Made available in DSpace on 2014-05-17T02:00:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000458042-Texto+Completo-0.pdf: 2649672 bytes, checksum: a59591c4a1fe4e945b26d110c1c85f97 (MD5) Previous issue date: 2014 / Background: During critical illness and sepsis there is severe antioxidant depletion, and this scenario raises the critical ill patient’s mortality risk. Glutathione peroxidase (GPx) is one of the first endogenous antioxidant defense enzymes, and it works cooperatively with superoxide dismutase (SOD) and cathalase (CAT) to detoxify free radicals from the cellular environment. Genetic studies are important to understand the complexity of human oxidative stress and how the organism responds to an extreme situation such as critically care conditions. Previous studies with a GPx1 single nucleotide polymorphism (593C>T SNP; rs1050450; protein variant in GPx1: Pro198Leu) showed 593T carriers and 593TT homozygotes present higher risk to develop different diseases. Objective: We assessed the relationship of the genotype distribution of GPx1 SNP in critically ill patients with their conditions (organ dysfunction, sepsis, and septic shock) and their outcome. Results: We monitored 626 critically ill patients daily from the ICU (intensive care unit) admission to their discharge from hospital, or death. Our study revealed a significant association between 593TT GPx1 genotype and mortality; the mortality rate was higher in homozygous 593TT GPx1 (N = 94) when compared with the group of subjects with genotypes 593CT or 593CC GPx1 (N = 532) (52% versus 38%, P = 0. 009; OR = 1. 79; 95% CI = 1. 13-2. 85). Evaluating the subgroup of 293 ICU patients with sepsis, a pooled analysis including two genetic variants GPx1 and SOD2 (47C> T SNP, rs4880; protein variant in MnSOD: Ala-9Val) showed a significant difference in relation to progression to septic shock. The frequency of septic shock among septic patients with 593T GPx1 and 47C SOD2 alleles (N = 122) was higher when compared with septic patients carrying other settings of genotypes (N = 174) (78% versus 66%; P = 0. 028; OR = 1. 81; 95% CI = 1. 03-3. 18). Accepting the previously reported functional effects of these two SNPs on GPx1 and SOD2 gene expressions and, consequently, on GPx1 and MnSOD enzyme actvities, we believe our results may be considered as an important contribution for the understanding of oxidative imbalance during the critical ill. / Contexto: Durante a doença crítica e sepse há depleção grave de antioxidantes, e esse cenário aumenta o risco de mortalidade do paciente criticamente doente. Glutationa peroxidase (GPx) é uma das primeiras enzimas de defesa antioxidantes endógenas que, agindo em cooperação sinérgica com a superóxido dismutase (SOD) e a catalase (CAT), desintoxica radicais livres no ambiente celular. Os estudos genéticos são importantes para compreender a complexidade do estresse oxidativo humano e como o organismo responde a situações extremas, como no caso das situações críticas de saúde. Estudos anteriores com uma variante SNP (single nucleotide polymorphism) no interior do gene GPx1 (593C>T SNP; rs1050450; variante proteica na GPx1: Pro198Leu) mostraram que os portadores do alelo 593T e os homozigotos 593TT apresentam maior risco de desenvolver quadros patológicos graves. Objetivo: avaliar a relação da distribuição dos genótipos do SNP 593C>T GPx1 em pacientes criticamente doentes buscando associações com seus quadros de gravidade (disfunções orgânicas, sepse e choque séptico) e desfecho (mortalidade), durante o período de sua internação na unidade de terapia intensiva (UTI).Resultados: Foram monitorados diariamente 626 pacientes criticamente doentes desde a sua admissão na UTI até sua alta hospitalar ou óbito. Foi identificada uma associação significativa entre o genótipo 593TT GPx1 e a mortalidade: a taxa de mortalidade foi superior em homozigotos 593TT GPx1 (N = 94) quando comparados com o grupo de indivíduos com genótipos 593CT ou 593CC GPx1 (N = 532) (52% versus 38%, P = 0. 009; OR = 1. 79; 95% CI = 1. 13-2. 85). Avaliando o subgrupo de pacientes críticos com sepse, uma análise conjunta incluindo duas variantes genéticas GPx1 e SOD2 (47C>T SNP; rs4880; variante proteica na MnSOD: Ala-9Val) mostrou diferença significativa em relação a evolução para choque séptico. A frequência de choque séptico entre pacientes sépticos com alelos 593T GPx1 e 47C SOD2 (N = 122) foi superior quando comparado com pacientes sépticos com outras configurações de genótipos (N = 174) (78% versus 66%; P = 0. 028; OR = 1. 81; 95% CI = 1. 03-3. 18). Aceitando que os efeitos funcionais causados pelas variantes genéticas 593C>T GPx1 e 47C>T SOD2 em seus genes e nas enzimas GPx1 e MnSOD, respectivamente, afetam diretamente o balanço oxidativo celular, acreditamos que o resultado do presente estudo pode ser considerado como uma contribuição importante para a compreensão do estresse oxidativo no paciente criticamente doente.

