Babesia bovis is a causative agent of bovine babesiosis and is transmitted by vector ticks, Rhipicephalus (Boophilus) spp. The disease has a high mortality rate in susceptible cattle, causing serious economic loss. At present, the only commercial vaccine is culture-based with limited availability. No effective molecular vaccine has been developed to date. Generating a vaccine with specific critical epitopes responsible for protection against B. bovis is critically important. Immunity against B. bovis requires both innate and adaptive responses, with antigen-specific CD4+ T cells essential to the latter through production of IFN-γ. Fourteen B. bovis proteins were selected as putative vaccine candidates and their full-length genes cloned for recombinant protein production intended for evaluating peripheral blood mononuclear cell IFN-γ secretion level from experimentally infected animals in ELISPOT. All proteins expressed in insoluble form (inclusion bodies) and could not be purified. B. bovis genes were then truncated to exclude signal peptide and transmembrane regions, then cloned and expressed using pET101/D-TOPO in Escherichia coli to obtain soluble, useable proteins. Only recombinant B. bovis MSA1, MSA2b and MSA2a1 proteins were successfully expressed in soluble form. These proteins induce invasion-blocking antibodies in immunized cattle, are hypothesized to elicit protection in susceptible animals, but were previously studied by others. Due to failure to produce new candidates to assay, the animal experiments were not performed. Instead, sera from field-infected cattle were assayed for reactivity against the MSA proteins by indirect immunofluorescent antibody (IFA) and western blot (WB) analysis. Field sera from South Texas (#41) and the Mexican Yucatan (#6, #9 and #11) along with positive and negative controls were tested. In IFA test, cattle #6, #9 and #41 were positive while #11 was negative. In WB, #41 and #6 reacted with the recombinant MSA proteins and with control B. bovis whole parasite lysate. However, both #11 and #9 had no signal in WB, although the latter was positive in IFA. Several theories may explain this phenomenon, such as the different preparation process of the antigen in the two tests, strain differences between sera and test antigens, or the different design and nature of each test.

Thesis (Ph.D.)--Murdoch University, 2006. / Thesis submitted to the Division of Health Sciences. Bibliography: leaves 225-252.

Orientador: Rosangela Zacarias Machado / Banca: Marta Maria Geraldes Teixeira / Banca: Cláudio Lisias Mafra de Siqueira / Banca: Marcos Rogério André / Banca: Jesus Aparecido Ferro / Resumo: A babesiose é uma doença infecciosa economicamente importante que afeta o gado bovino em todo o mundo, endêmica e importante causa de morbidade e mortalidade em bovinos no Brasil. A doença é causada por Babesia bigemina e B. bovis, protozoários parasitas intraeritrocíticos do filo Apicomplexa, agentes de enorme importância econômica em regiões tropicais e subtropicais. Merozoitos de B. bovis possuem em sua superfície, pelo menos, cinco glico-proteínas, que pertencem à família de antígenos variáveis de superfície do merozoíto (VMSA). A família VMSA de B. bovis inclui os genes msa-1, msa-2a1, msa-2a2, msa-2b e msa-2c. Estes antígenos são altamente imunogênicos e contêm epítopos sensíveis à neutralização e, por conseguinte, têm sido considerados como antígenos candidatos para o desenvolvimento de vacinas de subunidades contra B. bovis. No entanto, estes antígenos de superfície são geneticamente diversificados entre diferentes isolados de B. bovis, O que resulta em diferenças antigénicas entre vários isolados de B. bovis. A fim de avaliar a resposta imune humoral contra B. bovis e a diversidade genética de antígenos de superfície de merozoítos de B. bovis, amostras de soro e DNA de sangue de 30 bezerras, sendo 15 da Fazenda Pesagro, Seropédica, Rio de Janeiro, e outras 15 da Fazenda Germânia, Taiaçu, São Paulo, foram obtidas trimestralmente, desde o nascimento até aos 12 meses de idade. Os Anticorpos IgG para B. bovis foram detectados pelos testes de Imunofluorescência Indireta (... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Babesiosis, an economically important infectious disease that affects cattle worldwide, is endemic and important cause of morbidity and mortality of cattle in Brazil. The disease is caused by Babesia bigemina and B. bovis, apicomplexan intraerythrocytic protozoa parasites, which are agents of huge economic importance in tropical and subtropical regions. B. bovis merozoites present at least five (glyco-) proteins on their surfaces, which belong to a family of variable merozoite surface antigens (VMSA). The members of the VMSA family consist of merozoite surface antigen msa-1, msa-2a1, msa-2a2, msa-2b, and msa-2c. These antigens are highly immunogenic and contain neutralization-sensitive epitopes, and therefore have been considered as candidate antigens for developing subunit vaccines against B. bovis. However, these surface antigens are genetically diverse among different isolates of B. bovis, which results in antigenic differences among various B. bovis isolates. In order to evaluate the humoral immune response against B. bovis and genetic diversity of merozoite surface antigens of B. bovis, serum and DNA blood samples of 30 dairy calves, 15 from Seropedica, state of Rio de Janeiro, and the other 15 from a herd located in Taiaçu, state of São Paulo were obtained quarterly, since the birth up to 12 months of age. IgG antibodies to B. bovis were detected by Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT) and Enzyme-Linked Immunoadsorbent Assay (ELISA) tests. Polymerase Chain Reaction... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-08T16:45:52Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1089558 bytes, checksum: 71f90b61d1b8e5726e713eaa43b87a19 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-08T16:45:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1089558 bytes, checksum: 71f90b61d1b8e5726e713eaa43b87a19 (MD5) Previous issue date: 2005-11-18 / Bovinos da raça holandesa entre 3-4 meses de idade receberam quatro imunizações subcutâneas com o peptídeo sintético SBbo23290 anti-Babesia bovis mais saponina, e foram desafiados com amostra virulenta de B. bovis, sendo avaliados quanto ao desenvolvimento da resposta imune celular. Para isso, foi determinado o perfil de linfócitos circulantes (CD4 + , CD8 + , CD21 + e WC1 + ) por citometria de fluxo e seguimento dos eventos microscópicos ocorridos em linfonodos através de técnicas diferenciais (Hematoxilina & Eosina e Verde Metil Pironina) e de imunohistoquímica (Peroxidase anti-peroxidase). Os estudos histológicos mostraram reatividade evidente de centros germinativos a partir do quinto dia após a primeira imunização. A hiperplasia dos cordões medulares foi mais evidente aos três dias após a terceira imunização. O antígeno SBbo23290 foi detectado em células SBbo23290 positivas durante todo o experimento, concomitantemente às alterações histológicas em órgãos linfóides. Quando foi determinada a composição fenotípica dos linfócitos de sangue periférico circulantes, observou-se no grupo peptídeo um aumento progressivo de linfócitos WC1+ até os sete dias após a segunda coleta, que decaiu ligeiramente após a terceira inoculação, aumentando novamente após o desafio com a amostra virulenta de B. bovis, o que não aconteceu com os demais grupos experimentais, havendo diferença estatística entre os grupos. Os linfócitos CD4 + e CD21 + decresceram após a primeira inoculação, aumentando após a segunda inoculação, e decaindo nas demais coletas, havendo diferença estatística entre os grupos. A porcentagem de linfócitos T totais no grupo peptídeo foi superior aos demais grupos durante quase todo o experimento, sendo que a maior porcentagem foi obtida após a segunda coleta, não havendo diferença estatística entre os grupos nas diferentes coletas. Sendo assim, pode-se concluir que o peptídeo sintético induz de maneira eficaz uma resposta imunológica antígeno- específica, na qual encontram-se envolvidos mecanismos celulares e humorais. / Tree-four month old bovines of the Holstein Freesan breed received four under–skin immunization of the synthetic peptideo 23290 anti-Babesia bovis plus saponina. They were challenged with an virulent sample of B. bovis and they were evaluated considering the development of the cellular immune answer through identification of CD4 + , CD8 + , CD21 + , and WC1 + T lymphocytes by flow citometry and microscopic evaluation of lymph nodes using the techniques H&E and Pironin Methil Green, such as PAP. The lymphonodes analysis