Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-05-22T22:48:06Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Patricia Virgínia Padilha Dantas.pdf: 1794711 bytes, checksum: 3b9d8a8b2b52f9422cf61605a8152e7e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-22T22:48:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Patricia Virgínia Padilha Dantas.pdf: 1794711 bytes, checksum: 3b9d8a8b2b52f9422cf61605a8152e7e (MD5) Previous issue date: 2017-02-17 / O bambu é uma cultura vegetal de ampla utilização e com importância comercial, mas que apresenta dificuldades quanto à sua propagação por métodos sexuados e por isso vem sendo estabelecida por métodos vegetativos, dentre os quais a cultura de tecidos vegetais. A cultura de tecidos vegetais através da micropropagação produz mudas de alto padrão, entretanto encara uma questão delicada quanto à contaminação in vitro por microrganismos endofíticos. Estes microrganismos embora não sejam desejáveis ao processo de micropropagação podem apresentar diversas potencialidades biotecnológicas, como a produção de enzimas e metabólitos com atividade antimicrobiana. O objetivo do presente trabalho foi isolar os fungos filamentosos endofíticos presente nos tecidos do bambu (Bambusa vulgaris) multiplicado in vitro, com capacidade de produzir enzimas (amilase e lípase), bem como testar a potencialidade antimicrobiana do líquido metabólico bruto desses fungos. A micropropagação de bambu foi realizada a partir de diferentes explantes, e foram obtidos isolados que seguiram para caracterização da comunidade microbiana cultivável do bambu. Os fungos filamentosos foram identificados por taxonomia e biologia molecular (região ITS) e empregados em testes de atividade enzimática em meios sólidos, além de testes de inibição bacteriana por microdiluição. Foram obtidos oito isolados de fungos filamentosos cultiváveis originados em sua maioria dos explantes obtidos de ramificações mais proximais com relação ao colmo da matriz coletada. Estes isolados pertencem a pelo menos cinco espécies distintas, Hypoxylon investiens, Daldinia eschsholtzii, Curvularia lunata, Fusarium solani e Bambusicola bambusae. Destes, cinco apresentaram atividade enzimática degradativa dentre os substratos avaliados, sendo um, CTNFB06 (B. bambusae), ativo para todos os substratos testados. Todos apresentaram atividade antimicrobiana para bactérias Gram negativa, com CIM de até 150 μL.mL-1, e Gram-positiva, com CIM de até 7,8 μL.mL-1, e três linhagens apresentaram atividade frente à bactéria Gram-positiva resistente à meticilina, com CIM de até 15.6 μL.mL-1. Deste modo foi demonstrada a presença e distribuição de fungos filamentosos endofíticos do bambu (Bambusa vulgaris), bem como o valor destes fungos para potencialidades biotecnológicas na produção de enzimas e atividade antimicrobiana. / Bamboo is a plant culture widely used with commercial prominence, but it presents difficulties in its propagation by sexed methods and for this reason has been widely established by vegetative methods, among it the plant tissue culture. The plant tissue culture through micropropagation produces high quality seedlings. However, it faces a delicate issue regarding in vitro contamination by endophytic microorganisms. These endophytic microorganisms, although not desirable to the micropropagation process, may present several biotechnological potentialities, such as enzymatic and antimicrobial activity. The present work aimed to isolate the endophytic filamentous fungi present in the tissues of bamboo multiplied in vitro, with the capacity to produce enzymes (amylase and lipase), as well as to test the antimicrobial potential of the crude metabolic liquid of these fungi. Micropropagation of bamboo was developed from different explants, and isolations were developed to characterize the microbial community of bamboo. Filamentous fungi were identified by taxonomy and molecular biology (ITS region) and used in enzymatic activity tests in solid media, and microdilution bacterial inhibition tests. Eight isolates of cultivable filamentous fungi were obtained, mostly from the explants obtained from more proximal branches with respect to the stem of the collected matrix. These isolates belong to at least 5 distinct species, Hypoxylon investiens, Daldinia eschsholtzii, Curvularia lunata, Fusarium solani and Bambusicola bambusae. Of these, 5 presented enzymatic activity among tested substrates, one, CTNFB06 (B. bambusae), being active for all substrates tested. All showed antimicrobial against Gram-negative bacteria, with MIC up to 150 μL.mL-1, and Gram-positive, with MIC up to 7.8 μL.mL-1, and three strains showed activity against Gram-positive bacteria Methicillin resistant, with MIC up to 15.6 μL.mL-1. The presence and distribution of endophytic filamentous fungi of bamboo (Bambusa vulgaris) was demonstrated, as well as the value of these fungi for biotechnological potentialities in the production of enzymes and antimicrobial activity.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:03:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3021_1.pdf: 370665 bytes, checksum: 767d05bee0118fd9958462aa98eef252 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A produtividade em viveiros de cultivo de camarão depende da qualidade dos sedimentos, importante para a manutenção dos ciclos biogeoquímicos e entre os métodos de manejo se destaca a adição de probióticos nos sistemas de produção. Objetivou-se avaliar o efeito do uso de probióticos na atividade microbiana em sedimentos de viveiros de camarão e a influência desse composto no desempenho dos cultivos. As coletas foram realizadas em Rio Formoso-PE, de setembro de 2007 a outubro de 2008, em três viveiros: V2 (sem probiótico), V3 e V4 (com probiótico), nos períodos de despesca do cultivo anterior (tempo zero-T0); após a secagem e tratamento dos viveiros (tempo inicial-TI) e despesca ao final do cultivo (tempo final-TF). Foram analisados C- biomassa, respiração, quociente metabólico (qCO2) e atividade enzimática. Houve grande variação nas respostas entre os viveiros, nos diversos períodos. No viveiro V3 foram verificadas maiores emissões de CO2 (TI, T0, TF), qCO2 (TF), e atividade enzimática geral - FDA (TI e TF). O C-biomassa foi maior nos viveiros V3 e V2 nos períodos de despesca (T0 e TF). Maior atividade da desidrogenase ocorreu nos períodos após despesca no V2 (T0 e TF), no tempo final em V3 e no tempo zero em V4, enquanto a atividade da fosfatase alcalina foi maior no tempo inicial (TI) nos viveiros com probiótico. Em geral, o uso de probióticos nos viveiros melhorou o equilíbrio microbiano, estabilizando a degradação da matéria orgânica. A atividade das enzimas - FDA e a biomassa microbiana apresentaram comportamentos semelhantes, quando os viveiros foram tratados com probióticos, aumentaram a sobrevivência dos camarões reduzindo a produtividade. O viveiro sem probiótico (V2) apresentou o melhor rendimento produtivo sendo considerado o melhor tratamento. Porém, os mecanismos envolvidos na relação probiótico/atividade microbiana ainda não estão devidamente esclarecidos, sendo recomendada a continuidade dos estudos para determinar a influência da microbiota no desempenho do cultivo

