Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T11:39:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 276693.pdf: 1653605 bytes, checksum: 92e108206ef61f401325ee0b2476c79f (MD5) / Tendo em mente que a 1,25D3, produto final do metabolismo da vitamina D3 é essencial para a integridade do sistema reprodutor masculino, e que, a homeostase do Ca+2 desempenha papel chave em muitos processos envolvidos na espermatogênese, avaliamos o efeito em nível membranar da 1,25D3 sobre o metabolismo do Ca+2 em testículo inteiro e célula de Sertoli de ratos imaturos. Foi demonstrado que em após 60 minutos de pré-incubação com o hormônio, não hove variação da captação basal de 45Ca+2 nos tempos de incubação de 30, 60, 150, 300 e 600 segundos. No tempo de incubação de 60 segundos, foi verificado que a 1,25D3 tem a capacidade de aumentar a captação de 45Ca+2 do meio extracelular em diferentes doses em ambos modelos experimentais, sendo este evento independente da ação genômica. Em testículos, observou-se que doses entre 10-15M e 10-9M foram eficazes em aumentar a captação de 45Ca+2, sendo o maior efeito evidenciado da dose de 10-10M (106%). Utilizando esta dose, foi demonstrado que os canais de CCDV do tipo L e T são as principais vias de entrada do íon nas células testiculares, e que há necessidade da manutenção das correntes de K+ e Cl- para que ocorra este evento. Em células de Sertoli também não foi verificada a variação da captação basal de 45Ca+2. Neste sistema, foi verificado que no tempo de 60 segundos de incubação, o hormônio foi capaz de elevar a captação de 45Ca+2 entre as doses de 10-12M e 10-8 M, onde a dose de 10-12 M aumentou em torno de140% a capatação do íon. Já a dose de 10-10 M elevou em 89% o influxo do íon. Desta forma, utilizando a dose de 10-10 M, verificamos que as células de Sertoli comportam- se assim como os testículos: há necessitadade da ativação dos CCDV-L e T para a entrada do Ca+2 assim como das correntes de K+ e Cl-. Também foi verificado que em células de Sertoli há necessidade da ativação das proteínas PKC e p38MAPK para a capatação de Ca+2 estimulada pela 1,25D3. Alé, disso, as proteínas PI3K e ERK1/2 também estão em parte envolvidas neste processo. Por fim, avaliamos que a integridade dos microtúbulos e a atividade dos canais ClC3 faz-se necessária para que ocorra a entrada do íon nas células de Sertoli, sendo esta elevação do íon necessária para que ocorra o processo de secreção celular já demosntrada anteriormente pela 1,25D3.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia. / Made available in DSpace on 2013-07-15T22:44:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 224515.pdf: 1874632 bytes, checksum: f75ffdde81e2821558f7fe8c19ed4e46 (MD5) / Os hormônios tireoidianos (HT) regulam a esteroidogênese e a espermatogênese. O mecanismo clássico de ação dos HT ocorre através da ligação com receptores nucleares específicos. Todavia, as iodotironinas podem atuar por vias não-genômicas ou extranucleares, caracterizadas pela rapidez da resposta (de segundos a minutos), e desta forma sinalizam distintas vias de regulação celular. O objetivo do presente estudo foi estudar o envolvimento dos canais de cloreto no efeito hiperpolarizante do T4 em células de Sertoli de túbulos seminíferos de ratos imaturos, e investigar a ação dos HT na captação de cálcio em testículos de ratos imaturos, assim como a caracterização das vias de entrada deste íon estimuladas por iodotironinas. Para isto foram utilizadas as técnicas eletrofisiológica e de captação de 45Ca2+. Nos estudos eletrofisiológicos, os túbulos seminíferos foram mantidos em uma câmara de perfusão com KRb a 32 ºC, pH 7,4 em atmosfera carbogênica (O2:CO2; 95:5 v/v). Quando usado o ácido carboxílico 9-antraceno (9-AC), este