O manejo populacional de cães e gatos é um conjunto de estratégias para controlar e prevenir problemas relacionados com o convívio entre esses animais e os seres humanos. Nesta tese é proposto um fluxo de trabalho baseado em métodos quantitativos, para auxiliar o planejamento, implementação e monitoramento de programas de manejo populacional de animais de companhia. Ao seguir o fluxo de trabalho é possível coletar dados para caracterizar populações, analisar esses dados para propor intervenções e avaliar o efeito das intervenções. A proposta foi baseada na articulação de cinco pesquisas. Na primeira pesquisa foi implementado de um desenho amostral complexo para caracterizar a população de cães e gatos domiciliados de Votorantim, São Paulo. Na segunda pesquisa que foi baseada nos dados levantados na primeira, foram usadas análises de correspondências múltiplas para identificar perfis de opiniões públicas em relação ao abandono de cães e gatos. Na terceira pesquisa foi avaliada a validade do desenho amostral usado na primeira pesquisa, mediante simulações estocásticas. Na quarta pesquisa foi desenvolvido um modelo matemático de manejo populacional que permite priorizar as intervenções de acordo com o efeito que produzem. Na quinta pesquisa foi desenvolvido um modelo matemático para avaliar a eficiência do controle reprodutivo realizado com contraceptivos de efeito reversível. Os modelos das duas últimas pesquisas foram baseados em sistemas acoplados de equações diferenciais e em análises de sensibilidade global e local. A proposta foi implementada em um software de código aberto, o pacote do R capm, que pode ser incorporado na rotina de trabalho dos setores envolvidos no manejo populacional de animais de companhia / Dog and cat population management is a set of strategies to control and prevent problems related with the coexistence between those animals and human beings. In this thesis it is proposed a work-fiow based on quantitative methods to support the planning, implementation and mo- nitoring of companion animal population management programs. Following the work-fiow, it is possible to collecf data to characterize populations, analyze that data to propose interventions and assess the effect of interventions. The proposal was based on the articulation of five rese- arches. In the first research, a complex sampling design was implemented to characterize the owned dog and cat populations of Votorantim, São Paulo. In the second research, which was based on data from the first one, public opinion profiles regarding dog and cat abandonment were identified using multiple correspondence analysis. In the third research, the validity of the sampling design used in the first research was assessed through stochastic simulations. In the fourth research, a mathematical model of population management was developed. With that model, it is possible to prioritize interventions according to the effect they produce. In the fifth research, a mathematical model was developed to assess the efficiency of reproductive control based on contraceptives with reversible effect. The models of the last two researches were based on systems of coupled differential equations, and on global and local sensitivity analysis. The proposal was implemented in an open source software, the R package capm, that can be incorporated in the working routine of sectors involved with companion animal population management

A doença valvar crônica de mitral (DVCM) é a principal cardiopatia adquirida dos cães e uma das suas complicações é a hipertensão arterial pulmonar (HAP), o que pode induzir a disfunção do ventriculo direito (VD). Assim, constituíram-se em objetivos do presente estudo identificar e descrever alterações de tamanho do VD, padrão de fluxo na artéria pulmonar (AP) e função sistólica ventricular direita nas diferentes fases da DVCM, além de correlacionar estas variáveis com índices de tamanho, volume, funções sistólica e diastólica do lado esquerdo do coração, bem como com a velocidade da insuficiência tricúspide (IT) e gradiente de pressão entre o ventrículo e átrio direitos nos cães que apresentavam regurgitação da valva tricúspide. Para tanto, foram incluídos 96 cães de diversas raças no estudo, que foram separados em quatro grupos de acordo com o estágio da DVCM: grupos ou estágios A, B1, B2 e C. Os cães com DVCM sintomáticos ou em estágio C apresentaram alterações no fluxo da artéria pulmonar (AP), bem evidenciadas pela redução das suas velocidades máxima e média, além da redução dos tempos de aceleração (TAC) e ejeção (TEJ) do fluxo sistólico da AP e correlação negativa com as variáveis de tamanho e funções sistólica e diastólica do coração esquerdo. O tamanho do VD foi estatisticamente maior nos animais do estágio C em comparação aos do estágio B1 e associou-se, negativamente, com os