Submitted by DAVID JAVIER GALINDO HUAMÁN null (dgalindoh89@gmail.com) on 2017-04-06T12:09:49Z No. of bitstreams: 1 galindo_dj_me_jabo.pdf: 3220960 bytes, checksum: b0645c4310022e5f5c72093f60c926a4 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-04-12T18:50:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 galindohuaman_dj_me_jabo.pdf: 3220960 bytes, checksum: b0645c4310022e5f5c72093f60c926a4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-12T18:50:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 galindohuaman_dj_me_jabo.pdf: 3220960 bytes, checksum: b0645c4310022e5f5c72093f60c926a4 (MD5) Previous issue date: 2017-02-24 / Outra / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O cervo-do-pantanal (Blastocerus dichotomus) é uma espécie emblemática dentro dos cervídeos neotropicais. Nas últimas décadas, suas populações têm sofrido declínio notório devido, principalmente, à destruição do seu habitat. Isto causa a perda da diversidade genética, que junto à depressão endogâmica (pelo isolamento de pequenas populações) pode levar à espécie a extinções locais. Nesse contexto, as técnicas de reprodução assistida podem auxiliar no processo de manutenção da diversidade genética nestas populações isoladas. Desta forma, o objetivo deste estudo foi elaborar um protocolo de superovulação para cervo-do-pantanal em cativeiro. Assim, foram testados protocolos sucessivamente (A, B, C) até que fossem obtidos resultados satisfatórios. Para que se pudesse chegar a um protocolo viável, foram testadas três combinações farmacológicas. Tratamento A: CIDR® durante sete dias, seguido de 0,5 mg de BE e 0,11 mg de GnRH no dia 0, 800UI de eCG no dia 5 após inserção do CIDR®, 530 µg de PGF2α no dia 7 e 0,11 mg de GnRH logo após a detecção do estro, para a indução da ovulação. Tratamento B: CIDR® durante oito dias, seguido de 0,5 mg de BE e 0,11 mg de GnRH no dia 0, 1200UI de eCG no dia 5 após inserção do CIDR®, 530 µg de PGF2α no dia 8 e 0,11 mg de GnRH logo após a detecção do estro, para a indução da ovulação. Tratamento C: CIDR® durante oito dias, seguido de 0,5 mg de BE e 0,11 mg de GnRH no dia 0, 1200UI de eCG no dia 5 após inserção do CIDR®, 530 µg de PGF2α no dia 8 e 2,5 mg de LH, entre 12-18 horas após a detecção do estro para a indução da ovulação. A detecção de estro foi realizada com o auxílio de um macho, sendo permitida a cópula. Oito dias após a cópula foi realizada a contagem dos CL e folículos anovulatórios mediante laparotomia mediana ventral, assim como a colheita de embriões. O Tratamento A resultou em 2 CL. O Tratamento B resultou em 1 CL e 8 folículos anovulatórios. O Tratamento C resultou em 10, 3 e 11 CL, e 0, 1 e 5 folículos anovulatórios para as fêmeas 3, 4 e 5, respectivamente. Além disso foi realizada a colheita de 2, 2 e 5 embriões das fêmeas FBD3, FBD4 e FBD5, respectivamente. Obtendo uma taxa de recuperação de 37,5% (9/24), dos quais dois eram embriões viáveis para transferência. Todos os tratamentos foram efetivos na sincronização do estro. O Tratamento C, com a aplicação i.m. de 1200UI de eCG e de LH, como indutor da ovulação, teve a melhor resposta em termos de superovulação, assim como de colheita de embriões. / The marsh deer (Blastocerus dichotomus) is an emblematic species within the neotropical deer. In the last decades, their populations have suffered a notable decline due, mainly, to the destruction of their habitat. This causes loss of genetic diversity, which together with inbreeding depression (by the isolation of many small populations) can lead this species to local extinctions. In this context, assisted reproduction techniques can help in the process of maintaining genetic diversity in these isolated populations. Thus, the aim of this study was to elaborate a superovulation protocol for captive marsh deer. Therefore, protocols were successively tested (A, B, C) until satisfactory results were obtained. To be able to achieve a viable protocol, three pharmacological combination were tested. Treatment A: CIDR® for 7 days, followed by 0.5 mg of EB and 0.11 mg of GnRH on D0, 800IU of eCG on day 5 after CIDR® insertion, 530 µg PGF2α on day 7, and 0.11 mg of GnRH soon after estrus detection, for ovulation induction. Treatment B: CIDR® for 8 days, followed by 0.5 mg of EB and 0.11 mg of GnRH on D0, 1200IU of eCG on day 5 after CIDR® insertion, 530 µg PGF2α on day 8, and 0.11 mg of GnRH soon after estrus detection, for ovulation induction. Treatment C: CIDR® for 8 days, followed by 0.5 mg of EB and 0.11 mg of GnRH on D0, 1200IU of eCG on day 5 after CIDR® insertion, 530 µg PGF2α on day 8, and 0.25 mg of LH, between 12-18 hours post estrus detection, for ovulation induction. Estrus detection was performed with the aid of a male, and copulation was allowed. Eight days after copulation, CL and anovulatory follicles were counted through median ventral laparotomy, as well as the collection of embryos. Treatment A resulted in 2 CL. Treatment B resulted in 1 CL and 8 anovulatory follicles. Treatment C resulted in 10, 3 and 11 CL, and 0, 1 and 5 anovulatory follicles for hinds FBD3, FBD4, and FBD5, respectively. In addition, 2, 2 and 5 embryos were harvested from hinds FBD3, FBD4 and FBD5, respectively. Obtaining a recovery rate of 37.5% (9/24), of which two were viable embryos for transfer. All treatments were effective in synchronizing estrus. Treatment C, with an i.m. application of 1200IU of eCG and LH, as ovulation inducer, had the best response in terms of superovulation, as well as embryo collection.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-01-26T13:46:03Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_VitrificacaoTecidoOvariano.pdf: 4015963 bytes, checksum: 40c8ba45cdbfd05b51e3296153b718d1 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-01-27T13:24:34Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_VitrificacaoTecidoOvariano.pdf: 4015963 bytes, checksum: 40c8ba45cdbfd05b51e3296153b718d1 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-27T13:24:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_VitrificacaoTecidoOvariano.pdf: 4015963 bytes, checksum: 40c8ba45cdbfd05b51e3296153b718d1 (MD5) Previous issue date: 2016-09-06 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Esta tese tem como principal objetivo desenvolver um protocolo eficiente de vitrificação de tecido ovariano de gata doméstica (Felis catus). O estudo foi dividido em: Fase I: Efeito de diferentes tipos de meios-base durante a vitrificação de tecido ovariano de gata; Fase II: Efeito de diferentes crioprotetores extracelulares e técnicas de vitrificação em tecido ovariano de gata; Na fase I, a morfologia de folículos pré-antrais foi similar ao controle fresco (p > 0,05), quando o RPMI-1640 foi utilizado como meio-base. RPMI-1640 não contém vermelho fenol que, adicionado ao meio, intensificou a toxicidade do crioprotetor etileno glicol durante a vitrificação. Na fase II, a percentagem de folículos morfologicamente normais foi similar ao controle, apenas quando o meio de vitrificação foi suplementado com 0,1 M ou 0,5 M de trealose (p > 0,05). Além disso, através dos parâmetros como a morfologia, proliferação celular e espessura de fibras colágenas pode-se dizer que a combinação de trealose com etilenoglicol (EG) sozinho ou adicionado de dimetilsufóxido (DMSO), aplicando os métodos Solid-surface vitrification (SSV) ou Ovarian Tissue cryosystem (OTC), apresentaram sucesso na preservação do tecido ovariano vitrificado. Apesar do OTC com EG não apresentar diferença significativa dos demais tratamentos, uma vez que este protocolo apresentou o maior percentual de folículos morfologicamente normais (56%), sendo similar ao controle (64%). Adicionalmente, nenhum efeito sobre a regulação de expressão gênica foi observada nos grupos testados, quando foram avaliados marcadores de apoptose (BAX - proteína X associada ao Bcl-2), de estresse do retículo endoplasmático (ERP29 – proteína do retículo endoplasmático 29), de canais de água como as aquaporinas 3 e 9 (AQP3 e AQP9), e os transportadores de membrana ABC (ABCB1 e ABCG2), com exceção do método SSV com EG que apresentaram, após 7 dias de cultivo in vitro, um aumento da expressão da ERP29 (indica estresse no reticulo endoplasmático) e a diminuição da expressão da AQP9 (afeta canais de transporte de agua). Com isso, para a manutenção da preservação do tecido ovariano de gata é necessário o uso de um protocolo de vitrificação contendo meio-base livre de