Made available in DSpace on 2015-04-14T13:34:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 410177.pdf: 3937581 bytes, checksum: 9588bb7a228c103426c20b2050c969d6 (MD5) Previous issue date: 2009-03-06 / A epilepsia atinge cerca de 1% da popula??o mundial, sendo que aproximadamente 30% desses pacientes n?o respondem ao tratamento medicamentoso. Por sua vez, as c?lulas tronco representam uma esperan?a de tratamento da epilepsia, porquanto t?m grande capacidade de prolifera??o, diferencia??o e regenera??o de tecidos, podendo restaurar circuitos neurais e restabelecer a excitabilidade neuronal fisiol?gica. O objetivo deste estudo foi verificar se as c?lulas tronco mesenquimais (CTM) ou se c?lulas lisadas (Lise Celular) obtidas da medula ?ssea apresentam potencial terap?utico no controle das crises epil?pticas e do dano neuronal progressivo induzido pela epilepsia experimental. Os animais foram injetados com l?tio-pilocarpina (127 mg/kg e 60 Mg/kg i.p., respectivamente) para indu??o de status epilepticus (SE). As crises comportamentais foram classificadas de acordo com a escala de Racine e a dura??o do SE foi controlada com diazepam (10 mg/kg, i.p., 90 minutos). Os animais controle receberam solu??o salina. Ap?s 22 dias, o total dos animais foi dividido em cinco grupos: PILO; PILO+CTM, PILO+Lise, Salina e Salina+CTM. Os grupos CTM receberam transplante de c?lulas tronco mesenquimais, obtidas da medula ?ssea de camundongos EGFP C57BL/6. O grupo PILO+Lise recebeu c?lulas tamb?m provenientes da medula ?ssea desses animais, mas que passaram previamente por um processo de lise celular. Os animais dos grupos Salina e PILO receberam solu??o salina. Todos os transplantes foram feitos via veia da cauda (104-6 c?lulas, 200μL). Os animais tratados com pilocarpina (PILO) foram monitorados por v?deo durante sete dias pr?-transplante, e outros catorze dias ap?s o procedimento, para observa??o e computa??o de crises espont?neas recorrentes (CERs). Ainda, 45 dias depois da inje??o das c?lulas os animais foram avaliados nas seguintes tarefas: labirinto aqu?tico de Morris (LAM), reconhecimento de objetos, campo aberto e labirinto em cruz elevado. Decorridos 24 horas, 07 dias, 14 dias, 21 dias, 60 dias e 135 dias do transplante os animais foram sacrificados, e foram coletados os hipocampos direito e esquerdo para an?lise da presen?a de EGFP por PCR. Para a avalia??o histol?gica, os animais foram sacrificados 04 meses ap?s o transplante, tendo sido analisados o volume hipocampal, o volume dos n?cleos CA1, CA2, CA3 e CA4, bem como a densidade e o n?mero total de c?lulas nestes n?cleos. Finalmente, as c?lulas provenientes da medula ?ssea de camundongos C57/BL6 antes e ap?s serem cultivadas foram avaliadas por citometria de fluxo. Nossos resultados demonstram que as c?lulas mesenquimais injetadas n?o reduzem as CERs. J? para os animais tratados com lisado celular, verificamos que h? redu??o na freq??ncia de crises. A administra??o de CTM aos animais tratados com PILO promoveu melhora cognitiva no paradigma do reconhecimento de objetos, sem, por?m, melhorar a performance destes animais no LAM. O tratamento com lisado celular, por sua vez, n?o levou a melhor desempenho em quaisquer dos paradigmas cognitivos citados acima. Por meio da an?lise histol?gica podemos observar que os animais tratados com l?tio-pilocarpina apresentavam contagem total de c?lulas, densidade e volume inferiores aos animais controle. Ainda, CTM ou Lise n?o produziram aumento significativo em nenhuma das vari?veis analisadas, com exce??o do volume hipocampal, que se apresentou maior nos grupos PILO+CTM no hemisf?rio direito e PILO+Lise em ambos os hemisf?rios. Por outro lado, a an?lise dos dados obtidos na citometria de fluxo revelou que as CTM s?o positivas para os seguintes marcadores de superf?cie CD45, CD19, CD34, CD117 e Sca-1. Finalmente, detectamos a presen?a de EGFP em amostras obtidas do hipocampo de animais transplantados com CTM, resultado que demonstra que as c?lulas administradas intravenosamente migram ao sistema nervoso central. Nos ?ltimos anos, estudos que buscam tratamentos baseados em c?lulas tronco para as mais diversas doen?as neurodegenerativas foram vistos com muito interesse. Este tipo de tratamento pode, no futuro, ser ?til tamb?m no tratamento da epilepsia cr?nica, embora ainda seja preciso estabelecer com mais clareza o tipo de c?lula tronco ideal.