Submitted by Vasti Diniz (vastijpa@hotmail.com) on 2017-09-06T12:21:20Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1977225 bytes, checksum: 4fbd41473c4fb59dd997d5983d38f034 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-06T12:21:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1977225 bytes, checksum: 4fbd41473c4fb59dd997d5983d38f034 (MD5) Previous issue date: 2015-07-10 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Lectins are proteins with the ability to interact specifically and reversibly with carbohydrates. They are present in all forms of life, performing vital functions for the maintenance of these beings. The legume lectins have numerous biological activities that can be used for therapy. The aim of this study was to isolate a lectin of Phaseolus lunatus seeds var. cascavel (PLUN), as well as to characterize it and check anti-hemolytic, antioxidant, antitumor and gastroprotective activities. The presence of lectins and an indication of their carbohydrate inhibitor was determined using the hemagglutination activity against human type ABO red blood cells. Protein concentration was determined by Bradford method using bovine serum albumin as standard. The isolation of PLUN was performed by size exclusion chromatography on Sephadex G-100. The weight and the purity of lectin was estimated by EGPA (polyacrylamide gel electrophoresis) under reducing and non-reducing conditions. The characterization was performed PLUN checking their resistance to pH and temperature variations, the presence front integrity of urea, DTT (dithiothreitol), beta-mercaptoethanol, EDTA (ethylenediaminetetra acetic acid), as well as the action of the trypsin and chymotrypsin enzymes . The characterization of glycoproteins was carried out by electrophoretic and staining for determination of total carbohydrates. The anti-hemolytic activity was performed using human ABO red blood cells, the antioxidant activity was determined by the molybdenum reduction methods (total antioxidant) and capture of the DPPH (2,2-diphenyl-1-picryl-hidrazila), and ABTS (2,2' sulfonic -azinobis-3-ethylbenzthiazoline-6 acid), antitumor activity was determined by the MTT (3- [4,5-dimethyl-thiazol-2-yl] -2,5-diphenyltetrazolium bromide) against cells melanoma A375 and the gastroprotective the protection induced gastropathy ethanol. The hemagglutinating activity indicated the presence of lectins only able to agglutinate erythrocytes of type A. This was inhibited only by lectin-carbohydrate N-acetyl-D-galactosamine at a concentration of 25 mM. The molecular exclusion was enough to isolate the lectin, where the peak I obtained from chromatography was active against type A red blood cells (PLUN). The estimated weight by EGPA indicated that it has about 128 kDa. The final purification yield was 80%, and this purified protein about 28 times. Thermostability and pH indicated variations in resistance to 80°C and pH between 2 and 11. Only the 8 M urea was able to inhibit the lectin. The 250 mM EDTA was inhibitory effect on hemagglutination activity was recovered in the presence of manganese ions. PLUN is a glycoprotein, with approximately 2% of carbohydrates in its composition. The lectin has no anti-hemolytic effect for no human blood type. PLUN has antioxidant action with AAEAA (μMAA/g) of 418.20, 326 and 82.9 for total antioxidant activity, ABTS radical capture and capture of DPPH radical, respectively. The IC50 (mg/ml) stood at 1.22, 0.21 and 4.39 for the tests cited above, respectively. The lectin has antitumor activity against melanoma derived cells at doses of 100 and 50 mg/ml, reducing up to 83% tumor cells, and gastroprotective action in a concentration of 1000 mg / kg, reducing up to 63% of the injured area stomach. / Lectinas são proteínas com a capacidade de interagir de forma específica e reversível com carboidratos. Estão presentes em todas as formas de vida desempenhando funções vitais. As lectinas de leguminosas apresentam inúmeras atividades biológicas que podem ser utilizadas pela terapêutica. O objetivo desse estudo foi isolar uma lectina de sementes de Phaseolus lunatus var. cascavel (PLUN), bem como caracterizá-la e verificar as atividades antihemolítica, antioxidante, antitumoral e gastroprotetora. A presença de lectinas e a indicação do seu carboidrato inibidor foi determinada utilizando a atividade hemaglutinante. A concentração proteica foi determinada pelo método de Bradford utilizando a albumina sérica bovina como padrão. O isolamento de PLUN foi realizado por cromatografia de exclusão em Sephadex G-100. O peso e a pureza da lectina foram estimados por EGPA (eletroforese em gel de poliacrilamida). A caracterização de PLUN foi realizada verificando sua resistência às variações de temperatura e pH, integridade frente à presença de ureia, ditiotreitol, beta-mercaptoetanol, EDTA, tripsina e quimiotripsina. A caracterização para glicoproteínas foi realizada pela coloração eletroforética e pela dosagem de carboidratos totais. A atividade antihemolítica foi realizada utilizando hemácias humanas ABO, a atividade antioxidante foi determinada pelos métodos de redução do molibdênio (antioxidante total) e captura dos radicais DPPH e ABTS, a atividade antitumoral foi determinada pelo ensaio do MTT contra células de melanoma A375 e a gastroprotetora pela proteção a gastropatia induzida por etanol. A atividade hemaglutinante