era adicionado e após 30 segundos o T4, e o potencial transmembrana monitorado. Para a captação de 45Ca2+, os testículos foram pré-incubados e incubados em KRb na presença de 0,2 µCi 45Ca2+ a 32 ºC, pH 7,4; mantidos em atmosfera carbogênica (O2:CO2, 95:5 v/v). O T3 ou T4 foram adicionados no meio de incubação. Quando usados inibidores, estes eram adicionados 15 minutos antes do hormônio. O efeito hiperpolarizante do T4 foi bloqueado totalmente na presença de 9-AC, indicando o envolvimento de canais de cloreto nesta ação do T4. Este hormônio também estimulou a captação de 45Ca2+, efeito não evidenciado para o T3 nos tempos e doses estudados. O uso de nifedipina e flunarizina, bloqueadores dos canais de Ca2+ dependentes de tensão (CCDT) tipo L e T, respectivamente, bloquearam a ação estimulatória do T4. Este estímulo também foi bloqueado pelo antagonista de canal de K+ dependente de Ca2+, apamina, e pelo 9-AC, antagonista de canal de Cl-, sugerindo um mecanismo de retroalimentação entre o Ca2+ e Cl- e/ou Ca2+ e K+. O inibidor de proteína cinase A (PKA), KT 5720, inibiu completamente o efeito do T4, indicando a ativação desta via no mecanismo de entrada do Ca2+ estimulada por T4. No entanto, este efeito não foi alterado pelo uso de cloreto de estearoilcarnitina, inibidor de proteína cinase C, sendo que este inibidor demonstrou um efeito per se estimulando a captação de 45Ca2+. Destes resultados pode-se concluir que os canais de Cl- são importantes mediadores da ação hiperpolarizante do hormônio T4 em células de Sertoli. O influxo de 45Ca2+ modulado por T4 é dirigido por correntes de canais de cálcio dependentes de tensão, Cl- e K+, bem como, pela atividade da PKA, sinalizando uma via imediata de ação do T4 na membrana plasmática.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2009. / Made available in DSpace on 2012-10-24T16:38:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 265413.pdf: 3730048 bytes, checksum: f61fcefd12bae9a7111b586b424409ab (MD5) / Hormônios esteróides, vitamina D, retinóides e hormônios da tireóide estimulam respostas celulares através de mecanismos genômicos e não-genômicos. No presente trabalho, hormônios com ação genômica: Tiroxina (T4) e 1?,25-diidróxivitamina D3 (1?,25(OH)2D3 ou 1,25D), foram estudados sob o ponto de vista não-genômico através de dois diferentes sistemas de membrana plasmática: transporte de aminoácidos em testículos de ratos e fluxo de cloreto em células de Sertoli TM4. As células de Sertoli de testículos de mamíferos são células secretoras que além de proteínas, nutrientes e fatores de crescimento, secretam um fluido rico em cloreto (Cl-) e potássio (K+) no lúmen dos túbulos seminíferos que são críticos para espermatogênese. Primeiramente, os resultados desse trabalho demonstraram que os canais de Ca2+ e os canais de K+ dependentes de ATP (K+ATP) são requeridos para o efeito estimulatório do hormônio T4 no transporte de aminoácidos em testículos de ratos imaturos. Além disso, os canais de Cl- e os canais de K+ dependentes da baixa condutância de Ca2+ (SKCa) estão parcialmente envolvidos nesse mecanismo. Esse efeito não-genômico do T4 é dependente da proteína cinase C (PKC) e aponta o T4 como um importante regulador metabólico da função testicular. Posteriormente foi demonstrado o efeito estimulatório da 1,25D no transporte de aminoácidos em testículo de ratos de uma forma dependente da concentração, dependente da idade e específico para esse hormônio. O requerimento dos canais de Ca2+, dos canais SKCa, da proteína cinase A (PKA) e da síntese de proteínas indicam efeitos rápidos e prolongados da 1,25D nesse mecanismo. Através de estudos eletrofisiológicos foi demonstrado que a 1,25D aumenta a permeabilidade ao íon cloreto na membrana plasmática