O presente trabalho foi desenvolvido com o objetivo de se verificar a influência da Saccharomyces cerevisae (produto comercial ou células mantidas em meio cultura) nas atividades das enzimas peroxidases, quitinases, β-1,3-glucanases e no perfil eletroforético de peroxidases, em tecidos de milho e sorgo. As preparações de levedura utilizadas foram representadas por suspensões de células e seus respectivos filtrados, autoclavados ou não. A análise dos extratos obtidos dessas gramíneas, submetidos aos diferentes tratamentos com S. cerevisae, mostrou aumentos na atividade da peroxidase, quitinase e β-1,3-glucanase. Porém, tecidos de sorgo existiam melhor resposta aos tratamentos em comparação aos tecidos de milho, da mesma forma que o tratamento FSA (fitrado de suspensão autoclavada) estimular uma maior atividade da peroxidase em relação aos outros tratamentos. A atividade de quitinase foi maior em todos os tratamentos nos diversos tempos em relação ao controle, porém a β-1,3 glucanase exibiu maior atividade 48 e 72 horas após os tratamentos. Suspensões de células e os filtrados dessas suspensões de células, tratadas termicamente ou não, foram efetivos nas alterações enzimáticas, demonstrando serem termoestáveis. Porém, por outro lado, extratos obtidos de células intactas de homogenezadas de S. cerevisae apresentaram baixa ou nenhuma atividade de peroxidases, quitiniases ou &#946-1,3-glucanases, indicando que as alterações no aumento da atividade das enzimas e perfil eletroforético de peroxidases nas plantas, não foram devidas as enzimas existentes nas células da levedura. Finalmente, os resultados sugerem que as alterações ocorridas na atividade e perfil eletroforético de peroxidases e na atividade de quitinases e &#946-1,3-glucanases nos tecidos de milho e sorgo, em resposta ao tratamento com S. cerevisae, refletem o "reconhecimento" das células ou metabólitos da levedura por parte das plantas, acarretando uma alteração no metabolismo normal do vegetal / The aim of this work was to verifY the influence of Saccharomyces cerevisae (commercial baker's yeast or cultivated yeast cells in solid medium) on peroxidade, chitinase and β-1,3-glucanase activities and changes in the electrophoretic pattern of peroxidase in maize and sorghum tissues. The yeast treatments included cell suspension and its filtrate, autoclaved or not. These treatments induced an increase in peroxidase, chitinase and β-1,3-glucanase activities in both maize and sorghum. However, sorghum tissues exhibited better responses to treatments than maize tissues, the same results was found in the treatment with autoclaved cell filtrate, which stimulated high peroxidase activity compared to other treatments. The chitinase activity was higher in all treatments during all the time in relation to the control, while β-1,3-glucanase exhibited higher activity only at 48 and 72 hours after the treatment. Cell suspension and its filtrate, autoclaved or not, were effective in altering the activities of the enzymes showing to be thermostable. By other hand, extracts from intact or homogenized S. cerevisiae cells showed low or no activity of peroxidases, chitinases or β-1,3-glucanases, indicating that the changes in the activities or electrophoretic partern of peroxidases on plants were not due to the enzymes present in the yeast cells. Finally, the results suggest that the changes in peroxidases activity and electrophoretic pattern and chitinases and β-1,3-g1ucanases activities in maize and sorghum tissues in response to treatment with S. cerevisiae, indicate the possible recognition of the yeast cells or their metabolites by the plants

ARAÚJO, E. S. Látex de Plumeria rubra L. (jasmim): perfil protéico, caracterização enzimática e ação contra insetos. 2009. 90 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2009. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2014-12-15T21:41:55Z No. of bitstreams: 1 2009_dis_esaraujo.pdf: 3707223 bytes, checksum: cc7319968dcadccfe82fc0bbf1676d78 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2015-01-20T14:12:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_dis_esaraujo.pdf: 3707223 bytes, checksum: cc7319968dcadccfe82fc0bbf1676d78 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-20T14:12:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_dis_esaraujo.pdf: 3707223 bytes, checksum: cc7319968dcadccfe82fc0bbf1676d78 (MD5) Previous issue date: 2009 / Plumeria rubra L. is a laticífera plant belonging to the family Apocynaceae popularly known as Jasmim. For spicy and fragrant flowers make this tree is commonly seen ornate squares and gardens of residential urban centers. Laticífer plants are well known for producing a fluid endogenously generally milky in appearance - latex - that exudates from the plant when it undergoes some type of injury, either by mechanical damage or attack by predators. Latex is a material that has been the subject of biochemical and pharmacological studies show that it is a promising source of compounds with potential biotechnological application. In this study the latex of P. rubra was the subject of biochemical and biological research with emphasis on the search for proteins that could make any deleterious action against agricultural insect pests. Laboratory procedures that employ centrifugation and dialysis allowed the fractionation of latex into three distinct components: rubber (BL), proteins (PLPr) and low molecular weight molecules (DL). The PLPr fraction was subject to biochemical and enzymatic characterization and was used in bioassays with the bean weevil-of-rope, Callosobruchus maculatus and the fruit fly, Ceratitis capitata. The full latex and its fractions were used in testing the repellency of oviposition of C. maculatus and Zabrotes subfasciatus. The BL fraction is the major component of latex, 70 %, while PLPr and DL fractions are about 15 % each one. The content of soluble protein in PLPr fraction was 0.33 mg / mL. Espectrometric and electrophoretic analysis revealed the presence of proteins with molecular weights ranging from 12 to 117 kDa, with a maximum of protein with 26 kDa and pI <6.0. The characterization showed that the enzyme antioxidativas enzymes superoxide dismutase and peroxidase were detected in the protein fraction, as well as activity chitinases. Proteins of latex were able to degrade azocasein (nonspecific substrate) and BANA (specific substrate for cysteine proteases). The proteolytic enzymes were detected mainly of type cysteine and to a lesser extent, serine proteases. The pH and temperature optimum for this activity was 6.0 and 37 ºC respectively, where higher values of temperature cancel the activity. Through experiments with artificial diet can be observed that the protein fraction of latex in 0.4 % was able to reduce by 50 % the survival and, in 0.1 %, reduce the by 50 % the weight gain of larvae of C. maculatus. When these proteins were denatured by heating the larval development was similar to the control, suggesting that the maintenance of protein structure is essential for the observed effect. Proteins of latex were not digested by endogenous proteases of the digestive tract of larvae, suggesting that they would be free to cause deleterious effects. No effect on the development of the larvae of C. capitata was observed when the proteins were added to the diet, even at a concentration of 4 %. Whole latex when adsorbed in bean seeds, showed repellent activity on oviposition of both bruchid, being more evident in Z. subfasciatus. The repellent activity was observed time and dose dependent. The latex was unable to affect the viability of eggs or larval development. The PLPr and DL fractions showed no repellent activity, showing that neither protein nor molecules with low molecular weight are involved in this action. The insects, when exposed directly to the latex for a long period of time had not affected their fecundity or oviposition. / Plumeria rubra L. é uma planta laticífera pertencente à família Apocynaceae popularmente conhecida como Jasmim. Por apresentar flores vistosas e perfumadas, essa árvore é comumente vista ornamentando praças e jardins residenciais dos grandes centros urbanos. Plantas laticíferas são assim denominadas por que produzem endogenamente um fluido de aspecto geralmente leitoso - o látex - que é exsudado da planta quando esta sofre algum tipo de ferimento, seja por dano mecânico ou por ataque de predadores. O látex é um material vegetal que tem sido alvo de estudos bioquímicos e farmacológicos que mostram ser ele uma fonte promissora de compostos com potencial aplicação biotecnológica. No presente trabalho o látex de P. rubra foi alvo de investigações bioquímicas e biológicas com ênfase na pesquisa de proteínas que pudessem apresentar alguma ação deletéria contra insetos pragas agrícolas. Procedimentos laboratoriais que empregam centrifugações e diálises permitiram o fracionamento do látex em três componentes distintos: borracha (BL), proteínas (PLPr) e moléculas de baixa massa molecular (DL). A fração PLPr foi alvo de caracterização bioquímica e enzimática e foi utilizada em bioensaios com o caruncho do feijão-de-corda, Callosobruchus maculatus e com a mosca-das-frutas, Ceratitis capitata. O látex íntegro e suas frações foram utilizados em ensaios de repelência da ovoposição de C. maculatus e Zabrotes subfasciatus. A fração BL é o componente majoritário do látex, 70 %, enquanto as frações PLPr e DL constituem cerca de 15 % cada uma. O teor de proteínas solúveis na fração PLPr foi de 0,33 mg/mL. Análises eletroforética e espectrométricas revelaram a presença de proteínas com massas moleculares que variaram de 12 a 117 kDa, com um máximo de proteínas com 26 kDa e pI<6,0. A caracterização enzimática mostrou que as enzimas antioxidantes superóxido dismutase e peroxidase foram detectadas na fração protéica, assim como, uma atividade quitinásica. As proteínas do látex foram capazes de degradar azocaseína (substrato inespecífico) e BANA (substrato específico para proteases cisteínicas). As enzimas proteolíticas detectadas foram principalmente do tipo cisteínica, e em menor proporção, serínica. O pH e a temperatura ótimos para esta atividade foram 6,0 e 37 ºC, respectivamente, onde valores de temperatura superiores anulam a atividade. Utilizando experimentos de dieta artificial pôde-se observar que a fração protéica do látex a 0,4 % foi capaz de diminuir em 50 % a sobrevivência, e a 0,1 %, diminuir 50 % do ganho de massa das larvas de C. maculatus. Quando essas proteínas foram desnaturadas por aquecimento o desenvolvimento larval foi igual ao controle, sugerindo que a manutenção da estrutura protéica é essencial para o efeito observado. As proteínas do látex não foram digeridas pelas proteases endógenas do trato digestório das larvas, sugerindo que as mesmas ficariam livres para causar o efeito deletério. Nenhum efeito no desenvolvimento das larvas de C. capitata foi observado quando as proteínas foram adicionadas à dieta, mesmo na concentração de 4 %. O látex íntegro, quando adsorvido em sementes de feijão, apresentou atividade inibitória do tipo repelente sobre a ovoposição de ambos os bruquídeos testados, sendo mais evidente em Z. subfasciatus. A ação repelente observada foi dose e tempo dependente. O látex não foi capaz de afetar a viabilidade dos ovos e nem o desenvolvimento larval. As frações PLPr e DL não apresentaram atividade repelente, mostrando que nem proteínas nem moléculas de baixa massa molecular estão envolvidas nessa ação. Os insetos, quando expostos diretamente ao látex por longo período de tempo não tiveram sua fecundidade nem ovoposição afetados, sugerindo que o efeito observado não altera a fisiologia do animal.

