Made available in DSpace on 2015-04-30T14:03:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000467154-Texto+Completo-0.pdf: 7061163 bytes, checksum: 094a6255137e152d52395cd63a9b0ee4 (MD5) Previous issue date: 2015 / Alzheimer disease (AD) and Parkinson disease (PD) are the two most common neurodegenerative disorders affecting around 35 and 10 million people worldwide, respectively. These disorders are characterized by neuronal protein deposits and progressive loss of function or structure of central nervous system (CNS). Studies have shown that purinergic system is involved in mechanisms associated with neurodegenerative diseases such as AD and PD. The purinergic signaling is meditated by ATP and adenosine through activation of purinoceptors P2 and P1, respectively. The nucleotide and nucleoside levels are modulated by the action of the ectonucleotidase family, especially by ecto-Nucleoside triphosphate diphosphohydrolases (NTPDases) and ecto-5´-nucleotidase (EC-5´-Nt). These enzymes hydrolyze ATP to adenosine, which is subsequently deaminated by the enzyme Adenosine Deaminase (ADA) to inosine. Adenosine is described as an important neuromodulator and neuroprotective of CNS, and its modulation has proven to be a promising alternative for the treatment of neurodegenerative diseases. Thus, this study aims to evaluate behavioral parameters in models of cognitive impairment induced by scopolamine, 6-hydroxydopamine, and paraquat in zebrafish and study the possible effect of these models on the purinergic system. Our results, using a model of pharmacological cognitive impairment induced by scopolamine in adult zebrafish, showed that selective and non-selective inhibitors of adenosine receptors (Caffeine, ZM241385, and DPCPX) prevented the cognitive deficit induced by scopolamine. The same results were found for the adenosine transporter inhibitor (dipyridamole), and ADA inhibitor (EHNA). These data support the hypothesis of adenosinergic signalling can modulate memory mechanisms. We also developed a new experimental model of neurodegeneration by treating adult zebrafish chronically with paraquat herbicide (Pq) that results in symptoms of PD. Treatment consisted of six ip. injections of Pq in doses of 10 or 20 mg/kg and each injection was administered every three days. Locomotor behavior was assessed 24 hours after each injection and showed a decrease in both doses. The turn angle was also evaluated and showed difference between the doses administered compared to control group. Non-motor behaviors such as anxiety and social interaction were not significantly different after chronic treatment with Pq. However, after Pq exposure, the animals showed a deficit in Y-maze task memory. Apart from the behavioral data, our results presented an increase on dopamine levels, whereas DOPAC decreased in the experimental group showing change in dopamine metabolism. The amount of tyrosine hydroxylase demonstrated no significant difference between control and treated fish; however, dopamine transporter expression decreased in the group treated with 10 mg/kg Pq, and there was no change at the highest dose. Our study also evaluated the effect of chronic exposure of Pq and 6-hydroxydopamine (6-OHDA) neurotoxins, commonly used as an animal model of PD, on extracellular nucleotide and nucleoside metabolism. Two doses of 6-OHDA were tested, 25 and 50 mg/kg, and the animals were sacrificed at six days after exposure. Our data showed no changes in ectonucleotidase activities or ATP, ADP and AMP levels after exposure to Pq. However, a decrease of extracellular adenosine and increase in inosine levels were observed when compared to the control group. The 6-OHDA treatment did not affect the activity of NTPDase, EC-5´-Nt, and ATP levels in both tested doses. In contrast to the previous results, ADP levels were different for each dose used, while the AMP levels decreased in both doses. The adenosine and inosine showed an increase in both doses of 6-OHDA tested in zebrafish brains. These data suggest that the purinergic system can be modulated differently in experimental animals with symptoms of Parkinson's disease. In addition, this study also presented a new model of neurodegeneration using the Pq and confirms the involvement of purinergic system on neurodegeneration as well as its pharmacological potential in neurodegenerative diseases. / As doenças neurodegenerativas mais prevalentes são a doença de Alzheimer (DA) e a doença de Parkinson (DP) afetando cerca de 35 e 10 milhões de pessoas no mundo, respectivamente. Essas patologias são caracterizadas pelo depósito de proteínas em células neuronais e pela perda progressiva da função ou estrutura no sistema nervoso central (SNC). Estudos têm mostrado que o sistema purinérgico está envolvido nos mecanismos relacionados a DA e DP. A sinalização purinérgica é mediada pela ação do ATP e da adenosina através da ativação dos receptores P2 e P1, respectivamente. Os níveis de nucleotídeos e de nucleosídeos são modulados pela ação enzimática das ectonucleotidases, especialmente pela ecto-nucleosídeo trifosfato