demonstrated germinal centers reactivity at the 5 th day after the first immunization. Medullars cords hyperplasia was more evident three days after the third immunization. SBbo32290 antigen was detected in SBbo23290 positive cells during whole experiment, and simultaneous to the histology alterations in lymphonodes. Evaluating phenotypic composition of the peripheral blood lymphocytes, a progressive increase of WC1 + lymphocytes was detected, which decreased after third immunization, and an increment was observed again after the challenge. It was not observed in the another experimental groups. The CD4 + and CD21 + lymphocytes decreased after first immunization, increased after the second immunization, and decreased again in the following immunizations; the variation was statistically significant between the groups. The variation in total number of lymphocytes wasn’t statistically significant, although an increment of this cells was observed in the peptide group xvalmost whole experiment, comparing with the another groups. We can conclude that the syntetic peptideo induct an effective immunological specific-antigen answer, in with cellular and humoral mechanisms were involved.

Submitted by Cleber Casali (clebercasali@ufv.br) on 2017-06-28T16:56:14Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 636589 bytes, checksum: 1b3995e45fbf3303781d6ef784b350eb (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-28T16:56:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 636589 bytes, checksum: 1b3995e45fbf3303781d6ef784b350eb (MD5) Previous issue date: 2001-06-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Bovinos inoculados com amostra atenuada de Babesia bovis (Bbo UFV-1) foram avaliados quanto ao desenvolvimento da resposta imune, por meio de estudos histopatológicos e imunohistoquímicos de cortes de linfonodos superficiais. Os estudos histopatológicos mostraram ativação da resposta imune pela reatividade de centros germinativos a partir do 3o dia pós-vacinal, sendo mais acentuada entre os 9-12 dias após a primeira exposição ao antígeno. Após a re-inoculação houve um aumento no número de centros germinativos. Níveis maiores de atividade de síntese protéica foram detectados na região medular, em plasmócitos localizados nos cordões medulares, caracterizando a produção de imunoglobulinas. Foram detectados grupos de células em apoptose, principalmente, localizados nos centros germinativos e nos cordões medulares dos linfonodos dos animais inoculados, enquanto que no linfonodo do animal negativo estas células eram observadas em menor número e distribuídas isoladamente. Antígenos de B. bovis foram detectados em células dendríticas pelo método de PAP. Concomitantemente às alterações histopatológicas em órgãos linfóides periféricos, observou-se um aumento nos níveis séricos de IgG1 e IgG2. Através da dosagem e estudo da cinética de produção de IFN-γ, TNF-α e IL-12 avaliou-se a ativação de PBMCs cultivadas com peptídeos sintéticos e previamente estimuladas reconhecimento do com peptídeo amostra sintético atenuada 23290 por de B. células bovis. de O memória, estimulou a produção dos níveis mais elevados de IFN-γ, TNF-α e IL-12 no presente estudo, caracterizando-o como um potencial imunógeno contra B. bovis. / Bovine inoculated with attenuated sample of Babesia bovis (Bbo UFV-1) were appraised about the development of the immune response through histopathologics and immunohistochemistry studies of sections of superficial lymph nodes. The histopathologics studies showed activation of the immune response through the reactivity of germinal centers starting from the 3 rd day post-vaccinal, being more accentuated among the 9-12 days after the first exhibition to the antigen. After the re-inoculation there was an increase in the number of germinal centers. Larger levels of protein synthesis were detected in the medullar area, in plasmacytes located in the medullars cords, characterizing the immunoglobulin production. Groups of cells were detected in apoptosis, mainly located in the germinal centers and in the medullars cords of the lymph nodes of the inoculated animals, while in the lymph node of the bovine control, these cells were observed in smaller number and distributed separately. Antigens of B. bovis were detected in dendritic cells by the method of PAP. An increase in the serics levels of IgG1 and IgG2 was observed in parallel to the histopathologics alterations in secondary lymphoids tissues. The activation of PBMCs cultivated in the presence of synthetic peptides and previously stimulated with attenuated sample of B. bovis was evaluated through the quantify and study of the kinetics of production of IFN-γ, TNF-α and IL-12. The recognition of the synthetic peptide 23290 for memory cells stimulated the production of the largest levels of IFN-γ, TNF-α and IL-12 detected in the present work, characterizing it as a potential immunogen against B. bovis.