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Caracterização magnética do compósito multiferróico (1-x)Pb(Mg1/3Nb2/3)-xPbTiO3/NiFe2O4Gualdi, Alexandre José 22 March 2010 (has links)
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Previous issue date: 2010-03-22 / Universidade Federal de Minas Gerais / In this work we studied the magnetic properties of nickel ferrite and the (1-x)Pb(Mg1/3Nb2/3)-xPbTiO3/NiFe2O4 (PMN-PT/NFO) multifferroic composite syntherized in different temperatures. The magnetization, magnetostriction and magnetoelectric effect measurements were performed as a function of applied magnetic field at room temperature. The goals of the work were the developement of the instrumentation. For magnetoestriction measurements a capacitive cell was design for this application. The magnetoelectric measurements were performed in two experimental setup: one uses the Physical Properties Measurements System (PPMS) by Quantum Design and the other system was adapted in a vibration sample magnetometer (VSM) We observed that magnetic properties present a dependence with the synthesis conditions as well as the nickel ferrite than the composite sample. We observed also an intrinsic dependence with the magnetostriction properties of composite. / Nessa dissertação estudamos as propriedades magnéticas de amostras de ferritas de níquel e do compósito multiferróico (1-x)Pb(Mg1/3Nb2/3)- xPbTiO3/NiFe2O4 (PMN-PT/NFO) sinterizado em diferentes temperaturas. Foram realizadas medidas de magnetização em função do campo magnético, medidas de magnetoestricção e medidas do efeito magnetoelétrico. O foco principal do nosso estudo foi o desenvolvimento de uma instrumentação para a realização de tais medidas. Para isso, foi aperfeiçoada uma célula capacitiva desenvolvida durante meu trabalho de iniciação científica para a realização de medidas de magnetoestricção. Além disso, foram montados dois sistemas para a realização de medidas de efeito magnetoelétrico. Um desses sistemas utiliza utiliza o Physical Properties Measurement System (PPMS) da Quantum Design e o outro utiliza um magnetômetro de amostra vibrante (VSM). Observamos que, tanto nas amostras de ferrita quanto nas amostras de compósito, existe uma dependência das propriedades magnéticas com a temperatura de sinterização. Além disso, também foi observada a dependência das propriedades magnetoelétricas com as propriedades magnetoestrictivas dos compósitos, no qual mostramos que o efeito magnetoelétrico é devido às propriedades magnetoestrictivas dos compósitos.
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Sinalização rápida por testosterona na membrana plasmática da célula de sertoli : captação de 45Ca2+ e efeitos eletrofisiológicosVon Ledebur, Esther Iris Christina Freifrau January 2002 (has links)
Resumo não disponível.
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Efeito hiperpolarizante do isoproterenol na membrana da célula de sertoli de ratos imaturos : envolvimento dos receptores beta2-adrenérgicos e dos canais K+ATPJacobus, Ana Paula January 2004 (has links)
No presente estudo, foi investigado o mecanismo pelo qual, o isoproterenol hiperpolariza o potencial de membrana (PM) da célula de Sertoli em túbulos seminíferos de ratos, com quinze dias de idade (imaturos). Foram analisadas a modificação do potencial de membrana e a resistência, utilizando-se a técnica de registro intracelular. O isoproterenol (2x10-6M) induziu uma hiperpolarização imediata e significativa na membrana da célula de Sertoli. O antagonista β2-adrenérgico butoxamina (1x10-6M) anulou a ação do isoproterenol. O antagonista β1-adrenérgico metoprolol (1x10-6M) teve efeito de reduzir a ação do isoproterenol, porém sem ser significativo. A inibição dos canais K+ATP, com a sulfoniluréia glibenclamida, suprimiu a ação do isoproterenol. A testosterona, a qual atua despolarizando o potencial de membrana, através do fechamento de canais K+ATP, via PLC-PIP2, impediu a hiperpolarização produzida pelo agonista β-adrenérgico. Os policátions como: espermina e LaCl3 (cloreto de lantâno) reverteram o efeito hiperpolarizante do isoproterenol, despolarizando o potencial de membrana, provavelmente através de interações iônicas que neutralizam a ação do agonista β-adrenérgico nos canais K+ATP. O agonista da adenilato ciclase, forscolina (1x10-7M), rapidamente hiperpolariza o potencial de membrana da célula de Sertoli, mimetizando o efeito do isoproterenol; db-AMPc também hiperpolariza o potencial de membrana destas células. Estes efeitos indicam que o isoproterenol age nos canais K+ATP, provavelmente, envolvendo a cascata: receptor β-adrenérgico/Gs/AC/AMPc/PKA. Estes resultados sugerem que a hiperpolarização induzida por isoproterenol é mediada pela abertura de canais K+ATP, em células de Sertoli. Esta hiperpolarização β-adrenérgica, provavelmente, tem uma papel fisiológico, na modulação do potencial de membrana, opondo-se à despolarização produzida pela testosterona, através do fechamento dos canais K+ATP.