Made available in DSpace on 2014-05-21T02:01:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000458139-Texto+Completo-0.pdf: 1285140 bytes, checksum: 007aa44c0f4f5b63ed16f382d6a0b0a9 (MD5) Previous issue date: 2014 / Persistence is an antimicrobial tolerance phenotype with an unclear molecular background. Such tolerant cells (called persisters) correspond to small portions of the bacterial population and are capable of surviving excessive concentrations of the drug, even though they do not possess any specific resistance mechanism. The clinical impact of persisters lies on their capacity to resume multiplication and reestablish the infection after the concentration of the drug diminishes in the infection site, possibly being responsible for the re-incidence and for the chronic aspect of certain infectious diseases. This survival phenotype has been observed in several species; however reports involving A. baumannii are scarce. Therefore, this work aimed to evaluate the persistence phenotype to antimicrobial drugs in nosocomial isolates of A. baumannii, as well as verifying the possible contribution of the sodB gene, which is involved in the control of oxidative stress, and the pmrC gene, a determinant of polymyxins resistance, in persister cells formed upon polymyxin B exposure. In order to do so, clinical isolates of A. baumannii were exposed to high concentration of tobramycin and polymyxin B for 6 h and the number of surviving cells were estimated every 1. 5 h. In addition, the gene expressions at transcription level of two isolates were evaluated after the exposure to polymyxin B for 5 h. A high heterogeneity in the ability to form persister cells was observed among the isolates, presenting no correlation between the fractions of persisters after tobramycin and polymyxin B treatments. These data may indicate genetic or epigenetic variations that are determinant to the development of this characteristic, and that are not related among drugs of different classes. Moreover, the preliminary results of the gene expression assays may suggest that the mechanism involved in the polymyxin B resistance phenotype does not directly participate in persistence to polymyxin B, nor indicate the participation of sodB in this phenotype. In conclusion, the molecular mechanisms for persistence are still to be determined, and this characterization is highly important to assist in the development of new therapeutic options. / A persistência é um fenótipo de tolerância a fármacos antimicrobianos com bases moleculares pouco entendidas. Tais células tolerantes (chamadas de persisters) correspondem a pequenas parcelas da população bacteriana e são capazes de sobreviver a concentrações elevadas do fármaco, mesmo sem possuir mecanismos de resistência específicos. O impacto clínico das células persisters se dá pela capacidade destas células de retomar seu crescimento e restabelecer a infecção após os níveis do fármaco diminuírem no sítio da infecção, podendo ser responsáveis pela reincidência e pelo aspecto crônico de certas doenças infecciosas. Este fenótipo de sobrevivência já foi observado em inúmeras espécies, porém relatos envolvendo o A. baumannii são escassos. Portanto, este trabalho teve por objetivo avaliar o fenótipo de persistência a drogas antimicrobianas em isolados nosocomiais de A. baumannii, bem como verificar a possível participação do gene sodB envolvido no controle do estresse oxidativo e do gene pmrC, determinante de resistência às polimixinas, em células persisters formadas a partir da exposição à polimixina B. Para tal, isolados clínicos de A. baumannii foram expostos a concentrações elevadas de tobramicina e polimixina B por 6 h e o número de células sobreviventes foi averiguado em intervalos de 1,5 h. Além disso, as expressões gênicas a nível de transcrição de dois isolados foram avaliadas após a exposição à polimixina B por 5 h. Uma grande heterogeneidade na capacidade de formação de células persisters foi observada dentre os isolados, não havendo correlação entre a fração de persisters após o tratamento com tobramicina e polimixina B. Estes dados podem indicar variações genéticas ou epigenéticas determinantes para o desenvolvimento desta característica, as quais não são relacionadas entre drogas de diferentes classes. Além disso, os resultados preliminares dos ensaios de expressão gênica podem sugerir que o mecanismo de resistência às polimixinas não participa diretamente na persistência à polimixina B, e que não há a participação de sodB no desenvolvimento e manutenção deste fenótipo nas condições testadas. O estudo desta característica e de seus determinantes moleculares são de suma importância para o desenvolvimento de novas opções terapêuticas.

Made available in DSpace on 2014-07-11T02:02:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000459166-Texto+Completo-0.pdf: 2547388 bytes, checksum: 27814fb2b5f7b670424cdc2d80523d6f (MD5) Previous issue date: 2014 / Disturbances in glutamatergic signaling have been proposed as the cause of many diseases of the nervous system. The zebrafish has been considered as an efficient model in the investigation of the neurochemical basis of various disorders, such as schizophrenia and epilepsy. Several neurotransmitter systems have been characterized in zebrafish, including the glutamatergic system. Moreover, a vast repertoire of behavioral responses to drugs has been characterized in particular in adults. However, little information is available about the ability to generate response to classic drugs of glutamatergic action in the early stages of development in zebrafish.Throughout development, ionotropic glutamate receptors have an orderly variability between the subunits that compose them, giving them different pharmacokinetic properties and degree of affinity for their ligands. In this way, we analyzed the locomotor/behavioral profile of zebrafish in response to the glutamate receptor antagonist, MK-801, in different doses in 30, 60, 120 days post-fertilization (dpf) and 2 years post-fertilization animals, as well the effect of