A Diabetes mellitus em cães é cada vez mais frequente, decorrente de fatores genéticos e/ou ambientais, como um distúrbio endócrino que, de forma semelhante à que ocorre em humanos, falha no controle adequado de glicose no sangue, desencadeia a hiperglicemia, glicosúria e perda de peso. A terapia celular utilizando as células beta-pancreáticas tem sido alvo de estudos, devido à grande demanda de novos casos de Diabetes mellitus e à falta de órgãos para transplantes em humanos e animais. Acredita-se que a ciência possa responder e inovar em tratamentos, encontrando a possível cura para esta doença complexa. Portanto, o objetivo deste estudo foi obter e caracterizar células derivadas do pâncreas fetal canino de animais com idades compreendidas entre 50 e 60 dias de gestação. As células pancreáticas de fetos caninos apresentam morfologia fibroblastóide e crescimento em monocamada em cultivo, apresentam células pluripotentes e proliferativas, não são tumorigênicas e apresentam expressão de PDX1, um fator de transcrição que tem papel importante na ativação do gene promotor da insulina. O pâncreas possui inervação simpática, observado por fibras nervosas TH+. Histologicamente, o pâncreas fetal canino apresenta ácinos num estágio de organização avançado, com parênquima semelhante ao encontrado no cão adulto. As ilhotas pancreáticas são distribuídas no tecido de maneira irregular, organizando-se em pequenos aglomerados de células por entre os ácinos, especialmente próximas aos vasos sanguíneos. A coloração com Ditizona permitiu inferir a presença de insulina no tecido pancreático, o que foi comprovado mediante técnica de imunofluorescência, além da presença de células que expressam o hormônio somatostatina. Os resultados desta investigação indicam que o pâncreas fetal canino demonstra características favoráveis para ser uma fonte viável de células para estudos aplicados à terapia celular em cães. Outras investigações referentes à comprovação da produção de insulina in vitro por essas células se fazem necessárias / Diabetes mellitus in dogs is increasingly common, due to genetic and/or environmental factors such as an endocrine disorder, similarly to what occurs in humans, failure to adequately control blood glucose triggers hyperglycemia, glycosuria and weight loss. Cell therapy using the pancreatic beta cells has been the subject of studies, due to the great demand of new cases of diabetes mellitus and the lack of organs for transplants in humans and animals. It is believed that science can respond and innovate treatments, finding a possible cure for this disease complex. Therefore, the objective of this study was to obtain and characterize derived cells from canine fetal pancreas, of animals aged between 50 and 60 days of gestation. The pancreatic cells of canine fetuses exhibit fibroblastoid morphology and growth in monolayer culture, exhibit pluripotent and proliferative cells, are not tumorigenic and have PDX1 expression, a transcription factor that plays an important role in the activation of the insulin gene promoter. The pancreas has sympathetic innervation observed by TH+ nerve fibers. Histologically, the fetal pancreatic acini canine presents an advanced stage organization with similar parenchyma that found in adult dog. The pancreatic islets are distributed in the fabric unevenly, organizing themselves into small clusters of cells through the acini, especially close to the blood vessels. Staining with Dithizone allowed inferring the presence of insulin in the tissue, which was confirmed by immunofluorescence, in addition to cells that express somatostatin. The results of this investigation indicate that the canine fetal pancreas shows favorable characteristics to be a feasible source of cells for cell therapy applied to studies in dogs. Further investigation regarding the evidence of in vitro production of insulin by these cells are required

A membrana amniótica humana vem assumindo um papel de extrema importância na medicina regenerativa nos últimos anos, principalmente na área de dermatologia e oftalmologia, sendo seu uso promissor no tratamento de doenças cuja terapêutica atual é pouco eficaz. Além disso, na membrana amniótica humana encontram-se células-tronco mesenquimais, que apresentam plasticidade e vem sendo aplicadas para a regeneração de tecidos. Entretanto, muito pouco se sabe sobre a capacidade plástica e o uso de células-tronco de membrana amniótica de animais, já que a literatura a este respeito, não é tão ampla quanto à de humanos. Neste projeto estabelecemos a cultura de células-tronco de membrana amniótica (MA) de fetos caninos, caracterizando as células in vitro e in vivo. As células de MA foram obtidas a partir de um procedimento cirúrgico de histerectomia em cadelas prenhas, durante campanhas de castração da prefeitura da cidade de São Paulo. As células de MA foram caracterizadas in vitro, observando-se características semelhantes a outras células-tronco mesenquimais. Porém, quando foi analisado o seu comportamento in vivo, observamos