difosfoidrolases (NTPDases) e ecto-5'-nucleotidase (EC-5´-Nt). Estas enzimas hidrolisam ATP em adenosina, que é subsequentemente desaminado pela enzima adenosina deaminase (ADA) a inosina. A adenosina é descrita como importante neuromodulador e neuroprotetor do SNC e sua modulação tem se mostrado uma alternativa promissora para o tratamento de doenças neurodegenerativas. Com isso, este estudo visa avaliar parâmetros comportamentais em modelos de déficit cognitivo induzidos por escopolamina, por 6-hidroxidopamina e por paraquat em peixe-zebra, e estudar o possível efeito desses modelos sobre o sistema purinérgico. Nossos resultados, utilizando o modelo farmacológico de déficit cognitivo induzido por escopolamina em peixe-zebra adulto, mostraram que os inibidores seletivos e não seletivos dos receptores de adenosina (Cafeína, ZM241385 e DPCPX) preveniram o déficit causado pela escopolamina. Os mesmos resultados foram encontrados para o inibidor do transportador de adenosina (dipiridamol) e inibidor da ADA (EHNA). Esses dados suportam a hipótese de que a sinalização adenosinérgica pode modular o processamento da memória. Nosso estudo também caracterizou um novo modelo experimental de neurodegeneração, tratando peixes-zebra adultos cronicamente com paraquat (Pq), herbicida associado aos sintomas da DP. O tratamento consistiu de seis injeções intraperitoniais nas doses de 10 ou 20 mg/kg a cada três dias. O comportamento locomotor foi avaliado 24 horas após cada injeção e mostrou uma diminuição em ambas as doses. O ângulo de giro também foi avaliado 24 horas após cada injeção e demonstrou diferença entre as doses administradas. Comportamentos não motores como ansiedade e interação social não apresentaram diferença significativa após o tratamento crônico com Pq. No entanto, os animais tratados com Pq demonstraram déficit de memória em tarefa de labirinto em Y comparados com o grupo controle. Além dos dados comportamentais, nossos resultados mostraram um aumento nos níveis de dopamina, enquanto os de DOPAC diminuíram nos animais tratados com Pq, mostrando mudança no metabolismo. Já a tirosina hidroxilase não apresentou diferença significativa entre animais do grupo controle e tratados, porém a expressão do transportador de dopamina diminuiu no grupo tratado com 10 mg/Kg de Pq, não havendo alteração na maior dose. Nosso estudo também investigou os efeitos da exposição crônica do Pq e da neurotoxina 6-hidroxidopamina (6-OHDA), comumente usada como modelo animal de DP, sobre o metabolismo extracelular de nucleosídeos e nucleotídeos. Duas doses de 6-OHDA foram testadas, 25 e 50 mg/kg, e os animais foram eutanasiados seis dias após a exposição. Nossos dados mostraram que o Pq não alterou a atividade das NTPDases e EC-5´-Nt ou os níveis extracelulares de ATP, ADP e AMP. No entanto, o tratamento crônico com Pq diminui os níveis extracelulares de adenosina e aumentou os níveis de inosina. Os peixes tratados com 6-OHDA não apresentaram alterações na atividade das NTPDases e EC-5´-Nt, bem como nos níveis de ATP extracelular nas duas doses testadas. Porém, houve mudanças nos níveis de ADP e uma diminuição, em ambas as doses, nos níveis de AMP. Já os níveis extracelulares de adenosina e inosina apresentaram um aumento. Estes dados sugerem que o sistema purinérgico pode ser modulado de forma diferente em animais experimentais com sintomas de Parkinson. Além disso, este trabalho também apresentou um novo modelo de neurodegeneração utilizando o Pq além de reforçar o envolvimento do sistema purinérgico e o seu potencial farmacológico sobre doenças neurodegenerativas.

Made available in DSpace on 2015-04-30T14:06:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000467697-Texto+Completo-0.pdf: 3365118 bytes, checksum: f6826fc894e0d18084119ccb17fc33a1 (MD5) Previous issue date: 2015 / The first line of defense of organism is made by phagocytic cells such as neutrophils. Apoptosis and NETosis of neutrophils are two major mechanisms of programmed cell death that differ in their morphological characteristics and effects on the immune system. Apoptosis is characterized by nuclear chromatin packaging and nuclear fragments and this death can be delayed by the presence of pathogens or chemicals components such as lipopolysaccharide (LPS). Neutrophils have other antimicrobial strategy, called neutrophil extracellular traps (NETs), which contributes to the elimination and control of the pathogen. NETosis is induced by infection, inflammation or trauma and represents an innate immune activation mechanism. The objective of this study was to evaluate the effect of Gallic acid (GA) in the control of apoptosis and release NETs. The results show that GA decreased the anti-apoptotic effect of LPS, blocked the induction of NETs and prevented the formation of free radicals induced by LPS. These findings demonstrate that the GA is a novel therapeutic agent for decreasing the exacerbated response of the body against an infectious agent. / A primeira linha de defesa do organismo é feita por células fagocíticas como os neutrófilos. Apoptose e NETose dos neutrófilos são os dois maiores mecanismos de morte celular programada, que diferem em suas caracteríscas morfológicas e em seus efeitos sobre o sistema imune. A apoptose é caracterizada pelo empacotamento da cromatina e dos fragmentos nucleares, porém esta morte por ser atrasada pela presença de patógenos ou pela presença de componentes químicos, como o lipopolissacarídeo (LPS). Os neutrófilos possuem outra estratégia antimicrobiana, chamada armadilhas extracelulares (NETs), que contribuem para eliminação e controle do patógeno. A NETose é induzida por infecção, inflamação ou trauma e, representa um mecanismo de ativação da resposta imune inata. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do Ácido gálico (AG) no controle da apoptose e formação de NETs de neutrófilos. Os reultados mostram que o AG diminuiu o efeito anti-apoptótico do LPS, bloqueou a liberação de NETs e preveniu a formação de radicais livres induzidos por LPS. Estes resultados demonstram que o AG pode ser um novo agente terapêutico no controle da resposta exacerbada do corpo contra um agente infeccioso.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000432345-Texto+Completo-0.pdf: 979099 bytes, checksum: 820bba184bdc3f509975d4086e7aaeb4 (MD5) Previous issue date: 2011 / Angiostrongylus cantonensis is a nematode of rodents, their definitive hosts. When infects humans, its unusual host, it causes eosinophilic meningoencephalitis. So far no drug has been demonstrated clinical efficacy for the treatment of angiostrongyliasis, although albendazole has been employed as a drug of choice. The idea of seeking a drug that would reduce or prevent morbidity is an alternative approach for usual vermicides, which presents poor results in angiostrongyliasis. In this sense, the present study aimed, among other things, to evaluate the effect of three substances with the potential capacity to inhibit oviposition in A. cantonensis. Rodent species Rattus norvegicus were inoculated with 100 L3 larvae of A. cantonensis and after 42 days of infection L1 larvae began to be shed in feces. The substances were administered to animals with 42 days of infection and, for 5 days for lovastatin (400 mg/kg) orally, phenanthroline for 4 days (20 mg/kg) intraperitoneally using carboxymethylcellulose (CMC) 1% and 3 days as an adjuvant, 12 in 12 hours, for nitazoxanide (8,3 mg/kg) orally. The results showed a decline in the elimination of larvae R. norvegicus when was used nitazoxanide compared to untreated infected animals and demonstrate a potential effect on the inhibition of this parasite oviposition. These results demonstrate that some degree of reduction in egg production is attainable and further studies should be performed to persue this new idea of virulence reduction as an alternative to parasite killing. / Angiostrongylus cantonensis é um nematódeo de roedores, seus hospedeiros definitivos. Ao infectar o ser humano, um hospedeiro não habitual, causa meningoencefalite eosinofílica. A droga indicada para o tratamento é o albendazol, porém não existe, até o presente momento, droga de eficácia clínica demonstrada para o tratamento das angiostrongilíases. Assim, a idéia de buscar uma substância que reduza ou previna a morbidade é uma alternativa à abordagem usual de drogas vermicidas. Neste sentido, o presente estudo objetivou verificar o efeito de três substâncias com potencial capacidade de inibição da oviposição em A. cantonensis. Roedores da espécie Rattus norvegicus foram inoculados com 100 larvas L3 de A. cantonensis e após 42 dias de infecção larvas L1 começaram a ser eliminadas nas fezes. As substâncias foram administradas aos animais com 42 dias de infecção durante 5 dias para a lovastatina (400 mg/Kg) pela via oral, 4 dias para a fenantrolina (20 mg/Kg) pela via intraperitoneal diluindo-se em carboximetilcelulose (CMC) a 1% como coadjuvante e 3 dias, de 12 em 12 horas, para a nitazoxanida (8,3 mg/Kg) pela via oral. Os resultados mostraram um declínio na eliminação de larvas por R. norvegicus quando foi utilizada a nitazoxanida em relação aos animais infectados e não tratados demonstrando um potencial efeito na inibição da oviposição deste parasito. Estes resultados demonstram que esta idéia deve ter continuidade e mais estudos devem ser realizados para aprimorar essa nova hipótese.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000418471-Texto+Completo-0.pdf: 941887 bytes, checksum: 83e65c46f62b9cf566ee10180ce3d11c (MD5) Previous issue date: 2009 / It has been demonstrated that kinin B1 receptors are highly upregulated under several stressful stimuli, such as infection. In spite of that, there is no evidence indicating whether Porphyromonas gingivalis LPS (Pg-LPS), a preferential TLR2 activator, might lead to B1 receptor upregulation. In this study, we demonstrate that Pg-LPS injection into the rat paw resulted in a marked functional upregulation of B1 receptors (as measured by an increase of B1 receptor-induced edema formation), which was preceded by a rapid raise in B1 receptor mRNA expression. The local administration of Pg-LPS also resulted in a prominent production