caffeine pre-exposure on MK-801 action. Additionally, we analyzed the expression profile of subunits that comprise the NMDA receptor in whole brain of zebrafish during development. Locomotor/behavioral response to kainic acid (KA) was evaluated in different doses at ages 7, 15 and 30 dpf.Also, the pre-exposure to kainic acid in 24 hours post-fertilization (hpf) and 7 and 15 dpf animals was challenged by a second exposure to kainic acid at 2 months post-fertilization The results demonstrated that zebrafish has an age-dependent response to MK-801 and kainic acid, at least on the locomotor/behavior aspects. The peak of locomotor response to MK-801 occurred at 60-120 days post-fertilization, which was partially prevented by caffeine and able to alter the time on upper zone of aquarium as a measure of anxiety. Analysis of gene expression of NMDA receptor subunits in zebrafish brain demonstrated that NR2C and NR2D subunits have later expression in comparison to subunits NR1, NR2A and NR2B. The animals that were exposed to KA showed alterations in locomotor activity without displaying classic convulsive characteristics. However, pre- exposure to 7dpf KA was able to partially prevent the seizure events in response to KA injection (6 mg / K) at 2 months post- fertilization. / Distúrbios na sinalização glutamatérgica são propostos como a causa de inúmeras patologias do sistema nervoso. O peixe-zebra tem sido considerado um eficiente modelo na investigação das bases neuroquímicas de diversos transtornos, tais como a esquizofrenia e a epilepsia. Diversos sistemas de neurotransmissão já foram caracterizados em peixe-zebra, incluindo o sistema glutamatérgico. Além disto, um vasto repertório de respostas comportamentais a fármacos já foram caracterizados em especial em indivíduos adultos. Entretanto, pouca informação é disponível a cerca da capacidade de gerar resposta a clássicas drogas de ação glutamatérgica em fases iniciais do desenvolvimento em peixe-zebra. Ao longo do desenvolvimento, os receptores glutamatérgicos apresentam uma ordenada variabilidade entre as subunidades que os compõem, o que lhes confere diferentes propriedades farmacocinéticas e grau de afinidade por seus ligantes.Desta forma, neste trabalho foi analisado o perfil de resposta locomotora/comportamental do peixe-zebra ao antagonista glutamatérgico MK-801 em diferentes doses nas idades de 30, 60, 120 dias pós-fertilização (dpf) e 2 anos pós-fertilização(apf), bem como o efeito da pré-exposição à cafeína sobre os efeitos do MK-801. Adicionalmente, foi analisado o perfil de expressão das subunidades que compõem o receptor NMDA em cérebro total de peixe-zebra ao longo do desenvolvimento. A resposta locomotora ao ácido caínico (KA) também foi avaliada em diferentes doses nas idades de 7, 15 e 30 dpf. A pré-exposição ao ácido caínico em animais de 24 horas pós-fertilização (hpf) e 7 e 15 dpf foi confrontada pela exposição ao ácido caínico aos 2 meses de vida do peixe-zebra. Os resultados encontrados neste trabalho demonstram haver uma resposta idade-dependente na atividade locomotora do peixe-zebra, tanto para MK-801 quanto para ácido caínico.O pico de resposta locomotora ao MK-801 foi entre 60 e 120 dpf, o qual foi parcialmente prevenido pela pré-exposição à cafeína e foi capaz de alterar de forma idade-dependente o tempo no topo do aquário, utilizado como uma medida de ansiedade. A análise de expressão das subunidades dos receptores NMDA em cérebro de peixe-zebra demonstrou que as subunidades NR2C e NR2D possuem expressão tardia em relação às subunidades NR1, NR2A e NR2B. Os animais que foram expostos ao KA apresentaram alteração na atividade locomotora sem exibir características convulsivas clássicas. Entretanto, a pré-exposição ao KA aos 7dpf foi capaz de prevenir parcialmente os eventos convulsivos em resposta à injeção de KA (6 mg/Kg, i. p) aos 2 meses pós-fertilização.

Made available in DSpace on 2014-07-19T02:02:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000459268-Texto+Completo-0.pdf: 1089012 bytes, checksum: 3e3bbefbe5c53d842c73d0dec81136ac (MD5) Previous issue date: 2014 / Hepatocellular Carcinoma is the most prevalent primary tiver tumor and is among the top ten cancers that affect the world population. lts development is related, in most cases, the existente of chronic tiver injury, such as occurs in cirrhosis. Current curative therapies are only surgical resection, transplantation and percutaneous ablation, however with the possibility of recurrence. In this context, the search for new therapies for the disease becomes an interesting field for research. The knowledge about the correlation between chronic inflammation and cancer has driven new researches with anti-inflammatory agents that have potential for the development of antitumor drugs. Gallic acid is a polyphenol found in many natural products and have shown anti-inflammatory activity, anti-tumor, antimutagenic and strong antioxidant action. The purpose of this study was to investigate the effect of gallic acid on cell proliferation and inflammatory parameters of tiver carcinoma cells (HepG2), as well as to investigated the mechanisms involved. Cell viability was evaluated through MTT colorimetric assay and Trypan blue exclusion. Results showed that the gallic acid decreased proliferation of HepG2 celis in a dose and time dependent manner, without causing necrosis (LDH assay). We observed significant induction of apoptosis by PE Annexin V and 7-AAD assay and no interferente with the cell cycle using the FITC BrdU Flow Kit. The leveis of inflammatory mediators were measured by Cytometric Bead Array Human Inflammation Assay and observed a significant reduction in the leveis of interleukin-8 (pro-inflammatory and related to angiogenesis, invasiveness and metastasis) and increased leveis of interleukin-10 (anti-inflammatory and related to the induction of programmed cell death) and interleukin-12 (antiangiogenic and antimetastatic). We also evaluated the leveis of TGF by ELISA (Enzyme-Linked lmmunosorbent Assay) and no significant differences. According