a formação de um tumor de crescimento rápido, aproximadamente um mês, após o inóculo dessas células em 10 camundongos imunossuprimidos nude, sendo o tumor identificado histologicamente como um carcinoma embrionário. Diante do comportamento biológico formando um tumor in vivo, inferimos que células-tronco provenientes de membrana amniótica de cães não devem ser usadas para aplicação com objetivos terapêuticos em animais, pelo menos até que novas coletas sejam realizadas para que se possa confirmar ou não este comportamento. / The human amniotic membrane has taken an extremely important role in regenerative medicine in recent years, especially in dermatology and ophthalmology, and its promising use in treating diseases for which current therapy is ineffective. In addition, the amniotic membrane has human mesenchymal stem cells, which exhibit plasticity and have been applied to tissue regeneration. However, very little is known about the plastic capacity and the use of stem cells from amniotic membrane of animals, since the literature in this regard, it is not as broad as those of humans. In this project we established a culture of amniotic stem cells of dog, characterizing these cells in vitro and in vivo. The cells were obtained from a surgical procedure for hysterectomy in pregnant bitches, during castration\'s campaigns of the São Paulo\'s municipality. The cells were characterized in vitro, observing characteristics similar to other mesenchymal stem cells. In spite of their behavior, in vivo we observed the formation of a fast-growing tumor about a month after the inoculation of these cells in 10 immunosuppressed mice, being the tumor identified histologically as an embryonic carcinoma. Considering the biological behavior of forming a tumor in vivo, we infer that stem cells from amniotic membrane of dogs should not be used for application for therapeutic purposes in animals, at least until other collections are carried out so that it can be confirmed or not.

A distrofia muscular do Golden Retriever é uma miopatia hereditária, recessiva e fatal. Achados clinicopatológicos no trato gastrintestinal desses cães, como atrofia muscular, megaesôfago, dilatação gástrica são relatados, com possíveis alterações nos plexos entéricos. Este trabalho tem como objetivo analisar os neurônios colinérgicos e nitrérgicos do plexo mioentérico, a expressão do receptor P2X7 e a morfologia do íleo de cães afetados pela distrofia muscular comparados aos de cães não afetados. Os tecidos foram preparados por métodos imunohistoquímicos de marcação do Óxido Nítrico Sintase (NOS), Acetilcolina Transferase (ChAT), do pan-neuronal anti-HuC/D e do receptor P2X7. As análises qualitativas e quantitativas das contagens das marcações, das densidades neuronais e da área dos perfis foram obtidas dos Microscópios de Fluorescência, de Confocal de Varredura à Laser, e Microscópio Eletrônico de Transmissão. Os resultados qualitativos demonstraram que neurônios NOS-ir e ChAT-ir apresentaram morfologia Dogiel Tipo I com fibras que colocalizam com o receptor P2X7 e a musculatura intestinal com núcleos picnóticos e maior quantidade de fibras colágenas no grupo distrófico. Os dados quantitativos demonstraram: a) diminuição na área do perfil neuronal dos neurônios NOS-ir e ChAT-ir no grupo distrófico b) maior densidade de neurônios NOS-ir no grupo distrófico. O presente estudo adicionou informações sobre o código químico do plexo mioentérico de cães que podem facilitar o entendimento de desordens intestinais nesses animais. / The Golden Retriever muscular dystrophy is a hereditary myopathy, recessive and fatal. Clinical and pathological findings in the gastrointestinal tract of these dogs as muscle atrophy, megaesophagus, and gastric dilatation are reported, with possible changes in the enteric plexus. This work aims to analyze the cholinergic and nitrergic neurons of myenteric plexus, the P2X7 receptor expression and morphology of the ileum of dogs affected by muscular dystrophy compared to those of unaffected dogs. Tissues were prepared by immunohistochemical methods of labeling Nitric Oxide Synthase (NOS), acetylcholine transferase (ChAT), the panneuronal anti-HuC / D and P2X7 receptor. Qualitative and quantitative analyzes of scores of labeling, density and of neuronal profiles area were obtained from Fluorescence Microscopes, Confocal Laser Scanning, and Transmission Electron Microscope. The results showed that NOS-(immunoreactive)ir and ChAT-ir neurons present morphology Dogiel Type I, their fibers colocalize with the P2X7 receptor and the intestinal muscles present pyknotic nuclei with increased amount of collagen fibers in the dystrophic group. The quantitative data showed: a) decrease in the neuronal area profile of NOS-ir and ChAT-ir neurons in the dystrophic group b) higher density of NOS-ir neurons in the dystrophic group. The present study added information about the chemical code of the myenteric plexus of dogs that can facilitate the understanding of intestinal disorders in these animals.

