Orientadores: Wagner José Fávaro, Patrick Vianna Garcia / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-24T14:25:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carniato_AmandaPocol_M.pdf: 2911906 bytes, checksum: 77e9b9f70f794e03c6fff7075745bfb0 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Introdução: A alta recorrência do câncer de bexiga não-músculo invasivo (CBNMI) pode estar relacionada aos baixos efeitos das atuais terapias sobre os receptores Toll-like (TLRs) e a angiogênese. Atualmente, a terapia utilizada contra o CBNMI é a imunoterapia com BCG (Bacillus Calmette-Guerin) associada com a ressecção transuretral. Entretanto, a utilização do BCG está associada a efeitos colaterais, desde sintomas irritativos leves até reação sistêmica grave. Nesse contexto, uma nova perspectiva é representada pelo imunomodulador P-MAPA (agregado polimérico anidrídico fosfolinoleato-palmitoleato de amônio e magnésio). Objetivos: Os objetivos deste estudo foram caracterizar os efeitos da ativação dos mediadores das vias de sinalização dos TLRs 2, 4 (MyD88, IKK?, NF-kB, TNF-?, IL-6, TRIF, IRF-3, IFN-?), INOS e p53 na regulação do processo de angiogênese (VEGF e endostatina) e apoptose (BAX) frente ao uso do P-MAPA e BCG no CBNMI. Materiais e Métodos: Para a indução do CBNMI, 30 animais Fischer 344 induzidos quimicamente com uma dose intravesical de 1,5 mg/kg de N-metil-N-nitrosouréia (MNU) a cada 15 dias, totalizando 4 doses. Outros 10 animais Fischer 344 que não receberam MNU foram considerados como Grupo Controle. Duas semanas após a indução, os animais foram divididos em 3 grupos e tratados semanalmente por 6 semanas consecutivas via intravesical: Grupo Controle: 0,3 mL de solução fisiológica 0,9% ; Grupo MNU (Câncer): mesmo tratamento que o grupo Controle; Grupo MNU-BCG: 106 UFC ¿ 40 mg de BCG; Grupo MNU-P-MAPA: 5 mg/Kg de P-MAPA. Após tratamento os animais foram eutanasiados e as bexigas urinárias coletadas e submetidas às análises histopatológicas, imunohistoquímicas e Western Blotting. Resultados: O MNU demonstrou-se efetivo na indução do CBNMI, caracterizando carcinoma com invasão da lâmina própria (pT1), carcinoma papilífero (pTa), carcinoma in situ (pTis) e metaplasia escamosa. O grupo MNU-P-MAPA apresentou recuperação histopatológica em 100% dos animais, não apresentando alterações neoplásicas, enquanto que o grupo MNU-BCG recuperou apenas 60% dos animais. Os níveis proteicos para TLR2 e TLR4, dos intermediários da via de sinalização não-canônica (TRIF, IRF-3, IFN-?), p53 e BAX foram significativamente maiores no grupo MNU-P-MAPA em relação aos demais grupos experimentais. Sendo que para os intermediários da via de sinalização canônica (MyD88, IKK?, NF-kB, TNF-?, IL-6) foram maiores no grupo MNU-BCG. Os níveis proteicos de iNOS estiveram aumentados em ambos os tratamentos MNU-BCG e MNU-P-MAPA. E para VEGF, os níveis foram significativamente aumentados nos grupos MNU e MNU-BCG em relação aos demais grupos experimentais. Em contraste, a endostatina mostrou-se reduzida no grupo MNU e aumentada no grupo MNU-P-MAPA. Conclusão: Assim, pode-se concluir que a imunoterapia com P-MAPA promoveu distinta ativação do sistema imune inato mediada por TLRs 2 e 4 em relação ao BCG, resultando no aumento da via de sinalização para interferons, morte celular imunogênica, além da restauração dos níveis proteicos de p53 induzindo a apoptose e desaceleração do processo de angiogênese. A ativação da via de sinalização para interferons se correlacionou com a significativa melhora do CBNMI e ocorrência de apoptose / Abstract: Introduction: The high recurrence of non-muscle invasive bladder cancer (NMIBC) may be related to the low effect of the current therapies about receptors Toll-like (TLRs) and angiogenesis. Currently, the therapy used against the NMICB is the immunotherapy with BCG (Bacillus Calmette-Guerin) associated with the transurethral resection. However, the use of BCG is associated to side effects, since symptoms irritative mild to severe systemic reaction In this context, a new perspective is represented by the immunomodulatory P-MAPA (polymeric aggregate anidrídico phospholinoleate-palmitoleate ammonium and magnesium). Aims: The aims of this study were characterize the effects of activation of mediators of signaling pathways of TLRs 2, 4 (MyD88, IKK?, TNF-?, IL-6, TRIF, IRF-3, IFN-?, iNOS) and p53 in regulating the process of angiogenesis (VEGF, HIF, Endostatin) and apoptosis (BAX) compared to using P-MAPA and BCG in the NMIBC. Materials and Methods: For NMIBC induction, 30 Fischer 344 animals were chemically induced with intravesical dose of 1.5 mg / kg of N-methyl-N-nitrosourea (MNU) every 15 days, totaling 4 doses. Another 10 Fischer 344 animals that not received MNU were considered as Control Group. Two weeks after induction, the animals were divided into 3 groups and treated