índices de função sistólica ventricular esquerda (VE). Os índices de função sistólica do VD como índice de excursão sistólica do plano anular tricúspide (iTAPSE) e variação fracional de área (FAC) foram maiores nos estágios mais avançados da DVCM e, juntamente com a velocidade de movimentação miocárdica sistólica do anel valvar tricúspide (onda Sm), correlacionou-se com índices de funções sistólica e diastólica do VE, seguindo o mesmo padrão de aumento de movimentação e estado hipercinético das variáveis do lado esquerdo do coração na evolução da DVCM. O padrão de fluxo sistólico da AP, bem caracterizado pelo TAC e TEJ, e o índice de área doVD foram os índices que mais alteraram com a evolução da hipertensão pulmonar na DVCM, enquanto que os índices de função do VD não apresentaram alterações significativas neste modelo de hipertensão arterial pulmonar em cão / Chronic mitral valvular disease (CMVD) is the most important acquired heart disease of dogs, and has as one of its complications, pulmonary arterial hypertension (PAH), which can lead to dysfunction of the right ventricle (RV). So, the objectives of the present study was to identify and describe changes in size, flow pattern in the pulmonary artery (PA) and RV systolic function at different stages of CMVD, and to correlate these variables with size, volume, systolic and diastolic function of left side of the heart, as well as the velocity of tricuspid insufficiency (TI) and pressure gradient between RV and right atrium in dogs thad had tricuspid valve regurgitation. For this purpose, 96 dogs of various breeds were included in the study, and they have been separated into 4 groups according to the stage of DVCM: group or stage A, B1, B2 and C. Dogs with symptomatic DVCM or stage C showed changes in the flow of PA, well evidenced by the reduction of the maximum and mean velocity flow of PA, besides the reduction of the acceleration (ACT) and ejection (EJT) times of systolic flow and negative correlation with the variables of size and systolic and diastolic function of the left heart. The RV size was statistically higher in the C stage of animals compared to stage B1; it was negatively associated with indices of left ventricular systolic function (LV). The systolic function indexes as index of tricuspide annular plane systolic excursion (ITAPSE) and fractional area change(FAC) were higher in more advanced stages of CMVD, and together with systolic myocardial movement of the tricuspid valve annulus velocity (wave Sm), correlated with indices of systolic and diastolic function of the left ventricle, following the same pattern of increase and hyperkinetic movement state variables of the left side of the heart in the evolution of DVCM. The pattern of systolic flow of the AP, well characterized by ACT and EJT, and RV area index are the variables that altered with the development of pulmonary hypertension in DVCM, while RV function indices showed no significant changes in this model of PAH in dogs

As células germinativas primordiais (CGPs) são as precursoras dos gametas, capazes de gerar um novo indivíduo os quais transmitirão os materiais genéticos para as futuras gerações. Normalmente, a linha germinal de mamífero é determinada por fatores genéticos e epigenéticos que possuem funções essenciais para guiar na direção e desenvolvimento das CGPs, bem como das células germinativas embrionárias (CGEs). A reprogramação epigenética é fundamental para a regulação do genoma durante o desenvolvimento das células germinativas responsáveis por originar a linhagem gametogênica nos mamíferos. A metilação e desmetilação em CGPs são um evento único, essencial para apagar a memória epigenética e também prevenir transmissões de epimutações para a próxima geração. Assim, o completo entendimento das vias e mecanismos para a migração inicial e diferenciação destas células em CGEs podem ser importantes para identificar e corrigir falhas possíveis nesses processos, o que será importante, no futuro, para o desenvolvimento e desempenho reprodutivo. A maioria dos estudos com CGPs e CGEs é realizado em camundongos, porém nem sempre esta espécie torna-se o melhor modelo de estudo quando se quer transpor esses conhecimentos a humanos. O cão doméstico (Canis lúpus familiaris) apresenta-se como um modelo ideal para o estudo do desenvolvimento em mamíferos, pois possui inúmeras similaridades com a bioquímica, fisiologia e genética. Deste modo, torna-se interessante expandir os estudos sobre as CGPs e CGEs na espécie canina, a fim de mostrar a importância de diferentes modelos que se assemelham a seres humanos. Portanto, objetiva-se, nesta proposta, identificar qual é a dinâmica de marcadores pluripotentes, germinativos e epigenéticos que são importantes para o desenvolvimento das CGPs e CGEs caninas. Para tal procedimento, essa pesquisa foi