Orientador : Marcel Cerqueira Cesar Machado / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-14T08:20:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_PythagorasLopesde_D.pdf: 929228 bytes, checksum: 45f9306b6a9c87c128f48fce31e4ce99 (MD5) Previous issue date: 1976 / Sem resumo. / Doutorado / Doutor em Ciências Médicas

The objective of this study was to evaluate the effects of neuromuscular electrical stimulation (NMES) of low frequency on the vastus lateralis muscle. Eleven, male and female, dogs of variable age were randomly placed in 3 groups: I (control), II (NMES post immobilization), and III (NMES before and post immobilization). The right femoral-tibial-patellar joint of the animals in groups I, II, and III was immobilized for 30 days by the percutaneous transfixation type II method. The dogs from group II were placed on eletrotherapy 3 times weekly for 90 days, during (30 days) and post immobilization (60 days). The dogs from group II were initiated on NMES post-removal of the temporary rigid immobilization. The parameters evaluated consisted of: measurement of thigh circumference, joint motion using a goniometer, gait analysis, creatine kinase (CK) and aspartate aminotransferase (AST) levels and morphometry of the longitudinal muscle fibers collected by vastus lateralis muscle biopsy. The gait analysis was performed daily by the same observer for 90 days. The circumference of the thigh, joint motion, and muscle biopsy were performed on days 0, 30, 60 and 90 post-surgery. The blood samples for CK and AST were collected before and immediately after 6, 24 and 48 hours post-NMES on days 0,1,7,30,45,60,75 and 90. The NMES was employed on the femoral quadriceps muscle group with a frequency of 50Hz post-duration of 300msec on an off-time/on-time ratio of 1:2. There was no significant difference on the gait analysis, thigh circumference, joint motion, and CK and AST values. In terms of morphometry of muscle fibers, the greatest hypertrophy change was observed on longitudinal fibers of the dogs from group II (p=0.0005), followed by the dogs from group III. It can be concluded that NMES of low frequency does not avoid the muscular atrophy of vastus lateralis muscle during rigid temporary immobilization of the stifle joint, but causes muscular gain after this period, recommending its use / Com o objetivo de avaliar o efeito da estimulação elétrica neuromuscular (EENM) de baixa freqüência no músculo vasto lateral foram utilizados 11 cães, machos e fêmeas, sem raça definida, de idades variadas e agrupados aleatoriamente em três grupos denominados de I ou controle, II (EENM após imobilização) e III (EENM durante e após imobilização). A articulação femoro-tíbio-patelar direita dos animais dos grupos I, II e III foi imobilizada por 30 dias pelo método de transfixação percutânea tipo II. Os cães do grupo III iniciaram as sessões de eletroterapia, três vezes por semana, por 90 dias, ou seja, durante (30 dias) e após a imobilização (60 dias). Os cães dos grupos II tiveram início da EENM após a remoção da imobilização rígida temporária. Os parâmetros avaliados foram a mensuração da circunferência da coxa, goniometria do joelho, graus de claudicação, enzimas creatina-quinase (CK) e aspartato-amino-transferase (AST) e morfometria das fibras musculares longitudinais obtidas por biópsia muscular do vasto lateral. A análise dos graus de claudicação foi realizada diariamente por um mesmo observador por 90 dias. A circunferência de coxa, goniometria e biópsia do músculo vasto lateral foram realizadas nos tempos zero, 30, 60 e 90 dias de pós-operatório. As amostras de sangue para avaliação da CK e AST foram coletadas antes, imediatamente depois, aos 6, 24 e 48 horas após a EENM, nos dias zero, um, sete, 30, 45, 60, 75 e 90. A EENM foi empregada no músculo quadríceps femoral numa freqüência de 50Hz, duração de pulso de 300 milisegundos e relação on time/off time de 1:2. Não houve diferença significativa nos graus de claudicação, valores de circunferência da coxa, goniometria e comportamento das enzimas CK e AST entre os grupos I, II e III. Quanto à morfometria das fibras musculares, foi observada uma maior hipertrofia das fibras musculares longitudinais nos cães do grupo II (p=0,0005), seguida pelos cães do grupo III. Podese concluir que a EENM de baixa freqüência não evita a atrofia do músculo vasto lateral durante a imobilização rígida temporária do joelho, mas ocasiona ganho de massa muscular após esse período, recomendando-se o seu uso

