CD146 est une molécule d’adhésion appartenant à la superfamille des immunoglobulines qui existe sous trois formes, deux isoformes membranaires et une forme soluble. Elle a été découverte initialement dans les cellules de mélanome humain où son expression est un marqueur de mauvais pronostic. Depuis elle a été décrite dans de nombreux types de cancer (prostate, sein, rein, poumon non à petites cellules, …). Elle est aussi exprimée sur l’ensemble de l’endothélium vasculaire.Dans la première partie de ce travail, nous avons montré que CD146 soluble provient du clivage de l’ectodomaine des isoformes longue et courte de CD146 respectivement par ADAM 10 et Tace (ADAM 17). De plus, nous avons identifié deux autres isoformes de CD146 soluble provenant d’un épissage alternatif, I10-sCD146 et I5-13-sCD146. Ces différentes formes de CD146 soluble agissent sur l’endothélium vasculaire en stimulant l’angiogenèse.Dans la seconde partie du travail, nous avons généré un anticorps anti-CD146 capable de détecter CD146 dans les cellules cancéreuses mais pas dans les cellules qui l’expriment dans les conditions physiologiques (cellules endothéliales, cellules musculaires lisses). Nous avons montré que cet anticorps présente un intérêt diagnostique et un intérêt thérapeutique. Son mécanisme d’action implique une internalisation de la molécule CD146, ce qui permet d’envisager une utilisation en médecine personnalisée. / CD146 is an adhesion molecule belonging to the immunoglobulin superfamily that exists as three forms, two membrane isoforms and a soluble form. It was originally discovered in human melanoma cells where its expression is a marker of poor prognosis. Since it has been described in many types of cancer (prostate, breast, kidney, non-small cell lung cancer, ...). It is also expressed throughout the vascular endothelium.In the first part of the study, we showed that soluble CD146 originates from the shedding of the ectodomain of the long and short isoforms of CD146 by ADAM 10 and Tace (ADAM 17) respectively. In addition, we identified two other isoforms of soluble CD146 generated by alternative splicing, I10-sCD146 and I5-13-sCD146. These different forms of soluble CD146 display effects on the vascular endothelium by stimulating angiogenesis.In the second part of the study, we generated an anti-CD146 antibody able to detect CD146 in cancer cells but not in cells that express the molecule in physiological conditions (endothelial cells, smooth muscle cells). We have shown that this antibody displays both diagnostic and therapeutic interests. Its mechanism of action involves the internalization of CD146, allowing a potential use in personalized medicine.

L’athérosclérose est une maladie inflammatoire chronique de la paroi artérielle, caractérisée par une infiltration des leucocytes consécutive à l’accumulation de lipoprotéines au sein de l’intima. Les molécules d'adhésion jouent un rôle important dans la progression de l’athérosclérose par leur implication dans l’infiltration des leucocytes au niveau du site de lésion. CD146 est une molécule d’adhésion présente sur les cellules endothéliales et sur certaines populations leucocytaires. Il a été récemment montré une augmentation de sa forme soluble lors de l’athérosclérose et de ses complications. De plus, son expression augmente au sein des plaques d’athérosclérose. En revanche, son implication dans la formation de la plaque d’athérosclérose n’a jamais été étudiée.Nous avons évalué le rôle in vivo de CD146 grâce au modèle murin APOEKO/CD146KO. Nous montrons que CD146 joue un rôle protecteur dans l’athérosclérose en inhibant la sécrétion de la chimiokine RANTES. La régulation de RANTES médiée par CD146 est dépendante de la voie VEGFR2-p38/MAPK. Dans une seconde étude, nous montrons que l’implication de CD146 dans l’athérosclérose est dépendante du régime alimentaire. Enfin dans une étude pilote, nous proposons une nouvelle stratégie thérapeutique de l’athérosclérose via l’injection de microvésicules CD146+. Nous montrons que l’apport du CD146 membranaire conduit à une réduction de RANTES, des neutrophiles circulants et de la plaque d’athérosclérose.En conclusion, l’ensemble de ces travaux apporte de nouvelles données dans la compréhension de la pathologie de l’athérosclérose en identifiant CD146 comme une nouvelle cible thérapeutique dans le traitement de l’athérosclérose. / Atherosclerosis is a chronic inflammatory disease of the arterial wall characterized by the leukocyte infiltration consecutive to the accumulation of lipoproteins within the intima. Adhesion molecules play