTROLE: foram realizadas três contrações voluntárias isométrica máxima (CVM), cujo maior torque encontrado entre elas definirá o valor de 70% para contração voluntária isométrica submáxima (CVIS) nas sessões seguintes. Posteriormente a CVIS, foi realizado o TT20km sem manipulação cognitiva ou suplementação; 3) FADIGA MENTAL (FM): execução do teste de atenção sustentada (RVIP), CVIS e TT20km respectivamente; 4) PLACEBO: ingestão da cápsula de placebo (FM + PLA) em seguida teste de RVIP, CVIS e TT20km; 5) CAFEÍNA: ingestão de cafeína (FM + CAF), consequentemente realizaram o teste de RVIP, CVIS e o TT20km). A atividade cerebral do córtex pré-frontal e córtex motor primário foi analisada por meio de eletroencefalografia (EEG) registrada antes e depois do teste RVIP. Igualmente, EEG do córtex pré-frontal e motor primário foi registrada durante uma contração voluntária isométrica submáxima, realizada antes do TT20km. Para as análises de comparações entre pré e pós tarefa cognitiva de atenção sustentada utilizou-se um teste T-student. Para as comparações múltiplas analisou-se por modelo misto entre a condição e a distância no TT20km, quando necessário o teste de Bonferroni foi utilizado. Resultados: CAF melhorou o desempenho em ciclistas mentalmente fatigados em ~ 1.8 % para FM e ~ 1.7 % para PLA (p = 0.00) e aumentou ~ 4.4 % para FM e ~ 3.6 % do que o placebo de WMEAN em FM + CAF (p = 0,00). A ativação cortical aumentou em ~ 4.8 % nas ondas teta de EEG após teste RVIP em FM e reduziu em FM + CAF ~ 8.8 % e FM + PLA ~ 4.8%. A razão entre PSE e WMEAN foi menor em FM + CAF do que nas outras condições (p = 0.01). Os ciclistas apresentaram maior motivação nos primeiros 2 km em FM + CAF comparado a FM e FM + PLA (p = 0.02) e maior afeto nos últimos 2 km em FM e FM + CAF do que FM + PLA (p = 0.01). Uma menor ativação cortical durante a CVIS e uma maior eficiência neuromuscular foi identificada na condição FM + CAF (p = 0.03). Conclusão: A CAF bloqueou os efeitos negativos da fadiga mental no CPF, melhorou o desempenho, diminuiu a PSE durante TT20km e aumentou a eficiência neuromuscular / Recent literature suggests that mental fatigue worsens the performance of athletes during time trial (TT) cycling tests. Thus, the aim of this study was to verify if caffeine could reverse or block the negative effects of mental fatigue in a TT of 20km (TT20km). Methods: Twelve trained cyclists with experience in TT for at least 2 years, and performance level > 3 (34.3 ± 6.2 years, 179.3 ± 5.1 cm, 77.6 ± 6.8 kg, 13.8 ± 4.5 % body fat 58.9 ± 6.2 ml .kg-1.min-1; 367.0 ± 32.5 WPEAK), carried out five visits at laboratory: 1) PRELIMINARY: for selection of subjects and familiarization with the instruments; 2) CONTROL: three maximal isometric voluntary contractions (CVM) were performed, the highest torque found between them will define the value of 70% for voluntary isometric submaximal contraction (CVIS) in the following sessions. After the CVIS, the TT20km will be performed without cognitive manipulation or supplementation; 3) MENTAL FATIGUE (FM): execution of the sustained attention test (RVIP), CVIS and TT20km respectively; 4) PLACEBO: placebo capsule intake (FM + PLA) then RVIP, CVIS and TT20km test; 5) CAFFEINE: caffeine intake (FM + CAF), consequently performed the RVIP, CVIS and TT20km tests). Brain activity of the prefrontal cortex and primary motor cortex will be analyzed by electroencephalography (EEG) recorded before and after the RVIP test. Likewise, EEG of the prefrontal cortex and primary motor will be recorded during a submaximal isometric voluntary contraction, performed before TT20km. For the