Submitted by Amauri Alves (amauri.alves@ufv.br) on 2015-11-04T12:14:30Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 583903 bytes, checksum: 2502ab1ef4041967c288e1621742e282 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-04T12:14:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 583903 bytes, checksum: 2502ab1ef4041967c288e1621742e282 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Neste estudo foram analisadas 100 amostras de sangue de cães com trombocitopenia importante (plaquetas < 100.000/μL), oriundas da rotina laboratorial de atendimento do Hospital Veterinário da Universidade Federal de Viçosa (UFV), Viçosa, Minas Gerais. Todas as amostras de sangue foram submetidas ao analisador hematológico automático, à confecção de esfregaços sanguíneos de sangue total, à capa de leucócitos e à técnica de centrifugação por gradiente de densidade. Além disto, as amostras foram submetidas à extração de DNA e posteriormente à reação em cadeia da polimerase (PCR), para o diagnóstico molecular de Ehrlichia spp., Hepatozoon sp., Babesia spp., Anaplasma spp. e Leishmania spp. Os resultados da PCR confirmaram amostras positivas para Ehrlichia spp. (69%), Hepatozoon sp. (25%), Babesia spp. (16%) e Anaplasma platys (4%), com alguns animais apresentando até três patógenos em coinfecção. Verificou-se ainda estreita relação entre a ocorrência da trombocitopenia e erliquiose e a alta frequência de coinfecções. A centrifugação por gradiente de densidade mostrou-se bastante sensível na identificação do Hepatozoon canis, com resultados superiores aos das técnicas tradicionais (esfregaço sanguíneo e capa de leucócitos) e concordância substancial com a PCR. Foram observadas diferenças significativas nos parâmetros sanguíneos entre os animais com e sem hematozoários, como a presença de desvio nuclear de neutrófilos à esquerda maior nos animais positivos para Babesia spp. e alterações no volume plaquetário médio e PDWc nos animais com erliquiose. No sequenciamento realizado, identificou-se a presença de várias espécies, incluindo Ehrlichia canis, Ehrlichia chaffeensis, Hepatozoon canis, Babesia canis vogeli, Anaplasma platys, Anaplasma phagocytophilum e Rangelia vitalii, sendo os patógenos Ehrlichia chaffeensis e Anaplasma phagocytophilum relacionados a infecções em humanos. / In this study we analyzed blood samples from 100 dogs with important thrombocytopenia (Platelets < 100.000/μL), of the routine care of the Veterinary Hospital from Universidade Federal de Viçosa (UFV). All Samples were processed on automated hematology analyzer and subjected to analysis of their blood smears, buffy coat, and the density gradient centrifugation technique. In addition, samples were subjected to procedure for DNA extraction and subsequent polymerase chain reaction (PCR) to Ehrlichia spp., Hepatozoon sp., Babesia spp., Anaplasma spp. and Leishmania spp. The PCR results confirmed positive samples to Ehrlichia spp. (69%), Hepatozoon sp. (25%), Babesia spp. (16%) and Anaplasma platys (4%), with some animals having up to three concomitant pathogens. We also found a close relationship between the occurrence of thrombocytopenia and ehrlichiosis and the high frequency of coinfection. The density gradient centrifugation showed to be more sensitive at detecting Hepatozoon canis than traditional tecniques (blood smears, buffy coat) and the results are in agreement to those by PCR. Significant differences were observed in blood parameters between animals with and without hemoparasite, such as presence of a nuclear deviation of neutrophils on the left bigger in positive animals for Babesia spp. and changes in mean platelet volume and PDWc in animals with ehrlichiosis. In the sequencing performed we identified the presence of several species, including Ehrlichia canis, Ehrlichia chaffeensis, Hepatozoon canis, Babesia canis vogeli, Anaplasma platys, Anaplasma phagocytophilum and Rangelia vitalii, being the Anaplasma phagocytophilum and Ehrlichia chaffeensis related pathogens infections in humans.