intravesically for 6 consecutive weeks: Control Group: 0.3 ml of 0.9% saline; MNU Group (Cancer): same treatment as the Control group; BCG-MNU Group: 106 UFC - 40 mg of BCG; MNU-P-MAPA group: 5 mg/kg P-MAPA. After treatment, the animals were euthanized and the urinary bladders collected and subjected to histopathological, immunohistochemical and Western blotting analyzes. Results: The MNU demonstrated to be effective in inducing NMIBC, presenting undifferentiated tumor, featuring carcinoma with invasion of the lamina propria (pT1), papillary (pTa), carcinoma in situ (PTis) and squamous metaplasia. The MNU-P-MAPA group presented histopathological recovery in 100% of animals showing no neoplasic alterations, while MNU-BCG group recovered only 60% of animals. Protein levels of TLR2 and TLR4, the intermediary of non-canonical signaling pathway (TRIF, IRF-3, IFN-?), p53 and BAX were significantly higher in MNU-P-MAPA group compared to other experimental groups. Whereas the intermediate canonical signaling pathway of TLRs (MyD88, IKK?, TNF-?, IL-6) were higher in MNU-BCG group. Protein levels of iNOS were high in both MNU-BCG and MNU-P-MAPA treatment groups. Protein levels for VEGF and HIF were significantly increased in MNU and MNU-BCG group compared to the other experimental groups. In contrast, endostatin was reduced in MNU group and increased in the MNU-P-MAPA group. Conclusion: Thus, it can be concluded that immunotherapy with P-MAPA promoted distinct activation of the innate immune system mediated by TLRs 2 and 4 compared to BCG, resulting in increased signaling pathway for interferon, immunogenic cell death, in addition to restoration of p53 protein levels that leads to apoptosis and slowing the process of angiogenesis. The activation of the signaling pathway for interferon correlated with significant improvement NMIBC and the occurrence of apoptosis / Mestrado / Biologia Tecidual / Mestra em Biologia Celular e Estrutural

Le fer est un oligoélément indispensable pour tout organisme vivant. Le taux de fer systémique est régulé par la fixation de l’hepcidine, hormone synthétisée majoritairement par le foie mais également par les macrophages, à la ferroportine seul exporteur du fer. L’expression de ces deux protéines est régulée par le taux de fer et les processus inflammatoires. Des mécanismes d’acquisition et de séquestration du fer sont mis en place respectivement par le pathogène et l’hôte durant l’infection et régulent en parallèle l’expression de l’hepcidine et la ferroportine. Les travaux de recherche effectués dans le cadre de ma thèse ont porté d’une part sur un aspect fondamental à améliorer nos connaissances du mécanisme de régulation de l’axe hepcidine - ferroportine en condition inflammatoire et analyser l’influence du fer sur la réponse immune au niveau des macrophages; d’autre part une deuxième partie de mes recherches s’est orientée vers une étude plus appliquée du rôle du fer dans la réponse immune induite par une infection mycobactérienne. Nous montrons que l’expression de l’hepcidine et de la ferroportine est différentiellement régulée en corrélation avec la polarisation des macrophages via les voies de signalisation intracellulaires PI3K et autres kinases. Le fer influence la polarisation des macrophages et module ainsi la réponse inflammatoire, et représente aussi un signal de danger capable de stimuler une voie MyD88-dépendante. Enfin, la réponse à l’infection Mycobacterium. bovis BCG est modulée par un régime modérément enrichi en fer, réduisant la charge bactérienne et l’inflammation. / Iron is an essential trace element for all organisms. In mammals, systemic iron homeostasis relies on hepcidin, a peptide hormone synthesized by liver but also macrophages with defensing properties, and its target, the cell iron exporter ferroportin. Iron content and inflammation regulate hepcidin and ferroportin expression in mammals. During infection, pathogens develop sophisticated mechanisms for iron acquisition and sequestration. In response, host regulates the bioavailability of iron through hepcidin and ferroportin expression. First, this work contributes to improve our fundamental knowledge on hepcidin and ferroportin regulation during inflammation and analyzes the influence of iron in macrophages immune response. Second, the role of iron in response to mycobacterial infection was investigated. We show that hepcidin and ferroportin expression was regulated differentially in correlation with macrophages polarization through intracellular signaling pathways involving PI3K and others kinases. In addition, iron influenced macrophages polarization leading to a decrease of inflammatory response with a potent effect on MyD88 pathway stimulation. Finally, we showed that moderate iron-rich diet modulated Mycobacterium bovis BCG response reducing the bacterial burden and inflammation.