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2015-12-16T08:30:10Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 958308 bytes, checksum: 9c5736945cebbeb560b27c1893c60060 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-16T08:30:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 958308 bytes, checksum: 9c5736945cebbeb560b27c1893c60060 (MD5) Previous issue date: 2014-03-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Tomando como base clones de Pichia pastoris transfretados com o gene desenhado a partir do peptídeo sintético SBbo23290, iniciou-se a produção do antígeno recombinante em leveduras Pichia pastoris. O material recuperado foi filtrado e concentrado em membranas de Amicon, com tamanho de filtro de 30 kDa e 3 kDa. Para garantir o máximo de proteína antigênica purificada, para ser usada em teste como candidato vacinal em Bovinos Bos taurus taurus com idade entre 8-12 meses, os quais receberam três imunizações subcutâneas com intervalo de 30 dias do peptídeo recombinante rBbo23290 mais saponina, 30 dias após da ultima imunização, os bovinos foram desafiados com amostra virulenta de B. bovis avaliando-se parâmetros clínicos como; hematócrito, parasitemia e temperatura, além do acompanhamento do desenvolvimento da resposta imune humoral, mediante quantificação de IgG total. Os parâmetros hematológicos e a temperatura foram analisados semanalmente durante o período de imunização, e diariamente a partir do 7o dia pós-desafio com o parasita. Os exames sorológicos foram realizados semanalmente durante todo o experimento, os resultados deste experimento demostraram que o peptídeo recombinante tem atividade imunogênica que foi comprovado com o incremento nos níveis de IgG total, mas na hora do desafio biológico evidenciou-se alguma possível falha na diluição do imunógeno ou uma alta dose na inoculação do parasita patogênico, o qual desenvolveu uma resposta diferente da esperada em alguns dos animais vacinados, mesmo assim conseguiu- se demostrar que o peptídeo recombinante possui atividade imunogênica, e pode ser considerado como um potente candidato vacinal para o controle da doença causada pela B. bovis. Precisam-se estudos adicionais para medir e quantificar o tipo de resposta produzida pela imunização, a dosificação ideal para obter a melhor resposta imune nos bovinos. Também, análise das variáveis físicas químicas e biológicas do peptídeo rBbo23290 para entender a influência do tipo e a intensidade da resposta imunológica dos animais no momento da inoculação e no desafio biológico. / Pichia pastoris clones expressing the synthetic peptide SBbo23290 were used to produce this recombinant antigen. The recombinant peptide rBbo 23290 with saponin was used to vaccinate bovines Bos taurus taurus. The animals were then challenged with virulent strain Babesia bovis. As clinical parameters were monitored: hematocrit, hemoglobine, parasitemy, and temperature. Furthermore, the IgG was quantified. Our results showed that some of the vaccinated animals presented an unexpected reaction. This could be due either to a mistake on the dilution of the peptide, or to an unproved higher inoculation of the pathogen strain. Nevertheless, it was demonstrated that our synthetic antigen was immunogenic, based on the increase total levels of IgG. Therefore, it could be considered as a candidate to control bovine babesiosis by B. bovis. Nonetheless, future research is needed to measure and quantify the response activated by the immunization. Furthermore, a suitable dose should be established, aiming to obtain an optimal immunological response. Moreover, it will be worthy to analyze physical, chemical, and biological parameters of this protein, which probably influence the immunological response of the animals.

