Made available in DSpace on 2015-05-14T13:00:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 3314099 bytes, checksum: 6718a7629561d518b36935f1ca31ec59 (MD5) Previous issue date: 2013-10-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The fungi have become, over the last two decades, a major cause of illness in humans. Fungi of the genus Penicillium can be found in various substrates and affect immunocompromised people, hospitalized patients, many animals and plants, as well as compromise the quality of air indoors. The indiscriminate use of antibiotics and the resulting framework of resistance of microorganisms to conventional antimicrobial therapy has been stimulating researchers to seek alternative sources of these compounds, among them products derived by medicinal plants. Tendency to get phytochemicals from extracts, fractions, fixed or essential oils obtained from plant species is currently observed. In this context, the present study evaluated the in vitro antifungal activity of seven phytochemicals: carvacrol, citral, geraniol, linalool, pcymene, terpinolene and thymol, against twelve strains of Penicillium. Firstly, screening was carried out to find the phytochemical with the best activity by determining the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) by the broth microdilution technique. Following, the tests were proceeded with thymol, which were: determination of Minimum Fungicidal Concentration (MFC), effect of the phytochemical on mycelial growth kinetics, interference of thymol on germination of conidia and evaluation of the influence of thymol on the fungal morphology. To this end, we selected two strains, one that was more resistant and another with a more sensitive profile. The value of thymol MIC50 and MIC90 was 128μg/ml, while the CFM value ranged from 128μg/ml to 1024μg/ml. It was observed total radial mycelial growth inhibition at the three thymol concentrations used (128μg/ml, 256μg/ml and 512μg/ml) over 14 days of exposure. In the study of the interference of thymol on the conidia germination was observed inhibitory effect. At the concentration of 512μg/mL was found greater than 80% inhibition, at 256 μg/mL inhibition was higher than 75%, while in 128μg/mL inhibition was higher than 60%, all this for both strains tested, revealing concentration-dependent inhibitory effect. In the presence of thymol, morphological changes were observed in mycelial structure, such as decrease in the amount of conidia, reduction in the formation of reproductive structures with the appearance of rudimentary reproductive structures, besides the abnormal development of hyphae. Given the above, it is concluded that thymol has antifungal activity against strains of Penicillium and therefore represents a new possibility in the arsenal of products for the treatment of infections caused by this fungus. / Os fungos tornaram-se, ao longo das últimas duas décadas, uma das principais causas de doença em humanos. Fungos do gênero Penicillium podem ser encontrados nos mais variados substratos e afetam indivíduos imunocomprometidos, pacientes hospitalizados, animais e plantas diversas, além de comprometerem a qualidade do ar de ambientes internos. O uso indiscriminado de antibióticos e o decorrente quadro de resistência dos microrganismos à terapêutica antimicrobiana convencional vem impulsionando os pesquisadores a buscarem fontes alternativas desses fármacos, dentre elas, produtos de plantas medicinais. Observa-se, atualmente, uma tendência à obtenção de fitoconstituintes a partir de extratos, frações, óleos fixos ou essenciais, obtidos de espécies vegetais. Nesse contexto, o presente estudo avaliou a atividade antifúngica in vitro de sete fitoconstituintes: carvacrol, citral, geraniol, linalol, pcimeno, terpinoleno e timol, sobre doze cepas de Penicillium. Primeiramente, realizou-se uma triagem para encontrar o fitoconstituinte com melhor atividade, através da determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM), pela técnica de microdiluição. A seguir, prosseguiram-se os testes com o timol, quais foram: determinação da Concentração Fungicida Mínima (CFM), efeito do fitoconstituinte sobre a cinética de crescimento micelial do fungo, interferência do timol sobre a germinação dos conídios e avaliação da influência do timol sobre a micromorfologia fúngica. Para tanto, foram selecionadas duas cepas, uma que se mostrou mais resistente e outra com perfil mais sensível. O valor da CIM50 do timol, bem como da CIM90, foi 128μg/ml, já o valor da CFM variou de 128μg/ml a 1024μg/ml. Observou-se total inibição do crescimento micelial radial, nas três concentrações de timol utilizadas (128μg/ml, 256μg/ml e 512μg/ml), ao longo de 14 dias de exposição. No estudo da interferência do timol sobre a germinação dos conídios, observou-se efeito inibitório. Na concentração de 512μg/mL foi encontrada uma inibição superior a 80%, em 256 μg/mL a inibição foi superior a 75%, enquanto que em 128μg/mL a inibição foi superior a 60%, para as duas cepas testadas, revelando um efeito inibitório dependente da concentração. Na presença do timol, foram observadas alterações morfológicas na estrutura micelial, tais como diminuição do número de conídios, redução da formação de estruturas de reprodução com surgimento de estruturas reprodutivas rudimentares, além de desenvolvimento anormal das hifas. Diante do exposto, conclui-se que o timol apresenta atividade antifúngica contra cepas de Penicillium e, conseqüentemente, representa uma nova possibilidade no arsenal de produtos para o tratamento de infecções por este fungo.

