Orientador: Aparecido Antonio Camacho / Banca: Marlos Gonçalves Sousa / Banca: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Banca: Daniel Paulino Júnior / Banca: Wagner Luís Ferreira / Resumo: Com o objetivo de avaliar a função miocárdica e autonômica de cães com sepse, foram estudadas 17 cadelas com diagnóstico de piometra e critérios de positividade para síndrome da resposta inflamatória sistêmica. Esses animais foram submetidos à avaliação ecocardiográfica e variabilidade da frequência cardíaca, além de avaliação hematológica, bioquímica sérica, dosagem das concentrações de TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-10 e proteína C reativa, no momento do diagnóstico (T-0) e 15 (T-15) e 30 (T-30) dias após a histerectomia. Dentre os parâmetros ecocardiográficos, foi observada diminuição do tempo de desaceleração da onde E do fluxo mitral em T-0 em relação ao T-30 (68,0 ± 49,1 e 111,0 ± 63,8; p=0,035) e tempo de relaxamento isovolumétrico também em T-0 em relação ao T-30 (61,5 ± 15,6 e 70,0 ± 13,6; p=0,0002). Foi observada também correlação negativa significativa entre os índices de função sistólica, fração de encurtamento e fração de ejeção, e a concentração sérica de proteína C reativa (r=-0,324, p=0,02 e r=-0,332, p=0,01, respectivamente). Em relação à avaliação do sistema autonômico, foi observada redução de todos os parâmetros da variabilidade da frequência cardíaca em T-0 em relação aos demais momentos, com p<0,0001 para todos os índices. Assim, nas condições do presente estudo foi possível concluir que fêmeas caninas com sepse de ocorrência natural apresentam disfunção autonômica, refletido pela diminuição de todos os parâmetros da variabilidade da frequência cardíaca e que a proteína C reativa pode desempenhar um papel na patogênese da progressão do comprometimento cardíaco / Abstract: In order to assess myocardial and autonomic function in dogs with sepsis were studied 17 bitches diagnosed with pyometra and positive criteria for systemic inflammatory response syndrome. These animals underwent echocardiographic and heart rate variability tests, and also hematological evaluation, serum biochemistry, and serum TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-10 and C-reactive protein, at diagnosis (T-0) and 15 (T-15) and 30 (T-30) days after hysterectomy. Among the echocardiographic parameters were observed decrease in E mitral flow deceleration time in T-0 relative to the T-30 (68.0 ± 49.1 and 111.0 ± 63.8; p = 0.035) and isovolumetric relaxation time in relation to T-0 and T-30 (61.5 ± 15.6 and 70.0 ± 13.6, p = 0.0002). It was also observed a significant negative correlation between indexes of systolic function, fractional shortening and ejection fraction, and the serum concentration of C-reactive protein (r = -0.324, p = 0.02 and r = -0.332, p = 0.01, respectively). Regarding the assessment of the autonomic system, there was a reduction of all parameters of heart rate variability in T-0 compared to other moments, with p <0.0001 for all indexes. Thus, under the circumstances of the present study, it was possible to conclude that female dogs with naturally occurring sepsis present autonomic dysfunction, reflected by the reduction of all parameters of heart rate variability, and C-reactive protein may play a pathogenic role in the progression of cardiac involvement / Doutor

Orientador: Sueli Aparecida Calvi / Coorientador: Ana Carla Pereira / Coorientador: Edward A. Gravis / Banca: Lenice do Rosário Souza / Banca: Ida Maria Foschiani Dias Baptista / Banca: Fátima Regina Vilani Moreno / Banca: Ana Cláudia Pelizon / Resumo: Não disponível / Abstract: It is estimated that one-third of the total world population is latently infected with M. tuberculosis and only 5-10% of the infected individuals will develop active TB disease during their life-time. The reason why some infected individuals develop active disease, while others do not is not yet entirely understood. Given the central role of TLR-2 in the incitement of inflammation, polymorphisms in its gene might be involved in both infectious and inflammatory diseases. The aim of this study was