PEREIRA, D. A. Proteases e inibidores de proteases em látex vegetal e intestino de lagartas: aspectos sobre resistência e suscetibilidade das plantas alvo. 2014. 116 f. Tese (Doutorado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014. / Submitted by Daniel Eduardo Alencar da Silva (dealencar.silva@gmail.com) on 2015-01-22T18:10:27Z No. of bitstreams: 1 2014_tese_dapereira.pdf: 2673759 bytes, checksum: 7774cf88f545c534e580605cea0c8aa2 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2016-01-27T22:52:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_tese_dapereira.pdf: 2673759 bytes, checksum: 7774cf88f545c534e580605cea0c8aa2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-27T22:52:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_tese_dapereira.pdf: 2673759 bytes, checksum: 7774cf88f545c534e580605cea0c8aa2 (MD5) Previous issue date: 2014 / Plant latex is produced and stored in channels formed by highly specialized cells structures. A remarkable feature of these fluids is the presence of complex proteolytic systems. Many studies report that latex possesses a variety of defense proteins against insects and fungi. However, some insects overlap this defense and feed on latex-producing plants, for example Pseudosphinx tetrio and Danaus plexippus, both of the order Lepidoptera. The biochemical aspects of insect resistance to latex defense proteins are still not widely elucidated. This issue was addressed in this work. Initially, the proteolytic activity of Pseudosphinx tetrio gut was characterized and evaluated in its ability to degrade latex proteins of its host plant (Plumeria rubra) and non-host plants (Calotropis procera e Cryptostegia grandiflora). Furthermore, we assessed whether protease inhibitors from latex fluids (C. procera, P. rubra and Cr. grandiflora) inhibit intestinal proteases from P. tetrio and D. plexippus and vice versa. The effect of latex enzymes on peritrophic membrane (PM) of D. plexippus was also assessed. Intestinal proteases from P. tetrio are predominantly of serine type and their activities are higher in basic pHs. P. tetrio gut proteases rapidly and completely digested latex proteins of its host plant and C. procera and partially digested proteins from Cr. grandiflora. D. plexippus larvae were not affected when fed on artificial diet containing latex proteins (1%) from non-host plants. In vitro assays detected serine and cysteine peptidase inhibitors in both gut homogenates and latex fluids. Protease inhibitors from latex inhibited the proteolytic activity of gut homogenates of both larvae. Nevertheless, in vivo analysis demonstrated that latex inhibitors do not affect the development of D. plexippus. Only the gut homogenate from D. plexippus showed inhibitory activity towards proteases latex from its host plant (Calotropis procera). Slight changes were observed in the protein profile of the PMs from D. plexippus subjected to latex protein fractions in vivo, whilst in vitro treatment resulted in more severe damage. This study concludes that proteolysis and inhibition of proteolysis are involved in the defensive systems of both caterpillars and their host plants. Even though latex peptidase inhibitors inhibit gut peptidases (in vitro), the ability of gut peptidases to promptly digest latex proteins (in vivo) regardless of their origin seems to be a pivotal event favoring caterpillars overcoming plant defense. / O látex vegetal é produzido e estocado em sistemas de canais formados por células altamente especializadas, os laticíferos. Uma característica marcante destes fluidos é a presença de sistemas proteolíticos complexos. Muitos estudos relatam que proteínas de defesa contra insetos e fungos são encontradas em látex. No entanto, alguns insetos sobrepõem esta defesa e alimentam-se de plantas laticíferas, como Pseudosphinx tetrio e Danaus plexippus, ambas da ordem Lepidoptera. As bases bioquímicas da resistência de insetos às proteínas defensivas do látex ainda não são amplamente elucidadas. Esta problemática foi abordada neste trabalho. Inicialmente a atividade proteolítica do extrato intestinal de P. tetrio foi caracterizada e avaliada sua capacidade de degradar as proteínas do látex de sua planta hospedeira, Plumeria rubra, bem como de plantas laticíferas não hospedeiras (Calotropis procera e Cryptostegia grandiflora). Além disso, foi avaliado se inibidores de proteases de fluidos laticíferos (C. procera, P. rubra e Cr. grandiflora) inibem as proteases intestinais de P. tetrio e D. plexippus e vice-versa. Em adição, foi analisado o efeito de enzimas laticíferas sobre a membrana peritrófica (MP) de D. plexippus. As proteases intestinais de P. tetrio são predominantemente do tipo serínica e suas atividades são maiores em pHs básicos. O extrato intestinal de P. tetrio rapidamente e completamente digeriu as proteínas do látex de sua planta hospedeira e de C. procera, bem como digeriu parcialmente as proteínas do látex de Cr. grandiflora. Larvas de D. plexippus se desenvolveram plenamente quando alimentadas com dieta artificial contendo 1% das frações proteicas dos látex de plantas não hospedeiras. Ensaios in vitro indicaram que ambos, extratos