Made available in DSpace on 2015-05-14T13:00:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2935405 bytes, checksum: a27c6a172bf89039f257e78b64b11891 (MD5) Previous issue date: 2010-06-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / A microbiological screening tested ten essential oils and three phytochemicals in solid discs with a sterile medium to evaluate the susceptibility of diferent fungal strains. Oils from C. zeylanicum, O. majorana, O. vulgare were chosen due to their efficient antifungical activity against twenty-one strains analyzed. The tests that determine CIM and CFM have proven through essential oils from C. zeylanicum and O. vulgare were able of causing death on yeast and filamentous strains. The analyze about of the inhibition mycelial growth potential by kinetics of microbial death indicates which essential oils from cinnamon and oregano obtained a important antifungal activity compared with essential oil of marjoram. The oils were able to interfere accentually in the logarithmic phase of yeast during twenty-four hours exposure. This antifungal activity was compared with fungistatic and fungicidal effect of ketoconazole. In regard to count of yeasts, there was not a significant difference (p> 0.05) between to essential oils and the standard antifungal, ketoconazol. The fumigant effect of the essential oils examined in an optical microscope indicates that the possible mechanism of action is an interference with cell wall formation. In agreement with what research suggests, this study tested the effect of sorbitol, an osmotic protector which is a complement, this way, microscopic changes, such as: decreased percentage of cytoplasm, loss of pigmentation, deficient development of hyphae and empty hyphae were observed. This present study also analyzed the essential oils tested against resistant strains caused in part by the presence of efflux proteins on the membrane of some them. / Após triagem microbiológica por meio de difusão, avaliou-se a susceptibilidade fúngica de dez óleos essenciais e três fitoconstituintes. Os óleos de C. zeylanicum, O. majorana, O. vulgare foram escolhidos por apresentarem elevada atividade antifúngica sobre vinte e uma cepas testadas. Os ensaios para determinação da CIM e a CFM mostraram que os óleos essenciais de canela e orégano foram letais sobre as cepas leveduriformes e filamentosas, o que confirmou a boa atividade antifúngica destes óleos. A avaliação do potencial de inibição do crescimento micelial, pela cinética de morte microbiana, mostra que os óleos essenciais de canela e orégano, exibiram atividade antifúngica relevante em relação ao óleo essencial de manjerona. Os óleos foram capazes de interferir acentuadamente na fase logarítmica da levedura, num período de 24 horas, com pronunciado efeito fungicida e fungistático, após 4 horas de exposição. Esta atividade antifúngica foi comparada ao efeito fungistático e fungicida do cetoconazol. Não houve diferença significativa (p> 0,05), encontrada entre as contagens das leveduras frente aos óleos essenciais e o antifúngico padrão, cetoconazol. O efeito fumigante, dos óleos essenciais, quando analisado sob a luz da microscopia óptica, mostra que o possível mecanismo de ação destes óleos essenciais acontece por interferir na formação da parede celular. Para confirmar o modo de ação sugerido, o presente trabalho testou o efeito do sorbitol, protetor osmótico, adicionado ao meio. Observaram-se modificações microscópicas, como: diminuição do teor de citoplasma, perda de pigmentação, desenvolvimento distorcido de hifas e hifas vazias. Também, verificou-se grande resistência dos fungos, causadas em parte, pela presença de proteínas de efluxo na membrana de algumas cepas.