dividida em duas fases: a primeira, consiste no processo in vivo, desde o desenvolvimento inicial do embrião até a completa formação da crista gônadal. Análises de RTq-PCR e imunofluorescência para marcadores pluripotentes POU5F1 (OCT4) e NANOG, germinativos DDX4 (VASA), DAZL e DPPA3 (STELLA) e epigenéticos 5mC, 5hmC, H3K27me3 e H3K9me2 foram realizados para criar um perfil de genes que são importantes para o desenvolvimento das CGPs caninas. Prosseguiu-se para a segunda fase in vitro, que incide na derivação e caracterização das CGEs caninas. Ensaios de Fosfatase Alcalina, imunofluorescência para os marcadores: pluripotente POU5F1 (OCT4), germinativos DDX4 (VASA), DAZL e DPPA3 (STELLA), mesodérmico THY-1 (CD90) e epigenéticos 5mC, 5hmC, H3K27me3 e H3K9me2, RT-qPCR para os genes NANOG e DDX4 e formação de teratoma foram efetivados para comprovar a linhagem de células CGEs. Como resultado in vivo, percebe-se que diferentes padrões de marcações e genes foram expressos nas CGPs, comprovando que a espécie canina se assemelha mais com os humanos do que com os camundongos. Os resultados in vitro mostraram que foi possível derivar as células CGEs e que estas conseguem reter sua pluripotencialidade e que diminuem a expressão dos genes germinativos. Porém, essas células tendem a se diferenciar em outros tecidos somáticos, mesmo com a adição de suplementos, fato também notado em CGEs humanas. / Primordial germ cells (PGCs) are known as the only cells capable of generating a new individual, they originate the gametes which then will transmit genetic material to future generations. Normally, the mammalian germ line is determined by genetic and epigenetic factors that have essential functions to guide the direction and development of PGCs as well as embryonic germ cells (EGCs). Epigenetic reprogramming is fundamental for the regulation of the genome during the development of the germ cells responsible for originating the gametogenic lineage in mammals. Methylation and demethylation in PGCs is a unique event, essential for erasing epigenetic memory and also preventing transmissions of epimutations to the next generation. Thus, the understanding of the patterns of differentiation of PGCs in EGCs can be important in identifying and correcting possible failures in these processes, which will be important in the future for development and reproductive performance. Most of the studies with PGCs in EGCs are carried out in mice, but this species is not always the best model of study when transposing this knowledge to humans. In canines, no study has ever been reported on canine PGCs and maybe the Canine species has become interesting as a new animal model for studies. It is known that the study material of human embryos are scarce samples and difficult to obtain, so it is necessary to use other animal models, such as the Canids, which also resemble humans. Dogs were the first fundamental models for the development of bone marrow transplantation in humans, but also made valuable contributions to the development of therapies for cardiovascular and orthopedic diseases. Then, it has become interesting to expand the studies on PGCs in the canine species in order to show the importance of different models that might resemble humans. Therefore, we had how proposal identify which were pluripotent, germinative and epigenetic markers that are important for the development of PGCs and canine EGCs. It research was divided into two phases: the first consists of the in vivo process, from the initial development of the embryo to the complete formation of the gonadal ridge. We analyzed through the techniques of real-time PCR (RT-qPCR) and immunofluorescence for pluripotent markers POU5F1 (OCT4) and NANOG, germline DDX4 (VASA), DAZL and DPPA3 (STELLA) and epigenetic 5mC, 5hmC, H3K27me3 and H3K9me2 were performed to create a profile of genes that are important for the development of canine PGCs. We proceeded to the second in vitro phase, which focuses on the derivation and characterization of canine EGCs. Alkaline Phosphatase (AP), immunofluorescence for the markers: pluripotent POU5F1 (OCT4), germinative DDX4 (VASA), DAZL and DPPA3 (STELLA), mesodermal THY-1 (CD90) and epigenetic 5mC, 5hmC, H3K27me3 and H3K9me2. We also analyzed RT-qPCR for NANOG and DDX4 genes and teratoma formation were performed to prove the EGCs cell lineage. As a result in vivo, different marking patterns and genes had been expressed in CGPs, proving that the canine species is more similar to humans than to mice. The in vitro results showed that it was possible to derive the EGCs and that they are able to retain their pluripotency and decrease the expression of the germinative genes. However, these cells continue to differentiate into other somatic tissues, even with the addition of supplements, a fact also noted in human CGEs.

