Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 795172 bytes, checksum: d8766c35c169f6531bce61562c21c96d (MD5) Previous issue date: 2003-08-29 / The capybara, an herbivorous rodent of simple stomach, has been pointed out in the market of meats for having an excellent zootechnical performance. It has appreciated meat, valuable carcass, high reproductive potential and presents efficient food usage. The last item must be a consequence of the cecotrophy, which makes the cecum, an important organ in the digestive physiology of such animal. To carry out this study, ten adult capybaras from Cachoeirinhas` Farm in Viçosa-MG, were used. From them it was obtained data regarding the anatomy, histology and quantification of endocrine cells and nervous ganglia of the cecum. Fragments of the apex, body and base of the cranial taenia and of the area of ileocecal transition were collected. Macroscopically, the cecum is voluminous, sacciform, presenting a medium volumetrical capacity of 3,6 ± 1,7 l, and a medium length of 70 ± 16,2 cm completing a total of 25% of whole large intestine that measured 2,8 ± 0,6 m on the average. The cecum histologically showed straight tubulous glands with average length of 0,2 ± 0,02 mm, of prismatic simple mucous secretor epithelium, a highly vascularized submucosal tunic with nervous ganglia observed clearly, a developed and with numerous myenterics ganglia muscular tunic. Quantitatively, the cecum presented a medium number of 2,0 ± 1,0 submucosals ganglia/mm2, 6,7 ± 3,0 myenterics ganglia/mm2, 173,1 ± 60,8 argyrophylics cells/mm2, 207,8 ± 68,3 argentaffins cells/mm2 and 55,7 ± 27,4 serotonin immunoreactive cells/mm2. / A capivara, um roedor herbívoro de estômago simples, vem sendo apontada no mercado de carnes por ter um excelente desempenho zootécnico. Sua carne é apreciada e sua carcaça valiosa, apresenta elevado potencial reprodutivo e manifesta eficiente aproveitamento dos alimentos. Este, provavelmente seja conseqüência da realização da cecotrofia, que faz do ceco, importante órgão na fisiologia digestiva deste animal. Neste trabalho, utilizaram-se dez capivaras adultas, provenientes do criatório da Fazenda Cachoeirinha localizada no município de Viçosa-MG, das quais obtiveram-se dados a respeito da anatomia, histologia e quantificação de células endócrinas e gânglios nervosos do ceco. Foram coletados fragmentos do ápice, corpo, base, da tênia cranial e da região de transição íleo-cecal. Macroscopicamente, o ceco é volumoso, saculado, apresentando capacidade volumétrica média de 3,6 ± 1,7 l e comprimento médio de 70 ± 16,2 cm correspondente a 25% do intestino grosso com média de 280 ± 60 cm. Histologicamente, o ceco apresentou glândulas simples tubulosas de tamanho médio de 0,2 ± 0,02 mm, com epitélio simples cilíndrico secretor de muco, uma única submucosa altamente vascularizada contendo gânglios nervosos de fácil visualização, uma túnica muscular desenvolvida e com numerosos gânglios mioentéricos. Quantitativamente o ceco apresentou um número médio de 2,0 ± 1,0 gânglios submucosos/mm2, 6,7 ± 3,0 gânglios mioentéricos/mm2, 173,1 ± 60,8 células argirófilas/mm2, 207,8 ± 68,3 células argentafins/mm2 e 55,7 ± 27,4 células imunorreativas à serotonina/mm2.

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Several studies involving Trypanosoma cruzi infection have shown anti-tumor characteristics of the parasite and some of its proteins. A protein with a molecular weight of 21kDa was sequenced, cloned and characterized as being a protein secreted by the parasite which is directly involved in cell invasion by amastigote and trypomastigote forms, this protein was named P21. Studies carried out with recombinant form of this protein, rP21 shows that it has some biological activities which may some beneficial role of this protein in inflammatory processes and even the development of tumors. Breast cancer is the second most common cancer in the world and the experimental model used most commonly to represent is the Ehrlich tumor. This study aimed to evaluate the effects of recombinant protein rP21 of T. cruzi in Ehrlich tumor cells. Initially, the cell viability was analyzed using Ehrlich cells and peritoneal macrophages from BALB/c mice exposed to different concentrations of rP21 in different exposure times and both types of cells remained viable at all times and the protein concentrations. The effect of this chemoattractant protein was evaluated by an invasion assay, which demonstrated that the protein was not able to induce cell invasion Ehrlich, however, the protein was able to induce the invasion of peritoneal macrophages. After that, the capacity of the polymerization of actin cytoskeleton by rP21 was analyzed, showing that the protein is capable of polymerization cytoskeleton in a dose-dependent manner. It was also seen that the solid Ehrlich tumor model, treatment with rP21 shown to inhibit tumor growth. From these features, the biological activities of the protein rP21 are restated, showing the possibility of use of the protein in the anti-tumor treatment. / Vários estudos envolvendo infecção por Trypanosoma cruzi têm mostrado características anti-tumorais tanto do parasita quanto de algumas de suas proteínas. Uma proteína com peso molecular de 21kDa foi sequenciada, clonada e caracterizada sendo uma proteína secretada pelo parasita e que está envolvida diretamente na invasão celular por formas amastigota e tripomastigota, essa proteína foi denominada de P21. Estudos desenvolvidos com a forma recombinante dessa proteína, rP21 mostra que ela apresenta algumas atividades biológicas, o que poderia garantir algum papel benéfico dessa proteína em processos inflamatórios e até mesmo no desenvolvimento de tumores. O câncer de mama é o segundo tipo mais comum de câncer no mundo, sendo que o modelo experimental utilizado mais comumente para representá-lo é o tumor de Ehrlich. Assim, este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos da proteína recombinante rP21 de T. cruzi em células de tumor de Ehrlich. Inicialmente, a viabilidade celular foi analisada utilizando células de Ehrlich e macrófagos peritoneais de BALB/c expostos a diferentes concentrações de rP21 em diferentes tempos de exposição, sendo que ambos os tipos celulares permaneceram viáveis em todos os tempos e concentrações da proteína. O efeito quimioatraente desta proteína foi avaliada por um ensaio de invasão, que demonstrou que a proteína não foi capaz de induzir a invasão de células de Ehrlich, no entanto, a proteína foi capaz de induzir a invasão de macrófagos peritoneais. Após isso, a capacidade de polimerização do citoesqueleto de actina pela rP21 foi analisada, mostrando que a proteína apresenta a capacidade de polimerização do citoesqueleto de uma forma dose-dependente. Também foi visto que no modelo de tumor sólido de Ehrlich, o tratamento com a rP21 demonstrou inibir o crescimento tumoral. A partir dessas características, as atividades biológicas da proteína rP21 são reafirmadas, mostrando a possibilidade de um emprego da proteina no tratamento anti-tumoral. / Mestre em Biologia Celular e Estrutural Aplicadas

Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasite that presents different strain types and degrees of virulence. The strains are classificated like clonal or typical and exotic or atypical. This parasite presents several evasion mechanisms, which guarantees the successful replication in the host cell and, between these mechanisms, there is ability to modulate apoptosis of infected cells as well of cells in the microenvironment of infection. The present work aimed to evaluate de ability of two atypical strains of T. gondii (Udi1CH-05 and Udi2CH-05) on modulation of apoptosis in BeWo cells, the susceptibility of these cells by infection, as well as the influence of those strains on the standard of secretion of cytokines by the trophoblastic cells lineage. These parameters were evaluated from the perspective of the immediate origin of the strains derived directly from cell culture or from animals and maintained for a short period in culture (here called Calomys callosus / culture). The Udi1CH-05 culture category upregulated apoptosis from 12 hours post infection, and from 2 hours of infection by Udi2CH-05, culture category, apoptosis was uncontrolled in BeWo cells. The condition C. callosus / culture of both strains didn t control apoptosis when compared to uninfected control. BeWo cells infected with Udi2CH-05, C. callosus / culture category produce high levels of IL-12 in the early stages of infection, suggesting a typical inflammatory response. Levels of TNF-α were higher in the early stages of infection and with a gradual decrease production, coinciding with failure to induce apoptosis when cells were infected BeWo Udi2CH-05, C. callosus / culture category. The levels of IL-10 found during infection of BeWo cells by Udi1CH-05 indicate that other cytokines may be involved in the control of infection, whereas this cytokine acts in controlling the immune response induced by infection of cells by BeWo Udi2CH-05, C. callosus / culture category. The production of TGF-β detected by infection Udi1CH-05 C. callosus / culture or Udi2CH-05 of both categories, shows that this cytokine acts in the immunoregulation of infected cells, whereas infection by Udi1CH-05, culture category, suggests that other anti-inflammatory cytokines can participate in immunoregulation, since the increase the apoptosis rate coincided with the decreased production of TGF-β. / Toxoplasma gondii é um parasito intracelular obrigatório que apresenta diferentes tipos de cepas e graus variados de virulência. As cepas são classificadas como clonais e cepas exóticas ou atípicas. Este parasito apresenta diversos mecanismos de evasão, o que garante o sucesso na replicação na célula hospedeira e, entre estes mecanismos, destaca-se habilidade de modular a apoptose tanto de células infectadas quanto de células presentes no microambiente da infecção. O presente trabalho objetivou avaliar a habilidade de duas cepas atípicas de T. gondii (Udi1CH-05 e Udi2CH-05) em modular a apoptose de células BeWo, a susceptibilidade destas células a este parasito, bem como a influência de tais cepas no padrão de secreção de citocinas por esta linhagem de células trofoblásticas. Estes parâmetros foram avaliados sob a perspectiva da procedência imediata das cepas oriundas diretamente de cultura celular ou oriundas de animais e mantidas por curto período em cultura (aqui denominada Calomys callosus/cultura). A categoria cultura de Udi1CH-05 modulou positivamente a apoptose a partir de 12 horas de infecção, e a partir de 2 horas de infecção por Udi2CH-05, categoria cultura a apoptose não foi controlada em células BeWo. A condição C. callosus/cultura de ambas as cepas não controlou a apoptose quando comparado ao controle não infectado. As células BeWo infectadas com Udi2CH-05, categoria C. callosus/cultura produzem altos níveis de IL-12 nos estágios iniciais da infecção, sugerindo o desencadeamento de resposta inflamatória típica. Os níveis de TNF-α foram maiores nos estágios iniciais de infecção e com diminuição gradativa de produção, coincidindo com incapacidade em induzir a apoptose quando células BeWo foram infectadas por Udi2CH-05, categoria C. callosus/cultura. Os níveis de IL-10 encontrados durante a infecção de células BeWo por Udi1CH-05, indicam que outras citocinas podem estar envolvidas no controle da infecção, enquanto que essa citocina atua no controle da resposta imune desencadeada pela infecção de células BeWo por Udi2CH-05, categoria C. callosus/cultura. A produção de TGF-β detectada mediante a infecção por Udi1CH-05 C. callosus/cultura ou por Udi2CH-05 de ambas as categorias, demonstra que essa citocina atua na imunorregulação de células infectadas, enquanto que a infecção por Udi1CH-05, categoria cultura sugere que outras citocinas anti-inflamatórias possam participar da imunorregulação, pois o aumento do índice de apoptose coincidiu com a diminuição da produção de TGF-β. / Mestre em Biologia Celular e Estrutural Aplicadas

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Diabetes mellitus (DM) consists of a group of syndromes characterized by hyperglycemia, altered lipid metabolism, carbohydrates, proteins, and an increased risk of complications. The aqueous extract of Vochysia rufa (AEVR), has been used to treat DM due to its hypoglycemic effect. Despite the popular use, there is a lack of information regarding the effect of AEVR in liver. The aim of this study was evaluate the effects of AEVR in oxidative stress, apoptosis index and morphological alterations in liver of rats. The animals were divided in six groups: non- (ND) and diabetic (DB) treated with AEVR (500mg/kg), glibenclamide (6mg/kg) and water. The rats were treated during 43 days. Liver was removed and stored at -80ºC to oxidative stress analysis. And fixed in 10% phosphate-buffered formalin, than were processed, embedded in paraffin, sectioned at 4μm and stained with hematoxylin and eosin for histological examination under a light microscope. Nuclei of hepatic cells were isolated and analyzed by flow cytometry to determine the apoptotic index. The DB group shows an increase in activity of antioxidant enzymes GPx, SOD and lipid peroxidation (TBARS), and decrease in GHS, GST, CAT rates. On the other hand, the DB-AEVR group got this oxidative parameters restored to normal levels. Although, a decreased apoptotic index was observed in DB group, and an increased in ND-GB group. And was observed a reduction of apoptosis in this groups: ND-AEVR, DB-AEVR and DB-GB. Histological analysis demonstrated there wasn't difference in groups. According to experimental conditions, the AEVR was efficient to reduce oxidative stress induced by STZ, apparently has an anti-apoptotic effect, and weren't observed pathologic changes in hepatic tissue. / O Diabetes Mellitus (DM) é caracterizado pelo aumento significativo de glicose circulante no sangue, resultado de anormalidades na secreção e/ou ação da insulina. O extrato aquoso de Vochysia rufa (EAVR) tem sido utilizado popularmente para o tratamento do diabetes, no entanto, existem poucos estudos demonstrando o efeito dessa planta para o fígado. O objetivo do estudo foi avaliar os efeitos do EAVR no estresse oxidativo e alterações histopatológicas em fígado de ratos. Os animais foram divididos em seis grupos: (n = 10): não-diabético (ND) e diabético (DB) tratado via gavagem com o EAVR (500 mg/kg), glibenclamida (6mg/kg) e não tratados. O tratamento foi de 43 dias. Após o sacrifício, o fígado foi dissecado, pesado e armazenado a -80ºC para avaliação do estresse oxidativo. E fixado em formaldeído tamponado a 10%, sendo posteriormente processado para análise histológica. Os núcleos dos hepatócitos foram isolados e avaliados, por meio da citometria de fluxo, para determinação do índice de apoptose. No grupo DB houve aumento da atividade das enzimas SOD, GPx, e peroxidação lipídica (TBARS), e diminuição da atividade das enzimas CAT, GST e nos níveis de GSH, evidenciando a ocorrência do estresse oxidativo devido ao diabetes induzido por STZ. Por outro lado, no grupo DB-EAVR evidenciou-se uma restauração dos parâmetros analisados a níveis próximos do grupo ND. Não foram evidenciadas alterações histopatológicas significativas nos grupos estudados. No entanto, houve menor índice de apoptose nos grupos DB, ND-EAVR, DB-EAVR e DB-GB, enquanto que houve maior frequência de apoptose para o grupo ND-GB. Em conclusão, o tratamento dos animais diabéticos com o extrato aquoso de Vochysia rufa foi eficiente para restaurar os níveis normais das enzimas relacionadas à defesa antioxidante, bem como o extrato apresentou efeito antiapoptótico, porém não exibiu efeito significativo no peso corporal e na morfologia do fígado. / Mestre em Biologia Celular e Estrutural Aplicadas

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A fatty high diet causes inflammation in the hypothalamus, mainly in the neurons that control satiety and thermogenesis. Moreover, activation of apoptosis via TLR4 (toll like receptor 4) is observed in conjunction with inflammatory condition. The neuronal death is a process that involves the release of cytokines and glial activation. The microglia have immune function in nervous tissue, but the astrocytes, the main component of glia, is more involved in synaptic plasticity and chronic responses of the Central Nervous System. Moreover, these cells in the hypothalamus, which is the center of energy metabolism control, have specific characteristics, with receptors for fatty acids, glucose and leptin. In this context, we investigated the response of astrocytes after in vitro treatment with fatty acids on cortical and hypothalamic astrocytes. To that end, we made the dissociation of the cortex and hypothalamus of Swiss mice (1-2 days) and the cells were plated for procedures. Treatments were performed with different doses of stearate (100μM, 200μM and 2mM) and palmitate (200μM, 500μM and 5mM) for one week. Immunocytochemistry was performed with anti-GFAP (evaluates the astroglial reactivity) and anti-NFB (transcription factor that participates in the TLR-4 pathway) and TNF- dosage by ELISA. Dosage of 200μM medium were reserved after 3 days of contact with astrocytes that were treated with palmitate or stearate, for obtaining conditioned medium that were stocked for neurons culture treatment. Cultures of hypothalamic neurons (lineage CLU189) were treated for 3 or 6 days with conditioned medium, in sequence, in this cultures, were performed immunocytochemistry with caspase3 (apoptosis marker) and anti- Ki-67 (cell proliferation marker). The immunostaining was quantified and statistically treated for comparison of experimental and control groups. The results showed that treatment with stearate enhances the expression of GFAP and NFB only in astrocytes from the hypothalamus. The TNF- was upregulated in conditionated medium used for treatment of hypothalamic cells, however this augment did not interfere with apoptosis rate in CLU 189 cultures in first three days of contact with conditionated medium and, in the sixth day, in comparison to conditioned control medium only in astrocytes. Such results showed the protection provided for substances had released by reactived astrocytes from hypothalamus. Also, our results showed that neurons could respond to fatty acid without other cell intervention. / Uma dieta rica em gorduras provoca inflamação no hipotálamo, principalmente nos neurônios que controlam a saciedade e termogênese. Além disso, a ativação de apoptose via TLR4 (toll like receptor 4) também foi observada. A morte neuronal é um processo que envolve a ativação da glia e liberação de citocinas. A microglia tem a função imune no tecido nervoso, mas os astrócitos, o componente mais abundante das células gliais, está mais envolvido com a plasticidade sináptica e respostas crônicas do Sistema Nervoso Central. Além disso, essas células, no hipotálamo, que é o centro controlador do metabolismo energético, têm características específicas, apresentando receptores para ácidos graxos, glicose e leptina. Neste contexto, investigamos a reação dos astrócitos após o tratamento com ácidos graxos em culturas de astrócitos hipotalâmicos e corticais. Para tanto, foi feita a dissociação do córtex e hipotálamo de camundongos Swiss (1-2 dias) e os astrócitos foram plaqueados para os experimentos. Essas culturas foram tratadas com doses diferentes de estereato (100μM, 200μM e 2mM) e palmitato (200μM, 500μM e 5mM) durante uma semana. Foi realizada a imunocitoquímica com o anticorpo anti-GFAP (avalia a reatividade dos astrócitos) e anti- NFB (fator de transcrição que participa da via de ativação TLR-4) e a dosagem de TNF- por ELISA. O meio na dose de 200μM foi recolhido após 3 dias de contato com astrócitos tratados com estereato ou palmitato, para a obtenção de meio condicionado, o qual foi estocado para tratamento de culturas de neurônios. Foram utilizadas culturas de neurônios hipotalâmicos (linhagem CLU189) para o tratamento, por 3 ou 6 dias, com o meio condicionado, e posteriormente, nessas culturas, foi realizada a imunocitoquímica com os anticorpos anti-caspase3 (avalia morte celular por apoptose) e anti-ki-67 (marcador de célula em proliferação). As imunomarcações foram quantificadas e tratadas estatisticamente para comparação dos grupos experimentais e controles. Os resultados mostraram que o tratamento com estereato intensifica a expressão de GFAP e NFB somente em astrócitos do hipotálamo. O TNF- estava aumentado no meio condicionado usado no tratamento de células do hipotálamo, mas esse aumento não interferiu na apoptose nas culturas de CLU189 nos 3 primeiros dias para os meios condicionados, e no 6º dia, em relação ao meio condicionado somente em astrócitos. Mostrando certa proteção fornecida por substâncias produzidas pelos astrócitos hipotalâmicos. Ainda, nossos dados também mostraram que os neurônios respondem, sem mediação de outro tipo de célula, ao tratamento com ácido graxo. / Mestre em Biologia Celular e Estrutural Aplicadas

The Diabetes Mellitus (DM) is a group of metabolic diseases, with hiperglycemia resulting from defects in insulin secretion (type 1 DM) and / or action (type 2 DM), promoting the elevation of blood glucose levels, which can damage target organs (eyes, kidneys, nerves, heart). In the kidney presents as diabetic nephropathy (DN), characterized by increased levels of urinary albumin excretion (UAE), which could progress to end stage kidney disease. The renin-angiotensin-aldosterone system (RAAS) is an important mediator of the pathophysiological changes of DN. The pharmacological blockade of this system has been shown as a combined treatment of DN, decreasing urinary albumin excretion. The aim of this study was to evaluate the effects of triple RAAS blockade on kidney structure and function, as well as albuminuria in diabetic Wistar rats with DN in development. Induction of diabetes in rats was performed with intravenous administration of alloxan (50mg/kg) diluted in 0.9% saline and glycemia observed 24h after the induction of diabetes; animals with blood glucose greater than 200 mg/dL were considered diabetic and were divide into 5 groups: I) control group - no treatment (CG); II) experimental group 1 - treated with enalapril (EN) (angiotensin converting enzyme inhibitor - ACEI), III) experimental group 2 - treated with losartan (LO) (angiotensin receptor blocker - ARB), IV) experimental group 3 - treated with aliskiren (AL) (direct renin inhibitor - DRI); V) experimental group 4 - treated with triple blockade ACEIARB- DRI (EN+LO+AL). After 90 days of treatment, animals were placed in metabolic cages to collect 24-hour urine and thereafter for determination of blood, proteinuria, and glomerular filtration rate by creatinine clearance. Then, the animals were anesthetized and had their kidneys removed for histological and immunohistochemical studies (&#945;-SMA and PCNA). After induction, all animals that became diabetic, remained with high glycemic levels throughout the treatment period. Histology showed on CG glomerular collagen deposition and tubulointerstitial, tubular dilation, space capsule expansion and inflammatory infiltration; those changes were attenuated by treatments with EN, LO, AL and EN+LO+AL. The treatments reduced the expression of &#945;-SMA glomerular (EN p<0.01; LO p<0.01; AL p<0.05, EN+LO+AL p<0.01) and tubulointerstitial (EN p<0.05, AL p<0.01, EN+LO+AL p<0.05) compared to CG. There were no significant differences in the number of PCNA glomeruli positive cells and in the analysis of plasma concentrations of sodium, potassium and urea between groups. However, EN and LO preserved a largest number of proliferating tubulointerstitial cells. Rats treated with AL (p<0.05) and EN+LO+AL (p<0.05) had a higher glomerular filtration rate (GFR) when compared to CG, EN and LO. AL and EN+LO+AL significantly reduced proteinuria in these animals when compared to CG (p<0.01). The treatment with EN+LO+AL reduced the expression of &#945;-SMA glomerular and tubulointerstitial, preserved a greater number glomeruli, GRF and UAE. However, administration of AL resulted in similar data. / O Diabete Melito (DM) corresponde a um grupo de doenças metabólicas, com hiperglicemia resultante de defeitos na secreção (DM1) e/ou ação (DM2) da insulina, promovendo a elevação das taxas glicêmicas, que pode lesionar órgãos-alvo (olhos, rins, nervos ou coração). Nos rins manifesta-se como a nefropatia diabética (ND), caracterizada pelos níveis aumentados de excreção urinária de albumina (EUA), que poderá evoluir até a insuficiência renal crônica terminal, dialítica. O sistema Renina-Angiotensina-Aldosterona (SRAA) é um importante mediador das alterações fisiopatológicas da ND. O bloqueio farmacológico deste sistema tem-se mostrado como um aliado ao tratamento da ND, diminuindo a EUA. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos do bloqueio triplo do SRAA na estrutura e função renais, bem como na proteinúria, de ratos Wistar diabéticos com ND em desenvolvimento. A indução do diabetes nos ratos foi feita com a administração intravenosa de aloxano (50mg/Kg) diluída em solução salina 0,9% e a glicemia verificada 12h, 24h e 48h após a indução do diabetes, animais com glicemia acima de 200mg/dL foram considerados diabéticos e divididos em 5 grupos: I) grupo controle sem qualquer tratamento (CO); II) grupo experimental 1 tratados com enalapril (EN) (iECA); III) grupo experimental 2 tratados com losartan (LO) (BRA); IV) grupo experimental 3 tratados com alisquireno (AL) (IR); V) grupo experimental 4 tratados com iECA-BRA-IR (EN+LO+AL). Após 90 dias de tratamento, os animais foram colocados em gaiolas metabólicas para coleta de urina 24 horas e, posteriormente, de sangue para determinação da proteinúria e taxa de filtração glomerular, através do clearance de creatinina. Em seguida, os animais foram anestesiados e tiveram seus rins retirados para estudos histológicos e imunohistoquímicos. Os animais de todos os grupos se apresentaram hiperglicêmicos após a indução e as glicemias se mantiveram elevadas durante todo o tempo de tratamento. A histologia mostrou no CO a deposição de colágeno glomerular e tubulointersticial, dilatação tubular, expansão do espaço capsular e presença de infiltrado inflamatório, alterações que foram atenuadas pelos tratamentos com EN, LO, AL e EN+LO+AL. Os tratamentos reduziram a expressão de &#945;-SMA glomerular (EN p<0,01; LO p<0,01; AL p<0,05; EN+LO+AL p<0,01) e tubulointersticial (EN p<0,05; AL p<0,01; EN+LO+AL p<0,05) quando comparados ao CO. Não houve diferenças significativas no número de células PCNA glomerulares positivas e nas análises das concentrações plasmáticas de sódio, potássio e uréia entre os grupos; entretanto, EN e LO preservaram o maior número de células em proliferação tubulointersticial. Os ratos tratados com AL (p<0,05) e EN+LO+AL (p<0,05) tiveram uma maior taxa de filtração glomerular, quando comparados ao CO, EN e LO. AL e EN+LO+AL reduziram significativamente a proteinúria desses animais, quando comparados ao CO (p<0,01). O tratamento com EN+LO+AL reduziu a expressão de &#945;-SMA glomerular e tubulointersticial, além de preservar um maior número de glomérulos, função renal e EUA, comuns nos quadros de ND. No entanto, a administração de AL resultou em dados semelhantes. / Mestre em Biologia Celular e Estrutural Aplicadas

Made available in DSpace on 2016-05-02T13:55:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TochimaraAparecidaMiyauchi-dissertacao.pdf: 849651 bytes, checksum: ef29d9bc544c7cef9bb8b27b98b198ea (MD5) Previous issue date: 2012-09-28 / Coordenacao de Aperfeicoamento de Pessoal de Nïvel Superior / Parthenogenesis has been described as an alternative method to produce embryos for studies with embryonic cells, particularly in humans which have a restriction of fertilized embryos. Procedures used in parthenogenesis are also required to produce embryos by somatic cell nuclear transfer in domestic species. However, many biological, cellular and molecular aspects of parthenogenetic embryos are still unknown. This study aimed to compare the kinetics of development, apoptosis rate and gene expression of stress and celular metabolism in bovine parthenogenetic embryos and embryos fertilized in vitro. Oocytes (n = 1541) obtained from slaughterhouse ovaries were matured in vitro and submitted to parthenogenetic activation (4.62 µM ionomycin for 5 min followed by 2 mM 6-DMAP for 4 h) or in vitro fertilization (2 x 106 sperm/mL for 20h with semen from a single departure). 72h postactivation/fertilization (hpaf), embryos (8-cell) were frozen for subsequent analysis of gene expression and another part has been separated into groups of high or low potential of development: Part &#8805; 8 - parthenogenetic embryos with 8 or more cells (high development potential); Part < 8 - embryos less than 8 cells (low development potential); &#8805; 8 IVF - in vitro fertilized embryos with 8 or more cells; and IVF < 8 - embryos with less than 8 cells. Embryos were cultured in CR2aa medium with 2.5% BFS in 5% CO2, 5% O2, 90% N2 at 38.5° C and were evaluated rates of blastocyst 168hpaf (D7) and 196hpaf (D8). 8-cell embryos obtained after 72hpfa were analyzed for gene expression. D8 blastocysts were fixed and subsequently apoptotic index was analyzed by TUNEL. Data were compared by analysis of variance and means by Student Newman Keuls test. Gene expression was evaluated by REST® software. Values are shown as mean ± standard error. Embryos with 8 or more cells produced higher (P < 0.01) blastocysts rates in D7 and D8 compared to embryos with less than eight cells, showing its greatest development potential, regardless if they were parthenogenetic or fertilized. Embryos of Part &#8805; 8 group had higher (P <0.05) blastocyst rate in D7 (63.6 ± 3.4%) than IVF &#8805; 8 (45.3 ± 8.9%), but at D8 rate was similar (56.7 ± 3.0% and 44.2 ± 8.9% for Part &#8805; 8 and IVF &#8805; 8, respectively; P <0.05). There was no difference (P < 0.05) on blastocyst rates at D7 and D8 between embryos with less than 8 cells derived from parthenogenesis or fertilization. There was no difference in total cell number (92.0 ± 3.4, 102.30 ± 4.8), apoptotic cells (10.8 ± 1.22, 9.5 ± 1.07) and apoptotic index (11.4 ± 1.27, 9.8 ± 1.8) for parthenogenetic and IVF blastocysts, respectively. In 8-cell embryos analyzed, there was a subexpression of genes DNAJB1, HSPA1L, HSF1 and GLUT1 for Part in relation to FIV, while HSF2 was overexpressed in Part compared to FIV. In conclusion, bovine parthenogenetic embryos differ to embryos fertilized in vitro in hability of preimplantation development in vitro and gene expression, which may limit the use of parthenogenesis in studies of embryonic development. / A partenogênese tem sido descrita como um método alternativo para produzir embriões para estudos com células embrionárias, principalmente em humanos para os quais existe a restrição do uso de embriões fecundados. Procedimentos utilizados na partenogênese são também necessários para se produzir embriões por transferência nuclear com células somáticas nas espécies domésticas. Contudo, muitos aspectos biológicos, celulares e moleculares dos embriões partenogenéticos ainda são desconhecidos. Este estudo objetivou comparar a cinética do desenvolvimento, índice de apoptose e expressão de genes de estresse e metabolismo celular em embriões bovinos partenogenéticos e embriões fecundados in vitro. Oócitos (n=1541) obtidos de ovários de matadouro foram maturados in vitro e submetidos à ativação partenogenética (4,62 µM ionomicina por 5 min seguido de 2 mM 6-DMAP por 4h) ou fecundação in vitro (2 x 106 espermatozoides/ml por 20h, com sêmen de uma única partida). Com 72h pós-ativação/fecundação (hpaf) parte dos embriões (8 células) foram congelados para posterior análise da expressão gênica e outra parte foi separada em grupos de alto ou baixo potencial de desenvolvimento: Part&#8805;8 - embriões partenogenéticos com 8 ou mais células (alto potencial de desenvolvimento); Part<8 - embriões com menos de 8 células (baixo potencial de desenvolvimento); FIV&#8805;8 - embriões fecundados in vitro com 8 ou mais células; e FIV<8: embriões com menos de 8 células. Os embriões foram cultivados em meio CR2aa com 2,5% SFB em 5%CO2, 5%O2, 90% N2 a 38,5ºC e avaliadas as taxas de blastocistos com 168hpaf (D7) e 196hpaf (D8). Embriões com 8 células obtidos após 72hpfa foram analisados quanto à expressão gênica. Blastocistos em D8 foram fixados e posteriormente foram avaliados pela técnica de TUNEL o índice apoptótico. Os dados foram comparados por análise de variância e as médias por teste de Student Newman Keuls. A expressão gênica foi avaliada pelo software REST®. Os valores são mostrados como média±erro padrão. Embriões com 8 ou mais células produziram maiores (P<0,01) taxas de blastocistos no D7 e D8 do que os embriões com menos de oitos células mostrando seu maior potencial de desenvolvimento, independentemente se foram partenogenéticos ou fecundados. Embriões do grupo Part&#8805;8 apresentaram maior (P<0,05) taxa de blastocistos no D7 (63,6±3,4%) que os FIV&#8805;8 (45,3±8,9%), porém a taxa no D8 foi semelhante (56,7±3,0% e 44,2±8,9% para Part&#8805;8 e FIV&#8805;8, respectivamente; (P<0,05). Não houve diferença (P<0,05) quanto às taxas de blastocistos no D7 e D8 entre embriões com menos de 8 células oriundos da partenogênese ou fecundação. Não houve diferença quanto ao número total de células (92,0±3,4; 102,30±4,8), células apoptóticas (10,8±1,22; 9,5±1,07) e índice apoptótico (11,4±1,27; 9,8±1,8) nos blastocistos partenogenéticos e FIV, respectivamente. Nos embriões com 8 células analisados, houve subexpressão dos genes DNAJB1, HSPA1L, HSF1, GLUT1 nos Part em relação aos FIV, enquanto o HSF2 esteve sobrexpresso nos Part quando comparado aos FIV. Conclui-se que embriões partenogenéticos bovinos possuem diferenças se comparados aos embriões fecundados in vitro quanto à capacidade de desenvolvimento pré-implantacional in vitro e expressão gênica, o que pode limitar o uso da partenogênese em estudos sobre desenvolvimento embrionário.

Submitted by Hellen Luz (hellencrisluz@gmail.com) on 2017-09-21T16:23:57Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_InibicaoNitrergicaLocal.pdf: 1790723 bytes, checksum: 5ed20bd490d92e565a6c597c03db4c77 (MD5) / Rejected by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br), reason: on 2017-10-10T17:00:33Z (GMT) / Submitted by Hellen Luz (hellencrisluz@gmail.com) on 2017-10-17T18:25:37Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_InibicaoNitrergicaLocal.pdf: 1790723 bytes, checksum: 5ed20bd490d92e565a6c597c03db4c77 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-11-24T14:43:47Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_InibicaoNitrergicaLocal.pdf: 1790723 bytes, checksum: 5ed20bd490d92e565a6c597c03db4c77 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-24T14:43:48Z (GMT). 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Nesse contexto, a proposta do trabalho é averiguar a influência do sistema nitrérgico local na recuperação histológica e funcional do tendão. Para isso, o trabalho conta com o modelo experimental de ruptura do tendão de Aquiles, possibilitando instaurar um quadro de tendinopatia crônica nos animais. O acompanhamento dos grupos controle, ruptura+veículo (Salina 0,9%), ruptura+L-nitro-arginina-metil-éster (LNAME, 5mM) e ruptura+nitroprussiato de sódio (SNP, 3mM) prosseguiram até o 21° dia, estipulado para a coleta de amostras. A fim de avaliar a produção de óxido nítrico, o método de dosagem de Griess foi usado. Os parâmetros funcionais foram caracterizados pelo índice funcional de Aquiles (IFA), obtidos em 0, 7, 14 e 21 dias. Amostras também foram reservadas para processamento histomorfológico e autofluorescência. O ganho de massa corporal também foi avaliado. Conseguimos caracterizar o efeito das drogas no tecido sem fortes influências sistêmicas pela manutenção do peso corporal e níveis de nitrito plasmático. O L-NAME gerou uma significativa redução na densidade celular, inibiu a formação de vasos entre a malha colágena, melhorou a organização tecidual e restabeleceu precocemente o padrão funcional em 21 dias após a injúria. Por outro lado, os tratamentos com SNP e veículo mantiveram a desorganização do tecido e desempenho funcional insatisfatório. Juntos, nossos resultados sugerem um efeito benéfico da inibição local da NOS após a ruptura para a remodelagem tecidual, contribuindo para a regeneração do tendão. / The tendon injuries prevalence has been increased usually by repetitive movements in the occupational and recreational activities of society. The main features this injury involve healing dysfunction and loss of extracellular matrix. At this tissue, the extracellular matrix is basically made of type I collagen and the loss of this protein associated with problems in the remodeling have been considered the major responsible for the symptomatic and functional effects of injury. Additionally the literature reports the nitric oxide synthase expression was up-regulated throughout the repair process. At this context the propose of this work is investigated the nitrergic local inhibition in tissue and functional recovery after tendon injury. We used a experimental model of Achilles tendon rupture for establish pathophysiological changes similar to chronic tendinopathy. The animals were divided into experimental groups control, injury+vehicle (saline, 0,9%), injury+L- Nω-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME, 5mM) and injury+sodium nitroprusside (SNP, 3mM), which were followed until the 21º day, when were killed to collect samples. In order to access nitric oxide production Griess nitrite assay was used. Functional recovery was calculated by Achilles Functional Index (AFI) in 0, 7, 14 and 21 days. Tendons were also processed for histomorphological and autofluorescence analysis. The body weight gain was also evaluated. We characterized the effect of drugs about tissue without stronger systemic influences by maintenance of body weight and plasmatic levels of nitrite. The L-NAME led to significant decrease in the cellular density, vessel formation between collagen network, accelerated the tissue organization and restored early the functional pattern at 21 days after injury. On the other hand, the treatment with SNP and vehicle remained the tissue disorganization and low functional performance. Taken together our results suggest a positive effect of local suppression of NOS after rupture for tissue remodeling, contributing to tendon regeneration.

Made available in DSpace on 2015-03-04T18:57:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese part1.pdf: 16560182 bytes, checksum: b1b85ba9cf99cc97cd1daa82ff037abf (MD5) Previous issue date: 2013-05-10 / This work presents an anatomically detailed arterial network model denoted by the acronym ADAN. The ADAN is a computational model of the human arterial system provided by an unprecedented anatomically detailed arterial network in cardiovascular research and carried out in order to simulate blood flow. This work is focused in two main points: (1) the complexity of the arterial network on top of which a one-dimensional mathematical model is used to perform blood flow simulations and (2) the boundary conditions of the one-dimensional model for which criteria and methodologies were developed to define and impose an effective blood flow distribution. With regard to topologial aspects, the anatomically-based arterial network comprises almost all arteries reported in the medical literature. In other words, this is the most complete human arterial model developed up to date. The ADAN model includes 2142 vessels from the vasculatures of the the head, trunk, limbs, abdominal organs, brain an heart. The develpment of this detailed arterial network needed the anatomical literature approved by the medical comunity and practices of anatomy by means of dissections of real specimens as well. The blood flow is modeled as flow of an incompressible fluid through compliant vessels. A one-dimensional approximation of blood flow is adopted in order to describe the flow rate, pressure and arterial lumen through the arterial tree in a distributed way. In order to deal with the boundaries conditions at the end points where the network was truncated, an innovative approach based on the Vascular Territories Theory was developed taking into account stringent physiological and anatomical criteria. Moreover, an algorithm for indetification of vascular territories resistances was also developed. Those two main points provided such a model of the arterial system able to simulate and to predict hemodynamics results at impossible placements through the existing models up to now. Besides, as result of an comprehensive research to find geometrical parameters of the model, the present work provides an wide morphometrical database of the human arterial system. The ADAN model can be used by medical doctors, physiologists, biomedical engineers and cardiovascular researchers as a computational hemodinamics laboratory of the entire human arterial tree. In addition, almost as a corollary, the ADAN model can also be explored for medical educational purposes. / Este trabalho apresenta um modelo anatomicamente detalhado da rede arterial humana denominado pelo acrônimo ADAN. O ADAN é um modelo computacional do sistema arterial provido de um detalhamento anatômico sem precedentes na área da pesquisa em modelagem cardiovascular, desenvolvido para fins de simulações hemodinâmicas. O foco do trabalho está: (1) na complexidade da rede arterial sobre a qual se utiliza um modelo matemático unidimensional para simular o escoamento sanguíneo e (2) na modelagem das condições de contorno do problema de forma a prover critérios e metodologias para definir e impor uma dada distribuição efetiva do fluxo de sangue. Para tratar o aspecto da topologia, foi desenvolvida uma rede arterial com base na anatomia descritiva contendo a quase totalidade das artérias conhecidas e catalogadas na literatura médica, o que implica no modelo arterial humano mais completo já desenvolvido. Isto inclui 2.142 vasos que abrangem desde a vascularização da cabeça, tronco e membros até a rede arterial dos órgãos abdominais, cérebro e coronárias. No desenvolvimento desta rede arterial detalhada foram empregadas as referências anatômicas mais recomendadas e adotadas pela comunidade médica, assim como foram realizadas sessões práticas de estudos da anatomia humana em espécimes reais. O escoamento sanguíneo é modelado como o fluxo de um fluido incompressível em vasos complacentes. Uma aproximação de escoamento unidimensional é adotada, o que permite descrever de forma distribuída o fluxo, pressão e lumem arterial ao longo de toda a árvore. Para tratar o aspecto das condições de contorno em segmentos terminais onde a rede foi truncada, foi desenvolvida uma metodologia inovadora com base na Teoria dos Territórios Vasculares, levando em conta rigorosos critérios da anatomia vascular periférica e da fisiologia. Além disso, foi desenvolvido um procedimento algorítmico para a identificação dos parâmetros resistivos do modelo Windkessel para os leitos periféricos. Assim, estes dois aspectos citados conduziram a um modelo do sistema arterial capaz de simular, descrever e predizer resultados hemodinâmicos em regiões anatômicas antes impossíveis pelos modelos existentes. Além disso, como resultado de uma extensa pesquisa no processo de calibração geométrica do modelo, o trabalho disponibiliza uma ampla base de dados morfométricos da rede arterial humana, cujas informações, até o momento, somente eram encontradas em publicações dispersas tanto da literatura médica quanto da modelagem do sistema cardiovascular. O modelo ADAN da rede arterial humana pode ser utilizado com um laboratório de hemodinâmica computacional com um nível de abrangência tal que possa ser empregado por médicos, fisiologistas, engenheiros biomédicos ou outros profissionais envolvidos com a pesquisa cardiovascular. Além disso, quase como um corolário, o modelo ADAN presta-se, ainda, para finalidades didáticas na formação de recursos humanos em medicina, uma vez que possui características de um atlas tridimensional interativo e provido de modelo matemático-computacional da rede arterial humana.

Submitted by JACIARA CRISTINA ALMEIDA DO AMARAL (jaciaramaral@ufpa.br) on 2019-01-30T14:12:26Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese capa ficha e artigo 10 12 18.pdf: 3164292 bytes, checksum: ead5dec19de419da533838099f689015 (MD5) / Approved for entry into archive by JACIARA CRISTINA ALMEIDA DO AMARAL (jaciaramaral@ufpa.br) on 2019-01-30T14:13:09Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese capa ficha e artigo 10 12 18.pdf: 3164292 bytes, checksum: ead5dec19de419da533838099f689015 (MD5) / Made available in DSpace on 2019-01-30T14:13:09Z (GMT). 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Células de rim de macaco verde africano (Vero) foram expostas in vitro a diferentes concentrações de Fluconazol e foram avaliadas quanto a diferentes parâmetros, tais como: citotoxicidade (ensaio MTT e morte celular por corantes fluorescentes), genotoxicidade / mutagenicidade (teste do cometa e teste do micronúcleo) e indução de estresse oxidativo (ensaio do DCFH-DA). O Fluconazol foi utilizado nas concentrações de 81,6; 163,2; 326,5; 653; 1.306 e 2.612,1μM para o ensaio do MTT e 81,6; 326,5 e 1.306μM para os demais ensaios. Os resultados do MTT mostraram que a viabilidade celular diminuiu à partir da concentração de Fluconazol de 1.306μM (85,93%), sendo estatisticamente significativa (P <0,05) na concentração de Fluconazol de 2.612,1μM (35,25%), em comparação com o controle (100%). O Fluconazol também induziu necrose (P <0,05) quando as células foram expostas às concentrações de 81,6; 3.26,5 e 1.306μM para ambos os tempos de tratamento testados (24 e 48h) em comparação com o controle negativo. Com relação à genotoxicidade / mutagenicidade, os resultados mostraram que o Fluconazol aumentou significativamente (P <0,05) o índice de dano ao DNA, avaliado pelo ensaio do cometa, à 1.306μM (ID = 1,17) em comparação ao controle negativo (ID = 0,28). A frequência de micronúcleos também aumentou até atingir signficância estatística (P <0,05) em 1.306μM de Fluconazol (com 42MN / 1000 células binucleadas) em relação ao controle negativo (13MN / 1000 células binucleadas). Finalmente, a formação significativa (P <0,05) de espécies reativas de oxigênio foi observada em 1.306μM de Fluconazol (DO = 40,9), em comparação ao controle negativo (DO = 32,3). Nossos resultados mostraram que o Fluconazol foi citotóxico e genotóxico nas condições avaliadas. É provável que tais efeitos possam ser devidos às propriedades oxidativas do Fluconazol e / ou à presença de FMO (Flavina monoxigenase) em células Vero. / Fluconazole is a broad-spectrum triazole antifungal that is well-established as the first-line treatment for Candida albicans infections. Despite its extensive use, reports on its genotoxic/mutagenic effects are controversial; therefore, further studies are needed to better clarify such effects. African green monkey kidney (Vero) cell line were exposed in vitro to different concentrations of Fluconazole and were then evaluated for different parameters, such as cytotoxicity (MTT/cell death by fluorescent dyes), genotoxicity/mutagenicity (comet assay/micronucleus test), and induction of oxidative stress (DCFH-DA assay). Fluconazole was used at concentrations of 81.6, 163.2, 326.5, 653, 1306, and 2612.1μM for the MTT assay and 81.6, 326.5, and 1306μM for the remaining assays. MTT results showed that cell viability reduced upon exposure to Fluconazole concentration of 1306μM (85.93%), being statistically significant (P<0.05) at Fluconazole concentration of 2612.1μM (35.25%), as compared with the control (100%). Fluconazole also induced necrosis (P<0.05) in Vero cell line when cells were exposed to all concentrations (81.6, 326.5, and 1306μM) for both tested harvest times (24 and 48 h) as compared with the negative control. Regarding genotoxicity/mutagenicity, results showed Fluconazole to increase significantly (P<0.05) DNA damage index, as assessed by comet assay, at 1306μM versus the negative control (DI=1.17 vs DI=0.28, respectively). Micronucleus frequency also increased until reaching statistical significance (P<0.05) at 1306μM Fluconazole (with 42MN/1000 binucleated cells) as compared to the negative control (13MN/1000 binucleated cells). Finally, significant formation of reactive oxygen species (P<0.05) was observed at 1306μM Fluconazole vs the negative control (OD=40.9 vs OD=32.3, respectively). Our experiments showed that Fluconazole is cytotoxic and genotoxic in the assessed conditions. It is likely that such effects may be due to the oxidative properties of Fluconazole and/or the presence of FMO (flavin-containing monooxygenase) in Vero cells. / FAPAN - Faculdade Pan Amazônica