A própolis é um material resinoso coletado pelas abelhas de diversas partes das plantas como brotos, folhas jovens e exsudatos. É utilizado para embalsamar animais que tenham morrido dentro da colmeia, vedar as paredes e conferir proteção frente a doenças. O emprego desse produto natural com finalidade medicinal remonta a antiguidade, tendo iniciado junto com antigas civilizações como a Egípcia, Grega e Romana e perduram até os dias atuais com ampla utilização em múltiplas finalidades terapêuticas médicas e veterinárias. O objetivo desse trabalho foi avaliar o potencial antifúngico, a capacidade de remover e inibir biofilmes de espécies de Candida não-albicans de diferentes tipos de própolis e analisar a composição química da própolis obtida do Rio Grande do Sul (RS). Foram realizadas macerações e extrações sequenciais com solventes em ordem crescente de polaridade a fim de purificar os extratos. Em seguida foi feita a determinação da atividade antifúngica pelo método da microdiluição em caldo e o ensaio de remoção e inibição de biofilmes através de teste em corpo de prova (utilizando cateter como material teste). Após, foi realizada a análise química da fração diclorometano de própolis obtida do RS. De modo geral, os extratos e frações de própolis vermelha e própolis nativa do RS demonstraram forte atividade anti-Candida frente às leveduras testadas e significativa capacidade de remoção de seu biofilme aderido em cateteres, como corpo de prova. A própolis verde apresentou baixo espectro de ação antifúngica. A análise química da fração diclorometano de própolis obtida do RS levou ao isolamento dos flavonoides pinocembrina, pinostrobina e pinostrobina chalcona. Os resultados evidenciam o potencial da própolis nativa do RS e da própolis vermelha para o desenvolvimento de novos agentes antifúngicos e desinfetantes contra Candida não-albicans. / Propolis is a resinous material collected by bees from various plant parts such as buds, young leaves and exudates. It is used to embalm animals that have died inside the hive, seal the walls and confer protection against the disease. The use of this natural product with medicinal purposes dates back to antiquity, having started with ancient civilizations as the Egyptian, Greek and Roman, and lasted to the present day with extensive use in multiple medical and veterinary therapeutic purposes. The aim of this study was to evaluate the antifungal potential, the ability to remove and inhibit biofilms of Candida non-albicans of different types of propolis and analyze the chemical composition of propolis obtained from Rio Grande do Sul (RS). Maceration and sequential extractions with solvents in order of increasing polarity were performed to purify the extracts. Then the antifungal activity was determined by the method of broth microdilution testing and removal and inhibition of biofilms through test of body of proof (catheter using as test material). After, the chemical analysis of the dichloromethane fraction of propolis obtained in RS was performed. In general, the extracts and fractions of propolis of RS demonstrated strong anti-Candida activity across the tested yeasts and significant capacity removal of biofilm attached in catheter, as test body. The green propolis had low action spectrum antifungal. Chemical analysis of the dichloromethane fraction of propolis native to RS led to the isolation of the flavonoids pinocembrin, chalcone pinostrobin and pinostrobin. The results show the potential of the RS native propolis and red propolis for the development of new antifungal agents and disinfectants against non-albicans Candida.

Este trabalho trata da purificação em escala preparativa por técnicas cromatográficas, determinação de seqüência primária parcial, caracterização espectroscópica por dicroísmo circular, fluorescência, infravermelho e investigação de atividades biológicas de duas lectinas ligantes de quitina dos extratos salinos de Artocarpus integrifolia, jaca, e Artocarpus incisa, fruta-pão. Nossos resultados revelaram que as lectinas quitina-ligantes das sementes de jaca e fruta-pão, jackina e frutackina respectivamente, são homólogas entre si, constituindo-se por monômeros de cerca de 14 kDa formados por três subunidades, unidas por pontes S-S. Elas possuem 62% de identidade entre si, são ricas em cisteínas, aminoácidos básicos e serinas e não possuem similares identificadas até o momento, podendo constituir um novo grupo de lectinas na superfamília de lectinas quitina-específicas. Os espectros de dicroísmo circular de jackina e frutackina são similares: ambas são proteínas de estrutura toda-beta, com máximo em torno de 230 nm e mínimo em torno de 214 nm, este último, bastante distorcido por estruturas desordenadas. Os espectros de fluorescência de jackina e frutackina apresentaram máximos de emissão acima de 340 nm, sugerindo que os N-terminais de duas das 3 cadeias de jackina e frutackina (onde os triptofanos estão localizados) estão expostos. Frente a condições extremas de pH e temperatura, monitoradas por CD e fluorescência, observou-se que a estrutura de jackina é vulnerável a pH ácido e termicamente estável. Quanto às atividades biológicas, jackina e frutackina mostraram atividade inibitória de crescimento para Saccharomyces cerevisiae; jackina também mostrou promoção de adesão da linhagem de células de eritroleucemia K562, atividade inibitória para Fusarium moniliforme na concentração de 2,25 mg/mL e atividade hemaglutinante frente a células sangüíneas humanas do sistema ABO e de coelhos, que não foi inibida nem por N-acetilglicosamina, indicando sua preferência por quitina ou seus fragmentos. / This work deals with the preparative-scale purification by chromatographic techniques, the partial primary sequence determination, the spectroscopic characterization by circular dichroism, fluorescence, FT-IR and the investigation of biological activities of two novel chitin-binding lectins from the saline extracts of the seeds of Artocarpus integrifolia, jackfruit, and Artocarpus incisa, breadfruit. Our results revealed that the chitin-binding lectins from jackfruit and breadfruit, jackin and frutackin respectively, are homologous to each other, consiting of monomers of 14 kDa, made up of 3 subunits, linked by S-S bridges. They have 62% of identity between each other; they are rich in cysteines, serines and basic amino acids and they are no homologous to any other known protein, probably constituting a new group of lectins in the chitin-binding lectin superfamily. The CD spectra of jackin and frutackin are similar: both present a beta profile spectra, presenting a maximum about 230 nm and a minimum around 214 nm, this later one, distorted by unordered structures. The fluorescence spectra of jackin and frutackin presented maxima above 340 nm, suggesting that the N-terminals of the 2 up 3 chains of jackin and frutackin (where the tryptophans are) are exposed. Regarding the pH and temperature exposure, monitored by CD and fluorescence, it was observed that the structure of jackin is vulnerable to acid pH and thermally stable. When considered the biological activities, jackin and frutackin presented growth inhibition activity towards Saccharomyces cerevisiae; jackin also promoted the adhesion of the erythroleukemic cell line K562, presented growth inhibition activity towards Fusarium moniliforme at 2,25mg/mL and hemaggluting activity towards rabbit and human red cells from the system ABO, that was not inhibited even by N-acetilglucosamine, suggesting itspreference by oligomers of N-acetilglicosamine or chitin.