of the proinflammatory cytokine TNF-G, followed by an increase of neutrophil influx; both events were observed at time periods prior to B1 receptor induction. The functional and molecular Pg-LPS-elicited B1 receptor upregulation was significantly reduced by the glucocorticoid dexamethasone, and to a lesser extent by the chimeric anti-TNFa antibody infliximab. Of high relevance, we show for the first time that a single administration of the pro-resolution lipid mediator Resolvin E1 was able to markedly down-regulate Pg-LPS-driven B1 receptor expression, probably by inhibiting TNFG production and neutrophil migration to the inflammatory set. Collectively, the present findings clearly suggest that TLR2 activation by Pg-LPS is able to induce the upregulation of B1 receptors, through mechanisms involving TNFa release and neutrophil influx, which are largely sensitive to Resolvin E1. It is tempting to suggest that kinin B1 receptors might well represent a pivotal pathway for the inflammatory responses evoked by P. gingivalis and its virulence factors. / O receptor B₁ para as cininas está normalmente ausente durante condições fisiológicas podendo ser rapidamente induzido em resposta a diversos estímulos, como os processos infecciosos. Apesar disso, não existem estudos indicando como o LPS de Porphyromonas gingivalis (Pg-LPS), um ativador preferencial de TLR2, pode induzir a expressão do receptor B₁. No presente trabalho, foi demonstrado que a injeção do Pg-LPS na pata de rato resulta na indução funcional tempo-dependente dos receptores B₁ (determinada pelo aumento marcante na resposta edematogênica), que foi precedida pelo rápido aumento na expressão do seu RNAm. A administração local de Pg-LPS produziu um aumento marcante na produção da citocina pró-inflamatória TNF-G e do influxo de neutrófilos. Ambos os eventos foram observados anteriormente à indução dos receptores B₁. A indução funcional e molecular do receptor B₁ pelo Pg-LPS foi reduzida significantemente pelo glicocorticóide dexametasona e pelo anticorpo monoclonal anti- TNF-G infliximab. De grande relevância, foi demonstrado pela primeira vez, que uma única administração de Resolvina E1, um mediador lipídico pró-resolução da inflamação, foi capaz de produzir uma redução marcante na expressão dos receptores B₁ mediada pelo Pg-LPS, provavelmente inibindo produção de TNF-G e a migração de neutrófilos para o sítio inflamatório. Analisados em conjunto, os dados obtidos permitem inferir que a ativação do TLR2 pelo Pg-LPS é capaz de induzir a expressão dos receptores B₁, através de mecanismos relacionados à produção de TNF-G e ao influxo de neutrófilos, que são sensíveis a Resolvina E1. Assim, é possível sugerir que os receptores B₁ representam uma via importante nas respostas inflamatórias desencadeadas pela P. gingivalis e seus fatores de virulência.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000431256-Texto+Completo-0.pdf: 478082 bytes, checksum: c6f6e34791efd5a484688e004ceee45b (MD5) Previous issue date: 2011 / Zebrafish has been increasingly used in behavioral studies, but data can present high variability. Most studies have been performed using isolated zebrafish, despite their interactive nature and dependence on shoal counterparts. We compared adult zebrafish behavioral parameters and cortisol levels after exposure to novelty in animals tested individually or in groups of three (triplets). In the exploratory behavior task, data from single fish and triplets were not significantly different, but single fish data were more disperse than in triplets in latency to and time spent in the tank upper part, and crossings (p<0. 01). In the light dark task, latency to enter in the dark zone, time in the light zone, and number of crossings were not different between groups, but results were more variable in single fish’s latency to enter the dark zone compared to triplets (p<0. 01). In the inhibitory avoidance task, only fish trained individually showed increased test latencies compared to training (p<0. 05). Again, data dispersion was higher in single fish than in triplets (p<0. 001). Cortisol levels from animals in their housing tank were lower than in fish exposed to the exploratory tank for 5 min (p<0. 05). Compared to triplets, cortisol levels of fish individually exposed to the test tank were higher (p<0. 001) and more variable (p<0. 