an important role in the progression of atherosclerosis since they are involved in the leukocyte infiltration at the lesion site. CD146 is an adhesion molecule detected on all endothelial cells of the vascular tree and also expressed on some subpopulations of leukocytes. Recently, few studies have shown that soluble form of CD146 is increased in atherosclerosis and its clinical complications. In addition, CD146 expression increases in atherosclerotic plaque. However, its involvement in atherosclerotic plaque formation has never been investigated. We evaluate the in vivo role of CD146 thanks to APOE KO/CD146 KO mice model. We demonstrate that CD146 plays a protective role in atherosclerosis by inhibiting the secretion of the RANTES chemokine responsible for neutrophils and monocytes recruitment within atherosclerotic plaque. RANTES regulation mediated by CD146 is dependent on VEGFR2-p38/MAPK pathway. In a second study, we show that the involvement of CD146 in atherosclerosis is dependent on the diet. Finally, in a pilot study, we propose a new therapeutic strategy for atherosclerosis through the injection of CD146 + microvesicles. We demonstrate that bringing CD146 membrane isoform through microvesicles leads to a reduction of RANTES, circulating neutrophils and atherosclerotic plaque.Overall, this work provides advances in atherosclerosis for a better understanding of its mechanisms by identifying CD146 as a new therapeutic target in the treatment of atherosclerosis.

CD146 est une glycoprotéine appartenant à la superfamille des immunoglobulines, exprimée de manière ubiquitaire sur l'endothélium, principalement au niveau des jonctions. Une forme soluble de CD146 (CD146s) est générée par clivage de la forme membranaire par un mécanisme dépendant des métalloprotéases. CD146 et CD146s interviennent dans le maintien de l'intégrité de l'endothélium, la transmigration endothéliale des monocytes et possèdent des propriétés angiogéniques. Les concentrations sériques de CD146s varient au cours de pathologies liées à une atteinte vasculaire. Notre travail a pour but d'étudier l'implication de CD146s dans deux contextes indépendants: la physiopathologie obstétricale et la sclérodermie systémique. La première partie de notre travail a consisté à analyser le rôle de la molécule au cours de la grossesse. Dans le placenta normal, l'expression de CD146 est restreinte aux trophoblastes possédant des capacités de migration et d'invasion, les trophoblastes extra-villeux (EVT). Ces EVT remodèlent les artères utérines spiralées afin d'établir une circulation foeto-maternelle. Au cours de ce processus, appelé pseudo-vasculogenèse, les EVT acquièrent un phénotype endothélial. De plus, l'expression placentaire de CD146 et les concentrations de CD146s varient au cours de grossesses pathologiques. L'hypothèse de notre travail est que CD146s régulerait les capacités invasives des EVT et interviendrait dans le développement placentaire. / CD146 is a member of the immunoglobulin superfamily. This is a membrane glycoprotein localized at the endothelial junction. CD146 also exists as a soluble form in the plasma (sCD146), generated by proteolysis of membrane CD146 through a mechanism involving metalloproteinases. CD146 and sCD146 are involved in endothelium integrity, monocyte transmigration and display angiogenic properties. CD146s level variations are observed in vascular pathologies. The aim of our work was to investigate the role of sCD146 in obstetrical physiopathology and in systemic sclerosis. In a first part, the involvement of our molecule was analyzed during pregnancy. In normal placenta, CD146 is expressed in intermediate and extra-villous trophoblasts (EVT), presenting migratory and invasive properties. EVT invade the spiral arteries and convert from an epithelial to an endothelial phenotype during the pseudo-vasculogenesis process. Moreover, CD146 placental expression and sCD146 levels are modified during pathologic pregnancies. We hypothesized that sCD146 could regulate EVT invasiveness and placental development. Using placental villous explants, we demonstrated that sCD146 inhibits EVT outgrowth. Consistently, we showed that sCD146 inhibits the ability of EVT cells (HTR8/SVneo) to migrate, invade and form tubes in Matrigel®. The involvement of sCD146 in human pregnancy was investigated by evaluation of sCD146 levels in 50 pregnant women. We observed physiological down-regulation of sCD146 throughout pregnancy. These results prompted us to investigate the effect of prolonged sCD146 administration in a rat model of pregnancy.