Submitted by CLARISSA HELENA SANTANA null (santana.chs@gmail.com) on 2016-03-21T18:17:24Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Clarissa_Helena_Santana.pdf: 1159982 bytes, checksum: 1160868d6c0bff2c67119202847275c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-03-22T17:26:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 santana_ch_me_jabo.pdf: 1159982 bytes, checksum: 1160868d6c0bff2c67119202847275c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-22T17:26:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 santana_ch_me_jabo.pdf: 1159982 bytes, checksum: 1160868d6c0bff2c67119202847275c7 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A bovinocultura é um setor com importante destaque no agronegócio brasileiro. O carrapato Ripicephalus (Boophilus) microplus é responsável por perdas econômicas significativas aos pecuaristas e é vetor de hemoparasitoses como Anaplasma spp e Babesia spp. Sabe-se que os bovinos Bos taurus taurus são mais susceptíveis à infestação por carrapatos do que Bos taurus indicus. Acredita-se que o mesmo ocorra para a infecção por Babesia bovis. Neste trabalho, foram avaliados, em duas colheitas, 355 bovinos da raça Angus, pertencentes a uma fazenda de Uruguaiana-RS, nos quais foram realizadas contagens de carrapatos e colheitas de amostras de sangue para quantificação de B. bovis, pela técnica de qPCR, e genotipagem com chip de 150.000 marcadores SNP. Para qPCR utilizaram-se sequências iniciadoras que flanqueiam um fragmento do gene do citocromo B (mt-cytB), como oligonucleotídeos iniciadores. Após genotipagem dos bovinos com o chip Gene Seek Genomic Profiler™ (GGP-HD) da Illumina Infinium®, foi realizado imputação de genótipos, para recuperação de genótipos faltantes, e controle de qualidade. Foi realizada análise de associação genômica ampla (GWAS), para cada uma das características, infecção por B. bovis e resistência a carrapatos, através do método denominado “Single Step Genomic BLUP” (ssGBLUP). Todos os animais apresentaram infestação por carrapatos e infecção por B. bovis, determinada pela qPCR, e altos valores médios para ambas as características. Algumas regiões cromossômicas foram identificadas como significativas para as características estudadas, sendo que, sete dos cromossomos identificados no presente estudo já haviam sido descritos em outros trabalhos. Neste sentido, o presente estudo corrobora com outros resultados indicando que a técnica de qPCR é um método sensível de detecção de B. bovis em animais Angus e que as regiões genômicas identificadas como significativas podem ser importantes para a variação das características estudadas. / The cattle industry is a sector with importance in the Brazilian agribusiness. The Ripicephalus (Boophilus) microplus is responsible for economic losses and is a vector for hemoparasitoses, such as Anaplasma spp and Babesia spp. It is known that the Bos tauros animals are more susceptible to infestation by ticks when compared with infestation in Bos indicus animals. It is believed that the same behavior keeps for infection by Babesia bovis. They were evaluated, in two collections, 355 Angus cattle, from a farm in Uruguaiana city, estate of Rio Grande do Sul, where were performed tick counts, quantification of B. bovis by qPCR and genotyping with a 150K chip. Were used as primers, in the qPCR, sequences that flanking the fragment of the cytochrome b gene. The technique was standardized and optimized using specimens of isolates of B. bovis. After genotyping, imputation was carried out, for recovery of missing genotypes, and quality control. Genome association analysis was performed (GWAS), to each of the characteristics, through the method called "Single Step Genomic BLUP" (ssGBLUP). All animals showed tick infestation and infection by B. bovis and high average values for both characteristics. Some regions on chromosomes were identified as significant to the characteristics tick infestation and infection by B. bovis, and seven chromosomes, identified in the present study, were already described in other studies. The present study agrees with other results indicating that the qPCR technique is a sensitive method to detecting B. bovis in Angus and genomic regions identified may be significant for the variation of these characteristics.