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Dimetilaminoetanol(DMAE) na viabilidade de fibroblastos humanos cultivados / Dimethylaminoethanol(DMAE) in the viability of cultivated human fibroblasts

Giannoccaro, Fabiana Bocci [UNIFESP] January 2006 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2015-12-06T23:08:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006 / Introdução: O dimetilaminoetanol (DMAE) tem sido utilizado na prática clínica no combate a rugas e flacidez cervico-facial. Sua ação firmadora é explicada devido a sua molécula ser um precursor de acetilcolina, de forma que o DMAE alteraria a contração muscular. Entretanto não existem trabalhos experimentais que comprovem esta teoria. Pela falta de definição do real mecanismo de ação do DMAE, e não existindo referência na Literatura da sua ação sobre os fibroblastos, foi elaborado estudo para avaliar a ação direta sobre os fibroblastos humanos cultivados. Métodos: Fibroblastos humanos provenientes de fragmento de pele total desprezado de pacientes submetidos a procedimentos cirúrgicos estéticos ou reparadores realizados na Disciplina de Cirurgia Plástica da UNIFESP/EPM. Foi utilizada a técnica de explante, e na quarta passagem celular o meio de cultura foi suplementado com diferentes concentrações de DMAE e as células foram avaliadas quanto à proliferação, medidas do cálcio citosólico e ciclo celular. A análise estatística dos resultados foi realizada usando-se o teste de ANOVA seguido pelo teste de Newman-Keuls para múltiplas comparações. Resultados: A proliferação dos fibroblastos mostrou-se diminuída com o aumento das concentrações de DMAE. O tempo de tratamento com tripsina foi maior nos grupos tratados com DMAE de forma dose dependente. Houve aumento de cálcio citosólico na presença de DMAE de forma dose-dependente. Houve um aumento de apoptose nos grupos tratados com DMAE. Conclusão: O DMAE diminuiu a proliferação dos fibroblastos, e causou aumento do cálcio citosólico e alterou o ciclo celular causando um aumento da apoptose nos fibroblastos humanos cultivados. / Background: Dimethylaminoethanol (DMAE) has been used in medical practice to treat facial wrinkles and cervical flabbiness. Its tensor action is explained by its action as an acethylcoline precursor affecting muscular contraction. However, there are no experimental models proving this theory. Due to the lack of information about DMAE action mechanism and no data about DMAE action on fibroblasts in vitro this study was performed. Methods: Human fibroblasts from patients who undergone cosmetic or reparative surgery performed on Plastic Surgery Division from UNIFESP/EPM were cultured from discharged total skin fragment. Explant technique was used and fibroblasts from passage four were cultured with different concentrations of DMAE. The cells were evaluated in proliferation, cytosolic calcium, and cellular cycle. Statistical analysis was done using ANOVA and Newman-Keuls test for multiple comparisons. Results: Fibroblast proliferation diminished with increasing DMAE concentrations. The trypsin treatment in DMAE groups was longer than in control group in a dose dependent way. Increasing in cytosolic calcium was found in DMAE groups in a dose dependent manner. Apoptosis increased in DMAE treatment group. Conclusion: DMAE diminished fibroblast proliferation, increased cytosolic calcium leading to increasing apoptosis in cultured human fibroblasts. / BV UNIFESP: Teses e dissertações
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Silenciamento do canal de potássio Eag1 potencializa efeitos da temozolomida em células U-87 MG de glioblastoma multiforme

Sales, Thais Torquato 25 November 2015 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2015. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2016-05-31T21:08:28Z No. of bitstreams: 1 2015_ThaisTorquatoSales.pdf: 2906055 bytes, checksum: cffb10f33ad18864796f8568c7f00c30 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-05-31T21:08:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_ThaisTorquatoSales.pdf: 2906055 bytes, checksum: cffb10f33ad18864796f8568c7f00c30 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-31T21:08:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_ThaisTorquatoSales.pdf: 2906055 bytes, checksum: cffb10f33ad18864796f8568c7f00c30 (MD5) / Glioblastoma multiforme (GBM) é o tipo mais comum de tumor cerebral primário em seres humanos adultos, representando aproximadamente 55% dos casos. O processo tumoral desenvolve-se de maneira agressiva e as opções terapêuticas são limitadas. O protocolo de tratamento padrão inclui radioterapia em combinação com temozolomida (TMZ), combinado com excisão cirúrgica quando possível. Apesar de alguns avanços no tratamento de GBM, o tempo de sobrevida dos pacientes diagnosticados com esse tipo de glioma é de aproximadamente 14,5 meses. A interferência de RNA (RNAi) é um mecanismo de silenciamento de genes e está entre as abordagens