analysis of comparisons between pre and post cognitive task of sustained attention was used a T-student test. For the multiple comparisons, the mixed model was analyzed for the condition and the distance in the TT20km, and the best matrix was identified for each case, when necessary the Bonferroni test was used. Results: CAF improved performance in mentally fatigued cyclists at ~ 1.8 % for FM and ~ 1.7 % for PLA (p = 0.00) and increased ~ 4.4% for FM and ~ 3.6% than WMEAN on FM + CAF (p = 0.00). Cortical activation increased by ~ 4.8 % in the theta EEG waves after RVIP test in FM and reduced in FM + CAF ~ 8.8 % and FM + PLA ~ 4.8 %. The ratio of RPE to WMEAN was lower in FM + CAF than in other conditions (p = 0.01). The ciclists started the TT20km more motivated in first 2 km (p = 0.02) and finished with more pleasure in the last 2km in FM and FM + CAF than in FM + PLA (p = 0.01). Lower cortical activation during CVIS and greater neuromuscular efficiency was identified in the FM + CAF condition (p = 0.03). Conclusion: CAF blocked the negative effects of mental fatigue on CPF, improved performance, decreased PSE over TT20km and increased neuromuscular efficiency

O presente trabalho tem como objetivo caracterizar três agrupamentos de genes da alfa proteobactéria Caulobacter crescentus envolvidos na resposta a metais e antibióticos. Analisamos o agrupamento composto pelos genes CC1637-CC1640, que contém um sistema BlaR/BlaI de transdução de sinal, e realizamos uma análise comparativa de dois sistemas de efluxo da família RND composto pelos genes CC2720-CC2725 e CC2388-CC2390 que estariam envolvidos na resposta a metais cádmio e zinco. Mutantes simples e duplos com deleção em fase foram obtidos, e o estudo da atividade promotora foi realizado através de ensaio de <font face=\"Symbol\">b-galactosidase utilizando gene repórter lacZ . Ensaios de RT-PCR e atividade <font face=\"Symbol\">b-galactosidase mostraram que o gene CC1638 provavelmente não possui promotor próprio e que os genes CC1637- CC1640 podem consituir um operon. A atividade promotora do gene CC1640 não responde a H2O2, Cd2+ e Zn2+, mas a linhagem <font face=\"Symbol\">DCC1640 apresentou baixa viabilidade na presença de Cd2+. As linhagens <font face=\"Symbol\">DCC1637 e <font face=\"Symbol\">DCC1638 mostraram sensibilidade a t-butil-hidroperóxido. A linhagem <font face=\"Symbol\">DCC1640 mostrou-se sensível aos antibióticos CTX e PPT, e ensaios de <font face=\"Symbol\">b-galactosidase em placa e em meio liquido mostraram indução da expressão pelos antibióticos CTX e CFE. Observamos uma auto-regulação do operon pela proteína codificada pelo gene CC1640 (BlaI), confirmado por ensaios de EMSA. A presença de BlaR inibe a ligação da proteína BlaI ao promotor, sugerindo que ambas BlaI/BlaR regulem em conjunto o promotor do gene CC1640. Análise in silico do consenso TTACGNNCGTAA localizado no promotor de CC1640 identificou esta sequência na região promotora de outros genes. A análise da expressão relativa sugere que os genes CC1568, CC1230 e CC2661 são regulados pela proteína BlaI, sugerindo que BlaI regula a expressão de outros genes possivelmente envolvidos na resposta a antibióticos <font face=\"Symbol\">b-lactâmicos. Ensaios de atividade <font face=\"Symbol\">b-galactosidase da região intergênica CC2720-CC2721 mostraram que esta não possui atividade promotora, e análise por RT-PCR confirmou que os genes CC2720-CC2721 são co-transcritos e que fazem parte do operon CC2720-CC2725. A expressão do operon mostrou indução significativa na presença de Cd2+, moderada indução na presença de Zn2+ e Co2+, e pouca indução na presença de