A própolis é um material resinoso coletado pelas abelhas de diversas partes das plantas como brotos, folhas jovens e exsudatos. É utilizado para embalsamar animais que tenham morrido dentro da colmeia, vedar as paredes e conferir proteção frente a doenças. O emprego desse produto natural com finalidade medicinal remonta a antiguidade, tendo iniciado junto com antigas civilizações como a Egípcia, Grega e Romana e perduram até os dias atuais com ampla utilização em múltiplas finalidades terapêuticas médicas e veterinárias. O objetivo desse trabalho foi avaliar o potencial antifúngico, a capacidade de remover e inibir biofilmes de espécies de Candida não-albicans de diferentes tipos de própolis e analisar a composição química da própolis obtida do Rio Grande do Sul (RS). Foram realizadas macerações e extrações sequenciais com solventes em ordem crescente de polaridade a fim de purificar os extratos. Em seguida foi feita a determinação da atividade antifúngica pelo método da microdiluição em caldo e o ensaio de remoção e inibição de biofilmes através de teste em corpo de prova (utilizando cateter como material teste). Após, foi realizada a análise química da fração diclorometano de própolis obtida do RS. De modo geral, os extratos e frações de própolis vermelha e própolis nativa do RS demonstraram forte atividade anti-Candida frente às leveduras testadas e significativa capacidade de remoção de seu biofilme aderido em cateteres, como corpo de prova. A própolis verde apresentou baixo espectro de ação antifúngica. A análise química da fração diclorometano de própolis obtida do RS levou ao isolamento dos flavonoides pinocembrina, pinostrobina e pinostrobina chalcona. Os resultados evidenciam o potencial da própolis nativa do RS e da própolis vermelha para o desenvolvimento de novos agentes antifúngicos e desinfetantes contra Candida não-albicans. / Propolis is a resinous material collected by bees from various plant parts such as buds, young leaves and exudates. It is used to embalm animals that have died inside the hive, seal the walls and confer protection against the disease. The use of this natural product with medicinal purposes dates back to antiquity, having started with ancient civilizations as the Egyptian, Greek and Roman, and lasted to the present day with extensive use in multiple medical and veterinary therapeutic purposes. The aim of this study was to evaluate the antifungal potential, the ability to remove and inhibit biofilms of Candida non-albicans of different types of propolis and analyze the chemical composition of propolis obtained from Rio Grande do Sul (RS). Maceration and sequential extractions with solvents in order of increasing polarity were performed to purify the extracts. Then the antifungal activity was determined by the method of broth microdilution testing and removal and inhibition of biofilms through test of body of proof (catheter using as test material). After, the chemical analysis of the dichloromethane fraction of propolis obtained in RS was performed. In general, the extracts and fractions of propolis of RS demonstrated strong anti-Candida activity across the tested yeasts and significant capacity removal of biofilm attached in catheter, as test body. The green propolis had low action spectrum antifungal. Chemical analysis of the dichloromethane fraction of propolis native to RS led to the isolation of the flavonoids pinocembrin, chalcone pinostrobin and pinostrobin. The results show the potential of the RS native propolis and red propolis for the development of new antifungal agents and disinfectants against non-albicans Candida.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:50:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Lectinas são proteínas que se ligam a carboidratos e glicoconjugados. Rizomas de Microgramma vaccinifolia têm ampla utilização na medicina popular no tratamento de hemoptises e hematúria. Os objetivos deste trabalho foram isolar, caracterizar, avaliar as atividades tóxica, antibacteriana e antifúngica da lectina de rizoma de M. vaccinifolia (MvRL) e identificar as raças 1, 2 e 3 de Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici por biologia molecular. As proteínas do extrato de rizoma (ER) foram fracionadas com sulfato de amônio fornecendo a fração 0-60% (F0-60%). Atividade hemaglutinante (AH) e concentração de proteína foram determinadas em ER e F0-60%. MvRL foi isolada por cromatografia da F0-60% em Sephadex G-25. A AH de MvRL foi avaliada em presença de carboidratos, glicoproteínas, preparações contendo carboidrato das raças 1, 2 e 3 de Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici, em diferentes