Orientador: Maria Izabel Souza Camargo / Resumo: O presente trabalho teve como objetivo avaliar o efeito tóxico e terapêutico do extrato da glândula salivar (EGS) de fêmeas de carrapatos Rhipicephalus sanguineus senso lato (Acari: Ixodidae), alimentadas por 2 dias em hospedeiros, em diferentes concentrações, por meio de injeções intraperitoneais em ratas Wistar. Os resultados clínicos mostraram que na concentração de 10 μg/μL houve aumento da frequência de neutrófilos e diminuição da de linfócitos. Na análise histológica do fígado, observou-se que o extrato nessa concentração causou alguns efeitos tóxicos como vacuolização citoplasmática nos hepatócitos e desorganização estrutural dos cordões celulares. Nas concentrações de 40 e 80 μg/μL, as ratas ganharam peso corporal e tiveram o peso relativo do fígado diminuído, evidenciandoo que essas concentrações causaram toxicidade sistêmica. Nesse trabalho foi também analisado o efeito do EGS apenas na concentração de 0,04μg/μL, sobre lesões pré-neoplásicas (LPN) no fígado de ratos Wistar e observou-se aumento no peso relativo apenas do fígado nos animais dos grupos LPN e LPN+EGS quando comparados ao controle. A histologia mostrou que os animais LPN, antes da injeção do extrato, foram os que tiveram o tecido hepático com maiores danos (desorganização dos cordões, aumento de tecido conjuntivo, vacuolização citoplasmática, células apoptóticas e aumento na frequência de células de Kupffer, células de defesa deste órgão) os quais foram reduzidos quando os ratos receberam o EGS. No pres... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study aimed to evaluate the toxic and pharmacological effect of salivary gland extract (SGE) of female ticks Rhipicephalus sanguineus in different concentrations through intraperitoneal injections in Wistar rats. Clinical results showed that at the concentration of 10 μg/μL there was an increase in neutrophil frequency and a decrease in lymphocytes. It was also observed that in the liver histological analysis, the extract at this concentration caused some toxic effects: cytoplasmic vacuolization in the hepatocytes and structural disorganization in the cellular cords. At concentrations of 40 and 80 μg/μL, rats body weight increased, and relative liver weight decreased, showing that these concentrations caused systemic toxicity. In this study, was analysed the effect of SGE in the concentration of 0.04 μg/μL on the pre-neoplasic lesions (PNL) in the liver of Wistar rats, and there was an increase in the relative weight of the liver in the groups PNL and PNL + SGE. The histology showed that the PNL animals had the hepatic tissue with the biggest damage (cord disorganization, increase of connective tissue, cytoplasmic vacuolization, apoptotic cells and increased Kupffer cell quantity, indicating immune response), those alterations were reduced when the mice received the SGE as treatment. In the study about the in vitro evaluation of the acaricides effect of thymol and carvacrol on RML-15 cells from R. sanguineus s.l. ticks were carried out. Thymol at all tested concentration... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The reduction of the systolic function of the left ventricle in patients with congestive heart failure is related with increased ventricular volume. Despite of the advances in conservative treatments the prognosis is guarded with a high mortality rate. This work proposed the development of a surgical protocol of cardiac chamber reduction through partial ventriculectomy in dogs with dilated cardiomiopathy. The post operative control was made by cardiac biopsy by videothoracoscopy. A post operative control was performed and a short term evaluation was made by electrocardiogram and simple thorax radiography. The latter exams, serum biochemistry and physiological evaluation during sixty days allowed the approval of the technique for the animals survived while evaluated and the histological examination of the biopsies revealed that the procedures were conservative since the only change observed was subepicardiac fibrosis. / A redução na função sistólica do ventrículo esquerdo em pacientes com insuficiência cardíaca congestiva, está relacionada ao aumento de volume do ventrículo. A despeito dos avanços no tratamento conservador, o prognóstico é mau com alta taxa de mortalidade. Este trabalho propôs o estabelecimento de um protocolo cirúrgico de redução cardíaca, através de ventriculectomia parcial, para tratamento de cães com a referida patologia e, através de biópsias cardíacas por videotoracoscopia, fez o controle pós-operatório destes animais. Também avaliou a curto prazo, através de eletrocardiograma e radiografia simples de tórax, sua evolução em função do procedimento. Tanto estes exames, como a bioquímica sérica e avaliação de parâmetros fisiológicos destes pacientes, observados durante sessenta dias, revelaram bons resultados da técnica uma vez que os animais sobreviveram ao período de observações e, pela análise histológica dos fragmentos de miocárdio obtidos nas biópsias, concluiu-se que o procedimento é conservador do tecido cardíaco sendo a única alteração observada a fibrose subepicárdica.