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-12-04T21:15:20Z No. of bitstreams: 1 AngelicaFernandesGurgelDeSousa_DISSERT.pdf: 4154120 bytes, checksum: 9b7e3179ef04b1aafa2fdd770a6124d4 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-12-08T23:03:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 AngelicaFernandesGurgelDeSousa_DISSERT.pdf: 4154120 bytes, checksum: 9b7e3179ef04b1aafa2fdd770a6124d4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-08T23:03:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AngelicaFernandesGurgelDeSousa_DISSERT.pdf: 4154120 bytes, checksum: 9b7e3179ef04b1aafa2fdd770a6124d4 (MD5) Previous issue date: 2017-05-26 / Os problemas relacionados com defeitos ?sseos continuam a motivar a busca de terapias mais eficazes. Assim, a combina??o de biomateriais, c?lulas-tronco e mol?culas bioativas fazem parte das ferramentas usadas pela medicina regenerativa para alcan?ar esse objetivo. Diversos estudos j? mostraram o potencial osteog?nico dos polissacar?deos sulfatados (PSs) extra?dos de macroalgas marinhas. Entre eles, o fucoidan, isolado da alga marrom Fucus vesiculosus, ? o mais estudado, sendo j? comercializado por algumas empresas. As algas verdes tamb?m s?o fonte de PSs, mas estas s?o ainda pouco exploradas para aplica??es na regenera??o ?ssea. Em geral, as aplica??es cl?nicas dos PSs extra?dos de algas ainda s?o limitadas devido ? escassez de estudos sobre os seus efeitos, como por exemplo, o potencial genot?xico ? desconhecido na maioria dos casos. Assim, neste trabalho avaliamos a atividade osteog?nica 1) do Fucoidan de F. vesiculosus (um extrato comercializado pela Sigma), 2) das amostras ricas em PSs obtidas do subfracionamento do fucoidan comercial, e 3) do extrato rico em PSs extra?dos da alga verde Caulerpa sertularioides usando como modelo c?lulas-tronco humanas isoladas da geleia de Wharton de cord?es umbilicais (CTMH-GW). Estudou-se tamb?m o potencial genot?xico dos extratos totais de F. vesiculosus e C. sertularioides e posteriormente, da subfra??o do fucoidan que apresentou maior potencial osteog?nico, utilizando do ensaio de micron?cleo com bloqueio da citocinese (CBMN) na linhagem CHO-K1. Os ensaios de redu??o do MTT evidenciaram que as amostras ricas em PSs n?o apresentaram citotoxicidade significativa ao longo de 72 h, at? 10 ?g.mL-1. Os ensaios de atividade da fosfatase alcalina (ALP) e de mineraliza??o sugerem que as amostras ricas em PSs possuem atividades osteog?nicas diferentes: a subfra??o do fucoidan FUC 0.5 (5 ?g.mL-1) foi a que apresentou melhor resultado, aumentando 124% a atividade da ALP em rela??o ao controle positivo (c?lulas mantidas em meio osteog?nico). J? o extrato total de C. sertularioides (5 ?g.mL-1) aumentou 192% a atividade da ALP. Adicionalmente, todas as amostras testadas induziram o ac?mulo de c?lcio na matriz extracelular. Quanto ? genotoxicidade, os resultados do ensaio CBMN sugerem que, nas condi??es testadas, estas amostras n?o s?o genot?xicas, indicando que podem ser uma alternativa para terapias de regenera??o ?ssea. / Problems related with bone defects continue to motivate the search for more effective therapies. Thus, the combination of biomaterials, stem cells and bioactive molecules is part of the tools used by regenerative medicine to achieve this goal. Several studies have already shown the osteogenic potential of sulfated polysaccharides (SPs) extracted from marine macroalgae. Among them, fucoidan, isolated from brown algae Fucus vesiculosus, is the most studied, and is already commercialized by some companies. Green algae are also a source of SPs, but these are even more unexploited in the scope of bone regeneration. In general, the clinical applications of SPs from algae are very limited, because studies on their effects are scarce, for example, their genotoxic effects are unknown in most cases. Thus, in this work, we evaluated the osteogenic activity of Fucoidan from F. vesiculosus (an extract