to these results, we believe that gallic acid has a strong potential as an anti-tumor agent. / O Carcinoma Hepatocelular é o tumor hepático primário mais prevalente e está entre as dez principais neoplasias que afetam a população mundial. O seu desenvolvimento está relacionado, na maioria das vezes, a uma lesão hepática crônica, como ocorre na cirrose. As terapias consideradas curativas atualmente são somente a ressecção cirúrgica, o transplante e a ablação percutânea, ainda com possibilidade de recidiva. Nesse contexto, a busca por novas alternativas terapêuticas para a doença torna-se um campo de pesquisa em expansão. O conhecimento sobre a correlação entre a inflamação crônica e cãncer tem impulsionado novas pesquisas com agentes anti-inflamatórios que apresentem potencial para o desenvolvimento de drogas antitumorais. O ácido gálico é um polifenol encontrado em vários produtos naturais, o qual tem apresentado atividade anti-inflamatória, antitumoral, antimutagênica e forte ação antioxidante. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito do ácido gálico sobre a proliferação celular e parâmetros inflamatórios das células de carcinoma hepático (HepG2), assim como investigar os mecanismos envolvidos.A viabilidade celular foi avaliada através do ensaio colorimétrico MTT e contagem celular por exclusão com Azul de Trypan. Os resultados mostraram que o ácido gálico reduziu a proliferação celular de maneira dose e tempo dependente, sem causar necrose (ensaio LDH). Observamos indução significante da apoptose através do ensaio PE Annexin V and 7-AAD e nenhuma interferência no ciclo celular utilizando o kit FITC BrdU Flow. Os níveis de mediadores inflamatórios foram medidos utilizando o kit Cytometric Bead Array Human Inflammation. Observamos redução significante nos níveis da interleucina 8 (pró-inflamatória e relacionada à angiogênese, invasividade e metástases), aumento dos níveis de interleucina 10 (anti-inflamatória e relacionada à morte celular programada) e aumento dos níveis de interleucina 12 (antiangiogênica e antimetastática). Nós também avaliamos os níveis de TGF(3 por ELISA (Enzyme¬Linked lmmunosorbent Assay) e não observamos diferenças significativas. A partir desses resultados, acreditamos que o ácido gálico tem forte potencial como agente antitumoral.

Made available in DSpace on 2014-08-13T02:01:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000460184-Texto+Completo-0.pdf: 1028375 bytes, checksum: 28478eee33cfe1af70ef0f52ca6b57b9 (MD5) Previous issue date: 2014 / Solanum tuberosum is one of the most important crops worldwide being the fourth most consumed food. Despite its importance, this crop presents a high susceptibility to a wide range of pathogens, leading to an extensive yield loss. A potential approach for disease control in potato is the understanding of the mechanisms of resistance induction and their relation to strengthening of natural plant defenses. In this work, the effect of defense inducers (XTH and Acibenzolar-S-methyl - Bion®) and ethylene blocker (aminoethoxyvinylglycine – AVG) in the plant metabolism was assessed. Biochemical markers for plant defense, such as POX and PPO enzymes, synthesis of phenolic compounds, flavonoid fraction and salicylic acid accumulation were also evaluated. Bion® resulted in a negative effect upon P. carotovorum inoculated plants, whilst XTH delayed disease progression. Plants cultivated in the presence of Bion+AVG showed an increase in PPO activity comparing to the control plants, although its activity was similar between XTH and Bion® plants. POX activity was promoted by Bion® at 24 hpi, however, at 72 hpi plants showed higher POX activity within XTH+AVG and Bion+AVG treated plants, compared with non-treated plants. In general, plants presented free SA levels 65% higher than conjugated one. The highest concentrations of SA (52. 2 μg/g) was found in Bion+AVG treated plants, whilst the lowest concentrations (4. 8 μg/g) were found in XTH and AVG treated plants. / A espécie Solanum tuberosum é uma das espécies vegetais de maior importância no mundo, sendo a batata o quarto alimento mais consumido. Porém, apesar do uso extensivo de pesticidas, esta cultura ainda é muito afetada por doenças, acarretando grandes perdas econômicas. Uma importante alternativa ao uso de químicos para o manejo das pragas, é o fortalecimento das defesas naturais da planta através da promoção de seus mecanismos de defesa. Neste trabalho foi avaliada a incidência da doença causada por Pectobacterium carotovorum e o metabolismo vegetal relacionados à defesa, tal como atividade das enzimas peroxidases (POX) e polifenoloxidases (PPO), síntese de compostos fenólicos, flavonoides e o acúmulo de ácido salicílico (AS) livre e conjugado. Foram utilizados os indutores de defesa XTH e o Bion®, bem como o bloqueador da síntese de etileno, AVG (aminoetoxivinilglicina), em plantas de batata cultivadas in vitro. O tratamento com Bion® não promoveu a resistência vegetal nas plantas inoculadas com P. carotovorum. Enquanto o uso do XTH foi eficiente na promoção de resistência das plantas, retardando o progresso da doença causada pela fitobactéria. Em plantas cultivadas na presença de Bion+AVG, foi observado um aumento na atividade de PPO em comparação com o controle, porém a atividade desta enzima é semelhante entre os tratamentos XTH e Bion®. Nas plantas do tratamento XTH+AVG a atividade da PPO se mantém semelhante às plantas do controle e do tratamento XTH. A atividade da POX foi promovida pelo tratamento Bion® em 24 horas pós-inoculação (hpi), enquanto que os tratamentos XTH+AVG e Bion+AVG induziram a maior atividade desta enzima em 72 hpi. Apesar das diferenças observadas nas atividades de PPO e POX, estas não apresentaram relação com a incidência da doença nas plantas. Em geral, os níveis de AS livre nos tecidos foi 65% maior que o AS conjugado. Em 24hpi, as plantas do tratamento Bion+AVG apresentaram os maiores níveis de AS livre (52,2 μg/g), enquanto os o tratamento XTH e AVG apresentaram os menores níveis de AS (4,87 e 4,82 μg/g, respectivamente).