indicou a presença de lectinas capazes de aglutinar apenas hemácias do tipo A. Essa lectina foi inibida apenas pelo carboidrato n-acetil-D-galactosamina em uma concentração de 25 mM. A exclusão molecular foi suficiente para isolar a lectina, onde o pico I obtido da cromatografia foi ativo contra hemácias tipo A (PLUN). A estimativa do peso por EGPA indicou que esta apresenta aproximadamente 128 kDa. O rendimento final da purificação ficou em 80%, sendo essa proteína purificada cerca de 28 vezes. A termoestabilidade e as variações de pH indicaram resistência em até 80ºC e em pH entre 2 e 11. Apenas a ureia 8 M foi capaz de inibir a lectina. O EDTA 250 mM teve efeito inibidor sobre a atividade hemaglutinante que foi recuperada em presença de íons manganês. PLUN é um glicoproteína, apresentando aproximadamente 2% de carboidratos em sua composição. A lectina não apresenta efeito antihemolítico para nenhum tipo sanguíneo humano. PLUN apresenta ação antioxidante com AAEAA (μMAA/g) de 418,20, 326 e 82,9 para a ação antioxidante total, captura do radical ABTS e captura do radical DPPH, respectivamente. As IC50 (mg/mL) ficaram em 1,22, 0,21 e 4,39 para os ensaios acima citados, respectivamente. A lectina apresenta atividade antitumoral contra células oriundas de melanoma em doses de 100 e 50 μg/mL, reduzindo em até 83% as células tumorais, e ação gastroprotetora em uma concentração de 1000 μg/kg, reduzindo em até 63% a área lesada do estômago. Os resultados indicam uma lectina com considerada atividades antioxidante, antitumoral e gastroprotetora. Mais estudos devem ser realizados para verificar possíveis mecanismos moleculares envolvidos nessas observações, bem como a determinação da estrutura tridimensional da proteína.

Submitted by Vasti Diniz (vastijpa@hotmail.com) on 2017-09-08T12:11:24Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1391577 bytes, checksum: e8bbd0db33d228b40d69b547aed31f9c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-08T12:11:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1391577 bytes, checksum: e8bbd0db33d228b40d69b547aed31f9c (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Human activities have caused climate changes and altered the salinity of the oceans. Salinity is one of the factors that limit the distribution and the survival of marine organisms. Coelomocytes are the immune system cells of the echinoderms and have been studied as biomarkers in stress situations. The aim of the present study was to investigate the effect of the salinity in the immune system cells of the tropical sea urchin Echinometra lucunter. Animals were collected in João Pessoa coast (Brazilian Northeast). Animals or coelomocytes were exposed to different salinity (25‰ to 45‰) and phagocytic parameters, production of reactive oxygen species (ROS), mitochondrial activity and ABC transporter activity analyzed. The phagocytic parameters did not change when animals or cells were exposed to low or high salinity in any time intervals monitored. However, our data showed an increase in the coelomocytes concentration when animals were exposed to 25‰. ROS levels were higher when cells were incubated at 25‰ and lower when cells were cultured at 45‰. We noted a loss of the mitochondrial inner membrane potential when coelomocytes were incubated at 45‰. The activity of ABC transporters decreased when cells were incubated at low salinity and increased when cells were incubated at high salinity. Our work shows that the immune system of the tropical sea urchins E. lucunter tolerates salinity changes from 25‰ to 45‰ and suggests two cellular parameters (ROS levels and ABC transporters activity) as potential biomarkers on the monitoring of the impact of environmental salinity changes. / As atividades humanas têm causado mudanças climáticas e alterado a salinidade dos oceanos. A salinidade é um dos fatores que limitam a distribuição e sobrevivência de organismos marinhos. Celomócitos são as células do sistema imune dos equinodermos e têm sido estudados como biomarcadores em situações de estresse. O objetivo do presente estudo foi investigar o efeito da salinidade em celomáticos do ouriço-do-mar tropical Echinometra lucunter. Os animais foram coletados na costa de João Pessoa (Nordeste do Brasil). Os animais ou os celomócitos foram expostos a diferentes salinidades (25‰ e 45‰) e parâmetros fagocíticos, produção de espécies reativas de oxigênio (ROS), atividade mitocondrial e atividade dos transportadores ABC analisados. Os parâmetros fagocíticos não alteraram quando os animais ou as células foram expostos a 25‰ ou 45‰ nos intervalos de tempo monitorados. Porém, foi observado um aumento na concentração de celomócitos quando os animais foram expostos a 25‰. Os níveis de ROS foram maiores quando as células foram incubadas a 25‰, e menores quando as células foram cultivadas a 45‰. Foi observada uma perda do potencial de membrana mitocondrial interna quando os celomócitos foram incubados a 45‰. A atividade dos transportadores ABC diminuiu quando as células foram incubadas a 25‰ e aumentou quando as células foram incubadas a 45‰. O presente trabalho demonstra que o sistema imune do ouriço-do-mar E. lucunter tolera mudanças de salinidade (25‰ até 45‰), e sugere dois parâmetros celulares (níveis de ROS e atividade de transportadores ABC) como potenciais biomarcadores no monitoramento de mudanças na salinidade ambiental.