The aim of this study is to analyse the portfolio of the pharmaceutical company Meda Pharma s.r.o. and then, according to the results, suggest a marketing stratégy to be effective up to 2020. The work has two parts, theoretical and practical. The theoretical part explains the basic concepts related to the market, marketing, marketing mix, marketing strategy and its instruments. This part is also dedicated to concepts relating to the pharmaceutical industry. The practical part is focused on analysis of portfolio of the company. I will use the marketing mix, the Boston matrix, evaluate the largest competitors in each product and focus also on the profitability of products of the company. In conclusion, I will propose a marketing strategy to be put in place by 2020.

This master's thesis is focused on analysis of Whirlpool CR, spol. s r. o. product range. Main objective of this thesis is to analyse Whirlpool CR freestanding home appliances product range and suggest reccomendations for its optimalization. The theoretical part is devoted to methods for the analysis of macro-and microenvironment, which are then applied in practical part of work. Based on internal company data Whirlpool CR, spol. s r. o. is provided the analysis of the marketing mix. The analysis of range and recommendations for its optimization are performed with the Boston Consulting Group matrix.

Le cancer de la vessie est le 9ème cancer le plus fréquent avec 435 000 nouveaux cas diagnostiqués chaque année et 165 000 décès par an dans le monde. Au diagnostic, 70-80% des cancers de la vessie sont tumeurs superficielles n’infiltrant pas le muscle vésical (TVNIM). Depuis près de 40 ans, les instillations intra-vésicales de bacille de Calmette-Guérin (BCG) sont le traitement de référence des TVNIM ayant un risque élevé de progression (T1, carcinome in situ, Ta haut grade). Malgré un traitement bien conduit, le taux de récidive est d'environ 50%, et la progression vers une tumeur infiltrant le muscle est estimé à 20%-30% dans les 5 ans. Jusqu’à 15% des patients développent des métastases de leur carcinome urothélial. Aujourd’hui, aucun biomarqueur ne permet de prédire la réponse au BCG, ni l’évolution métastatique de la maladie. La cystectomie totale reste le traitement de référence en cas de non-réponse au BCG. Plusieurs essais cliniques évaluent des traitements immuno-modulateurs ciblant les points de contrôle immunitaires PD1, PD-L1 en 2° ligne de traitement après échec du BCG. Les instillations endo-vésicales d’adénovirus recombinant, de virus oncolytique ou d'agoniste de la voie STING sont des stratégies thérapeutiques en cours d'évaluation. L'objectif de ce travail était d'étudier les mécanismes de résistance intrinsèques des cellules tumorales exposées au BCG afin d'identifier de nouvelles cibles thérapeutiques. / Bladder cancer is a heterogeneous disease that displays invasive and non-invasive histological features, and a wide spectrum of molecular alterations and subtypes. Treatment of non-invasive tumors with high-risk features (carcinoma in situ, high-grade Ta, T1) includes trans-urethral resection of the tumor, followed by intravesical instillations of bacillus Calmette-Guérin (BCG). Despite a multitude of evidence for anti-tumor efficacy, 50% of patients with high-risk NMIBC develop tumor recurrence and 20-30% disease progression. Ultimately, 10-15% of patients die of metastatic disease. New therapeutic strategies are currently in clinical development to treat BCG-unresponsive tumors including antagonistic antibodies directed against the T-cell immune checkpoints PD-1, PD-L1 and CTLA-4, but also recombinant adenovirus interferon α (Ad-IFNα/Syn3), oncolytic virus and STING agonists. Although recent studies have identified potential immune parameters that could impact clinical response, mechanisms of tumor resistance to BCG immunotherapy remain poorly understood. Additionally, tumor heterogeneity and plasticity of cancer cells undermine our attempts to precise dynamics of immune escape under selective pressure. How cancer cells evade to the anti-tumor immune response, and whether cancer cells acquire intrinsic undesirable characteristics upon BCG exposure remain unknown. Altogether, this highlights the crucial need to better understand the mechanisms of tumor resistance that occur during BCG immunotherapy in order to identify new targetable pathways and treatment strategies.

