Submitted by Etelvina Domingos (etelvina.domingos@ufpe.br) on 2015-04-08T19:09:06Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO RAISA QUEIROZ CATUNDA.pdf: 1302963 bytes, checksum: 19093f5f0f4d3fbf5a39dcf14f6805a1 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-08T19:09:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO RAISA QUEIROZ CATUNDA.pdf: 1302963 bytes, checksum: 19093f5f0f4d3fbf5a39dcf14f6805a1 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014 / O objetivo deste estudo foi avaliar, in vitro, a citotoxicidade de três adesivos dentinários (Adper Single Bond 2 -SB, Sistema Adesivo Silorano-SAS e Single Bond Universal -SBU) em células Vero, após diferentes tempos de contato. Métodos: As células foram cultivadas a uma concentração de 2x105 células/ml por 24h e crescidas até formar uma monocamada subconfluente. As células Vero foram expostas a 25μl de extratos obtidos da imersão dos adesivos em meio de cultura (DMEM) por 24h, 48h e 72h, imediatamente após a polimerização. DMEM fresco foi utilizado como controle negativo e o metabolismo celular foi avaliado pelo método MTT [3-(4,5- Di-metiltiazol-2-il)-2,5- brometo difenil- tetrazolio)]. Os dados foram comparados estatisticamente através do teste ANOVA. Resultados: Os valores percentuais de viabilidade variaram de 94,2% em 72h (SBU) até 109,6% em 48h (SB). A média percentual de viabilidade após a exposição aos extrados de SB, SAS e SBU foram 103,2%, 100,63% e 97,43%, respectivamente. Não houve uma diferença significativa entre os grupos experimentais e o controle negativo (p= 0,342). Conclusões: Todos os adesivos testados neste estudo apresentaram nenhuma citotoxicidade à células Vero in vitro.

Submitted by Fabíola Silva (fabiola.silva@famerp.br) on 2017-08-03T11:44:01Z No. of bitstreams: 1 ceylamariaodecastro_tese.pdf: 1353174 bytes, checksum: 1308d049511e8f07c8b5a5d1f5aa3df6 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-03T11:44:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ceylamariaodecastro_tese.pdf: 1353174 bytes, checksum: 1308d049511e8f07c8b5a5d1f5aa3df6 (MD5) Previous issue date: 2015-09-03 / This study aimed at assessing the extracellular metabolic profile of Vero cells infected by Mayaro virus. In this metabolomic study, the use of nuclear magnetic resonance associated to multivariate analytical methods, devices of standard recognition, showed metabolic variations which can be attributed to the effect of Mayaro virus infection. Vero cells were infected and incubated for 2, 6 and 12 hour periods. Differentiated variations in the levels of several metabolites such as amino acids, organic acids, guanidine compound, monoamine, carbohydrates and fatty acids have occurred in each period. These organic compounds are metabolites involved in the glycolysis pathway, tricarboxylic acid cycle, pentose phosphate pathway, and the oxidation pathway of fatty acids (via the β-oxidation). This study demonstrates footprinting analysis representing the effect of the virus action on the Vero cell metabolism, furthermore, these analyzes point out the intracellular metabolic state, improving the knowledge of the microorganism influence on cellular metabolism. / O presente estudo tem como objetivo avaliar o perfil metabólico extracelular de células Vero infectadas pelo vírus Mayaro. Neste estudo metabolômico o uso da ressonância magnética nuclear combinado a métodos analíticos multivariados, ferramentas de reconhecimento padrão que demonstraram variações metabólicas que podem ser atribuídas ao efeito da infecção do vírus Mayaro. As células Vero foram infectadas e incubadas em períodos de 2, 6 e 12 horas. Em cada período ocorrem variações diferenciadas nos níveis de vários metabólitos, como aminoácidos, ácidos orgânicos, composto de guanidina, monoamina, carboidratos e ácidos graxos. Esses compostos orgânicos são metabólitos envolvidos na via da glicólise, ciclo do ácido tricarboxílico, via das pentoses-fosfato, e via da oxidação dos ácidos graxos (via da β-oxidação). Este estudo demonstra footprinting analysis que representa o efeito da ação do vírus no metabolismo da célula Vero, além disso, essas análises indicaram o estado metabólico intracelular, e contribuem para o conhecimento da influência do microorganismo no metabolismo celular.