promissoras para a terapia do câncer. Assim, utilizou-se a metodologia de RNAi para supressão do canal de potássio Ether à go-go 1 (Eag1) em células de glioblastoma da linhagem U-87 MG. Este alvo molecular tem papel relevante na tumorigênese de vários tipos de câncer, auxiliando na proliferação celular e metástases. O estudo realizado na presente dissertação examinou o papel de Eag1 na viabilidade das células de glioma tratadas com TMZ. Inicialmente, realizaram-se ensaios experimentais com concentrações de TMZ (125, 250 ou 500 µM) e pontos temporais (24h, 48h, ou 72h). A viabilidade celular do glioma foi determinada via ensaio de 3-(4,5)-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT). No ponto temporal de 72h e concentração de 250 µM, o fármaco TMZ diminuiu a viabilidade das células em aproximadamente 50%. Com base nesse resultado da curva dose-resposta, estabeleceu-se a concentração do quimioterápico para a execução dos ensaios seguintes. Testaram-se, também, os efeitos do bloqueador de canal de potássio astemizol (ATZ 2,5 µM, 5 µM e 10 µM) ou vetor de expressão de shRNA denominado pKv10.1-3 (0,2 μg) sobre a viabilidade do glioma nos tempos de 24, 48 e 72 horas. Este vetor expressa grampos curtos de RNA (shRNA) direcionados à sequência de RNAm de Eag1 5'-GTCCACTTGGTCCATGTCCAG-3'. Além disto, avaliou-se os efeitos causados por ATZ 5 µM ou por pKv10.1-3 (0,2μg) em combinação com TMZ 250 µM, no tempo de 72 horas. O tratamento com pKv10.1-3 potencializou, de maneira significativa, a redução na viabilidade celular causada por TMZ sobre células de glioma (77,2% versus 47,9%). Verificou-se, ainda, que a inibição de Eag1 por astemizol (5 µM) ou pKv10.1-3 aumenta a taxa de apoptose causada por TMZ, conforme ensaio de citometria de fluxo. pKv10.1-3 (0,2 µg) reduziu significativamente o conteúdo de RNAm de Eag1, para 0,57 vezes em relação ao valor observado no grupo controle negativo pScramble (0,2 µg), conforme resultado de RT-qPCR. Quanto à proteína Eag1, esta mostrou-se elevada nas células de glioblastoma humano da linhagem U-87 MG. Os tratamentos experimentais causaram redução do conteúdo desta proteína, detectada por imunocitoquímica. Portanto, os dados do presente estudo revelam que Eag1 desempenha papel na viabilidade das células de glioma, além disso, mostraram que a supressão desse canal potencializa a ação da TMZ em células U-87 MG de glioblastoma multiforme. / Glioblastoma multiforme (GBM) is the most common primary brain tumor in human adults, accounting for about 55% of cases. Tumorigenesis develops aggressively and the therapeutic alternatives remain limited. The standard treatment includes radiotherapy in association with chemotherapy with temozolomide (TMZ) and the surgical excision of tumor tissues. Despite some advances in GBM treatment, the survival time of patients diagnosed with GBM is nearly 14.5 months. RNA interference (RNAi) is a strategy for gene silencing considered a promising approach for cancer treatment. The present study used RNAi to suppress the Ether à go-go 1 (Eag1) potassium channel in U-87 MG glioblastoma cells. Eag1 is an oncological target which plays an important role in tumorigenesis of various cancers, improving cell growth and metastasis. The aim of this study was to examine the role of Eag1 in glioma cells treated with TMZ. First, we tested the effects of TMZ on glioma cell viability, examining drug concentrations (125, 250 and 500 µM) at three time points (24h, 48h and 72h). Cell viability was determined by the 3-(4,5)-dimethylthiazol-2-yl)-2,5- diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay. At 72h and concentration of 250 µM, TMZ decreased the cell viability in about 50%. Based on this dose-response curve, the drug concentration for the following tests was set up. We also evaluated the effects of astemizole (ATZ, an Eag1channel blocker) at 2.5 µM, 5 µM and 10 µM or a shRNA expression vector named pKv10.1-3 (0.2 µg). This vector expresses short-hairpin RNA (shRNA) targeting the Eag1 mRNA sequence 5'-GTCCACTTGGTCCATGTCCAG-3'. Cell viability was determined at 24, 48 and 72 hours. In addition, we evaluated the effects caused by ATZ 5 µM or by pKv10.1-3 (0.2 µg) in association with TMZ 250 µM, at 72 hours. The vector pKv10.1-3 increased the effect of TMZ on glioma cells (77.2% vs. 47.9%). Also, the Eag1 inhibition by atemizole (5 µM) or pKv10.1-3 increased the apoptosis rate caused by TMZ, as determined by flow cytometry. pKv10.1-3 (0.2 µg) significantly decrease Eag1 mRNA content to 0.57 times in comparison with the value found in pScramble (0,2 µg) control group, as determined by RT-qPCR. Indeed, GBM cells present a high expression of Eag1 protein. The experimental treatments reduced this protein content, as revealed by immunocytochemistry results. In conclusion, the results of this study reinforce that Eag1 plays a role in glioma cell viability. In addition, they show the channel suppression improves TMZ effects on U-87 MG GBM cells.
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Diferenciação in vitro de células tronco mesenquimais de placenta humana em fenótipo neural

Martini, Maristela Maria January 2008 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Neurociências / Made available in DSpace on 2012-10-24T02:43:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / As células tronco (CTs) são células indiferenciadas com habilidade de se auto-renovar infinitivamente, e que em condições apropriadas podem gerar diversos tipos celulares maduros. As células da placenta possuem características morfológicas, imunofenotípicas e funcionais similares as células tronco mesenquimais (CTMs) da medula óssea, porém é improvável que estas células possuam o mesmo potencial de diferenciação e proliferação de CTs embrionárias. Estas células são ainda de origem fetal e podem ser superiores a CTs somáticas em muitos aspectos. Juntamente com o seu fácil acesso, ausência de problemas éticos e abundância celular, as CTMs da placenta podem ser uma alternativa atrativa de progenitores de CTs para pesquisa básica e aplicações clínicas. É importante o estudo do microambiente, pois este e as CTs regulam-se de forma dinâmica e também, torna-se relevante a caracterização das vias de sinalização envolvidas nos processo de diferenciação de CTMs em fenótipo neural, onde são escassos os estudos. Nesta dissertação investigamos o potencial de diferenciação das CTMs de placenta humana, utilizando modelo de co-cultura, para fenótipos neurais. Para alcançarmos nossos objetivos, foram realizadas culturas de CTMs de placenta humana, bem como cultura de células astrocitárias de ratos neonatos. Foram realizados experimentos de co-cultura para verificação da importância do microambiente neural na diferenciação de CTMs, bem como a análise da importância da matriz extracelular (MEC) e dos fatores de crescimento liberados pelas células astrocitárias. Também investigamos as vias de sinalização envolvidas no processo de diferenciação de CTMs para fenótipo neural. As análises dos experimentos se deram por RT-PCR e imunofluorescência, utilizando marcadores de células precursoras neurais, células gliais e neurônios. Nossos resultados demonstram que as CTMs quando em microambiente favorável, têm a potencialidade para se diferenciar em fenótipos neurais, estes resultados são vistos quando as CTMs são co-cultivadas com células astrocitárias de ratos neonatos, bem como quando apenas tratadas com o meio condicionado produzido por estes, demonstrando a importância dos fatores de crescimento liberados pelas células astrocitárias na diferenciação neural de CTMs. Além de apresentarem expressão gênica, estas células possuem a expressão protéica de Nestina, GFAP e B-Tubulina III e também as alterações morfológicas necessárias na diferenciação. Sugerem estar envolvidas na diferenciação para células gliais e precursores neurais as vias MAPK, PI3K e JNK II, porém ambas não afetam a diferenciação para o fenótipo neuronal. The stem cells (SCs) are undifferentiated cells with ability to self-renew, and that under appropriate conditions can generate various cell types ripe. The cells of the placenta have morphological characteristics, and functional immunophenotypes similar mesenchymal stem cells (MSCs) of the bone marrow, but it is unlikely that these cells have the same potential for proliferation and differentiation of embryonic CTs. These cells are of fetal origin and can be greater than somatic SCs in many respects. Along with its easy access, lack of ethical problems in cellular abundance, the MSCs the placenta may be an attractive alternative for parents of SCs for basic research and clinical applications. It is important to the study of the microenvironment as this and the governing SCs are dynamic way and also, it is relevant to the characterization of signalling pathways involved in the process of differentiation of neural MSCs in phenotype, where the studies are scarce. In this dissertation investigated the potential of varying MSCs from human placenta, using model of co-culture, for neural phenotypes. To achieve our goals, cultures were performed for MSCs from human placenta and culture of astrocytes cells of newborn rats. Experiments were conducted in co-culture for verification of the importance of microenvironment in neural differentiation of MSCs, and the analysis of the importance of the extracellular matrix (MEC) and growth factors released by astrocytes cells. We also investigate ways of signalling involved in the process of differentiation of neural MSCs to phenotype. The analysis of the experiments is given by RT-PCR and immunofluorescence using markers of neural precursor cells, gliais cells and neurons. Our results show that the microenvironment favorable MSCs when they have the potential to differentiate into neural phenotypes, these results are seen when the MSCs are co-cultured with cells astrocytes of newborn rats, and only when treated with the means produced by conditioning these, demonstrating the importance of growth factors released by astrocytes cells in neural differentiation of MSCs. Besides submit gene expression, these cells have the protein expression of Nestin, GFAP and B-Tubulin III and the changes needed in morphological differentiation. Suggested to be involved in cell differentiation gliais neural precursors and the MAPK pathways, PI3K and JNK II, but both do not affect the differentiation for the neuronal phenotype.
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Caracterização de células-tronco de polpa dental humana obtida de dentes decíduos e permanentes

Souza, Leliane Macedo de January 2008 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2008. / Submitted by Danyelle Mayara Silva (danielemaiara@gmail.com) on 2009-09-14T20:28:03Z No. of bitstreams: 1 2008_LelianeMacedodeSouza.pdf: 18308931 bytes, checksum: 42ae9bc1b4c453b7e11bc6e306cfb1b7 (MD5) / Approved for entry into archive by Luis Felipe Souza Silva(luis@bce.unb.br) on 2009-09-15T19:03:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_LelianeMacedodeSouza.pdf: 18308931 bytes, checksum: 42ae9bc1b4c453b7e11bc6e306cfb1b7 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-09-15T19:03:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_LelianeMacedodeSouza.pdf: 18308931 bytes, checksum: 42ae9bc1b4c453b7e11bc6e306cfb1b7 (MD5) Previous issue date: 2008 / Células-tronco adultas representam uma nova abordagem em terapia regenerativa. Recentes pesquisas revelaram que o tecido pulpar de dentes humanos permanentes e decíduos contém células-tronco com grande potencial proliferativo, apresentam capacidade de auto-renovação e de diferenciação em diversas linhagens celulares in vitro. O objetivo deste projeto foi comparar o perfil morfológico e proliferativo dos tipos celulares cultivados e caracterizar as células-tronco pulpares humanas de dentes permanentes (CPdp) e decíduos (CPdd) em relação a dois métodos de isolamento. Terceiros molares impactados e dentes decíduos recém-esfoliados foram coletados, limpos e seccionados no limite da junção cemento-esmalte. Os tecidos pulpares foram cuidadosamente removidos e cultivados, utilizando os métodos de isolamento por digestão enzimática com solução de 3mg/mL de colagenase tipo I e 4mg/mL de dispase e pela cultura direta do fragmento do tecido pulpar. Realizamos análises morfológicas e do potencial proliferativo. Para a caracterização do perfil imunofenótipo foram utilizados anticorpos monoclonais anti: CD117, CD34, CD45 RA e a avaliação em citometria de fluxo. Nossos resultados indicaram grande potencial proliferativo in vitro de CPdp e CPdd, principalmente para CPdd. Os tipos celulares apresentaram imunofenótipo compatível para células-tronco, sendo expressivamente positivos para CD117, independente do método de isolamento. Houve diferença na expressão do CD34 entre os grupos celulares. A análise fenotípica final demonstrou as CPdp como CD117+, CD34- e CD45-, e as CPdd como CD117+, CD34+ e CD45-. _____________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Adult Stem cells represents a new approach in regenerative therapies. Recents researches have shown that postnatal and deciduous dental pulp contains stem cells with high proliferation capacity, ability to self-renew and to differentiate into multiple cell lineages. The aim of this study was to compare the morphological and proliferative profiles of the cells types in dental pulp of permanents and deciduous teeth, and to characterize the progeny by two isolation methods in vitro. Normal human impacted third molars and exfoliated deciduous teeth were collected, cleaned and cut around the cementum-enamel junction. The pulp tissue was gently separated from de crown and root. Pulp cell cultures were established via two approaches by enzyme digestion in a solution of 3mg/mL collagenase type I and 4mg/mL dispase and by culture of the explants into a tissue culture dishes. We performed morphological, proliferative analyses and immunophenotype studies to characterize the progeny using a cytometer for monoclonal antibodies: CD117, CD34, CD45 RA. Our findings indicated high proliferative rates for permanents and deciduous teeth, mainly for deciduous teeth. The cells population showed phenotypes compatibles for stem cells, with remarkable positive expression of the marker CD117, irrespective of the isolation method. We identified significant difference for the expression of CD34 among the cells groups. The immunophenotype profiles were CD117+, CD34- and CD45- for cells from permanents teeth, and CD117+, CD34+ and CD45- for cells from deciduous teeth.
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Ação extra nuclear do ácido retinóico via espécies reativas do oxigênio em células de sertoli

Frota Junior, Mario Luiz Conte da January 2005 (has links)
Durante a respiração celular, cerca de 1 a 3% do oxigênio metabolizado produz espécies reativas de oxigênio (ERO). Entretanto, para defender o organismo do efeito dessas espécies, existem vários sistemas antioxidantes, dependendo do organismo, da célula ou do tecido em questão. A Vitamina A (retinol) e seu derivados exercem uma infinidade de efeitos em diversos processos biológicos, destacando-se a embriogênese, visão, regulação de processos inflamatórios, crescimento, proliferação e diferenciação de células normais e neoplásicas. Embora o potencial antioxidante da vitamina A e carotenóides tenha sido descrito primeiramente, sabe-se hoje que, sob diferentes condições, essas moléculas podem se comportar de uma maneira pró-oxidante. Por isso, atualmente são melhores descritas como moléculas redox ativas. Apesar dos nossos trabalhos anteriores demonstrarem um efeito pró-oxidante do retinol em culturas de células de Sertoli, o mecanismo exato pelo qual esse efeito é verificado permanece a ser elucidado. Uma vez que o ácido retinóico (AR) é o metabólito mais ativo do retinol, foram verificados os efeitos da suplementação de AR em culturas de células de Sertoli, com o objetivo de verificar se os efeitos anteriormente observados com o retinol devem-se à metabolização do mesmo a AR. Nossos resultados mostraram que o AR em baixas doses não aumentou os níveis de TBARS. Além disso, na concentração de 1 nM o AR foi capaz de diminuir os níveis de TBARS. Entretanto, quando as células foram tratadas com altas doses de AR foi observado um aumento destes níveis, além de uma diminuição da viabilidade celular. Uma vez que altas doses de AR induziram um aumento na lipoperoxidação e diminuíram a viabilidade celular, nós decidimos investigar somente os efeitos de doses fisiológicas (nM) de AR. Foram dosadas as atividades da SOD, CAT e GPx em células de Sertoli tratadas com AR. A atividade da SOD encontrou-se aumentada em todas as doses testadas. A atividade da GPx mostrou-se aumentada nas células tratadas com 0,1 nM, 1 nM e 10 nM e a atividade da CAT aumentou somente com 1 nM de AR. Esses resultados sugerem que o AR em doses fisiológicas aumenta a atividade das enzimas antioxidantes, protegendo, assim, as células do estresse oxidativo, como pode ser observado nos índices de lipoperoxidação e viabilidade celular. Todavia, o mecanismo pelo qual o AR induz a geração de ERO é desconhecido. Então nós decidimos verificar a ação anti ou pró-oxidante in vitro do AR. Na concentração suprafisiológica de 10 M, AR foi capaz de degradar a 2-deoxiribose, um substrato específico do radical hidroxil, sugerindo que a auto-oxidação do mesmo é capaz de gerar radicais livres. Além disso, o potencial antioxidante total do AR foi avaliado: altas concentrações de AR (1–10 M) aumentaram a geração de radicais livres. Esses resultados demonstram, pela primeira vez, que o ácido retinóico é capaz de gerar radicais livres e sugerem, pelo menos em parte, que alguns efeitos induzidos por AR podem ser mediados por ERO geradas a partir da degradação espontânea do ácido retinóico. Classicamente, os efeitos biológicos dos retinóides estão relacionados à sua conversão em ácido retinóico através da modulação da expressão de genes. Entretanto, recentes trabalhos têm demonstrado que os retinóides possuem ações biológicas que não envolvem sua interação com receptores nucleares. Assim, alguns autores sugerem que o mecanismo de regulação dos retinóides também seja por modificação do estado redox celular. As concentrações de AR utilizadas nesse trabalho variaram de faixa do fisiológico até a do farmacológico. Sabe-se que as células de Sertoli sintetizam AR a partir do retinol circulante; isso pode ser uma das explicações dos efeitos observados em células de Sertoli tratadas com altas doses de retinol, uma vez que a metabolização de grandes concentrações de retinol poderia acarretar uma grande formação de ácido retinóico.
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Estudo das rotas de síntese dos gangliosídios nos dois fenótipos da célula estrelada hepática

Aguirres, Aline Bohnenberger de January 2005 (has links)
Glicoesfingolipídios (GSL) são constituintes da membrana plasmática e possuem bases de cadeia longa (bases esfingóides) como componente estrutural lipídico. Açúcares podem ser adicionados à ceramida sintetizada de novo (rota 1), sintetizada pela reciclagem da esfingosina (rota 2) e em GSL reciclados através do Golgi (rota 3). A serina palmitoiltransferase (SPT) é a enzima marca-passo e catalisa o primeiro passo na biossíntese de novo destes componentes. A linhagem celular GRX, representativa das células estreladas hepáticas, expressa o fenótipo miofibroblástico e pode ser induzida in vitro a adquirir o fenótipo lipocítico. Ambos fenótipos possuem gangliosídios da série-a (GM2, GM1 e GD1a) bem como o seu precursor GM3, que são expressos como doublets em HPTLC (bandas 1 e 2, respectivamente). Para o estudo da biossíntese dos GSL neste modelo biológico, foram determinadas as condições ideais para a atividade da SPT, e foi avaliada sua atividade na fração microssomal nos dois fenótipos. Também foi determinada a contribuição de cada rota de biossíntese para as duplas bandas. As células foram pré-incubadas com 5mM de -cloroalanina (inibidor da SPT) ou com 25M de fumonisina B1 (inibidor da ceramida sintase) e então, [U-14C]galactose foi adicionada no meio de cultura na presença contínua dos inibidores. Culturas controles (sem inibidores) foram realizadas simultaneamente. Os lipídios foram extraídos, os gangliosídios purificados em colunas Sep-Pack C18 e analisados por HPTLC, a qual foi revelada por auto-radiografia e após, submetida à análise densitométrica. Em ambos fenótipos, a síntese de novo, a reciclagem da esfingosina e a reciclagem pelo Golgi contribuem com a biossíntese dos GSL No miofibroblasto, os doublets dos gangliosídios complexos (GD1a e GM1) são, principalmente, sintetizados pelas rotas de reciclagem; enquanto as bandas do GM2 e do GM3 têm uma participação importante da síntese de novo. No lipócito, as rotas de reciclagem são as mais importantes. Contudo, no lipócito, ambas bandas do GM2 e a banda 2 do GM3 apresentam considerável síntese pela rota de novo. Esta rota tem uma contribuição menor no lipócito do que no miofibroblasto, o que está de acordo com os níveis da atividade da SPT detectados nestes fenótipos. Isto sugere que os fenótipos miofibroblasto e lipócito utilizam pools de ceramida distintos para a síntese de seus GSL e que apresentam importantes diferenças entre as rotas biossintéticas, o que pode se refletir no seu comportamento celular.
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Análise de um possível papel de biocondutor no citoesqueleto de células de sertoli tratadas com retinol (vitamina A)

Oliveira, Ramatis Birnfeld de January 2006 (has links)
Trabalhos recentes na literatura demonstraram que proteínas do citoesqueleto, mais especificamente os microfilamentos de actina, estão correlacionadas com a promoção e manutenção do estresse oxidativo, bem como modulação de processos mitocondriais. Trabalhos do nosso grupo caracterizaram que o tratamento com retinol (vitamina A) em células de Sertoli cultivadas era capaz de induzir a produção de espécies reativas de oxigênio (ERO), desbalanço na atividade de enzimas antioxidantes, com conseqüente promoção de estresse oxidativo. Radicais livres produzidos pelo tratamento com retinol, também foram capazes de induzir uma transformação pré-neoplásica, modulação de eventos recombinatórios, modulação de enzimas envolvidas na divisão celular como ornitina decarboxilase (ODC), progressão de ciclo celular e apoptose. O tratamento com retinol também foi capaz de, por uma via radical livre dependente, induzir a divisão de células de Sertoli terminalmente diferenciadas e não-proliferativas, com a conseqüente formação de focos proliferativos. Uma vez que o citoesqueleto participa de muitos dos processos relatados (proliferação, transformação e apoptose), e trabalhos recentes na literatura correlacionam estresse oxidativo com proteínas do citoesqueleto, nós decidimos avaliar a influencia do citoesqueleto e suas proteínas na produção e manutenção do estresse oxidativo gerado pelo tratamento com retinol. O primeiro capítulo dessa dissertação caracteriza uma modulação radical livre dependente do citoesqueleto das células de Sertoli tratadas com retinol, onde uma proteção/adaptação do citoesqueleto foi observada frente ao ambiente pró oxidativo gerado pelo retinol. Neste primeiro capítulo nós também sugerimos que a adaptação observada poderia ser relacionada com um possível papel de condução de elétrons pelos filamentos de actina. O segundo capítulo dessa dissertação demonstra uma dependência da correta organização dos filamentos de actina para a produção/manutenção do estresse oxidativo gerado pelo tratamento com retinol. Juntamente, o segundo capítulo apresenta uma explicação para a teoria de condução de elétrons pelos filamentos de actina, onde é descrito como esse fenômeno poderia ocorrer. Os resultados apresentados nessa dissertação sugerem que os microfilamentos de actina são essenciais para a produção/manutenção do estresse oxidativo gerado pelo tratamento com retinol, e que essa dependência pode ser explicada por uma nova função fisiológica de biocondutor de elétrons. / Recent works presented in the literature have shown that cytoskeleton proteins, specifically actin microfilaments, are correlated with promotion and maintenance of oxidative stress, and mitocondrial functions modulations. Works of our research group have characterized that retinol treatment in cultived Sertoli cells was able to induce reactive oxygen species (ROS) production, antioxidant enzymes activity imbalance, resulting in oxidative stress production. Free radicals produced by retinol treatment, were also able to induce pre neoplasic transformation, modulation of recombinatory events, modulation of enzymes involved in cell division such as ornitina decarboxilase (ODC), cell cycle progression and apoptosis. Retinol treatment was also able by a free radical-dependent way, induce the division of terminate differentiated and non proliferative Sertoli cells, resulting in proliferative focus formation. Once cytoskeleton participates of many of the related process (proliferation, transformation and apoptosis), and recent works presented in the literature correlated oxidative stress with cytoskeleton proteins, we decided evaluated the cytoskeleton influence in the production and maintenance of oxidative stress generated by retinol treatment. The first chapter presented in this manuscript characterizes a cytoskeleton modulation free radical-dependent in the Sertoli cells treated with retinol, where a cytoskeleton adaptation/protection was observed in response to a pro oxidative environment produced by retinol. In this first chapter we also suggested that the adaptation observed could be related with a possible function of electrons conductions through actin microfilaments. The second chapter of this manuscript shows an actin microfilaments dependence to production/maintenance of oxidative stress generated by retinol treatment. Together, the second chapter shows an explanation of the electron conduction theory through actin microfilaments, where a description of the electron conduction process is presented. The results presented in this manuscript suggest that actin microfilaments are essential to production/maintenance of oxidative stress generated by retinol treatment, and that this dependence could be explained by a new physiologic function of electron bioconductor.
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Caracterização das células natural killer no processo de reconstituição imune precoce pós-transplante de células-tronco hematopoéticas e sua influência na pega e no desenvolvimento de doença do enxerto contra o hospedeiro (DECH)

Astigarraga, Claudia Caceres January 2006 (has links)
Resumo não disponível
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Prevalência do vírus linfotrófico de células T humanas tipo 1 (HTLV-1) nos pacientes em hemodiálise de manutenção em Salvador

Santos, Rilma Ferreira de Souza 18 September 2013 (has links)
Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-09-17T19:08:10Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Rilma Ferreira de Souza Santos.pdf: 2519703 bytes, checksum: 9b3e67fd2162d148a0e9d2e3c41a3675 (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barroso(pbarroso@ufba.br) on 2013-09-18T17:02:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Rilma Ferreira de Souza Santos.pdf: 2519703 bytes, checksum: 9b3e67fd2162d148a0e9d2e3c41a3675 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-18T17:02:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Rilma Ferreira de Souza Santos.pdf: 2519703 bytes, checksum: 9b3e67fd2162d148a0e9d2e3c41a3675 (MD5) / Auxílio Financeiro à Pesquisa para apoio a projeto de pesquisa científica e/ou tecnológica – Processo 480292/2009-4; Bolsa de Produtividade em Pesquisa do coordenador do Estudo PROHEMO (CNPq – Processo 309468/2009-4); Bolsas de iniciação científica do PIBIC concedidas ao coordenador do Estudo PROHEMO – doze bolsas PIBIC – CNPq de 2005 a 2011. / Introdução: A prevalência da infecção pelo HTLV-1 varia de acordo com a região considerada. No Brasil, Salvador tem uma das maiores prevalências do vírus, variando de 1,35% a 1,80% de acordo com os diversos estudos. Em um estudo populacional realizado na cidade, encontrou-se uma prevalência de 1,70% (IC95%: 1,1 a 2,5%). Sabe-se pouco sobre a prevalência desta infecção na população dialítica, o que justifica a realização deste estudo. Objetivo: Determinar a prevalência de infecção por HTLV-1 em indivíduos em hemodiálise na cidade de Salvador, avaliar o impacto desta infecção sobre a anemia da doença renal crônica (DRC) e a frequência de co-infecção com outros vírus (vírus hepatotróficos). Métodos: Corte transversal dentro de uma coorte prospectiva. Entraram no estudo todos os participantes do PROHEMO (Estudo Prospectivo do Prognóstico de Pacientes Tratados por Hemodiálise) e que se encontravam ativos no estudo no período da coleta do sangue para a pesquisa sorológica. A sorologia para HTLV-1 foi feita pelo método ELISA e os casos positivos foram confirmados pelo método Western Blot. Utilizou-se o teste t de student (distribuição normal) ou U de Mann Witney (distribuição não normal) para comparar variáveis contínuas e teste do X2 ou teste exato de Fisher para variáveis categóricas. Resultados: Foram avaliados 695 indivíduos com média de idade de 48,7 anos, sendo 62% do sexo masculino. Identificamos 15 casos de HTLV-1, correspondendo a uma prevalência de 2,2% (IC95% 1,11 a 3,29). Dentre os casos positivos para HTLV-1, um deles (6,7%) era portador do vírus C da hepatite (HCV) e um (6,7%) portador do vírus B da hepatite (HBV). Os indivíduos soropositivos se encontravam há menos tempo em diálise e apresentavam níveis séricos menores de creatinina e paratormônio (PTH) que os indivíduos soronegativos; não houve diferença estatisticamente significante nos parâmetros hematimétricos entre os dois grupos. Conclusão: A prevalência de infecção pelo HTLV-1 na população dialítica pouco diferiu da encontrada na população geral de Salvador, sem impacto sobre a anemia da DRC. A coinfecção com os vírus B e C não foi comum. Na análise univariada, o tempo em diálise, a creatinina e o PTH foram significativamente mais baixos no grupo soropositivo. Estes achados, porém, não foram confirmados na análise multivariada. Nesta última análise, observou-se também que a classe social e o estado civil se associaram de forma independente com a sorologia positiva para o HTLV-1. / Salvador
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Desenvolvimento de processos para a produção de probióticos com Lactobacillus delbrueckii UFV H2b20 / Development of processes for the production of probióticos with Lactobacillus delbrueckii UFV H2b20

Leite, Mauricio de Oliveira 21 February 2005 (has links)
Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-06-27T16:38:17Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1862693 bytes, checksum: 55859873780bd6411394ca24d7cc0f14 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-27T16:38:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1862693 bytes, checksum: 55859873780bd6411394ca24d7cc0f14 (MD5) Previous issue date: 2005-02-21 / O objetivo deste trabalho foi definir as rotas tecnológicas para o desenvolvimento de processos de produção de probióticos contendo células de Lactobacillus delbrueckii UFV H2b20, bem como o de analisar a viabilidade técnica dos processos identificados, considerando a otimização do conjunto das etapas de cada processo. A produção de concentrado de células de L. delbrueckii UFV H2b20, a ser usado em todos os produtos, foi estabelecida em soro de queijo Minas Frescal esterilizado por calor. As condições ótimas para a esterilização foram determinadas. O rendimento em células foi da ordem de 10 9 UFC/mL. Os probióticos produzidos foram leite fermentado com L. delbrueckii UFV H2b20, leite em pó e sorvete contendo células viáveis dessa bactéria; foram produzidos também leite UHT, leite pasteurizado e leite em pó contendo células inativadas pelo calor. O leite fermentado apresentou valores de pH entre 4,0 a 4,5 e aproximadamente 10 8 UFC/g, e, estocado a 5oC, manteve-se nestas condições por até 30 dias; após 45 dias, a contagem foi de 10 7 UFC/g, valor ainda em conformidade com o estabelecido pela Resolução 47/97 de GMC para probióticos. O sorvete apresentou contagem na ordem de 10 8 UFC/g até 45 dias a -20oC. Após 60 dias nessa temperatura, houve redução para 10 7 UFC/g, contagem estável até 90 dias. O leite em pó probiótico foi produzido com células pré-tratadas para melhor sobrevivência ao processo em spray dryer, rendendo 10 8 UFC/g de L. delbrueckii UFV H2b20. Este número reduziu- se 10 7 UFC/g em 90 dias de estocagem a -20oC e a 10 6 e 10 5 à temperatura ambiente após 60 e 90 dias, respectivamente. A adição de células inativadas no leite pasteurizado não causou alterações no pH e na acidez do produto. No leite contendo células inativadas, houve desenvolvimento de proteólise e a conseqüente coagulação das proteínas após 30 dias de estocagem do produto, tornando seu processo inviável. As rotas tecnológicas definidas, o estudo de viabilidade técnica e a análise dos processos levaram a conclusões que recomendam a submissão de pedido de patente em função de três pontos demonstrados como inovações em processos. / The objective of this work was to define the technological routes for development of processes of production of probiotics which have cells of Lactobacillus delbrueckii UFV H2b20, as well as to analyze the viability technique of the identified processes, considering the optimization set of stages of each process. The production of concentrated cells of L. delbrueckii UFV H2b20, to be used in all the products, was established in cheese whey Minas Frescal sterilized by heat. The excellent conditions for the sterilization had been determined. The income of cells was in order of 10 9 UFC/mL. The produced probiotics had been fermented milk with L. delbrueckii UFV H2b20, powdered milk and ice cream having viable cells of this bacterium. There have also been produced UHT milk, pasteurized milk and powdered milk with inactivated cells by heat. Fermented milk presented values of pH between 4,0 to 4,5 and approximately 10 8 UFC/g, and, stored at 5oC, was remained in these conditions for up to 30 days; after 45 days, the counting was of 10 7 UFC/g, value still in compliance with the established Resolution 47/97 of GMC for probiotics. The ice cream presented counting in order of 10 8 UFC/g up to 45 days at -20oC. After 60 days in this temperature, it had been reduced to 10 7 UFC/g, steady counting up to 90 days. The probiotic powdered Milk was produced with cells pre-treated for better survival to the process in spray dryer, generating 10 8 UFC/g de L. delbrueckii UFV H2b20. This number was reduced to 10 7 UFC/g in 90 days of storage at -20oC and 10 6 and 10 5 at environment temperature after 60 and 90 days, respectively. The addition of inactivated cells in pasteurized milk did not cause modifications in pH and acidity of the product. Proteolyse have developed in milk with inactivated cells and a consequent coagulation of proteins after 30 days of storage of the product, becoming this process impracticable. The defined technological routes, the viability study techniques and the process analysis had taken the conclusions which advise a patent order in three points functions showed as innovations in processes. / Dissertação antiga

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