intestinais e látex das espécies em estudo, possuem inibidores de proteases serínicas e cisteínicas. Inibidores provenientes dos fluidos laticíferos em estudo inibiram a atividade proteolítica dos extratos intestinais de ambas as larvas. Entretanto, análise in vivo demonstrou que estes inibidores não afetam o desenvolvimento de D. plexippus. Somente o extrato intestinal de D. plexippus apresentou atividade inibidora de proteases do látex de sua planta hospedeira (Calotropis procera). Apenas discretas mudanças foram observadas no perfil proteico das MPs de D. plexippus submetidas às frações proteicas dos fluidos laticíferos in vivo, enquanto que o tratamento in vitro resultou em danos mais acentuados. A partir dos resultados obtidos conclui-se que proteólise e a inibição de proteólise fazem parte do sistema defensivo das larvas especialistas em plantas laticíferas e de suas plantas hospedeiras. Embora inibidores de proteases de fluidos laticíferos sejam capazes de inibir as proteases intestinais das larvas (in vitro), in vivo, a habilidade das proteases intestinais em prontamente digerir as proteínas do látex parece ser crucial para a sobreposição da defesa vegetal.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-06-10Bitstream added on 2014-06-13T20:35:51Z : No. of bitstreams: 1 blanco_kc_me_rcla.pdf: 835926 bytes, checksum: 46db69ad433dc1b354710697a08da977 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Este trabalho tem como objetivo estudar a produção da enzima ciclodextrina glicosiltransferase (CGTase) empregando culturas de Bacillus sp subgrupo alcalophilus utilizando como fonte de carbono fécula de mandioca (polvilho) proveniente de uma fecularia de mandioca. Nos ensaios foram empregados Bacillus sp subgrupo alcalophilus, isolado de água residuária de uma fecularia de mandioca. Para avaliar a produção de CGTase mediante a atividade enzimática pelo Bacillus sp subgrupo alcalophilus foi utilizado um planejamento fatorial a dois (2) níveis, estudando como variáveis as concentrações da fonte de carbono (polvilho), de nitrogênio e de carbonato de sódio. Os experimentos foram realizados em Erlenmeyers de 300 mL de capacidade contendo 100 mL do meio de produção com pH inicial de 9,2, a 150 rpm e temperatura de 35 ± 1ºC durante 72 horas de fermentação. A produção de CGTase foi monitorada pela determinação da atividade enzimática (U/mL). Após os ensaios realizados em frascos foram realizados experimentos em biorreator de 5 L de volume útil, contendo 2 L do meio de produção, pH de 9,20, agitação de 150 rpm e temperatura de 35 ± 1ºC durante 72 h de fermentação, utilizando um planejamento fatorial a dois (2) níveis, estudando como variáveis as taxas de aeração e a velocidade de agitação. A otimização das concentrações da fonte de carbono, nitrogênio e carbonato de sódio foram obtidas a partir de um planejamento experimental composto central (PCC) e seus resultados analisados pelas superfícies de resposta. Os melhores resultados do planejamento encontrados no ponto central, corresponderam a 6,96 g/L da fonte de carbono, 8,07 g/L de nitrogênio e 9,45 g/L de carbonato de sódio. A maior produtividade obtida de CGTase após 72 horas de fermentação, foi 98,86 U/mL com valor teórico de 98,87 U/mL. A partir do melhor resultado obtido no PCC, determinou-se... / The aim of this study was to investigate the Cyclodextrin glycosyltransferase (CGTase) enzyme production by Bacillus sp subgroup alcalophilus using cassava starch (manioc flour) as a carbon source. Bacillus sp subgroup alcalophilus was isolated from wastewater of cassava flour industry. To evaluate the assays results, two (2) levels of complete factorial experimental design was used, studying the variables: carbon source, nitrogen and sodium carbonate concentrations. The experiments were performed in 300 mL erlenmeyer flasks containing 100 mL of medium production with initial pH of 9.2, at 150 rpm and 35±1ºC, during 72 hour. CGTase production was monitored by measurements of enzymatic activity (U/mL). After the flasks experiments, assays was running in 5 L containing 2 L of medium production, pH 9.2, 35 ± 1ºC during 72-hours using a factorial design at two (2) levels for aeration and agitation rate. The optimization of carbon source, nitrogen and sodium carbonate concentrations was obtained by a central composite design and their results analyzed by surface response. The best results was located on the central point, 6.96 g/L of carbon source, 8.07 g/L of nitrogen and 9.45 g/L of sodium carbonate. The CGTase activity predicted by model was 98.86 U/mL and the experimental activity obtained was 98,87 U/mL. After the best results obtained by PCC, the conditions of aeration (vvm) and agitation (rpm) rates was determined in bioreactor using a complete factorial experimental design. The best conditions, of 2.18 vvm and agitation of 157.07 rpm gave a experimental predicted CGTase activity of 130.36 U/mL, which was very close to the theoric CGTase activity of 130.33 U/mL.