to evaluate the influence of TLR2 - 16934A/T and GT repeat polymorphisms on the immune response of PTB patients undergoing anti-TB treatment at different time points of anti-tuberculosis treatment: T1 (beginning), T2 (3 months) and T3 (end). For this we genotyped TLR2 -16934 and (GT)n repeats polymorphisms and evaluated the immune response of pulmonary tuberculosis patients during the time of anti-tuberculosis treatment. The present study suggests that TLR2 - 16934A/T and GT repeats polymorphisms can influence differential TLR-2, NF-κB and cytokine levels during anti-TB treatment. We also suggest that PTB patients with TLR2 - 16934 AA genotype may have a worst outcome of the disease, since they have a lower IFN-γ, cytokine essential to initiate the protective immunity to active TB. This association could not be made in our study due to the low number of patients evaluated. Since TLR-2 play a major role in initiating immune response against M. tuberculosis other polymorphisms in TLR2 would be crucial to better understand protective immune responses and may serve as biomarkers of protection or susceptibility to TB / Doutor

O objetivo do presente estudo foi avaliar os níveis das metaloproteinases da matriz MMP-9, MMP-3 e MMP-13, e das quimiocinas MCP-1, MIP-1&#946; e RANTES, no fluido gengival de dentes sob força ortodôntica. Foram recrutados 14 pacientes (3 homens e 11 mulheres) que foram submetidos à movimentação ortodôntica dos caninos superiores. Amostras do fluido gengival foram coletadas com tiras de Periopaper em diferentes tempos. O volume do FG foi determinado com o uso do Periotron e os niveis das MMPs e das quimiocinas quantificados usando-se uma multianálise imunoenzimática com microesferas. Os resultados mostraram que existe um aumento significativo no volume do FG na área de pressão em quase todos os tempos analisados, quando comparados às áreas de tensão. Os níveis da MMP-9 foram muito superiores aos das MMP-13 e MMP-3. Na análise da evolução do tempo pode ser observada uma alteração significativa nos níveis da quantidade total de MMP-9, MMP-13 e MMP-3 e na concentração de MMP-13 e MMP-3 durante o período de movimentação dentária no lado de pressão. A elevação dos níveis de expressão destas MMPs 1 hora após a aplicação da força ortodôntica sugere que estas enzimas estejam envolvidas na remodelação periodontal induzida. As quimiocinas MCP-1, MIP-1&#946; e RANTES foram detectadas no sulco gengival em todos os diferentes intervalos de tempo analisados, nas áreas de tensão e de pressão. Porém, diversas amostras estavam abaixo do nível de detecção do ensaio e, os níveis dessas quimiocinas no fluido gengival não parecem ser alterados pelas forças ortodônticas. / The goal of the present study was to evaluate the levels of the matrix metalloproteinases MMP-9, MMP-3 and MMP-13 and of the chemokines MCP-1, MIP-1&#946; and RANTES in the gingival crevicular fluid of teeth under orthodontic forces. Fourteen subjects (3 males and 11 females) were enrolled and subjected to orthodontic tooth movement of their maxillary canines. Samples of gingival crevicular fluid were collected from both tension and pressure sides using Periopaper strips at different time points. The volume of GCF was determined using a Periotron and the levels of MMPs and chemokines quantified using a multiplex microbead immunoassay. The results demonstrated that the levels of MMP-9 were higher than the levels of MMP-13 and MMP-3. Statistically significant fluctuations during the orthodontic tooth movement could be detected for the total amount of MMP-9, MMP-13 and MMP-3 and for the concentration of MMP-13 and MMP-3 at the pressure side. The elevation in the levels of these MMPs, 1 hour after the application of the orthodontic force, suggests that these enzymes are involved in the induced periodontal remodeling. The chemokines MCP-1, MIP-1&#946; and RANTES were detected in the GCF in both tension and pressure sides at different time points. However, several samples were below the level of detection of the assay and the levels of theses mediators in GCF did not seem to be altered by the orthodontic forces.