Le myélome multiple est une néoplasie plasmocytaire caractérisée par une prolifération clonale de plasmocytes malins au niveau de la moelle osseuse. Il correspond à environ 13% des cancers hématologiques et la survie médiane à 10 ans est d’environ 30%. Le CD146 est une molécule d’adhésion (CAM) qui est surtout exprimée au niveau des jonctions des cellules endothéliales. A l’origine, le CD146 a été identifié comme un marqueur tumoral du mélanome (MCAM) et, par la suite, il a été étudié dans de nombreux cancers tels que les cancers du rein, du sein, du poumon, les cancers gastriques et les ostéosarcomes. Son expression est le plus souvent associée à un mauvais pronostic. Nous avons montré pour la première fois, que cette molécule s’exprimait aussi à la surface des plasmocytes normaux, cette expression apparaissant tardivement au cours de la différenciation B. Nous avons montré que cette expression était modulée sur des plasmocytes tumoraux de gammapathie monoclonale avec une forte diminution voire le plus souvent une disparition sur les plasmocytes malins de Myélome Multiple (MM). De plus, nous avons montré que CD146 constituait un facteur de bon pronostic indépendant dans cette maladie et qu’il était un des mécanismes permettant à la cellule tumorale d’avoir un avantage en termes de survie. Un second axe de recherche a consisté à la mise en place d’une technique de détection des cellules endothéliales circulantes dans le sang et in situ dans la moelle osseuse dans le myélome multiple afin de disposer d’un outil permettant l’étude de l’angiogenèse dans cette pathologie ainsi que son suivi en clinique. / Multiple Myeloma is a neoplastic plasma-cell disorder that is characterized by clonal proliferation of malignant plasma cells in the bone marrow microenvironment. It accounts for approximately 13% of hematologic cancer and the ten year survival rate is approximately 30%. CD 146 is an adhesion molecule (CAM) that is essentially expressed at endothelial junctions. At first, CD 146 was identified as a tumor marker of melanoma. It subsequently was studied in conjunction with cancer of the kidney, the breast, the lung, as well as gastric cancers and osteosarcomas. Its expression is most often associated with a bad prognosis. For the first time we have shown that this molecule is expressed at the surface of normal plasma cells, this expression appearing during the late stages of B cell differentiation. We have demonstrated that this expression was modulated on Multiple Myeloma (MM) plasma cells, and and was significantly decreased or disappeared in malignant plasma cells. Moreover, we have shown that CD146 was an independent good prognostic marker and that it was implicated in mechanisms that confers a survival advantage to the tumor cell. The next part of the project consisted to set up a detection protocol for circulating endothelial cells in blood and bone marrow in multiple myeloma in order to develop a tool for studying angiogenesis in this pathology which can also be used during therapeutic monitoring.