Ni2+. A expressão do operon CC2388-CC2390 é altamente induzida na presença de níquel e cobalto, não é induzida por cádmio e moderadamente induzida por zinco. A linhagem <font face=\"Symbol\">DCC2724 não é sensível a zinco, cobalto ou níquel. A linhagem <font face=\"Symbol\">DCC2390 é sensível a cobalto, pouco sensível a níquel e não sensível a zinco, e ambas as linhagens foram sensíveis a cádmio. A obtenção do duplo mutante, assim como sua complementação, foram realizadas, e os resultados sugerem que se trata de dois sistemas de efluxo com diferentes respostas a metal. / The aim of this work is to characterize three clusters of genes from the alpha proteobacterium Caulobacter crescentus involved in metal and antibiotics response. We analyzed the cluster comprising genes CC1637-CC1640, which contains a BlaR/BlaI signal transduction system, and we performed a comparative analysis with two RND efflux systems consisting on genes CC2720-CC2725 and CC2388-CC2390, which are probably involved in cadmium and zinc response. Mutant strains for one or two of these genes were obtained, and the study of promoter activity was performed by <font face=\"Symbol\">b-galactosidase activity assays using lacZ as reporter gene. RT-PCR and <font face=\"Symbol\">b-galactosidase activity assays revealed that the CC1638 gene probably does not possess an exclusive promoter, and that the genes CC1637-CC1640 may constitute an operon. The promoter of CC1640 does not respond to H2O2, Cd2+ and Zn2+, but the <font face=\"Symbol\">DCC1640 strain presented low viability in the presence of Cd2+. The <font face=\"Symbol\">DCC1637 and <font face=\"Symbol\">DCC1638 strains showed sensitivity to t-butyl-hydroperoxide. The <font face=\"Symbol\">DCC1640 strain showed sensitivity to the antibiotics CTX and PPT, and <font face=\"Symbol\">b-galactosidase activity assays performed both on plates and liquid medium showed induction of the expression by the presence of antibiotics CTX and CFE. We observed auto-regulation of the operon by the protein encoded by the CC1640 gene (BlaI), which was confirmed by EMSA assays. The presence of BlaR inhibits the binding of the BlaI protein to the promoter, suggesting that both BlaI/BlaR regulate the CC1640 gene promoter. In silico analyses for the TTACGNNCGTAA consensus, located on CC1640 promoter, identified this sequence in promoter regions of other genes. Relative expression analyses indicate that the genes CC1568, CC1230 and CC2661 are regulated by the BlaI protein, suggesting that BlaI regulates the expression of other genes, possibly involved in <font face=\"Symbol\">b-lactamic antibiotics response. <font face=\"Symbol\">b-galactosidase activity assays of the intergenic region CC2720-CC2721 showed that it does not possess promoter activity, and a RT-PCR analysis confirmed that the genes CC2720-CC2721 are co-transcribed and belong to the CC2720-CC2725 operon. The expression of the operon showed significant induction in the presence of Cd2+, moderate induction in the presence of Zn2+ and Co2+, and a slight induction in the presence of Ni2+. The expression of the CC2388-CC2390 operon is highly induced in the presence of nickel and cobalt, not induced by cadmium and moderately induced by zinc. The <font face=\"Symbol\">DCC2724 strain is not sensitive to zinc, cobalt or nickel. The <font face=\"Symbol\">DCC2390 strain is sensitive to cobalt, slightly sensitive to nickel and not sensitive to zinc, and both strains are sensitive to cadmium. A double mutant was constructed, as well as a complemented strain, and results suggest that these are two efflux systems with distinct metal responses.