Introdução: O controle da dor em recém-nascidos (RN) é necessário, tendo em vista que a exposição contínua e repetitiva à dor poderá trazer consequências ao desenvolvimento da criança. Há evidências consistentes sobre o efeito analgésico e segurança de se administrar a oferta oral de soluções adocicadas em RN submetidos a procedimentos dolorosos agudos. A amamentação e o contato pele a pele são práticas rotineiras, de baixo custo e incentivadas pelo Programa Hospital Amigo da Criança, com evidência de efetividade analgésica que pode ser adotada, como medida alternativa à oferta de soluções adocicadas. Entretanto, é preciso avaliar se seu efeito analgésico e sua segurança superam a solução adocicada na administração de vacinas, antes de recomendar sua adoção. Hipótese: O efeito analgésico combinado da amamentação com o contato pele a pele é superior à oferta oral de glicose 25% na administração da vacina BCG em RN. Objetivo: Avaliar o efeito analgésico da combinação da amamentação com contato pele a pele na administração da vacina BCG em RN a termo. Método: Ensaio clínico randomizado, conduzido em um hospital de ensino da cidade de São Paulo, certificado como Hospital Amigo da Criança. A amostra foi composta por 109 RN a termo, saudáveis, internados na Unidade de Alojamento Conjunto do HU, entre agosto e setembro de 2015. A amostra foi randomizada e os RN alocados nos Grupos Experimental (GE amamentação + contato pele a pele iniciada 5 minutos, antes da administração da vacina de BCG) e Controle (oferta oral de 2 ml de solução glicosada 25% ao RN posicionado verticalmente no colo materno, 2 minutos, antes da administração da vacina de BCG). O desfecho primário analisado foi o escore de dor obtido com a avaliação pela escala Premature Infant Pain Profile- Revised (PIPP-R). O escore de dor foi obtido em seis intervalos de 30 segundos (30, 60, 90, 120, 150 e 180 segundos) pós-administração da vacina. Os desfechos secundários avaliados foram os indicadores fisiológicos frequência cardíaca (FC) e saturação de oxigênio (SatO2), além de alterações na mímica facial - sobrancelhas salientes, olhos espremidos e sulco nasolabial, duração do choro e eventos adversos. Os dados foram obtidos por meio de filmagens do recém-nascido para captar a mímica facial e do display do monitor multiparamétrico com os registros da FC e SatO2. Os dados foram extraídos por meio da análise segundo a segundo das filmagens e foram registrados em formulário impresso próprio e, posteriormente, armazenados em planilha Microsoft Excel. A análise estatística foi processada no programa do pacote estatístico SPSS 20. Para analisar a homogeneidade da amostra, foram utilizados os testes Qui-quadrado ou Exato de Fisher para variáveis qualitativas e o teste t pareado para comparar as médias das variáveis quantitativas. Os dados das variáveis quantitativas das medidas repetidas, como FC e SatO2, foram analisados com o Modelo de Análise Misto, e as medidas repetidas de escores de PIPP-R analisadas pelo modelo ANOVA (Modelo Geral Linear). O projeto de pesquisa foi aprovado pelos Comitês de Ética da Escola de Enfermagem e do Hospital Universitário da Universidade de São Paulo e registrado no Registro Brasileiro de Ensaios Clínicos. Resultados: A distribuição das variáveis sexo, gemelaridade, tipo de parto, Apgar, peso, idade gestacional, número de procedimentos dolorosos anteriores e tempo desde a última mamada apresentaram distribuições homogêneas entre os grupos experimental e controle. Os escores de dor foram inferiores no GE (p=0,002). Não houve diferenças estatisticamente significantes em relação ao tempo de choro (p=0,745) e ocorrência de eventos adversos (p= 0,618). Conclusão: A combinação da amamentação no contato pele a pele apresentou efeito analgésico superior à oferta oral de glicose 25% com o RN no colo materno, como resposta dolorosa do RN à vacina de BCG e que apresenta segurança para ser