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Engenharia Ambiental, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T03:46:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 286035.pdf: 10421694 bytes, checksum: 86b7defc9211ce2b78fde1aa5c44bf07 (MD5) / Entre os diversos problemas de saúde pública ligados ao abastecimento de água, a contaminação de mananciais de água doce por cianotoxinas tem sido muito enfatizada devido ao risco toxicológico que representa. Assim, este assunto tornou-se preocupante e é cada vez mais estudado pela comunidade científica, pois compromete a qualidade das águas destinada ao consumo humano, atingindo conjuntos de organismos muito além da comunidade aquática. A saxitoxina (STX) é uma neurotoxina produzida pela cianobactéria Cylindrospermopsis raciborskii, que compõe a biota da Lagoa do Peri, um dos principais mananciais de abastecimento de água para o Município de Florianópolis-SC. Este estudo investigou o mecanismo de ação da STX por meio de métodos toxicológicos in vitro, além de verificar a capacidade de adsorção de conchas de ostra e quitina à STX. Os testes citotóxicos e genotóxicos in vitro, realizados para avaliar a ação da STX sobre células Neuro 2A (N2A) e Vero, foram os testes do MTT, a fragmentação e a metilação do DNA, a lipoperoxidação e a frequência de células micronucleadas. Os ensaios de adsorção deram-se com o emprego de conchas de ostras trituradas e quitina, como matrizes adsorventes para a verificação da capacidade de adsorção da STX em soluções aquosas. Para a quantificação da STX, foi empregada a cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC). Os resultados obtidos nas avaliações toxicológicas demonstraram que a STX possui um potencial efeito citotóxico e genotóxico, pois induziu as células N2A à apoptose, à fragmentação e à hipermetilação do DNA, além de causar a oxidação lipídica da membrana celular. Nessas avaliações toxicológicas ainda foi possível verificar o potencial da STX à indução de formação de micronúcleos em células N2A e Vero, com evidências dos efeitos de origem aneugênica. Nos ensaios de adsorção, foi possível verificar que a concha de ostra e a quitina foram eficientes para remoção da STX (>60% em 48h) em amostras da água, na escala de concentrações empregadas neste estudo. / Amongst the diverse problems of public health on the water supply, the contamination of fresh water sources from cyanotoxins had been emphatized due toxicological risk. Thus, this subject that concern more and more studied by the scientific community, therefore compromises the waters quality destined to the human consumption, reaching organisms beyond the aquatic community. The saxitoxin (STX) is a neurotoxin produced in blooms of Cylindrospermopsis raciborski, cyanobacteria that composes the biota of Peri Lagoon - Florianópolis/SC. This study evaluated the mechanism of action of STX through toxicology methods in vitro, besides verifying the absorption capacity of oyster shell and chitin to STX. To evaluate the action of STX in Neuro 2A (N2A) and Vero cells, the cytotoxic and genotoxic in vitro essays employed were: MTT assay, DNA methylation and fragmentation, lipid peroxidation and frequency of micronucleated cells. From the adsorption essays were employed oyster shells powdered and chitin as adsorbents matrices and verifying the capacity of absorption of STX soluble to these adsorbents. The quantification of STX was for high performance liquid chromatography (HPLC). The results of toxicological evaluation showed that STX had a potential cytotoxic and genotoxic effects. The STX'exposure induced to N2A cells to cellular apoptosis, DNA fragmentation and methylation and lipid oxidation of cellular membrane. The toxicological evaluation demonstrated that STX induced to the N2A and Vero cells exposed to micronuclei formation, with evidenced to aneugenic effects. The adsorption assays verified that oyster shell and chitin were efficient to remove the STX (>60% in 48h) from water samples, in the concentrations scale employed in this study.