05). Thus, using single zebrafish in behavioral studies increases data variability, probably by disrupting their natural shoal behavioral strategies. This feature can be beneficial or detrimental depending on study aims and should be considered when designing, analyzing and interpreting zebrafish behavioral data. / O peixe zebra (Danio rerio) vem sendo cada vez mais utilizado em estudos de biologia do desenvolvimento, genética, farmacologia e de comportamento, mas os dados comportamentais obtidos nessa espécie apresentam uma grande variabilidade. A maioria dos estudos vem sendo realizados utilizando animais isolados, apesar do seu comportamento natural de formar e viver em cardume. Nós comparamos alguns parâmetros comportamentais e também os níveis de cortisol de peixe zebra adultos após a exposição à novidade. Na tarefa de comportamento exploratório, os resultados dos animais testados individualmente ou em trios não foram significativamente diferentes, mas os resultados dos animais testados sozinhos foram mais dispersos do que os trios nos parâmetros avaliados (latência para explorar a parte superior do aquário, tempo gasto na parte superior do aquário e número de cruzamentos, p <0,01). Na tarefa de claro/escuro, não houve diferença no desempenho dos animais testados individualmente quando comparados com os testados em trios (latência para passar para o lado escuro, tempo no lado claro e número de cruzamentos), mas na latência para passar para o lado escuro os resultados foram mais dispersos quando os peixes foram testados isoladamente (p < 0,01). Na tarefa de esquiva inibitória, apenas os peixes treinados individualmente, apresentaram aumento na latência do teste em relação à latência do treino (p <0,05). Novamente, a dispersão dos dados foi maior nos peixes testados sozinhos em comparação com os testados em trios (p <0,001). Os níveis de cortisol dos animais controle (aquário moradia) eram mais baixos do que os níveis de cortisol dos animais expostos ao teste exploratório durante 5 min (p <0,05). Comparado com trios, os níveis de cortisol dos peixes expostos ao teste individualmente foram mais variáveis (p <0,001) e maiores (P <0,05).Em resumo, utilizar peixe zebra individualmente em testes comportamentais aumenta a variabilidade dos dados, provavelmente por perturbar o seu comportamento natural de formação de cardume. Estes achados mostram que testar peixe zebra isolados pode ser benéfico ou prejudicial, dependendo dos objetivos do estudo mas, isso deve ser levado em consideração ao se estabelecer protocolos comportamentais e também na interpretação dos resultados obtidos.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000411831-Texto+Completo-0.pdf: 610126 bytes, checksum: aecb440e9c0d0afffb07d75e00577faf (MD5) Previous issue date: 2009 / Trichomonas vaginalis is a flagellate protozoan that causes trichomonosis, the most common, non-viral sexually transmitted disease (STD). Steroids may influence the pathogenesis of Trichomonas vaginalis. These hormones can influence the immune system and thus the susceptibility for diseases caused by protozoan parasites. Studies have described that the modulation of nucleotide levels seems to be essential for the survival of the parasite. Trichomonas vaginalis colonization may be influenced by the vaginal concentrations of estrogens. The role of estrogens in the pathogenesis of T. vaginalis has been controversial, and seemingly contradictory reports are found in the literature. Considering that T. vaginalis have not the ability to perform purine and pirimidine synthesis de novo, it becomes important to evaluate the enzyme activities involved in adenosine production in the presence of steroid hormones. We investigated the effect of dehydroepiandrosterone sulfate (DHEAS) and 17b-estradiol on NTPDase and ecto-5´- nucleotidase activities in fresh clinical (VP60) and long-term-grown isolates of T. vaginalis (30236 ATCC), followed by the NTPDase genes transcriptional analysis. The results presented demonstrate the influence of 17b-estradiol and DHEAS on nucleotidase activities and expression patterns in intact trophozoites of T. vaginalis. DHEAS significantly inhibited NTPDase activity. The NTPDase activity on 30236 isolate was inhibited in vitro and in the treatment with DHEAS for 12 hours. NTPDase activity was inhibited in the treatment with the hormone for 2 and 12 hours in VP60 isolate. The presence of the steroid hormone DHEAS during 12 hours also inhibited the transcript levels of NTPDaseA in VP60 isolate. In contrast, 17b-estradiol activated the NTPDase activity in vitro and in the treatment of the hormone during 12 hours in the VP60 isolate. The NTPDase activity on 30236 isolate was also increased by the 17b-estradiol when treated by 12 hours. However,, the treatment with 17b-estradiol by 2 hours inhibited the NTPDase activity on 30236 isolate. Considering the ecto-5´-nucleotidase activity, the results demonstrated that the treatment with DHEAS by 2 h significantly inhibited the AMP hydrolysis in VP60 and 30236 isolates. 17b-estradiol by 2 h inhibited the AMP hydrolysis in the 30236 isolate whereas did not alter the AMP hydrolysis in the VP60 isolate. The treatment with DHEAS by 12 h inhibited AMP hydrolysis. Considering that the vaginal microenvironment is a mixture of hormones with constantly changing concentrations and the effect of steroid hormones on T. vaginalis is complex and is influenced by the presence of hormones receptors on T. vaginalis, our results suggest that the modulation of extracellular ATP, ADP, and AMP levels during exposure to steroid hormones may be related with their influence in T. vaginalis colonization. / O Trichomonas vaginalis é um protozoário flagelado causador da tricomonose, a doença sexualmente transmissível (DST), não-viral mais comum. Esteróides podem influenciar a