Made available in DSpace on 2015-04-01T14:16:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 5574506 bytes, checksum: a2d785f5339e8cb5e573693458ab5abd (MD5) Previous issue date: 2011-09-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Ouabain, known as a cardiotonic glycoside capable of inhibiting the Na+/K+ ATPase, was widely used for heart failure treatment. Identified as an endogenous substance, ouabain is capable of interfering with various physiological functions, including immune system modulation. Besides that, little is known about the involvement of this substance in nociceptive and inflammatory processes. The present study investigated the role of ouabain in acute peripheral inflammation induced by intraplantar administrartion of different phlogistic agents (carrageenan, compound 48/80, histamine, bradykinin, and PGE2) and in nociceptive processes (abdominal writhing induced by acetic acid and hot plate). Ouabain produced a significant reduction in the mouse paw edema induced by carrageenan and compound 48/80. This antiinflammatory effect of ouabain is associated to the inhibition of PGE2, bradykinin, and mast-cell degranulation, but not to histamine. Ouabain also presented a central and peripheral anti-nociceptive activity. This analgesic potential might be related to the inhibition of inflammatory mediators and to activation of opioid receptors, since it was reversed by naloxone, an opioid antagonist. Additionally, the analgesic effect of ouabain was not related to sedative effect or to motor function. Taken together, the present work demonstrated for the first time, in vivo, the antiinflammatory and analgesic potential of ouabain / A Ouabaína é um glicosídeo cardiotônico, inibidor da Na+/K+-ATPase, utilizada na clínica para o tratamento de insuficiência cardíaca. Atualmente, sabe-se que essa substância é endógena, e capaz de interferir em várias funções fisiológicas, inclusive em diversos aspectos do sistema imunológico. Apesar disso, pouco se sabe sobre seu envolvimento em processos inflamatórios e nociceptivos. Neste trabalho, foi avaliada a atividade da Ouabaína na inflamação aguda desencadeada pela administração de diversos agentes flogísticos (carragenina, composto 48/80, histamina, PGE2 e bradicinina) e em modelos nociceptivos (contorções abdominais induzidas por ácido acético e placa quente). A Ouabaína produziu uma redução no edema de pata produzido por carragenina e pelo composto 48/80. Esse potencial anti-inflamatório está relacionado ao bloqueio da degranulação de mastócitos, bem como pela inibição da via da PGE2 e da bradicinina, porém é independente da via da histamina. A Ouabaína também apresentou uma atividade anti-nociceptiva central e periférica. Esse efeito está vinculado à inibição da via dos mediadores inflamatórios e a mecanismos opióides, visto que foi revertido pela administração da naloxona, um inibidor dos receptores opióides. Adicionalmente, foi descrito que a inibição da dor pela Ouabaína não possui envolvimento com sedação ou diminuição da capacidade motora. O conjunto desses dados demonstra pela primeira vez, in vivo, a atividade anti-inflamatória e anti-nociceptiva da Ouabaína.