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-08-28T18:21:56Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Caroline Maria Igrejas Lopes.pdf: 1274855 bytes, checksum: 7ab2a1c83145983aec2524d4fde884c2 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-09-05T23:19:48Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Caroline Maria Igrejas Lopes.pdf: 1274855 bytes, checksum: 7ab2a1c83145983aec2524d4fde884c2 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-05T23:19:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Caroline Maria Igrejas Lopes.pdf: 1274855 bytes, checksum: 7ab2a1c83145983aec2524d4fde884c2 (MD5) Previous issue date: 2015-08-10 / CAPES / Introdução: Avicennia schaueriana é uma espécie endêmica da vegetação de manguezal pertencente à família Verbenaceae. As espécies do gênero Avicennia são muito utilizadas pelas comunidades tradicionais para cura de várias doenças. Objetivo: Investigar a presença de compostos químicos e avaliar a citotoxicidade in vitro do extrato aquoso de folhas de Avicennia schaueriana e a ação cicatrizante do creme desse extrato nas feridas cutâneas em ratos. Materiais e Métodos: O extrato aquoso de folhas de A. schaueriana foi analisado por cromatografia em camada delgada para realização do perfil fitoquímico de cumarinas, flavonoides, triterpenos e taninos. Para a análise de saponinas foi utilizado o teste de formação de espuma e para os alcaloides o de precipitação. A avaliação citotóxica foi realizada através do método colorimétrico de brometo em células Vero. A ação cicatrizante foi avaliada utilizando 45 ratos divididos em três grupos iguais tratados durante 5, 10 e 15 dias com creme de extrato aquoso de folhas de A. schaueriana, solução de cloreto de sódio a 0,9% e creme de dexpantenol, aplicados sobre a região dorsal previamente tricotomizada e lesionada. Foram realizadas mensurações iniciais e finais de cada ferida para calcular o índice de cicatrização das úlceras, a análise histomorfométrica e a contagem dos fibroblastos nas secções histológicas das feridas cirúrgicas nos diferentes grupos e intervalos de tempo. Resultados: O estudo fitoquímico mostrou a presença de flavonoides, taninos, triterpenos e saponinas, porém não foi evidenciada a presença de cumarinas e alcaloides. Em relação àcitotoxicidade in vitro, observou que o extrato aquoso de folhas de A. schaueriana não foi considerado citotóxico, pois apresentou capacidade de proliferação de células Vero na maior concentração testada (100μg/mL). Na análise morfométrica verificou-se que o percentual médio de contração das feridas, após 10 dias de tratamento, foi mais elevado no grupo medicado com dexpantenol (93,41%). No tempo de 15 dias, o menor percentual médio de contração ocorreu no grupo do dexpantenol (94,41%) e o maior no de A. schaueriana (98,50%). Na histomorfometria, após 10 dias da cirurgia, o grupo do dexpantenol apresentou o menor comprimento médio não reepitelizado, não demonstrando diferença significativa com o de A.schaueriana, mas apresentando com o soro fisiológico. No período de 15 dias, a média foi nula no grupo da planta estudada, indicando 100% de reepitelização das feridas. Evidenciou-se também que, após 10 dias, o número médio de fibroblastos encontrado no grupo A. schaueriana foi mais elevado do que o soro fisiológico. No período de 15 dias, ogrupo A. schaueriana manteve uma maior quantidade de fibroblastos quando comparado aos demais grupos. Conclusão: O extrato aquoso de folhas de A. schaueriana contém importantes metabólitos secundários, associados a relevantes propriedades farmacológicas. Além disso, a espécie A. schaueriana não apresenta atividade citotóxica e a aplicação tópica do creme desse extrato diminui a área da ferida, estimula a reepitelização e aumenta o número de fibroblastos, exibindo ação cicatrizante mais eficiente nas feridas cutâneas em ratos do que o creme de dexpantenol. Portanto, esta planta poderá tornar-se um tratamento de uso tópico no proce sso de reparação tecidual. / Introduction: Avicennia schaueriana is an endemic species of mangrove vegetation belonging to the Verbenaceae family. The species of the Avicennia gender are extensively used by traditional communities for curing various diseases. Aim: To investigate the presence of chemical compounds and to evaluate the cytotoxicity in vitro of aqueous extract of Avicennia schaueriana leaves and the healing action of the cream of this extract in skin wounds in mice. Materials and Methods: The aqueous extract of A. schaueriana leaves was analyzed by thin-layer chromatography for performing the phytochemical profile of coumarins, flavonoids, triterpenes and tannins. For the analyses of saponnins the formation of foaming test was used and alkaloids the precipitation. The cytotoxic evaluation was performed using the colorimetric method of bromide in Vero cells. The cicatrizing activity was evaluated using 45 mice, divided into three equal groups treated for 5, 10 and 15 days with the cream of the aqueous extract of A. schaueriana leaves, solution of sodium chloride at 0.9% and cream of dexpanthenol, applied to the dorsal region previously shaved and injured. Thus, the initial and final measurements of each wound were taken to calculate the rate of healing of the ulcers, the histomorphometric analysis and the count of fibroblasts of histological sections of surgical wounds in the different groups and timeslots. Results: The phytochemical study showed the presence of flavonoids, tannins, triterpenes and saponins, but the presence of coumarins and alkaloids was not detected. Regarding the cytotoxicity in vitro, it was observed the aqueous extract of A. schaueriana leaves was not considered cytotoxic, as it presented Vero cell proliferation capacity at the highest concentration tested (100μg/ml). In the morphometric analysis, it was found that the average percentage of contraction of the wounds, after 10 days of treatment, was higher in the group medicated with dexpanthenol (93.41%). In the 15 days analysis, the lowest average percentage of contraction was observed in the dexpanthenol group (94.41%) and the highest in the A. schaueriana (98.50%). In the histomorphometry, after 10 days of the surgery, the dexpanthenol group had the lowest average length not re-epithelialized, showing no significant statistical difference from the A.schaueriana, but showing with saline solution. In the 15-days period, the average was void in the group of the studied plant, indicating 100% of re-epithelialization of the wounds. It was also noticed that after 10 days, the average number of fibroblasts found in the A. schaueriana group was higher than the saline solution. In the 15-days period, the A. schaueriana group maintained a higher amount of fibroblasts when compared to the others groups. Conclusion: The aqueous extract of A. schaueriana leaves contains important secondary metabolites, which have relevant pharmacological properties. Furthermore, the species A. schaueriana present no cytotoxic activity and the topical application of the cream of this extract decreases the wound area, stimulates the re-epithelialization, and increases the number of fibroblasts, presenting healing action more efficient, on mice skin wounds, than dexpanthenol cream. Therefore, this plant could become a topical treatment in the tissue repair process.