temperaturas, valores de pH e na presença de íons. Eletroforese em gel de poliacrilamida de MvRL foi realizada em condições nativas (PAGE) e desnaturadas (SDS-PAGE). O efeito de MvRL sobre Artemia salina, bactérias e fungos foi também avaliado. O DNA das raças 1, 2 e 3 de Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici foi isolado utilizando marcadores moleculares ISSR e RAPD. MvRL aglutinou eritrócitos humanos e sua AH foi inibida por manose, soro fetal bovino e preparações de F. oxysporum f.sp. lycopersici. A AH de MvRL foi termoestável, ativa em pH 5,0 e dependente de íons. PAGE revelou MvRL como uma proteína ácida e SDS-PAGE revelou banda polipeptídica glicosilada de massa molecular 17 kDa. Cromatografia de gel filtração definiu a massa molecular nativa de MvRL como 100 kDa indicando a lectina como um agregado molecular. MvRL foi tóxica sobre A. salina (CL50 de 154,16 μg/mL), não exibiu atividade antibacteriana e apresentou atividade antifúngica. MvRL foi mais ativa em inibir o crescimento da raça 3 de F. oxysporum f.sp. lycopersici. Os marcadores moleculares foram adequados para avaliar a variabilidade genética das raças. Em conclusão MvRL é uma lectina com atividade antifúngica e o efeito sobre F. oxysporum f.sp. lycopersici foi diferente para as três raças

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:50:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Uma lectina da entrecasca de Sebastiania jacobinensis (SejaBL) foi isolada por combinação de precipitação acetônica, fracionamento salino, cromatografia de troca iônica e gel filtração. A massa molecular de SejaBL foi determinada por SDS-PAGE e gel filtração, sendo de 52,0 kDa e 50,0 kDa, respectivamente. A lectina é uma glicoproteína com teor de carboidrato neutro de 6,94%, composta por duas subunidades com mesma massa molecular de 24 kDa. A lectina purificada hemaglutinou hemácias de coelho e humana. Glicoproteínas inibiram a hemaglutinação. SejaBL apresentou atividade máxima na faixa de pH 3,0-7,5, estabilidade térmica até 70 °C e é potencial inibidor da atividade da tripsina. Espectroscopia de fluorescência indicou a existência de superfícies hidrofóbicas. Lectina inibiu o crescimento micelial de Fusarium moniliforme e Fusarium oxysporum com um IC50 de 123±0,5&#956;g e 303±0,9&#956;g, respectivamente. Organismos não alvos, larvas Artemia salina e embriões de Biomphalaria glabrata, não foram afetados, indicando baixa toxicidade ambiental. Como modelo experimental, a lectina purificada de S. jacobinensis (SejaBL) foi utilizada como prova de que mudanças no centro hidrofóbico, causados pela irradiação gama, alteram estruturalmente proteínas. Para elucidar o efeito dos radicais livres nas propriedades moleculares de SejaBL atividade, estrutura terciária (intrínseca e bis-ANS fluorescência), massa molecular e perfil cromatográfico foram examinados após - irradiação em várias doses (0,020 a 35kGy). Atividade hemaglutinante específica (AHE), na lectina irradiada, mostrou perda significativa (p<0,05) acima de 12,5kGy e aumento significativo (p<0,05) em 0,1, 0,8 e 1kGy. Espectroscopia de fluorescência indicou supressão da emissão de fluorescência quando excitado a 280 e 295nm, com elevada ligação do bis-ANS, após altas doses. SDS-PAGE e HPLC-RP mostraram fragmentação polipeptídica. Mudança significativa na superfície hidrofóbica indicou captação de hidrogênio radical em aminoácidos, causando desorganização estrutural da lectina. Flavonóides são produtos secundários de plantas com capacidade para capturar radicais livres. A lectina da entrecasca de S. jacobinensis (SejaBL), proteína capaz de ligar a carboidrato, tem sua superfície hidrofóbica modificada por radicais livres produzidos pela água radiólise. No presente estudo, o efeito protetor sobre a proteína pela estabilidade antioxidante de flavonóides da entrecasca de S. jacobinensis (SejaBF), após irradiação gama, foi investigada. Dois flavonóides foram isolados com rápida recuperação da capacidade para capturar radical mensurado pelo 2,2-difenil-1-picrilhidracilo radical (DPPH) a 0,5 mg/mL, após alta dose de irradiação. Os danos causados por irradiação na AH foi minimizado em 55% na presença dos flavonóides. Os resultados mostraram radioestabilidade da capacidade antioxidante de SejaBF, protegendo a lectina de radicais livres após irradiação

