Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-10-30Bitstream added on 2015-03-03T12:07:26Z : No. of bitstreams: 1 000813664.pdf: 1966919 bytes, checksum: 678f54a7263d985bcff3e4552123c64b (MD5) / O presente trabalho avaliou o uso combinado de fungos e nematoides entomopatogênicos contra o bicudo-da-cana-de-açúcar, Sphenophorus levis, e contra a broca do cupuaçu, Conotrachelus humeropictus. Contra S. levis, foi feita seleção de isolados de Beauveria bassiana e Metarhizium anisopliae em adultos da praga, e testes de uso combinado em laboratório contra as fases de larva e adulto. Em campo, em área de cana-de-açúcar infestada naturalmente com S. levis, foram realizados 5 tratamentos (nematoide Steinernema brazilense, Bio NEP®; fungo B. bassiana; combinação nematoide + fungo; inseticida químico Regent Duo® e testemunha) foi avaliada a infestação de larvas de S. levis nas soqueiras de cana-de-açúcar, antes e após um ano da aplicação. Para verificação do tipo de interação, foram coletadas amostras de solo em 3 tempos. Na pré-aplicação, após uma semana e um mês da aplicação, e avaliada a mortalidade de larvas de Galleria mellonella expostas às amostras de solo. Nos experimentos com C. humeropictus, foi feita seleção de isolados de B. bassiana em larvas de Conotrachelus psidii, usado como inseto teste. Os experimentos de campo avaliou-se a combinação de B. bassiana e S. brazilense, contra a larva de C. humeropictus. Também foi avaliada a capacidade do nematoide S. brazilense de carrear conídios de B. bassiana e M. anisopliae em solo arenoso. No resultado obtido na seleção de isolados de fungos para S. levis, IBCB 170 de B. bassiana e IBCB 383 de M. anisopliae foram os mais eficientes, promovendo 80% e 72% de mortalidade, respectivamente. No ensaio contra larva de S. levis, observou-se efeito aditivo na mistura de S. brazilense com B. bassiana, promovendo 80% de mortalidade. No ensaio contra adultos ... / This study evaluated the combined use of entomopathogenic fungi and nematodes against the sugarcane weevil, Sphenophorus levis, and against the cupuaçu fruit borer, Conotrachelus humeropictus. To S. levis, we made a strain selection of Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae against adults, and a testing of combined use in laboratory in larvae and adults of the pest. In field experiments, were applied the treatments: 1) nematode Steinernema brazilense (Bio NEP®); B. bassiana; S. brazilense + B. bassiana; chemical treatment with Regent Duo®; and control treatment. We evaluated the infestation of S. levis larvae in sugarcane ratoon, before and after one year of the application. To evaluate interactions between agents, soil samplings were performed one week, and one month after application, and evaluated the mortality of Galleria mellonella larvae exposed to these soil samples. To C. humeropictus, a strain selection of B. bassiana was made on larvae of Conotrachelus psidii (used as preliminary test), and field experiments using B. bassiana and S. brazilense against larvae of C. humeropictus. We also evaluated the ability of the nematode S. brazilense carrying conidia of B. bassiana and M. anisopliae in sandy soil. The results of strain selection to S. levis, B. bassiana IBCB 170 and M. anisopliae IBCB 383 were the most efficient, providing 80% and 72% of mortality, respectively. In tests against larvae of S. levis, additive effect was observed in the treatment S. brazilense + B. bassiana, providing 80% mortality. Against adults of S. levis, the best treatment was B. bassiana + S. brazilense, causing 40% of mortality, showing additive interaction. In the field experiments, the infestation S. levis larvae in sugarcane ratoon was reduced by all treatments, except for control. The assessment of mortality of G. mellonella exposed to soils samples showed synergistic and additive effects, one week an on ...