Orientador: Ernesto Giovanni Boccara / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Artes / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:59:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gutiez_Maximiliano_M.pdf: 47188951 bytes, checksum: f28f2b741994b6729cbe119270a7ce3e (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: As produções artísticas de Evaristo Valle (1873 ¿ 1951) , pintor espanhol asturiano que viveu entre os anos finais do século XIX e meados do século XX, são o eixo orientador desta dissertação. Tema do primeiro capítulo, vida e obra de Valle serão apresentadas e discutidas a partir das relações contextuais que as abrangem, além de ser descrito o modo de serem construídos os sentidos de suas produções por meio de uma configuração que lhe é bastante peculiar e pelo tipo de interação que apresenta com as cores. A partir disso, no segundo capítulo, Goya e Cervantes, respectivamente com as obras El perro e ¿El Colóquio de los perros¿, são tomados como elo entre algumas quesotes discutidas nos trabalhos de Evaristo Valle e as pinturas que compõem o corpus do capítulo seguinte, cujas descrições embasam-se nas técnicas abordadas nas pinturas, a cor como contraste, e na temática subyacente a elas, principalmente a partir de dois elementos figurativos: uma vaca e um cão (ou cães), que, instaurados como atores do enunciado pictórico, observam os espaços da cidade de São Paulo, por onde transitam como os ocupantes de rua, os miseráveis, os alienados, os vagabundos, as crianças sem rumo, enfim, os cachorros vira-latas / Mestrado / Mestre em Artes

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-02-01T11:15:27Z No. of bitstreams: 1 renatadasilvamatos.pdf: 2490042 bytes, checksum: 3f0d6ff9d961f56b4bcffcb3d50f3422 (MD5) / Rejected by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br), reason: Adicionar instituição on 2016-02-01T15:48:42Z (GMT) / Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-02-01T16:15:45Z No. of bitstreams: 1 renatadasilvamatos.pdf: 2490042 bytes, checksum: 3f0d6ff9d961f56b4bcffcb3d50f3422 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-02-01T20:11:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 renatadasilvamatos.pdf: 2490042 bytes, checksum: 3f0d6ff9d961f56b4bcffcb3d50f3422 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-01T20:11:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 renatadasilvamatos.pdf: 2490042 bytes, checksum: 3f0d6ff9d961f56b4bcffcb3d50f3422 (MD5) Previous issue date: 2014-02-21 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O timol é um monoterpeno que já teve sua ação acaricida comprovada para diferentes espécies de carrapato e sabe-se que os métodos de solubilização interferem de maneira significativa nesta ação. Além disso, do ponto de vista morfofsiológco ainda não foram realizados estudos sobre os efeitos histopatológicos causados por esta substância de ixodídeos. Sendo assim, no primeiro capítulo do presente trabalho avaliou a eficácia do timol em diferentes métodos de solubilização sobre fêmeas ingurgitadas e larvas não ingurgitadas de Rhipicephalus microplus. No segundo capítulo foi avaliado o efeito histopatológico do timol em diferentes concentrações nos ovários de fêmeas de Rhipicephalus sanguineus com seis dias de alimentação. No primeiro capítulo utilizou-se a metodologia de teste por imersão com fêmeas ingurgitadas de R. microplus; para larvas não ingurgitadas a metodologia utilizada foi de pacote de larvas, sendo que foram testadas somente as formulações 3 e 4, uma vez que as demais já haviam sido avaliadas em estudos anteriores. Nos dois experimentos avaliaram-se dois grupos controle, um tratado com água e outro com etanol 50% e foram realizadas10 repetições para cada tratamento, sendo os mesmos mantidos em câmara climatizada (27 ± 1 ° C e RH> 80 ± 10). As fêmeas foram avaliadas diariamente, até a morte da última para posterior avaliação dos parâmetros biológicos peso da massa de ovos, percentual de eclosão, e percentual de controle, a mortalidade das larvas foi avaliada após 24 h. Em relação ao controle houve redução significativa (p<0,05) no