Parasitos pertencentes ao gênero Echinococcus são platelmintos que necessitam de dois hospedeiros para completar o seu ciclo de vida. Durante a fase larval expressam abundantemente uma proteína chamada Antígeno B (AgB), que é uma lipoproteína oligomérica com massa molecular de aproximadamente 150 kDa formada por subunidades de 8 kDa. As subunidades do AgB são codificadas por pelo menos cinco genes (AgB1-5), com similaridade superior a 70%. A função da proteína nativa tem sido relacionada com a modulação da resposta imune do hospedeiro intermediário, ocasionando um viés para a resposta Th2 e com a detoxificação de metabólitos lipídicos no interior do cisto. Neste trabalho, foi avaliada a ocorrência de rearranjos entre os loci gênicos AgB1-5 durante a fase larval de E. granulosus sensu stricto e E. ortleppi através de Southern blot e de variação do número de cópias dentro de um mesmo cisto de E. granulosus sensu stricto por qPCR. Também foram determinadas a diversidade de seqüências destes cinco genes durante a fase adulta de E. granulosus sensu stricto através de clonagem e o seqüenciamento de produtos de PCR obtidos a partir de um único verme, bem como foram desenvolvidos anticorpos policlonais contra a proteína recombinante dos cinco genes descritos e contra um peptídeo sintético representante do gene AgB2. As diferenças na organização dos genes do AgB entre cistos foram analisadas em três isolados de E. granulosus sensu stricto e três isolados de E. ortleppi por Southern blot. O padrão de bandas de hibridização revelou que esta família gênica contém pelo menos nove genes em E. granulosus sensu stricto e dez em E. ortleppi. Foram observadas diferenças entre os cistos de E. ortleppi quanto ao padrão de bandas de AgB3, o que indicaria a ocorrência de rearranjos. A análise do número de cópias dos genes AgB1-5 em protoescóleces de um único cisto revelou uma grande heterogeneidade no número de cópias de todos os genes do AgB analisados, muitas vezes superiores a 10 vezes entre os protoescóleces. A grande divergência entre os protoescóleces sugere que o mecanismo responsável pela variação origine elementos de DNA instáveis. A diversidade de seqüências dos genes do AgB1-5 do verme adulto foi menor que a encontrada na fase larval. Interessantemente, o verme adulto analisado neste trabalho apresentava seqüências típicas de duas espécies, AgB2 e Mdh de E. ortleppi e AgB1, AgB3, AgB4 e AgB5 além do haplótipo mitocondrial de Cox1 de E. granulosus sensu stricto. Esta é a primeira vez que um verme adulto, possivelmente hibrido, de Echinococcus é encontrado, e indica que o intercruzamento entre E. granulosus sensu stricto e E. ortleppi pode gerar organismos viáveis. A síntese de anticorpos contra cada uma das cinco subunidades do AgB descritas foi obtida pela inoculação de proteína recombinante (recAgB1-5) em camundongos BALB/c. Embora todas as proteínas recombinantes tenham sido imunogênicas, observou-se reação cruzada entre elas, e apenas os anticorpos contra recAgB3 e recAgB4 foram mais reativos contra a proteína inoculada. Para melhorar a especificidade dos anticorpos, sintetizou-se oligopeptídeos de 12-15 aminoácidos representativos de cada subunidade acoplados a uma proteína carreadora (oliAgB1-5) e imunizaram-se camundongos BALB/c. A análise do soro obtido dos camundongos revelou que dos cinco peptídeos testados, apenas oliAgB2 foi imunogênico e apresentou uma resposta específica. / Parasites belonging to the genus Echinococcus are flatworms that require two hosts to complete their lifecycle. During their larval stage, Echinococcus abundantly expresses a protein called antigen B (AgB), which is a 150 kDa oligomeric lipoprotein composed by 8 kDa subunits. AgB is encoded by at least five genes (AgB1-5) with similarity above 70%. The function of native protein has been related to the modulation of host immune responses leading towards a Th2 cellular response bias. The protein is also involved with detoxification of lipid metabolites inside the cyst. In this study we evaluated the occurrence of rearrangements within AgB1-5 loci on metacestodes of E. granulosus sensu stricto and E. ortleppi using Southern blot and the variation at AgB number of copies within an E. granulosus sensu stricto cyst by qPCR. We also analyzed the sequence diversity of these five genes during the adult stage of E. granulosus sensu lato by cloning and sequencing PCR products obtained from a single adult worm. Finally, we have developed antibodies against AgB1- 5 recombinant proteins (recAgB1-5) and against a synthetic peptide representative of subunit AgB2. The differences in AgB gene organization among isolates were analyzed in three E. granulosus sensu stricto and three E. ortleppi cysts. The banding pattern revealed that this gene family contains at least nine genes in E. granulosus sensu stricto and ten in E. ortleppi. Differences in the AgB3 banding pattern were observed among the E. ortleppi cysts, which would indicate the occurrence of rearrangements. The AgB1-5 number of copies analysis in protoscoleces from a single cyst revealed a large heterogeneity of all AgB genes analyzed, often more than 10 times between protoscoleces. The large divergence among protoscoleces suggests that the mechanism responsible for copy number variation originates unstable DNA elements. The sequence diversity of AgB within an adult worm was lower than that found in the larval stage. Interestingly, the adult worms examined in this study showed typical sequences of two species: AgB1, AgB3, AgB4 and AgB5, as well as the Cox1 mitochondrial