Made available in DSpace on 2014-09-19T02:01:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000461390-Texto+Completo-0.pdf: 2830978 bytes, checksum: c3b746f15a8c1946dc08a31f60e01821 (MD5) Previous issue date: 2014 / Hereditary hemochromatosis (HH) is a genetic disease where iron balance is deregulated and this metal accumulates in the liver, causing toxic effects and fibrosis. Fibrosis is an exacerbated wound-healing response with extracellular matrix (ECM) deposition. Hepatic stellate cells (HSC), when activated, are the main responsible for ECM production. Fructose-1,6-bisphosphate (FBP) is a sugar and possess innumerous beneficial effects, like enhance cell antioxidant potential, protects liver from damage and reverts the phenotype of activated HSC. Because of this, we aimed to test the effects of FBP in immortalized HSC line (GRX) exposed to free iron (Fe) tempting to simulate what occurs in patients with HH. Fe (1mg/L) treatment for 8 days increased cell growth, whereas Fe + FBP (1mg/L + 0. 6mM) decreased cell proliferation to levels below of control. LDH activity, apoptosis rate and cell cycle were not altered in any group. Oil Red-O (ORO) staining showed a decrease in lipid content when GRX cells were Fe-treated (1mg/L) for 8 days.In Fe + FBP (1mg/L + 0. 6mM), GRX cells showed increased lipid content and characteristics of quiescent HSC. PPAR-? expression was diminished on Fe group and same as control on Fe + FBP group. On the contrary, Fe treatment rose Col-1 expression and Fe + FBP reversed it to control levels. TGF-ß1 was unaltered in Fe group. However, on Fe + FBP group, TGF-ß1 levelswas far bellow of control and Fe-treated group, showing an antifibrotic activity. FBP didn’t present antioxidant activity by DPPH assay. Ferrozine assay showed a decreased absorbance after 120 min in all FBP-tested doses, demonstrating that FBP is an iron chelator. These data demonstrate that FBP reverse the phenotype of GRX cells even when in Fepresence and that this could be caused by regulation of PPAR-? and COL-1. In conclusion, FBP diminished the growth rate and reversed the phenotype of GRX cell, showing a possible antifibrotic effect. / Hemocromatose hereditária (HH) é uma doença genética onde o balanço do ferro está desregulado e esse metal se acumula no fígado, causando efeitos tóxicos e, principalmente, fibrose. Fibrose é uma resposta de cicatrização exacerbada com depósito de matriz extracelular (ECM). Células estreladas hepáticas (HSC) quando ativadas são as maiores responsáveis pela produção de ECM. Frutose-1,6-bisfosfato (FBP) é um açúcar e possui inúmeros efeitos benéficos, como melhorar o potencial antioxidante da célula, proteger o fígado de lesão e reverter o fenótipo de HSC ativadas. Por causa disso, nosso objetivo foi testar os efeitos da FBP em uma linhagem imortalizada de HSC (GRX) expostas a ferro livre (Fe), na tentativa de simular o que ocorre em pacientes com HH. O tratamento com Fe (1mg/L) por 8 dias aumentou a proliferação celular enquanto o tratamento com Fe + FBP (1mg/L + 0. 6mM) a diminuiu para níveis menores que os do controle. A atividade da LDH, taxa de apoptose e ciclo celular não foi alterada em nenhum grupo.A coloração com OilRed-O (ORO) mostrou uma diminuição na quantidade de lipídio intracelular quando as células foram tratadas com Fe por 8 dias. No grupo Fe + FBP, houve um aumento do conteúdo lipídico e as células apresentaram características morfológicas de células quiescentes. A expressão de PPAR-? foi diminuída no grupo Fe e igual ao controle no grupo Fe + FBP. Ao contrário, o Fe aumentou os níveis de expressão de Colágeno tipo I (Col-1) e o tratamento concomitante com FBP reverteu esse efeito, ficando igual ao controle. A produção de TGF-ß1 se manteve inalterada no grupo Fe e foi menor que o controle no tratamento com Fe + FBP, mostrando uma atividade antifibrótica da FBP. O teste de DPPH mostrou que a FBP não possui atividade antioxidante em nenhuma dose testada. O teste de Ferrozine mostrou uma diminuição da absorbância depois de 120 minutos de incubação de FBP + Fe em todas as doses testadas, mostrando que a FBP é um quelante de ferro. Esses dados demonstram que FBP reverte o fenótipo das células GRX mesmo quando em presença do Fe e que isso pode ser causado pela regulação da expressão do PPAR-? e COL-1. Em conclusão, a FBP diminuiu o crescimentoe reverteu o fenótipo de células GRX, mostrando um possível efeito antifibrótico.