Orientador: Antonio Batista Filho / Banca: Luis Garrigós Leite / Banca: Dinalva Alves Mochi / Banca: Silvia Renata Siciliano Wilcken / Banca: Regiane Cristina O. Freitas Bueno / Resumo: O presente trabalho avaliou o uso combinado de fungos e nematoides entomopatogênicos contra o bicudo-da-cana-de-açúcar, Sphenophorus levis, e contra a broca do cupuaçu, Conotrachelus humeropictus. Contra S. levis, foi feita seleção de isolados de Beauveria bassiana e Metarhizium anisopliae em adultos da praga, e testes de uso combinado em laboratório contra as fases de larva e adulto. Em campo, em área de cana-de-açúcar infestada naturalmente com S. levis, foram realizados 5 tratamentos (nematoide Steinernema brazilense, Bio NEP®; fungo B. bassiana; combinação nematoide + fungo; inseticida químico Regent Duo® e testemunha) foi avaliada a infestação de larvas de S. levis nas soqueiras de cana-de-açúcar, antes e após um ano da aplicação. Para verificação do tipo de interação, foram coletadas amostras de solo em 3 tempos. Na pré-aplicação, após uma semana e um mês da aplicação, e avaliada a mortalidade de larvas de Galleria mellonella expostas às amostras de solo. Nos experimentos com C. humeropictus, foi feita seleção de isolados de B. bassiana em larvas de Conotrachelus psidii, usado como inseto teste. Os experimentos de campo avaliou-se a combinação de B. bassiana e S. brazilense, contra a larva de C. humeropictus. Também foi avaliada a capacidade do nematoide S. brazilense de carrear conídios de B. bassiana e M. anisopliae em solo arenoso. No resultado obtido na seleção de isolados de fungos para S. levis, IBCB 170 de B. bassiana e IBCB 383 de M. anisopliae foram os mais eficientes, promovendo 80% e 72% de mortalidade, respectivamente. No ensaio contra larva de S. levis, observou-se efeito aditivo na mistura de S. brazilense com B. bassiana, promovendo 80% de mortalidade. No ensaio contra adultos ... / Abstract:This study evaluated the combined use of entomopathogenic fungi and nematodes against the sugarcane weevil, Sphenophorus levis, and against the cupuaçu fruit borer, Conotrachelus humeropictus. To S. levis, we made a strain selection of Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae against adults, and a testing of combined use in laboratory in larvae and adults of the pest. In field experiments, were applied the treatments: 1) nematode Steinernema brazilense (Bio NEP®); B. bassiana; S. brazilense + B. bassiana; chemical treatment with Regent Duo®; and control treatment. We evaluated the infestation of S. levis larvae in sugarcane ratoon, before and after one year of the application. To evaluate interactions between agents, soil samplings were performed one week, and one month after application, and evaluated the mortality of Galleria mellonella larvae exposed to these soil samples. To C. humeropictus, a strain selection of B. bassiana was made on larvae of Conotrachelus psidii (used as preliminary test), and field experiments using B. bassiana and S. brazilense against larvae of C. humeropictus. We also evaluated the ability of the nematode S. brazilense carrying conidia of B. bassiana and M. anisopliae in sandy soil. The results of strain selection to S. levis, B. bassiana IBCB 170 and M. anisopliae IBCB 383 were the most efficient, providing 80% and 72% of mortality, respectively. In tests against larvae of S. levis, additive effect was observed in the treatment S. brazilense + B. bassiana, providing 80% mortality. Against adults of S. levis, the best treatment was B. bassiana + S. brazilense, causing 40% of mortality, showing additive interaction. In the field experiments, the infestation S. levis larvae in sugarcane ratoon was reduced by all treatments, except for control. The assessment of mortality of G. mellonella exposed to soils samples showed synergistic and additive effects, one week an on ... / Doutor

Orientador: Nilza Maria Martinelli / Coorientador: Marcelo da Costa Ferreira / Banca: Antonio Carlos Busoli / Banca: Ana Lúcia Benfatti González Peronti / Banca: Leila Luci Dinardo-Miranda / Banca: Fernando Cesar Pattaro / Resumo: O objetivo foi descrever características morfológicas para reconhecimento de adultos de Sphenophorus levis, e avaliar o inseticida mais adequado de acordo com a época de aplicação para o controle. Para as análises morfológicas foram coletados 20 machos e 20 fêmeas de S. levis e de Metamasius hemipterus. A caracterização macroscópica das espécies foi realizada a partir de revisão da literatura e observações adicionais de caracteres de importância taxonômica nos espécimes estudados. A eficiência de inseticidas no controle de S. levis foi avaliada em dois experimentos, um com aplicação em dezembro e outro com aplicação em junho. Foram realizados nove tratamentos, compostos por oito controles químicos e uma testemunha. Realizou-se amostragem prévia antes das aplicações, as quais foram realizadas em filete continuo, e três avaliações após a aplicação dos inseticidas, contabilizando o número de formas vivas do inseto e número de tocos totais e atacados. No final da safra foi realizado biometria e análise tecnológica. O delineamento estatístico utilizado foi em blocos ao acaso com quatro repetições, em soqueira. Os dados foram analisados a Tukey a 5% de significância. A descrição dos caracteres presentes na antena, pronoto, abdômen e forma do pigídio, foram importantes para a diagnose de cada espécie. As formas do pigídio, bem como a distribuição das cerdas no mesmo, propiciaram a determinação do sexo para ambas as espécies. Os produtos/misturas utilizados não sofreram influência da época de aplicação e não foram eficientes