haplotype, are similar to E. granulosus sensu stricto sequences and Mdh and AgB2 were identical to those described for E. ortleppi. That is the first time that an adult worm of Echinococcus possibly hybrid is found, and it may indicate that the cross fertilization between E. granulosus sensu stricto and E. ortleppi generates viable organisms. Antibodies against each of the five subunits of AgB described were obtained by inoculating BALB/c mice with recombinant proteins recAgB1-5. Although every recombinant protein was immunogenic, we observed crossreaction between them, and only the response against recAgB3 and recAgB4 showed some specificity. To improve the antibody specificity, we synthesized oligopeptides of 12-15 amino acids representative of each AgB subunit (oliAgB1-5) coupled to a carrier protein and used these antigens to immunize BALB/c mice. Analysis of serum obtained from mice showed that only one of five oligopeptides tested (oliAgB2) was immunogenic, and it leads to a specific response.

O nucleotídeo de purina ATP, no meio extracelular, participa de diversos processos fisiológicos e patológicos como vasodilatação/constrição, proliferação, diferenciação, modulação sináptica, dor, inflamação e morte celular. Entre os receptores purinérgicos, o subtipo P2X7 é bem descrito como mediador de processos inflamatórios pela liberação de IL-1β e de morte celular com ativação de caspases. Evidências na literatura apontam para o envolvimento do sistema purinérgico no crescimento e na progressão de glioblastomas. Esses tumores são os mais comuns do SNC e seu alto grau de malignidade deve-se à capacidade de rápida proliferação e invasão no tecido sadio. Considerando a resistência que os glioblastomas apresentam à morte celular induzida por ATP, o objetivo desse trabalho foi investigar a expressão e funcionalidade do receptor citotóxico P2X7 em linhagens de gliomas e suas implicações na biologia tumoral. Entre as linhagens de glioblastomas estudadas, a linhagem de camundongo GL261 apresentou sensibilidade à morte induzida por ATP pela liberação de LDH, incorporação de iodeto de propídio e diminuição da viabilidade mitocondrial. O ATP foi tóxico em concentrações acima de 2 mM, o BzATP foi mais potente que o ATP e o antagonista oATP bloqueou completamente a morte celular. O silenciamento do receptor P2X7, na GL261, por RNA de interferência, também aboliu a morte celular induzida por ATP confirmando o envolvimento desse receptor, embora a formação de poro ainda tenha sido visível nestas células, ainda que diminuída. A morte celular apresentou características necróticas como a ruptura de membrana, a falta de ativação de caspases e a falta de externalização de fosfatidilserina, mas ao mesmo tempo houve encolhimento celular. Além dos efeitos mediados pela sua ativação, o silenciamento do receptor P2X7 na linhagem GL261 diminuiu a adesão e promoveu a migração celular, características de tumores mais invasivos. Em amostras de pacientes com gliomas, foi possível observar que a expressão de P2X7 correlaciona diretamente com a sobrevida dos pacientes. Juntamente com os dados da linhagem silenciada para o P2X7, é possível apontar o receptor P2X7 como uma possível molécula anti-tumoral, cuja redução na expressão diminui a adesão, aumenta a migração, torna a célula resistente à morte induzida por ATP, possivelmente diminuindo, desta forma, a sobrevida de pacientes acometidos por esta doença. / Purines nucleotides, particularly extracellular ATP, participate in diverse physiological and pathological processes such as vasodilatation/constriction, cell proliferation, differentiation, synaptic modulation, inflammation, pain sensation and cell death. Among purinergic receptors, the P2X7 subtype is well described as a mediator of inflammatory processes via IL-1β release and cellular death induced by caspases activation. Evidences in the literature point to the purinergic system involvement in growth and glioblastoma progression. These tumors are the most common in the central nervous system (CNS) and their high grade of malignance is the result of rapid proliferation and invasion abilities. Considering the resistance that glioblastomas show to ATP-induced cell death, the objective of this work was to investigate the expression and function of cytotoxic P2X7 receptor in glioma cell lines and their implications in tumor biology. Among the glioma cell lines, the mouse GL261 was sensitive to ATP-induced cell death with LDH release, iodide incorporation and a decrease in mitochondrial viability. ATP was toxic in concentrations above 2 mM, BzATP was more potent than ATP and the antagonist oATP blocked completely the cell death induced by ATP. P2X7 receptor silencing in GL261 by RNA interference, also abolished ATP-induced cell death, confirming this receptor involvement, although a diminished pore induction was observed. Cellular death had necrotic features like membrane rupture, lack of caspase activation and lack of phosphatidylserine exposure, but at the same time shrinking also occurs. Beyond its activation effects, P2X7 knockdown in GL261 decreased cell adhesion and promoted migration, features common to more invasive tumors. In human glioma samples, P2X7 receptor expression correlated directly with patients‟ survival. Together with data from P2X7-knocked down cell line, it is possible to suggest the P2X7 receptor as an anti-tumoral molecule, whose expression reduction leads to decreased adhesion, increased cell mobility, resistance to ATP-induced cell death, and therefore, decreased patients survival.