peso das massas de ovos nos tratamentos com as formulações 1, 3 e 4, sendo observados valores de 0,0; 0,2 e 0,0 mg, respectivamente. Nos grupos tratados com as formulações 1 e 4 não houve postura. O percentual de eclosão dos grupos controles tratados com etanol 50% e DMSO 1% foram respectivamente de 94,2% e 92,6%, sendo estatisticamente semelhante a formulação 2 que teve índice de eclosão de 63,9. Apenas a formulação 3, onde o índice de eclosão foi 20,0% diferiu estatisticamente dos grupos controle. Na formulação 3, o percentual de controle foi de 99,3%, e nas formulações 1 e 4 chegou a 100%. A mortalidade de larvas foi de 100% em todos os tratamentos; não houve mortalidade nos grupos controle. Para realizar as análises morfohistoquímicas dos ovários foram utilizadas 50 fêmeas de R. sanguineus com seis dias de alimentação que foram divididas em cinco grupos e submetidas ao teste de imersão em soluções de timol e etanol a 30% nas concentrações de 1,25 mg/mL; 2,25 mg/mL e 5,0 mg/mL. Também foram formados dois grupos controle, um tratado com água destilada e outro com etanol 30%. Após os tratamentos, as fêmeas foram mantidas em câmara climatizada regulada a 27±1°C e UR 80±10% por cinco dias. Após esse período os ovários foram removidos, fixados, desidratados, embebidos e incluídos em resina Leica, em seguida foram seccionados e as lâminas foram submetidas as técnicas de hematoxilina/eosina e von kossa. O mesmo procedimento foi seguido para a detecção de cálcio pela técnica de Von Kossa. Os resultados histológicos mostraram que o timol é capaz de agir no sistema reprodutor das fêmeas de R. sanguineus, alterando sua morfologia. Nesse sentido foram observados vacúolos no citoplasma das células germinativas nos diferentes estágios, irregularidades formando dobras na membrana limitante e coriônica e danos na vesícula germinal. A análise histoquímica mostrou que os grupos tratados com timol tiveram o teor de cálcio dos grânulos de vitelo alterado e de maneira geral apresentaram marcação mais intensa para este elemento. Desta forma, a partir dos resultados do primeiro capítulo, conclui-se que a redução do etanol nas formulações potencializou a atividade carrapaticida sobre fêmeas ingurgitadas de R. microplus, sem que fosse afetada sua atividade contra larvas não ingurgitadas desse carrapato e através dos estudos morfohistoquímico pode-se concluir que o timol altera a morfofisiologia dos fêmeas com seis dias de alimentação de R. sanguineus, apresentando efeito deletério em tais órgãos. / -

As membranas amnióticas humana, felina e canina representam uma boa fonte de célulastronco mesenquimais multipotentes. Sua obtenção não causa conflitos éticos, pois o âmnio é comumente descartado após o nascimento do indivíduo. Devido à característica inovadora da utilização de células-tronco na medicina regenerativa, diversos testes estão sendo realizados a fim de sanar dúvidas sobre possíveis complicações de seu emprego, tais como: infecções no ato da aplicação, deterioração da função tecidual e principalmente sobre o potencial tumorigênico das linhagens celulares. O teste tumoral foi negativo nas espécies felina e humana, viabilizando a utilização deste tipo de célula nestas espécies, porém, o mesmo teste foi realizado em cães anteriormente com resultado positivo para formação tumoral. A proposta deste estudo é traçar um perfil comparativo sobre as características de cultivo, marcadores moleculares e ensaio tumoral na membrana amniótica canina e felina. Para a obtenção das células, foram utilizadas placentas oriundas de 9 gestações caninas nas idades entre 35 a 45 dias, 1 gestação canina de 25 dias e 3 gestações felinas nas idades de 35 a 45 dias por procedimento de cesariana seguida de castração em clínicas da região de Pirassununga. O âmnio foi separado manualmente das outras membranas fetais e acondicionado em placas de Petri, submetido à maceração manual, para posterior cultivo em meio adequado para cultura de células mesenquimais. Após o estabelecimento do cultivo, foram realizadas análises de imunocitoquímica para marcadores mesenquimais (CD73, CD90 e CD105) e tumoral (CD30) sendo