O reparo Ãsseo à um processo multifuncional com a participaÃÃo de vÃrios mediadores. Dentre os fÃrmacos que interferem nesse processo, destaca-se o Ranelato de EstrÃncio (RSr), o qual apresenta um mecanismo de aÃÃo dual, estimulando a neoformaÃÃo ao mesmo tempo que inibe a reabsorÃÃo Ãssea. Para avaliar a capacidade osteoindutiva, modelos que favorecem o estudo do potencial de reparo Ãsseo local tÃm sido utilizados, tais como o de induÃÃo de defeitos de tamanhos crÃticos (CSD) em calvÃrias de ratos. O objetivo deste estudo foi avaliar o RSr no reparo Ãsseo de defeitos crÃticos de 8 mm de diÃmetro induzidos em calvÃria de ratos. Para tanto, imediatamente apÃs a cirurgia, os CSD receberam uma Ãnica aplicaÃÃo de RSr (2,1 e 6,3 mg) ou nenhum tratamento (Controle). Grupos de animais foram sacrificados a 0 h e aos 15, 45, 90 e 120 dias apÃs a induÃÃo do CSD e calvÃrias foram processadas para anÃlise macroscÃpica, por meio de Tomografia Computadorizada tipo Cone Beam (TCCB), histolÃgica (HE) e imunohistoquÃmica para RANKL e OPG. Na anÃlise por TCCB, verificou-se que, no grupo RSr 6,3 mg, o RSr causou reduÃÃo significativa da Ãrea do CSD aos 90 dias (67,79  2,32 mmÂ) e 120 dias (62,28  4,17 mmÂ), quando comparadas Ãs calvÃrias recÃm-induzidas (0 h) (78,61  0,96 mmÂ) (p<0,05), mas nÃo em relaÃÃo ao grupo Controle apÃs 90 dias (74,2  2,73 mmÂ) e 120 dias (72,04  1,74 mmÂ) (p>0,05). Na anÃlise histolÃgica das calvÃrias dos animais do grupo Controle foram observadas alteraÃÃes histolÃgicas significantes relacionadas ao reparo Ãsseo como neoformaÃÃo Ãssea restrita Ãs bordas do CSD quando comparados aos animais do grupo normal em todos os perÃodos experimentais (p<0,05). Os animais do grupo RSr (2,1 mg) nÃo apresentaram alteraÃÃes histolÃgicas significantes quando comparados ao grupo Controle em todos os perÃodos experimentais (p>0,05) enquanto que, nos animais do grupo RSr (6,3 mg), foram observados aspectos histolÃgicos compatÃveis com reparo Ãsseo aos 90 dias e aos 120 dias como neoformaÃÃo Ãssea em borda e no centro do CSD com diferenÃas significativas quando comparados aos grupos Controle ou RSr 2,1 mg (p<0,05). Complementando esses resultados, as calvÃrias dos animais apÃs 120 dias da aplicaÃÃo local de RSr (6,3 mg) apresentaram intensa imunoexpressÃo para OPG e negativa para RANKL, enquanto que as calvÃrias do grupo Controle apresentaram imunoexpressÃo moderada apenas para RANKL. Assim, pode-se concluir que o tratamento local com RSr evidenciou seu papel osteoindutor favorecendo a reparaÃÃo Ãssea do CSD pela modulaÃÃo da via RANKL/RANK/OPG. / The bone repair is a multifunctional process involving various mediators. Among the many drugs that interfere with this process, we highlight the Strontium Ranelate (SrR), which has a dual mechanism of action, stimulating neoformation at the same time, which inhibits bone resorption. To evaluate the osteoinductive capacity, models of study that investigate the potential for bone repair site have been used, such as induction of critical size defects (CSD) in rat calvaria. The aim of this study was to evaluate bone healing induced by SrR in critical defects of 8 mm in diameter in rat calvaria. For this purpose, immediately after surgery, the CSD received a single application of SrR (2.1 and 6.3 mg) or no treatment (Control). Groups of animals were sacrificed at 0 h and at 15, 45, 90 and 120 days after induction of CSD and calvarial samples were removed and processed for analysis by macroscopic type Cone Beam Computed Tomography (CBCT), histological (HE) and immunohistochemical for RANKL and OPG. In CBCT analysis, it was found that induction of CSD group SrR 6.3 mg caused a significant reduction of the areas of CSD at 90 days (67.79  2.32 mmÂ) and at 120 days (62.28  4.17 mmÂ) compared to calvariae newly induced (0 h) (78.61 mm  0.96) (p<0.05) but not compared to Control groups at 90 days (74.2  2.73 mmÂ) and at 120 days (72.04 Â1.74 mmÂ) (p>0.05). We observed in the histological analysis of calvariae of Control groups significant changes related to bone repair when compared to normal group (p<0.05). The animals that received SrR (2.1 mg) showed no significant histological changes, compared to the Control groups in all experimental periods (p>0.05), while animals of SrR 6.3 mg group showed significantly histological features consistent with bone repair at 90 days and at 120 days as neoformation in edge and center of the CSD when compared to Control or SrR 2.1 mg groups (p<0.05). To complement these results, the calvariae of animals after 120 days of topical application of SrR (6.3 mg) showed intense immunostaining for OPG and RANKL negative, whereas the calvariae of Control groups showed moderate immunoreactivity only for RANKL. Thus, it can be concluded that the local treatment with SrR (6.3 mg) revealed its role favoring osteoinductive bone repair by modulating the CSD RANK/RANKL/OPG.