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-07-27T20:16:50Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Gillene Batista Ferreira da Costa.pdf: 1571419 bytes, checksum: 9a32d696aec70ecf4657d46e65dcb369 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-07T22:06:37Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Gillene Batista Ferreira da Costa.pdf: 1571419 bytes, checksum: 9a32d696aec70ecf4657d46e65dcb369 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-07T22:06:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Gillene Batista Ferreira da Costa.pdf: 1571419 bytes, checksum: 9a32d696aec70ecf4657d46e65dcb369 (MD5) Previous issue date: 2017-02-20 / CNPq / O 5-fluoruracila (5-FU) é um quimioterápico de uso já consolidado no tratamento de lesões potencialmente malignas de pele. No entanto, em cavidade oral, o uso de quimioterápicos de forma tópica para o tratamento de lesões potencialmente malignas ainda não é uma realidade. Um tratamento tópico evitaria o desconforto pós-operatório causado por procedimentos invasivos. Sendo assim, esse trabalho objetivou avaliar a efetividade do antineoplásico 5-fluoruracila em orabase em lesões potencialmente malignas do dorso da mucosa lingual de camundongos, através da expressão do marcador biológico Ki 67. Para isso, camundongos machos albinos Swiss (Mus musculus) foram submetidos ao carcinógeno 4-nitroquinolona-1-óxido (4NQO), 100 μg/mL, na água de beber por 8 semanas. Após o período de monitoramento de mais 08 semanas, ao desenvolverem o processo de carcinogênese em língua, foram tratados com 01 aplicação tópica diária de 5-FU em orabase, nas concentrações de 0,5% e 5%, por 3 semanas. Após eutanásia dos animais, as línguas foram removidas, analisadas em microscopia de luz e através de imuno-histoquímica para o marcador biológico Ki 67. Observou-se que os animais tratados com 5-FU 0,5% orabase apresentaram uma menor quantidade de células marcadas pelo Ki 67, com uma menor intensidade de coloração, indicando que houve uma menor proliferação celular nos animais tratados, confirmando que o 5-fluoruracil 0,5% em orabase poderá consistir em um recurso terapêutico eficaz no tratamento de lesões potencialmente malignas da cavidade oral. / 5-fluorouracil (5-FU) is a chemotherapy of already consolidated use in the treatment of potentially malignant skin lesions. However, in the oral cavity, the use of topical chemotherapy for the treatment of potentially malignant lesions is not yet a reality. A topical treatment would avoid the postoperative discomfort caused by invasive procedures. Thus, this work aimed to evaluate the effectiveness of 5-fluorouracil antineoplastic in orabase in potentially malignant lesions of the lingual mucosa of mice, through the expression of the biological marker Ki 67. For this, Swiss albino male mice (Mus musculus) were submitted to the carcinogen 4-nitroquinolone-1-oxide (4NQO), 100 μg / mL, in the drinking water for 8 weeks. After the monitoring period of another 8 weeks, when they developed the carcinogenesis process in language, they were daily treated with a daily topical application of 5-FU in orabase, at concentrations of 0.5% and 5%, for 3 weeks. After euthanasia of the animals, the languages were removed, analyzed by light microscopy and by immunohistochemistry for the Ki 67 biological marker. Animals treated with 5-FU 0.5% orabase showed a lower amount of cells labeled with Ki 67, with a lower staining intensity, indicating that there was less cell proliferation in treated animals, confirming that 5-fluorouracil 0,5% in orabase may be an effective therapeutic resource in the treatment of potentially malignant lesions of the cavity oral.