patogênese do Trichomonas vaginalis. Estes hormônios podem influenciar o sistema imune e também a suscetibilidade para doenças causadas por parasitas. Estudos têm descrito que a modulação dos níveis de nucleotídeos pode ser essencial para a sobrevivência do parasito. A colonização por T. Vaginalis pode ser influenciada pela concentração de estrogênios na vagina. O papel dos estrogênios na patogênese do T. vaginalis é controverso, e estudos contraditórios são encontrados na literatura. Considerando que o T. vaginalis não realiza síntese de novo de purinas e pirimidinas, é importante avaliar as atividades enzimáticas envolvidas na produção de adenosina na presença de hormônios esteroidais. Nós investigamos o efeito do sulfato de deidroepiandrostenediona (S-DHEA) e do 17b-estradiol nas atividades da NTPDase e da ecto-5´-nucleotidase em um isolado clínico fresco (VP60) e em um isolado cultivado por longos períodos em laboratório (30236 ATCC), seguido pela análise transcricional dos genes. Os resultados demonstrram a influência do 17b-estradiol e do S-DHEA nas atividades da NTPDase e da ecto-5´-nucleotidase e padrões de expressão das NTPDases em trofozoítos intactos de T. vaginalis.A atividade da NTPDase no isolado 30236 foi inibida no ensaio in vitro e no tratamento na presença do hormônio S-DHEA por 12 h. No isolado VP60, a atividade da NTPDase foi inibida no tratamento com este hormônio por 2 e 12 h. A presença do hormônio esteróide S-DHEA por 12 h inibiu a expressão dos níveis de mRNA da NTPDaseA no isolado VP60. Em contraste, o 17b- estradiol ativou a atividade da NTPDase no isolado VP60 no ensaio in vitro e no tratamento por 12 h. A atividade da NTPDase no isolado 30236 foi ativada na presença do 17b- estradiol quando tratado por 12 h. Por outro lado, o tratamento com o hormônio 17b- estradiol por 2 h inibiu a atividade da NTPDase no isolado 30236. O tratamento na presença do S-DHEA por 2 h inibiu a hidrólise do AMP no isolado VP60 e no isolado 30236. O 17b-estradiol, no tratamento de 2 h, diminuiu a hidrólise do AMP no isolado 30236, mas não alterou a hidrólise do AMP no isolado VP60. O tratamento por 12 h na presença do hormônio S-DHEA inibiu a hidrólise do AMP. Considerando que a vagina é um ambiente constantemente afetado pelas mudanças hormonais e que os efeitos dos hormônios esteroidais são influenciados por receptores presentes no T. vaginalis, nossos resultados sugerem que a modulação dos níveis extracelulares de ATP, ADP e AMP durante a exposição aos hormônios esteroidais pode estar relacionada com a colonização do T. vaginalis.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000411286-Texto+Completo-0.pdf: 549164 bytes, checksum: 734a48776e052e1d86baccb49d04044f (MD5) Previous issue date: 2009 / Rationale: Asthma is a chronic inflammatory disease and glucocorticoids (GCs) are a very effective therapy. A subset of adult patients with severe asthma are resistant to GCs, but there is no data on sensitivity to GCs in children with this illness. Objectives: The aim of the present study is to analyze peripheral blood mononuclear cell (PBMC) sensitivity to GCs as well as inflammatory markers in children with persistent asthma plasma. Methods: patients with persistent asthma (n=57) were divided into three groups (severe, moderate and mild), and compared with healthy children (n=18). PBMCs were isolated and cultured in vitro to assess mitogen-induced proliferation as well as cellular sensitivity to dexamethasone. Plasma chemokines (CCL2, CCL3, CCL5, CCL11, CCL22, CCL24, CXCL9, CXCL10 and IL- 8), soluble TNF receptors and brain derived neurotrophic factor (BDNF) were assessed by ELISAs. Main Results: Patients with mild asthma showed significantly less stimulated T-cell proliferation and a relative insensitivity to dexamethasone. The asthmatic patients had mostly unchanged chemokine levels when compared with controls and IL-8 was negatively associated to pulmonary function. Moderate and severe asthma patients had higher BDNF levels (p < 0. 01), being the best asthma severity marker in this study. Conclusions: Children with severe asthma are not resistant to GCs in vitro. Plasma BDNF is a potential marker of disease progression in childhood asthma. Our findings suggest that the resistance to GCs in adults with severe asthma could be an acquired process. / Introdução: A asma é uma doença inflamatória crônica e os glicocorticóides (GCs) são a terapia mais efetiva para o controle da doença. Um subgrupo de paciente com asma severa é resistente aos GCs, mas não há dados a respeito da sensibilidade aos GCs em crianças com essa doença. Objetivos: A intenção deste estudo é analisar a sensibilidade das células mononucleares do sangue periférico (PBMC) aos GCs além de marcadores inflamatórios no plasma de crianças com asma persistente. Métodos: Os pacientes com asma persistente (n=57) foram divididos em três grupos (severa, moderada e leve), e comparados com crianças saudáveis (n=18). PBMCs foram isoladas e postas em cultura in vitro para testar a proliferação induzida por mitógeno assim como a sensibilidade celular à dexametasona. Quimiocinas do plasma (CCL2, CCL3, CCL5, CCL11, CCL22, CCL24, CXCL9, CXCL10 e IL-8), receptores solúveis de TNF e fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF) foram analisados com ELISA. Principais Resultados: Pacientes com asma leve apresentaram uma relativa resistência à dexametasona. Pacientes com asma moderada e severa mostraram ter níveis de BDNF mais elevados (p < 0. 