vermelho fenol, suplementado com trealose, como crioprotetor extracelular, e EG sozinho ou associado com DMSO, como crioprotetores intracelulares. Ambos os sistemas abertos (SSV) e fechados (OTC) são equivalentes na eficiencia em manter a sobrevivência folicular durante o processo de vitrificacao. / The aim o the present thesis was to develop an efficient vitrification protocol of the ovarian tissue from domestic cat (Felis catus). This study was divided: Phase I: Effect of different basis media during the vitrification of cat ovarian tissue; Phase II: Effect of different sugars (extracellular cryoprotectants) and the vitrification technique for the vitrification of feline ovarian tissue. In phase I, the morphology of preantral follicles was similar (p > 0.05) to fresh control when RPMI-1640 was used as basis medium for vitrification. RPMI-1640 does not contain phenol red, which was found to enhance ethylene glycol (EG) toxicity during vitrification. In phase 2, the percentage of morphologically normal preantral follicles was similar (p > 0.05) to fresh control only when the vitrification medium contained 0.1 or 0.5 M trehalose, instead of sucrose or raffinose at same concentrations. Furthermore, based on parameters such as morphology, cell proliferation and thickness of collagen fibers, it is possibe to assume that efficient vitrification of feline ovarian tissue can be performed by combining trehalose with EG, with or without dimethylsulfoxide (DMSO), applying the solid-surface vitrification (SSV) or ovarian tissue cryosystem (OTC) method. Although vitrification with OTC in the presence of EG did not differ from the other treatments, this protocol presented the highest percentages of preserved preantral follicles (56%), being similar to control (64%). Additionally, no effect on gene regulation was observed after vitrification when apoptosis markers (BAX – protein X associated to Bcl-2), endoplasmic reticulum (ER) stress (ER protein 29 – ERP29), water channels proteins like aquaporins 3 and 9 (AQP3 and AQP9), the membrane ABC transporters ABCB1 and ABCG2, except when the SSV method was applied using only EG as cryoprotectant followed by seven days in vitro culture, where ERP29 up-regulation (ER stress) and AQP9 down-regulation (impaired water transport) were observed. Based on this, it can be concluded that to efficiently preserve feline ovarian tissue, is is necessary the use of a vitrification protocol free of phenol red, supplemented with trehalose, as extracellular cryoprotectant, and EG alone or in combination with DMSO, as intracellular cryoprotectants. Both open (SSV) and closed (OTC) systems are equaly efficient to maintain follicular survival during the vitrification procedure.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2014-02-26T17:41:00Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoAndrologicaCriopreservacao.pdf: 583263 bytes, checksum: 2c984e9b23730bb3ded92177091696eb (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-02-27T14:34:36Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoAndrologicaCriopreservacao.pdf: 583263 bytes, checksum: 2c984e9b23730bb3ded92177091696eb (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-27T14:34:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoAndrologicaCriopreservacao.pdf: 583263 bytes, checksum: 2c984e9b23730bb3ded92177091696eb (MD5) Previous issue date: 2005 / A biotecnologia aplicada à reprodução é uma ferramenta também importante para conservação de espécies ameaçadas de extinção. Algumas espécies de primatas não-humanos neotropicais têm sido amplamente agredidas por ações antrópicas, ocasionando a inclusão de 26 espécies brasileiras na lista oficial de animais ameaçados de extinção do IBAMA. As espécies de primatas não humanos Ateles belzebuth e Ateles paniscus, participantes do gênero Ateles, popularmente chamados de macaco-aranha, encontram-se particularmente ameaçadas. Poucos estudos são realizados acerca do status populacional destas espécies e menos ainda sobre dados reprodutivos e reprodução assistida. O presente trabalho pretendeu avaliar as características andrológicas de exemplares de primatas não humanos do gênero Ateles em cativeiro e comparar a performance dos diluentes