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-08-29T22:35:03Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Jessica Alves Cavalcante.pdf: 3000670 bytes, checksum: a98c78f78ffd2d82f171d901e0297cf1 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-09-10T19:07:29Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Jessica Alves Cavalcante.pdf: 3000670 bytes, checksum: a98c78f78ffd2d82f171d901e0297cf1 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-10T19:07:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Jessica Alves Cavalcante.pdf: 3000670 bytes, checksum: a98c78f78ffd2d82f171d901e0297cf1 (MD5) Previous issue date: 2017-07-13 / CAPES / O avanço nos estudos do câncer e a compreensão de diversos mecanismos se deve principalmente a oncologia experimental. Este ramo da oncologia surgiu com a introdução dos chamados tumores transplantáveis ou transmissíveis e são mantidos em laboratório através da inoculação seriada em animais ou mantidos em cultura celular. O tumor de Ehrlich é um adenocarcinoma espontâneo de glândula mamária originário de camundongos fêmea. Nesse contexto, o presente trabalho visou avaliar os efeitos inibitórios do extrato bruto etanólico de Rhipsalis baccifera (Cactaceae) sobre o Carcinoma de Ehrlich, assim como analisar o perfil fitoquímico e avaliação da toxicidade. O estudo foi realizado através de método experimental, desenvolvido no Laboratório de Farmacologia e Cancerologia Experimental do Departamento de Antibióticos da Universidade Federal de Pernambuco. O vegetal foi coletado no campus da UFPE, identificado e preparado exsicata para depósito em herbário. O processo extrativo de Rhipsalis baccifera para obtenção do extrato foi em etanol e em seguida obtido por filtração e concentrado em evaporador rotativo. Foi realizado perfil fitoquímico através de cromatografia delgada, avaliação da toxicidade “in vitro” por Artemia Salina Leach e avaliação da toxicidade aguda “in vivo” pelo método OECD 423. Para os ensaios da atividade antitumoral foram utilizados vinte e quatro camundongos albinos Swiss fêmeas com 60 dias, pesos entre 25 a 40 g com ração e água ad libitum. Para o implante da massa tumoral, as células tumorais foram retiradas de animal doador através da aspiração da forma ascítica e introduzidos nos animais receptores, por via subcutânea numa concentração de 25 x 10⁶ células/mL. Após sete dias de tratamento dos animais, estes foram eutanasiados para realização de exames hematológicos e bioquímicos. Os órgãos foram processados para análise quanto às alterações macroscópicas e microscópicas. Toda investigação foi realizada de acordo com as normas do Comitê de Ética no uso de animais (CEUA) do Centro de Biociências da UFPE. A análise fitoquímica encontrou a presença de alcaloides, flavonoides, terpenos, triterpenos e fenilpropanóides; citotoxicidade para as A. salinas foi elevada com CL50 de 0,9788 μg/mL; toxicidade aguda com DL₅₀ encontrada de 2500 mg/kg; o EERB apresentou inibição tumoral de 84,1% e 75,8% para as doses de 250 mg/kg e 125 mg/kg, respectivamente em relação ao grupo controle. Recomenda-se novas pesquisas para avaliar diferentes componentes fitoquímicos e influências ambientais; o EERB revelou alta citotoxicidade, no entanto resultados com outras espécies da mesma família são divergentes, onde se faz necessário outros estudos para melhor avaliação; o EERB apresentou baixa toxicidade aguda e alta potencial para uso, assim outras investigações envolvendo estudos pré-clínicos e clínicos do extrato serão necessárias para determinar a dose segura; o EERB apresentou inibição tumoral significativa em relação ao grupo controle. Sugere-se, no entanto, um estudo mais detalhado a partir de outras vias de administração do extrato, bem como a utilização de outras linhagens tumorais. / Advances in cancer studies and the understanding of various mechanisms are mainly due to experimental oncology. This branch of oncology arose with the introduction of so-called transplantable or transmissible tumors and are maintained in the laboratory through serial inoculation in animals or maintained in cell culture. The Ehrlich tumor is a spontaneous adenocarcinoma of the mammary gland from female mice. In this context, the present work aimed to evaluate the inhibitory effects of the crude ethanolic extract of Rhipsalis baccifera (Cactaceae) on the Ehrlich Carcinoma, as well as to analyze the phytochemical profile and toxicity evaluation. The study was carried out through an experimental method, developed in the Laboratory of Pharmacology and Experimental Cancerology of the Department of Antibiotics of the Federal University of Pernambuco. The plant was collected on the campus of UFPE, identified and prepared exsicata for herbarium deposit. The extractive process of Rhipsalis baccifera to obtain the extract was in ethanol and then obtained by filtration and concentrated in a rotary evaporator. A phytochemical profile was performed through thin chromatography, in vitro toxicity evaluation by Artemia Salina Leach and evaluation of acute toxicity in vivo using the OECD 423 method. Twenty-four female Swiss albino mice were used for antitumor activity assays. 60 days, weights between 25 and 40 g with feed and water ad libitum. For tumor mass implantation, tumor cells were withdrawn from donor animal through ascitic aspiration and introduced into the recipient animals subcutaneously at a concentration of 25 x 10 6 cells / ml. After seven days of treatment, the animals were euthanized for haematological and biochemical tests. The organs were processed for macroscopic and microscopic alterations. All research was carried out according to the standards of the Ethics Committee on the use of animals (CEUA) of the Bioscience Center of UFPE. Phytochemical analysis found the presence of alkaloids, flavonoids, terpenes, triterpenes and phenylpropanoids; Cytotoxicity for A. salinas was elevated with LC50 of 0.9788 μg / mL; Acute toxicity with LD50 found at 2500 mg / kg; The EERB showed tumor inhibition of 84.1% and 75.8% for the 250 mg / kg and 125 mg / kg doses, respectively, in relation to the control group. New research is recommended to evaluate different phytochemical components and environmental influences; The EERB revealed high cytotoxicity, however results with other species of the same family are divergent, where other studies are necessary for a better evaluation; The EERB showed low acute toxicity and high potential for use, so other investigations involving preclinical and clinical studies of the extract will be necessary to determine the safe dose; The EERB showed significant tumor inhibition in relation to the control group. However, a more detailed study is suggested from other routes of administration of the extract, as well as the use of other tumoral strains.