para o controle de Sphenophorus levis com a metodologia empregada. Faz-se necessários trabalhos com outras metodologias de aplicação para observar o efeito dos produtos/misturas utilizados / Abstract: The objective was to describe morphological characteristics for recognition Sphenophorus levis adults, as well as to assess the most appropriate insecticide according to the time of application for the control this pest. For morphological analysis were collected 20 males and 20 females of S. levis and Metamasius hemipterus. The macroscopic characterization of these species was started from literature review and additional comments from characters of taxonomic significance about the studied specimens. The efficiency of insecticides the controlling S. levis was evaluated in two experiments with application in december and the other with application in june. Were performed nine treatments, composed by eight chemical controls and a control. Was conducted previous sampling, the aplications were performed under continuous fillets. Three evaluations were carried out after the application, counting the number of insect life forms and the total number of stumps and attacked stumps. At the end of the harvest it was held biometrics and technological analysis. The design utilized was randomized block design with four replications, in ratoon. The data were analyzed by Tukey test at 5% significance. The characters present at the antenna, pronotum, abdomen, and description of the pygidium, were important for the diagnosis of each species. The pygidium form and the distribution of the bristles led to the determination of sex in both species. Products/mixtures used do not suffer from influence of application time and were not efficient for control Sphenophorus levis with the methodology employed. It is necessary, work with other application methods to observe the effect of products/mixtures used / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-09-15Bitstream added on 2014-06-13T18:44:29Z : No. of bitstreams: 1 abreu_il_dr_jabo.pdf: 406152 bytes, checksum: 68b3c6cb5d92e815f953857099241db8 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os países industrializados apresentam uma forte tendência em buscarem, cada vez mais, sistemas de controle biológico eficiente e específicos sendo menos tóxicos para os humanos e o ecossistema em geral. Os bioinseticidas à base de microrganismos entomopatogênicos não encontram grandes restrições quanto a sua utilização. Dentre as bactérias que possuem atividade entomopatogênica, Bacillus thuringiensis é a que apresenta maior valor potencial no controle dos insetos-praga, por apresentar vários genes cry e possuir mecanismos de recombinação genética como: conjugação e transformação. O objetivo desse estudo foi identificar e caracterizar a linhagem B. thuringiensis var. londrina. A análise morfológica dos cristais indica uma nova proteína Cry. Para comparação foram utilizadas as linhagens de B. thuringiensis var. tenebrionis, var. tolworthi e var. kurstaki - HD1 que possuem os genes cry3Aa, cry3Ba e cry1Aa, respectivamente. Foi realizada a extração do DNA total das quatro linhagens, em seguida esse material foi submetido à reação de PCR com os oligonucleotideos iniciadores específicos dos genes acima citado. Para a confirmação dos resultados utilizou-se a técnica de hibridização por Southern blotting e seqüenciamento dos amplicon. O amplicom para o gene cry3 obtido pela linhagem padrão B. thuringiensis var. tenebrionis foi igual ao tamanho esperado, porém o obtido pela linhagem var. londrina foi maior em números de nucleotídeo que o esperado, indicando uma possível recombinação. A técnica de Southern blotting confirmou a recombinação do gene mostrando diferenças entre as bandas das linhagens padrão e da linhagem var. londrina, confirmando assim um novo gene cry3. Os bioensaios executados com esse novo gene não indicaram eficiência para alguns insetos-praga de lavoura da ordem Lepidoptera e foram eficientes... / Industrialized countries show a strong tendency to look for efficient and specific biological control systems that are less toxic to humans and ecosystems. Bioinsecticides based on entomopathogenic microorganisms are well accepted by the public. Among those, bacteria that exhibit such entomopathogenic activities, Bacillus thuringiensis is the one with major potential over the pests, since it harbors several cry genes and holds genetic recombination mechanisms such as bacterial conjugation and transformation in order to accomplish these control procedures. The aim of this research was to identify and characterize the strain of B. thuringiensis var. londrina. As a comparison some other strains of B. thuringiensis such as B. thuringiensis var. tenebrionis, var. tolworthi and var. kurstaki - HD1 that holds the genes cry3Aa, cry3Ba and cry1Aa, were used respectively. Alkaline lysis procedure was used for the DNA extraction from the four bacterial strains followed by its use on PCR reactions using the specific primers for the genes. To confirm the results were utilized the techniques of Southern blotting hybridization and DNA sequencing. The obtained amplicons have shown a difference in size considering the pattern strains compared to the var. londrina. The genetic recombination that took place so as to generate the var. londrina cry gene was detected by Southern blotting analysis, the hybridization results confirm the genetic recombination showing the banding pattern differences that took place generating the new cry3 gene. The bioassays showed that the recombinant gene was efficient to control Sphenophorus levis (Coleopteran).