indicada, como intervenção analgésica na prática clínica. / Introduction: Pain management in infant newborns is necessary, given the continuous and repeated exposure to pain can have negative consequences for the child\'s development. There is robust evidence of the analgesic effect and safety of administering oral sweetened solutions to newborns undergoing acute painful procedures. Breastfeeding and the skin-to-skin care are routine clinical practices, with low cost, and the Baby-Friendly Hospital Initiative recommends them. There is evidence of both practices regarding their analgesic effectiveness, which can be adopted as an alternative treatment to sweetened solutions. However, it is necessary to assess whether the analgesic effect and safety of these measures outweigh sweetened solutions in the administration of vaccines, before recommending its adoption. Hypothesis: The analgesic effect of combining breastfeeding plus skin-to-skin contact is superior to the taste of 25% glucose in the BCG vaccination in infant newborns. Objective: To evaluate the analgesic effect of combining breastfeeding plus skin-to-skin contact in the BCG vaccination in term infant newborns. Methods: A randomized clinical trial conducted at the University of São Paulo Teaching Hospital certified as a Baby-Friendly Hospital from August to September 2015. This study was performed on 109 healthy term infants who were born during the study, admitted at a rooming-in ward. The sample was randomized and infants were allocated in Experimental Group (GE breastfeeding plus skin-to-skin contact which begun 5 minutes prior to the administration of BCG vaccine) or Control Group (CG taste of 2 mL 25% glucose administered 2 minutes prior the BCG vaccination with the mother holding her baby upright on her lap). The primary outcome analyzed was the pain score assessed by the Premature Infant Pain Profile - Revised (PIPP-R). The pain score was assessed in six intervals of 30 seconds (30th, 60th, 90th, 120th, 150th and 180th) after the BCG vaccine administration. The secondary outcomes were: physiological parameters heart rate (HR) and oxygen saturation (O2Sat), and changes in facial expression brow bulging, eyes squeezed and nasolabial furrow, crying duration and adverse events. Data was obtained from video records of the newborn facial expressions and HR and O2Sat of multiparametric monitor display. Data was extracted from the video records after being analyzed throughout every second. Data was stored in the Microsoft Excel spreadsheet. Statistical analysis was performed by statistical package SPSS 20. To analyze the homogeneity of the sample, chi-square test or Fisher\'s exact was performed for qualitative variables, to compare the means of quantitative variables, paired t-test was used. Quantitative variables of repeated measures, as HR and O2Sat were analyzed with Mixed Model Analysis and repeated measurements of PIPP-R scores were analyzed by ANOVA (General Linear Model). The ethics committee of the School of Nursing and University Hospital, both from the University of São Paulo, approved the research project. The research project is registered at the Brazilian Registry of Clinical Trials. Results: The distribution of gender, twin pregnancy, mode of delivery, Apgar, weight, gestational age, number of previous painful procedures and time since last feeding showed homogeneous distribution between the Experimental and Control groups. Pain scores were lower in the EG (p = 0.002). There were no statistically significant differences in relation to the crying duration (p = 0.745) and adverse events (p = 0.618). Conclusion: The combination of breastfeeding plus skin-to-skin contact showed superior analgesic effect regarding the comparative intervention of oral 25% glucose with infant positioned vertically in mothers lap and it is safe to be prescribed as an analgesic treatment in clinical practice.