Existe um interesse crescente pelo controle das condições de cultivo necessárias para a expansão de células-tronco de indivíduos adultos devido ao grande potencial para o desenvolvimento de pesquisa básica e de aplicações terapêuticas apresentado pelas mesmas. Atualmente, a literatura apresenta poucos trabalhos que detalhem a biologia da célula-tronco mesenquimal (MSC) de camundongo, revelando a necessidade de estudos voltados para este tema. Quatro culturas de longa duração foram produzidas com células da medula óssea de camundongos normais e IDUA knock-out através de técnicas de cultivo relativamente simples. Estas culturas puderam ser mantidas por até 40 passagens, e demonstraram ser morfologicamente homogêneas. Células dessas culturas puderam ser induzidas a diferenciarem-se ao longo de vias de diferenciação adipogênica e osteogênica, e revelaram ser capazes de suportar o crescimento e a proliferação de células-tronco hematopoiéticas. Por apresentarem tais características funcionais, essas populações celulares foram operacionalmente definidas como MSCs. Quando o repertório de marcadores de superfície dessas células foi observado por meio de citometria de fluxo, verificou-se que elas eram positivas para Sca-1, CD29, CD44 e CD49e, e eram negativas para CD11b, CD13, CD18, CD19, CD31, CD45, CD49d e Gr-1 Este perfil de moléculas de superfície assemelha-se àquele descrito para a MSC humana, e indica ausência de contaminantes hematopoiéticos. Uma verificação preliminar da freqüência da MSC na medula óssea de camundongo foi realizada, trazendo a estimativa de que uma MSC está presente numa faixa de 11.000 – 27.000 células. Finalmente, os dados revelaram que não há diferenças imediatamente perceptíveis entre camundongos normais e do modelo murino de MPS I no tocante à MSC, o que indica que os trabalhos futuros visando à correção da deficiência de α-L-iduronidase neste modelo utilizando a MSC são viáveis. O estabelecimento da metodologia para o cultivo e expansão da MSC murina através de técnicas simples vem preencher uma lacuna existente no campo dos modelos experimentais animais, trazendo novas perspectivas para o desenvolvimento de estratégias de terapia celular/genética em modelos experimentais murinos.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:07:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005 / OBJETIVO:Avaliar os efeitos da OHB em células caliciformes de íleo de camundongos após a exposição à radiação ionizante. MÉTODO: Foram utilizados 35 camundongos machos da linhagem C57BL, randomizados e distribuídos em quatro grupos: Grupo I, Controle (GC): 5 animais não irradiados ,submetidos à observação por 24hs, seguidos de eutanásia e ressecção de um segmento de 2cm do íleo terminal. Grupo II, Irradiado (GRT): 10 animais submetidos a uma sessão de radioterapia com dose única de 5Gy e após 24hs de observação foram submetidos à de eutanásia e ressecção de um segmento de 2cm do íleo terminal. Grupo III, Irradiado/ Oxigenação hiperbárica (GRT/OHB): 10 animais submetidos a uma sessão de radioterapia com dose única de 5Gy, após 24hs foram expostos a cinco sessões diárias de 90’ de OHB, foram submetidos à eutanásia no 7°dia após a sessão de radioterapia, seguido de ressecção de um segmento de 2 cm do íleo terminal. Grupo IV, Irradiado/ Sem Oxigenação hiperbárica (GRT/SOHB): 10 animais submetidos a uma sessão de radioterapia com dose única de 5 Gy e no 7° dia após a sessão radioterápica foram submetidos a eutanásia e ressecção de um segmento de 2 cm do íleo terminal. Foram avaliadas as células caliciformes.Os testes estatísticos utilizados foram, análise de variância de Kruskal-Wallis e teste de Mann-Whitney, com p ≤ 0,05 . RESULTADOS: Ao comparar o número de células encontrados, pode-se observar que o Grupo IV >I >II > III, sendo que não existe diferença entre o grupo I e III. A média de células caliciformes encontradas nos grupos foram GI 6,21; GII 5,01; GIII 6,09; GIV 16,06. Os estudos demonstraram que o grupo IV apresentou uma hiperplasia das células caliciformes (p ≤ 0,05). CONCLUSÃO: A exposição às radiações ionizantes provoca hiperplasia das células caliciformes. A oxigenação hiperbárica diminui as alterações encontradas nas células caliciformes do íleo de camundongos submetidos à radioterapia. / Objective: The aim of the present investigation was to analyze the effect of the radiance in the ileum caliciforms cells of the male mice from the line C57BL. Methods: the mice was randomize and distributed in four groups: Group I, control (GC) : 5 animals no irradiated, under 