Orientadores: Ronei Luciano Mamoni, Maria Heloisa Souza Lima Blotta / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-16T10:37:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Longhi_LarissaNaraAlegrini_M.pdf: 6631958 bytes, checksum: 45b4fc2e64262b037302e0269ebd8f71 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Tradicionalmente o papel das células NK na resposta imunológica tem sido associado com a resistência à infecção viral e tumores, porém estudos recentes apontam para a participação destas células na resposta imunológica contra outras doenças infecciosas. O objetivo deste estudo foi avaliar a possível participação de células NK (CD56+CD3-) na resposta imunológica ao fungo Paracoccidioides brasiliensis. Foram utilizadas células CD56+ isoladas por meio imunomagnético provenientes de pacientes com paracoccidioidomicose e de indivíduos controle. As células CD56+ foram avaliadas quanto à capacidade citotóxica direta contra leveduras de P. brasiliensis (cepa virulenta - Pb18 e avirulenta - Pb265) e contra células-alvo (monócitos) infectadas com leveduras de ambas as cepas. Também foi avaliada a expressão dos constituintes dos grânulos citotóxicos (granzima A, B, perforina e granulisina), receptores de ativação (NKG2D) e de inibição (KIR2DL2/L3/S2 e KIR3DL1), marcadores de ativação (CD69 e CD25), assim como a produção de citocinas (IFN-g e TNF-a) por meio de PCR em tempo real e por citometria de fluxo. A participação da IL-15 na ativação das células NK foi avaliada pela adição da citocina recombinante em alguns experimentos. Para avaliar a participação dos grânulos na atividade citotóxica direta e contra células-alvo em alguns experimentos as células foram tratadas com inibidores específicos (SrCl, concanamicina A ou EGTA). Os resultados demonstraram que células de pacientes apresentam resposta citotóxica (direta e contra células-alvo) inferior àquela observada nos indivíduos controle. A citotoxicidade direta foi dependente de grânulos, mas independente de perforina, enquanto que a citotoxicidade contra células-alvo foi dependente de perforina. A expressão de granulisina (RNAm e proteína) foi maior nas células de indivíduos controle. Além disso, observamos que células CD56+ apresentam a capacidade de secretar essa proteína após o estímulo com leveduras de P. brasiliensis. Também observamos que as células CD56+ de doadores normais são ativadas (aumentam a expressão de CD69 e CD25) quando estimuladas com o fungo, enquanto as células NK de pacientes não mostraram esse aumento, a não ser quando estimuladas com IL-15. Estes resultados demonstraram que as células CD56+ podem participar ativamente da resposta imunológica contra o P. brasiliensis, podendo contribuir tanto para a morte direta do fungo como de células infectadas, e que a granulisina pode desempenhar um papel preponderante no controle da infecção pelo P. brasiliensis. Outro fato importante observado foi que as células CD56+ quando estimuladas por células leveduriformes de P. brasiliensis produzem e secretam IFN-g, uma citocina com atuação importante na ativação de outras células do sistema imunológico como macrófagos e linfócitos, e dessa forma pode contribuir para o desenvolvimento da resposta imunológica adquirida subseqüente à infecção. / Abstract: Besides their role in viral infection and tumor resistance, recent studies have showed that NK cells also participate in the immune response against other infectious diseases. The aim of this study was to evaluate the possible role for NK cells (CD56+) in the immune response against the fungi Paracoccidioides brasiliensis. CD56+ cells from patients with paracoccidioidomycosis and healthy individuals were isolated by immmunomagnetic columms and antibodies. We evaluated the capacity of the direct killing of P. brasiliensis yeast cells (Pb18 virulent strain and Pb285 avirulent strain), as well as, the ability to kill infected target cells (monocytes infected with either virulent or avirulent strains). The CD56+ cells also were assessed in order to evaluate the expression of citotoxic granules (granzyme A, B, perforin and granulysin) and the expression of the activation receptor NKG2D, the inhibition receptors KIR2DL2/L3/S2 and KIR3DL1 and the activation molecules CD69 and CD25. We also determine the capability of production and release of cytokines (IFN-g and TNF-a) using Real Time PCR, flow cytometry and ELISA. The role of IL-15 was analyzed by the addition of