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The p63 protein is expressed in the nuclei of the mammary myoepithelial cells and has synergisms or antagonisms with p53 tumor suppressor protein. The immunohistochemistry expression of p63 was studied for access the role of myoepithelial cells in histogenesis of the mixed tumors. Additionally, the possible association between p63 and p53 for access the biological aspects of this tumors was evaluated. Four specimens of the normal gland, 20 benign mixed tumors, 35 carcinomas in mixed tumors and 11 tubulopapilary carcinomas were evaluated. Myoepithelial cells forming layers periductals/periacinars continuous were reactive for protein p63 in normal gland and in benign mixed tumor. The carcinomas in mixed tumors and 72.7% (8/11) tubulopapilary carcinomas were reactive for p63. In the mixed tumors star and spindle shaped cells were reactive for p63. The p53 protein was expressed in 20.0% (4/20), 28.6% (10/35) and 36.7% (4/11), benign mixed tumors, carcinoma in mixed tumors and tubulopapilary carcinomas, respectively. There was not relation between p63 and p53 expression in none type of tumor. The present study point the participation of the mioepithelial cells in the histogenesis of the mixed tumors. The decrease in p63 expression in the basal myoepithelial cells of the carcinomas may be important for tumoral progression. / A proteína p63 é expressa no núcleo das células mioepiteliais da mama e apresenta funções sinérgicas ou antagonistas com a proteína de supressão tumoral p53. A expressão imuno-histoquímica de p63 foi estudada para acessar o papel das células mioepiteliais na histogênese dos tumores mistos. Adicionalmente, avaliou-se a possível relação entre expressão imuno-histoquímica de p63 e p53 com a finalidade de obter informações sobre a biologia desses tumores. Quatro amostras de mama normais, 20 tumores mistos benignos, 35 carcinomas em tumores mistos e 11 carcinomas tubulopapilares foram avaliados. Células mioepiteliais, formando camadas periductais/periacinares contínuas, foram imunoreativas para p63 na mama normal e nos tumores mistos benignos. Todos os carcinomas em tumores mistos e 72,7% (8/11) dos carcinomas tubulopapilares foram reativos para p63. A reatividade para p63 foi superior nos tumores mistos benignos quando comparada com os carcinomas. Nos tumores mistos, células mioepiteliais com formato fusiforme e estrelado, presentes no estroma mucinoso também foram reativas para p63. A proteína p53 foi expressa em 20,0% (4/20), 28,6% (10/35) e 36,4% (4/11) dos tumores mistos benignos, carcinomas em tumores mistos e carcinomas tubulopapilares, respectivamente. Não houve relação entre a expressão de p53 e p63 nos diferentes tipos tumorais. O presente estudo evidenciou a participação das células mioepiteliais na histogênese dos tumores mistos. A diminuição da expressão de p63 nas células mioepiteliais que compõem a camada basal dos carcinomas pode ser um evento importante para a progressão tumoral.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-12-18Bitstream added on 2014-06-13T20:24:26Z : No. of bitstreams: 1 kawauchi_im_dr_jabo.pdf: 499820 bytes, checksum: 080a7eb37337b58fd7c2aab2abd15abd (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os objetivos da presente tese foram avaliar o panorama qualitativo e determinar, por meio de métodos in vivo e in vitro, o valor nutricional da farinha de carne e ossos (FCO) e da farinha de vísceras de aves (FVA) para cães, além de estabelecer equações para predição da energia metabolizável (EM) destes alimentos com base em seus respectivos constituintes químicos e na solubilidade em pepsina. Objetivou-se ademais padronizar para cães a metodologia de solubilidade em pepsina da FCO e da FVA. Procedeu-se à ampla amostragem das FCO e FVA comercializadas no Estado de São Paulo - Brasil, sendo avaliadas 15 FCO e 15 FVA em relação às suas características qualitativas e, destas, oito farinhas de cada tipo foram avaliadas também em ensaio de digestibilidade com cães. Foram realizados dois ensaios de digestibilidade pelo método de coleta total de fezes e urina e a digestibilidade dos nutrientes e EM dos alimentos determinados pelo método de substituição. Em cada ensaio foram utilizados 18 cães adultos da raça beagle, distribuídos em delineamento em blocos casualizados, com três blocos (período), nove dietas e duas repetições por dieta. Formulou-se uma dieta basal e dietas teste foram obtidas pela mistura de 700 g/kg da dieta basal e 300 g/kg de cada uma das farinhas avaliadas. Foi determinada a solubilidade da proteína dos ingredientes em pepsina nas concentrações de 0,02%, 0,002% e 0,0002%. Tanto a FCO como a FVA apresentaram características qualitativas adequadas, com exceção de contaminação por Salmonella spp. por algumas amostras. A FCO apresentou reduzidos valores de digestibilidade e de EM, ao contrário da FVA, para a qual verificaram-se bons resultados. A solubilidade da proteína da FCO