24 hrs observation they are sacrificed and 2cm from terminal ileum was colleted. Group II, irradiated (GRT): 10 animals irradiated with a 5Gy single dose and after 24hrs observation they was sacrificed and 2cm from terminal ileum was colleted. Group III, irradiated/ hyperbaric oxygenic therapy (GRT/OHB): 10 animals irradiated with a 5Gy single dose, after 24hs they was exposed to 5 sections daily with 90’ each, they was sacrificed after 7 days of the radiotherapy and 2cm from terminal ileum was colleted. Group IV, irradiated/ no hyperbaric oxygenic therapy (GRT/SOHB): 10 animals irradiated with a 5Gy single dose, they was sacrificed after 7 days of the radiotherapy and 2cm from terminal ileum was colleted. The Kruskal-Wallis variance test and Mann-Whitney test was used to analyzed the data observed. Results: When we match the number of cells, could be observed that the group IV>I>II>III, but that was not founded a difference between group I and III. The caliciforms cells media founded in groups were GI 6,21; GII 5,01; GIII 6,09; GIV 16,06. The studs showed that the group IV demonstrated an hyperplasic from caliciforms cells (p<0,05). Conclusions: The exposition to the ionic radiation induce an hyperplasic in the number of caliciforms cells. The hyperbaric oxygen therapy induce a decreased of the morphological disturbance founded in the caliciforms cells from mice terminal ileum exposed to the radiotherapy / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Existe um interesse crescente pelo controle das condições de cultivo necessárias para a expansão de células-tronco de indivíduos adultos devido ao grande potencial para o desenvolvimento de pesquisa básica e de aplicações terapêuticas apresentado pelas mesmas. Atualmente, a literatura apresenta poucos trabalhos que detalhem a biologia da célula-tronco mesenquimal (MSC) de camundongo, revelando a necessidade de estudos voltados para este tema. Quatro culturas de longa duração foram produzidas com células da medula óssea de camundongos normais e IDUA knock-out através de técnicas de cultivo relativamente simples. Estas culturas puderam ser mantidas por até 40 passagens, e demonstraram ser morfologicamente homogêneas. Células dessas culturas puderam ser induzidas a diferenciarem-se ao longo de vias de diferenciação adipogênica e osteogênica, e revelaram ser capazes de suportar o crescimento e a proliferação de células-tronco hematopoiéticas. Por apresentarem tais características funcionais, essas populações celulares foram operacionalmente definidas como MSCs. Quando o repertório de marcadores de superfície dessas células foi observado por meio de citometria de fluxo, verificou-se que elas eram positivas para Sca-1, CD29, CD44 e CD49e, e eram negativas para CD11b, CD13, CD18, CD19, CD31, CD45, CD49d e Gr-1 Este perfil de moléculas de superfície assemelha-se àquele descrito para a MSC humana, e indica ausência de contaminantes hematopoiéticos. Uma verificação preliminar da freqüência da MSC na medula óssea de camundongo foi realizada, trazendo a estimativa de que uma MSC está presente numa faixa de 11.000 – 27.000 células. Finalmente, os dados revelaram que não há diferenças imediatamente perceptíveis entre camundongos normais e do modelo murino de MPS I no tocante à MSC, o que indica que os trabalhos futuros visando à correção da deficiência de α-L-iduronidase neste modelo utilizando a MSC são viáveis. O estabelecimento da metodologia para o cultivo e expansão da MSC murina através de técnicas simples vem preencher uma lacuna existente no campo dos modelos experimentais animais, trazendo novas perspectivas para o desenvolvimento de estratégias de terapia celular/genética em modelos experimentais murinos.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-07-12T16:42:07Z No. of bitstreams: 1 Tese _ICS_Ricardo Evangelista Fraga.pdf: 5154897 bytes, checksum: af2af2c3bb0b0542ad0b616f2fd0beb9 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-07-12T16:42:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese _ICS_Ricardo Evangelista Fraga.pdf: 5154897 bytes, checksum: af2af2c3bb0b0542ad0b616f2fd0beb9 (MD5) / O presente trabalho trata de estudos relacionados à Corynebacterium pseudotuberculosis (Cp), agente etiológico da linfadenite caseosa. Tem como finalidade estabelecer o perfil da resposta imune durante o percurso da infecção por estirpe atenuada (T1), relacionado ao primeiro experimento, ou selvagem (C57), segundo experimento, de Cp, em diferentes linhagens de camundongos, e desta forma estabelecer o padrão de resposta imune