Introdução: O controle da dor em recém-nascidos (RN) é necessário, tendo em vista que a exposição contínua e repetitiva à dor poderá trazer consequências ao desenvolvimento da criança. Há evidências consistentes sobre o efeito analgésico e segurança de se administrar a oferta oral de soluções adocicadas em RN submetidos a procedimentos dolorosos agudos. A amamentação e o contato pele a pele são práticas rotineiras, de baixo custo e incentivadas pelo Programa Hospital Amigo da Criança, com evidência de efetividade analgésica que pode ser adotada, como medida alternativa à oferta de soluções adocicadas. Entretanto, é preciso avaliar se seu efeito analgésico e sua segurança superam a solução adocicada na administração de vacinas, antes de recomendar sua adoção. Hipótese: O efeito analgésico combinado da amamentação com o contato pele a pele é superior à oferta oral de glicose 25% na administração da vacina BCG em RN. Objetivo: Avaliar o efeito analgésico da combinação da amamentação com contato pele a pele na administração da vacina BCG em RN a termo. Método: Ensaio clínico randomizado, conduzido em um hospital de ensino da cidade de São Paulo, certificado como Hospital Amigo da Criança. A amostra foi composta por 109 RN a termo, saudáveis, internados na Unidade de Alojamento Conjunto do HU, entre agosto e setembro de 2015. A amostra foi randomizada e os RN alocados nos Grupos Experimental (GE amamentação + contato pele a pele iniciada 5 minutos, antes da administração da vacina de BCG) e Controle (oferta oral de 2 ml de solução glicosada 25% ao RN posicionado verticalmente no colo materno, 2 minutos, antes da administração da vacina de BCG). O desfecho primário analisado foi o escore de dor obtido com a avaliação pela escala Premature Infant Pain Profile- Revised (PIPP-R). O escore de dor foi obtido em seis intervalos de 30 segundos (30, 60, 90, 120, 150 e 180 segundos) pós-administração da vacina. Os desfechos secundários avaliados foram os indicadores fisiológicos frequência cardíaca (FC) e saturação de oxigênio (SatO2), além de alterações na mímica facial - sobrancelhas salientes, olhos espremidos e sulco nasolabial, duração do choro e eventos adversos. Os dados foram obtidos por meio de filmagens do recém-nascido para captar a mímica facial e do display do monitor multiparamétrico com os registros da FC e SatO2. Os dados foram extraídos por meio da análise segundo a segundo das filmagens e foram registrados em formulário impresso próprio e, posteriormente, armazenados em planilha Microsoft Excel. A análise estatística foi processada no programa do pacote estatístico SPSS 20. Para analisar a homogeneidade da amostra, foram utilizados os testes Qui-quadrado ou Exato de Fisher para variáveis qualitativas e o teste t pareado para comparar as médias das variáveis quantitativas. Os dados das variáveis quantitativas das medidas repetidas, como FC e SatO2, foram analisados com o Modelo de Análise Misto, e as medidas repetidas de escores de PIPP-R analisadas pelo modelo ANOVA (Modelo Geral Linear). O projeto de pesquisa foi aprovado pelos Comitês de Ética da Escola de Enfermagem e do Hospital Universitário da Universidade de São Paulo e registrado no Registro Brasileiro de Ensaios Clínicos. Resultados: A distribuição das variáveis sexo, gemelaridade, tipo de parto, Apgar, peso, idade gestacional, número de procedimentos dolorosos anteriores e tempo desde a última mamada apresentaram distribuições homogêneas entre os grupos experimental e controle. Os escores de dor foram inferiores no GE (p=0,002). Não houve diferenças estatisticamente significantes em relação ao tempo de choro (p=0,745) e ocorrência de eventos adversos (p= 0,618). Conclusão: A combinação da amamentação no contato pele a pele apresentou efeito analgésico superior à oferta oral de glicose 25% com o RN no colo materno, como resposta dolorosa do RN à vacina de BCG e que apresenta segurança para ser indicada, como intervenção analgésica na prática clínica. / Introduction: Pain management in infant newborns is necessary, given the continuous and repeated exposure to pain can have negative consequences for the child\'s development. There is robust evidence of the analgesic effect and safety of administering oral sweetened solutions to newborns undergoing acute painful procedures. Breastfeeding and the skin-to-skin care are routine clinical practices, with low cost, and the Baby-Friendly Hospital Initiative recommends them. There is evidence of both practices regarding their analgesic effectiveness, which can be adopted as an alternative treatment to sweetened solutions. However, it is necessary to assess whether the analgesic effect and safety of these measures outweigh sweetened solutions in the administration of vaccines, before recommending its adoption. Hypothesis: The analgesic effect of combining breastfeeding plus skin-to-skin contact is superior to the taste of 25% glucose in the BCG vaccination in infant newborns. Objective: To evaluate the analgesic effect of combining breastfeeding plus skin-to-skin contact in the BCG vaccination in term infant newborns. Methods: A randomized clinical trial conducted at the University of São Paulo Teaching Hospital certified as a Baby-Friendly Hospital from August to September 2015. This study was performed on 109 healthy term infants who were born during the study, admitted at a rooming-in ward. The sample was randomized and infants were allocated in Experimental Group (GE breastfeeding plus skin-to-skin contact which begun 5 minutes prior to the administration of BCG vaccine) or Control Group (CG taste of 2 mL 25% glucose administered 2 minutes prior the BCG vaccination with the mother holding her baby upright on her lap). The primary outcome analyzed was the pain score assessed by the Premature Infant Pain Profile - Revised (PIPP-R). The pain score was assessed in six intervals of 30 seconds (30th, 60th, 90th, 120th, 150th and 180th) after the BCG vaccine administration. The secondary outcomes were: physiological parameters heart rate (HR) and oxygen saturation (O2Sat), and changes in facial expression brow bulging, eyes squeezed and nasolabial furrow, crying duration and adverse events. Data was obtained from video records of the newborn facial expressions and HR and O2Sat of multiparametric monitor display. Data was extracted from the video records after being analyzed throughout every second. Data was stored in the Microsoft Excel spreadsheet. Statistical analysis was performed by statistical package SPSS 20. To analyze the homogeneity of the sample, chi-square test or Fisher\'s exact was performed for qualitative variables, to compare the means of quantitative variables, paired t-test was used. Quantitative variables of repeated measures, as HR and O2Sat were analyzed with Mixed Model Analysis and repeated measurements of PIPP-R scores were analyzed by ANOVA (General Linear Model). The ethics committee of the School of Nursing and University Hospital, both from the University of São Paulo, approved the research project. The research project is registered at the Brazilian Registry of Clinical Trials. Results: The distribution of gender, twin pregnancy, mode of delivery, Apgar, weight, gestational age, number of previous painful procedures and time since last feeding showed homogeneous distribution between the Experimental and Control groups. Pain scores were lower in the EG (p = 0.002). There were no statistically significant differences in relation to the crying duration (p = 0.745) and adverse events (p = 0.618). Conclusion: The combination of breastfeeding plus skin-to-skin contact showed superior analgesic effect regarding the comparative intervention of oral 25% glucose with infant positioned vertically in mothers lap and it is safe to be prescribed as an analgesic treatment in clinical practice.