Made available in DSpace on 2015-04-01T14:16:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 3272893 bytes, checksum: 54fd73a37837f8d64e245874e3ff9a98 (MD5) Previous issue date: 2011-09-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Soil saliniy is a major factor in reducing plant growth and, consequently, their agricultural productivity. Most of the studies in the literature presents a strategy for reducing the effects of improving salt tolerance in plants for the production of osmolytes and stress proteins, and there are few studies aimed at increasing salt tolerance by restoring ionic homeostasis. This work was proposed to understand the physiological mechanisms and structural related with adjustment in the halophyle Halococcus morrhuae. This showed significant growth in the medium to halobacterias, that are organized in the form of sarcina of different sizes. The results achieved in attempts to characterize the lipid membrane halobactéria according to the values of retention time corresponding to phosphatidic acid (PA) and phosphatidylglycerol (C20-C20) (PG), and glycolipid known as Diglicosilarqueol (DGA-1 ). Additionally, patterns of breaks fatty acids extracted from Halococcus morrhuae showed a significant similarity when compared with the fatty acids found in organisms of the domain Eucarya and Bacteria. The genes of the antiport Na + / Ca2+ and Na + / H+ proved functional after cloning in Escherichia coli DH5α in solid and liquid medium. The antiport Na+ / H+ activity showed a statistically more significant when compared to the growth of clones containing the antiport Na+/Ca2+, making it interesting for the construction of transgenic plants tolerant to salinity. These database contribute to understanding the physiology of Halococcus morrhuae for future biotechnological applications, among them the inclusion of these genes in plants to assess the functionality in eukaryotic models. / A salinização do solo é um dos principais fatores para redução do crescimento das plantas e, consequentemente, da sua produtividade agrícola. A maioria dos estudos presentes na literatura apresenta como estratégia para redução dos seus efeitos o melhoramento da tolerância a sal pelas plantas pela produção de osmólitos e proteínas de estresse, existindo poucos estudos visando o aumento da tolerância ao sal pelo restabelecimento da homeostase iônica. Neste trabalho foi proposto compreender mecanismos fisiológicos e estruturais relacionados com a adaptação à halofilia em Halococcus morrhuae. O crescimento de H. morrhuae foi significativo no meio para halobactérias, organiza-se na forma de sarcinas de diferentes tamanhos ao longo do tempo. Os resultados alcançados na tentativa de caracterização de lipídios da membrana da halobactéria, de acordo com os valores de tempo de retenção, correspondem ao ácido fosfatídico (PA) e fosfatidilglicerol (C20-C20)(PG), e ao glicolipídio conhecido como diglicosilarqueol (DGA-1). Adicionalmente, os padrões de quebras dos ácidos graxos extraídos de Halococcus morrhuae apresentaram uma similaridade significativa quando comparada com a dos ácidos graxos encontrados em organismos do domínio Eucarya e Bacteria. Os genes dos antiportes Na+/Ca+2 e Na+/H+ aumetaram a tolerância ao sal, mostrando-se funcionais após espressão em Escherichia coli DH5α em meio sólido e em meio líquido. O antiporte Na+/H+ apresentou uma atividade estatisticamente mais significativa (p<0,03) quando comparada ao crescimento dos clones contendo o antiporte Na+/Ca2 (p<0,05). Entretanto, ambos os antiportes são candidatos interessantes para a construção de plantas geneticamente modificadas tolerantes a salinidade. Estes dados também contribuem para o entendimento da fisiologia de H. morrhuae para futuras aplicações biotecnológicas, dentre elas a inserção desses genes em plantas para avaliar a funcionalidade em modelos eucarióticos.

Made available in DSpace on 2015-04-01T14:16:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arquivototal.pdf: 2215115 bytes, checksum: 40dd5f4fb946f6f9e74f8da93471a174 (MD5) Previous issue date: 2012-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The lipases and biosurfactants produced by microorganisms are involved in the metabolism of oil substrates and they receive great biotechnological interest. In this work the production of lipases and biosurfactants by bacteria isolated from soil used for discard of the residual vegetable oil was analyzed. The 66 strains tested demonstrated lipolytic activity on the tributirine agar. In the rhodamine B agar medium with olive oil or soy oil, the number of lipolytic strains varied from 31,8% to 37,8%, depending on the substrate and medium pH. Lipolytic activity of the 25 positive strains in the rhodamine B agar with olive oil, analyzed by titrimetric method varied from 0.62 U/mL/min to 12.4 U/mL/min. The most active strain in the lipases production, identified as the species belonging to the Burkholderia cepacia complex by 16S rRNA gene sequencing analysis, was submitted to the Surface Respond Methodology analysis to determine the optimal conditions of pH and temperature. The Burkholderia sp. O19 strain showed high lipolytic activity in wide range of pH and temperature, and the highest activity was predicted for pH and temperature above 8.5 and 65oC. All of the bacterial strains showed to produce biosurfactants in at least one of the three analyzed methods. The test of dispersion of the diesel oil allowed the biosurfactants detection in all of the strains, while the oil emulsification and hemolytic activity were observed in 73% and 59% of the strains, respectively. The soil used for the disposal of vegetable oil proved conducive to prospecting of lipolytic microorganisms and producers biosurfactants. / As lipases e os biossurfactantes produzidos por microrganismos estão envolvidos no metabolismo de substratos oleosos e despertam grande interesse biotecnológico. Neste trabalho foi analisada a produção de lipases e biossurfactantes por bactérias isoladas de um solo utilizado para descarte do óleo vegetal residual. As 66 linhagens isoladas demonstraram atividade lipolítica quando incubadas no meio ágar tributirina. No meio contendo ágar rodamina B, com azeite de oliva ou óleo de soja, o número de linhagens lipolíticas variou de 31,8% a 37,8%, dependendo do substrato e do pH do meio. Atividade lipolítica das 25 linhagens positivas no ágar rodamina B com azeite de oliva, avaliada pelo método titulométrico, variou de 0,62 U/mL/min a 12,4 U/mL/min. A linhagem mais ativa na produção de lipases foi identificada, com o seqüenciamento do gene 16S rRNA, como espécie do complexo Burkholderia cepacia, e submetida à análise da Metodologia de Superfície de Resposta, para determinar as condições ótimas de pH e temperatura. A linhagem Burkholderia sp. O19 apresentou alta atividade lipolítica em ampla faixa de pH e temperatura, sendo que a maior atividade foi prevista para pH e temperatura superiores a 8,5 e 65oC. Todas as linhagens demonstraram produzir biossurfactantes com pelo menos um dos três métodos avaliados. O teste de dispersão do óleo diesel permitiu a detecção de biossurfactantes em todas as linhagens, enquanto a emulsificação e atividade hemolítica foram observadas em 73% e 59% das linhagens, respectivamente. O solo usado para o descarte de óleo vegetal mostrou-se propício à prospecção de microrganismos lipolíticos e produtores de biossurfactantes.