em animais susceptíveis e resistentes, além de avaliar o envolvimento do óxido nítrico, INF-gama e da citocina IL-10 no início do processo infeccioso. Uma comparação entre as respostas imunes a estas duas estirpes foi feita no terceiro experimento. Na metodologia empregada, para o primeiro e segundo experimento, foram utilizados 133 animais de diferentes linhagens, por experimento, sendo: de linhagem heterogênea - 28 Swiss; de linhagem isogênica - 28 Balb/c, 35 C57Black/6 selvagem, 14 C57Black/6 knockout (KO) para óxido nítrico (ON), 14 C57Black/6-KO-IFN-gama e 14 C57Black/6 knockout-KO-IL-10. Cada linhagem estudada foi dividida em dois grupos (controle e teste). Para o terceiro experimento foram utilizados 15 animais Balb/c divididos em três grupos. Os animais do grupo teste foram infectados com a estirpe T1 com 107/ml (1° experimento), a C57 com 102/ml (2° experimento) ou 104/ml das duas estirpes (T1 ou C57), no 3° experimento. Após a infecção os animais Swiss, Balb/c e C57Black/6 selvagens, foram avaliados aos 07, 30, 60 e 120 dias, enquanto que os animais C57Black/6 selvagens e knockout, foram analisados aos 07 e 14 dias (1° e 2° experimentos). Os animais referentes ao 3° experimento foram avaliados aos 70 dias após a infecção. Foi realizada a construção da curva de mortalidade; avaliação morfológica, que constava da identificação de granulomas, bem como dos locais de acometimento e avaliação do peso do baço; avaliação do direcionamento celular para o local da infecção, que corresponde a avaliação total e diferencial das células da cavidade peritoneal; produção das citocinas IL-1α, TNF-α, INF-γ, GMC-SF, IL-10, IL-6, IL-2, IL-17 por células aderentes da cavidade peritoneal estimuladas com antígenos secretados ou com bactéria viva (1° e 2° experimento); imunofenotipagem, avaliando as células T CD4+ e T CD8+; bem como a mensuração das citocinas IL-1α, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-13, IL-17, IL-21, IL-22, IL-27, INF-γ e TNF-α no homogenato do baço, em todos os experimentos. Os resultados obtidos mostram uma diferença entre as linhagens Balb/c, C57Black/6 e Swiss no tipo de resposta imune estabelecida durante infecção com T1 e com C57, onde os animais C57Black/6 demonstraram ser mais resistentes. Dentre os animais nocauteados, aqueles KO-IL-10 demonstraram ser mais resistentes, enquanto que os animais KO-ON e KO-INF-γ foram mais sensíveis à infecção. No 3° experimento foi possível visualizar que a estirpe C57 induziu alterações morfológicas mais acentuadas e maior direcionamento de células para o local da infecção, quando comparada com tais induções feitas pela estirpe T1. Com os experimentos realizados e resultados obtidos, pretendeu-se fornecer subsídios para uma melhor compreensão da relação parasito-hospedeiro no modelo murino, em infecções experimentais que confrontam duas estirpes desta bactéria com diferentes linhagens de camundongos. Estes conhecimentos poderão orientar a construção de protocolos de imunização/desafio visando o desenvolvimento de vacinas ou/e imunoterapias. / Salvador

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:44:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011 / BV UNIFESP: Teses e dissertações

GUERRA, Priscila Valera. Efeito protetor de CXCL10 em infecção experimental por Leishmania braziliensis. 2013. 68 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-07-09T11:23:12Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_pvguerra.pdf: 1062693 bytes, checksum: cbcefa56a6fe8c511929d08079c527fe (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-07-10T10:48:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_pvguerra.pdf: 1062693 bytes, checksum: cbcefa56a6fe8c511929d08079c527fe (MD5) / Made available in DSpace on 2013-07-10T10:48:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_pvguerra.pdf: 1062693 bytes, checksum: cbcefa56a6fe8c511929d08079c527fe (MD5) Previous issue date: 2013 / Leishmania braziliensis is the more common etiologic agent of the cutaneous leishmaniasis in Brazil. BALB/c mice are more susceptible to L. braziliensis infection, although develop small and not ulcerated lesions. The lesions in BALB/c mice infected by L. braziliensis are accompanied by expression of a broad chemokines spectrum, including CXCL10, which is able to attract and activate NK and Th1 cells with IFN-γ production. The aim of this study was to evaluate whether the chemokine CXCL10, administered in early stages of infection could influence the course of disease, leading to a faster and more effective time of healing. Groups