de células de Sertoli TM4 em potenciais despolarizantes através do receptor VDR (receptor de vitamina D) e de uma forma dependente das proteínas PKA e PKC. Com a utilização de análogos esteróis da vitamina D (VDS) específicos para o estudo de respostas não-genômicas, células TM4 individuais foram tratadas com diferentes VDS, 1,25D e 25-diidróxivitamina D3 (25D) (metabólitos naturais); 1?,25(OH)2-lumisterol D3 (JN; agonista não-genômico), e/ou 1?,25(OH)2-vitamin D3 (HL; antagonista não-genômico). Os resultados demonstraram que: 1) 1,25D, 25D e JN são agonistas no estímulo da permeabilidade ao Cl-; 2) HL bloqueia o efeito desses agonistas confirmando a presença de um VDR alternativo de membrana (VDRmem ou VDR-AP). Experimentos de capacitância celular e videomicroscopia demonstraram que a 1,25D estimula processos secretórios em células TM4 importantes para a função reprodutiva. Ensaios de ligação hormônio-receptor e análises computacionais demonstraram que dois curcuminóides, a curcumina (CM) e a bisdemetóxicurcumina (BDC), polifenóis ativos da planta turmérica, se ligam com alta afinidade ao VDR e mais favoravelmente ao VDR-AP. Dessa forma, para verificar a especificidade de ação da 1,25D no VDR-AP, o efeito da CM e da BDC foi testado nas correntes de Cl- em células TM4. Em baixas concentrações, CM e BDC demonstraram um mecanismo de ação similar a 1,25D no aumento da permeabilidade ao íon Cl-. Em altas concentrações, CM e BDC parecem ativar correntes de Cl- através dos canais de cloreto reguladores da condutância transmembrana da fibrose cística (CFTR). Os dados obtidos com esse trabalho contribuem para o entendimento de novas vias de ação nas células de Sertoli desencadeadas por hormônios e substâncias relacionadas importantes para a homeostasia endócrina e exócrina do testículo.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Curso de Pós-Graduação em Farmacologia / Made available in DSpace on 2012-10-18T06:54:49Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-09-25T21:03:19Z : No. of bitstreams: 1 180013.pdf: 5489168 bytes, checksum: 78b424a7ba5c67fe1f24ccec94e92b39 (MD5) / Vários efeitos do [óxido nítrico] devem-se à ativação de [guanilato ciclase] ou alteração do funcionamento de [canais de potássio]. O envolvimento destes mecanismos no efeito anti-proliferativo do NO foi investigado em duas linhagens de mastocitoma murinas, P815 e MCP-5. O NO (em forma de doadores SNAP 10-100 µM e GSNO 100-1000 µM) inibiu de maneira concentração e tempo dependente a [proliferação] de ambas as linhagens celulares, com efeito máximo em torno de 50%, induzindo uma interrupção do ciclo celular na fase de mitose. As células incubadas com o doador de NO por 4 ou 24 h tiveram a proliferação inibida da mesma forma, indicando que o efeito causado pelo NO é irreversível. Os bloqueadores de canais de K+, tetraetilamônio (TEA; bloqueador não-seletivo; 10-1000 µM); 4-aminopiridina (4-AP; bloqueador de canais sensíveis à voltagem; 1-100 µM) e as toxinas caribdotoxina, iberiotoxina e apamina (bloquedores de subtipos de canais de potássio dependentes de cálcio; 100 nM), reverteram completamente o efeito anti-proliferativo do NO. Entretanto, o bloqueador de canais de K+ ATP-dependentes (glibenclamida; GBN; 10-1000 µM) não alterou a inibição da proliferação induzida pelo NO. O efeito do NO não foi mimetizado pelo 8-Br-cGMP (um análogo permeante do cGMP), nem alterado por um inibidor seletivo da guanilato ciclase solúvel (ODQ; 1-10 µM). Drogas que interferem com o citoesqueleto não afetaram o efeito anti-proliferativo do NO. Conclui-se que o NO inibe a proliferação celular irreversivelmente por uma via dependente de canais de potássio, porém independente da atividade da enzima guanilato ciclase e do citoesqueleto.