Made available in DSpace on 2015-04-01T14:16:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1333665 bytes, checksum: 2f915f0ace8bbb6bb5fbbb794e7c40d5 (MD5) Previous issue date: 2013-06-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / In many parts of the world leguminous plant is one of the most widely known plants previously reported. There are many different types of plants in the family leguminous used as food, in this case, the genus Canavalia comprises a group of some 48 species. The term lectin (derived from the latin word legere, meaning, among other things, to select) represent a heterogeneous group of proteins ranging from size, structure, molecular organization and constitution of interaction points as well as performing several biological activities such as anti-inflammatory, antifungal and antibiotic. Until now, the lectins of plants are one of the most studied, although some lectins in animals are well-specified. This research aim to isolate, purify and define biological activities of a new lectin present in the seeds of the Canavalia maritime. The results indicate the presence of a new lectin with a preference to agglutinate native erythrocytes of rabbit. These lectins were both purified in column chromatography of Sephadex G-50 and chitin, molecular exclusion in HPLC system, respectively. The purity and molecular weight (approximate) of the new lectin (from 50 to 55 kDa) was detected by SDS polyacrylamide gel electrophoresis. The new lectin did not cause hemolysis in human erythrocytes type A, O and AB, it reflects the interaction level of the sugars. According to sugar inhibition assays, the new lectin (content 71,5μg) indicates it is specific for arabinose, fructose, maltose, saccharose and xylose. On the other hand, the new lectin did not prevent the growth of tested bacterial strains, however, it is able to promote the proliferation these microorganisms. It also presented an anti-inflammatory activity as peritonitis induced by carrageenan in mice reducing the migration of neutrophils in the peritoneum of mice and permeability of the blood vessels. It also produced antifungal activity on the growth of the fungus C. neoformans, on its growth assay, evidenced by CIM determination, in this case, the results demonstrates no growth in the presence of the new lectin. / As leguminosas estão entre as plantas mais conhecidas pelas pessoas de diversas partes do mundo. Nesta família, muitas são as plantas que usamos como alimento. O gênero Canavalia ao qual pertence o feijão da praia, dentro da família Leguminosae, é formado por um pequeno grupo de 48 espécies. O termo lectina (do latim legere , que significa escolher, selecionar), representa um grupo heterogêneo de proteínas que variam amplamente em tamanho, estrutura, organização molecular, bem como na constituição de seus sítios de interação, desempenhando atividades biológicas diversas como antiinflamatórias, antifúngicas e antibióticas. As lectinas de plantas são as mais estudadas até então, embora algumas presentes em animais e microorganismos já tenham sido bem caracterizadas. O objetivo geral deste trabalho foi isolar, purificar e determinar atividades biológicas de uma nova lectina presente em sementes da leguminosa Canavalia maritima. Os resultados indicaram a presença de uma nova lectina com preferência em aglutinar eritrócitos nativos de coelho, purificada através de cromatografias de afinidade em Sephadex G-50 e quitina, e de exclusão molecular em sistema HPLC, respectivamente. Por meio de eletroforese em gel de poliacrilamida na presença de SDS, foi constatada a pureza e o peso molecular aproximado da nova lectina de 50 a 55 kDa. A nova lectina não promoveu hemólise em eritrócitos humanos dos tipos A, O e AB, em graus variáveis, o que reflete a sua especificidade de interação com diferentes açúcares. Com uma composição de 71,5 μg de carboidratos, a nova lectina demonstrou, pelo teste de inibição por açúcares, especificidade para os açúcares arabinose, frutose, maltose, sacarose e xilose. Por outro lado, a nova lectina, não inibiu o crescimento das linhagens bacterianas testadas, entretanto, observou-se que ela é capaz de promover a proliferação destes microorganismos. Apresentou atividade antiinflamatória, no modelo de peritonite induzido por carragenina em camundongos, reduzindo a migração dos neutrófilos no peritônio de camundongos e a permeabilidade dos vasos sanguíneos. Também produziu atividade antifúngica sobre o crescimento dos fungos C. neoformans, nos ensaios de crescimento das cepas, evidenciado pela determinação da CIM, onde os resultados demonstraram que não houve crescimento na presença da nova lectina.