e da FVA em pepsina a 0,0002% e a 0,02%, respectivamente, são métodos qualitativos válidos. A EM em MJ/kg de FCO e de... / This study aimed to evaluate the quality and to determine by in vivo and in vitro methods the nutritional value of meat and bone meal (MBM) and poultry by-product meal (PM) for dogs, and to establish prediction equations for metabolizable energy (ME) of these foods based on their chemical composition and on the protein solubility in pepsin. Moreover this study aimed to standardize the protein solubility in pepsin methodology of MBM and PM for dogs. MBM and PM marketed in Sao Paulo State – Brazil were sampled and it were evaluated 15 MBM samples and 15 PM samples to assess their qualitative characteristics and eight of each type of meal were evaluated in the digestibility trial with dogs. It were carried out two digestibility trials by the total collection of feces and urine method and nutrient digestibility and energy values of foods it were determined by the substitution method. In each trial, 18 adult beagle dogs were distributed in a randomized block design with three blocks (period), nine diets and two replicates per diet. It was formulated a basal diet and test diets were obtained by blending 700 g/kg of the basal diet and 300 g/kg of each of the meals evaluated. It was determined the protein solubility in pepsin at 0.02%, 0.002% and 0.0002%. Both the MBM as PM presented appropriate qualitative characteristics, except for Salmonella spp. contamination by some samples. The MBM presented reduced digestibility and ME values for dogs, as opposed to PM, which presented good results. The protein solubility in pepsin at 0.0002% and 0.02% for MBM and PM respectively, are valuable qualitative methods. ME in MJ/kg of both... (Complete abstract click electronic access below)

Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. / Made available in DSpace on 2012-10-17T07:13:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2016-01-08T23:13:26Z : No. of bitstreams: 1 142209.pdf: 3484721 bytes, checksum: d86e7299ca63b989e38ce9c896e200e3 (MD5)

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-06-21T17:33:38Z No. of bitstreams: 1 Naiara Carvalho Teixeira Bagues Contribuição para o ... 2016.pdf: 2270065 bytes, checksum: ee36fb7fb8ecab2b0af558caddf66435 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-06-21T17:33:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Naiara Carvalho Teixeira Bagues Contribuição para o ... 2016.pdf: 2270065 bytes, checksum: ee36fb7fb8ecab2b0af558caddf66435 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-21T17:33:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Naiara Carvalho Teixeira Bagues Contribuição para o ... 2016.pdf: 2270065 bytes, checksum: ee36fb7fb8ecab2b0af558caddf66435 (MD5) Previous issue date: 2016 / Made available in DSpace on 2016-07-22T13:19:17Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Naiara Carvalho Teixeira Bagues Contribuicao para o 2016.pdf.txt: 243367 bytes, checksum: 9df9a4fb8bc7a3cd21d749f05648f537 (MD5) Naiara Carvalho Teixeira Bagues Contribuicao para o 2016.pdf: 2270065 bytes, checksum: ee36fb7fb8ecab2b0af558caddf66435 (MD5) license.txt: 2991 bytes, checksum: 5a560609d32a3863062d77ff32785d58 (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Gonçalo Moniz, Instituto de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / INTRODUÇÃO: A Leishmaniose visceral (LV) é uma doença infecciosa e parasitária que se encontra em expansão no Brasil. A espécie que causa a doença no Brasil é a Leishmania infantum. O cão é o principal reservatório do parasita. Uma vacina contra leishmaniose visceral canina (LVC) pode favorecer o controle da doença. Este trabalho tem como objetivo contribuir para o desenvolvimento de uma vacina contra LVC. OBJETIVO: O estudo do primeiro capítulo visou o desenvolvimento de um modelo para a avaliação de antígenos candidatos à vacina contra LVC. METODOLOGIA: Um experimento foi realizado para obtenção de cães resistentes a LVC. Os linfócitos dos animais deveriam ser capazes de reconhecer antígenos potencialmente úteis para o desenvolvimento de uma vacina. Para isso, uma cepa de L.infantum foi isolada de cão naturalmente infectado e doente (Camaçari, Bahia). Seis cães adultos e sadios foram inoculados com 1x108 formas promastigotas em fase estacionária de cultura por via dérmica e acompanhados por dois anos. RESULTADOS: Os animais apresentaram: 1) área de induração e ulceração rasa no local da inoculação do parasita com cura espontânea em um período inferior a três meses, 2) ausência de manifestações clínicas e de alterações hematológicas e bioquímicas séricas, 3) produção baixa e flutuante de anticorpos da classe IgG reativos a antígenos de Leishmania, 4) resposta linfoproliferativa (em 4 de 6 cães) frente a estimulação com antígenos de Leishmania, 5) produção baixa de IFN-γ em um ensaio realizado com sangue total incubado por 24h com antígenos de Leishmania (4 de 5 cães), 6) carga parasitária baixa em aspirado de baço, detectada por PCR em tempo real. CONCLUSÃO: Os animais