commercialized by Sigma), 2) SPs-rich samples obtained from subfractionation of commercial fucoidan, and 3) SPs-enriched extract from green algae Caulerpa Sertularioides, using human mesenchymal stem cells isolated from the Wharton jelly of umbilical cords (CTMH-GW) as cell model. It was also studied the genotoxic potential of the total extracts of F. vesiculosus and C. sertularioides, using the cytokinesis block micronucleus assay (CBMN) in the line CHO-K1. The genotoxicity of fucoidan?s subfraction that presented greater osteogenic potential was also evaluated. The MTT reduction assays showed that SPs-enriched samples did not show significant cytotoxicity over 72 h, up to 10 ?g.mL-1. Alkaline phosphatase (ALP) activity and mineralization assays suggest that SPs-enriched samples have different osteogenic activities: fucoidan subfraction FUC 0.5 (5 ?g.mL-1) showed the best result, increasing 124% the ALP activity in relation to the positive control (cells maintained in osteogenic medium). The total extract of C. sertularioides (5 ?g.mL-1) increased the ALP activity by 192%. In addition, all samples tested induced calcium accumulation in the extracellular matrix. Concerning to genotoxicity, CBMN assay results suggest that, under the tested conditions, these samples are not genotoxic, indicating their potential as alternative bone regeneration therapy.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:30:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 464699.pdf: 3304843 bytes, checksum: 1c2d736171549331a5af746072affda0 (MD5) Previous issue date: 2014-11-26 / Mesenchymal stem cells hold great promise for tissues repair and regeneration, including bone defects. The association of these cells to a scaffold which resembles bone tissue structure and physiology is a major challenge in bone tissue engineering. The lyophilized bovine bone has a structure, chemical composition and mechanical properties similar to human bone marrow and acts as an excellent osteoconductive material. This in vitro study aimed to evaluate the growth of bone marrow mononuclear cells (BMMC) on a lyophilized bovine bone scaffold (Orthogen? - Baumer S.A., BR) covered with fibronectin; to verify if different cell densities interfere with the adhesion and proliferation of these cells and to evaluate whether the combination of platelet-rich plasma (PRP) interferes with adhesion and proliferation of BMMC grown on the lyophilized bovine bone scaffold. For this purpose, bone marrow cells obtained from a Kyoto rat were grown on blocks of lyophilized bovine bone coated with fibronectin in DMEM culture medium supplemented with 10% inactivated fetal bovine serum. The Orthogen? samples were distributed into four experimental groups, in triplicate, in three 24 wells culture plates and evaluated in three periods: 72 h, 96 h and 192 h. Group 1: lyophilized bovine bone + BMMC (5 x 104 cells / well); Group 2: lyophilized bovine bone + BMMC + PRP; Group 3: lyophilized bovine bone + fibroblasts (3T3); Group 4: lyophilized bovine bone + BMMC (15 x 104 cells / well). Cultures were incubated with the intercalating agent 4',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) for nuclear staining in order to evaluate the cell population density, by detection with confocal microscopy, of the number of cells adhered to the lyophilized bovine bone scaffolds, after 72 h, 96 h and 192 h. The analysis of the lyophilized bovine bone surface and the morphological aspects of the cells adhered to it was performed on one sample from each group, by scanning electron microscopy (SEM). Analysis of variance (ANOVA) with two factors showed a significant interaction between the main effects evaluated: group and time, with p < 0.001. Through the results of Bonferroni statistical test, significant difference was found in the average number of nuclei in the period of culture of 96 h in group 3, and the period of culture of 192 h in group 4, which was higher than the other groups. Through SEM analysis, mononuclear cells adhered to the lyophilized bovine bone scaffold were observed only in the groups 3 and 4, in the last, progressively, being already possible to observe cell morphology