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-01-24Bitstream added on 2014-06-13T19:20:18Z : No. of bitstreams: 1 reis_ro_dr_botfmvz.pdf: 1007324 bytes, checksum: 536ddb6ef3848f47cd6253ed5d8bd393 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Com o objetivo de verificar possíveis alterações hematológicas e bioquímicas que ocorrem no sangue bovino obtido de animal hígido e parasitado com Babesia bigemina, quando conservado em bolsas plásticas contendo Citrato-fostato-dextrose-adenina (CPDA-1) e os efeitos da Riboflavina e radiação ultravioleta na inativação de Babesia bigemina. Na primeira etapa o grupo I foi formado por bolsas plásticas contendo sangue proveniente de bovinos saudáveis e o grupo II foi formado por bolsas plásticas contendo sangue de bovinos parasitados com Babesia bigemina. Foi determinado Contagem total de hemácias e leucócitos, Concentração da Hemoglobina, Volume Globular, Proteína Plasmática Total, Fibrinogênio, Sódio, Potássio e Lactato a cada três dias durante 21 dias. Na segunda etapa foi realizado Esfregaço Sanguíneo Corado, Reação de Imunofluorescência Indireta e Reação em Cadeia da Polimerase quantitativa antes e após aplicação da Riboflavina e radiação ultravioleta, em seguida, o sangue foi inoculado em bezerros esplenectomizados. Esses exames foram repetidos nos dias sete, 14 e 21 pós-inoculação. O sangue conservado apresentou redução da contagem de hemácias e leucócitos, da Concentração da Hemoglobina, Volume Globular, Proteína Plasmática Total, Fibrinogênio e Sódio e ocorreu um aumento na concentração de Potássio e Lactato no decorrer de 21 dias. Observou-se que o sangue armazenado em bolsas plásticas sofre alterações hematológicas e bioquímicas após 21 dias de conservação. A Babesia bigemina não foi eliminada pela adição da Riboflavina e exposição à luz ultravioleta. Novos estudos devem ser realizados para verificar a eficácia desta técnica na inativação de patógenos que podem ser transmitidos por meio da transfusão sanguínea / The aim of this study was to verify the possible hematological and biochemical alterations that occur in bovine blood obtained from healthy animals and from the ones infected with Babesia bigemina when kept in plastic bags with CPDA-1, and to verify the effectiveness of the treatment with Riboflavin in the inactivation of the Babesia sp. In the first part of the experiment, group I was formed by plastic bags with blood obtained from healthy bovines and group II by plastic bags with blood obtained from bovines infected with Babesia bigemina. In both groups the Red Blood Cells Count, Hemoglobin Concentration, Packed Cell Volume, Total Plasma Protein, Fibrinogen, White Blood Cells, Sodium, Potassium and Lactate was determined every three days, during 21 days. In a second phase the stained blood smear, indirect immunofluorescence reaction and quantitative Polimerase Chain Reaction to diagnose before and after the treatment with Riboflavin and ultraviolet radiation. The blood was inoculated in esplenectomized bovine. These exams were repeated on the days 7, 14 and 21 after the inoculation. In both groups the preserved blood presented reduction in the number of Erythrocytes, Leukocytes, Hemoglobin Concentration, Packed Cell Volume, Total Plasma Protein, Fibrinogen and Sodium and an increase of the Potassium and Lactate concentration occurred in the period of 21 days. The results were considered statistically significant (p<0,01). This way it was observed that the blood preserved in plastic bags suffers hematological and biochemical alterations after 21 days of conservation. Babesia bigemina was not eliminated by the treatment with Riboflavin and ultraviolet radiation