Submitted by MARINA APARECIDA VIANA DE ALENCAR null (vianama@yahoo.com.br) on 2016-02-26T17:04:47Z No. of bitstreams: 1 Tese_Marina_Aparecida_Viana_de_Alencar.pdf: 1225329 bytes, checksum: c32298de773fbb15c157d9c531076e77 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-02-26T19:15:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 alencar_mav_dr_jabo.pdf: 1225329 bytes, checksum: c32298de773fbb15c157d9c531076e77 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-26T19:15:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 alencar_mav_dr_jabo.pdf: 1225329 bytes, checksum: c32298de773fbb15c157d9c531076e77 (MD5) Previous issue date: 2016-02-02 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo foi descrever características morfológicas para reconhecimento de adultos de Sphenophorus levis, e avaliar o inseticida mais adequado de acordo com a época de aplicação para o controle. Para as análises morfológicas foram coletados 20 machos e 20 fêmeas de S. levis e de Metamasius hemipterus. A caracterização macroscópica das espécies foi realizada a partir de revisão da literatura e observações adicionais de caracteres de importância taxonômica nos espécimes estudados. A eficiência de inseticidas no controle de S. levis foi avaliada em dois experimentos, um com aplicação em dezembro e outro com aplicação em junho. Foram realizados nove tratamentos, compostos por oito controles químicos e uma testemunha. Realizou-se amostragem prévia antes das aplicações, as quais foram realizadas em filete continuo, e três avaliações após a aplicação dos inseticidas, contabilizando o número de formas vivas do inseto e número de tocos totais e atacados. No final da safra foi realizado biometria e análise tecnológica. O delineamento estatístico utilizado foi em blocos ao acaso com quatro repetições, em soqueira. Os dados foram analisados a Tukey a 5% de significância. A descrição dos caracteres presentes na antena, pronoto, abdômen e forma do pigídio, foram importantes para a diagnose de cada espécie. As formas do pigídio, bem como a distribuição das cerdas no mesmo, propiciaram a determinação do sexo para ambas as espécies. Os produtos/misturas utilizados não sofreram influência da época de aplicação e não foram eficientes para o controle de Sphenophorus levis com a metodologia empregada. Faz-se necessários trabalhos com outras metodologias de aplicação para observar o efeito dos produtos/misturas utilizados. / The objective was to describe morphological characteristics for recognition Sphenophorus levis adults, as well as to assess the most appropriate insecticide according to the time of application for the control this pest. For morphological analysis were collected 20 males and 20 females of S. levis and Metamasius hemipterus. The macroscopic characterization of these species was started from literature review and additional comments from characters of taxonomic significance about the studied specimens. The efficiency of insecticides the controlling S. levis was evaluated in two experiments with application in december and the other with application in june. Were performed nine treatments, composed by eight chemical controls and a control. Was conducted previous sampling, the aplications were performed under continuous fillets. Three evaluations were carried out after the application, counting the number of insect life forms and the total number of stumps and attacked stumps. At the end of the harvest it was held biometrics and technological analysis. The design utilized was randomized block design with four replications, in ratoon. The data were analyzed by Tukey test at 5% significance. The characters present at the antenna, pronotum, abdomen, and description of the pygidium, were important for the diagnosis of each species. The pygidium form and the distribution of the bristles led to the determination of sex in both species. Products/mixtures used do not suffer from influence of application time and were not efficient for control Sphenophorus levis with the methodology employed. It is necessary, work with other application methods to observe the effect of products/mixtures used.