京都大学 / 0048 / 新制・課程博士 / 博士(医学) / 甲第19965号 / 医博第4155号 / 新制||医||1017(附属図書館) / 33061 / 京都大学大学院医学研究科医学専攻 / (主査)教授 野田 亮, 教授 伊達 洋至, 教授 山下 潤 / 学位規則第4条第1項該当 / Doctor of Medical Science / Kyoto University / DFAM

京都大学 / 新制・課程博士 / 博士(医学) / 甲第23800号 / 医博第4846号 / 新制||医||1058(附属図書館) / 京都大学大学院医学研究科医学専攻 / (主査)教授 高橋 淳, 教授 髙折 晃史, 教授 辻川 明孝 / 学位規則第4条第1項該当 / Doctor of Medical Science / Kyoto University / DFAM

Perivascular cells of microvascular niches are the prime candidates for being a reservoire of mesenchymal stem cell (MSC)-like cells in many tissues and organs that could serve as a potential source of cells and a target of novel cell-based therapeutic approaches. In the present study, by utilising typical markers of pericytes (neuronal-glial antigen 2, NG2, a chondroitin sulphate proteoglycan) and those of MSCs (CD146 and CD105) and primitive pluripotent cells (sex-determining region Y-box 2, Sox2), the phenotypic traits and the distribution of murine and rat retinal perivascular cells were investigated in situ. Our findings indicate that retinal microvessels of juvenile rodents are highly covered by NG2-positive branching processes of pericytic (perivascular) cells that are less prominent in mature capillary networks of the adult retina. In the adult rodent retinal vascular bed, NG2 labeling is mainly confined to membranes of the cell body resulting in a pearl-chain-like distribution along the vessels. Retinal pericytes, which were identified by their morphology and NG2 expression, simultaneously express CD146. Furthermore, CD146-positive cells located at small arteriole-tocapillary branching points appear more intensely stained than elsewhere. Evidence for a differential expression of the two markers around capillaries that would hint at a clonal heterogeneity among pericytic cells, however, is lacking. In contrast, the expression of CD105 is exclusively restricted to vascular endothelial cells and Sox2 is detected neither in perivascular nor in endothelial cells. In dissociated retinal cultures, however, simultaneous expression of NG2 and CD105 was observed. Collectively, our data indicate that vascular wall resident retinal pericytes share some phenotypic features (i.e. CD146 expression) with archetypal MSCs, which is even more striking in dissociated retinal cultures (i.e. CD105 expression). These findings might have implications for the treatment of retinal pathologies.

[Truncated abstract] Melanoma cell adhesion molecule (MCAM) is highly expressed in more than 70% of metastatic melanoma and is correlated with invasive potential. However, the specific contribution MCAM makes to invasion and metastasis in melanoma is not clear. In this study, I have demonstrated that transfection of MCAM into MCAM-negative melanoma and CHO cells leads to changes in cell shape, and the modulation of cell-to-cell and cell-matrix interactions. MCAM positive cells were slower to spread on collagen type I, collagen type IV and laminin 1 than MCAM negative cells, although these differences were not apparent on vitronectin, fibronectin and laminin 10. In contrast, MCAM expression had little effect on cell adhesion to any of the matrices tested. MCAM positive (compared to negative) cells also showed morphological changes and a rearrangement of the actin cytoskeleton when plated on a matrix containing laminin 5. Taken together, these data suggest that MCAM expression modulates β1-integrinmediated spreading on matrix, but has little effect on αvβ3-mediated cell-matrix interactions. As this study provided little evidence to suggest that MCAM transfection altered β1 integrin expression levels on melanoma cells, it is proposed that a competitive interaction between the cytoplasmic domains of MCAM and β1 integrin may affect mature focal adhesion assembly. MCAM expression in melanoma cells was also associated with decreased cell movement over matrix into a scratch-wound site and an increased tendency to form cell cords on Matrigel. These two assays gauge the propensity of a cell to engage in cell-cell versus cell-matrix interactions, and suggest that MCAM positive cells favour cell-cell adhesion. Interestingly, MCAM transfection was also associated with an increased ability of melanoma cells to migrate through a basement membrane towards a chemoattractant. ... Analysis of the intracellular domain of MCAM revealed the presence of tyrosine and dileucine endocytosis signals. Interestingly, disruption of these two motifs did not seem to impair the internalization of MCAM from the cell surface. The di-leucine motif, however, was necessary for the recycling of MCAM back to the surface following endocytosis. Lastly, MCAM was found to exists as dimers within the cell membrane in the absence of ligand, although the exact location of the dimerization motif is not yet clearly defined. Collectively, findings from my study suggest: MCAM expression in melanoma cells facilitates cell-cell interactions, whilst concomitantly modulating cell-matrix interactions. MCAM transfection also leads to enhanced migration of melanoma cells through a basement membrane. Thus, MCAM expression may increase the ability of melanoma cells to migrate as a collective, a feature of highly invasive cancer. The intracellular domain of MCAM interacts with ApxL2, a novel member of the Shroom family of actin-binding proteins. It is likely that ApxL2 links a proportion of MCAM within the cell to the actin cytoskeleton, contributing to cell shape determination and other processes, such as migration. MCAM exists as dimers on the cell surface and is internalized at least partially by a clathrin-mediated mechanism.