recombinant cytokine in some experiments. To determine if the cytotoxic activity was dependent of granules, cell cultures were supplemented with specific inhibitors which prevent granule release. The results showed that cells from patients present a lower citotoxic response when compared to healthy individuals. The direct citotoxicity seems to be granule-dependent but independent on perforin, whereas the citotoxicity against target cells showed to be perforin dependent. It was observed an augmented expression of granulysin (mRNA and protein) in cells from controls, and that CD56+ cells are able to produce and release granulysin after stimulation with P. brasiliensis yeast cells. Furthermore, the analyses of CD56+ cells from controls showed elevated expression of CD25 and CD69 after the stimulus with yeast cells, while cells from patients are only activated in the presence of IL-15. These results demonstrated that CD56+ cells can participate actively of the immune response against the P. brasiliensis infection either by destroying directly yeast cells or by the recognition and killing of infected cells. Granulysin is the possible mediator of the cytotoxic effect observed in this study, once this protein is produced and released by CD56+ cells. Another important data is the finding that CD56+ cells are able to produce IFN-g after the stimulus, which could influence the subsequent acquired immunological response by stimulating others cells as macrophages and lymphocytes. / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientadores: Jacks Jorge Junior, Maria Elvira Pizzigatti Correa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-15T19:23:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kellermann_MicheleGassen_D.pdf: 1376117 bytes, checksum: 09db31adee16534a2115ee880eb7d6c4 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A mucosite oral é uma complicação comum do transplante de células tronco hematopoéticas (TCTH) e está associada à citotoxicidade das drogas utilizadas durante o regime de condicionamento. Os efeitos debilitantes da mucosite podem causar aumento da morbidade, aumento do risco de infecções sistêmicas e queda de qualidade de vida dos pacientes durante o período imediato pós-condicionamento. Os mecanismos envolvidos na fisiopatologia da mucosite oral são complexos e ainda não foram completamente elucidados. É conhecido o papel da IL-1, IL-6 e do TNF na etiopatogenia da mucosite, como parte do grupo de agentes desencadeadores do processo inflamatório, iniciado pela liberação de radicais livres originados a partir da citotoxicidade das drogas quimioterápicas utilizadas nos esquemas de condicionamento. Variações genotípicas, como polimorfismos, podem contribuir na suscetibilidade individual aos efeitos secundários do tratamento antineoplásico. Desta forma, o objetivo deste estudo foi avaliar retrospectivamente a influência dos polimorfismos IL1B-511C/T, IL1B+3953C/T, IL1RN VNTR íntron 2, TNF-308G/A e IL6-174G/C na mucosite oral, situação final e sobrevida pós-TCTH. A análise dos polimorfismos foi realizada através de reações de PCR utilizando DNA genômico obtido de amostras de sangue periférico de 55 pacientes submetidos ao transplante de células-tronco hematopoéticas alogênico e autólogo. Os resultados demonstraram correlação entre o polimorfismo no gene IL1B+3953C/T e a gravidade da mucosite oral. Os pacientes que expressaram os genótipos IL1B+3953TT e IL1B+3953CT, desenvolveram mucosite oral grave. Ao avaliar apenas os pacientes submetidos ao TCTH alogênico, essa relação foi mantida, contudo, não foi estatisticamente significante. Os resultados também revelaram que pacientes com mucosite oral grave apresentavam menor sobrevida pós-transplante e maior mortalidade em relação aos pacientes com mucosite leve a moderada. Adicionalmente, os resultados deste estudo demonstraram que a presença dos genótipos IL1B+3953TT e IL1B+3953CT, associados com mucosite oral grave também estavam relacionados com maior mortalidade e menor sobrevida global pós-TCTH. Concluindo, os resultados deste trabalho demonstraram a correlação do polimorfismo no gene IL1B+3953C/T com a gravidade da mucosite oral, situação final e sobrevida pós-TCTH / Abstract: Mucositis is a frequent complication of high-dose chemoradiotherapy regimens commonly used as conditioning therapy before hematopoietic stem cell transplantation (HSCT). The debilitanting effects of mucositis can result in impair