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:29:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3827.pdf: 2724697 bytes, checksum: 3f4e145c147d9f4616cb864463c26613 (MD5) Previous issue date: 2011-04-28 / Universidade Federal de Sao Carlos / Given the importance of mineralization processes to the knowledge of biogeochemical cycles in aquatic environments and aiming to detail these processes through enzymatic activities of microorganisms which act on aquatic macrophytes detritus, this study had as main goals to determine the dynamics of five enzymes activities which act on degradation of lignocellulosic wastes (endoglucanase (EC 3.2.1.4 and EC 3.2.1.91), &#946;- xylanase (EC 3.2.1.8), &#946;-1,4-glucosidase (EC 3.2.1.21) peroxidase (EC 1.11.1.7) and polyphenol oxidase (EC 1.10.3.2)) and the annual succession and efficiency of these enzymes during aquatic macrophytes decomposition, according to intrinsic (fiber content and chemical quality) and extrinsicconditions (temperature, pH, condition of oxygenation and proximity of sediment) in two aquatic systems. The experiments were conducted in the ecological station of Jataí (Luiz Antonio SP). For each experiment 216 litter bags (20 × 20 cm; &#1092; pore = 0.4 mm) were prepared with fragments of Salvinia molesta (10 g (DW)), Eichhornia azurea (15 g (DW)), Cyperus giganteus (Exp. I) and Eleocharis sp. (Exp. II) (15 g (DW)) previously dried. The litter bags were incubated in 3 different sites in two depths: surface (&#8776; 0.2 m) and sediment-water interface (&#8776; 3.0 m) at Lagoa do Óleo (oxbow lagoon) in January 2008 and Represa do Beija-Flor (reservoir) in January 2009. Each sampling day (1, 3, 5, 30, 60, 90, 120, 150, 200, 250, 300 and 350) three litter bags of each depth were collected and taken to the laboratory for remaining particulate matter analysis. Taking into account the similarity observed between the systems, it was considered that those detritus were decomposed into acid environment with low nutrient availability (at least part of the year) and, mostly, aerobic (anaerobic periods could have occurred in s-w interface). The chemical quality, characterized by C:N ratio, exercised greatest influence on POMR mass loss and decay coefficients. Enzyme activity on the studied detritus was initiated at the same time of leaching process, intensively. After this period, a decrease in this activity was observed, occurring intermediate peaks. Until the 350th day of decomposition there was a predominance of hydrolytic enzymes activity in relation to oxidative enzymes. There was a direct relationship between mass loss and enzyme activity, related mainly to xylanase activity. / Diante da importância dos processos de mineralização para o entendimento dos ciclos biogeoquímicos em ambientes aquáticos e tendo em vista o detalhamento desses processos através das atividades enzimáticas dos microrganismos que atuam sobre os detritos de macrófitas aquáticas, esse estudo teve como objetivos principais determinar a dinâmica das atividades de cinco enzimas que atuam na degradação dos detritos lignocelulósicos (endoglucanases (EC 3.2.1.4 e EC 3.2.1.91), &#946;-xilanase (EC 3.2.1.8), &#946;- 1,4-glicosidase (EC 3.2.1.21), peroxidase (EC 1.11.1.7) e polifenol-oxidase (EC 1.10.3.2)) e analisar a sucessão e a eficiência anual dessas enzimas durante a decomposição de macrófitas aquáticas, em função de condições intrínsecas (teor de fibras e qualidade química) e extrínsecas (e.g. temperatura, pH, condição de oxigenação e proximidade do sedimento) aos seus detritos em dois sistemas aquáticos. Os experimentos foram realizados na Estação Ecológica de Jataí (Luiz Antonio SP). Para cada experimento foram preparados 216 litter bags (20 × 20 cm; &#1092; de poro = 0,4 mm) com fragmentos de Salvinia molesta (10 g (MS)), Eichhornia azurea (15 g (MS)), Cyperus giganteus (Exp. I) e Eleocharis sp. (Exp. II) (15 g (MS)), previamente secos. Os litter bags foram incubados em 3 pontos diferentes, em duas profundidades: superfície (&#8776; 0,2 m) e interface sedimento-água (&#8776; 3,0 m) na Lagoa do Óleo em janeiro de 2008 e na Represa do Beija-Flor em janeiro de 2009. Nos dias amostrais (1, 3, 5, 30, 60, 90, 120, 150, 200, 250, 300 e 350) três litter bags de cada profundidade foram coletados e levados ao laboratório para análise do material particulado remanescente. Levando em consideração a semelhança observada entre os dois sistemas, foi considerado que os detritos foram decompostos em ambiente ácido, com baixa disponibilidade de nutrientes (pelo menos em parte do ano) e, majoritariamente, aeróbio, podendo ter ocorrido períodos de anaerobiose na interface s-a. A qualidade química, caracterizada aqui pela razão C:N, foi o fator que exerceu a maior influência sobre as porcentagens e coeficientes de perda de massa da MOPR dos detritos de macrófitas aquáticas avaliados. A atividade enzimática sobre os detritos nos ambientes estudados é iniciada paralelamente à lixiviação, com intensidade. Após esse período é observado decréscimo dessa atividade, ocorrendo picos intermediários. Até o 350º dia de decomposição há predominância da atividade de enzimas hidrolíticas sobre a atividade de enzimas oxidativas. Houve uma relação direta entre perda de massa e atividade enzimática, relacionada, principalmente, à atividade de xilanase.