Cultivos de células VERO em microcarregadores porosos de celulose (Cytopore) e porosos de gelatina (Cultispher G) com rendimento celular três vezes maior, foram obtidos em relação às culturas em microcarregadores sólidos de DEAE-dextran (Cytodex tipo 1). No Cytopore e Cultispher G atingimos 1.265 e 1.103 células/microcarregador, respectivamente e no Cytodex 1, 256 células/microcarregador. A concentração celular nos suportes porosos Cytopore aumentou 43 vezes o número de células iniciais, 37,5 vezes no Cultispher G e 17 vezes no Cytodex 1. As culturas de células VERO nos microcarregadores porosos foram utilizadas com êxito para a replicação do vírus rábico (PV/VERO), quando infectadas com MOI de 0,05. Títulos de 104,8 FFD50/mL determinados pelo método de inibição de focos fluorescentes (RFFIT) foram obtidos 96 horas após a infecção. Estudos de microscopia óptica e eletrônica de varredura e transmissão para análise da estrutura destes suportes, mostraram boa colonização celular e a eficiência da replicação viral. A padronização de metodologia para cultura e infecção viral de células VERO nos microcarregadores porosos indica a utilidade destes suportes para produção de antígenos e vacinas virais e a potencialidade do sistema para a obtenção de produtos biotecnológicos em geral. / Cultures of VERO cell on porous cellulose-coated microcarriers (Cytopore) and on porous gelatin-coated (Cultispher G) with a cellular yield 3 times higher, was obtained in relation to DEAE-dextran solid microcarriers (Cytodex type 1). In the cultures on Cytopore and Cultispher G we obtained 1.265 and 1.103 cells/microcarrier, respectively and 256 cells/microcarrier on Cytodex 1. The cell concentration for the Cytopore porous suports increased 43 times from the initial cell number, 37,5 times for the Cultispher G and 17 times for the Cytodex 1. The VERO cell cultures on porous microcarriers were efficiently used for the replication of the rabies virus (PV/VERO), when infected with 0,05 MOI. Titers of 104,8 FFD50/mL determined by the fluorescent focus inhibition method (RFFIT) were obtained 96 hours post-infection. Studies on light microscopy and scanning and transmission eletronic microscopy carried out to analyse the suports structure, showed a good cell population and efficiency of virus infection. The standardization of a methodology for culture and virus infection of VERO cells on porous microcarriers indicate the usefulness of these porous supports to the antigens and viral vaccines production and the potenciality of this system for the attainment of biotechnological products.