A profilaxia pré-exposição (PrEP) ao HIV se consolidou como uma importante estratégia de combate ao avanço da epidemia. Ainda assim, a incidência de casos da infecção vem aumentando na população jovem, assim como a de outras infecções sexualmente transmissíveis (ISTs), que atuam como importante fator de risco para transmissão do HIV-1. Entre as infecções mais frequentemente diagnosticadas estão Chlamydia trachomatis (CT) e Neisseria gonorrhoeae (NG). A presença de lesões na mucosa genital e anal são fatores de risco estabelecidos para a transmissão do HIV-1, porém o impacto das infecções assintomáticas ainda é pouco conhecido. Dados recentes mostram que a ativação sistêmica de linfócitos T é um fator de risco para a aquisição da infecção pelo HIV-1. Nesse estudo, estudamos a ativação de linfócitos T na presença de infecção anorretal assintomática por CT e/ou NG. Células mononucleares do sangue periférico de voluntários do PrEP Brasil, um estudo clínico demonstrativo de PrEP ao HIV em homens que fazem sexo com homens, foram descongeladas para análise da ativação de linfócitos T. Trinta e quatro participantes com swab anorretal positivo para CT e/ou NG foram selecionados, enquanto assintomáticos e negativos para outras ISTs. Trinta e cinco controles foram selecionados randomicamente. Encontramos uma maior frequência de linfócitos T CD8+ HLA-DR+CD38+ (1,5 vs. 0,9% p < 0,005) no grupo com infecção assintomática. Os linfócitos T CD8+ de memória também apresentaram uma maior expressão dos marcadores de ativação. Os marcadores de exaustão e senescência foram significantemente mais expressos no grupo com a infecção. Não foi observado aumento ou diferença nos níveis de CD14 solúvel no plasma. Nossos achados demonstram que as infecções anorretais assintomáticas por CT e NG induzem a ativação sistêmica de linfócitos T CD8+. Considerando a alta prevalência dessas infecções e o risco associado de aquisição da infecção pelo HIV-1, o rastreamento periódico e o tratamento sistemático devem sem explorados em conjunto com as estratégias de prevenção ao HIV / Oral antiretroviral pre-exposure prophylaxis (PrEP) has been established as a pivotal strategy in the prevention against HIV epidemic. However, the incidence of HIV-1 infections has been rising among the youth, as well as other sexually transmitted infections (STIs), acting as an important risk factor for HIV-1 acquisition. Infection by Chlamydia trachomatis (CT) and Neisseria gonorrhoeae (NG) are among the most diagnosed. Although the presence of mucosal lesions is a known risk factor for HIV-1 acquisition, the potential increase in risk associated with asymptomatic STIs is not completely understood. Recent data defined higher T cell activation as a single risk factor for sexually acquired HIV-1 infection. We examined the effect of asymptomatic CT and/or NG anorectal infection on immune activation. Peripheral blood mononuclear cells from participants of PrEP Brasil, a study of daily oral PrEP among healthy men who have sex with men, were analyzed for T cell activation by flow cytometry. Thirty-four participants with positive anorectal swab for CT and/or NG were selected, while negative for other STIs and without any reported symptoms. Thirty-five controls were randomly selected. We found a higher frequency of CD8+ HLA-DR+CD38+ T cells (1.5 vs. 0.9% p < 0.005) in the group with CT and/or NG infection and a greater median proportions of activation markers expression in CD8+ T cells with memory phenotype. Exhaustion and senescence markers were also significant higher in the infected group. No difference was observed in the soluble CD14 levels. Our findings suggest that asymptomatic CT and NG anorectal infection lead to a systemic activation of the T cell compartment. Considering the high prevalence of asymptomatic infection and the risk of HIV-1 acquisition associated, regular screening and treatment should be explored as an adjuvant tool for HIV prevention

A profilaxia pré-exposição (PrEP) ao HIV se consolidou como uma importante estratégia de combate ao avanço da epidemia. Ainda assim, a incidência de casos da infecção vem aumentando na população jovem, assim como a de outras infecções sexualmente transmissíveis (ISTs), que atuam como importante fator de risco para transmissão do HIV-1. Entre as infecções mais frequentemente diagnosticadas estão Chlamydia trachomatis (CT) e Neisseria gonorrhoeae (NG). A presença de lesões na mucosa genital e anal são fatores de risco estabelecidos para a transmissão do HIV-1, porém o impacto das infecções assintomáticas ainda é pouco conhecido. Dados recentes mostram que a ativação sistêmica de linfócitos T é um fator de risco para a aquisição da infecção pelo HIV-1. Nesse estudo, estudamos a ativação de linfócitos T na presença de infecção anorretal assintomática por CT e/ou NG. Células mononucleares do sangue periférico de voluntários do PrEP Brasil, um estudo clínico demonstrativo