differentiation and to identify spherical and fusiform cells with cytoplasmic extensions. We concluded that BMMC cultured on a lyophilized bovine bone scaffold coated with fibronectin adhered and proliferated on the bone surface. BMMC cultured at a density of 15 x 104 cells / well, adhered and proliferated on the bone surface more evidently, when compared to the BMMC cultured at a density 5 x 104 cells / well, in the three culture periods evaluated. The association of PRP to BMMC culture on a lyophilized bovine bone scaffold increased, but not with statistical significance, the adhesion and proliferation on the bone surface. / As c?lulas-tronco mesenquimais det?m grande promessa para a repara??o e regenera??o de tecidos, inclusive de defeitos ?sseos. A associa??o destas c?lulas a um arcabou?o que se assemelhe ? estrutura e ? fisiologia do tecido ?sseo ? um dos grandes desafios da engenharia tecidual ?ssea. O osso bovino liofilizado, com estrutura e composi??o qu?mica similares ao osso humano medular, al?m de possuir propriedades mec?nicas compar?veis ?s do osso humano, atua como excelente material osteocondutor. O presente estudo in vitro teve como objetivos avaliar o cultivo de c?lulas mononucleares de medula ?ssea (CMMO) sobre um arcabou?o de osso bovino liofilizado (OrthoGen? - Baumer S.A., BR) recoberto com fibronectina; verificar se diferentes densidades celulares interferem na prolifera??o e na ades?o destas c?lulas e avaliar se a associa??o de plasma rico em plaquetas (PRP) interfere na ades?o e na prolifera??o das CMMO cultivadas sobre o arcabou?o de osso bovino liofilizado. Para isso, c?lulas da medula ?ssea obtidas de um rato Kyoto foram cultivadas sobre blocos de osso bovino liofilizado, recobertos com fibronectina, em meio de cultura DMEM suplementado com 10% de soro fetal bovino inativado. As amostras do OrthoGen? foram distribu?das em quatro grupos experimentais, em triplicata, em tr?s placas de cultura com 24 po?os e avaliadas em tr?s per?odos: 72 h, 96 h e 192 h. Grupo 1: osso bovino liofilizado + CMMO (5 x 104 c?lulas/po?o); Grupo 2: osso bovino liofilizado + CMMO + PRP; Grupo 3: osso bovino liofilizado + fibroblastos (3T3); Grupo 4: osso bovino liofilizado + CMMO (15 x 104 c?lulas/po?o). As culturas foram incubadas com o agente intercalante 4',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) para colora??o nuclear visando ? avalia??o de densidade populacional, por meio da detec??o por microscopia confocal, do n?mero de c?lulas aderidas aos arcabou?os de osso bovino liofilizado, ap?s 72 h, 96 h e 192 h. A an?lise da superf?cie do osso bovino liofilizado e das caracter?sticas morfol?gicas das c?lulas aderidas sobre ele o foram realizadas em uma amostra de cada grupo, com o aux?lio do microsc?pio eletr?nico de varredura. A an?lise de vari?ncia (ANOVA) com dois fatores mostrou intera??o significativa entre os efeitos principais avaliados: grupo e tempo, com valor de p < 0,001. Atrav?s dos resultados do teste estat?stico de Bonferroni, verificou-se diferen?a significativa da m?dia de n?cleos no per?odo de cultura de 96 h no grupo 3, e no per?odo de cultura de 192 h no grupo 4, a qual foi maior do que as dos demais grupos. Atrav?s da an?lise por microscopia eletr?nica de varredura foram observadas CMMO aderidas ao arcabou?o de osso bovino liofilizado somente no grupo 3 e no grupo 4, neste aumentando de forma progressiva, j? sendo poss?vel evidenciar diferencia??o na morfologia celular e identificar c?lulas esf?ricas e fusiformes com prolongamentos citoplasm?ticos. Conclui-se que as CMMO cultivadas sobre um arcabou?o de osso bovino liofilizado recoberto com fibronectina aderiram e proliferaram sobre a superf?cie ?ssea. As CMMO cultivadas numa densidade de 15 x 104 c?lulas / po?o, aderiram e proliferaram sobre a superf?cie ?ssea de forma mais evidente, quando comparadas ?s CMMO cultivadas numa densidade 5 x 104 c?lulas / po?o, nos tr?s per?odos de cultura avaliados. A associa??o de PRP ? cultura de CMMO sobre um arcabou?o de osso bovino liofilizado aumentou, mas n?o de forma estatisticamente significativa, a ades?o e a prolifera??o celular sobre a superf?cie ?ssea.