Cultivos de células VERO em microcarregadores porosos de celulose (Cytopore) e porosos de gelatina (Cultispher G) com rendimento celular três vezes maior, foram obtidos em relação às culturas em microcarregadores sólidos de DEAE-dextran (Cytodex tipo 1). No Cytopore e Cultispher G atingimos 1.265 e 1.103 células/microcarregador, respectivamente e no Cytodex 1, 256 células/microcarregador. A concentração celular nos suportes porosos Cytopore aumentou 43 vezes o número de células iniciais, 37,5 vezes no Cultispher G e 17 vezes no Cytodex 1. As culturas de células VERO nos microcarregadores porosos foram utilizadas com êxito para a replicação do vírus rábico (PV/VERO), quando infectadas com MOI de 0,05. Títulos de 104,8 FFD50/mL determinados pelo método de inibição de focos fluorescentes (RFFIT) foram obtidos 96 horas após a infecção. Estudos de microscopia óptica e eletrônica de varredura e transmissão para análise da estrutura destes suportes, mostraram boa colonização celular e a eficiência da replicação viral. A padronização de metodologia para cultura e infecção viral de células VERO nos microcarregadores porosos indica a utilidade destes suportes para produção de antígenos e vacinas virais e a potencialidade do sistema para a obtenção de produtos biotecnológicos em geral. / Cultures of VERO cell on porous cellulose-coated microcarriers (Cytopore) and on porous gelatin-coated (Cultispher G) with a cellular yield 3 times higher, was obtained in relation to DEAE-dextran solid microcarriers (Cytodex type 1). In the cultures on Cytopore and Cultispher G we obtained 1.265 and 1.103 cells/microcarrier, respectively and 256 cells/microcarrier on Cytodex 1. The cell concentration for the Cytopore porous suports increased 43 times from the initial cell number, 37,5 times for the Cultispher G and 17 times for the Cytodex 1. The VERO cell cultures on porous microcarriers were efficiently used for the replication of the rabies virus (PV/VERO), when infected with 0,05 MOI. Titers of 104,8 FFD50/mL determined by the fluorescent focus inhibition method (RFFIT) were obtained 96 hours post-infection. Studies on light microscopy and scanning and transmission eletronic microscopy carried out to analyse the suports structure, showed a good cell population and efficiency of virus infection. The standardization of a methodology for culture and virus infection of VERO cells on porous microcarriers indicate the usefulness of these porous supports to the antigens and viral vaccines production and the potenciality of this system for the attainment of biotechnological products.

A fototerapia com lasers em baixa intensidade de lesões de herpes simples tem sido demonstrada clinicamente ora prevenindo a formação de vesículas, ora cicatrizando rapidamente as lesões e até aumentando o espaço de tempo entre o aparecimento dessas manifestações recorrentes. No entanto, os mecanismos básicos de ação dos lasers nessas situações são desconhecidos. Dessa forma, o objetivo do trabalho foi realizar ensaios in vitro utilizando células epiteliais em cultivo e culturas do vírus HSV-1 para estudar a interferência do laser em baixa intensidade na infecção do HSV-1. Material e Métodos: Culturas de vírus HSV-1 e de células epiteliais de macaco (linhagem Vero) infectadas ou não infectadas, crescidas em déficit nutricional (2 % de soro fetal bovino - sfb) foram utilizadas. As irradiações foram realizadas com um laser de GaAlAs (660 e 780 nm, área focal de 3,6 mm2). Uma, duas e três irradiações com intervalos de 6 h foram realizadas. Os grupos experimentais foram: Controle: não-irradiadas; 660 nm/ 3 J/cm2 (28 s); 660 nm/ 5 J/cm2 (38 s); 780 nm/ 3 J/cm2 (19 s) e, 780 nm/ 5 J/cm2 (25 s). Os efeitos citopáticos do HSV-1 e a viabilidade celular de culturas irradiadas e controles foram analisadas em 4 condições: 1) irradiação das células epiteliais não infectadas; 2) células epiteliais irradiadas antes da infecção; 3) irradiação dos vírus antes da infecção; 4) irradiação das células previamente infectadas pelo HSV-1. A viabilidade celular foi obtida pelo teste da redução do MTT e os efeitos citopáticos por observação em microscopia de luz. Resultados: A viabilidade celular de culturas irradiadas crescidas em déficit nutricional, independentemente do número de irradiações, foi sempre significantemente menor que aquela de culturas não-irradiadas e crescidas nas condições ideais de concentração de sfb (10 %). A viabilidade celular de culturas não infectadas foi similar em todos os grupos. O número de irradiações influenciou o crescimento celular positiva e proporcionalmente ao número de irradiações, exceto para o grupo 660 nm/ 3 J/cm2. Nenhuma diferença nos efeitos citopáticos foi observada entre os grupos, independentemente do número de irradiações nas 3 condições do estudo. A viabilidade celular de todos os grupos não mudou nem pela irradiação das células nem do vírus antes da inoculação nas células. A viabilidade de células infectadas antes da irradiação foi significantemente maior que o controle