que as células de origem canina mostraram-se positivas para os marcadores mesenquimais CD73, CD90 e para o marcador tumoral CD30 e as de origem felina mostraram-se positivas para os marcadores mesenquimais CD73, CD90 e CD105. O ensaio in vivo realizado com a inoculação das CT\'s canina e felina em camundongos imunossuprimidos (Balb/c NUDE) pelas vias subcutânea, intramuscular e intraperitoneal não demonstrando formação tumoral após 60 dias da inoculação. Foram realizadas análises de citometria de fluxo onde as maiores quantificações nas células caninas foram os marcadores de pluripotência (OCT-4 e SOX2, com 59,4% e 34,35% respectivamente), e felinas foram os marcadores mesenquimais (CD73 e CD90, com 32,58% e 23,48%). A análise de qPCR das células felinas demonstrou baixa, expressão de todos os genes testados (mesenquimais, pluripotência, hematopoiético e teratogênico). Já as células de origem canina, demonstraram expressão maior do gene mesenquimal (CD90) e do gene de pluripotência (SOX2 e OCT4). Os achados deste estudo demonstraram por ambas as técnicas (citometria e qPCR) que as células da membrana amniótica felina tem um potencial mesenquimal mais evidente do que as caninas e ambas não apresentaram potencial tumorigênico quando submetidas ao ensaio in vivo. / Human, feline and canine amniotic membranes are a good source of multipotent mesenchymal stem cells. The obtaining does not cause ethical conflict because the amnion is usually discarded after the birth. Due to the innovative feature of the use of stem cells in regenerative medicine, several tests are being conducted to answer some questions about possible complications of its use, such as infections during application, deterioration of tissue function and particularly on the carcinogenic potential of amniotic stem cells. Teratoma formation assays were proved negative in feline and human species, enabling the use of this type of cell in these species, however, the same test was performed in dogs previously and was positive for teratomas, condemning its application. The purpose of this study is to trace a molecular profile and detailed teratogenic test, comparing the canine and feline amniotic membrane model, since the experiments were favorable to the feline model, in order to find out where they differ to justify the new data to counteract the results of previous studies using canine amnion. To obtain cells, it were used placentas from 9 pregnant canines between 35 to 45 days of gestation, one placenta at 25 days from canine and 3 placentas from feline at 35 to 45 days. It was realized caesarean and followed ovarian salpingo hysterectomy at veterinarian clinics on Pirassununga region. The amnion was manually separated from the other fetal membranes and placed on Petri dishes. Then was made a manual maceration, later to be cultivated. After culture establishment were performed immunocytochemical analyzes for mesenchymal (CD73, CD90 and CD105) and teratogenic (CD30) markers. The canine cells were positive to the following markers: CD73, CD90 and CD30 and the feline cells were positive for CD73, CD90 and CD105. Teratogenic test was conducted by subcutaneous, intramuscular and intraperitoneal inoculation of the canine and feline stem cells, in immunosuppressed mice (Balb/c NUDE)and was not observed tumor formation after 60 days of inoculation. Flow cytometry analyzes were performed where the largest quantifications in canine cells were the genes of pluripotency (Oct-4 and Sox2, 59.4% and 34.35% respectively), and the feline were performed at the mesenchymal genes (CD73 and CD90, with 32.58% and 23.48%). PCR analysis of feline cells demonstrated low expression of all markers tested (mesenchymal, pluripotency, hematopoietic and teratogenic). The cells of canine origin, showed higher expression of mesenchymal gene (CD90) and pluripotencys genes (SOX2 and OCT4). The findings of this study demonstrated for both techniques (flow cytometry and qPCR) that feline amniotic membrane cells has a more potential than the canine amniotic membrane cells. Both showed no tumorigenic potential when submitted to in vivo test.