Made available in DSpace on 2016-03-07T19:20:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-09-25. Added 1 bitstream(s) on 2016-03-07T19:24:32Z : No. of bitstreams: 1 000857259.pdf: 8427881 bytes, checksum: cf2b0701d9d70a69bcb6e7fc40635a54 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O desenvolvimento de novos fármacos mais eficientes, menos tóxicos e com menores efeitos colaterais, tem se mostrado um tema de grande importância e interesse científico. Neste contexto o presente trabalho apresenta a síntese de N-alquilsulfonamidas análogos do PABA, com potencial propriedades farmacológicas interessantes como efeito ou atividade bloqueadora sobre canais iônicos de potássio dependentes de voltagem. Além disso, algumas dessas sulfonamidas sintetizadas apresentam N-(aminoalquil)-lactamas como cadeia lateral. Estes grupos lactânicos que têm sido descritos como inibidores de tryptase humana, um mediador importante na asma, e atividade como inibidores de protease do HIV-1. As análises físico-químicas foram realizadas por diferentes técnicas espectroscópicas (RMN de 1H e 13C, FT-IR) e espectrométricas (EI-MS e ESI-MS). As estruturasde todos os compostos foram confirmadas sem ambiguidade. Foi realizado um estudo por espectrometria de massas de alta resolução para todos os produtos. Esse estudo permitiu observar a formação do íon sulfoxilato e propor mecanismos para explicar este e outros fragmentos experimentais. As moléculas sintetizadas estão sob investigação para determinar sua atividade inibitória de canais de potássio. Algumas moléculas mostraram bons resultados / The development of new drugs more efficient, less toxic and with fewer side effects has been a subject of great importance and scientific interest. Un this context the present work shows the sythesis of new sulfonated compounds analogues of PABA, with potential interesting pharmacological properties, as the effect or blocking activity on ion channels of voltage gated potassium. In addition, some of these sufonamides, have N-(aminoalkyl) lactams as side chain. These lactamic groups have been described as inhibitors of human tryptase, an important mediator in asthma, and activity as HIV-1 protease inhibitors. The physical-chemical analyses have been carried out by different spectrocopic (1H and 13C NMR, FT-IR) and spectrometric techniques (EI-MS and ESI-MS). The structures of all compounds were unambiguously confirmed. A study for High Resolution Mass Spectrometry was peformed for all products. This study allowed to observe the formation of sulfoxylates ions and to propouse mechanisms to explain this and other experimental fragments. The synthesized molecules are under current investigation of its inhibiting channels and some molecules showed good results

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:25:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-03-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:46:28Z : No. of bitstreams: 1 000846735.pdf: 4178375 bytes, checksum: 0b48d653f6d0491f468566e9d47fc572 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Este trabalho versa sobre o emprego da equação de Fokker-Planck (EFP) na descrição da difusão através de canais iônicos presentes na estrutura celular. Os canais possuem grande importância para o funcionamento celular por promoverem o equilíbrio químico entre o meio interno e externo da célula. Este controle do equilíbrio químico é diretamente relacionado à sua capacidade de abertura e fechamento (gating) e seletividade. Inicialmente fazemos uma breve apresentação da equação de Fokker- Planck mostrando sua relação com a equação de Langevin e os métodos de solução para diferentes modelos. Dentre os modelos mencionados focamos a adoção de diferentes dependências temporais no termo referente ao drift e no coeficiente de difusão. Para estes casos as soluções foram obtidas por meio de um ansatz. Em seguida, buscamos associar estes modelos matemáticos de EFP com a difusão através de canais iônicos, mas desconsiderando o gating. Esta associação é feita através da descrição da mudança de potencial na membrana plasmática quando íons fluem entre o meio interno e externo da célula. Outro aspecto abordado em um dos modelos foi descrever a difusão quando há o fechamento do canal com o tempo. O resultado obtido para este exemplo foi comparado a dados da literatura. Por fim, apresentamos uma breve discussão sobre a equação de Fokker-Planck em um sistema de coordenadas cilíndricas / This work focus on the use of the Fokker-Planck equation (FPE) to describe the diffusion through ionic channels located in the cell membrane. The channels are responsible by the control of the ionic chemical equilibrium between the internal and external cell environment. The regulation of the chemical equilibrium is related to its capacity of opening and closing (gating) and its selectivity. Initially, we brief by present of the Fokker-Planck equation, where we show its relation with the Langevin equation and the methods of solution to different models. Among the models mentioned, we focus on adoption of different temporal dependence in the drift term and diffusion coefficient. The solutions for these cases are obtained by an ansatz that satisfies the boundary conditions of the models. We associate these mathematic models of FPE with diffusion through ionic channels without consider the gating process. This association is done describing the change of the membrane potential when there is diffusion of ions between the inside and outside of the cell. Another aspect described by one of the models is the diffusion when there is the closing of the channel with the time. The result obtained for this case is compared with results from the literature. Finally, we present a brief discussion of the Fokker-Planck equation in a cylindrical coordinate system