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-09-19T14:00:10Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese_versão final.pdf: 1205267 bytes, checksum: 9a8cbb067098410ee054ef9a7c182895 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-19T14:00:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese_versão final.pdf: 1205267 bytes, checksum: 9a8cbb067098410ee054ef9a7c182895 (MD5) Previous issue date: 2016-02-17 / Os óleos essenciais extraídos de plantas possuem diversas propriedades biológicas, e sendo assim, podem ser utilizados para o desenvolvimento de produtos farmacêuticos e cosméticos. Entretanto, os mesmos apresentam alguns fatores que limitam a sua utilização no desenvolvimento de produtos, tais como, alta volatilidade, instabilidade e baixa solubilidade. Assim, a encapsulação de óleos essenciais tem sido utilizada como uma estratégia eficiente que permite aumentar a estabilidade física e bioatividade, como também diminuir a volatilidade dos mesmos. No presente trabalho foi avaliado, o óleo essencial de folhas de Eugenia brejoensis (Myrtaceae), uma espécie arbustiva encontrada em alguns estados do Nordeste e do Sudeste brasileiro e popularmente utilizada no tratamento de diarreia, febre e reumatismo. A composição química do óleo essencial de E. brejoensis (OEB) foi definida por meio de Cromatografia Gasosa Acoplada à Espectrometria de Massas (GC-MS) e a sua atividade antifúngica frente à isolados clínicos de dermatófitos e leveduras foi definida de acordo com protocolos do Instituto de Padronização Clinica e Laboratorial (CLSI). Em seguida, foram preparados e caracterizados sistemas de encapsulação baseados em nanoemulsões e complexação molecular com β-ciclodextrina (BCD) para a veiculação do óleo essencial. A investigação da complexação molecular do óleo essencial de E. brejoensis e a β-ciclodextrina foi feita por calorimetria exploratória diferencial (DSC), termogravimetria (TG) e difração de raios X (DRX). O estudo da liberação de compostos voláteis do óleo essencial de E. brejoensis livre e encapsulado na β-ciclodextrina foi realizado por análise de headspace estático acoplado a Cromatografia Gasosa (HE-GC). Os resultados mostraram que o óleo essencial de E. brejoensis é um antifúngico de amplo espectro, pois mostrou atividade contra todos os fungos testados com Concentração Inibitória Mínima entre 0,39 – 12,5 μL/mL. Ademais, a encapsulação do óleo essencial foi possível tanto pelo sistema de nanoemulsão como pelo sistema de inclusão molecular com β-ciclodextrina. A nanoemulsão O/A desenvolvida apresentou diâmetro médio de partícula de 143,1± 1,1 nm, Pdl 0,219 ± 0,004 e potencial zeta de -19,7 ± 0,1 mV. O complexo de inclusão entre o óleo essencial de E. brejoensis e β-ciclodextrina foi obtido na proporção molar de 1:1 e mostrou ser capaz de proteger o óleo essencial contra a degradação térmica e volatilidade. A análise de headspace estático mostrou um percentual de retenção do óleo essencial de E. brejoensis na β-ciclodextrina de 86,87% e que a liberação dos componentes voláteis ocorre de forma gradual. / Plant essential oils have several biological properties and can be used for the development of pharmaceuticals and cosmetics. However, they have some factors that limit their use in the development of products such as high volatility, instability and poor solubility. Thus, the encapsulation of essential oils has been used as an efficient strategy that can increase physical stability and bioactivity, as well as reducing the volatility thereof. In this work was evaluated, Eugenia brejoensis (Myrtaceae) essential oil, a shrubby species found in some states of the Northeast and Southeast Brazil and popularly used to treat diarrhea, fever and rheumatism. The essential oil chemical composition of E. brejoensis (OEB) was defined by Gas Chromatography - Mass Spectrometry (GC-MS) and its antifungal activity against the clinical isolates of dermatophytes and yeasts was defined according to Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) protocols. Then, were prepared and characterized encapsulation systems based on nanoemulsions and molecular complexation with β-cyclodextrin (BCD). The investigation of molecular complexing was made by differential scanning calorimetry (DSC), thermogravimetry (TGA) and X-ray diffraction (XRD). The release study of the of volatiles compounds from the essential oil of E. brejoensis free and encapsulated in β-cyclodextrin was performed by Static Headspace - Gas Chromatography (GC-HE) analysis. The results showed that the essential oil of E. brejoensis is a broad-spectrum antifungal and the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) range between 0.39 to 12.5 uL/mL. Moreover, the encapsulation of essential oil was possible both the nanoemulsion system as the β-cyclodextrin molecular system. The nanoemulsion 0/W showed an average particle size diameter of 143.1 ± 1.1 nm, Pdl 0.219 ± 0.004 and zeta potential of -19.7 ± 0.1 mV. The E. brejoensis essential oil and β-cyclodextrin molecular complex was obtained in the molar ratio 1: 1 and was found to be capable of protecting the essential oil against thermal degradation and volatility. The static headspace analysis showed an retention percentage by β- cyclodextrin of 86.87%, and the release of essential oil volatile components occurs gradually.