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-06-12Bitstream added on 2014-06-13T20:43:08Z : No. of bitstreams: 1 rossi_jr_dr_jabo_parcial.pdf: 88852 bytes, checksum: f0badc33849f0f480aac58f70772e600 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-01-16T10:37:50Z: rossi_jr_dr_jabo_parcial.pdf,Bitstream added on 2015-01-16T10:38:35Z : No. of bitstreams: 1 000671176.pdf: 1093299 bytes, checksum: d1fd5a36d749654ea04ac75ca09f863d (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A caracterização molecular de 46 isolados de Bacillus thuringiensis foi realizada por meio da técnica de PCR com os oligonucleotídeos iniciadores gerais Gral-cry8(d)/Gral-cry8(r), resultando na identificação do isolado BT_I622 como portador do gene cry8 (coleóptero-específico). O fragmento obtido de aproximadamente 376 pares de base (pb), localizado na porção inicial do gene, foi clonado em vetor pGEM®-T Easy, sequenciado e analisado por bioinformática. A determinação da sequência completa do gene cry8 presente no isolado BT_I622, foi realizada pela estratégia de “primer walking” com a utilização de oligonucleotídeos específicos. Os iniciadores foram elaborados através do programa Primer3, com base nas sequências de genes cry8 depositadas no banco de dados público GenBank (NCBI) e, por meio da análise das sequências geradas com o par de oligonucleotídeos gerais utilizados inicialmente na caracterização dos isolados. As amplificações com diferentes combinações de iniciadores resultaram na obtenção de fragmentos em torno de 1420, 3302, 628, 1580, 508 e 510 pb, os quais foram clonados, sequenciados e analisados pelos programas Phred/Phrap/Consed visando a montagem do gene. A sequência contendo 3531 pb foi comparada ao GenBank pela ferramenta BLASTn, apresentando 98% de similaridade com o gene cry8Ka2. Paralelamente, a sequência de aminoácidos deduzida (1176 aa) revelou 75% de identidade com a proteína Cry8Ba1 na análise com o algoritmo BLASTp, demonstrando que o isolado BT_I622 é portador de um novo gene cry8. Os bioensaios indicaram que as larvas de Sphenophorus levis são sensíveis a nova proteína Cry8 de B. thuringiensis / The molecular characterization of 46 Bacillus thuringiensis isolates was carried out using the PCR technique with primers designed to detect cry8 genes (Gral-cry8(d)/Gral-cry8(r)), resulting in the identification of the isolate BT_1622 as a cry8 gene carrier (coleopteran specific). The ca. 376 base pairs (bp) fragment obtained was located in the initial part of the gene, which was cloned into the plasmid pGEM®-T Easy, sequenced and analyzed by bioinformatics. The complete sequence determination of this gene found within isolate BT_1622 was done using the “primer walking” strategy. The primers were designed using the software Primer3, comparing to previously sequenced cry8 genes found in the public database GenBank (NCBI) and analyzing the sequences generated with the pair of general primers used initially in the characterization of isolates. The amplifications with different primer combinations resulted other fragments of this gene with 1,420; 3,302; 628; 1,580; 508 and 510 bp, which were cloned, sequenced and analyzed using the software Phred/Phrap/Consed to obtain the full gene. The 3,531 bp sequence was compared to the GenBank using the BLASTn tool, and showed 98% of similarity with the gene cry8Ka2. Also, the deduced amino acid sequence (1,176 amino acids) showed 75% identity to the Cry8Ba1 using the algorithm BLASTp, demonstrating that the isolate BT_1622 carriers a new cry8 gene. The bioassay results indicated that the Sphenophorus levis larvae are sensitive to the new Cry8 protein of B. thuringiensis

Orientador: Manoel Victor Franco Lemos / Coorientador: Janete Apparecida Desidério / Banca: Ana Maria Guidelli Thuler / Banca: Fernando Hercos Valicente / Banca: Lucia Maria Carareto Alves / Banca: Odair Aparecido Fernandes / Resumo: A caracterização molecular de 46 isolados de Bacillus thuringiensis foi realizada por meio da técnica de PCR com os oligonucleotídeos iniciadores gerais Gral-cry8(d)/Gral-cry8(r), resultando na identificação do isolado BT_I622 como portador do gene cry8 (coleóptero-específico). O fragmento obtido de aproximadamente 376 pares de base (pb), localizado na porção inicial do gene, foi clonado em vetor pGEM®-T Easy, sequenciado e analisado por bioinformática. A determinação da sequência completa do gene cry8 presente no isolado BT_I622, foi realizada pela estratégia de "primer walking" com a utilização de oligonucleotídeos específicos. Os iniciadores foram elaborados através do programa Primer3, com base nas sequências de genes cry8 depositadas no banco de dados público GenBank (NCBI) e, por meio da análise das sequências geradas com o par de oligonucleotídeos gerais utilizados inicialmente na caracterização dos isolados. As amplificações com diferentes combinações de iniciadores resultaram na obtenção de fragmentos em torno de 1420, 3302, 628, 1580, 508 e 510 pb, os quais foram clonados, sequenciados e analisados pelos programas Phred/Phrap/Consed visando a montagem do gene. A sequência contendo 3531 pb foi comparada ao GenBank pela ferramenta BLASTn, apresentando 98% de similaridade com o gene cry8Ka2. Paralelamente, a sequência de aminoácidos deduzida (1176 aa) revelou 75% de identidade com a proteína Cry8Ba1 na análise com o algoritmo BLASTp, demonstrando que o isolado BT_I622 é portador de um novo gene cry8. Os bioensaios indicaram que as larvas de Sphenophorus levis são sensíveis a nova