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Preparação e caracterização de eletrodos modificados com poli-{estireno co-ácido acrílico} para aplicação em células a combustívelBúrigo, Carina January 2014 (has links)
Dissertação de Mestrado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciência e Engenharia de Materiais da Universidade do Extremo Sul Catarinense - UNESC, como requisito à obtenção do título de Mestre em Ciência e Engenharia de Materiais. / A implantação de novas tecnologias para produção e armazenamento de energia limpa de modo eficiente, de química elevada, sustentável e de baixo custo, esta cada vez mais em evidência devido a estudos e previsões de crises energéticas no mundo todo. Uma alternativa para este problema são as células a combustíveis (CC), que são dispositivos eletroquímicos que consomem hidrogênio e oxigênio para produzir eletricidade - cujo estudo e produção são promissores. Este estudo apresenta a preparação e caracterização eletroquímica de membranas poliméricas de poli-{estireno co-ácido acrílico} sulfonado (PSAAS) e não sulfonado (PSAA) para aplicação em CC de membranas poliméricas (PMFC). Os copolímeros utilizados foram preparados na relação de 92:8, seguido por sulfonação com H2SO4, aumentando a eficiência, versatilidade, hidrofilicidade e condutividade da membrana polimérica. Eletrodos de Pt || PSAA e Pt || PSAAS foram preparados por casting a partir de uma solução de polímero depositada sobre a sua superfície. Os filmes poliméricos foram caracterizados por voltametria cíclica e espectroscopia de impedância electroquímica em meio ácido e neutro. Os voltamogramas cíclicos foram registrados em 0,5 mol.dm-3 em solução de H2SO4 e em 0,1 mol.dm-3 em solução de KCl, onde foi observada a presença de processos redox atribuídos à íons H+. A caracterização morfológica dos filmes foi realizada por meio de microscopia de força atômica, onde os filmes de PSAA e PSAAS apresentaram diferenças morfológicas, sendo que o PSAAS possui menos irregularidades e é visivelmente mais plano. A caracterização espectroscópica comprovou a presença de grupos funcionais característicos para o poli-{estireno co-ácido acrílico} sulfonado por meio das bandas 3500-3100, 2930, 1658, 1400-1000, 1400-1290, 1190-1120, 1182 e 1000 cm-1. Os espectros eletrônicos do filme PSAAS em pH 2.0 e 10.0 apresentaram _máx em 427 e 486nm. Por meio dos resultados, foi possível mostrar que as membranas de PSAAS são materiais poliméricos eletroativos e que podem ser usadas como célula a combustível de membrana permeável devido sua considerável condutividade protônica, diferentemente das membranas produzidas com PSAA que apresentaram pouca permeabilidade e menor condutividade.