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2017-08-02T15:15:32Z No. of bitstreams: 1 Dario Cesar de Oliveira Conceicao.pdf: 1516839 bytes, checksum: c85f4d87bbe696e0c66e4f218110bdcf (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-02T15:15:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dario Cesar de Oliveira Conceicao.pdf: 1516839 bytes, checksum: c85f4d87bbe696e0c66e4f218110bdcf (MD5) Previous issue date: 2015-02-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The Bauhinia genus comprises about 300 species that are popularly known as "pata-de-vaca". Several species of Bauhinia presented activities such as antifungal, antitumor and hypoglycemic. The species studied in this work are Bauhinia cheilantha (Bong) Steud and Bauhinia pentandra (Bong) Vog. Ex. Steua (Fabaceae) that are also popularly known as "mororó-sem-espeinho" and "mororó-de-espinho" respectively. This study aimed to carry out the chemical and evaluate the antifungal activity of extracts and compounds obtained from the leaves and stems of these species. The Soxhlet extraction was conducted using the solvents hexane, ethyl acetate and methanol. Analysis of the chromatographic profiles was done by HPLC-DAD. For achieving antifungal activity of the fungal strains were used: yeast with the Candida guilhermondii LM 103 and dermatophytes Microsporum canis LM 910, M. gypseum LM 130 and Trichophyton rubrum LM 148 was determined and the minimum inhibitory concentration. Chromatographic fractionation column with Sephadex LH-20® resulted in the isolation of litospermosida substances kanferol, quercetin, and HPLC-DAD were isolated and quercitrin, afzelin for the species B. cheilantha. For the species B. pentandra fractionation resulted in kanferol substances, quercetin, pinitol cyclitol and flavonoids were identified 3-O-[β-D-glicopiranosil-(1→6)- α-L-ramnopiranosil]-7-O-α-L-ramnopiranosilkanferol, 3-O-[β-D-glicopiranosil-(1→6)-α-L-ramnopiranosil]-7-O-α-L- ramnopiranosil-3’-metoxiquercetina and 3-O-[β-D-glicopiranosil-(1→6)-α-L-ramnopiranosil]-7-O-α-L-ramnopiranosilquercetina. The Caule-Hex extracts, Folha -MeOH Folha-AcOEt and afzelin substances, litospermosida and querctitrina obtained from B. cheilantha and Caule-MeOH extracts and Folha-MeOH obtained from B. pentandra showed antifungal activity with minimum inhibitory concentrations between 512 ug / mL to 1024 / mL. / O gênero Bauhinia compreende cerca de 300 espécies que são popularmente conhecidas como “pata-de-vaca”. Várias espécies de Bauhinia apresentaram atividades como antifúngica, antitumoral e hipoglicemiante. As espécies estudadas neste trabalho são Bauhinia cheilantha (Bong) Steudel e Bauhinia pentandra (Bong) Vog. Ex. Steua (Fabaceae) que também são popularmente conhecidas como “mororó-sem-espinho” e “mororó-de-espinho” respectivamente. Este trabalho teve como objetivo realizar o estudo químico e avaliar a atividade antifúngica dos extratos e compostos obtidos das folhas e caules dessas espécies. A extração foi realizada em Soxhlet utilizando os solventes hexano, acetato de etila e metanol. A análise do perfil cromatográfico foi feita por CLAE-DAD. Para realização da atividade antifúngica foram utilizadas as cepas fúngicas: com a levedura Candida guilhermondii LM 103 e os dermatófitos Microsporum canis LM 910, M. gypseum LM 130 e Trichophyton rubrum LM 148 e foi determinada a concentração inibitória mínima. O fracionamento cromatográfico em coluna com Sephadex LH-20® resultou no isolamento das substâncias litospermosida, kanferol, quercetina, e por CLAE-DAD foram isoladas a quercitrina e afzelina para a espécie B. cheilantha. Para a espécie B. pentandra o fracionamento resultou nas substâncias kanferol, quercetina, ciclitol pinitol e foram identificados os flavonóides 3-O-[β-D-glicopiranosil-(1→6)- α-L-ramnopiranosil]-7-O-α-L-ramnopiranosilkanferol, 3-O-[β-D-glicopiranosil-(1→6)-α-L-ramnopiranosil]-7-O-α-L-ramnopiranosil-3’-metoxiquercetina 3-O-[β-D-glicopiranosil-(1→6)-α-L-ramnopiranosil]-7-O-α-L-ramnopiranosilquercetina. Os extratos Caule-Hex, Folha-MeOH, Folha-AcOEt e as substâncias afzelina, litospermosida e querctitrina obtidas de B. cheilantha e os extratos Caule-MeOH e Folha-MeOH obtida de B. pentandra apresentaram atividade antifúngica com concentrações inibitórias mínimas entre 512 μg/mL e 1024 μg/mL.