Made available in DSpace on 2015-04-01T14:16:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1211143 bytes, checksum: 23a2b34a9ee3ee070ebfce58519b026d (MD5) Previous issue date: 2013-05-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Canavalia brasiliensis belongs to the family of Leguminosae and known as feijão-bravo-do-Ceará, it s a species from Americas. In Brazil it can be found in the North, Northeast, Midwest and Southeast. Many species of plant contain carbohydrate-binding proteins which are commonly called lectins or agglutinins which are distributed in virtually all living organisms. That study aimed to detect, purify and characterize physico-chemically a ConBr new lectin from extract of the seeds of C. brasiliensis and to evaluate its relationship with pathogenic bacteria and inflammatory processes. The lectin, with affinity for rabbit erythrocytes, was isolated by affinity chromatography on matrix Sephadex G-50 followed by chitin, and molecular exclusion in HPLC system. The purity and the molecular weight of the lectin were determined by SDS-PAGE. The protein was characterized as to the nature glycoprotein, the specific sugars and glycoproteins, resistance to pH, temperature, denaturing agents, reducing, oxidizing and chelating agents. The lectin on SDS-PAGE showed two bands of 25 and 45 kDa and a content of 47 μg of carbohydrates. It was specific for mannose, fructose and maltose. It was inactivated when heated to 90 °C and 100 °C for 10 minutes and at pH 5,0 and 13.0. It had reduced their activity in the presence of urea 4 and 8 M and sodium metaperiodate, and increased with β-mercaptoethanol. It s a metalloprotein which depend of Mg2+ for stabilizing its carbohydrate biding site. It didn t present activity against Bacillus subtilis ATCC 0516, Escherichia coli ATCC 10536, Pseudomonas aeruginosa ATCC 8027, P. aeruginosa ATCC 25619, Staphilococcus aureus ATCC 6538 e S. aureus ATCC 25925 and in the carrageenan-induced peritonitis model in mice, the lectin didn t have toxicity to animals and showed anti-inflammatory effect reducing the blood vessel permeability and migration of neutrophils in the peritoneum of mice. / Canavalia brasiliensis pertence à família Leguminosae e sendo conhecida como feijão-bravo-do-Ceará, é uma espécie predominante do Continente Americano. No Brasil pode ser encontrada nas regiões Norte, Nordeste, Centro-Oeste e Sudeste. Muitas espécies de plantas contêm proteínas de ligação a carboidratos as quais são comumente chamadas de lectinas ou aglutininas as quais são distribuídas em praticamente todos os organismos vivos. O referido trabalho objetivou detectar, purificar e caracterizar fisico-quimicamente uma nova lectina ConBr do extrato das sementes de C. brasiliensis e avaliar sua relação com bactérias patogênicas e processos inflamatórios. A lectina com afinidade por eritrócitos de coelho foi isolada através de cromatografia de afinidade em matriz de sephadex G-50 seguida de quitina; e exclusão molecular em sistema HPLC. O grau de pureza e o peso molecular da lectina foram determinados por eletroforese SDS-PAGE. A proteína foi caracterizada quanto à natureza glicoproteica, especificidade a açúcares e glicoproteínas, resistência ao pH, temperatura, agentes desnaturantes, redutores, oxidantes e quelantes. A lectina apresentou na SDS-PAGE duas bandas de 25 e 45 kDa e um teor de 47 μg de carboidratos. Foi específica para manose, frutose e maltose. Foi inativada quando aquecida a 90 °C e 100 °C durante 10 minutos e em pH 5,0 e 13,0. Teve sua atividade reduzida na presença de ureia 4 e 8 M e do metaperiodato de sódio; e aumentada com o β-mercaptoetanol; é uma etaloproteína dependente de Mg2+ para a estabilização do seu sítio de ligação a carboidratos. Não apresentou atividade frente às bactérias Bacillus subtilis ATCC 0516, Escherichia coli ATCC 10536, Pseudomonas aeruginosa ATCC 8027, P. aeruginosa ATCC 25619, Staphilococcus aureus ATCC 6538 e S. aureus ATCC 25925 e no modelo de peritonite induzido por carragenina em camundongos, a lectina não se mostrou tóxica para os animais e exibiu efeito antiinflamatório através da redução da permeabilidade dos vasos sanguíneos e da migração dos neutrófilos no peritôneo dos animais.