proteína Cry8 de B. thuringiensis / Abstract: The molecular characterization of 46 Bacillus thuringiensis isolates was carried out using the PCR technique with primers designed to detect cry8 genes (Gral-cry8(d)/Gral-cry8(r)), resulting in the identification of the isolate BT_1622 as a cry8 gene carrier (coleopteran specific). The ca. 376 base pairs (bp) fragment obtained was located in the initial part of the gene, which was cloned into the plasmid pGEM®-T Easy, sequenced and analyzed by bioinformatics. The complete sequence determination of this gene found within isolate BT_1622 was done using the "primer walking" strategy. The primers were designed using the software Primer3, comparing to previously sequenced cry8 genes found in the public database GenBank (NCBI) and analyzing the sequences generated with the pair of general primers used initially in the characterization of isolates. The amplifications with different primer combinations resulted other fragments of this gene with 1,420; 3,302; 628; 1,580; 508 and 510 bp, which were cloned, sequenced and analyzed using the software Phred/Phrap/Consed to obtain the full gene. The 3,531 bp sequence was compared to the GenBank using the BLASTn tool, and showed 98% of similarity with the gene cry8Ka2. Also, the deduced amino acid sequence (1,176 amino acids) showed 75% identity to the Cry8Ba1 using the algorithm BLASTp, demonstrating that the isolate BT_1622 carriers a new cry8 gene. The bioassay results indicated that the Sphenophorus levis larvae are sensitive to the new Cry8 protein of B. thuringiensis / Doutor

Orientador: Manoel Victor Franco Lemos / Banca: José Eduardo Garcia / Banca: Cristina Lacerda Soares Petrarolha Silva / Banca: Odair Aparecido Fernandes / Banca: Antônio Carlos Monteiro / Resumo: Os países industrializados apresentam uma forte tendência em buscarem, cada vez mais, sistemas de controle biológico eficiente e específicos sendo menos tóxicos para os humanos e o ecossistema em geral. Os bioinseticidas à base de microrganismos entomopatogênicos não encontram grandes restrições quanto a sua utilização. Dentre as bactérias que possuem atividade entomopatogênica, Bacillus thuringiensis é a que apresenta maior valor potencial no controle dos insetos-praga, por apresentar vários genes cry e possuir mecanismos de recombinação genética como: conjugação e transformação. O objetivo desse estudo foi identificar e caracterizar a linhagem B. thuringiensis var. londrina. A análise morfológica dos cristais indica uma nova proteína Cry. Para comparação foram utilizadas as linhagens de B. thuringiensis var. tenebrionis, var. tolworthi e var. kurstaki - HD1 que possuem os genes cry3Aa, cry3Ba e cry1Aa, respectivamente. Foi realizada a extração do DNA total das quatro linhagens, em seguida esse material foi submetido à reação de PCR com os oligonucleotideos iniciadores específicos dos genes acima citado. Para a confirmação dos resultados utilizou-se a técnica de hibridização por Southern blotting e seqüenciamento dos amplicon. O amplicom para o gene cry3 obtido pela linhagem padrão B. thuringiensis var. tenebrionis foi igual ao tamanho esperado, porém o obtido pela linhagem var. londrina foi maior em números de nucleotídeo que o esperado, indicando uma possível recombinação. A técnica de Southern blotting confirmou a recombinação do gene mostrando diferenças entre as bandas das linhagens padrão e da linhagem var. londrina, confirmando assim um novo gene cry3. Os bioensaios executados com esse novo gene não indicaram eficiência para alguns insetos-praga de lavoura da ordem Lepidoptera e foram eficientes... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Industrialized countries show a strong tendency to look for efficient and specific biological control systems that are less toxic to humans and ecosystems. Bioinsecticides based on entomopathogenic microorganisms are well accepted by the public. Among those, bacteria that exhibit such entomopathogenic activities, Bacillus thuringiensis is the one with major potential over the pests, since it harbors several cry genes and holds genetic recombination mechanisms such as bacterial conjugation and transformation in order to accomplish these control procedures. The aim of this research was to identify and characterize the strain of B. thuringiensis var. londrina. As a comparison some other strains of B. thuringiensis such as B. thuringiensis var. tenebrionis, var. tolworthi and var. kurstaki - HD1 that holds the genes cry3Aa, cry3Ba and cry1Aa, were used respectively. Alkaline lysis procedure was used for the DNA extraction from the four bacterial strains followed by its use on PCR reactions using the specific primers for the genes. To confirm the results were utilized the techniques of Southern blotting hybridization and DNA sequencing. The obtained amplicons have shown a difference in size considering the pattern strains compared to the var. londrina. The genetic recombination that took place so as to generate the var. londrina cry gene was detected by Southern blotting analysis, the hybridization results confirm the genetic recombination showing the banding pattern differences that took place generating the new cry3 gene. The bioassays showed that the recombinant gene was efficient to control Sphenophorus levis (Coleopteran). / Doutor

O Brasil é o maior produtor de cana-de-açúcar (Saccharum officinarum L.) do mundo e a cultura continua em expansão na safra 2014/15. A expansão das áreas de plantio de cana-de-açúcar e o sistema de colheita mecanizada de cana crua tem levado ao aumento proporcional de inúmeras pragas da cultura, destacando-se o bicudo da cana, Sphenophorus levis, considerado praga primária e limitante da cultura. Inicialmente, essa espécie foi considerada restrita a região de Piracicaba, mas desde 2010 foi encontrada nos estados de São Paulo, Minas Gerais, Paraná, Mato Grosso do Sul, Mato Grosso e Goiás. Suas larvas abrem galerias nos rizomas, causando danos diretos nos tecidos dos colmos, sobretudo nas épocas mais secas do ano, o que ocasiona a morte das touceiras, falhas na rebrota, além de promover danos indiretos, como o aumento do número de plantas invasoras que competem com a cultura. Os métodos químico, mecânico, cultural e biológico já foram testados até o momento, no entanto, o sucesso no seu controle ainda não foi obtido e a população dessa praga continua crescendo e se tornando mais constante nos canaviais pelo Brasil. Dessa forma, estudar estratégias para a melhoria do manejo de S. levis é fundamental para o estabelecimento de métodos de controle eficientes no contexto do MIP. Diante disso, objetivou-se com esse trabalho: 1) Determinar a distribuição espacial e a flutuação populacional de S. levis; 2) Testar o manejo da palha pós-colheita nas linhas de plantio na ocorrência de S. levis e; 3) Avaliar a eficácia da aplicação de Beauveria bassiana na população de S. levis. Em relação à flutuação populacional de S. levis foi observada uma elevação linear da última quinzena de outubro para a primeira de novembro, com queda subsequente e, aumento populacional maior à partir da última quinzena de dezembro. O pico populacional se deu no mês de março, seguido por uma rápida redução a partir de abril. A proporção de fêmeas foi similar a de machos em todos os tratamentos. Os dados sugerem que não houve efeito dos tratamentos na distribuição de adultos do bicudo. Os resultados da flutuação populacional, da distribuição de frequência e distribuição espacial se complementam, pois, em hipótese, a distribuição dos adultos está diretamente relacionada com a flutuação populacional, uma vez que em altas densidades a distribuição foi agregada. Além disso, as estratégias de afastamento da palha da linha de plantio não interferiram nos níveis de infestação de S. levis, quando comparado ao tratamento que não houve manejo da palha e, essa tática utilizada conjuntamente à aplicação de B. bassiana também não influenciou na densidade populacional de adultos de S. levis no período avaliado. Diante disso, concluiu-se que a distribuição de S. levis em cana-de-açúcar apresenta o padrão agregado em altas densidades populacionais; o manejo da palha entre as linhas de cana-de-açúcar não reduz a densidade populacional de S. levis em locais com elevado histórico de infestação e, são necessários mais estudos para ajustar a dose de B. bassiana adequada e eficaz no controle de S. levis. / Brazil is the world\'s largest sugarcane producer and the cultivated area continues to expand in 2014/2015 season. This expansion, along with the mechanical harvesting of green sugarcane leads to a proportional increase in the number of crop pests, especially the sugarcane weevil, Sphenophorus levis, considered a primary and limiting pest in this crop. Initially, this species was restricted to the Piracicaba region, however, since 2010 it has been found in several regions of São Paulo State, and also in other states in the country, such as Minas Gerais, Paraná, Mato Grosso do Sul, Mato Grosso and Goiás. The larvae penetrate the basal part of the plants and the rhizomes, building irregular galleries and causing damage to stem tissues, mainly in the driest season, leading to the death of clumps, failures in regrowth and, consequently, indirect damage due to the increase in the incidence of invasive plants that compete with the crop. Chemical, mechanical, cultural and biological methods have already been tested, however, the success in pest control has not yet been achieved and the population of S. levis continues to grow, becoming more constant in Brazilian sugarcane fields. Thus, the study of strategies to enhance the management of