desenvolveram uma forma subclínica da infecção ao lado de resposta imune humoral e celular fracas. OBJETIVO: No segundo capítulo foi testado um ensaio de avaliação da produção de citocinas por células de sangue de cães naturalmente infectados por Leishmania infantum. O quantiFERON modificado permite a avaliação in vitro e de maneira rápida da produção de citocinas contra Leishmania em animais de área endêmica. METODOLOGIA: Antígeno solúvel e antígenos recombinantes de L. infantum (rLci2-NT-5R-CT e rLci2-NT-CT) foram produzidos e utilizados no ensaio para a estimulação do sangue total de27 cães de área endêmica e não endêmica para LVC por 24h. O plasma foi coletado e a produção das citocinas caninas IFN-γ, IL-2, IL-6, IL-10 e TNF-α foram quantificadas. RESULTADO: Devido a problemas técnicos não foi possível avaliar os dados obtidos e, consequentemente, não foi possível caracterizar grupos de animais susceptíveis e resistentes. OBJETIVO: No terceiro capítulo, a carga parasitária e aspectos histológicos em diferentes regiões do baço de cães com LVC foi analisada. METODOLOGIA: A carga parasitária e alterações histológicas no baço de 6 cães com LVC foram avaliados por amostragem de três secções inferior, média e superior do órgão. RESULTADO: Observou-se uma variação na distribuição na carga parasitária do baço do mesmo animal. Avaliações histológicas (desorganização polpa branca, granulomas, periesplenite, células plasmáticas, e infiltração polimorfonuclear) mostraram uma variação na freqüência (granulomas) ou intensidade (perisplenite) no baço de 2 dos 6 cães. CONCLUSÃO: Conclui-se que a distribuição da carga parasitária e as alterações histológicas no baço de cães com LV mostram um certo grau de heterogeneidade. / INTRODUCTION: Visceral Leishmaniasis (VL) is an infectious parasitic disease which is increasing in Brazil. The species that causes the disease in Brazil is Leishmaniainfantum. The dog is the main reservoir of the parasite. A canine visceral leishmaniasis vaccine (CVL) may favor the control of the disease. This paper aims to contribute to the development of a vaccine against CVL. OBJECTIVE: The first chapter study aimed the development of a model for the evaluation of candidate antigens for a vaccine against CVL. An experiment was conducted to obtain resistant dogs to CVL. Lymphocytes of these animals should be able to recognize potentially useful antigens for a vaccine development. METHODOLOGY: For this, a strain of L. infantum was isolated from naturally infected and sick dog (Camaçari, Bahia). Six dogs and healthy adults were intradermally inoculated with 1 x 108 promastigotes in the stationary phase culture and were followed for two years. RESULTS: The animals showed: 1) induration area and shallow ulceration in parasite inoculation site with spontaneous healing in a period of less than three months, 2) absence of clinical symptoms and hematological and biochemical changes, 3) low and floating production of antibodies IgG reactive to Leishmania antigens, 4) lymphoproliferative response (in 4 of 6 dogs) compared to stimulation with leishmanial antigens, 5) low IFN-γ in a test performed on whole blood incubated for 24 h with antigen Leishmania (4 of 5 dogs), 6) a low parasite load in spleen aspirates, detected by realtime PCR. CONCLUSION: These animals developed a subclinical form of the infection alongside with a weakspecific humoral and cellular immune response and weak cell. OBJECTIVE: The second section was tested in a trial evaluating cytokine production by blood cells of dogs naturally infected with Leishmaniainfantum. The modified QuantiFERON allows evaluation both in vitro and quickly production of cytokines against Leishmania in animals in an endemic area. METHODOLOGY: Soluble antigen and recombinant antigens of L. infantum (rLci2-5R-NT-CT and rLci2-NT-CT) were produced and used in the assay for the stimulation of whole blood of 27 animals from endemic and nonendemic area for LVC for 24h. Plasma was collected and cytokine production of canine IFN- γ, IL-2, IL-6, IL-10 and TNF-α cytokines were quantified. RESULTS: Due to technical some problems, it was not possible to characterize groups of animals susceptible and resistant in relation to modified QuantiFERON assay results. OBJECTIVE: In the third chapter, the parasite load and histological aspects in different regions of the spleen of dogs with CVL were analyzed. METHODOLOGY: The parasite load and histological changes in the spleen of 6 dogs with CVL were evaluated by sampling three sections of the spleen (lower, middle and upper section of the organ). RESULTS: There was a variation in parasitic load distribution in the spleen of the same animal. Histological evaluations (disorganized white pulp, granulomas, periesplenite, plasma cells, and polymorphonuclear infiltration) showed a variation in the frequency (granulomas) or intensity (perisplenite) in spleen in 2 of 6 dogs. CONCLUSION: Therefore, the distribution of the parasitic load and histological changes in dogs spleen with VL show a certain degree of heterogeneity.