Made available in DSpace on 2014-10-24T01:01:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000462085-Texto+Completo-0.pdf: 1068489 bytes, checksum: 5d6806fb1169973228c8e48e31e91c88 (MD5) Previous issue date: 2014 / We have compared the behaviour and neurochemical effects of synthetic cathinones mephedrone and methedrone in mice, with attempts to evaluate some the mechanisms of action of methedrone, as well as the influence of nightclub-like stimulation on the behaviour. The effects of cathinone derivatives were examined in a series of behavioural tests in mice, and monoamine brain levels were determined by HPLC. Since there is a correlation between club parties and consume of recreational drugs, separated groups were pre-exposed to nightclub-like environment. Cathinone derivatives caused marked hyperlocomotion, allied to motor coordination inability, through 30 min after injection. Moreover, mephedrone caused anxiolytic-like effects, while methedrone induced anxiogenic actions. Both cathinone derivatives increased the latency in the hot-plate test, with a significant reduction of immobility time in tail suspension test. Mephedrone triggered 2- and 3-fold increase of dopamine and serotonin levels, respectively, in the nucleus accumbens, with 1. 5-fold elevation of dopamine contents in the frontal cortex. Methedrone caused a 2-fold increase of dopamine in the nucleus accumbens and striatum, and 1. 5-fold increase of serotonin levels in the hippocampus and striatum. Part of methedrone effects appear to be dependent on dopamine and serotonin modulation. Noteworthy, nightclub-like stimulation produced a further increase of latency to thermal stimulation, in both mephedrone and methedrone-treated mice. Mephedrone and methedrone induced a series of distinct behavioural changes likely by modulation of dopamine and serotonin systems. Curiously, increased latency to thermal stimulation elicited by cathinones was intensified by nightclub-like environment. / O presente estudo comparou os efeitos das catinonas sintéticas metiladas, mefedrona e metedrona, sobre diversos parâmetros comportamentais e bioquímicos em camundongos, além de avaliar alguns dos possíveis mecanismos relacionados com os efeitos in vivo da metedrona. Além disso, também foram analisados os efeitos da estimulação semelhante a nightclubs sobre os efeitos comportamentais das duas substâncias de abuso. Os efeitos das catinonas, mefedrona e metedrona, foram avaliados em diversos paradigmas comportamentais e, ainda, sobre os níveis cerebrais de monoaminas em camundongos, através de HPLC. Considerando a correlação entre nightclubs e o consumo de drogas recreacionais, alguns grupos experimentais foram pré-expostos a um ambiente com temperatura elevada, música eletrônica e luzes estroboscópicas, durante sete dias antes da administração das substâncias-teste, a fim de reproduzir o local de consumo das catinonas. Os derivados das catinonas, mefedrona e metedrona, causaram hiperlocomoção, associada com sinais de redução da coordenação motora, durante 30 min após os tratamentos. Além disso, a mefedrona causou efeitos ansiolíticos, enquanto a metedrona induziu comportamento ansiogênico. Ambos os derivados da catinona causaram um aumento da latência à estimulação térmica na placa-quente, acompanhado de redução marcante do tempo de imobilidade no teste de suspensão da cauda. A administração de mefedrona induziu um aumento rápido dos níveis de dopamina e serotonina no nucleus accumbens (2 e 3 vezes, respectivamente), com um aumento na dopamina de 1,5 vezes, no córtex frontal. Por outro lado, a metedrona causou uma elevação de duas vezes nos níveis de dopamina no nucleus accumbens e no estriado, além de um aumento de 1,5 vezes dos conteúdos de serotonina, no hipocampo e no estriado.A utilização de diferentes ferramentas farmacológicas demonstrou que parte dos efeitos da metedrona está relacionada com a modulação dos sistemas dopaminérgico e serotoninérgico. Finalmente, foi demonstrado que a estimulação ambiental do semelhante a nightclubs produziu um aumento dos efeitos analgésicos da mefedrona e da metedrona no teste de placa-quente. A mefedrona e a metedrona induziram uma série de alterações comportamentais, que foram semelhantes ou distintas, dependendo do paradigma experimental avaliado. Os efeitos destas catinonas sintéticas parecem estar diretamente relacionados com a modulação dopaminérgica e serotoninérgica. Curiosamente, o aumento da latência à estimulação térmica às catinonas foi potencializado pela ambientação tipo nightclub.