Resumo: Com o objetivo de verificar possíveis alterações hematológicas e bioquímicas que ocorrem no sangue bovino obtido de animal hígido e parasitado com Babesia bigemina, quando conservado em bolsas plásticas contendo Citrato-fostato-dextrose-adenina (CPDA-1) e os efeitos da Riboflavina e radiação ultravioleta na inativação de Babesia bigemina. Na primeira etapa o grupo I foi formado por bolsas plásticas contendo sangue proveniente de bovinos saudáveis e o grupo II foi formado por bolsas plásticas contendo sangue de bovinos parasitados com Babesia bigemina. Foi determinado Contagem total de hemácias e leucócitos, Concentração da Hemoglobina, Volume Globular, Proteína Plasmática Total, Fibrinogênio, Sódio, Potássio e Lactato a cada três dias durante 21 dias. Na segunda etapa foi realizado Esfregaço Sanguíneo Corado, Reação de Imunofluorescência Indireta e Reação em Cadeia da Polimerase quantitativa antes e após aplicação da Riboflavina e radiação ultravioleta, em seguida, o sangue foi inoculado em bezerros esplenectomizados. Esses exames foram repetidos nos dias sete, 14 e 21 pós-inoculação. O sangue conservado apresentou redução da contagem de hemácias e leucócitos, da Concentração da Hemoglobina, Volume Globular, Proteína Plasmática Total, Fibrinogênio e Sódio e ocorreu um aumento na concentração de Potássio e Lactato no decorrer de 21 dias. Observou-se que o sangue armazenado em bolsas plásticas sofre alterações hematológicas e bioquímicas após 21 dias de conservação. A Babesia bigemina não foi eliminada pela adição da Riboflavina e exposição à luz ultravioleta. Novos estudos devem ser realizados para verificar a eficácia desta técnica na inativação de patógenos que podem ser transmitidos por meio da transfusão sanguínea / Abstract: The aim of this study was to verify the possible hematological and biochemical alterations that occur in bovine blood obtained from healthy animals and from the ones infected with Babesia bigemina when kept in plastic bags with CPDA-1, and to verify the effectiveness of the treatment with Riboflavin in the inactivation of the Babesia sp. In the first part of the experiment, group I was formed by plastic bags with blood obtained from healthy bovines and group II by plastic bags with blood obtained from bovines infected with Babesia bigemina. In both groups the Red Blood Cells Count, Hemoglobin Concentration, Packed Cell Volume, Total Plasma Protein, Fibrinogen, White Blood Cells, Sodium, Potassium and Lactate was determined every three days, during 21 days. In a second phase the stained blood smear, indirect immunofluorescence reaction and quantitative Polimerase Chain Reaction to diagnose before and after the treatment with Riboflavin and ultraviolet radiation. The blood was inoculated in esplenectomized bovine. These exams were repeated on the days 7, 14 and 21 after the inoculation. In both groups the preserved blood presented reduction in the number of Erythrocytes, Leukocytes, Hemoglobin Concentration, Packed Cell Volume, Total Plasma Protein, Fibrinogen and Sodium and an increase of the Potassium and Lactate concentration occurred in the period of 21 days. The results were considered statistically significant (p<0,01). This way it was observed that the blood preserved in plastic bags suffers hematological and biochemical alterations after 21 days of conservation. Babesia bigemina was not eliminated by the treatment with Riboflavin and ultraviolet radiation / Orientador: Raimundo Souza Lopes / Coorientador: Pedro Paulo Pires / Banca: Regina Kiomi Takahira / Banca: Elizabeth Moreira dos Santos Schmidt / Banca: Advaldo Henrique da Fonseca / Banca: Cecília Braga Laposy / Doutor