quando 2 irradiações foram realizadas. Conclusão: Nas condições deste estudo a radiação laser em baixa intensidade é capaz de aumentar o crescimento de células Vero crescidas em déficit, no entanto, não o suficiente para atingir o crescimento característico dessas células crescidas nas suas condições ideais. O número de irradiações influencia o crescimento das células de forma positiva e proporcional ao número de irradiações, exceto para o parâmetro 660 nm/ 3 J/cm2. A radiação laser não altera nem a susceptibilidade das células à infecção, nem a virulência do HSV-1. No entanto, ela prolonga a viabilidade das células infectadas pelo HSV-1. Efeitos positivos da fototerapia que tem sido relatados clinicamente parecem ser devido a efeitos no hospedeiro não relacionados com a replicação viral nas células infectadas. / Purpose: The clinical effects attributed to phototherapy relative to Herpes simplex lesions have included prevention of lesion formation, speeding the healing of lesions, and decreasing the frequency of recurrent lesions. The mechanisms underlying these findings have not been established yet. The aim of this in vitro study was to analyze the effect of phototherapy on epithelial cells, on HSV-1, and on infected epithelial cells in culture. Material and Methods: Cultures of HSV-1 and infected or non-infected monkey epithelial cells (Vero cell line) grown in deficient media (2 % fetal bovine serum-fbs) were used. The laser irradiation was delivered using a GaAlAs laser (660 and 780 nm, focal spot of 3.6 mm2). One, two and three irradiations with 6 hourintervals were done. The experimental groups were: Control: non-irradiated; 660 nm/3 J/cm2 (28 sec); 660 nm/5 J/cm2 (38 sec); 780 nm/3 J/cm2 (19 sec), and 780 nm/5 J/cm2 (25 sec). The HSV-1 cytopatic effects and the cell viability of irradiated cultures and controls were analyzed in four different conditions: 1) irradiation of noninfected epithelial cells; 2) epithelial cells irradiated prior infection; 3) virus irradiated prior infection; and 4) irradiation of HSV-1 infected cells. The cell viability was assessed by the reduction of the MTT test and the cytopatic effects by the light microscopy observation. Results: The cell viability of irradiated cultures grown in nutritional deficit, independently of the irradiation numbers, was always significantly smaller than that of non-irradiated cultures grown at the ideal serum concentration condition (10 %). The cell viability of non-infected cells was similar amongst the groups. The number of irradiations influenced the cell growth positively and proportionally to the number of irradiations, except for the 660 nm/3J/cm2 group. Any variation in cytopatic effects was observed amongst the experimental groups, independently of the irradiation numbers at the 3 conditions analyzed. The cell viability of all experimental groups were not altered either by irradiation of the cells or of the virus prior infection. The viability of infected cells prior irradiation was significantly higher than that of non-irradiated cultures when 2 irradiations were done. Conclusion: The experimental conditions for this study demonstrate that the phototherapy is capable of enhancing the growth of Vero cells grown under nutritional deficit conditions, however, not enough to reach the characteristic cell growth of cells grown at the ideal serum concentration condition. The number of irradiations influences the cell growth positive and proportionally, except when the parameter 660 nm and 3 J/cm2 was used. The laser radiation does not change either the susceptibility of the Vero cell to the HSV-1 infection or the HSV-1 virulence; however, prolongs the cell viability of HSV-1 infected cells. Positive benefits of phototherapy that have been reported clinically would appear to be due to host effects unrelated to viral replication in infected cells.

A fototerapia com lasers em baixa intensidade de lesões de herpes simples tem sido demonstrada clinicamente ora prevenindo a formação de vesículas, ora cicatrizando rapidamente as lesões e até aumentando o espaço de tempo entre o aparecimento dessas manifestações recorrentes. No entanto, os mecanismos básicos de ação dos lasers nessas situações são desconhecidos. Dessa forma, o objetivo do trabalho foi realizar ensaios in vitro utilizando células epiteliais em cultivo e culturas do vírus HSV-1 para estudar a interferência do laser em baixa intensidade na infecção do HSV-1. Material e Métodos: Culturas de vírus HSV-1 e de células epiteliais de macaco (linhagem Vero) infectadas ou não infectadas, crescidas em déficit nutricional (2 % de soro fetal bovino - sfb) foram utilizadas. As irradiações foram realizadas com um laser de GaAlAs (660 e 780 nm, área focal de 3,6 mm2). Uma, duas e três irradiações com intervalos de 6 h foram realizadas. Os grupos experimentais foram: Controle: não-irradiadas; 660 nm/ 3 J/cm2 (28 s); 660 nm/ 5 J/cm2 (38 s); 780 nm/ 3 J/cm2 (19 s) e, 780 nm/ 5 J/cm2 (25 s). Os efeitos citopáticos do HSV-1 e a viabilidade celular de culturas irradiadas e controles foram analisadas em 4 condições: 1) irradiação das células epiteliais não infectadas; 2) células epiteliais irradiadas antes da infecção; 3) irradiação dos vírus antes da infecção; 4) irradiação das células previamente infectadas pelo HSV-1. A viabilidade celular foi obtida pelo teste da redução do MTT e os efeitos citopáticos por observação em microscopia de luz. Resultados: A viabilidade celular de culturas irradiadas crescidas em déficit nutricional, independentemente do número de irradiações, foi sempre significantemente menor que aquela de culturas não-irradiadas e crescidas nas condições ideais de concentração de sfb (10 %). A viabilidade celular de culturas não infectadas foi similar em todos os grupos. O número de irradiações influenciou o crescimento celular positiva e proporcionalmente ao número de irradiações, exceto para o grupo 660 nm/ 3 J/cm2. Nenhuma diferença nos efeitos citopáticos foi observada entre os grupos, independentemente do número de irradiações nas 3 condições do estudo. A viabilidade celular de todos os grupos não mudou nem pela irradiação das células nem do vírus antes da inoculação nas células. A viabilidade de células infectadas antes da irradiação foi significantemente maior que o controle quando 2 irradiações foram realizadas. Conclusão: Nas condições deste estudo a radiação laser em baixa intensidade é capaz de aumentar o crescimento de células Vero crescidas em déficit, no entanto, não o suficiente para atingir o crescimento característico dessas células crescidas nas suas condições ideais. O número de irradiações influencia o crescimento das células de forma positiva e proporcional ao número de irradiações, exceto para o parâmetro 660 nm/ 3 J/cm2. A radiação laser não altera nem a susceptibilidade das células à infecção, nem a virulência do HSV-1. No entanto, ela prolonga a viabilidade das células infectadas pelo HSV-1. Efeitos positivos da fototerapia que tem sido relatados clinicamente parecem ser devido a efeitos no hospedeiro não relacionados com a replicação viral nas células infectadas. / Purpose: The clinical effects attributed to phototherapy relative to Herpes simplex lesions have included prevention of lesion formation, speeding the healing of lesions, and decreasing the frequency of recurrent lesions. The mechanisms underlying these findings have not been established yet. The aim of this in vitro study was to analyze the effect of phototherapy on epithelial cells, on HSV-1, and on infected epithelial cells in culture. Material and Methods: Cultures of HSV-1 and infected or non-infected monkey epithelial cells (Vero cell line) grown in deficient media (2 % fetal bovine serum-fbs) were used. The laser irradiation was delivered using a GaAlAs laser (660 and 780 nm, focal spot of 3.6 mm2). One, two and three irradiations with 6 hourintervals were done. The experimental groups were: Control: non-irradiated; 660 nm/3 J/cm2 (28 sec); 660 nm/5 J/cm2 (38 sec); 780 nm/3 J/cm2 (19 sec), and 780 nm/5 J/cm2 (25 sec). The HSV-1 cytopatic effects and the cell viability of irradiated cultures and controls were analyzed in four different conditions: 1) irradiation of noninfected epithelial cells; 2) epithelial cells irradiated prior infection; 3) virus irradiated prior infection; and 4) irradiation of HSV-1 infected cells. The cell viability was assessed by the reduction of the MTT test and the cytopatic effects by the light microscopy observation. Results: The cell viability of irradiated cultures grown in nutritional deficit, independently of the irradiation numbers, was always significantly smaller than that of non-irradiated cultures grown at the ideal serum concentration condition (10 %). The cell viability of non-infected cells was similar amongst the groups. The number of irradiations influenced the cell growth positively and proportionally to the number of irradiations, except for the 660 nm/3J/cm2 group. Any variation in cytopatic effects was observed amongst the experimental groups, independently of the irradiation numbers at the 3 conditions analyzed. The cell viability of all experimental groups were not altered either by irradiation of the cells or of the virus prior infection. The viability of infected cells prior irradiation was significantly higher than that of non-irradiated cultures when 2 irradiations were done. Conclusion: The experimental conditions for this study demonstrate that the phototherapy is capable of enhancing the growth of Vero cells grown under nutritional deficit conditions, however, not enough to reach the characteristic cell growth of cells grown at the ideal serum concentration condition. The number of irradiations influences the cell growth positive and proportionally, except when the parameter 660 nm and 3 J/cm2 was used. The laser radiation does not change either the susceptibility of the Vero cell to the HSV-1 infection or the HSV-1 virulence; however, prolongs the cell viability of HSV-1 infected cells. Positive benefits of phototherapy that have been reported clinically would appear to be due to host effects unrelated to viral replication in infected cells.