Desde o plano real, em 1994, com a estabilização da moeda e maior facilidade ao crédito, verifica-se o aumento do consumo da população de baixa renda em vários setores do mercado. Além do preço mais baixo, fator indispensável para atender a essa camada da população, discute-se quais são e como são planejadas as estratégias de marketing e comunicação utilizadas pelas empresas que atuam no mercado popular. Nesse contexto, esta pesquisa tem como objetivo geral desenvolver modelos de análise integrada para a definição de estratégias de marketing e comunicação de produtos eletroeletrônicos populares. Para alcançar o objetivo proposto, o estudo utilizou o método exploratório por meio dos seguintes procedimentos: pesquisa bibliográfica em livros, dissertações, teses, revistas, jornais, sites e pesquisa empírica, que foi conduzida em duas fases combinando as abordagens qualitativa (primeira fase) e quantitativa (segunda fase). A população estudada foi composta por executivos das áreas de marketing e comunicação de empresas do setor eletroeletrônico associadas à ELETROS (Associação Nacional dos Fabricantes de Produtos Eletroeletrônicos). O subsídio teórico da análise da pesquisa consistiu na definição de produto popular e população de baixa renda; na análise do consumidor de baixa renda; no estudo das estratégias de marketing e comunicação; no tema da construção de marca; na abordagem dos modelos de análise BCG, GE e SWOT; por fim, na análise das diversas configurações de negócio que poderiam ser adotadas pelas empresas pesquisadas. Os resultados mostraram que as empresas estudadas utilizam principalmente a análise SWOT e as pesquisas de mercado para elaborar a sua estratégia de marketing e comunicação. Porém esse planejamento não é específico para produtos populares. De forma geral, ele se concentra no produto, e, em segundo lugar, com a mesma relevância, em preço e análise do mercado. A partir disso, foram elaborados modelos de análise integrada para a definição de estratégias de marketing e comunicação de produtos eletroeletrônicos populares. / Since the Real Plan was introduced in 1994, bringing with it a stable currency and easier credit, there has been a noted increase in spending among members of the lower-income population in various market sectors. In addition to lower prices, an indispensable factor when targeting this section of the population, there is discussion of marketing and communication strategies used by companies operating in the lowend market and how they plan such strategies. Within this context, the overall objective of this study is to develop integrated analysis models for defining marketing and communication strategies for low-end household appliances and electronics. An exploratory approach was taken in this study, comprising a study of the literature (books, dissertations, theses, magazines, newspapers, and websites) and two phases of empirical research: first qualitative, then quantitative. The study group comprised marketing and communications executives at companies affiliated with Eletros (National Association of Appliance and Electronic Product Manufacturers). The theoretical component of the study involved defining low-end products and the low-income population, and analysing low-income consumers, marketing and communication strategies, brand building, the use of BCG, GE and SWOT analyses, and different business models that could be adopted by the companies studied. Results showed that companies mostly used SWOT analyses and market surveys when planning marketing and communication strategies. However, this planning isnt specific for low-end products. In general, they concentrate on the product, and in second place (with the same relevance), on price and market analyses. Based on these findings, integrated analysis methods were designed for use when planning marketing and communication strategies for low-end household appliances and electronics.

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The animals were divided in two groups: six calves from Curraleiro breed and six calves from Nelore breed. Each group was further divided in: immunized group which received the BCG vaccine and a control which received the adjuvant. The data were submitted to descriptive statistics and then to the Kruskall Wallis and Mann-Whitney tests. It was realized hemogram, total protein, albumin, globulin eletroforesis of serological protein, ELISA for M. bovis IgG and IgM levels. The results were grouped and Curraleiro and Nelore calves were compared, the Curraleiro breed exhibited larger numbers of leucocytes, neutrophils, lymphocytes and monocytes; higher proteins and globulins levels; and higher concentration of alfa-1, beta and gama globins fraction. So, considered the vaccination to BCG, the Curraleiro calves were more levels in produce specifics M. bovis IgM and IgG. Between the immunized groups, Curraleiro group immunized presented better performance than Curraleiro control group, Nelore group immunized and lastly Nelore control group. Concluded that Curraleiro breed compared to Nelore breed exhibited unspecific and specific humoral immune response more productive qualified for bigger numbers of leucocytes and higher concentration of unspecific and specific immunoglobulin. / A raça Curraleiro foi formada em regime de criação extensiva na região do cerrado, com mínimos cuidados sanitários e de alimentação, resultando em animais rústicos, que constituem um importante recurso genético para a pecuária brasileira. Com o objetivo de ampliar os conhecimentos sobre aspectos imunológicos dessa raça, foi realizado o estudo comparativo entre bovinos da raça Curraleiro e Nelore após vacinação com Mycobacterium bovis - BCG. Para tanto se quantificou a produção de anticorpos IgM e IgG específicos para Mycobacterium bovis, por meio do teste de ELISA indireto método in house. Utilizou-se 12 bezerros de propriedades do Estado de Goiás, seis de cada raça com idade aproximada de seis meses. Os bezerros de cada raça foram subdivididos em outros dois grupos, o grupo vacinado recebeu Mycobacterium bovis BCG via intradermica. Inicialmente os dados foram submetidos à estatística descritiva e posteriormente aos testes de Kruskall Wallis e Mann- Whitney. Para o protocolo de avaliação realizaram-se os seguintes exames: hemograma, quantificação de proteína total, albumina, globulina, eletroforese das proteínas séricas, IgG e IgM M. bovis específicas. Agrupando os resultados de todas as colheitas, observou-se que os bezerros da raça Curraleiro quando comparados aos bezerros Nelore, apresentaram maiores contagem total de leucócitos, segmentados, linfócitos e monócitos; concentrações mais elevadas de proteínas e globulinas séricas; das frações alfa-1, beta e gama globulinas. Considerando especificamente a vacinação com Mycobacterium bovis - BCG, os bezerros Curraleiro produziram maiores quantidades de IgM e IgG M. bovis específicas quando comparados aos bezerros Nelore. Entre os grupos vacinados o que apresentou maiores valores foi o grupo Curraleiro vacinado, seguido pelo grupo Curraleiro controle, posteriormente grupo Nelore vacinado e por fim o grupo Nelore controle, com as menores concentrações. Conclui-se que bovinos da raça Curraleiro quando comparados aos da raça Nelore apresentam resposta imunológica inespecífica e específica humoral maiores, caracterizada por maior número de leucócitos e maiores concentrações de imunoglobulinas IgM e IgG M. bovis específicas.