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-02-23T00:01:15Z No. of bitstreams: 1 JessicaAlvesDeMedeirosAraujo_DISSERT.pdf: 20630647 bytes, checksum: 1016136129718286256c9eeb291a89c5 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-02-26T22:00:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 JessicaAlvesDeMedeirosAraujo_DISSERT.pdf: 20630647 bytes, checksum: 1016136129718286256c9eeb291a89c5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-26T22:00:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JessicaAlvesDeMedeirosAraujo_DISSERT.pdf: 20630647 bytes, checksum: 1016136129718286256c9eeb291a89c5 (MD5) Previous issue date: 2015-04-08 / A possibilidade de repor c?lulas perdidas em doen?as neurodegenerativas atrav?s de transplantes com c?lulas-troncos das mais diversas fontes vem sendo amplamente estudada. As c?lulas-tronco adultas (CTA) podem ser facilmente isoladas e sua utiliza??o na pesquisa n?o envolve quest?es ?ticas e religiosas. Al?m disso, estas c?lulas s?o menos prop?cias ? transforma??o tumoral do que c?lulas-tronco embrion?rias, outra importante fonte de c?lulas para terapias celulares. No entanto, as CTA s?o, em estados fisiol?gicos, restritas a gera??o de c?lulas dos seus tecidos de origem, o que poderia limitar a sua utiliza??o. Por?m, nos ?ltimos anos, uma s?rie de t?cnicas vem sendo descritas com o objetivo de reverter tais limita??es. Neste trabalho, n?s investigamos a capacidade das c?lulas-tronco mesenquimais adultas, isoladas de camundongos ou do cord?o umbilical humano, serem induzidas a adquirir um fen?tipo neuronal de forma direta, sem passar por um est?gio de c?lula progenitora ou pluripotente, atrav?s da reprograma??o gen?tica com genes pr?-neurais. Nossos resultados indicam que tanto c?lulas-tronco mesenquimais adultas murinas quanto humanas podem ser reprogramadas em neur?nios ap?s a express?o combinada de Sox2 e Ascl1 ou Sox2 e Neurog2. As c?lulas reprogramadas exibem morfologias compat?veis com o fen?tipo neuronal, expressam prote?nas t?picas de neur?nios maduros, apresentam a capacidade de gerar potenciais de a??o repetitivos e formam conex?es sin?pticas com outros neur?nios presentes no cultivo. Portanto, nosso trabalho apresenta a primeira evid?ncia de reprograma??o direta de c?lulas-tronco mesenquimais humanas em neur?nios funcionais.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 432976.pdf: 13950952 bytes, checksum: 85bef78387928925cf69df3245a8d8b9 (MD5) Previous issue date: 2011-03-30 / Os defeitos ?sseos podem ser considerados cr?ticos ou n?o, de acordo com sua capacidade de reparo normal pelo organismo evitando sequelas ?sseas. O tempo decorrido para ocorrer esse reparo acabar? trazendo alguma sequela tempor?ria para o paciente. Esse estudo teve como objetivo avaliar e comparar a influ?ncia de c?lulas mesenquimais indiferenciadas, cultivadas sob membranas de col?geno, no reparo de defeitos ?sseos em f?mur de ratos. Dos 14 animais utilizados na pesquisa, dois foram doadores de medula ?ssea e doze compuseram a amostra. Os animais foram submetidos a quatro danos teciduais no f?mur direito: Grupo 1, com c?lulas mesenquimais indiferenciadas dilu?das em soro fisiol?gico e recobertas por membrana de col?geno; Grupo 2, com c?lulas mesenquimais indiferenciadas dilu?das em gel de hidroxipropilmetilcelulose (HPMC); Grupo 3, com c?lulas mesenquimais indiferenciadas dilu?das em gel de HPMC e recobertas com membrana de col?geno; e Grupo 4, controle: reparo espont?neo. Quatro animais foram eutanasiados nos per?odos de 7, 18 e 30 dias p?s-operat?rios e avaliados por meio de histologia com hematoxilina e eosina em micorscopia de luz e demicroscopia eletr?nica de varredura. Todos os grupos estudados tiveram reparoda cavidade ?ssea formada, muito embora somente o grupo controle tenha apresentado forma??o de cortical ?ssea na sua por??o externa em 30 dias. O presente estudo sugere que o uso de c?lulas mesenquimais indiferenciadas n?o contribui para acelerar o processo de reparo ?sseo em defeitos n?o cr?ticos. O uso desses biomateriais pode inclusive atrasar o processo de reparo ?sseo, uma vez que o organismo ter? que reabsorver esse biomaterial, ao mesmo tempo que dever? estar formando novo osso