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Neosporosis is a parasitic disease of wide distribution and great importance to the cattle industry, mainly due to its associated reproductive losses. The life cycle of Neospora caninum typified by the tree know infectious stages: tachyzoites, tissue cysts with bradyzoites, and oocysts. Transmission routes can be horizontal and/or vertical. The vertical transmission or transplacentally is the most frequent form of infection, and an important form of maintain the agent in herds. With aim of to determine the occurrence of anti-Neospora caninum antibodies in serum samples of 260 bovine fetuses, collected in a slaughter in the municipality of Santa Maria, in Rio Grande do Sul, Brazil. For detection antibodies anti-N. caninum indirect fluorescent antibody test was used and immunoglobulin G and M were detected, using a cut-off 1:25. Of the 260 serum samples tested, 15% (39/260) were positive for the presence of anti-N. caninum. Of these, in 38 the presence of IgG where detected (97.4%) and in six IgM were present (10.3%). Five samples (15.4%) tested were positive for both IgG and IgM. The results reaffirming the ability of N. caninum in determine fetal infection. The results presented on the first chapter indicated that the search of IgM anti-N. caninum is of very limited help in the detection of the transplacental infection in cattle. In second chapter, was evaluated the susceptibility to infection by N. caninum in different cell cultures, for the purpose of observe the ability in vitro multiplication this agent. For this, eight cell cultures were tested, among the cell cultures tested, four presented good susceptibility to agent: cell lines VERO (yield of 21.2 tachyzoites/cell) and MA-104 (17.1); primary bovine testicle (16.3) and lung cells (13.6). Primary bovine kidney (8.2 tachyzoites/cell), MDBK (5.1) and RK-13 cell lines (0.4) presented moderate to low sensitivity. No viable tachyzoites were detected in the culture of MDCK cells. These results demonstrate that MA-104 cells present adequate susceptibility to N. caninum compared to VERO cells, which have been largely used to multiply the parasite in vitro. Due to the easy manipulation, quick multiplication and relatively low nutritional equirements, these results indicate that MA-104 cells are adequate for multiplication of N. caninum in vitro. / A neosporose é uma doença parasitária de ampla distribuição e com grande importância para a bovinocultura, principalmente pelas perdas reprodutivas que determina. O ciclo do Neospora caninum caracteriza-se por apresentar três estágios infecciosos: os taquizoítos, os cistos teciduais contendo bradizoítos e os oocistos. Suas rotas de transmissão podem ser horizontal e/ou vertical. A infecção vertical ou transplacentária é a forma mais freqüente de infecção, sendo uma importante forma de manutenção do agente nos rebanhos. Com o objetivo de determinar a ocorrência de anticorpos anti-N. caninum em fetos bovinos, foram coletadas 260 amostras de soro em abatedouro localizado no município de Santa Maria, Rio Grande do Sul, Brasil. Para detecção de anticorpos anti-N. caninum, utilizou-se a técnica de imunofluorescência indireta com a presença de imunoglobulinas G e M (IgG e IgM), sendo analisada com ponto de corte de 1:25. Do número total de amostras testadas, 15% (39/260) foram positivas para anticorpos anti-N. caninum. Destas, em 38 (97,4%) foi detectada a presença de IgG anti-N. caninum e em seis (15,4%) de IgM. Em cinco amostras (12,8%) detectaram-se ambos, IgG e IgM. Os resultados reafirmam a capacidade do N. caninum determinar infecção fetal. Os resultados obtidos no primeiro capítulo desta dissertação permitiram demonstrar que a pesquisa de IgM foi de limitada importância na detecção da infecção via transplacentária em soro fetal bovino. No segundo capítulo, foi avaliada a susceptibilidade à infecção pelo N. caninum em diferentes cultivos celulares, com a finalidade de observar a capacidade de multiplicação deste agente in vitro. Para isto, foram testados oito cultivos, sendo que quatro apresentaram boa susceptibilidade a multiplicação pelo N. caninum: células VERO (produção de 21,2 taquizoítos/célula), MA-104 (17,1), cultivo primário de testículo (16,3) e pulmão bovino (13,6). O cultivo primário de rim bovino (8,2), células MDBK (5,1) e RK-13 (0,4) apresentaram baixa sensibilidade, enquanto células MDCK não produziram taquizoítos viáveis. Os resultados obtidos demonstram que as células MA-104 apresentaram susceptibilidade semelhante a das células VERO linhagem tradicionalmente utilizada para o cultivo deste protozoário. Pela facilidade de cultivo e rápida multiplicação, menor exigência nutricional e produção de taquizoítos em níveis semelhantes às células VERO, as células MA-104 demonstraram ser adequadas para a manutenção e multiplicação do N. caninum in vitro.