Objectifs: Chez les patients atteints de sclérose en plaques (SEP), des lymphocytes pro-inflammatoires utilisent des molécules d’adhérence afin de parvenir à traverser la barrière hémo-encéphalique (BHE) et former des lésions multifocales dans le système nerveux central (SNC). Dans le contexte de la SEP, les lymphocytes CD4 auto-agressifs polarisés en TH17 (sécrétant de l’IL-17) sont reconnus comme contribuant à la formation des lésions. Le rôle des lymphocytes CD8 TC17 est quant à lui encore mal défini. L’identification de marqueurs de surface spécifiquement exprimés par les lymphocytes TH17 et TC17 faciliterait la caractérisation de ces sous-populations pathogéniques et fournirait de nouvelles cibles thérapeutiques pour traiter la SEP. Méthodologie: Nous avons identifié MCAM lors d’analyses protéomiques de cellules endothéliales de la BHE humaine et de lymphocytes T humains. Nous avons caractérisé le phénotype et la fonction de ces cellules exprimant MCAM ex vivo, in vitro, in situ et in vivo, à partir de matériel obtenu de témoins (contrôles), de patients atteints de SEP et d’animaux atteints d’encéphalomyélite auto-immune expérimentale (EAE). Résultats: MCAM est exprimé à la fois par les cellules endothéliales de la BHE humaine et par une sous-population de lymphocytes T effecteurs mémoire CD161+ et CCR6+. Les lymphocytes CD4 et CD8 MCAM+ expriment plus d’IL-17, IL-22, GM-CSF et granzyme B (Gz B) que les lymphocytes MCAMneg. De plus, l’expression de MCAM est fortement augmentée à la surface des lymphocytes T CD4+ et CD8+ lors des poussées de SEP, alors que les traitements immunomodulateurs en diminuent l’expression. In situ, l’expression de MCAM par les cellules endothéliales de la BHE est plus marquée au site des lésions de SEP et d’EAE, et on retrouve des lymphocytes CD4 et CD8 MCAM+ au sein de ces infiltrats périvasculaires du SNC. In vitro, les lymphocytes CD8 MCAM+ causent plus de mort oligodendrocytaire et bloquer MCAM diminue la transmigration des CD8 TC17 et des CD4 TH17 à travers les cellules endothéliales de la BHE humaine. In vivo, dépléter les lymphocytes CD4 ou CD8 MCAM+ améliore les signes cliniques de l’EAE par transfert. Par ailleurs, l’expression de MCAM est régulée à la hausse à la surface des lymphocytes CD4 et CD8 de la souris transgénique TCR1640, un modèle animal d’EAE spontanée. Finalement, bloquer MCAM atténue les déficits neurologiques chroniques aussi bien du modèle d’EAE induite avec le MOG35-55 que du modèle d’EAE spontanée. Conclusion: Nos données démontrent que les lymphocytes encéphalitogéniques produisant de l’IL-17 et présentant une capacité effectrice et migratoire marquée expriment MCAM. MCAM pourrait servir de biomarqueur en SEP et constituer une cible thérapeutique valable pour traiter les conditions neuroinflammatoires. / Objective: In multiple sclerosis (MS), pro-inflammatory lymphocytes use adhesion molecules to cross the blood-brain barrier (BBB) and accumulate in central nervous system (CNS) lesions. CD4 T lymphocytes polarized into auto-aggressive encephalitogenic TH17 (IL-17 secreting) are known to partake in MS lesion formation. Much less is known about the role of CD8 TC17. Identification of specific surface markers and adhesion molecules expressed by TH17 and TC17 lymphocytes would allow further characterization of these pathogenic subsets and would provide new therapeutic targets in MS. Methodology: We identified MCAM in a proteomic screen of human BBB endothelial cells (ECs) and on a subset of T lymphocytes. We characterized the phenotype and function of MCAM-expressing cells ex vivo, in vitro and in situ using human and mouse material obtained from controls, MS subjects and Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) animals. Results: MCAM is expressed by human BBB-ECs and by human effector memory CD161+ and CCR6+ T lymphocytes. Both CD4 and CD8 MCAM+ lymphocytes express more IL-17, IL-22, GM-CSF