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Produção de imunossensor para identificação de células-tronco mesenquimais de coelhoBovolato, Ana Lívia de Carvalho. January 2017 (has links)
Orientador: Elenice Deffune / Resumo: Diante do crescente uso de células-tronco em medicina regenerativa aliada a importância de diagnóstico rápido, os imunossensores surgem como ferramentas que propiciam rapidez, seletividade e sensibilidade. Foi investigada a construção de um imunossensor para identificação de células-tronco mesenquimais de coelho frente à inexistência no mercado, de marcadores específicos para a espécie. Com o objetivo de identificar a célula-tronco mesenquimal (CTM) em amostras biológicas, foi proposto a construção de filmes pela técnica layer-by-layer (LbL) com solução de quitosana e anticorpo monoclonal de especificidade anti-CD90 produzido home made (HM) para aplicação em imunossensores eletroquímicos. Inicialmente foi caracterizado o anticorpo monoclonal produzido por técnicas imunoquímicas. A classe do anticorpo produzido é IgG1. O crescimento dos filmes foi confirmado por voltametria cíclica (VC) pela área dos voltamogramas. A distorção dos voltamogramas foi observada com maior adsorção em 4 bicamadas, considerado como cobertura completa do eletrodo. Foi padronizado e produzido o biofilme de 4 bicamadas para fixação dos anticorpos monoclonais murinos anti-CD90 HM com solução de quitosana 0,2%. A análise dos resultados obtidos com imunossensor comparando-se com a citometria de fluxo identifica a elevada sensibilidade do mesmo para a confirmação da presença de CTM em amostras biológicas, havendo necessidade de mais desenvolvimento para a quantificação das células. A partir de uma concent... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre
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Substituição do uso de soro fetal bovino na manutenção do cultivo de células CER infectadas pelo vírus da doença infecciosa da bursa de FabríciusTapparo, Ane Franciele [UNESP] 26 February 2009 (has links) (PDF)
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tapparo_af_me_sjrp.pdf: 812527 bytes, checksum: aac6f17be2c6552511dcaa2c2bd79c32 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Atualmente, as culturas celulares são consideradas uma das ferramentas mais importantes na virologia. Os meios de cultura utilizados na manutenção destes sistemas não oferecem capacidade às células de adsorver e se multiplicar em matrizes plásticas sem a adição suplementar de soro fetal bovino (SFB). Entretanto, o uso do SFB não é aconselhável devido às variações encontradas entre os lotes, o alto grau de proteína animal e a possibilidade da presença de agentes infecciosos. Além dos aspectos sanitários, existe o aspecto ético em relação à obtenção deste produto biológico. Com o aumento dos ensaios in vitro a quantidade estimada de produção de soro fetal bovino no mundo é de aproximadamente 500.000 litros/ano, isto significa, mais de 1.000.000 de fetos bovinos sacrificados para obtenção de SFB. O objetivo deste estudo foi cultivar as células CER (chicken embryo related) em diferentes meios de cultura: M-VSFM, 293- SFMII, VP-SFM, VP-SFM AGT, Glasgow, Leibovitz 15, adicionados de 2mg/ml ou 5mg/ml de IGF-1 (Insulin-like Growth Factor) e verificar a possibilidade das estirpes virais Lukert e Farangher de se adaptarem neste sistema. Nesta cultura a expressão da fibronectina e da laminina (LB1 e LB2) foram dectadas por imunofluorescência e imunoperoxidase indireta, respectivamente. As monocamadas de células CER foram infectadas pela estirpe Lukert e Farangher, sendo a m.o.i (multiplicidade de infecção) utilizada de 1.0. Após três passagens, o RNA viral foi extraído para determinar as substituições genéticas. A região hipervariável do gene VP2 foi amplificada por RT/PCR. Para confirmar as mutações, os produtos da PCR foram seqüênciados e comparados com as seqüências de VDIB publicadas no GenBank. Os resultados demonstraram que o meio VP-SFM e 5µg/mL de IGF-1 aplicado às culturas foi o melhor para a adaptação direta do cultivo das monocamadas... / Currently, the cell culture are considered one of the tools most important in the virology. The culture medium used in the maintenance those systems do not offer capacity to the cells of attachment and if spread in plastic surfaces without the supplementary addition of foetal bovine serum (FBS). However, the use FBS is not advisable due to batch-tobatch variation in composition, the