O desenvolvimento de vacinas multivalente constitui urna das prioridades na pesquisa de vacinas modernas. A utilização de vetores vivos para apresentação de antígenos heterólogos mostra-se bastante atraente, e eliminaria a necessidade de várias doses para se alcançar uma proteção máxima. Este tipo de vacina poderia ser administrado em dose única, o que poderia aumentar a cobertura vacinal. Neste trabalho foi explorado o potencial do Mycobacterium bovis BCG recombinante (rBCG) vivo expressando antígenos de Bordetella pertussis, como futuro componente de urna vacina tetravalente rBCG-DTP contra a tuberculose, tétano, difteria e pertussis. Os antígenos de pertussis utilizados foram a subunidade S1 mutada e atóxica da Toxina Pertussis (SI-P1) e o fragmento CRD, um domínio imunogênico da proteína FHA (Adesina Hemaglutinina Filamentosa). PT é o principal fator de virulência de B. pertussis e tanto sozinho como combinado com outros antígenos é o principal componente de todas as vacinas acelulares desenvolvidas até o momento. FHA é um importante fator de aderência da bactéria às células ciliada alvo do hospedeiro, sendo o CRD (domínio de reconhecimento a carboidrato) o responsável pelo reconhecimento de carboidratos em receptores de células do hospedeiro. Os genes detses antígenos foram clonados em vetores de expressão micobacterianos e expressos em BCG sob o controle do promotor mutado da β-lactamase de Mycobacterium fortuitum, pBlaF*, em fusão com o peptídeo sinal da β-lactamase. Estes vetores possuem como marcador de seleção um gene de resistência a kanamicina. Camundongos foram imunizados com rBCG expressando S1-PT e os respectivos esplenócitos mostraram elevada produção de IFN-γ e baixa produção de IL-4, caracterizando uma forte resposta celular Th1 antígeno-específica dominante. rBCG-S1PT induziu uma baixa resposta humoral contra PT. Camundongos imunizados com rBCG-S1PT mostraram elevado nível de proteção contra um desafio intracerebral com uma cepa virulenta de B. pertussis. Animais imunizados com rBCG expressando CRD revelaram a presença de anticorpos anti-FHA no soro. Ensaios com camundongos imunizados com a combinação destas duas vacinas estão sendo realizados. Uma nova abordagem para obtenção de rBCG sem o uso de genes de resistência a antibióticos como marcador de seleção, foi investigada, utilizando a complementação em BCG auxotrófico. Uma cepa de rBCG auxotrófico para lisina foi transformada com vetores de expressão contendo o gene de complementação para lisina e os antígenos de pertussis sob controle do mesmo promotor: a seleção dos recombinantes é realizada em meio sem lisina. Estas construções permitiram a expressão estável dos antígenos e serão avaliadas quanto a indução de uma resposta imunológica efetiva contra pertussis. / The development of combined vaccines constitutes one of the priorities in modem vaccine research. The use of live vectors for heterologous antigen presentation is desirable, as it could eliminate the necessity of several doses to reach a maximum protection and increase vaccine coverage. In this work, the potential of recombinant Mycobacterium bovis BCG (Bacillus Calmette and Guerin) (rBCG), expressing Bordetella pertussis antigens was investigated. The antigens used were the genetically detoxified S1 subunít of pertussis toxin (S1-PT) and the CRD fragment of FHA (Filamentous hemagglutinin. The antigen genes were cloned into mycobacterial expression vectors under control of the upregulated M. fortuitum β-lactamase promoter, pBlaF*, in fusion with the β-lactamase signal sequence. Mice were immunized with rBCG expressing S1-PT and the respective splenocytes induced specific production of INF-γ and low IL-4, characterizing a strong antigen-specific Th1-dominant cellular response. The rSCG-S1 PT induced a low humoral response against PT. Mice immunized with rSCG-S1 PT strains displayed high-level of protection against an intracerebral challenge with live B. pertussis. Animals immunized with rBCG expressing CRD induced anti-FHA antibodies production. Protection induced by the combination of these two strains is being evaluated. A new approach for production of rBCG without the use of antibiotic resistance markers was also investigated, using complementation in auxotrophic BCG. A lysine auxotrophic rSCG strain was transformed with expression vectors containing the complementation gene for lysine and the pertussis antigens: selection of recombinant clones was carried in media without lysine. These constructs allowed steady expression of the antigens and will be evaluated for the induction of an immunological response against pertussis. These strains would be appropriate for clinical evaluation in humans.