and Gz B than MCAMneg lymphocytes. Moreover, MCAM is strikingly up-regulated in human on CD4+ and CD8+ T lymphocytes during MS relapses, while treatment decreases MCAM expression. In situ, MCAM+ CD8 and CD4 T lymphocytes are present in perivascular infiltrates of MS and EAE CNS specimens, while MCAM expression is up-regulated on BBB-ECs within lesions. In vitro, MCAM+ CD8 T lymphocytes display higher killing capacity of oligodendrocytes, and MCAM blockade reduces CD8 TC17 and CD4 TH17 transmigration across human BBB-ECs. In vivo, depletion of MCAM+ cells from reactivated CD4 T lymphocytes and from CD8 T lymphocytes decreases clinical symptoms in adoptive transfer EAE. Furthermore, expression of MCAM is up-regulated on CD4 and CD8 T lymphocytes in the TCR1640 transgenic mice, a model of spontaneous EAE. Finally, blocking MCAM in both MOG35-55-induced and spontaneous primary progressive EAE attenuates chronic neurological deficits. Conclusions: Our data demonstrate that encephalitogenic IL-17-producing lymphocytes with high effector and migratory capacity express MCAM, and that MCAM could serve as a biomarker for MS and a valuable target for the treatment neuroinflammatory conditions.

Les tumeurs solides sont infiltrées par des cellules immunes (TIIC) dont la nature, la fonction et la composition varient d’un patient à l'autre. Ces cellules inflammatoires influencent l'invasion tumorale en contrôlant la croissance et le potentiel métastatique d’une tumeur. Ainsi, il est proposé d’utiliser cette infiltration comme outil diagnostic et pronostic de routine. Certaines cellules sont bien connues pour jouer un rôle important dans le contrôle de la progression tumorale, comme c’est le cas des lymphocytes T cytotoxiques CD8+ alors que d’autres possèdent un rôle contradictoire. Étant donné la dépendance des tumeurs sur l’équilibre entre ces différentes cellules, il est important d’identifier les fonctions précises des cellules immunes au sein de la tumeur. De nombreuses études sont réalisées afin d’identifier des marqueurs descriptifs du phénotype et la fonction des cellules immunes dans la tumeur. Ce projet de doctorat se divise en deux parties : 1- Identifier la méthode de désagrégation des tissus tumoraux altérant le moins la biologie des TIIC pour leur caractérisation. 2- Caractériser l’expression de la molécule d’adhérence CD146 dans les TIIC et en identifier l’origine. L’identification de marqueurs pour la caractérisation phénotypique et fonctionnelle des TIIC a été réalisée, entre autres, par la détection de protéines exprimées par la cellule. Dans la première partie de ce projet, nous avons démontré que les méthodes utilisées pour désagréger les tissus tumoraux dans le but d’isoler les TIIC induisent des changements dans la biologie de ces cellules ce qui peut fausser les conclusions qui en dérivent. Nous avons donc comparé l'impact de trois méthodes de désagrégation : une dissociation mécanique utilisant la MédimachineTM et deux digestions enzymatiques utilisant une collagénase de type I seule ou combinée à de la collagénase de type IV et de la DNase I de type II. Nous nous sommes intéressés à l'effet de ces méthodes sur des paramètres tels que la viabilité cellulaire, l’altération des protéines de surface et la capacité des cellules à proliférer. Nous avons démontré que ces méthodes affectent la viabilité des cellules de manière comparable, alors que la détection de certaines protéines de surface et la capacité de proliférer est réduite/inhibée par les traitements enzymatiques. Nous concluons qu’une méthode mécanique utilisant la MédimachineTM est mieux adaptée à la caractérisation des TIIC afin de conserver leurs propriétés. Dans la deuxième partie de notre projet, nous avons adapté cette méthode à la caractérisation des TIIC. Nous avons porté une attention particulière à la molécule d’adhérence CD146 dont l’implication dans la migration des cellules