high animal protein content, and the possibility of the presence of infectious agents. Beyond the sanitary aspects, exists the ethical aspect in relation to the attainment of this biological product. With the increase of in vitro assays the amount of FBS produced in the world is estimated at approximately 500.000 litres/year, this carry in 1.000.000 bovine fetuses sacrified for FSB attainment. The aim of this study was to adapt the CER cells (chicken embryo related) on different medium: M-VSFM, 293-SFMII, VP-SFM, VP-SFM AGT, Glasgow, Leibovitz 15, supplemented by 2mg/ml or 5mg/ml IGF-1 (Insulin-like Growth Factor) and to verify the possibility the Lukert and Farangher viral strain adapted in this system. The expression of the fibronectin and laminin (LB1 and LB2) were detected by immunofluorescence and indirect immunoperoxidase, respectively. The CER cells monolayer had been infected by Lukert and Farangher strain, being the m.o.i (infection multiplicity) used of 1.0. After three passages, viral RNA was isolated to determine the genetic changes. The hypervariable regions of the VP2 gene was amplified by RT/PCR. To confirm the genetic changes, PCR products were sequenced and compared to the sequences of the GenBank published VDIB strain.The results had demonstrated that the medium VP-SFM and 5µg/mL IGF-1 applied to the cultures was optimum for the direct adaptation of the culture of the monolayers without addition of FBS. In relation the detection of the extracellular protein, the fibronectin was induced... (Complete abstract click electronic access below)
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Investigação do potencial genótóxico e antigenotóxico do extrato de Brassica oleracea in vivoGonçalves, Álvaro Luiz Martini [UNESP] 27 February 2012 (has links) (PDF)
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goncalves_alm_me_botib.pdf: 590776 bytes, checksum: 8b55e04bfd5d2925a1cf2b9ac4822357 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Brassica oleracea é uma espécie botânica popularmente conhecida como “couve”. É utilizada na alimentação e também na medicina popular, devido às suas ações antiulcerogênica e quimiopreventiva do câncer, entre outras. Este estudo teve como objetivo avaliar o potencial genotóxico e antigenotóxico do extrato de folhas de Brassica oleracea em células somáticas e germinativas de camundongos in vivo, usando o Ensaio Cometa e o teste do micronúcleo. Os animais (camundongos Swiss albinos machos) foram divididos em oito grupos experimentais (n=6). O grupo controle negativo recebeu água destilada e o controle positivo 80 mg/kg de doxorrubicina (DXR). Três diferentes doses do extrato foram testadas (500, 1000 e 2000 mg/kg) para a avaliação do potencial genotóxico. As mesmas doses do extrato foram utilizadas simultaneamente com injeção intraperitoneal de DXR (uma hora após o tratamento com o extrato via gavage), para a avaliação dos potenciais antigenotóxico e anticlastogênico/antianeugênico. As células analisadas pelo Ensaio Cometa foram leucócitos de sangue periférico coletados 4 e 24 horas após os tratamentos, e células do fígado, cérebro, medula óssea e testículos, coletadas 24 horas após os tratamentos. Para o Teste do Micronúcleo, foram analisadas células de medula óssea, coletadas 24 horas após os tratamentos. Os dados obtidos foram estatisticamente analisados utilizando-se ANOVA e teste de Tukey-Kramer. A ausência de genotoxicidade e aneugenicidade/clastogenicidade foi observada para as três doses do extrato. No entanto, as três doses testadas induziram um decréscimo significante de danos no DNA das células analisadas pelo Ensaio Cometa, assim como redução no número de eritrócitos policromáticos micronucleados analisados pelo Teste do Micronúcleo, em comparação ao grupo controle positivo... / Brassica oleraceae is a botanical specie popularly known as “kale”. Is used in the feeding and also in folk medicine due to its anti-ulcerogenic and cancer chemopreventive activities, among others. The main objective of the present study was to evaluate the genotoxic and antigenotoxic potential of the Brassica oleraceae extract in different cells of mice in vivo, using the comet assay and micronucleus test. The animals (male Swiss mice) were divided in eight experimental groups (n = 6). The negative control group received distilled water and the positive control 80mg/kg of doxorubicin (DXR). Three different doses of the extract were tested (500, 1000 and 2000 mg/kg) to