Made available in DSpace on 2014-11-01T01:01:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000462325-Texto+Completo-0.pdf: 1364561 bytes, checksum: 19bc55cdfda395e1b4a89ba3de34a12a (MD5) Previous issue date: 2014 / Esophageal cancer is the eighth most common cancer worldwide. The prognosis for this cancer is poor, generally, the overall survival rate is 10-15% with about five years of survival. Adenosine is present in different tissues of various organisms and plays an extremely important role in the purinergic system. Adenosine is produced directly or indirectly by ATP and its target P1 receptors which are G-protein coupled (A1, A2A, A2B and A3). Caffeine is a non-selective adenosine antagonist and has low affinity for A3 great affinity for A1, A2A and A2B. The objective of this study was to investigate the role of P1 purinergic receptors and the action of caffeine on the proliferation of squamous cell carcinoma of the esophagus, using the human lineage of squamous cell esophageal OE21.First we demonstrated that P1 receptors are expressed in the cell line by means of qRT-PCR and still A2A receptor expression was significantly reduced when these cells were treated with caffeine (100 μM). In addition to the caffeine treatment also decreases cell proliferation (1, 5 e 10 mM) and this effect was most likely a type of non-apoptotic cell death. Similarly, adenosine decreases cell viability (1, 5 and 10 mM) and proliferation (5 mM) via apoptosis and dipyridamole (10 μM) affect cell viability and did not alter the type of death caused. These results demonstrate the in vitro investigation of adenosine and caffeine in esophageal cancer receptors and this is a first step to understanding of purinergic signaling in esophageal cancer. / O câncer de esôfago é o oitavo câncer mais comum no mundo. O prognóstico para esse tipo de câncer é ruim, geralmente, a taxa de sobrevivência global é de 10-15% com cerca de cinco anos de sobrevida. A adenosina está presente em diferentes tecidos de vários organismos e tem um papel extremamente importante no sistema purinérgico. Ela é produzida direta ou indiretamente através do ATP e tem como alvo receptores purinérgicos P1 que são acoplados à proteína G (A1, A2A, A2B e A3). A cafeína é um antagonista não seletivo de adenosina e tem baixa afinidade pelos receptores A3 e grande afinidade pelos receptores A1, A2A e A2B. O objetivo deste trabalho foi investigar o papel dos receptores purinérgicos P1 e a ação da cafeína e da adenosina na proliferação de carcinoma de células escamosas de esôfago, utilizando a linhagem humana de carcinoma de células escamosas de esôfago OE21.Primeiro demonstramos que os receptores P1 estão expressos na linhagem celular através de qRT-PCR, e que a expressão do receptor A2A foi significativamente reduzida (p<0,05) quando essas células foram tratadas com cafeína (100 μM). Em adição o tratamento com a cafeína também diminui significativamente a viabilidade (1, 5 e 10 mM) das células e este efeito foi provavelmente um tipo de morte celular não-apoptótica. De modo semelhante, a adenosina diminui a viabilidade celular (1, 5 e 10 mM) e a proliferação (5 mM) através de apoptose, e o dipiridamol (10 μM) afetou a viabilidade celular e não alterou o tipo de morte causada. Estes resultados demonstram, através de investigação in vitro, a ação dos receptores P1 adenosina e da cafeína no câncer de esôfago e este é um primeiro passo para entender de sinalização purinérgica no câncer de esôfago.

Made available in DSpace on 2014-11-04T01:01:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000462324-Texto+Completo-0.pdf: 3205960 bytes, checksum: 9ae99a266b918522a991ea13e531b2fb (MD5) Previous issue date: 2014 / Schistosomiasis is endemic in 74 countries, affecting more than 200 million people. In Brazil, Schistosoma mansoni is the only causative agent of schistosomiasis, which affects 19 states. Control measurements and effective treatment can result in a decrease of the parasitic load of individuals with the severe form. In this matter, when diagnostic methods with adequate sensitivity for monitoring are not used, those measurements may difficult diagnosis, favoring the persistence of the infection for long periods, as well as the environmental contamination and consequently exposure to local population reinfection. In these areas, or where there was recent introduction of S. mansoni, classic parasitological methods to find eggs in feces are not efficient. Although immunological and molecular techniques are currently considered as main diagnostic tools, parasitological methods re necessary to confirm the infection. Helmintex™ has been recently described as highly sensitive diagnostic method that isolates eggs from 30 gram of feces through the interaction of eggs with paramagnetic microspheres in a magnetic field. Despite the sensibility, its limitation lies in the number of slides to be analyzed, making the process time consuming and not applicable for clinical routine. In this context, this work opens perspectives for the use of new tools in an attempt to optimize S. mansoni egg detection in the last step of the Helmintex™, using chemiluminescence, and ninhydrin staining. Another alternative tested was the ninhydrin staining. Helmintex™ sediments containing S. mansoni eggs were fixed with 70% ethanol and deposited on Whatman Grade 541 filter paper, immersed in a solution of ninhydrin:ethanol (30: 70 %) for later eggs visualization at the optical microscope. Reading time for each filter was counted and registered. Ideal conditions for incubation with ninhydrin were established in 15 minutes at 24 °C. Reading time for each sample was, in general, of 23 minutes. When compared to the original Helmintex™ method, the use of ninhydrin decreased the reading time of the final sediment in, at least, 450 minutes. The results of this work showed that the implementation of new tools in existent diagnostic methods may contribute to a better performance of sensitive techniques with limited application in field studies, and open perspectives to new studies that aim to investigate and to optimize primordial steps of concentration methods. / A esquistossomose é endêmica em 74 países, afetando mais de 200 milhões de pessoas. No Brasil, o Schistosoma mansoni é o único agente etiológico da esquistossomose, que atinge 19 estados. Medidas de controle e tratamento efetivo podem resultar em diminuição da carga parasitária de indivíduos com a forma severa da doença. Assim, quando não forem utilizados métodos diagnósticos com sensibilidade adequada para acompanhamento, essas medidas podem dificultar o diagnóstico, favorecendo a permanência da infecção por longos períodos, além da contaminação ambiental e consequentemente a exposição à população local à reinfecção. Nestas áreas, ou onde ocorreu introdução recente de S. mansoni, os métodos parasitológicos clássicos para encontrar ovos nas fezes não demonstram eficácia. Embora as técnicas imunológicas e moleculares sejam consideradas atualmente as principais ferramentas de diagnóstico, são necessários métodos parasitológicos para a confirmação da infecção. Recentemente, o Helmintex® foi descrito como um método diagnóstico altamente sensível que isola ovos a partir de 30 gramas de fezes através da interação dos ovos com microesferas paramagnéticos em um campo magnético. Apesar da sensibilidade, sua limitação está no número de lâminas a serem analisadas, tornando o processo demorado e inviável para aplicação na rotina clínica. Neste contexto, este trabalho abre perspectivas para a utilização de novas ferramentas na tentativa de otimizar a detecção de ovos de S. mansoni na última etapa do método Helmintex®, utilizando a quimioluminescência, e a coloração por ninidrina. Outra alternativa testada foi a coloração do sedimento final com ninidrina. Os sedimentos de Helmintex® contendo ovos de S. mansoni foram fixados com etanol 70 % e depositados em papel filtro Whatman Grau 541, imersos em uma solução de ninidrina:etanol (30:70%) para posterior visualização dos ovos corados em microscópio óptico. O tempo de leitura de cada filtro foi cronometrado. As condições ideais para incubação com a ninidrina foram estabelecidas em 15 minutos à 24 °C. O tempo de leitura para cada amostra foi, em média, de 23 minutos. Em comparação com o método Helmintex® original, a utilização de ninidrina diminuiu o tempo de leitura do sedimento final em, ao menos, 450 minutos. Os resultados deste trabalho mostraram que a implementação de novas ferramentas em métodos diagnósticos já existentes podem contribuir para um melhor desempenho de técnicas sensíveis, porém com aplicação limitada em estudos de campo, e abrem perspectivas para novos estudos que visam investigar e otimizar etapas primordiais de métodos de concentração.

Made available in DSpace on 2014-12-18T19:29:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000464249-Texto+Completo-0.pdf: 13663409 bytes, checksum: 370383758e5762e6645f52a510e7dfab (MD5) Previous issue date: 2014 / Lung cancer is the most commonly diagnosed type of cancer and the leading cause of cancer related mortality in the world, causing nearly one million deaths per year. Among all histological types, adenocarcinoma is the most frequent one (75-80%). Gastrin-releasing peptide (GRP) is considered to be a mitogen, capable of inducing cell proliferation, since it is involved in fetal lung development. This neuropeptide had its effect on tumor growth first identified in human cells of small cell lung cancer, acting as an autocrine growth factor for tumor tissues by binding to its receptor GRPR. The receptor has been found in many tumor types such as prostate, breast, stomach, pancreas and colon. Moreover, this peptide acts as a morphogen, in angiogenesis and is related to inflammatory processes and in the regulation of cells of the immune system. Furthermore, asymptomatic smokers have high levels of GRP in bronchoalveolar lavage and urine. However, little is known about its effects in tumorigenesis and metastasis, and which molecular mechanisms and signaling pathways are responsible for the effects found. Our group demonstrated recently that GRP could act as a chemotactic molecule for neutrophils. Thus, we hypothesized that GRP could be also a chemotactic stimulus to tumor cells expressing the GRPR. In this study, we tested this hypothesis by examining the effect of GRP on proliferation, survival and migration of cells from the adenocarcinoma cell line A549, seeking to identify the mechanisms of action of this peptide. These cells express high levels of GRPR and treatment with GRP leads to activation of kinases such as AKT and ERK1/2 that are involved in the cellular processes mentioned. Our results suggest that GRP is a migratory stimulus to these cells without evidence of significant effect on their proliferation or survival to treatment with the chemotherapy drug cisplatin (CDDP). Nonetheless, they become more sensitive to CDDP when the drug is combined with a GRPR antagonist. Thus, we believe that future studies should consider a possible role for GRP in metastasis of NSCLC. / O câncer de pulmão é o tipo de câncer que mais comumente diagnosticado e o que mais mata no mundo levando a quase 1 milhão de mortes por ano. Entre todos os tipos histológicos, o adenocarcinoma é o mais frequente (75-80%). O peptídeo liberador de gastrina (GRP) é considerado um agente mitogênico, capaz de induzir a proliferação celular, uma vez que está envolvido no desenvolvimento fetal dos pulmões. Este peptídeo teve sua ação sobre o crescimento tumoral primeiramente identificada em células humanas de câncer de pulmão de pequenas células, atuando como fator autócrino de crescimento de tecidos e tumores através da ligação ao seu receptor GRPR. Este receptor foi encontrado em diversos tipos de tumores como próstata, mama, estômago, pâncreas e cólon. Além disso, este peptídeo atua como um morfógeno, na angiogênese e, está relacionado a processos inflamatórios e na regulação de células do sistema imune. E, fumantes assintomáticos possuem altos níveis de GRP no lavado broncoalveolar e na urina. No entanto, pouco se conhece sobre os seus efeitos na tumorigênese e metástase e, quais os mecanismos moleculares e as vias de sinalização que são responsáveis pelos efeitos encontrados. Nosso grupo demonstrou, recentemente, que o GRP pode atuar como uma molécula quimiotática para neutrófilos. Desta forma, hipotetizamos que o GRP poderia constituir num estimulo quimiotático também para as células tumorais que expressão o GRPR. Neste trabalho, testamos essa hipótese, analisando o efeito do GRP sobre a proliferação, sobrevivência e migração de células da linhagem de adenocarcinoma A549, buscando identificar mecanismos de ação desse peptídeo. Esta linhagem expressa altos níveis de GRPR.O tratamento com GRP leva a ativação de quinases como a AKT e ERK1/2 que estão envolvidas nestes processos celulares. Nossos resultados sugerem que o GRP é principalmente um estímulo migratório para estas células, sem evidências de efeito significativo sobre a sua proliferação ou sobrevivência ao tratamento com a droga quimioterápica cisplatina, mas tornam-se mais sensíveis quando a droga é combinada com um antagonista do GRPR. Dessa forma, acreditamos que estudos futuros devam considerar um possível papel para o GRP na metástase.