de PrEP ao HIV em homens que fazem sexo com homens, foram descongeladas para análise da ativação de linfócitos T. Trinta e quatro participantes com swab anorretal positivo para CT e/ou NG foram selecionados, enquanto assintomáticos e negativos para outras ISTs. Trinta e cinco controles foram selecionados randomicamente. Encontramos uma maior frequência de linfócitos T CD8+ HLA-DR+CD38+ (1,5 vs. 0,9% p < 0,005) no grupo com infecção assintomática. Os linfócitos T CD8+ de memória também apresentaram uma maior expressão dos marcadores de ativação. Os marcadores de exaustão e senescência foram significantemente mais expressos no grupo com a infecção. Não foi observado aumento ou diferença nos níveis de CD14 solúvel no plasma. Nossos achados demonstram que as infecções anorretais assintomáticas por CT e NG induzem a ativação sistêmica de linfócitos T CD8+. Considerando a alta prevalência dessas infecções e o risco associado de aquisição da infecção pelo HIV-1, o rastreamento periódico e o tratamento sistemático devem sem explorados em conjunto com as estratégias de prevenção ao HIV / Oral antiretroviral pre-exposure prophylaxis (PrEP) has been established as a pivotal strategy in the prevention against HIV epidemic. However, the incidence of HIV-1 infections has been rising among the youth, as well as other sexually transmitted infections (STIs), acting as an important risk factor for HIV-1 acquisition. Infection by Chlamydia trachomatis (CT) and Neisseria gonorrhoeae (NG) are among the most diagnosed. Although the presence of mucosal lesions is a known risk factor for HIV-1 acquisition, the potential increase in risk associated with asymptomatic STIs is not completely understood. Recent data defined higher T cell activation as a single risk factor for sexually acquired HIV-1 infection. We examined the effect of asymptomatic CT and/or NG anorectal infection on immune activation. Peripheral blood mononuclear cells from participants of PrEP Brasil, a study of daily oral PrEP among healthy men who have sex with men, were analyzed for T cell activation by flow cytometry. Thirty-four participants with positive anorectal swab for CT and/or NG were selected, while negative for other STIs and without any reported symptoms. Thirty-five controls were randomly selected. We found a higher frequency of CD8+ HLA-DR+CD38+ T cells (1.5 vs. 0.9% p < 0.005) in the group with CT and/or NG infection and a greater median proportions of activation markers expression in CD8+ T cells with memory phenotype. Exhaustion and senescence markers were also significant higher in the infected group. No difference was observed in the soluble CD14 levels. Our findings suggest that asymptomatic CT and NG anorectal infection lead to a systemic activation of the T cell compartment. Considering the high prevalence of asymptomatic infection and the risk of HIV-1 acquisition associated, regular screening and treatment should be explored as an adjuvant tool for HIV prevention

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-03-11Bitstream added on 2014-06-13T19:28:21Z : No. of bitstreams: 1 silva_pb_me_rcla.pdf: 790741 bytes, checksum: d5249659f04bcedba18543a60ee45546 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente estudo teve como objetivo verificar se as intensidades do LFEMG e do ponto de quebra são semelhantes e se há diferença no valor do índice, calculando-se o RMS em intervalos referentes a cinco segundos ou ao ciclo de passada e estudar o comportamento da freqüência de passada (FP), amplitude (RMS) e freqüência da atividade eletromiográfica nos período pré (RMS-PRE, FM-PRE) e pós contato (RMS-PRE, FM-POS) dos músculos íleocostal (IC), reto femoral (RF), vasto lateral (VL), vasto medial (VM), bíceps femoral (BF), tibial anterior (TA) e gastrocnêmio lateral (GL), bem como da co-ativação dos músculos RF/BF, VL/BF, VM/BF e GL/TA nos períodos pré (PRE) e póscontato (POS) ao longo de um teste incremental, considerando as intensidades absolutas e quatro intensidades relativas: inicial (IIN), equivalente ao LFEMG (ILF), 15% abaixo (IAB) e 15% acima (IAC) do LFEMG. Onze voluntários foram submetidos a um teste incremental de corrida até exaustão voluntária. Os valores de RMS foram obtidos de duas formas, a cada cinco segundos do intervalo de corrida e a cada ciclo de passada. O LFEMG e o ponto de quebra foram determinados. Não houve diferenças significantes entre os valores dos índices obtidos pelas duas formas de análise nem entre os músculos. Entretanto, foi evidenciado que os valores de LFEMG foram maiores do que os do ponto de quebra apenas quando determinados pelos valores de RMS obtidos nos ciclos de passada. As velocidades relativas obtidas foram 9,2±0,4 km.h-1 na IAB, 10,6±0,7 km.h-1 na LFEMG e 12,3±0,5 km.h-1 na IAC. A partir dos 11 km.h-1 a FP, a RMS-PRE para o músculo IC e a RMS-POS para os músculos VL e VM apresentaram aumento. Nas intensidades relativas, houve