evaluate the genotoxic potential. The same extract doses followed by DXR injection (one hour after the treatment) were used to evaluate the antigenotoxic and anticlastogenic/antianeugenic potentials. The cells analyzed by comet assay were leukocytes from peripheral blood collected 4 and 24 hours after the treatments, and liver, brain, bone marrow and testicles cells collected 24 h after the treatments. Bone marrow cells collected 24 hours after the treatments were analyzed by micronucleus test. The data were statistically analyzed using ANOVA and Tukey-Kramer test. The absence of genotoxic and aneugenic/clastogenic effects was observed with the three tested doses of the extract. On the other hand, the three tested doses of the extract induced a significant decrease in the DNA damage in all cells analyzed by comet assay, and a reduction in the frequency of micronucleated polychromatic erythrocytes, in comparison with DXR positive control group. Under the experimental conditions employed in the present experiment, the results obtained showed that Brassica oleraceae extract is not genotoxic and presents a clear chemoprotection against DNA damage induced by doxorubicin
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Efeitos e regulação da expressão do kit ligante (KL) durante a maturação in vitro do complexo cumulus-oócito bovinoLima, Paula Fernanda de [UNESP] 02 October 2012 (has links) (PDF)
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lima_pf_me_botfmvz.pdf: 431092 bytes, checksum: 3cea30aa873b1916f3293f49265588ad (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O desenvolvimento da competência oocitária ocorre de forma gradual durante a foliculogênese e é dependente da interação do oócito com as células do cumulus via fatores parácrinos. O KL é expresso pelas células do cumulus e estimula a maturação nuclear do oócito em roedores, mas suas funções no complexo cumulus-oócito (CCO) bovino não são conhecidas. Neste trabalho, avaliou-se o padrão de expressão do KL, os efeitos do KL sobre a progressão da meiose e a expansão do cumulus, bem como a regulação da expressão do KL por fatores secretados pelo oócito (FSOs; BMP15, FGF8, FGF10, FGF16 e FGF17) durante a maturação in vitro (MIV) de CCOs bovinos. Adicionalmente, os efeitos do KL sobre a expressão de BMP15, GDF9, FGF16 e c-KIT foi avaliada. As isoformas do KL (KL1 e KL2) apresentaram padrões de expressão semelhantes nas células do cumulus ao longo da MIV, com pico de expressão às 12 horas do cultivo. A adição de KL ao cultivo aumentou a porcentagem de oócitos em meiose II e diminuiu a de oócitos em meiose I ao final da MIV, mas não afetou a expansão do cumulus. O FGF8 aumentou a expressão dos RNAm do KL1 e do KL2, enquanto a BMP15 estimulou apenas a expressão do RNAm do KL1. Distintamente, a dose máxima do FGF10 diminuiu a expressão do KL2 às 22 horas do cultivo em estudo dose-resposta, embora o mesmo não tenha sido observado quando uma dose menor, porém efetiva em estimular a expansão do cumulus, foi testada ao longo da MIV (4, 12 e 22 horas). O tratamento com FGF10 e BMP15 associados aumentou a expressão do KL1 às 12 horas do cultivo em relação ao controle e aos fatores de crescimento sozinhos, sugerindo cooperação entre eles na regulação da expressão do KL. A adição de KL ao meio de cultivo não alterou a expressão dos FSOs. Em conjunto, os resultados deste estudo sugerem o... / The development of oocyte competence occurs gradually during folliculogenesis and is dependent on the interaction of the oocyte with cumulus cells via paracrine factors. The KL is expressed by cumulus cells and stimulates oocyte nuclear maturation in rodents, but its functions in cumulus-oocyte complex (COC) cattle are unknown. In this study, we evaluated the expression pattern of KL, the effects of KL on the progression of meiosis and cumulus expansion and regulation of KL expression by factors secreted by the oocyte (OSF; BMP15, FGF8, FGF10, FGF16 and FGF17) during in vitro maturation (IVM) of bovine COCs. Additionally, the effect of KL on the expression of BMP15, GDF9, FGF16 and c-KIT was evaluated. Isoforms of KL (KL1 and KL2) showed similar expression patterns in cumulus cells along the MIV, with higher expression at 12 hours of cultivation. The addition of KL increased the percentage of oocytes in meiosis II and decreased oocyte meiosis I in the end of IVM, but did not affect cumulus expansion. The FGF8 increased expression of KL1 and KL2 mRNA, while only BMP15 stimulated mRNA expression KL1. Distinctly, the maximum dose of FGF10 decreased expression of KL2 at 22 hours of cultivation in dose-response study, although the same was not observed when a lower dose, but effective to stimulate cumulus expansion was tested along MIV (4, 12 and 22 hours). Treatment with FGF10 and BMP15 associated with increased expression of KL1 at 12 hours of culture in relation to the control and growth factors alone, suggesting cooperation between them in the regulation of expression of the KL. The addition of KL to the culture medium did not alter the expression of the FSOs. Taken together, our results suggest the involvement of KL in controlling bovine oocyte nuclear maturation and expression of KL in bovine cumulus cells is... (Complete abstract click electronic access below)
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Investigação do potencial genótóxico e antigenotóxico do extrato de Brassica oleracea in vivo /Gonçalves, Álvaro Luiz Martini. January 2012 (has links)
Orientador: Edson Luis Maistro / Banca: Mária Sérgio Mantovani / Banca: Wilma de Grava Kempinas / Resumo: Brassica oleracea é uma espécie botânica popularmente conhecida como "couve". É utilizada na alimentação e também na medicina popular, devido às suas ações antiulcerogênica e quimiopreventiva do câncer, entre outras. Este estudo teve como objetivo avaliar o potencial genotóxico e antigenotóxico do extrato de folhas de Brassica oleracea em células somáticas e germinativas de camundongos in vivo, usando o Ensaio Cometa e o teste do micronúcleo. Os animais (camundongos Swiss albinos machos) foram divididos em oito grupos experimentais (n=6). O grupo controle negativo recebeu água destilada e o controle positivo 80 mg/kg de doxorrubicina (DXR). Três diferentes doses do extrato foram testadas (500, 1000 e 2000 mg/kg) para a avaliação do potencial genotóxico. As mesmas doses do extrato foram utilizadas simultaneamente com injeção intraperitoneal de DXR (uma hora após o tratamento com o extrato via gavage), para a avaliação dos potenciais antigenotóxico e anticlastogênico/antianeugênico. As células analisadas pelo Ensaio Cometa foram leucócitos de sangue periférico coletados 4 e 24 horas após os tratamentos, e células do fígado, cérebro, medula óssea e testículos, coletadas 24 horas após os tratamentos. Para o Teste do Micronúcleo, foram analisadas células de medula óssea, coletadas 24 horas após os tratamentos. Os dados obtidos foram estatisticamente analisados utilizando-se ANOVA e teste de Tukey-Kramer. A ausência de genotoxicidade e aneugenicidade/clastogenicidade foi observada para as três doses do extrato. No entanto, as três doses testadas induziram um decréscimo significante de danos no DNA das células analisadas pelo Ensaio Cometa, assim como redução no número de eritrócitos policromáticos micronucleados analisados pelo Teste do Micronúcleo, em comparação ao grupo controle positivo ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Brassica oleraceae is a botanical specie popularly known as "kale". Is used in the feeding and also in folk medicine due to its anti-ulcerogenic and cancer chemopreventive activities, among others. The main objective of the present study was to evaluate the genotoxic and antigenotoxic potential of the Brassica oleraceae extract in different cells of mice in vivo, using the comet assay and micronucleus test. The animals (male Swiss mice) were divided in eight experimental groups (n = 6). The negative control group received distilled water and the positive control 80mg/kg of doxorubicin (DXR). Three different doses of the extract were tested (500, 1000 and 2000 mg/kg) to evaluate the genotoxic potential. The same extract doses followed by DXR injection (one hour after the treatment) were used to evaluate the antigenotoxic and anticlastogenic/antianeugenic potentials. The cells analyzed by comet assay were leukocytes from peripheral blood collected 4 and 24 hours after the treatments, and liver, brain, bone marrow and testicles cells collected 24 h after the treatments. Bone marrow cells collected 24 hours after the treatments were analyzed by micronucleus test. The data were statistically analyzed using ANOVA and Tukey-Kramer test. The absence of genotoxic and aneugenic/clastogenic effects was observed with the three tested doses of the extract. On the other hand, the three tested doses of the extract induced a significant decrease in the DNA damage in all cells analyzed by comet assay, and a reduction in the frequency of micronucleated polychromatic erythrocytes, in comparison with DXR positive control group. Under the experimental conditions employed in the present experiment, the results obtained showed that Brassica oleraceae extract is not genotoxic and presents a clear chemoprotection against DNA damage induced by doxorubicin / Mestre