Orientador: Rosangela Zacarias Machado / Banca: Nadia Regina Pereira Almosny / Banca: Natalino Hajime Yoshinari / Banca: Jose Mauricio Barbanti Duarte / Banca: Karin Werther / Resumo: Doenças transmitidas por vetores artrópodes são mundialmente importantes para a saúde humana e animal. Recentemente, diversos estudos têm sido realizados a fim de investigar o possível papel dos animais selvagens na epidemiologia destas enfermidades. A identificação de reservatórios selvagens para estes hemoparasitas ajudaria no entendimento da epi enfermidades por eles causadas, principalmente aquelas de caráter zoonótico. O presente estudo teve como objetivo pesquisar em amostras de sangue de carnívoros selvagens mantidos em cativeiro a presença de infecção ou exposição a agentes Anaplasmataceae (Ehrlichia canis, E. chaffeensis, E. ewingii, Neorickettsia risticii, N. helminthoeca, Anaplasma platys e A. phagocytophilum), Rickettsiaceae (Orientia tsutsugamushi e Rickettsia sp. dos Grupos da Febre Maculosa e do Tifo), Babesia sp., Cytauxzoon sp. (somente para os felídeos), micoplasmas hemotróficos (Mycoplasma haemofelis, Candidatus M. haemominutum, Candidatus M. turicensis, M. haemocanis e Candidatus M. haematoparvum) e Hepatozoon sp., utilizando métodos sorológicos e moleculares. Para tal, foram amostrados 167 felídeos e 100 canídeos selvagens mantidos em cativeiro nos estados de São Paulo, Mato Grosso e Distrito Federal. Doze felídeos (7,2%) e três (3%) canídeos mostraram-se soropositivos frente ao antígeno de E. canis. Apenas um canídeo (1%) mostrou-se soropositivo para A. phagocytophilum. Nenhum animal mostrou-se soropositivo para E. chaffeensis ou N. risticii. A análise filogenética baseada em um fragmento de 350 pb do gene 16S rRNA não foi suficientemente robusta para diferenciar entre as espécies de Ehrlichia spp. Os fragmentos de DNA de Ehrlichia spp. encontrados em quatro felídeos foram posicionados em um ramo distinto daquela de E. canis e E. chaffeensis, com base... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Vector-borne diseases are worldwide important to human and animal health. Recently, several studies have been done aiming to investigate the role of wild animals in the epidemiology of these diseases. The identification of wild reservoirs for these hemoparasites would help in a better understanding of the epidemiology of these diseases, mainly that with zoonotic character. The present work aimed to investigate the presence of infection or exposure to Anaplasmataceae (Ehrlichia canis, E. chaffeensis, E. ewingii, Neorickettsia risticii, N. helminthoeca, Anaplasma platys e A. phagocytophilum) and Rickettsiaceae (Orientia tsutsugamushi and Spotted Fever and Typhus Group Rickettsia sp.), Babesia sp., Cytauxzoon sp., hemotrophic hemoplasmas (Mycoplasma haemofelis, Candidatus M. haemominutum, Candidatus M. turicensis, M. haemocanis e Candidatus M. haematoparvum) and Hepatozoon sp. in captive wild carnivores blood samples by molecular and serological methods. Blood samples were collected from 167 wild felids and 100 wild canids, maintained in captivity in zoos from São Paulo and Mato Grosso states, and Distrito Federal. Twelve felids (7.2%) and three canids (3%) were seropositive to E. canis. Only one canid (1%) was seropositive to A. phagocytophilum. None was seropositive to E. chaffeensis neither N. risticii. The phylogenetic analysis of 350bp of 16S rRNA gene was not sufficiently robust to support the differentiation of Ehrlichia species. The Ehrlichia spp. DNA found in four felids was in a distinct clade from E. chaffeensis and E. canis by omp-1 phylogenetic analysis. The phylogenetic analysis of dsb gene showed the infection by E. canis in one sampled crab-eating fox. Seventeen felids (10%) and ten canids (10%) was positive to Anaplasma spp. PCR, which was in the same clade than A. phagocytophilum and A. platys by... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor