Orientador: João Tadeu Ribeiro Paes / Banca: Edislaine Barreiros de Souza / Banca: Márcia Zilioli Bellini / Resumo: As pesquisas com células-tronco têm avançado expressivamente e ocupam um papel de destaque no contexto do novo ramo terapêutico que se convencionou denominar de medicina regenerativa. A abundância e facilidade de obtenção do tecido muscular têm permitido a ampliação dos estudos acerca de seu potencial como fonte de células-tronco mesenquimais. Neste sentido, diferentes metodologias têm sido propostas para a obtenção de células-tronco mesenquimais oriundas do tecido muscular (CTDM), objetivando cultivo e aplicação clínica em medicina humana e veterinária. Um aspecto importante a ser considerado nos diversos protocolos de isolamento de células-tronco mesenquimais refere-se ao emprego rotineiro da colagenase de origem bacteriana (Clostridium histolyticum). O emprego de reagentes xenobióticos, como a colagenase, rotineiramente empregados, obedecem às recomendações da Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA - Brasil), que preconiza a não utilização desses produtos no cultivo de células destinadas à terapia celular em pacientes humanos, uma vez que podem conter agentes infecciosos e contaminantes capazes de desencadear severas reações imunológicas. Neste contexto, objetivou-se, neste estudo, a proposição de novas metodologias a fim de substituir o emprego de xenobióticos no processo de obtenção CTDM. Para tanto, foram comparados os métodos de digestão enzimática (colagenase), dissociação mecânica e explante, em diferentes meios de cultura. O conjunto de resultados mostra que as técnicas de dissociação mecânica e explante são metodologias... / Abstract: The researches with stem cells have advanced significantly and take a prominent role in the context of the new treatment branch that has been conventionally called of regenerative medicine. The abundance and ease of obtaining muscle tissue have allowed the expansion of studies on its potential as a source of mesenchymal stem cells. In this sense, different methodologies have been proposed for obtaining mesenchymal stem cells derived of muscle tissue (SCDM), aiming cultivation and clinical application in human and veterinary medicine. An important aspect to be considered in the various protocols of isolation of mesenchymal stem cells refers to the routine use of bacterial collagenase (Clostridium histolyticum). The use of xenobiotic reagents, such as collagenase, contrasts with the recommendations of the National Health Surveillance Agency (ANVISA - Brazil), which recommends the avoidance of the use of these products in the cultivation of cells destined for cell therapy in human patients, since which may contain infectious agents and contaminants that are capable of triggering severe immunological reactions. In this context, we aimed in this study to propose new methods to replace the use of xenobiotics in the process of obtaining SCDM. For this end, the methods of enzymatic digestion (collagenase), mechanical dissociation and explant were compared in different culture media. The set of results shows that the techniques of mechanical dissociation and explant are viable methodologies for replacement of collagenase procedures for obtaining SCDM. These new methodological... / Mestre

Orientador: Ana Liz Garcia Alves / Coorientador: Fernanda da Cruz Landim e Alvarenga / Banca: Anna Paula Balesdent Barreira / Banca: Brunna Patricia Almeida da Fonseca / Banca: Rogério Martins Amorim / Banca: Carlos Alberto Hussni / Resumo: Lesões tendíneas, especialmente do tendão flexor digital superficial dos membros torácicos, são importantes enfermidades que acometem a espécie equina, e apresentam alto índice de recidivas e afastamento da atividade atlética. Os avanços médicos e pesquisas relacionadas têm mostrado crescente interesse na utilização da terapia celular em tratamentos dessas lesões que apresentam uma cicatrização lenta ou ineficaz. Existem dúvidas quanto à persistência e comportamento das células tronco mesenquimais (CTM) implantadas no local da lesão e de sua migração a outros locais inflamados. Sendo assim, este estudo teve como objetivo identificar CTM marcadas com nanocristais antes e após o implante em lesões experimentais do tendão flexor digital superficial (TFDS) de eqüinos, observando a possibilidade de migração das CTM para outro foco de lesão realizado no membro contralateral do animal. Para isso, foram utilizados cinco equinos, submetidos à indução de lesões no TFDS em ambos os membros torácicos e, após sete dias, foram implantadas as CTM autólogas marcadas com nanocristais Qtracker 655 em um dos membros do animal. Sete dias após o implante, foram realizadas biópsias dos tendões, congelados em nitrogênio, sendo posteriormente realizados cortes histológicos para visualização em microscópio de fluorescência. Paralelamente, células marcadas com nanocristal foram mantidas em cultivo por 24 horas e, após este período, avaliou-se a sua viabilidade. Nas lesões que receberam células marcadas, foram visualizados sinais fluorescentes nas amostras, enquanto estes eram ausentes nas lesões dos membros contralaterais. As CTM marcadas e injetadas no tecido tendíneo mantiveram sua fluorescência sete dias após o implante in vivo, não sendo observado migração para o membro contralateral. As células mantiveram sua viabilidade após 24 horas de incubação com o marcador Qtracker / Abstract: Tendon lesions, especially of the superficial digital flexor tendon (SDFT) on forelimb, are important injuries in equine, because have high reinjury incidence and can cause retirement of athletic activities. Medical researches have shown growing interest on using stem cell therapy in the treatment of lesion with slow or ineffective repair. There are doubts regarding the persistency of the mesenchymal stem cells (MSC) implanted on the lesion site and of its migration to other injury sites. This study aims to identify marked MSC with nanoparticles quantum dots (QD) before and after the implant in equine induced tendinitis and to verify if there is a migration to another injury site on the contralateral. Five equines have a SDFT tendinitis induced on both forelimb and, after seven days, have seeded autologous MSC, marked with quantum dots Qtracker 655 in one of the limbs. Seven days after the implant, biopsies of the tendons were conducted, in which histological cuts were made for visualization in fluorescence microscope. The viability of the cells marked with nanoparticles and kept in cultivation was evaluated after 24 hours of incubation. Fluorescent signs were visualized on samples of the lesions that received marked cells, while they were absent on the lesions of the contralaterals. The marked MSCs kept their fluorescent emission, making it possible to identify them after seven days of in vivo implant, not occurring migration to the opposite limb. The cells maintained their viability in cultivation after 24 hours of incubation with the Qtracker marker / Doutor

Orientador: Fausto Viterbo / Banca: Antonio de Castro Rodrigues / Banca: Jesus Carlos Andreo / Banca: Valéria Paula Sassoli Fazan / Banca: Jayme Adriano Farina Junior / Resumo: As lesões de nervos periféricos representam um grande desafio para a medicina. Inúmeras técnicas visam solucionar a regeneração do nervo periférico. Os protocolos de recuperação funcional destes nervos são diversos e os resultados nem sempre apresentam soluções que promovam a regeneração da via motora e sesitiva. Com o advento da engenharia tecidual, a partir da diferenciação de células-tronco, surgiu uma nova alternativa terapêutica para a regeneração de nervos. O objetivo deste trabalho é estudar a regeneração de nervo mediante tubulização por enxerto de veia autóloga e verificar se o uso da combinação de células-tronco mesenquimais de tecido adiposo (CTM-TA) e plasma rico em plaquetas (PRP) na tubulização do nervo fibular comum altera a morfologia e fisiologia deste nervo e de músculos inervados por ele. Os animais foram divididos em seis grupos, sendo três controles e três experimentais. O G1 (n=10) representou o controle inicial. Os grupos G2, G3 e G4 (n=20) representaram os Grupos Experimentais e receberam, após ressecção do segmento nervoso, enxerto de veia jugular externa de 20 mm tubulizando os dois cotos do nervo, sendo que G2 não recebeu preenchimento, G3 foi preenchido com PRP, G4 foi preenchido com PRP e células tronco, G5 (n=10) representou o controle final e o G6 (n=20) representou o controle de desnervação. Foram obtidas células-tronco mesenquimais de tecido adiposo (CTM-TA) do mesmo animal, com caracterização fenotípica, utilizando CD90 e CD44 identificando a expressão média de 86,5%. As CTM-TA foram expandidas em cultura e aplicadas na concentração de 5x106 por animal. O índice funcional foi avaliado pela marcha, testes eletrofisiológicos de latência e amplitude e ainda foi realizada a análise morfométrica das fibras nervosas, observando o diâmetro mínimo da fibra, diâmetro mínimo do axônio, área das fibras, área do axônio, área ... / Abstract: Peripheral nerves injuries represent an enormous clinical challenge in medicine. Numerous techniques aim for regeneration of peripheral nerves. Nowadays, there are different protocols concerning to its functional retrieval and the results of current researches do not always show solutions to promote a regeneration of motor and sensory via. With the advent of tissue engineering, from the stem cells differentiation, arise a new therapeutic alternative in nerve regeneration. The aim of this study was to analyze the nerve regeneration by tubulization technique using autologous graft, as well as to verify whether the combination of mesenchymal stem cells from fat tissue (CTM-TA) and platelet-rich plasma (PRP) in tubulization of Commom Peroneal Nerve modify the morphology and physiology of this nerve nor muscles that it innervates. Animals were divided into six groups, consisting in three control and three experimental groups. G1 group (n=10) represented the Inicial Control Group. G2, G3 and G4 group (n=20) corresponded to the experimental groups and also receive, after resection of the nerve, an external jugular vein graft of 20 mm, thereby performing a tubulization of the two nerve stumps, where G2 was not filled; G3 was filled with PRP; G4 was filled with PRP and stem cells; G5 (n = 10) represented the Final Control Group and G6 (n = 20) symbolized the Control Denervation Group. It was obtained mesenchymal stem cells from fat tissue (MSC-FT) from the same animal, with phenotypic characterization using CD90 and CD44, thus identifying the average expression of 86.5%. MSC-FT were expanded in culture and applied at a concentration of 5x106 per animal. The functional index was evaluated by walking tracks analysis, electrophysiological latency test and amplitude, besides the morphometric analysis of nerve fibers (observing the minimum diameter of the fiber), the minimum diameter of the axon, fiber area, axon area, myelin area and myelin sheath ... / Doutor

Orientador: Daniela Cristina Cataneo / Coorientador: Eleneice Deffune / Banca: Francisco Guerreiro Cardoso / Banca: Flávia Cilene Maciel da Cruz Alves / Banca: Luiz Felippe Júdice / Banca: Érica Nishida Hasimoto / Resumo: Tendo em vista o desafio do tratamento de injúrias traqueais e o progresso na produção desse órgão por técnicas de engenharia de tecidos, faz com que o interesse nessa área cresça de forma considerável, já que ainda não há um tratamento padrão descrito na literatura acerca das lesões traqueais que acometem 50% do comprimento total do órgão de um adulto ou 30% da traqueia de uma criança. Assim, este estudo tem como objetivo a construção de modelo de traqueia para enxerto utilizando técnicas de engenharia de tecidos. Para tanto, foram realizados cinco e 10 ciclos de descelularização nas traqueias de coelhos doadores seguindo etapas: congelamento/descongelamento sem adição de nenhum crioprotetor, banho ultrassônico no aparelho Ultrasonic cleaner (Unique model USC 1400®) na frequência de 40 Khz durante 10 minutos, irradiação utilizando diodo de emissão de luz (LED) azul com comprimento de onda de 450nm ± 20nm na dose de 90 J/cm2 totalizando 60 minutos de exposição, adição do detergente deoxicolato de sódio a 4% sob agitação a 180 rpm no C24 Incubator shaker (New Brunswick Scientific) durante 48 horas. Paralelamente, foram realizadas expansão e caracterização das células-tronco mesenquimais dos coelhos receptores com posterior diferenciação dessas células em condrócitos e células de músculo liso. Finalmente, foi realizada a recelularização das traqueias com aplicação das células-tronco mesenquimais, dos condrócitos e das células de músculo liso dos coelhos receptores nas superfícies externas dos arcabouços produzidos para os transplantes traqueais. Após cinco ciclos repetidos do protocolo de descelularização utilizado, ainda é possível observar células epiteliais respiratórias e condrócitos remanescentes nas traqueias dos coelhos doadores. Porém, a repetição de 10 ciclos do mesmo protocolo de descelularização remove completamente as células epiteliais respiratórias e reduz a... / Abstract: There is no standard treatment yet described in the literature for tracheal lesions whose length is more than 50% in adults and a third of the trachea in small children. Given the challenge of tracheal injuries treatment and the organ generation progress by tissue engineering techniques the interest in this area is growing considerably. Thereby this study aims to produce tracheal model for graft using tissue engineering techniques. Were performed five and 10 cycles of decellularization on donor rabbit‟s tracheae following the steps: freezing/defreezing without addition of any cryoprotectant; sonication in Ultrasonic cleaner (Unique model USC 1400®) with 40 Khz for 10 minutes; blue light-emitting diode (LED) irradiation with wavelength of 450nm ± 20nm along a dose of 90 J/cm2 at a total exposure of 60 minutes; addition of sodium deoxicholate detergent 4% during 48 hours under 180 rpm agitation in the C24 Incubator Shaker (New Brunswick Scientific). Meanwhile, expansion and characterization of mesenchymal stem cells of rabbits' receptors were performed with subsequent differentiation of these cells into chondrocytes and smooth muscle cells. Finally, it was realized the tracheal recellularization by the application of the mesenchymal stem cells, chondrocytes and smooth muscle cells from receptors rabbits in the outer face of the produced scaffolds for tracheal transplantation. After five repeated cycles of decellularization protocol used, it is still possible to observe respiratory epithelial cells and chondrocytes remaining in the tracheae of the donor rabbits. However, after 10 cycles of the same decellularization protocol the respiratory epithelial cells are completely removed and the tracheal cartilage chondrocytes are reduced. Animals that have been transplanted with five cycles decellularized tracheae had died after 10-12 days due to rejection by the presence of donor rabbit‟s epithelial cells. Animals that have been ... / Doutor

Orientador: Elenice Deffune / Coorientador: Marcone Lima Sobreira / Banca: Regina Moura / Banca: Edivaldo Edner Joviliano / Resumo: O cultivo de células tronco (CT) e a descoberta de técnicas que promovem a diferenciação tecidual apontam para novos domínios da medicina: a terapia celular e a engenharia de tecidos (ET). As limitações da medicina atual encontram na ET uma nova possibilidade terapêutica, com tratamentos regenerativos ou substitutivos para os tecidos danificados. Dentre as limitações médicas encontram-se as doenças arteriais obstrutivas periféricas (DAOP). A DAOP está presente em 5% da população e cerca de 20 a 30% dos casos podem evoluir para amputação do membro inferior acometido, mesmo com os tratamentos hoje existentes. A ET apresenta-se como uma ferramenta promissora para a resolução dos problemas cardiovasculares, particularmente para os que afetam as artérias de pequeno diâmetro (<5 mm), sendo factível a produção de enxertos vasculares autólogos, sob a ótica da medicina personalizada. O objetivo deste trabalho foi construir de um modelo experimental de vaso sanguíneo para enxerto, utilizando técnicas de ET para a diferenciação de células tronco mesenquimais de tecido adiposo (CTMta) em células endoteliais. Inúmeras etapas metodológicas foram necessárias: identificação da melhor forma de descelularizar as veias de animais doadores para confecção do arcabouço (scaffold), onde foram comparados 3 diferentes protocolos utilizando os detergentes Triton X-100, deoxicolato de sódio (DS) e dodecil sulfato de sódio (SDS); obtenção, expansão e caracterização por citometria de fluxo com anti-CD90 de CTMta; comprovação da adesão das CTMta sobre o scaffold utilizando imunofluorescência e o kit Qtracker; estabelecimento do índice de apoptose das CTMta sobre o scaffold descelularizado por eventual resíduo químico; análise histológica por HE e realização de imunohistoquímica com... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Stem cells (SC) cultivation and the development of new techniques to promote tissue differentiation evolved to new medicine fields of research: cell therapy and tissue engineering (TE). The current limitations in medicine rely on TE for new therapies as they provide regeneration and substitution of the damaged tissue. Within therapeutic limitations are the peripheral arterial obstruction diseases (PAD). PAD affects 5% of population and about 20-30% of cases may progress to amputation of the limb, even if the treatments that exist today. TE is a promising tool for cardiovascular diseases, especially those where the vessel is a small caliber artery (<5 mm), as it is possible to recreate the structure of the vessel with autologous vascular grafts from the perspective of personalized medicine. This research aimed to propose the creation of an experimental blood vessel using TE techniques and adipose-derived stem cell differentiation into endothelium. Several techniques were required: to gather enough veins and remove its cells, using three different protocols with Triton X 100, sodium deoxycholate (SD) and sodium dodecil sulfate (SDS); to obtain, cultivate and characterize adipose-derived stem cells with the CD90 marker and flow citometry; to prove the cells could adhere to the scaffold using immunofluorescence and Qtracker kit; to establish the cell apoptosis on the scaffold for possible chemical residue; histology and immunohistochemistry on the cell seeded scaffold using the fascin marker. Were obtained 90 jugular and cava vein segments and were decellularized, withing 11 different protocols. The best protocols were 2h of 1% SD, 1h of 2% SDS and 2h of 1% SDS. The protocols where triton were used gave no good results. There was no relevant difference between the apoptosis on the best... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:06:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000433015-Texto+Completo-0.pdf: 17216538 bytes, checksum: e8444c6061514da24d7de97d9e76a1ce (MD5) Previous issue date: 2011 / Introduction: Neonatal hypoxia-ischemia (HI) is an important cause of mortality and morbidity in infants. Human umbilical cord blood cells (HUCBC) are a potential source of cellular therapy in perinatology. However, despite the beneficial effects of cell-based therapies shown in most studies, there has not been a consensus regarding the optimal dose of HUCBC for HI. Objective: In this study, we compared the long-term effects of intravenous administration of HUCBC at three different doses on spatial memory and brain morphological changes following HI in newborn Wistar rats. In addition, we tested whether the transplanted HUCBC migrate to the injured brain after transplantation. Methods: Seven-day-old animals underwent right carotid artery occlusion and were exposed to 8% O2 inhalation for 2 h. After 24 h, the animals were randomly assigned into five experimental groups: sham-operated rats, HI rats administered with vehicle (HI + vehicle), and HI rats treated with 1 x 106 (HI + low-dose), 1 x 107 (HI + medium-dose), or 1 x 108 (HI + high-dose) HUCBC into the jugular vein. After 8 weeks of transplantation, spatial memory performance was assessed using the Morris water maze (MWM), and subsequently, the animals were euthanized for brain morphological analysis using stereological methods. In addition, we performed immunofluorescence and polymerase chain reaction (PCR) analyses to identify HUCBC in the rat brain 7 days after transplantation. Results: The MWM test showed a significant spatial memory recovery at the highest HUCBC dose compared to HI + vehicle rats (P < 0. 05). Furthermore, the brain atrophy was also significantly lower in the HI + medium- and high-dose groups compared to the HI + vehicle animals (P < 0. 01; 0. 001, respectively). In addition, HUCBC were localized in host brains by immunohistochemistry and PCR analyses 7 days after intravenous administration. Conclusion: These results revealed that HUCBC transplantation has the dose-dependent potential to promote robust tissue repair and stable cognitive improvement after HI brain injury. / Introdução: A lesão cerebral hipóxico-isquêmica neonatal (HI) é uma das maiores causas de mortalidade e morbidade neurológica em crianças. O sangue do cordão umbilical humano, rico em células-tronco adultas, é uma fonte potencial para a terapia celular em perinatologia. No entanto, apesar do efeito benéfico mostrado na maioria dos estudos, ainda não há consenso em relação à dose adequada de células-tronco de cordão umbilical humano (CTCUH) no tratamento da HI. Objetivo: Comparar os efeitos comportamentais e morfológicos da administração intravenosa de três diferentes doses de CTCUH 8 semanas após a indução da HI em ratos recém-nascidos. Além disso, objetivou-se verificar a presença das células no cérebro dos animais em estudo 7 dias após o transplante.Métodos: Ratos Wistar de 7 dias de vida foram submetidos à oclusão da artéria carótida direita seguida por exposição a ambiente hipóxico (8% O2) por 2 h. Após 24 h, os ratos foram randomizados em 5 grupos experimentais: ratos cirurgia-simulada; ratos HI que receberam veículo (HI + veículo); e ratos HI que receberam 1 x 106 (HI + dose baixa), 1 x 107 (HI + dose média); or 1 x 108 (HI + dose alta) CTCUH na veia jugular. A memória de orientação espacial foi avaliada através do labirinto aquático de Morris e, posteriormente, os ratos foram sacrificados para as avaliações morfológicas quantitativas. Adicionalmente, a presença das CTCUH no cérebro dos animais tratados foi verificada através de técnicas de imunofluorescência e da análise de PCR. Resultados: Oito semanas após o transplante, o teste do labirinto aquático de Morris mostrou uma significativa recuperação da memória de orientação espacial nos ratos do grupo HI + dose alta quando comparados aos animais não tratados (P < 0,05). Além disso, a atrofia cerebral foi significativamente menor nos grupos HI + dose média e alta quando comparados aos animais HI + veículo (P < 0,01; 0,001, respectivamente). CTCUH foram localizadas no cérebro dos ratos que receberam o transplante celular 7 dias após a administração intravenosa. Conclusão: Os resultados mostrados neste estudo revelaram que o transplante intravenoso de CTCUH tem potencial dose-dependente para promover o reparo neuro-tecidual e a estável recuperação cognitiva após lesões hipóxico-isquêmicas.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:05:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000412790-Texto+Completo-0.pdf: 4945836 bytes, checksum: ee40952653059296bd5709107e36417b (MD5) Previous issue date: 2009 / INTRODUCTION: Bone marrow mononuclear cells have been utilized in tissue regeneration attempts in several pathologies. The aim of this study was to evaluate the potential healing effect of these cells in fresh tympanic membrane perforations. METHODS: Bilateral myringotomy was performed in 10 Wistar rats. Bone marrow mononuclear cells were used in one side and physiologic solution (control) in the opposite side. We evaluated healing time, tympanic membrane mobility and histology. RESULTS: The side where mononuclear cells were applied healed 3 days earlier than the control side (p=0,006). There was no difference in mobility or histology between groups. CONCLUSION: Bone marrow mononuclear cells provided a faster tympanic membrane healing time when compared to a control group. / INTRODUÇÃO: As células mononucleares de medula óssea têm sido utilizadas em diversas patologias na tentativa de regeneração tecidual. O objetivo deste estudo foi avaliar o seu potencial efeito na cicatrização de perfurações agudas da membrana timpânica (MT). MÉTODOS: Foram realizadas perfurações timpânicas bilateralmente por meio de miringotomia em 10 ratos Wistar. Células mononucleares de medula óssea foram utilizadas de um lado e solução fisiológica no lado contralateral. Avaliou-se o tempo de cicatrização, a mobilidade timpânica e a histologia. RESULTADOS: O lado que utilizou células mononucleares cicatrizou em média 3 dias antes que o controle (p=0,006). Não houve diferença de mobilidade ou padrão histológico entre os grupos. CONCLUSÃO: As células mononucleares de medula óssea proporcionaram uma cicatrização mais rápida da MT que o grupo controle.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:06:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000393516-Texto+Completo-0.pdf: 10259147 bytes, checksum: 763119f3451fafb413c3fb6cda86f10f (MD5) Previous issue date: 2007 / Introduction: Hypoxic-ischemic injury is an important cause of mortality and morbidity in infants, often leading to mental retardation, epilepsy and cerebral palsy. Human umbilical cord blood (HUCB), which is rich in adult stem cells, is a potential source of cellular therapy in perinatology. Objective: In this study, we investigated the effects of HUCB cells on motor, spatial orientation memory and histological outcome in neonate rats subjected to hypoxicischemic (HI) injury. Methods: Seven-days-old rats underwent right carotid artery occlusion followed by exposure to 8% O2 inhalation for 2 h. Twenty-four hours after HI injury, rats received either saline solution or HUCB cells intravenously. We also added a group of shamoperated animals. After three weeks, spatial orientation memory was assessed using Morris Water Maze and motor evaluations were conducted by open-field activity, cylinder, grid walking and ledged beam walking tests. Subsequently, rats were sacrificed for histological analyses. Results: HI rats showed a significant spatial orientation memory impairment and a volumetric decrease of the ipsilateral hemisphere to arterial occlusion. In motor tests, animal subjected to HI injury showed only a tendency to deficits in cylinder and grid walking tests. However, animals that received HUCB cells did not show statistical difference in behavioral tests and cerebral atrophy when compared to saline group. Conclusion: The present study suggests that intravenous injection of HUCB cells does not improve functional and histological outcomes in HI rats with severe brain damage. Additional investigations, considering aspects as dose, time to transplantation, delivery methods, immunosuppression and associated therapies are necessary to assessment the clinical relevance of cellular therapy in neonatal brain damage. / Introdução: A lesão hipóxico-isquêmica neonatal é uma causa importante de mortalidade e morbidade na infância, levando, freqüentemente, a retardo mental, epilepsia e paralisia cerebral. O sangue do cordão umbilical humano, rico em células-tronco adultas, é uma fonte potencial para a terapia celular em perinatologia. Objetivo: Investigar os efeitos das células-tronco de cordão umbilical humano na memória de orientação espacial, no desempenho motor e nos desfechos histológicos em ratos neonatos submetidos à hipóxia-isquemia neonatal (HI). Métodos: Ratos de 7 dias de vida foram submetidos à oclusão da artéria carótida direita seguida por exposição a ambiente hipóxico (8% O2) por 2 h. Após vinte e quatro horas, os ratos receberam solução salina ou células-tronco de cordão umbilical humano por via intravenosa. Um grupo de animais cirurgia-simulada também foi adicionado. Após três semanas, a memória espacial foi avaliada através do labirinto aquático de Morris e as avaliações motoras aplicadas foram o campo aberto, os testes do cilindro, da grade e da trave. Subseqüentemente, os ratos foram sacrificados para as avaliações histológicas. Resultados: Ratos com HI mostraram um significativo prejuízo na memória espacial e uma redução volumétrica do hemisfério ipsilateral à oclusão arterial. Nos testes motores, os animais submetidos à HI mostraram apenas uma tendência a déficits nos testes do cilindro e da grade. No entanto, os animais tratados com células-tronco de cordão umbilical humano não mostraram diferenças estatísticas nos testes comportamentais e na atrofia cerebral quando comparados ao grupo que recebeu solução salina. Conclusão: Este estudo sugere que a injeção intravenosa de células-tronco de cordão umbilical humano não melhora os desfechos comportamentais e histológicos em ratos após HI severa. Investigações adicionais, considerando aspectos como dose, tempo para o transplante, métodos de injeção, uso de imunossupressão e de terapias associadas são necessárias para avaliar a relevância clínica da terapia celular na lesão cerebral neonatal.

Made available in DSpace on 2011-12-27T14:14:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 000413419-0.pdf: 7548238 bytes, checksum: fb7df37e9d8df24acf3390709418323f (MD5) license.txt: 581 bytes, checksum: 44ea52f0b7567232681c6e3d72285adc (MD5) / Tissue engineering has been showing a promising approach on the treatment of patients with trauma or facial deformities that need extensive areas of bone grafts. It involves the association of an appropriate kind of cell and a biocompatible and biodegradable scaffold that imitates functionally and structurally a specific kind of tissue. Calcium Phosphate Cement (CFC) appears as an interesting alternative of biomaterial to be used as a scaffold due to its characteristics as biocompatibility, bioactivity and osteoconductivity. Thus, the aim of the present study was to evaluate the ability of macroporous tridimensional CFC scaffolds, made with brazilian rawmaterial, to allow the adhesion, proliferation and differentiation of mesenchymal stem cells, derived from human bone marrow in cells osteogenic lineage. For that, cells obtained from iliac crest of an adult human donor were routinely processed until experimental conditions and, after that, cultured over CFC discs, macroporous that had as poror generation body, paraffin spheres, with size between 100 and 250μm. For the induction of cells in osteogenic lineage, BMP4 was added to the culture. Culture periods were established in five, ten and fifteen days. After these periods cells were evaluated due to their morphology by Scanning Electron Microscopy. The expression levels of genes BGLA and SSP1, that codify the osteocalcine (OC) and osteopontine (OP) proteins, as well as the Alkaline phosphatase activity (ALP), other important osteoblastic marker , were quantified by the PCR technique in real time QT-PCR) using the fluorophore SYBR GREEN® . The QT-PCR detected the expression of the genes BGLA and SSP1 and the alkaline phosphatase activity in the periods of 10 and 15 days of culture, what permitted them to check that had a cell proliferation and the differentiation of it in osteogenic cells.In the period of five days, it was not observed the expression of any observed genes. From theses results we concluded that the macroporous CFC, with pore size between 100 and 250 μm, created through the utilization of the paraffin microspheres, permits the adhesion, proliferation and differentiation of mesenchymal stem cells and can be used as an scaffold to the bone tissue engineering. / A engenharia tecidual tem se mostrado um campo promissor para a reabilitação de pacientes com traumas ou deformidades faciais que necessitem de áreas extensas de enxerto ósseo. Seu princípio básico envolve a associação de um tipo apropriado de célula e de um arcabouço biocompatível e bioabsorvível que mimetize funcional e estruturalmente determinado tipo de tecido. O Cimento de Fosfato de Cálcio (CFC) aparece como uma alternativa viável de biomaterial a ser utilizado com esta finalidade em virtude de suas características como biocompatibilidade, bioatividade e osteocondutividade. Assim, o objetivo da presente pesquisa foi avaliar a capacidade de suportes tridimensionais macroporosos de CFC, confeccionados com matérias-primas brasileiras, de permitir a adesão, proliferação e diferenciação de células-tronco mesenquimais derivadas da medula óssea humana. Para isso, células obtidas da crista ilíaca de um doador humano adulto foram rotineiramente processadas até as condições experimentais e, a seguir, cultivadas sobre suportes de CFC, macroporosos, que tiveram como corpo gerador de poros, microesferas de parafina, com tamanho entre 100 e 250μm. Para indução das células em linhagem osteogênica foi acrescentada Proteína Morfogênica Óssea (BMP4) ao meio de cultura. Os períodos de cultura estabelecidos foram de cinco, dez e 15 dias. Após estes períodos, o comportamento e a morfologia das células junto ao biomaterial foram avaliados por meio de Microscopia Eletrônica de Varredura.Os níveis de expressão dos genes BGLA e SSP1, que codificam as proteínas osteocalcina (OC) e osteopontina (OP) respectivamente, bem como a atividade da Fosfatase Alcalina (ALP), outro marcador osteoblástico importante, foram quantificados pela técnica de PCR em Tempo Real (QT-PCR) utilizando o fluoróforo SYBR Green®. O QT-PCR detectou a expressão dos genes BGLA e SSP1 e a atividade da fosfatase alcalina nos períodos de 10 e 15 dias de cultura, o que nos permitiu constatar que houve proliferação celular e diferenciação destas em células osteogênicas. No período de cinco dias, não foi observada a expressão de nenhum dos genes investigados. A partir destes resultados concluímos que o CFC, macroporoso, com tamanho de poros entre 100 e 250μm, criados por meio da utilização de microesferas de parafina, permite a adesão, proliferação e diferenciação de células-tronco mesenquimais em células osteogênicas, podendo ser utilizado como arcabouço para engenharia de tecido ósseo.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:56:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000413194-Texto+Completo-0.pdf: 3719374 bytes, checksum: 939fa9966f0915aeae6d7fdb447e896d (MD5) Previous issue date: 2009 / Chronic obstructive pulmonary disease (COPD) is a major cause of mortality worldwide. In Brazil, every year 280 thousand patients are hospitalized with COPD. Since the adult lung cannot have a spontaneous growth or regenerate itself, the pulmonary emphysema is considered a progressive and irreversible disease. The aim of this study was to evaluate the effect of bone marrow mononuclear cells transplantation in the regeneration of emphysematous lung tissue in mice. The experimental model of pulmonary emphysema was induced in mice by intranasal instillation of 3. 5 mL/kg of papain in 0. 9% NaCl2 solution. The animals were divided into 2 groups: one control (n=8) that received normal saline, and the experimental group (n=8) that received 1x107 EGFP+ bone marrow cells through the tail vein. The animals were killed 45 days after transplant, and lungs were removed and perfused with 10% buffered formalin. The lungs were embedded in paraffin to obtain serial sections of 3 μm. Slides were stained with hematoxylin-eosin to evaluate lung morphology and with 0. 1% Evans Blue and DAPI to confirm the presence of EGFP+ cells in the lung epithelia. The analyses showed the presence of alveolar EGFP+ cells suggesting that the donors bone marrow cells are involved in the repair of lung tissue. / A doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC) é uma importante causa de mortalidade em todo mundo. No Brasil, a cada ano, são hospitalizados 280 mil pacientes com DPOC. Como o pulmão adulto não pode ter um crescimento espontâneo ou regenerar-se, o enfisema pulmonar é considerado uma doença progressiva e irreversível. O objetivo principal deste trabalho foi avaliar o efeito do transplante de células mononucleares de medula óssea na regeneração do tecido pulmonar enfisematoso de animais experimentais. O modelo experimental de enfisema pulmonar foi induzido em camundongos através de instilação intranasal de 3,5 mL/kg de papaína em solução de NaCl2 a 0,9%. Os animais foram divididos em dois grupos, sendo um controle (n=8) que recebeu somente soro, e o grupo experimental (n=8), cujos animais receberam 1x107 células de medula óssea EGFP+ através da veia caudal. Os animais foram sacrificados 45 dias após o transplante e os pulmões foram removidos e perfundidos com formol tamponado a 10%. Os fragmentos pulmonares foram incluídos em parafina para obtenção de cortes seriados de 3 Om. As lâminas foram coradas com Hematoxilina-eosina para avaliar a morfologia pulmonar e com Azul de Evans 0,1% e DAPI para a confirmação da presença de células EGFP+ no epitélio pulmonar. As análises demonstraram a presença de células alveolares EGFP+ sugerindo que as células de medula óssea dos animais doadores estão envolvidas no processo de reparo do tecido pulmonar.