S. levis is essential to adopt effective control methods in the IPM framework. In this sense, this study aims to: 1) Determine the spatial distribution and population dynamics of S. levis; 2) Evaluate the postharvest management of straw on planting rows in occurrence of S. levis and; 3) Evaluate the efficacy of B. bassiana application in the S. levis population in sugarcane. Concerning population dynamics of S. levis, it was observed a linear increase beginning in the last quarter of October until November, with a subsequent decrease and, a highest population increase was observed in the last half of December. The population peak occurred in March, followed by a fast decline in early April. The proportion of females to males was similar in all treatments. The data suggest that there was no effect of treatments on the distribution of adult weevils. The results of population dynamics, frequency distribution and spatial distribution are complementary, because, hypothetically, the distribution of adults is directly related to population dynamics, since at high densities the distribution was aggregated. In addition, strategies for straw management in the planting row did not affect the infestation levels of S. levis and this procedure along with the addition of B. bassiana did not influence population density of adults during the study period. Hence, it is concluded that the distribution of S. levis in sugarcane exhibits an aggregated pattern at high population densities. Straw management between the cane rows does not reduce population density of S. levis in areas with high historical infestation. Therefore, further studies are needed to adjust the appropriate and effective concentration of B. bassiana in the control of S. levis.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-27Bitstream added on 2014-06-13T18:55:59Z : No. of bitstreams: 1 nunes_bm_me_jabo.pdf: 266143 bytes, checksum: f9d63d42205c345e08635a99df4a18df (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / As medidas de controle utilizadas no controle de Sphenophorus levis ainda são consideradas insuficientes e alguns dos inseticidas utilizados tem demonstrado efeito fisiológico na cana. Os objetivos desta pesquisa foram avaliar em condições de campo, a eficiência de inseticidas (imidaclorpide, etiprole, - cipermetrina, tiametoxam+ -cialotrina e mistura dos fungos entomopatogênicos Beauveria bassiana+Metarhizium anisopliae) no controle de adultos do S. levis e os efeitos dos inseticidas sobre a qualidade da matéria-prima sadia, analisando-se parâmetros convencionais (Brix, Pureza, Pol, ART, AR, ATR e Fibra) e nãoconvencionais (acidez total e volátil, compostos fenólicos e nutrientes) e a microbiota presente durante a fermentação etanólica. Não foi observada eficiência dos inseticidas no controle de adultos de Sphenophorus levis. O inseticida tiametoxam+ -cialotrina provocou atraso na maturação da cana-de-açúcar, indicada através dos resultados obtidos para os parâmetros convencionais (Pol, Pureza, ART, AR e ATR), não-convencionais (acidez total e teores de nutrientes), e microbiológicos (número de micro-organismos totais, fungos e leveduras no mosto). Os micro-organismos contaminantes não afetaram as leveduras durante a fermentação etanólica. A aplicação do inseticida etiprole na cana-de-açúcar resultou em melhor qualidade da matéria-prima e menor impacto sobre a viabilidade dos brotos durante a fermentação etanólica / The control measures used to Sphenophorus levis are not still enought and moreover, some of the insecticides have demonstrated physiological effect on sugarcane. The objectives of this research were evaluate the insecticides effect (imidacloprid, ethiprole, -cypermethrin and thiamethoxam+ -cyhalotrin and mixing of the entomopathogenic fungi Beauveria bassiana + Metarhizium anisopliae) on S. levis adults under field conditions and the insecticides effects upon sugarcane quality, analyzing conventional parameters (Brix, Purity, Pol, ART, AR, ATR and fiber) and non-conventional (total and volatile acidity, phenolic compounds and nutrients), and microbiota during ethanolic fermentation. The insecticides were not efficient to control adults of Sphenophorus levis. The insecticide thiamethoxam + -cyhalothrin caused delay in sugarcane crop maturity, as shown by the results obtained for the conventional parameters (Pol, Purity, ART, AR and ATR), non-conventional (and total acidity levels nutrients) and microbiological (number of total microrganisms, fungi and yeast in wort). The microbial contaminants found in sugarcane juice did not interfere upon the yeast dynamic during ethanolic fermentation. The sugarcane treated with insecticide etiprole showed higher results for the quality parameters and reduced negative impacts on yeast bud viability present during ethanolic fermentation