of BALB/c mice (n=24) were infected by L. braziliensis and divided into two groups: one group (n=12) received CXCL10 (100 ng/5μL) and the other (n=12) received PBS (5μL), at 1, 3, 5 and 7 days postinfection. Some parameters were evaluated: thickness of the lesions every three days; parasite burden in both the footpad and the draining lymph node, NO concentration, cytokines production (IFN-γ, IL-12p40, TNF-α, IL-4, IL-10 and TGF-β), at 15 and 30 days after infection; and histopathological analysis of lesions. Animals receiving CXCL10 showed reduced disease duration, since the lesions started to regress earlier (12 days), whereas the control animals developed the disease for longer (15 days). CXCL10 induced statistically significant differences in parasite load in the draining lymph nodes compared with control in both times evaluated (15 days: p=0.0353; 30 days: p=0.0292). In the animals receiving CXCL10 was not observed change in the number of parasites in the site of inoculation, even with reduced thickness of the lesion, showing no correlation between lesion size and parasite load. There was no difference in NO concentration between groups with 15 days of infection, and this concentration remained the same in the group receiving CXCL10 at day 30, although it was lower than that observed in the control group. CXCL10 also induced higher levels of IFN-γ and IL-12, and reduced IL-4, IL-10, and TGF-β at 30 days postinfection, when compared to control animals. Histopathology analyses of lesions after 15 days postinfection showed a very mild inflammation in both groups, differing only for the presence of neutrophils, which were practically not observed in lesions of animals receiving CXCL10. Taken together, the data from this study showed CXCL10 chemokine presented a protective effect on L. braziliensis infection in BALB/c mice, with a reduction in the progression of the disease, associated with a higher concentration of IFN-γ and lesser of IL-4 and IL-10. / Leishmania braziliensis é o agente etiológico mais comum da leishmaniose cutânea no Brasil. Camundongos BALB/c são os mais susceptíveis à infecção por L. braziliensis, embora desenvolvam lesões pequenas e não ulceradas. As lesões em BALB/c infectados com L. braziliensis são acompanhadas pela expressão de um amplo espectro de quimiocinas, entre elas CXCL10, que é capaz de atrair a ativar células NK e Th1 com produção de IFN-γ. O objetivo deste trabalho foi avaliar se a quimiocina CXCL10, administrada nos estágios iniciais da infecção, poderia alterar o curso da doença, dimunindo o tempo de cura. Para isso, camundongos BALB/c (n=24) foram infectados com L. braziliensis e divididos em dois grupos: um grupo (n=12) recebeu CXCL10 (100 ng/5µL) e o outro (n=12) PBS (5µL), nos dias 1, 3, 5 e 7 dias de infecção. Alguns parâmetros foram avaliados: a espessura das lesões a cada três dias; a carga parasitária na pata e no linfonodo de drenagem, a concentração de NO, IFN-γ, IL-12p40, TNF-α, IL-4, IL-10 e TGF-β, 15 e 30 dias após a infecção; e análise histopatológica das lesões. Os animais que receberam CXCL10 apresentaram uma redução no tempo de duração da doença, uma vez que as lesões começaram a regredir mais precocemente (12 dias), enquanto que nos animais controle (PBS) a doença evoluiu por mais tempo (15 dias). CXCL10 induziu diferenças estatisticamente significativas na carga parasitária do linfonodo de drenagem nos dois pontos avaliados, quando comparado com o controle (15 dias: p=0,0353; 30 dias: p=0,0292). Nos animais que receberam CXCL10, não foi observada mudança no número de parasitos no sítio de inoculação, mesmo com redução da espessura da lesão, mostrando que não houve correlação entre o tamanho da lesão e a carga parasitária. Não houve diferença na concentração de NO entre os grupos, no 15º dia de infecção, e esta concentração manteve-se igual no grupo que recebeu CXCL10 no 30º dia, embora tenha sido menor do que a observada no grupo controle. CXCL10 também induziu concentrações mais elevadas de IFN-γ e IL-12 e mais reduzidas de IL-4, IL-10, TGF-β 30 dias pós-infecção, quando comparados aos animais controle. A análise histopatológica das patas mostrou uma inflamação muito leve em ambos os grupos, com diferença apenas quanto à ausência de neutrófilos nas lesões dos animais que receberam CXCL10. Em conjunto, os dados mostraram que CXCL10 apresentou um efeito protetor na infecção por L. braziliensis em camundongos BALB/c, com redução no tempo de evolução da doença, associada a maior concentração de IFN-γ e menor de IL-4 e IL-10.