Made available in DSpace on 2015-04-01T14:16:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1756619 bytes, checksum: d052f1be18e53f2beddaa57cda5b0a22 (MD5) Previous issue date: 2012-12-13 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Substrate-binding subunits are very important components of the solute importation system, known as the osmoprotectant system, which consists of a membrane protein belonging to the ABC superfamily. These molecules recognize specific substrates that have different physiological roles in prokaryotes, i.e. roles that contribute to the survival of these organisms in environments with high concentrations of salt. Using MEGA 5.05 software, this study performed a phylogenetic analysis of 431 nucleotide sequences of these subunits, orthologous to each other, collected from the database contained on the website http://www.genome.jp/kegg/. As a result of this analysis, phylogenetic trees were generated that clearly demonstrated that there was a horizontal transfer of some genes due to the sharing by different organisms. Also, two probable ancestral sequences were generated that showed homology with permeases that transport choline, glycine betaine and carnitine, which are trimethylamines currently present in various prokaryotes. Therefore, this system probably arose in prokaryotic organisms with the basic function of capturing nutrients, and by performing this basal function of being shared with other organisms, was fixed to the genome. However, because of the diversification of habitats by the prokaryotes, this system contributed decisively to the adaptation of these organisms to different environments, especially environments that had a high salt concentration; thus, acting and being currently characterized as a system of osmoprotection. / As subunidades ligadoras de substrato são componentes muito importantes do sistema de importação de soluto conhecido, como sistema de osmoproteção, que consiste em uma proteína de membrana pertencente à superfamlía ABC. Estas moléculas reconhecem substratos específicos que apresentam papéis fisiológicos diversos em procariotos, incluindo a colaboração para a sobrevivência destes organismos em ambientes com elevada concentração de sal. Utilizando o software MEGA 5.05, foi realizada uma análise filogenética de 431 sequências nucleotídicas destas subunidades, ortólogas entre si, coletadas a partir do banco de dados contido no site ttp://www.genome.jp/kegg/. Como resultado desta análise, foram geradas árvores filogenéticas que demonstraram claramente que houve a transferência horizontal de alguns dos genes devido ao ompartilhamento por organismos diferentes. Foram geradas também duas prováveis sequências ancestrais que apresentam homologia com permeases que transportam colina, glicina betaína e carnitina, que são aminas trimetiladas, presentes atualmente em diversos procariotos. Portanto, este sistema provavelmente surgiu em organismos procarióticos com a função básica de captura de nutrientes e por desempenhar esta função basal, ao ser compartilhado com outros organismos, foi fixado aos genomas. No entanto, a partir da diversificação de habitats, por parte dos procariotos, este sistema colaborou de forma decisiva para a adaptação destes organismos aos mais diversos ambientes, incluindo, especialmente os ambientes que apresentavam uma elevada concentração de sal, atuando e sendo caracterizado atualmente como um sistema de osmoproteção.

Made available in DSpace on 2015-04-01T14:16:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1809210 bytes, checksum: e118d10e8ea156df56a7871608a59d7b (MD5) Previous issue date: 2014-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Human identification is based on analyzing DNA through present throughout the genome molecular markers. These markers are transmitted from parents to offspring by heredity. STR markers are currently the most commonly used genetic markers in Forensic Genetics due to their high polymorphism, high reproducibility, possibility of being amplified by PCR in multiple copies in a single reaction, and minute quantities of DNA (1ng). The DNA test that allows individualization of the people is essential tool to the solution of forensic human identification cases, sex crimes, crime scenes (including or excluding suspects), mass disasters, and its result is presented in statistical calculations that consider allele frequency of markers used. So it is important to know the allele frequencies presented in the regional population so that the results are the most reliable possible. In this study , 15 autossomal markers (loci) STR or microsatellite (CSF1PO, D13S317, D16S539, D18S51, D19S433, D21S11, D2S1338, D3S1358, D5S818, D7S820, D8S1179, FGA, TH01, and VWA TPOX) were studied in 766 unrelated individuals paraibanos, demonstrating a tri population - hybrid formed Africans (25.86 %), Amerindian (6.81 %) and Europeans (67.33 %). The most informative were D21S11 and FGA, and were less informative TPOX, D7S820 and D13S317. The results are important for a database with allele frequencies found in Paraiba population can serve as a useful basis for calculating forensic practice in the State of Paraíba. / A identificação humana está baseada na análise do DNA através de marcadores moleculares presente em todo o genoma. Estes marcadores são transmitidos de pais para filhos por hereditariedade. Atualmente os marcadores STR são os marcadores genéticos mais utilizados em Genética Forense devido ao seu elevado polimorfismo, alta reprodutibilidade, possibilidade de serem amplificados por PCR em inúmeras cópias numa só reação e em mínimas quantidades de DNA (1ng). O exame de DNA que permite a individualização das pessoas é ferramenta indispensável à solução de casos forenses de identificação humana, crimes sexuais, locais de crime (incluindo ou excluindo suspeitos), desastres em massa, e tem seu resultado apresentado em cálculos estatísticos que consideram a frequência alélica dos marcadores usados. Por isso é importante o conhecimento das frequências alélicas apresentadas na população regional de forma que os resultados sejam os mais fidedignos possíveis. Neste trabalho, 15 marcadores autossômicos (loci) STR ou microssatélites (CSF1PO, D13S317, D16S539, D18S51, D19S433, D21S11, D2S1338, D3S1358, D5S818, D7S820, D8S1179, FGA, TH01, TPOX e vWA) foram estudados em 766 indivíduos paraibanos não aparentados, demonstrando uma população tri - hibrida, formada de africanos (25,86%), ameríndios (6,81%) e europeus (67,33%). Os mais informativos foram D21S11 e FGA, e os menos informativos foram TPOX, D7S820 e D13S317. Os resultados são importantes para que um banco de dados com as frequências alélicas encontradas na população paraibana possa servir de base de cálculo útil para prática forense no Estado da Paraíba.

