Made available in DSpace on 2016-06-07T17:12:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-13. Added 1 bitstream(s) on 2016-06-07T17:16:59Z : No. of bitstreams: 1 000865267.pdf: 860727 bytes, checksum: 462d816a3edd9a695666266dd28a3c7f (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente estudo teve como objetivo avaliar o efeito de diferentes métodos de remoção do excesso de cimento e do polimento na formação de biofilme e micromorfologia na região de margem dente/restauração. A partir de dentes bovinos, foram obtidos 96 blocos de dentina (4 mm x 8 mm x 2 mm) que foram moldados e reproduzidos em gesso tipo IV, sobre os quais foram produzidos 96 blocos prensados de cerâmica (Vita PM9, Vita Zahnfabrik; 4 mm x 8 mm x 2 mm) pela técnica de cera perdida. Os blocos de dentina e seus respectivos blocos cerâmicos foram cimentados com um cimento resinoso auto-adesivo (RelyX U200, 3M ESPE) e o excesso de cimento foi removido utilizando diferentes técnicas: MBr: microbrush e fotoativação, MBr-Pol: microbrush, fotoativação e polimento, Pi: pincel e fotoativação, Pi-Pol: pincel, fotoativação e polimento, Foto- Expl: 5 s de fotoativação inicial, explorador e fotoativação final, Foto-Expl- Pol: 5 s de fotoativação inicial, explorador, fotoativação final e polimento, Foto-Bi: 5 s de fotoativação inicial, bisturi e fotoativação final, Foto-Bi-Pol: 5s de fotoativação inicial, bisturi, fotoativação final e polimento. Após 24 h, a rugosidade da região de margem das amostras foi analisada utilizando um rugosímetro (Mitutoyo SJ-400 Tóquio, Japão; três medições em cada amostra). Análise micromorfológica da região foi obtida por microscópio estereoscópico e MEV. Em seguida, as amostras foram contaminadas em caldo de sacarose com suspensão padronizada com Streptococcus mutans, Staphylococcus aureus e Candida albicans e incubados por um período de 48 h. As amostras foram analisadas quantitativamente para aderência bacteriana na região da margem por microscopia de varredura confocal a laser e contagem das unidades formadoras de colônias (UFC/mL), e analisadas qualitativamente usando MEV. Os dados de rugosidade superficial (Ra) foram submetidos à análise de variância (2- way), teste de Tukey.. / Abstract This study evaluated the effects of excess cement removal techniques, with or without posterior polishing, on the biofilm formation and micromorphology in the marginal region of the tooth/restoration. From bovine teeth, 96 dentin blocks (4 x 8 x 2 mm) were produced, molded and reproduced in type IV gypsum, on which 96 pressed ceramic blocks (Vita PM9 4 mm x 8 mm x 2 mm, Vita Zahnfabrik) were produces via lost wax technique. The dentin blocks and their respective ceramic blocks were cemented with a self-adhesive resin-cement (RelyX U200, 3M ESPE) and cement excess was removed using different techniques, followed by polishing with silicone tips or, in some cases, not polished at all: MBr: microbrush and photoactivation, MBr-Pol: MBr + polishing, Pi: brush and photoactivation, Pi-Pol: PI + polishing, Photo-Expl: 5 s initial photoactivation, explorer and final curing, Photo-Expl-Pol: Photo-Expl + polishing, Photo-Bi: 5 s initial photoactivation, scalpel and final curing, Photo-Bi-Pol: Photo-Bi + polishing. After 24 hours, the samples marginal region roughness was analyzed using a profilometer (Mitutoyo SJ-400 Tokyo, Japan; three measurements on each sample). Micromorphological analyses of the region were performed by stereoscopic microscope and SEM. Then the samples were contaminated with sucrose broth standardized suspension with Streptococcus mutans, Staphylococcus aureus and Candida albicans and incubated for a period of 48 hours. The samples were quantitatively analyzed for bacterial adherence in the marginal region by confocal laser scanning microscopy and counting of colony forming units (CFU/ml), and qualitatively analyzed using SEM. Roughness data (Ra) were submitted to 2-way ANOVA, Tukey test (5%) and Student's-t tests. CFU, Biomass and bio thickness data were analyzed by Kruskal Wallis', Mann-Whitney's e Dunn's tests. The removing technique statistically influenced the roughness (Ra; p ˂ 0.05), when comparing polished and unpolished...

Made available in DSpace on 2016-08-12T18:48:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-12-03. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-12T18:51:10Z : No. of bitstreams: 1 000864610.pdf: 3089089 bytes, checksum: e31156d3741c67e09c6b97faabdaf165 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Photobacterium damselae subsp. piscicida (Phdp) é importante agente causal de septicemia e pseudotuberculose, respectivamente nas fases aguda e crônica em peixes marinhos. O método de imunização e tratamento das infecções bacterianas em peixes é limitado à imunização ativa, com demanda bioenergética celular para gerar a resposta imune humoral. O uso de antibióticos na água, como forma terapêutica, resulta em resíduos na carne do peixe e no consumidor final humano, favorecendo o desenvolvimento da resistência microbiana. Este estudo teve como objetivos a produção e purificação de anticorpos IgY policlonais, extraídos da gema do ovo de galinha e específicos para as proteínas citoplasmáticas e de membrana bacteriana de Phdp e seus efeitos no controle da sepse aguda em Rachycentron canadum infectados experimentalmente. Os resultados demonstram redução do acúmulo de células na inflamação aguda induzida, pela inoculação da bactéria homóloga na cavidade celomática e na atividade respiratória de leucócitos sanguíneos nos grupos que receberam anticorpos IgY 48 horas e 15 dias antes do desafio. Verificou-se ainda redução da disseminação bacteriana em fígado, rim, baço e coração que foi correlacionada com a diminuição das lesões renais e hepáticas e demonstrada no perfil bioquímico e histopatológico. Os resultados são promissores no que tange ao uso da imunoglobulina Y como método profilático e na imunoterapia de infecções bacterianas em organismos aquáticos / The Photobacterium damselae ssp. piscicida is an important causative agent of septicemia and pseudotuberculosis in the acute and chronic phases in marine fish, respectively. The method for immunization and treatment of bacterial infections in fish is limited to the active immunization, which demands cellular bioenergy to generate humoral immune response. The use of antibiotics in the water as a form of therapy results in residues in the meat that will be consumed by humans, favoring the development of microbial resistance. Thus, the aim of the study was to produce and purify polyclonal IgY, specific for membrane proteins of P. damselae ssp. piscicida (PMBphdp), extracted from the yolk of laying hens, and to observe its effects on the control of acute sepsis in experimentally infected Rachycentron canadus. The results showed reduction of cell accumulation in acute inflammation induced by inoculation of the homologous bacteria in the coelomic cavity and decrease in the respiratory activity of blood leukocytes in groups receiving IgY antibodies at 48 hours and 15 days before the challenge. It was also observed the reduction of bacterial dissemination to the liver, kidney and heart which was correlated with the decrease in liver and kidney damage, which was demonstrated by the biochemical and histopathological profile. The results are promising regarding the use of immunoglobulin Y as prophylactic method and for immunotherapy of microbial infections in aquatic organisms

O gênero Proteus é caracterizado pela rápida mobilidade, fenômeno denominado swarming . Quanto à homologia de seu DNA, apresenta apenas uma discreta relação com o da Escherichia coli. Freqüentemente relacionado com infecções urinárias, facilitadas pela sua capacidade em degradar uréia, tem sido encontrado colonizando cateteres e sondas vesicais, principalmente a espécie Proteus mirabilis. Devido a sua crescente importância na prática clínica, tanto como agente infeccioso de difícil erradicação, quanto como microrganismo com possibilidade de produzir β-lactamases de espectro expandido, seu controle no ambiente hospitalar tornou-se essencial. A necessidade da correta identificação dessa bactéria estimulou com que métodos de identificação molecular sejam constantemente estudados e aprimorados para essa finalidade. Métodos baseados em PCR têm se mostrado úteis, mas precisam ser validados para a rotina laboratorial. Diversos fatores de patogenicidade, ou seja, características biológicas de Proteus que favorecem a sua participação em processos infecciosos têm sido identificados, tais como: a capacidade de mobilidade e fixação celular, produção de protease, urease e hemolisina. Diversos autores inferem que a correta co-regulação desses fatores de virulência durante a diferenciação de swarming está relacionada com a capacidade de colonizar e invadir o tecido do hospedeiro. Vários estudos sugerem que extratos vegetais podem ser importantes produtos no controle de P. mirabilis ao interferir em sinais de quorum sensing , e consequentemente, na diferenciação celular e expressão de fatores de virulência. Neste sentido, os terpenos, compostos presentes em óleos essenciais, podem representar uma alternativa viável no controle de infecções por esses microrganismos. As proteases microbianas vêm se destacando como importantes fatores de virulência devido a ação direta sobre proteínas do hospedeiro, particularmente imunoglobulinas. O estudo em P. mirabilis tem sido focalizado na protease ZapA (mirabilisina), enzima capaz de degradar IgA, IgG, entre outras proteínas. Trabalhos relatam que não somente ZapA é regulada durante o swarming , mas também hemolisinas, fatores ligados à diferenciação celular e hiperprodução do flagelo. Assim sendo, na presente tese foram avaliados distintos sistemas via PCR (RAPD, ERIC-PCR, REP-PCR, BOX-PCR e ISSR) para caracterização molecular de isolados clínicos de P. mirabilis, o efeito de monoterpenos sobre a diferenciação celular e a produção de fatores de patogenicidade dessas bactérias, e realizado um estudo bioinformático sobre o complexo de metaloproteases com base no recentemente publicado genoma de P. mirabilis. / Submitted by Marcelo Teixeira (mvteixeira@ucs.br) on 2014-05-22T17:39:53Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Lessandra Michelim.pdf: 1136815 bytes, checksum: 25bc56ba17160011b1aba3b4e7732643 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-05-22T17:39:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Lessandra Michelim.pdf: 1136815 bytes, checksum: 25bc56ba17160011b1aba3b4e7732643 (MD5) / O gênero Proteus é caracterizado pela rápida mobilidade, fenômeno denominado swarming . Quanto à homologia de seu DNA, apresenta apenas uma discreta relação com o da Escherichia coli. Freqüentemente relacionado com infecções urinárias, facilitadas pela sua capacidade em degradar uréia, tem sido encontrado colonizando cateteres e sondas vesicais, principalmente a espécie Proteus mirabilis. Devido a sua crescente importância na prática clínica, tanto como agente infeccioso de difícil erradicação, quanto como microrganismo com possibilidade de produzir β-lactamases de espectro expandido, seu controle no ambiente hospitalar tornou-se essencial. A necessidade da correta identificação dessa bactéria estimulou com que métodos de identificação molecular sejam constantemente estudados e aprimorados para essa finalidade. Métodos baseados em PCR têm se mostrado úteis, mas precisam ser validados para a rotina laboratorial. Diversos fatores de patogenicidade, ou seja, características biológicas de Proteus que favorecem a sua participação em processos infecciosos têm sido identificados, tais como: a capacidade de mobilidade e fixação celular, produção de protease, urease e hemolisina. Diversos autores inferem que a correta co-regulação desses fatores de virulência durante a diferenciação de swarming está relacionada com a capacidade de colonizar e invadir o tecido do hospedeiro. Vários estudos sugerem que extratos vegetais podem ser importantes produtos no controle de P. mirabilis ao interferir em sinais de quorum sensing , e consequentemente, na diferenciação celular e expressão de fatores de virulência. Neste sentido, os terpenos, compostos presentes em óleos essenciais, podem representar uma alternativa viável no controle de infecções por esses microrganismos. As proteases microbianas vêm se destacando como importantes fatores de virulência devido a ação direta sobre proteínas do hospedeiro, particularmente imunoglobulinas. O estudo em P. mirabilis tem sido focalizado na protease ZapA (mirabilisina), enzima capaz de degradar IgA, IgG, entre outras proteínas. Trabalhos relatam que não somente ZapA é regulada durante o swarming , mas também hemolisinas, fatores ligados à diferenciação celular e hiperprodução do flagelo. Assim sendo, na presente tese foram avaliados distintos sistemas via PCR (RAPD, ERIC-PCR, REP-PCR, BOX-PCR e ISSR) para caracterização molecular de isolados clínicos de P. mirabilis, o efeito de monoterpenos sobre a diferenciação celular e a produção de fatores de patogenicidade dessas bactérias, e realizado um estudo bioinformático sobre o complexo de metaloproteases com base no recentemente publicado genoma de P. mirabilis.

Glicerol é um álcool gerado na produção de biodiesel, que corresponde 10% em relação ao biocombustível. Devido à crescente produção de biodiesel, pode ser utilizado como substrato para a obtenção de outros compostos, como o 2,3-butanodiol, através de vias fermentativas. Esta substância, que tem potencial de aplicação industrial e como combustível, pode ser obtida pela fermentação de glicerol pela bactéria anaeróbia facultativa Klebsiella oxytoca. Neste trabalho foram avaliados parâmetros e condições operacionais para o cultivo de K. oxytoca ATCC 8724, visando à obtenção de 2,3- butanodiol a partir de glicerol. Em razão do equilíbrio observado entre 2,3-butanodiol e acetoína, em proporção significativamente maior para o primeiro, no metabolismo fermentativo de K. oxytoca, a discussão dos resultados deste trabalho levam em conta a soma das concentrações destes compostos. Os resultados indicaram que este microrganismo metaboliza eficientemente o glicerol, visto que a velocidade média de crescimento celular neste substrato, em 8 horas de cultivo em frascos sob agitação, foi de 0,44 g/L/h, superior à obtida com glicose (0,38 g/L/h) nas mesmas condições. Observou-se que para substratos sacaríneos, que o metabolismo microbiano pode ser dividido em duas fases: na primeira fase, sem limitação de oxigênio, ocorre acentuado crescimento celular, em razão da prevalência da respiração, que resulta em substancial ganho energético para o microrganismo, enquanto na segunda fase, com limitação de oxigênio dissolvido, o fluxo de carbono é cada vez mais dirigido à formação de produtos de fermentação. Assim, em ensaios em regime descontínuo conduzidos em biorreator de bancada, o uso de uma velocidade característica de transferência de oxigênio (OTR) intermediária, da ordem de 17 mmol/L/h, proporcionou resultados superiores em termos de produção de 2,3-butanodiol, com conversão de 60 g/L de glicerol em 17,3 g/L do produto. Em regime descontínuo, a mais alta conversão de glicerol em produto foi alcançada com concentração inicial de substrato de 129 g/L, sendo produzidos, em 48 horas, 53,6 g/L de 2,3-butanodiol, o que significa um rendimento superior a 83% em relação ao máximo teórico. Com concentrações iniciais de glicerol de até 60 g/L, não foi constatado efeito inibitório sobre o crescimento celular. Por outro lado, o uso de 160 g/L de glicerol inicial levou a uma drástica redução do rendimento do processo (apenas 56,3%) e a uma concentração residual de substrato de 98 g/L, após 72 de cultivo. Com a condução do processo em regime descontínuo alimentado, como alternativa para contornar os efeitos de inibição pelo substrato, resultados expressivos foram alcançados com a massa de glicerol equivalente à que seria necessária para ter-se 202 g/L em regime descontínuo. Nestas condições, 92,1 g/L de 2,3-butanodiol e rendimento de 92,6%, foram alcançados, em 84 horas de fermentação. Os resultados revelam, o grande potencial de uso de glicerol como substrato para a produção de 2,3-butanodiol em escala industrial. / Submitted by Ana Guimarães Pereira (agpereir@ucs.br) on 2015-02-24T17:53:50Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Tiago Romio.pdf: 1717457 bytes, checksum: 861ff4780512e09b8f504992b102d1ec (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-24T17:53:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Tiago Romio.pdf: 1717457 bytes, checksum: 861ff4780512e09b8f504992b102d1ec (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Glycerol is a by-product of biodiesel production, which accounts for approximately 10% of the biofuel. Since a large volume of it is formed in industry, glycerol could be used as a substrate to obtain other compounds, such as 2,3-butanediol, through fermentative routes. This substance, which has potential for application in industry and as fuel, can be obtained by glycerol fermentation with the facultative anaerobe bacterium Klebsiella oxytoca. In this work, parameters and operational conditions for the cultivation of K. oxytoca ATCC 8724, envisaging 2,3-butanediol production from glycerol, were assessed. Due to the equilibrium between 2,3-butanediol and acetoin, in a significantly higher proportion for the first product, in the fermentative metabolism of K. oxytoca, the discussion of this work takes in account the sum of concentrations of these compounds. The results have shown that the microorganism is able to efficiently metabolize glycerol once cell growth rate on this substrate, after 8 hours of cultivation in shake flasks, was 0.44 g/L/h, higher than that obtained with glucose (0.38 g/L/h) under the same conditions. As previously described for saccharides, it was observed that the microbial metabolism can be divided into two phases: in the first phase, without limitation of oxygen, an intense cell growth occurs due to the prevalence of respiration, that results in a substantial gain of energy for the microorganism, whereas in the second phase, under oxygen limitation, most of carbon flux is driven to the formation of fermentation products. Thus, in batch runs carried out in a bench bioreactor, the use of an intermediate characteristic oxygen transfer rate (OTR) of about 17 mmol/L/h, led to superior results in terms of 2,3-butanediol production, with conversion of 60 g/L of glycerol to 17.3 g/L of product. In batch mode, the highest conversion of glycerol to product was achieved with 129 g/L of initial substrate concentration, with the production of 53.6 g/L 2,3-butanediol, in 48 hours, which means a yield of 83% in relation to the theoretical maximum. With initial glycerol concentrations up to 60 g/L, no inhibitory effect on cell growth was observed. On the other hand, the use of 160 g/L of glycerol led to a drastic decrease in the process yield to 56.3% and to a residual concentration of substrate of 98 g/L after 72 h of cultivation. By carrying out the process in fed-batch mode, as an alternative to overcome the substrate inhibitory effects, remarkable results have been attained with the mass of glycerol that would be needed to have an initial concentration of 202 g/L in batch mode. Under these conditions, a final concentration of 92.1 g/L of 2,3-butanediol, corresponding to a yield of 92.6%, was achieved after 84 hours of fermentation. The results show clearly the high potential of the use of glycerol as a substrate for 2,3- butanediol production in industrial scale.

Esta dissertação analisa o meio ambiente do trabalho no Brasil, dando especial ênfase para o trabalho na construção civil, através da análise de dados oficiais sobre os acidentes de trabalho e as doenças profissionais deste setor, bem como suas principais irregularidades e as formas de combatê-las. Além disso, também é analisada a aplicação dos Princípios de Direito Ambiental na promoção de um meio ambiente de trabalho saudável e adequado no setor da consA criação de suínos representa uma importante atividade econômica, sendo o Brasil o quarto exportador de carne suína. O aumento da participação brasileira no mercado externo depende da adequação às normas internacionais de qualidade microbiológica nos produtos. Entre os microrgansmos encontrados em carnes suínas destacam-se as bactérias dos gêneros Salmonella, Escherichia,, Yersinia, Aeromonas, Listeria, Staphylococcus, Campylobacter, Bacillus, Clostridium. Aeromonas é um gênero de bactérias enteropatogênicas emergente encontrado no trato intestinal de divesos animais, incluindo o porco. No presente trabalho foi avaliada a ocorrência de Aeromonas em carcaças suínas na entrada de abate, utilizando plaqueamento e PCR do gene lipA. Os isolados foram classificados através de testes bioquímicos e RFLP-PCR 16S rRNA, e avaliados quanto à resistência a antibióticos e fatores de virulência. Os resultados obtidos mostraram que a amplificação por PCR do gene lipA representa um método rápido, eficiente e sensível de determinação da presença de Aeromonas em amostras de origem animal. Elevada incidência de Aeromonas foi constatada tanto por PCR-lipA (97%), quanto por plaqueamento (86,7%). As contagens bacterianas em carcaças suínas foi da ordem de 1 a 4 logUFC/100cm2. As espécies de Aeromonas mais prevelentes em suínos foram A. media (35,7%), A. hydrophila (26,2%) e A. caviae (21,4%). A maior parte dos isolados apresentaram produção de mais de um fator de virulência, indicando o seu potencial patogênico. A alta frequência observada de isolados resistentes a sulfametoxazol/trimetoprima e tetraciclina é indicativo do uso indiscriminado destes antibióticos durante a criação de suínos. De um modo geral os dados reforçam a necessidade de avaliação de Aeromonas em amostras animais e alimentos derivados, assim como o potencial do PCR-lipA na determinação qualitativa destas bactérias. / Submitted by Ana Guimarães Pereira (agpereir@ucs.br) on 2015-09-21T18:37:24Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Roberto Francisco Lucena.pdf: 1252163 bytes, checksum: c106b386c62f574352d7e72d7c4af81c (MD5) / Made available in DSpace on 2015-09-21T18:37:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Roberto Francisco Lucena.pdf: 1252163 bytes, checksum: c106b386c62f574352d7e72d7c4af81c (MD5) / Pork production represents a very important economic activity in South Brazil. Today, Brazil hold the forth place in pork meat international marker. The expansion of Brazilian exports depends of the adequation to the international roules of microbiological quality. Among the microorganisms currently found in porc meat, the most importants belong to the genera: Salmonella, Escherichia,, Yersinia, Aeromonas, Listeria, Staphylococcus, Campylobacter, Bacillus, Clostridium. Aeromonas is a genus of emmergent enteropathogenic bacteria found in the intestinal tract of several animals, including pigs. In the present work it was evaluated the occurrence of Aeromonas in carcasses of pig using plating and PCR-lipA methods. The isolates were classified by biochemical tests and RFLP-PCR 16S rRNA, and evaluated for antibiotic resistance and the production of virulence factors. The results obtained showed that PCR amplification of lipA gene represents a rapid, efficient and sensible method to determine the presence of Aeromonas in animal samples. High incidence of Aeromonas in carcasses of pig was verified both by PCR-lipA (97%), and a conventional plating method (86.7%). Bacterial counts in carcasses of pig ranged from 1 to 4 logUFC/100cm2. The most prevalente Aeromonas species isolated from carcasses of pig were A. media (35,7%), A. hydrophila (26,2%) and A. caviae (21,4%). Most isolates showed the production of more than one virulence factor, indicating their pathogenic potential. The hig frequency of sulfametoxazol/trimetoprima and tetraciclina resistant isolates is an indicative of the indiscriminate use of these antibiotics during pig production. In general, the present results reinforce the necessity of Aeromonas evaluation in animal samples and derived products, as well as the potential of PCR-lipA in the qualitative determination of Aeromonas.

Polihidroxialcanoatos são polímeros 100% biodegradáveis produzidos intracelularmente por bactérias, que possuem características semelhantes às de polímeros de origem petrolífera e configuram uma alternativa a estes polímeros, os quais devido ao seu crescente acúmulo na natureza vêm se tornando um grave problema ambiental. O poli(3-hidroxibutirato) (PHB) é um poliéster que faz parte deste grupo, sendo o mais amplamente estudado. Visando o aproveitamento do soro de leite, que é gerado em volumes elevados na produção de queijo, e ainda uma possível redução de custos do processo de produção de PHB, este trabalho avaliou a produção deste polímero por meio das bactérias Alcaligenes latus e Bacillus megaterium. Inicialmente investigou-se o efeito de diferentes concentrações iniciais de lactose e de diferentes tempos de processo, em ensaio realizado em agitador orbital a 35 °C e 200 rpm. Definiu-se também qual das bactérias apresentou melhor desempenho e a concentração inicial de lactose por meio de ensaio em agitador orbital com as mesmas condições mencionadas anteriormente. Estes resultados foram avaliados por meio de planejamento experimental fatorial 2³ sem ponto central. Avaliou-se o efeito da neutralização do meio de cultivo preparado com o sobrenadante obtido após a precipitação ácida das proteínas do soro de leite com hidróxido de amônio (NH4OH), hidróxido de potássio (KOH) e hidróxido de sódio (NaOH) (soluções 10% m/v) por meio de análise estatística de um fator a vários níveis (ANOVA). Ainda, foram comparados (por meio de ANOVA) quatro meios de cultivo (produzidos com lactose, soro de leite, sobrenadante obtido após a precipitação ácida das proteínas do soro de leite, lactose extraída por processos de separação por membranas) por meio de ensaio em agitador orbital nas mesmas condições previamente mencionadas. O meio que proporcionou maior concentração final de PHB foi utilizado em ensaio em biorreator de bancada, a 35 °C e pH controlado em 6,5. Na primeira fase, identificou-se que para a bactéria A. latus a concentração inicial de lactose mais adequada foi a de 20 g.L-1, com produção máxima de PHB de 0,55 g.L-1 em 12 horas, enquanto que para a bactéria B. megaterium foi de 16 g.L-1, com produção máxima de PHB de 0,095 g.L-1 também em 12 horas. Com a posterior análise estatística, verificou-se que não houve diferença significativa na geração de produto com as concentrações iniciais de lactose de 16 e 20 g.L-1. A bactéria que proporcionou maior produção de polímero foi a A. latus, enquanto o meio foi o composto pelo sobrenadante obtido após a precipitação ácida das proteínas do soro de leite (neutralizado com hidróxido de amônio - melhor resultado na neutralização). No ensaio em biorreator de bancada (TecBio 7,5, Tecnal, Brasil), constatou-se que o tempo total de processo foi de 11,6 horas, com máxima velocidade específica de crescimento de 0,428 h-1, máxima velocidade específica de formação de produto de 0,026 g.L-1.h-1, máxima velocidade específica de consumo de substrato de 1,036 g.L-1.h-1, fator de rendimento em células de 0,211 g.g-1, fator de rendimento em produto de 0,024 g.g-1 e produtividade volumétrica de 0,014 g.L-1.h-1. Ainda, por meio de caracterização do PHB extraído e do PHB padrão por calorimetria exploratória diferencial, termogravimetria e espectroscopia no infravermelho com transformada de Fourier, verificou-se que o polímero produzido possui propriedades semelhantes às do padrão, demonstrando que a produção de PHB por A. latus e B. megaterium utilizando soro de leite é factível. / Submitted by Ana Guimarães Pereira (agpereir@ucs.br) on 2016-07-01T14:29:10Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Karina Hammel Berwig.pdf: 2733803 bytes, checksum: fc3f784dd87e48cbeb45f4a3784a5219 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-01T14:29:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Karina Hammel Berwig.pdf: 2733803 bytes, checksum: fc3f784dd87e48cbeb45f4a3784a5219 (MD5) Previous issue date: 2016-07-01 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, CAPES. / Polyhydroxyalkanoates are 100% biodegradable polymers produced intracellularly by bacteria, and have characteristics similar to petroleum-based polymers. They emerge as an alternative to recalcitrant polymers, that because of its growing accumulation in nature are becoming a serious environmental problem. Poly(3-hydroxybutyrate) (PHB) is a polyester which is part of this group, being the most studied. In order to utilize whey, which is generated in large volumes in cheese production, and also to enable a possible cost reduction of the PHB production process, this study evaluated the production of this polymer by Alcaligenes latus e Bacillus megaterium. First of all, the effect of different initial lactose concentrations and different process times were investigated in an orbital shaker at 35 °C and 200 rpm. In addition, it was defined which bacteria showed best results and also the appropriate initial lactose concentration in an orbital shaker in the same conditions mentioned. The results were evaluated by a factorial 2³ (without central point) experimental design. The neutralization of the medium (prepared with the supernatant obtained after the acid protein precipitation of whey) with ammonium hydroxide (NH4OH), potassium hydroxide (KOH) and sodium hydroxide (NaOH) (10% w/v solutions) was evaluated by a one factor statistical analysis (ANOVA). Also, four culture mediums (lactose, whey, supernatant obtained after acid protein precipitation of whey, lactose obtained by membrane filtration of whey) were compared through an experiment in orbital shaker in the same conditions used before. The results were also evaluated by a one factor statistical analysis. The medium with the best results was used in a bioreactor experiment, at 35 °C and pH controlled at 6.5. For A. latus the most appropriate initial lactose concentration was 20 g.L-1, with a maximum PHB concentration of 0.55 g.L-1 in 12 hours. For B. megaterium, the initial lactose concentration was 16 g.L-1, and a maximum PHB concentration of 0.095 g.L-1 also in 12 hours. With the posterior statistical analysis it was seen that there was no significant difference in PHB production with initial lactose concentrations of 16 and 20 g.L-1. A. latus showed better results for PHB production, while the best medium was the one produced with the supernatant obtained after acid protein precipitation of whey (neutralized with ammonium hydroxide - best neutralization results). In the bioreactor experiment was observed that the total process time was 11.6 hours, with a maximum specific growth rate of 0.428 h-1, maximum specific product formation rate of 0.026 g.L-1.h-1, maximum specific substrate consumption rate of 1.036 g.L-1.h-1, cell yield of 0.211 g.g-1, PHB yield of 0.024 g.g-1 and volumetric productivity of 0.014 g.L-1.h-1. Finally, it was seen, through the polymer characterization by differential scanning calorimetry, thermogravimetry and Infrared Spectroscopy with Fourier transform, that the produced polymer has similar characteristics to those of the standard PHB, showing that the production of PHB by A. latus and B. megaterium using milk whey is feasible.

Orientador: Dejanira de Franceschi de Angelis / Coorientador: Alexandre Nunes Ponezi / Banca: Clóvis Parazzi / Banca: Jonas Contiero / Banca: Jorge Hori / Banca: Luciana Fontes Coelho / Resumo: Neste trabalho avaliou-se a produção de ácido lático por bactérias isoladas de alimentos deteriorados e da agroindústria. As cepas foram isoladas e purificadas pela técnica de diluição seriada e plaqueamento por superfície, utilizando solução salina e meio MRS sólido com adição de actidiona 0,5% e CaCO3 0,3%, respectivamente. As fermentações foram conduzidas em frascos do tipo Schott, em meios MRS e MRS modificado com 40% de glicose, com e sem ajuste do pH, a temperatura de 35°C ± 2°C por 96h. O inoculo foi padronizado a O.D. de 0,08 a 0,1, 625nm. Durante as fermentações foram avaliados o consumo da glicose (g.L-1), o crescimento microbiano (UFC.mL-1), a produção de ácido lático (g.L-1), o rendimento (YP/S) % e a produtividade (g/L.h-1). As análises de quantificação do ácido lático foram realizadas por Lactímetro® e por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). A maior produção de ácido lático (15,60 g.L-1) foi obtida pela Cepa 22 em MRS modificado com um rendimento (YP/S) de 39,0 % e produtividade de 0,41 g/L.h-1. Nas fermentações em biorreator a maior produção de ácido lático (18,23 g.L-1) foi obtida pela Cepa 16 em MRS com um rendimento (YP/S) de 91,13 % e produtividade de 3,31 g/L.h-1. As cepas 16 e 22 foram identificadas como gênero Enterococcus / Abstract: This work evaluated lactic acid production by isolated bacteria from spoiled food and agroindustry. Strains were isolated and purificated by serial dilution in sterile saline solution and platings in MRS agar with 0.5% actidione and 0.3% of CaCO3. Fermentations were performed in MRS media and MRS modified media with glucose 40%, with and without pH adjustment at temperature 35°C ± 2°C for 96h. The inoculum was standardized OD 0.08 to 0.1 at 625nm. The consumption of glucose (g.L-1), microbial growth (CFU. mL-1), lactic acid production (g.L-1), yield (YP/S)% and productivity (g/L.h-1) were determined during fermentations. Lactic acid quantification were performed by Lactimeter® and high performance liquid chromatography (HPLC). The higher lactic acid content observed was (15.60 g.L-1) strain 22 in MRS modified media with a yield (YP/S) of 39.0 % and productivity of 0.41 g/L.h-1. In fermentations by bioreactor the higher lactic acid content observed was (18.23 g.L-1) strain 16 in MRS media with a yield (YP/S) of 91.13% and productivity of 3.31 g/L.h-1. The strains 16 and 22 were identified like genus Enterococcus / Doutor

Orientador: Denise Madalena Palomari Spolidório / Banca:Juliana Rico Pires / Banca: Shelon Cristina Souza Pinto / Banca: Luciene Cristina Souza Pinto / Banca: Joni Augusto Cirelli / Resumo:Os peptídeos antimicrobianos como por exemplo a catelicina (LL-37) e as defensinas humanas (hBD-1, hBD-2 e a hBD-3) são considerados antibióticos endógenos com importante papel na prevenção das doenças periodontais, devido a sua capacidade de regulação da resposta imune, sendo que os mesmos podem ser degradados pelos periodontopatógenos. Terapias que aumentem a produção destes peptídeos pelas próprias células do organismo, assim como a associação destes peptídeos com compostos naturais os quais possam agir em sinergismo na regulação da resposta imune, podem ser considerados novas estratégias para o melhor controle das doenças periodontais. Portanto os objetivos deste estudo in vitro foram: i) Avaliar a capacidade do extrato do chá verde (Camellia sinensis) e do seu polifenol, o EGCG, sobre a expressão gênica de hBD-1 e hBD-2 pelas células epiteliais gengivais (B11), sobre a degradação das mesmas frente ao P. gingivalis, ii) Através da utilização do modelo 3D de co-cultura celular, avaliar a capacidade antiinflamatória dos peptídeos hBD-3 e LL-37 quando em associação sobre a produção de citocinas, quimiocinas e fatores de crescimento, iii) Avaliar a capacidade anti-inflamatória da associação do EGCG e do polifenol proveniente do cranberry, o AC-PACs, com o peptídeo LL-37 sobre a produção de citocinas, quimiocinas e fatores de crescimento em modelo de co-cultura celular. As células epiteliais gengivais (B11) foram estimuladas com o extrato do chá verde e com o EGCG na presença e ausência de inibidores específicos. A produção e expressão gênica de hBD-1 e hBD-2 foram quantificados respectivamente pelas técnica de ELISA e qPCR. A capacidade do extrato do chá verde e do EGCG em proteger a degradação de hBDs pelo P. gingivalis foi mensurado através da técnica de ELISA. Foi desenvolvido um modelo em 3D de co-cultura de fibroblastos gengivais embebidos em....(Resumo completo, clicar acesso eletrôni / Abstract: The antimicrobial peptides LL-37, hBD-1, hBD-2 and hBD-3 are considered an endogenous antibiotic, with important role in the prevention of periodontal diseases due to their ability to regulate the immune response. However those peptides could be degraded by periodontal pathogens. Therefore, therapies able to up regulate the secretion of those peptides by human cells, and the association of antimicrobial peptides with natural compounds, which may act in synergism to modulate the immune response, may be a novel approach for effectively controlling periodontal diseases. The aim of this in vitro study were: i) investigate the ability of green tea extract and EGCG to induce hBD-1 and hBD-2 secretion and gene expression by gingival epithelial cells (B11) and to protect hBDs from degradation by P. gingivalis, ii) A 3D co-culture model of gingival epithelial cells and fibroblasts stimulated with A. actinomycetemcomitans LPS (1 μg/ml) were used to investigated the anti-inflammatory properties of the hBD-3, LL-37, ACPACs and EGCG and to determine whether LL-37 acts in synergy with AC-PACs, EGCG and hBD-3. Gingival epithelial cells were stimulated with green tea extract or EGCG in the presence and absence of specific inhibitors. The secretion and gene expression of hBD-1 and hBD-2 was respectively measured by ELISA and qPCR. The ability of green tea extract and EGCG to prevent hBDs degradation by P. gingivalis present in a bacterial culture supernatant was evaluated by ELISA. A 3D co-culture model composed of gingival fibroblasts embedded in a collagen matrix overlaid with gingival epithelial cells had a synergistic effect with respect to the secretion of IL-6 and IL-8 in response to A. actinomycetemcomitans LPS stimulation compared to fibroblasts and epithelial cells individually. The 3D co-culture model was stimulated with noncytotoxic concentrations of: i) hBD-3 (10 and 20 μM) ...(Complete abstract electronic access below) / Doutor

Orientador: Antonio Carlos Maringoni / Coorientador: Tadeu Antônio Fernandes da Silva Júnior / Banca: Luís Otavio Saggion Beriam / Banca: Renate Krause Sakate / Resumo: A podridão negra, incitada por Xanthomonas campestris pv. campestris (Xcc), é considerada a doença bacteriana mais destrutiva das brássicas em muitos países, podendo promover consideráveis reduções na produtividade. O estudo dos nichos ecológicos de sobrevivência de bactérias fitopatogênicas possui grande importância no manejo de fitobacterioses, uma vez que uma pequena quantidade de inóculo sobrevivente entre os ciclos de cultivo pode ser suficiente para iniciar uma nova epidemia no campo. Baseado nisso, o presente trabalho avaliou a sobrevivência de Xcc em diferentes ensaios, através da utilização do isolado 3098C de Xcc resistente a 100 μg/mL de rifampicina. A sobrevivência de Xcc na forma de células livres no solo foi avaliada em cinco experimentos, desenvolvidos em condições de campo, entre maio e agosto de 2014. Em condições controladas¸ foram utilizados seis tipos de solo, amostrados de diferentes áreas com cultivo ou não de brássicas. A colonização do filoplano e rizosfera de 26 espécies de plantas daninhas por Xcc também foi avaliada em experimentos de campo, entre agosto de 2014 a outubro de 2015. Nos experimentos de campo, Xcc sobreviveu entre 4 e 7 dias no solo, sendo influenciada diretamente pela temperatura e umidade, ocorridas durante os experimentos. Em condições controladas, a bactéria sobreviveu de 10 a 24 dias, sendo esses períodos influenciados pela textura, pH e teor de matéria orgânica em cada tipo de ... / Abstract: Black rot, incited by Xanthomonas campestris pv. campestris (Xcc), is the most destructive bacterial disease of brassicas in many countries, and can promote substantial reductions in productivity. The study of survival ecological niches of phytopathogenic bacteria has great importance in the management of plant bacteriosis, since a small amount of inoculum surviving among the cultivation cycle may be sufficient to initiate a new outbreak in the field. Based on this, this study evaluated the survival of Xcc in different experiments using Xcc strain 3098C, resistant to 100 μg/mL of rifampicin. The survival of Xcc as free cells in the soil was evaluated in five experiments, carried out in field conditions, between May and August, 2014. Under controlled conditions, six types of soil were used, sampled from different areas, with or without brassicas cultivation. The colonization of phylloplane and rhizosphere of 26 weed species by Xcc was also evaluated in field experiments, between August, 2014 and October, 2015. In field experiments, Xcc survived between 4 and 7 days in the soil, being directly influenced by temperature and humidity that occurred during the experiments. Under controlled conditions, the bacteria survived for 10 to 24 days, and these periods were influenced by texture, pH and organic matter content in each soil type. In weeds rhizosphere, Xcc had low capacity to survive, at most 28 days on Raphanus raphanistrum. In phylloplane, Xcc survived more than 42 days in Lepidium virginicum, and up to 70 days in Raphanus raphanistrum. Weeds from Amaranthaceae and Poaceae families did not show potential for the epiphytic survival of Xcc. / Mestre

Orientador: Ian Castro-Gamboa / Banca: Cíntia Duarte de Freitas Milagre / Banca: Flávia Talarico Saia / Resumo: O descobrimento de novas moléculas bioativas tem sido o grande al vo ao decorrer dos anos da química dos produtos naturais, particularmente, micro - organismos tem se evidenciado como uma importante fonte do descobrimento de novos fármacos. Uma ampla gama de compostos provenientes de organismos microbianos são relatados na literatura, porém, recentes pesquisas demonstram que tais micro - organismos podem sofrer indução por determinados agentes externos, químicos ou físicos, através de mecanismos de defesa ou até mesmo o mutualismo existente em determinado meio, produzindo nov as estruturas químicas, que até então, tinham sua rota b iosintética silenciada devido a metodologias padrões de cultivo isolado. Através de utilização de culturas mistas de bactérias, o presente trabalho proporciona o conhecimento da relação existente entr e Pseudoxanthomonas indica e Shigella sp., ambas provenientes da rizosfera de Senna spectabilis . Para isso, as bactérias foram cultivadas em meio de cultivo líquido czapek broth, sendo realizado o estudo do crescimento das bactérias e produção de metabolit os frente ao tempo, tendo em vista uma maximização de resultados e maior indução de compostos químicos. A utilização de ferramentas analíticas de análise rápida e eficiente como a cromatografia líquida de alta eficiência ( HPLC ) associada a espectrometria de massas de alta resolução do ( HRMS ) propiciaram a obtenção do perfil cromatográfico dos micro - organismos estudados em cultura mista e simples, sendo possível observar a existência de compostos químicos produzidos apenas em co - c ultura, evidenciado o potencial existente da abordagem utilizada. / Abstract: The discovery of new bioactive molecules has been the big target to over the ye ars the chemistry of natural products, particularly micro - organisms has been shown to be an important source of discovery of new drugs. A wide range of compounds from microbial organisms are reported in the literature, however, recent research shows that t hese micro - organisms can undergo induction by certain external, chemical or physical agents, through defense mechanisms or even the existing m utualism on a particular medium, producing new chemical structures, which until then had silenced their biosynthet ic route due to methodologies patterns of isolated farming. Through use of mixed cultures of bacteria, this study provides knowledge of the relationship between Pseudoxanthomonas indica and Shigella sp ., Both from the rhizosphere of Senna spectabilis . For this, bacteria were grown in liquid Czapek broth cultivation being conducted the study of the growth of bacteria and production of metabolites against time, with a view to maximizing results and greater induction of chemical compounds. The use of analytics quickly and efficiently analyzes such as high - performance liquid chromatograp hy tools (HPLC) associated with high resolution mass spectrometry (HRMS) enabled the obtaining of the chromatographic profile of microorganisms studied in mixed and single cultur e, and you can to observe the existence of chemical compounds produced only in co - culture demonstrated the potential of the approach used. / Mestre