Submitted by Giovanni Marcello de Angeli Gilli Cóser (gigilli@live.com) on 2018-09-27T19:29:54Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_GIOVANNI MARCELLO DE ANGELI GILLI COSER.pdf: 857854 bytes, checksum: bdc61e1ef7b26aa50af9ac27305cf374 (MD5) / Approved for entry into archive by Maria Lucia Martins Frederico null (mlucia@fca.unesp.br) on 2018-09-27T19:43:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 coser_gmag_me_botfca.pdf: 857854 bytes, checksum: bdc61e1ef7b26aa50af9ac27305cf374 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-27T19:43:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 coser_gmag_me_botfca.pdf: 857854 bytes, checksum: bdc61e1ef7b26aa50af9ac27305cf374 (MD5) Previous issue date: 2018-07-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Objetivou-se avaliar a eficiência de produtos alternativos para indução da brotação das cultivares de videira Niagara Rosada e Cabernet Sauvignon, como o Erger®, Bluprins® e Orobor® em diferentes doses e combinações destes produtos, comparando-os com o método convencional pelo uso do Dormex® (cianamida hidrogenada). Foram realizados, no ciclo de produção 2016/2017, dois ensaios em condições de clima subtropical no Estado de São Paulo, um em Botucatu e outro no município de São Manuel, utilizando a cultivar de uva para mesa Niagara Rosada. Outros dois ensaios foram realizados no Estado do Rio Grande do Sul em um pomar comercial localizado no município de Flores da Cunha, com a cultivar vinífera Cabernet Sauvignon. Concluiu-se que em Botucatu, o tratamento Erger® 5% + nitrato de cálcio 4% apresentou efeito significativo para produção e produtividade estimada, isso comparado com os tratamentos de Dormex® 5%. Já em São Manuel, a dose de 2,5% de Erger® + nitrato de cálcio 4% resultou em produção semelhante ao tratamento convencional com Dormex®, sendo apresentada melhor qualidade de fruto com a dose de 3,0% de Erger® + nitrato de cálcio 4%. Para os ensaios no Rio Grande do Sul, o tratamento Erger® 2,5% + nitrato de cálcio 4% apresentou efeito significativo, tanto na produção, quanto na produtividade do número de cachos por plantas, comparado com os tratamentos de Dormex® 4%. Já no segundo ensaio, o tratamento Dormex® 2% + Erger® 2% apresentou os maiores valores para a produção, produtividade estimada e número de cachos, indicando a possibilidade de combinação de indutores de brotação para melhoria da resposta produtiva de videiras ‘Cabernet Sauvignon’.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-07-13T12:33:57Z No. of bitstreams: 1 Erica de Oliveira Silva.pdf: 2322438 bytes, checksum: f9b138085af87bb67b1ee3b02342a96a (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-13T12:33:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Erica de Oliveira Silva.pdf: 2322438 bytes, checksum: f9b138085af87bb67b1ee3b02342a96a (MD5) Previous issue date: 2017-02-24 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / With the increase in emissions of atmospheric carbon dioxide, it has become increasingly necessary to understand the global carbon cycle, and in particular the role of several potential sinks. Agriculture contributes directly to global emissions of greenhouse gases, mainly in the conversion practices of land use from natural ecosystem to areas of agricultural use. There are few studies on the impacts of forest conversion on agricultural areas and seasonal variation on soil quality in dry tropical environments. Thus, the present study aimed to evaluate the impact of different management systems and the seasonal variation in soil C and enzymatic activities of the soil in the Brazilian semi-arid region. The study was carried out at the Buenos Aires farm, in the municipality of Serra Talhada - PE. Three soil samples were collected in layers 0-5, 5-10 and 10-20 cm, in April 2014 (PC1), October 2015 (PS) and April 2016 (PC2), in areas with different uses: Preserved area with vegetation native to the Caatinga (CAA); Protected area with Angico (ANG); Protected area with Ipê (IPE); Capoeira area (CAP); And agricultural area with corn (M). Total soil organic carbon (TOC), TOC stocks, oxidizable organic carbon fractions (F1, F2, F3 and F4), chemical fractionation of humic substances (SH) and enzymatic activities of β-glucosidase, urease and Acid phosphatase. The data were submitted to analysis of variance by the Tukey test at the level of 10% of probability in each layer. Multivariate principal component analysis (PCA) was applied separately to each layer. The Caatinga area presented the highest TOC levels, remaining stable over time. The largest stocks of COT were in the Caatinga area. Concentrations of C in fulvic acid (C-AF) were higher in the Caatinga area in the more superficial layer. The concentrations of C in humic acid (C-AH) were lower in the agricultural area compared to the Caatinga area. The Caatinga area presented the highest levels of C in F2, F3 and F4. The enzymatic activities of soil were higher in the Caatinga area, while the smaller activities were detected in the areas of Capoeira and Maize. Enzymatic activities did not show a clear seasonal trend. From the analysis of the main component of the data (ACP), it is possible to notice in the first two layers, in the different periods sampled, a greater distinction between the Caatinga area and the other areas. All indicators used in this study showed that the conversion of native vegetation areas into agricultural areas has negative effects, detectable even in the long term, indicating that the recovery of these areas is a slow process. The results obtained in this study are important for the understanding of the dynamics and variation of C in soil under different management and the effect of seasonality in extremely dry areas with very low rainfall (2014-2016). / Com o aumento das emissões do dióxido de carbono atmosférico, tornou-se cada vez mais necessário compreender o ciclo global do carbono e, em particular, o papel de vários potenciais sumidouros. A agricultura contribui diretamente com as emissões globais de gases de efeito estufa, principalmente nas práticas de conversão de uso da terra de ecossistema natural para áreas de uso agrícola. Poucos são os estudos sobre os impactos das conversões de florestas em áreas agrícolas e da variação sazonal sobre a qualidade do solo, em ambientes tropicais secos. Assim, o presente estudo teve por objetivo avaliar o impacto de diferentes sistemas de manejo e da variação sazonal no C do solo e nas atividades enzimáticas do solo, no semi-árido brasileiro. O estudo foi realizado na fazenda Buenos Aires, no município de Serra Talhada – PE. Foram feitas três amostragens de solo, nas camadas 0-5, 5-10 e 10-20 cm, em abril de 2014 (PC1), outubro de 2015 (PS) e abril de 2016 (PC2), em áreas com diferentes usos: área preservada com vegetação nativa da Caatinga (CAA); área protegida com Angico (ANG); área protegida com Ipê (IPE); área de Capoeira (CAP); e área de cultivo agrícola com Milho (M). Foram analiados carbono orgânico total do solo (COT), estoques de COT, frações oxidáveis de carbono orgânico do solo (F1, F2, F3 e F4), fracionamento químico das substâncias húmicas (SH) e atividades enzimáticas de β-glucosidase, urease e fosfatase ácida. Os dados foram submetidos à análise de variância pelo teste de Tukey ao nível de 10% de probabilidade em cada camada. Foi aplicada análise multivariada de componentes principais (ACP) separadamente a cada camada. A área de Caatinga apresentou os maiores teores de COT, se mantendo estável no decorrer do tempo. Os maiores estoques de COT foram na área de Caatinga. As concentrações de C em ácido fúlvico (C-AF) foram maiores na área de Caatinga na camada mais superficial. As concentrações de C em ácido húmico (C-AH) foram menores na área de cultivo agrícola em relação à área de Caatinga. A área de Caatinga apresentou os maiores teores de C na F2, F3 e F4. As atividades enzimáticas de solo foram mais elevadas na área de Caatinga, enquanto as menores atividades foram detectadas nas áreas de Capoeira e Milho. As atividades enzimáticas não apresentram um tendência sazonal clara. A partir da análise da componente principal dos dados (ACP), é possível notar nas duas primeiras camadas, nos diferentes períodos amostrados, uma maior distinção entre a área de Caatinga e as demais áreas. Todos os indicadores utilizados nesse estudo mostraram que a conversão de áreas de vegetação nativa em áreas agrícolas promove efeitos negativos, detectáveis mesmo em longo prazo, indicando que a recuperação dessas áreas é um processo lento. Sendo os resutados obtidos nesse estudo importantes para o entendimento da dinâmica e variação do C no solo sob diferentes manejos e o efeito da sazonalidade em áreas extremamente secas com baixíssimas precipitações (2014-2016).

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:03:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4519_1.pdf: 6728814 bytes, checksum: 0a2bf9b9ce453a0afed50516c47bdecf (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2004 / Foi verificado neste trabalho a atividade quitinolítica de Metarhizium spp. a partir da degradação da cutícula de Boophilus microplus, além das atividades lipolítica, amilolítica e proteolítica em meios basais, como também estudos do crescimento fúngico em três diferentes meios de cultura e isoenzimáticos. Foram observados maiores valores de atividade enzimática na linhagem CG291C (Metarhizium flavoviride var. flavoviride reisolada de B. microplus) em meio contendo cutícula de B. microplus para atividade quitinolítica, CG434C (M. anisopliae var. acridum reisolada de B. microplus) e CG434 (M. anisopliae var. acridum) lipolítica, CG442C (M. anisopliae var. acridum reisolada de B. microplus) proteolítica e CG442 (M. anisopliae var. acridum) para amilolítica. O meio BDA induziu o maior crescimento e esporulação, e entre os meios líquidos, Czapeck e Massa de arroz propiciaram maior peso da matéria seca. A análise eletroforética em gel de poliacrilamida demonstrou variações no número e posições das bandas, em cada um dos sistemas estudados. Foi observada maior variação nos perfis das bandas com relação às proteínas totais, em todas as linhagens, variando de uma a oito bandas com mobilidade relativa diferenciada. No sistema esterase as linhagens CG291 (Metarhizium flavoviride var. flavoviride) e CG291C (Metarhizium flavoviride var. flavoviride reisolada de B. microplus) apresentaram o mesmo perfil e mobilidade relativa o que diferiu das demais linhagens estudadas, revelando polimorfismo. Na visualização do gel para fosfatase ácida, apenas as linhagens CG291 e CG291C mostraram perfis idênticos com cinco bandas de mesma mobilidade relativa e revelando grande polimorfismo nas demais linhagens. No sistema superóxido dismutase as linhagens CG434, CG434c, CG442 e CG442C não apresentaram bandas. De modo geral, todas as linhagens mostraram padrões diferentes indicando uma variação fenotípica