TES e CEBRAN II, este último à base de ringer lactato, como criopreservadores de sêmen destas espécies. O experimento foi realizado utilizando 06 exemplares machos de primatas não humanos do gênero Ateles (02 exemplares de Ateles marginatus e 04 exemplares de Ateles paniscus) mantidos sob as mesmas condições de cativeiro no Centro Nacional de Primatas (CENP-SVS/MS), em Ananindeua, Pará. Os animais utilizados foram submetidos a exame clínico-andrológico e biometria testicular, antes da colheita seminal realizada por eletroejaculação. Foram realizadas avaliações físicoquímicas e de patologias espermáticas, além de avaliação de motilidade e vigor no sêmen a fresco e pós-diluição com os diluentes TES e CEBRAN II. As alíquotas de sêmen diluídas com os dois diluentes, na proporção 2:1, foram envasadas em minitubos com capacidade para 0,25 ml e criopreservados em nitrogênio líquido. Após descongelação, as doses envasadas foram avaliadas em teste de termo-resistência (T.T.R.). As médias de volume e concentração espermáticas obtidas foram, respectivamente, 1,94 ml (± 0,83) e 3.020.000 sptz/ml (±275,97). O pH 8 foi observado em todas as amostras e todos os exemplares apresentaram coagulação seminal. O índice de patologias espermáticas encontrados foi alto (69,8% ± 9,05) indicando que pode haver influência da sazonalidade reprodutiva nas características seminais encontradas nos animais deste experimento. Os resultados de avaliação de motilidade e vigor do sêmen a fresco, diluído e no T.T.R. não puderam ser analisadas estatisticamente, pois somente o sêmen de 03 animais demonstrou espermatozóides viáveis pós-descongelação, com resultados que sugerem que o diluente TES apresenta melhor eficiência na preservação de sêmen de Ateles do que o diluente CEBRAN II. / Biotechnology reproductive is a tool also important for conservation of endangered species. Some neotropicals no humans primates no-humans have been attacked thoroughly by human activities, causing the inclusion of 26 brazilian species in the official list of endangered animals of IBAMA. The species of primates Ateles belzebuth and Ateles paniscus, participants of the genus Ateles, popularly called spiders monkeys are particularly threatened. Few studies are accomplished concerning the population status of these species, mainly about reproductive data and assisted reproductive techniques. The present study intends evaluate andrologic characteriscs of non human primates of genus Ateles in captive and compare the performance of the diluentes TES and CEBRAN II, this last one to the base of ringer lactato, as cryopreservatives of semen of these species. The experiment was accomplished using 06 male monkeys of primates no humans genus Ateles (02 Ateles marginatus and 04 Ateles paniscus) maintained in the same captivity conditions in the National Center of Primates (CENP-SVS/MS), Ananindeua, Pará. These animals were submitted to clinical and andrological exams and testicular measurements, before the seminal collection by eletroejaculation. Physiochemical evaluations were accomplished and spermatic abnormalities too, besides motility and forward movement evaluation in the fresh semen and semen dilution with the diluents TES and CEBRAN II. The ejaculates diluted with the two diluents (2:1proportion) and were packed in plastic straws with capacity for 0,25 ml, cryopreserveds in liquid nitrogen. After thawing, the packed ejaculates were appraised in term-resistance test (T.T.R.). The volume averages and concentration obtained were, respectively, 1,94 ml (0,83) and 3.020.000 sptz/ml (275,97). THE pH 8 was observed in all of the samples and all animals presented seminal coagulation. The index of abnormalities spermatics found was loud (69,8% 9,05) indicating that can have influence of the seasonal breeding in the seminal characteristics found in the animals of this experiment. The results of motility evaluation and forward movement of the fresh and diluted semen and in T.T.R. could not be analyzed by statistical method, because only the semen of 03 animals demonstrated viable spermatozoids in thawing, with results that suggest that the TES diluent presents better efficiency in the preservation of semen of Ateles than CEBRAN II.