aumento dos valores da FP, da RMS-PRE para os músculos BF, TA e GL, da RMS-POS e FM-POS para o músculo GL a partir da ILF. As correlações foram significantes para FP e FM-PRE do VL... / The aim of the present study was to verify whether eletromyographic fatigue threshold (EMGFT) and breakpoint intensities were similar and whether there is differences in the speed value between these indexes when calculated considering five seconds intervals or referent to stride cycle and study stride frequency (SF), amplitude and frequency of electromyographic activity behaviors on pre (PRE) and post (POS) contact periods for iliocostalis (IC), rectus femoris (RF), vastus lateralis (VL), vastus medialis (VM), biceps femoris (BF), tibialis anterior (TA) and gastrocnemius lateralis (GL), and co-activation ratio of RF/BF, VL/BF, VM/BF and GL/TA on PRE and POST periods during an incremental running protocol, considering absolute intensities and four relative intensities: initiail (IIN), equivalent to EMGFT (IFT), 15% below (IBE) and 15% above (IAB) EMGFT. Eleven males performed an incremental running test to exhaustion. RMS values were obtained every five seconds and during stride cycles of each running stage. EMGFT and breakpoint were determined for all muscles. There were no significant differences between two different indexes when calcula values obtained RMS calculation nor among different muscles. However, the EMGFT values were greater than breakpoint values when determined using RMS calculated for stride cycles, with no difference when obtained every five seconds. Relative intensities obtained were 9.2±0.4 km... (Complete abstract click electronic access below)

A utilização de materiais de referência certificados em análise química é requisito importante em sistemas de garantia da qualidade, pois permite que métodos analíticos sejam validados e que seja obtida a rastreabilidade metrológica de resultados. Isso permite que se obtenham resultados válidos e comparáveis entre si, tanto no espaço quanto no tempo. Neste trabalho, foram realizadas todas as etapas para o preparo de um material de referência de mexilhão nacional, desde a coleta até as etapas de processamento tais como liofilização, moagem, envase e esterilização. Foram utilizados princípios internacionalmente aceitos para a avaliação da homogeneidade e da estabilidade do material, utilizando-se as técnicas analíticas de análise por ativação neutrônica instrumental e espectrometria de absorção atômica. Por meio da organização de programa colaborativo, com a participação de laboratórios nacionais e estrangeiros, foi realizada a caracterização química do material de referência de mexilhão, com determinação de elementos que ocorrem na faixa de porcentagem em massa a mg kg-1, no total de 47 elementos, além de alguns radionuclídeos naturalmente presentes no material. Com a aplicação de técnicas estatísticas adequadas, considerou-se que há possibilidade de certificação de 11 desses elementos: As, Ca, Cl, Co, K, Mg, Mn, Na, Se, Th e Zn. Esse estudo pode ser considerado passo importante no desenvolvimento metrológico nacional, pois demonstra que a produção e caracterização de materiais de referência biológicos, de mexilhão em particular, é viável no Brasil, como ferramenta de garantia da qualidade para estudos ambientais e nutricionais realizados no país. / The use of certified reference materials in chemical analysis is an important requirement in quality assurance systems, as it allows the validation of analytical methods and the realization of the metrological traceability of results. Then, it is possible to obtain valid and comparable results not only in space, but also in time. In this study, all the steps for the preparation of a national mussel reference material were attained, from the collection of the bulk material to processing steps such as freeze-drying, grinding, bottling and sterilization. Internationally accepted principles were applied for the homogeneity and stability assessment of the material, using instrumental neutron activation analysis and atomic absorption spectrometry as analytical techniques. By means of a collaborative program with participation of Brazilian and foreign laboratories, the chemical characterization of the material was performed. Element content in the mass percentage to mg kg-1 range was determined for 47 elements and some radionuclides, naturally present in the material. With the application of suitable statistical treatment to the data, it was considered that the content of 11 of those elements may be certified: As, Ca, Cl, Co, K, Mg, Mn, Na, Se, Th and Zn. This study may be considered an important step in the national metrological development, as it shows that the production and characterization of biological reference materials, mussel in particular, is feasible in Brazil, as a tool for quality assurance of environmental and nutritional studies performed in the country.