O presente estudo avaliou as alterações dos marcadores de estresse oxidativo em cães adultos alimentados com dietas com altos níveis de ácidos graxos (AG) saturados ou insaturado, suplementadas ou não com antioxidante natural à base de algas. Doze cães Beagle adultos sadios (6 machos e 6 fêmeas, 2 anos de idade, 11,2 ± 1,92 kg PV) foram distribuídos em dois blocos inteiramente casualizados e alimentados com 4 dietas experimentais revestidas com 2 fontes lipídicas: saturadas (13% de sebo bovino) ou insaturadas (13% de óleo de soja enriquecido com DHA), suplementadas ou não com 500 mg de antioxidantes naturais à base de algas (AOX) por 4 semanas, intercalados com um período de adaptação de 4 semanas. Amostras de sangue foram coletadas nos dias 0, 15 e 30 de cada bloco. Glutationa peroxidase (GSH-Px), superóxido dismutase (SOD), grupo sulfidrila, carbonilação de proteínas (PC), substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e potencial antioxidante reativo total (TRAP) foram avaliados no soro. Enquanto GSH-Px, SOD, glutationa S-transferase (GST), catalase (CAT), grupo sulfidrila e TBARS foram medidos nos eritrócitos. Não houve diferença significativa na maioria dos marcadores oxidativos avaliados. Em contraste, a atividade de GST nos eritrócitos foi maior nos animais que consumiram as dietas revestidas com sebo bovino em comparação com animais que consumiram dietas revestidas com óleo de soja enriquecida com DHA (P < 0,05). O soro dos animais alimentados com as dietas suplementadas com AOX apresentaram maiores valores de TRAP (P < 0,05). Os dados demonstraram que as concentrações de ácidos graxos insaturados utilizados nas dietas para cães adultos não foram suficientes para causar grandes alterações no estado oxidativo. Não foi possível avaliar a eficiência do antioxidante natural em manter o equilíbrio oxidativo dos animais, pois parece que o organismo não foi desafiado pelas dietas ricas em AG insaturados. Isso sugere que cães como descendentes de carnívoros podem ter alguma proteção natural contra a oxidação. / The present study evaluated the alterations of the oxidative stress markers in adult dogs fed with high levels of saturated or unsaturated fatty acids, supplemented or not with natural algae based antioxidant. Twelve healthy adult Beagle dogs (6 males and 6 females, 2 years old, 11.2 ± 1.92 kg BW), were distributed in 2 completely randomized blocks and fed with 4 experimental diets coated with 2 lipid sources: saturated (13% bovine tallow) or unsaturated (13% soybean oil enriched with DHA), supplemented or not with with 500 mg of algaebased natural antioxidant (AOX) for 4 weeks, intercalated with a 4 week adaptation period. Blood samples were collected on days 0, 15 and 30 of each block. Glutathione peroxidase (GSH-Px), superoxide dismutase (SOD), sulfhydryl group, protein carbonylation (PC), thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) and total reactive antioxidant potential (TRAP) were evaluated in serum. While GSH-Px, SOD, glutathione S-transferase (GST), catalase (CAT), sulfhydryl group and TBARS were measured in erythrocytes. There was no significant difference in most of the oxidative markers evaluated. In contrast, GST activity in erythrocytes was greater in the animals that consumed the diets coated with bovine tallow compared to animals that consumed diets coated with soybean oil enriched with DHA (P < 0.05). Serum from animals fed diets supplemented with AOX presented greater TRAP values (P < 0.05). The data demonstrate that the concentrations of unsaturated fatty acids used in the diets for adult dogs were not sufficient to cause large changes in the oxidative status. It was not possible to evaluate the efficiency of the natural antioxidant in maintaining the oxidative balance of the animals once seems like the body was not challenged by the unsaturated diets. It suggests that dogs descended from carrion carnivore dogs may have some natural protection against oxidation.