01) quando comparados com os pacientes com asma leve e controles, sendo o melhor marcador de severidade neste estudo. Conclusões: PBMCs derivadas de crianças com asma severa não são resistentes aos GCs in vitro. BDNF Plasmática é um potencial marcador da progressão da doença em crianças asmáticas. Nossos achados sugerem que a resistência aos GCs em adultos com asma severa possa ser um processo adquirido.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000401828-Texto+Completo-0.pdf: 432779 bytes, checksum: 3773335c19ab717d6f080b6e3d0f79c2 (MD5) Previous issue date: 2008 / Temperament relates to the emotional nature and the quality of the prevailing mood. We have proposed an integration of emotional and affective temperament constructs based on the principle that activation (anger and drive/pleasure) and inhibition (fear) are the two main emotional forces, which are integrated by the control system (attention and duty). Their interaction would result in the prevailing mood or affective temperaments. Uric acid (UA) is the end-product of purine metabolism and has been associated with psychological features such as high energy/drive, positive affect, achievement, good performance, higher social status and leadership. In this study we evaluated 129 subjects (44 males, 85 females) with the Combined Emotional and Affective Temperaments Scale, serum UA levels and a general health questionnaire. In the whole sample, serum UA levels were significantly correlated with disinhibition (r=0. 36, p<0. 001) and drive (r=0. 25, p<0. 01), but not with control, anger or any of the affective temperament scores. Among males, we found correlations at trend level (p >0. 05 and <0. 07) for control (r=0. 27), irritable (r=0. 29) and hyperthymic (r=0. 27) affective temperaments. Among females, a significant correlation was found only with disinhibition (r=0. 34, p=0. 001). The top tertile of males (serum UA>6. 0 mg/ml, n=16) had significantly higher drive (29. 9±5. 9 X 26. 0±3. 6, p=0. 01) and higher control at trend level (21. 2±3. 1 X 19. 3±2. 9, p=0. 054) than the rest of the sample. Among women, the top tertile (serum UA>4. 0 mg/ml, n=29) showed higher disinhibition scores (20. 7±4. 9 X 17. 9±3. 6, p<0. 01) and more choices of hyperthymic (8/26 X 6/59, p=0. 023) and irritable temperaments (7/26 X 5/59, p=0. 031) than the rest of the sample. In conclusion, these results confirm that externalized traits of temperament are associated with higher serum UA levels both in men and women. / O temperamento diz respeito à natureza emocional e ao humor basal. Propusemos uma integração dos construtos de temperamentos emocional e afetivo baseado no princípio de ativação (vontade e raiva) e inibição (medo) como as duas forças emocionais principais, que são reguladas por um sistema de controle (atenção e dever). A interação dessas forças resultaria no padrão de humor basal ou temperamento afetivo. O ácido úrico (AU) é o produto final do metabolismo de purinas e já foi associado com variáveis psicológicas como alta energia/vontade, afeto positivo, sucesso, alto desempenho, status social mais elevado e liderança. No presente estudo avaliamos 129 voluntários (44 homens e 85 mulheres) com a Escala de Temperamento Afetivo e Emocional, níveis séricos de AU e um questionário geral de saúde. Na amostra total, os níveis séricos de AU foram significativamente correlacionados com desinibição (r=0. 36, p<0. 001) e vontade (r=0. 25, p<0. 01), mas não com controle, raiva ou qualquer dos temperamentos afetivos. Entre homens, encontramos tendências de correlação (p>0. 05 and <0. 07) para controle (r=0. 27) e os temperamentos afetivos irritável (r=0. 29) e hipertímico (r=0. 27). Entre mulheres, uma correlação significativa foi observada somente com desinibição (r=0. 34, p=0. 001). O tertil mais alto dos homens (AU sérico>6. 0 mg/ml, n=16) apresentou significativamente mais vontade (29. 9±5. 9 X 26. 0±3. 6, p=0. 01) e controle no nível de tendência (21. 2±3. 1 X 19. 3±2. 9, p=0. 054) do que o resto da amostra. Entre mulheres, o tertil superior (AU sérico>4. 0 mg/ml, n=29) apresentou maiores escores de desinibição (20. 7±4. 9 X 17. 9±3. 6, p<0. 01) e mais frequentemente escolheram os temperamentos afetivos hipertímico (8/26 X 6/59, p=0. 023) e irritável (7/26 X 5/59, p=0. 031) do que o resto da amostra. Em suma, esses resultados confirmam que traços externalizados de temperamento estão associados com níveis mais altos de AU tanto em homens como em mulheres.