Made available in DSpace on 2015-04-01T14:16:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1357815 bytes, checksum: a8f6776ded44373a63e29cc1331535eb (MD5) Previous issue date: 2013-04-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Reproductive disorders in bovines can be caused by various pathogens, which might already be present in the reproductive tract. The microbial community of the reproductive apparatus, when known, can provide information about the health of the host. The metagenomics has been used to characterize and obtain genetics information about microbial communities in various environments and can relate certain diseases with changes in community composition. In this study, samples were collected from the secretion of mucosa of vaginal surface of 05 healthy cows and 05 cows that showed symptoms of reproductive disorders. Metagenomics DNA samples were extracted of secretion samples and amplified with primers for the V5-V6 regions of the 16S rRNA and sequenced on the platform "Ion Torrent Personal Genome Machine - PGM". The data were processed to remove low quality sequences and chimeras, with the Mothur program, then the data were released in the Ribosomal Database Project for classification of OTU's. Local blastn was performed and this results was loaded in MEGAN program, for viewing profiles and taxonomic microbial attributes. The control profile showed a total of 15 taxa, being the taxa Bacteroides, Enterobacteriaceae and Victivallis, with the highest representation of OTU's; the positive profile showed 68 taxa, and Bacteroides, Enterobacteriaceae, Histophilus, Victivallis, Alistipes and Coriobacteriaceae, the taxa with more OTU's representation. The genus Histophilus have pathogenics species in reproductive tract of cattle. There was a change in the community composition, well as in microbial attributes of profiles there may be a relationship between the pathogen and of other representatives taxa, in production of metabolites to disease progression. / Distúrbios reprodutivos em bovinos podem ser causados por diversos patógenos, que poderiam já estar presentes no trato reprodutivos. A comunidade microbiana dos aparelhos reprodutivos, quando conhecida, pode fornecer informações a respeito da saúde do hospedeiro. A metagenômica tem sido utilizada para caracterizar e obter informações genéticas a respeito de comunidades microbianas de diversos ambientes, podendo relacionar determinadas doenças com alterações na composição das comunidades. Nesse trabalho, foram coletadas amostras de secreção de mucosa da superfície vaginal de 05 vacas sadias e 05 vacas que apresentaram sintomas de distúrbios reprodutivos. Amostras de DNA metagenômico foram extraídas das amostras de secreção e amplificadas com primers para as regiões V5-V6 do gene 16S rRNA e sequenciadas na plataforma Ion Torrent Personal Genome Machine PGM . Os dados foram tratados para retirada de sequencias de baixa qualidade e quimeras, com o programa Mothur; em seguida, os dados foram lançados no Ribosomal Database Project para classificação das OTU´s. Blastn local foi efetuado e seus resultados foram carregados no programa MEGAN, para visualização de perfis taxonômicos e atributos microbianos. O perfil controle apresentou um total de 15 taxa, sendo os taxa Bacteroides, Enterobacteriaceae e Victivallis, os de maior representação de OTU´s; o perfil com distúrbios apresentou 68 taxa, sendo Bacteroides, Enterobacteriaceae, Histophilus, Victivallis, Alistipes, e Coriobacteriaceae, os taxa com maior representação de OTU´s. O gênero Histophilus possui espécies patogênicas em trato reprodutivo de bovinos. Observou-se uma alteração na composição das comunidades estudadas, bem como nos atributos microbianos dos perfis podendo haver uma relação entre patógenos e representantes de outros taxa, na produção de metabólitos para progressão da doença.