immunes à travers l’endothélium vers les sites d’inflammation est de plus en plus étudiée dans les maladies autoimmunes. Nous avons mis en évidence une augmentation des proportions de cellules immunes exprimant CD146 dans les tumeurs comparativement au sang de patients de cancers. Cette expression est induite par les cellules tumorales tout en étant accrue par la nécrose de celles-ci. Nous démontrons que ces cellules sont majoritairement des lymphocytes T CD4+ présentant un profil immunosuppressif. En conclusion, nos résultats suggèrent que CD146 participe à la mise en place du contexte immunitaire dans la tumeur et augmente la capacité de migration des lymphocytes T CD4+. L’induction par les cellules tumorales de cette molécule d’adhérence dans les cellules suppressives pourrait contribuer aux mécanismes immunorégulateurs mis en place par la tumeur. CD146 pourrait être un marqueur d’intérêt pour l’identification des cellules immunosuppressives et pour le développement de nouvelles thérapies. / Solid tumors are infiltrated by immune cells (TIIC), which vary in function and proportion from patient to patient. These inflammatory cells may contribute positively or negatively to tumor invasion, by controlling the growth and the metastatic potential of tumors. It has therefore been proposed to use infiltration as a diagnostic and prognosic tool. Certain cells play an important role in the control of tumor progression, as is the case of cytotoxic CD8+ T lymphocytes, whereas others present an ill-defined role. Since the progression of tumors depends on the balance between these cell types, it is important to identify their specific functions within the tumor. Many studies have therefore focused on identifying markers, which are suggestive of phenotype and function of immune cells in the tumor. This project is divided into two parts: 1 – The identification of a tumor tissue disaggregation method which induced minimal effects on TIIC biology. 2 – The characterization of the expression of the adhesion molecule CD146 in TIIC and understand its regulation. Marker identification for phenotypic and functional characterization of TIIC is carried out by detection of cell proteins. In the first part of this project, we showed that methods used to disaggregate tumor tissue in order to isolate TIIC induce changes in cell biology, which may alter results. We thus compared the effects of three disaggregation methods: mechanical disruption using MedimachineTM and two enzymatic digestions using a type I collagenase alone or combined with type IV collagenase and type II DNase I, on parameters such as cell viability, cell surface marker detection and cell proliferation. We showed that these methods affect cell viability in a comparable manner, whereas the detection of certain surface proteins and proliferative capacity of cells was reduced by enzymatic treatments. We concluded that a mechanical method using MedimachineTM is more suitable for the characterization of TIIC. In the second part of our project, we adapted this method to the characterization of TIIC. We focused on CD146, an adhesion molecule that was shown to be involved in immune cell migration in autoimmune disease. We demonstrated an increase of CD146+ immune cells in tumors compared to the blood of the same patients. This expression was shown to be induced by tumor cells and increased by necrosis. We showed that these cells are predominantly CD4+ T lymphocytes with an immunosuppressive profile. In conclusion, our results suggest that CD146 is involved in the establishment of the tumor immune environment and may increase the migratory capacity of CD4+ T cells toward tumors. Tumor cell induction of this adhesion molecule by suppressor cells could contribute to the immunoregulatory mechanisms established by tumors. CD146 may be a useful marker for the identification of immunosuppressive cells and development of new therapies.