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000392208-Texto+Completo-0.pdf: 680503 bytes, checksum: f878615d3cb5271fa0bad4f5e273c6b6 (MD5) Previous issue date: 2006 / A disfunção de múltplos órgãos e a Insuficiência renal aguda compartilham muitos dos fatores fisiopatológicos envolvidos na sua instalação. Estudos recentes correlacionam a herança genética com a suscetibilidade à disfunção de orgãos entre pacientes criticamente doentes. Muitos consideram que o gene da ECA poderia ser um potencial candidato a fator de risco genetico em pacientes de UTI. Em nosso estudo, examinamos os efeitos dos polimorfismos I/D e -262A>T do gene da ECA na função renal em pacientes criticamente doentes de uma UTI do sul do Brasil. Um escore de disfunção multiorgânico mundialmente reconhecido, o SOFA (avaliação seqüencial da disfunção do órgão), foi empregado para determinar o estado basal da saúde no primeiro dia de admissão à UTI. Considerando o escore SOFA da admissão e a tendência da função renal (através do escore diário do SOFA renal, determinado pela medida diária da creatinina sérica e da diurese), nós consideramos a hipótese de que os polimorfismos I/D e -262A>T do gene ECA poderiam influenciar na tendência da função renal em pacientes de ICU. Um total de 153 pacientes adultos, criticamente doentes (79 homens e 77 mulheres), foi incluído neste estudo.Nós monitoramos os pacientes diariamente durante sua permanência na UTI e hospitalar (período máximo de observação de 224 dias). Foi observada a progressão à disfunção renal (valores 3 e 4 de escores SOFA) nos primeiros sete dias da internação em UTI e a necessidade de diálise durante este período. As freqüências genotípicas totais em nossa amostra foram II=0. 17; ID=0. 46; DD=0. 37 e AA=0. 30; AT=0. 55; TT=0. 15, e as freqüências alélica foram I=0. 40; D=0. 60 e A=0. 56; T=0. 44. Este é o primeiro estudo delineado para verificar a influência de polimorfismos I/D e -262A>T do gene ECA na disfunção renal aguda entre pacientes de UTI. Nenhuma associação significativa foi encontrada entre a evolução da função renal durante a primeira semana de internação na UTI e os genótipos ou freqüências alélicas dos polimomrfismos em questão. Os polimorfismos I/D e -262A>T não apresentaram nenhum impacto significativo na tendência da função renal durante a primeira semana de internação na UTI, igualmente, não houve influência da herança genética sobre a mortalidade nos pacientes criticamente doentes estudados.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000424565-Texto+Completo-0.pdf: 224491 bytes, checksum: 1caac1bc975e0c96c25d98d9d4776ccf (MD5) Previous issue date: 2010 / To assess the extent of genetic variability in the pr1A gene of Metarhizium sp., 31 complete sequences of this gene were obtained by PCR amplification and analyzed together with 25 additional sequences (being four complete and 21 partial sequences) retrieved from GenBank. Overall, the nucleotide diversity for this gene was 0. 032. Phylogenetic trees based on pr1A sequences were constructed using neighbor-joining (NJ), maximum parsimony (MP), maximum likelihood (ML), and Bayesian Inference (BI). The entomopathogenic fungus Lecanicillium psalliotae was used as outgroup in all phylogenetic analysis. In general, clades were consistently recovered irrespective of the methods used, even though some support values were low. Our results from pr1A gene sequence data showed that there was no clear correlation between strains and host groups. Rather, some clades may be better explained by geographic affinities. Moreover, some strains classified within variety acridum and variety majus showed identical genetic profiles with the Metarhizium anisopliae var. anisopliae, and may represent erroneous classification in existing databases. Finally, our results suggest that positive selection may have partially shaped current pr1A diversity in this fungus. / Para avaliar o grau de variabilidade genética do gene pr1A de Metarhizium sp., 31 sequências completas foram analisadas conjuntamente com 25 sequências (sendo quatro sequências completas e 21 parciais) retiradas do GenBank. A diversidade global de nucleotídeos para pr1A foi 0,032. As árvores filogenéticas, baseadas nas sequências desse gene, foram construídas utilizando os métodos neighbor-joining (NJ), máxima parcimônia (MP), máxima verossimilhança (ML) e Inferência Bayesiana (BI). O fungo entomopatogênico Lecanicillium psalliotae foi utilizado como grupo externo em todas as análises filogenéticas. Embora alguns valores de bootstrap tenham sido baixos, em geral, os clados foram consistentes, independentemente dos métodos empregados. Os resultados dos dados das sequências não demonstraram uma ligação clara entre as linhagens e os grupos de hospedeiros. Entretanto, alguns agrupamentos podem ser melhor correlacionados à distribuição geográfica. Além disso, algumas cepas, previamente classificadas como pertencentes à variedade acridum e à variedade majus, demonstraram perfis genéticos idênticos ao Metarhizium anisopliae var. anisopliae, o que pode indicar a existência de uma classificação equivocada nas bases de dados taxonômicos existentes. Por fim, nossos resultados sugerem que a seleção positiva pode ter influenciado parcialmente a atual diversidade do gene pr1A existente entre as cepas de Metarhizium anisopliae.