Cryptococcus neoformans species complex são fungos oportunistas que desencadeiam meningite, tanto em pacientes imunocompetentes como em indivíduos hígidos. Este trabalho teve como objetivo estudar as espécies circulantes de Cryptococcus neoformans species complex isolados no Estado de Sergipe tanto a partir do LCR (líquido céfalo raqueanao) de pacientes com meningite infecciosa como de diversos substratos ambientais. Foram utilizadas amostras do LCR que deram entrada no IPH/HEMOLACEN/SE no período de 2001 a 2007. Foram realizadas 104 coletas ambientais dentro do Estado de Sergipe, das quais 55 foram obtidas a partir de excretas de aves e quatro de amostras de fezes de morcegos coletadas em cavernas. As demais foram obtidas de materiais de origem vegetal, perfazendo 45 amostras: 21 de Eucalyptus spp., oito de material de troncos vegetais em decomposição, 10 de restos vegetais coletados em duas praças e seis de Anacardium occidentale L. (cajueiro). O líquor foi examinado por microscopia direta e cultivado a 25ºC e a 37ºC. No período de 2005 a 2007 foram obtidos 141 isolados ambientais e 35 isolados clínicos de Cryptococcus neoformans species complex. Foram determinadas inferências ecológicas e epidemiológicas dos isolados obtidos além de realização de provas para identificação presuntiva fenotípica em meioNíger e, das espécies em meio CGB, teste de sensibilidade frente aosantifúngicos, caracterização enzimática de interesse biotipar e/ou marcador de linhagens, determinação de mating type sexual utilizando PCR e PCR Fingerprintig com iniciador M13. Nas linhagens de Cryptococcus spp. isoladas de líquor de pacientes com meningite infecciosa no Estado de Sergipe prevaleceu a espécie C. neoformans. Em relação às linhagens ambientais, somente uma amostra, dentre 140, foi identifcada como C. gattii. Todas as amostras oriundas de excretas de aves foram positivas no isolamento da levedura. Os isolados clínicos de C. neoformans e C. gattii oriundos de pacientes com meningite criptocócica no Estado de Sergipe apresentaram valores altos de concentração inibitória mínima (CIM) para os agentes antifúngicos testados, o que simboliza alta taxa de resistência, principalmente à Anfotericina B e ao Fluconazol. Em relação ao mating type sexual foi evidenciando que a maioria das linhagens clínicas foi identificada como MAT, confirmando o caráter de virulência que esta levedura desenvolve. Entretanto, no isolados ambientais o MATa foi mais prevalente, evidenciando o caráter menos virulento destas linhagens frente às de origem clínica. Cryptococcus neoformans foi a única espécie amplificada por PCR fingerprinting. Houve presença, dentre as amostras locais, de três perfis genéticos distintos epertencentes a uma mesma espécie. _________________________________________________________________________________________ ABSTRACT: Cryptococcus neoformans species complex are opportunistic fungi that cause meningitis in both immunocompetent patients and in healthy individuals. This work aimed to study the species of circulating Cryptococcus neoformans species complex isolated from northeastern Brazil from both the CSF (cerebrospinal fluid) of patients with infectious meningitis as various environmental substrates. Samples of CSF were received at IPH/HEMOLACEN/SE in the period 2001 to 2007. Were carried out 104 environmental samples within the state of Sergipe, of which 55 were obtained from the feces of birds and four stool samples collected from bat caves. The other samples were obtained from plant materials, totaling 45 samples: 21 from Eucalyptus spp., eight from material of decomposing trunks of plants, 10 from plant collected in two squares, six from Anacardium occidentale L. - (Cashew). CSF was examined by direct microscopy by staining with Indian ink and cultured in Sabouraud agar with chloramphenicol at 25 °C and 37 ºC. In the period from 2005 to 2007 were obtained from 141 environmental isolates and35 clinical isolates of Cryptococcus neoformans species complex. Ecological and epidemiological inferences were determined. In addition characteristics of isolates were carried out by tests for presumptive phenotypic identification, through Niger medium and species into the CGB test, sensitivity to the antifungal, enzymatic characterization of biotypes of interest and/or marker lines, determining sexual mating type using PCR and PCR Fingerprintig with primer M13. Among the strains of Cryptococcus spp. isolated from CSF of patients with infectious meningitis in the state of Sergipe, in the period from 2001 to 2009, prevaled the species C. neoformans. Among the environmental strains, only one sample of 140, was identified as C. gattii. All samples from thefeces of birds were positive in the isolation of yeast. Clinical isolates ofCryptococcus neoformans and C. gattii originating from patients withcryptococcal meningitis in the state of Sergipe exhibited higher values ofminimum inhibitory concentration (MIC) to the antifungal agents tested, which symbolizes high rate of resistance, especially to amphotericin B and fluconazole. In relation to sexual mating type was evident that most of the clinics were MAT strains, confirming the character of virulence of this yeast. However, among the environmental isolates the MATa was more prevalent, showing the character of these less virulent strains. Cryptococcus neoformans was the only species amplified by PCR fingerprinting. There was a presence among the local samples of three different genetic profiles belonging to the same species.