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Efeitos e regulação da expressão do kit ligante (KL) durante a maturação in vitro do complexo cumulus-oócito bovino /Lima, Paula Fernanda de. January 2012 (has links)
Orientador: José Buratini Júnior / Banca: Ciro Morais Barros / Banca: Marcelo Fábio Gouveia Nogueira / Resumo: O desenvolvimento da competência oocitária ocorre de forma gradual durante a foliculogênese e é dependente da interação do oócito com as células do cumulus via fatores parácrinos. O KL é expresso pelas células do cumulus e estimula a maturação nuclear do oócito em roedores, mas suas funções no complexo cumulus-oócito (CCO) bovino não são conhecidas. Neste trabalho, avaliou-se o padrão de expressão do KL, os efeitos do KL sobre a progressão da meiose e a expansão do cumulus, bem como a regulação da expressão do KL por fatores secretados pelo oócito (FSOs; BMP15, FGF8, FGF10, FGF16 e FGF17) durante a maturação in vitro (MIV) de CCOs bovinos. Adicionalmente, os efeitos do KL sobre a expressão de BMP15, GDF9, FGF16 e c-KIT foi avaliada. As isoformas do KL (KL1 e KL2) apresentaram padrões de expressão semelhantes nas células do cumulus ao longo da MIV, com pico de expressão às 12 horas do cultivo. A adição de KL ao cultivo aumentou a porcentagem de oócitos em meiose II e diminuiu a de oócitos em meiose I ao final da MIV, mas não afetou a expansão do cumulus. O FGF8 aumentou a expressão dos RNAm do KL1 e do KL2, enquanto a BMP15 estimulou apenas a expressão do RNAm do KL1. Distintamente, a dose máxima do FGF10 diminuiu a expressão do KL2 às 22 horas do cultivo em estudo dose-resposta, embora o mesmo não tenha sido observado quando uma dose menor, porém efetiva em estimular a expansão do cumulus, foi testada ao longo da MIV (4, 12 e 22 horas). O tratamento com FGF10 e BMP15 associados aumentou a expressão do KL1 às 12 horas do cultivo em relação ao controle e aos fatores de crescimento sozinhos, sugerindo cooperação entre eles na regulação da expressão do KL. A adição de KL ao meio de cultivo não alterou a expressão dos FSOs. Em conjunto, os resultados deste estudo sugerem o... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The development of oocyte competence occurs gradually during folliculogenesis and is dependent on the interaction of the oocyte with cumulus cells via paracrine factors. The KL is expressed by cumulus cells and stimulates oocyte nuclear maturation in rodents, but its functions in cumulus-oocyte complex (COC) cattle are unknown. In this study, we evaluated the expression pattern of KL, the effects of KL on the progression of meiosis and cumulus expansion and regulation of KL expression by factors secreted by the oocyte (OSF; BMP15, FGF8, FGF10, FGF16 and FGF17) during in vitro maturation (IVM) of bovine COCs. Additionally, the effect of KL on the expression of BMP15, GDF9, FGF16 and c-KIT was evaluated. Isoforms of KL (KL1 and KL2) showed similar expression patterns in cumulus cells along the MIV, with higher expression at 12 hours of cultivation. The addition of KL increased the percentage of oocytes in meiosis II and decreased oocyte meiosis I in the end of IVM, but did not affect cumulus expansion. The FGF8 increased expression of KL1 and KL2 mRNA, while only BMP15 stimulated mRNA expression KL1. Distinctly, the maximum dose of FGF10 decreased expression of KL2 at 22 hours of cultivation in dose-response study, although the same was not observed when a lower dose, but effective to stimulate cumulus expansion was tested along MIV (4, 12 and 22 hours). Treatment with FGF10 and BMP15 associated with increased expression of KL1 at 12 hours of culture in relation to the control and growth factors alone, suggesting cooperation between them in the regulation of expression of the KL. The addition of KL to the culture medium did not alter the expression of the FSOs. Taken together, our results suggest the involvement of KL in controlling bovine oocyte nuclear maturation and expression of KL in bovine cumulus cells is... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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