quality of life and increase the risk of sepsis in patients submitted to HSCT. The mechanisms involved in the pathobiology of oral mucositis are complex and has not been fully elucidated. Its well known the role of IL-1, IL-6 and TNF in pathogenesis of mucositis, as part of the group of agents triggering the inflammatory process, initiated by free radicals arising from the toxicity of chemotherapy drugs used in conditioning regimens. Genotypic variations, such as polymorphisms, can contribute to individual susceptibility to side effects of anticancer treatment. Thus, the goal of this study was to evaluate retrospectively the influence of polymorphisms IL1B-511C/T, IL1B+3953C/T, IL1RN VNTR, TNF- 308G/A e IL6-174G/C in oral mucositis and survival post-HSCT. The analysis of polymorphisms was performed by PCR reactions using genomic DNA extracted from peripheral blood samples from 55 patients undergoing autologous and allogeneic hematopoietic stem cell transplantation. The results showed a significant correlation between IL1B+3953C/T polymorphism and severity of oral mucositis. Patients who expressed the genotypes IL1B+3953TT and IL1B+3853CT, developed severe oral mucositis. When only the patients undergoing allogeneic HSCT were evaluated, this relationship was maintained, although not statistically significant. The results also reveled that patients with severe oral mucositis had a lower overall survival after transplantation and increased mortality compared to patients with mild to moderate mucositis. This study showed an association between IL1B+3953TT and IL1B+3953CT genotypes and higher mortality and lower overall survival after HSCT. In conclusion, our results demonstrated the correlation of IL1B+3953C/T polymorphism with oral mucositis severity and survival after HSCT / Doutorado / Estomatologia / Doutor em Estomatopatologia

Orientador: Anibal Eugenio Vercesi / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-11T13:52:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paim_BrunoAlves_D.pdf: 3170914 bytes, checksum: d4f5cbbb9bfc262aef0879eaf9d377d6 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Neste trabalho, o estresse oxidativo em mitocôndrias isoladas de fígados de camundongos knockout para o receptor de LDL (LDLr-/-) foi caracterizado por apresentar um menor conteúdo de isocitrato mitocondrial, uma reduçãoda razão GSH/GSSG e um maior conteúdo de proteínas oxidadas quando comparados a camundongos controles. A maior produção de EROs pelas mitocôndrias de camundongos LDLr-/- foi prevenida quando as mesmas foram incubadas na presença de isocitrato exógeno, o qual é capaz de manter NADPH completamente reduzido. Resultados semelhantes foram obtidos quando os animais foram tratados com solução de citrato solução de citrato de sódio 55 mM/ ácido cítrico 67 mM durante duas semanas, onde houve uma redução na produção de EROs pelas mitocôndrias isoladas de fígado assim como uma recuperação parcial no consumo de oxigênio mantido por substratos endógenos bem como no perfil de oxidação dos nucleotídeos de piridina. Os linfócitos de camundongos LDLr-/- também apresentaram elevação na produção de EROs, celular e mitocondrial bem como uma elevação nos níveis de Ca2+, citosólico e mitocondrial, quando comparados a camundongos controles. Uma vez que [Ca2+] intracelular tem demonstrado participar na modulação da resposta Th1 e Th2 e no processo de ativação linfocitária, decidimos estudar algumas citocinas em camundongos LDLr-/-. As citocinas Th1 (IL-2 e TNF- a) e Th2 (IL-4 e IL-10) se mostraram elevadas quando comparadas a camundongos controles. A elevação das citocinas Th1 e Th2, a geração de EROs e as elevações das concentrações de Ca2+ foram parcialmente inibidas após tratamento dos camundongos com verapamil, um antagonista de canal de cálcio tipo L. Os resultados nos levam a concluir que o estresse oxidativo observado em mitocôndrias isoladas de fígados de camundongos LDLr-/- ocorre em resposta a uma redução no conteúdo de substratos endógenos redutores de NADPH e que pode, ao menos em parte, ser corrigido após suplementação oral com solução de citrato. Além do mais, foi demonstrado que o Ca2+, em linfócitos isolados de baços de camundongos LDLr-/-, possui papel fundamental modulando a geração de EROs e a produção de citocinas. Estas alterações são provavelmente relacionadas com o processo de ativação linfocitária, em razão das lesões ateroscleróticas observadas no arco aórtico dos camundongos LDLr-/-, formadas espontaneamente / Abstract: In this work, oxidative stress in liver mitochondria isolated from LDLr-/- mice was further characterized by showing a lower mitochondrial isocitrate content, lower matochondrial GSH/GSSG ratio and a higher liver content of protein carbonyls as compared to control mice. The higher rate of ROS production in LDLr -/- mitochondria was also prevented by the presence of exogenous isocitrate which maintains NADP+ fully reduced. Similar results were obtained when the annimals were treated with drinking water containing 55 mM sodium citrate/67 mM citric acid during two weeks, when was observed lower levels of ROS production, an improve in the rate of oxygen consumption supported by NADP-linked substrates as well as a higher capacity to sustain reduced NAD(P)H in liver mitochondria. The spleen lymphocytes isolated from k/o mice also showed higher ROS generation by lymphocyte mitochondria and whole cell, and higher levels of cytosolic and mitochondrial Ca2+ compared to control mice. As intracellular Ca2+ has been shown to affect Th1 and Th2 priming and lymphocyte activation we evaluated some cytokines in LDL receptor k/o mice compared to controls. Th1 cytokines (interleukin-2 and TNF-a), as well as Th2 cytokines (interleukin-10 and interleukin-4) were higher in k/o mice than in control. The increase of Th1 and Th2 cytokines, ROS generation, and Ca2+ concentration were partially inhibited by treatment of the k/o mice with verapamil, an L-type Ca2+ channel antagonist. In conclusion, the data demonstrate that the liver mitochondrial oxidative stress in hypercholesterolemic LDL receptor knockout mice is the result of a low content of mitochondrial NADPH-linked substrates in the intact animal that can be, at least in part, replenished by oral administration of citrate. Also, we demonstrate that Ca2+ presents a central role in spleen mononuclear cell from hypercholesterolemic LDL receptor knockout mice modulating ROS generation and cytokines production. These alterations are probably related to lymphocyte activation due the expontaneous atherosclerotic lesion observed in aortic arch of k/o mice / Doutorado / Medicina Experimental / Doutor em Fisiopatologia Medica

Abstract The purpose of the present study was to compare the procalcitonin (PCT), neopterin, interleukin-8 (IL-8), interleukin-10 (IL-10) and interleukin-12 (IL-12) levels with those of erythrocyte sedimentation rate (ESR) and C-reactive protein (CRP) in cancer patients with (56) and without infection (36) and to evaluate their ability to differentiate infections from neoplastic fever (n = 10). The infection group had statistically higher levels of CRP (91 vs. 19 mg/l, p &lt; 0.001), PCT (0.28 vs.0.12 ng/ml, p &lt; 0.001), neopterin (12.8 pg/mL vs. 4.0 pg/mL, p &lt; 0.001), IL-8 (27.7 vs. 16.9 pg/ml, p = 0.032), IL-10 (3.8 pg/mL vs. 1.8 pg/mL, p = 0.005) and ratios of neopterin to IL-12 (1.74 vs. 0.11, p &lt; 0.001), and IL-10 to IL-12 (0.4 vs. 0.05, p &lt; 0.001) than the non-infection group. After a subdivision of the study population into patients with local or advanced disease, the differences between the study groups remained statistically significant for CRP and neopterin both in local (p &lt; 0.05 and p &lt; 0.001) and advanced diasease (p &lt; 0.01 and p &lt; 0.001) and in advanced disease for PCT (p &lt; 0.001), IL-10 (p &lt; 0.05), IL-12 (p &lt; 0.05), neopterin to IL-12 ratio (p &lt; 0.01) and IL-10 to IL-12 ratio (p &lt; 0.01). The ESR levels did not differ between the study group (50 vs. 42 p = 0.16), while the IL-12 values were lower in the infection group (10.6 pg/mL vs. 71.6 pg/mL, p = 0.007). The tumor load did not influence any of the studied infection markers within the study groups. For identifying bacteremia by area under the operating characteristics curves (AUC), the highest values were obtained for PCT (0.92) and neopterin (0.90), and slightly lower values were recorded for the ratios neopterin to IL-12 (0.79) and IL-10 to IL-12 (0.75). None of the markers or ratios were good for differentiating non-bacteremic infections from neoplastic fever, the AUC values rangin from 0.27 for ESR to 0.61 for IL-10 to IL-12 ratio. The simultaneous use of the ratio of neopterin to IL-12 with its high sensitivity (82%) and that of IL-10 to IL-12 with its high specificity (90%) should be further studied.

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