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao.pdf: 262952 bytes, checksum: fed2a60f7a0605b64f30fb2d2656c986 (MD5) Previous issue date: 2009-06-26 / Salbutamol and fenoterol are agonists &#946;2 adrenergic of short duration, with important paper in the treatment of the breathing diseases due to excellent effect bronchodilator. The study had as objective evaluates through physical exam, laboratorial and electrocardiography the effects of the fenoterol and salbutamol for road inalatory in dogs. Twelve dogs were distributed in 2 groups being: group FE (fenoterol) it received fenoterol through inalatory, in the dose of 2droups/5Kg of alive weight diluted in solution of chloride of sodium 0,9% and administered by road inalatory through the inhalation apparel; group SA (salbutamol) treaty with salbutamol, through aerosol dosador, in the dose of 100 micrograms. They were appraised four different moments, being considered MC (moment controls) before the administration of the drug, M30, M2 and M6, where the evaluations were accomplished respectively with 30 minutes, 2 hours and 6 hours after administration of the drugs. They were checked temperature (T), heart frequency (FC), breathing frequency (f), systolic blood pressure (PAS), appraised the gasometry and electrocardiogram. The fenoterol and salbutamol caused discreet heart stimulation, being significant for the animals of the group SA two hours after the administration of the drug compared a moment controls. Tremors were observed with larger predominance in the animals of the group SA. Decrease of the systolic blood pressure and increase of the breathing frequency were observed in the two groups, and there were not significant alteration of the temperature, gasometry and electrocardiogram for both groups. Was ended that the fenoterol provokes smaller side effects of heart stimulation and tremors compared to the salbutamol being this way a safer drug. / Salbutamol e fenoterol são agonistas &#946;2 adrenérgicos de curta duração, com papel importante no tratamento das doenças respiratórias devido ao seu excelente efeito broncodilatador. O presente estudo teve como objetivo avaliar por meio de exame físico, laboratorial e eletrocardiográfico os efeitos destes fármacos administrados por via inalatória em cães. Doze cães foram distribuídos em dois grupos com seis em cada sendo: grupo FE (fenoterol) recebeu fenoterol via inalatória, na dose de 2 gotas/5Kg de peso vivo, diluídas em solução de cloreto de sódio 0,9% e administrados por meio do aparelho de inalação; grupo SA (salbutamol) tratado com salbutamol, por meio de dosador de aerossol, na dose de 100mg. Foram avaliados quatro diferentes momentos, sendo considerado MC (momento controle) antes da administração dos fármacos, M30, M2 e M6, onde as avaliações foram realizadas com 30 minutos, 2 horas e 6 horas após administração dos fármacos respectivamente. Foram aferidas temperatura retal(TR), freqüência cardíaca (FC), freqüência respiratória (FR), pressão arterial sistólica (PAS), avaliados a hemogasometria e eletrocardiograma. O fenoterol e salbutamol causaram discreta estimulação cardíaca, sendo estatisticamente significativo para os animais do grupo SA 2 horas após a sua administração comparado ao momento controle. Tremores foram observados com maior predominância nos animais do grupo SA. Diminuição da pressão arterial sistólica e aumento da freqüência respiratória foram observados nos dois grupos, e não houve alteração significativa da temperatura retal, dos valores da hemogasometria e eletrocardiograma em ambos os grupos. Conclui-se que o fenoterol provoca menor efeitos colaterais de estimulação cardíaca e tremores comparados ao salbutamol sendo desta forma um fármaco mais seguro.