Made available in DSpace on 2015-04-22T22:06:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Shirley.pdf: 2487120 bytes, checksum: 840010088c8c6cc034faf3bb463fd6dd (MD5) Previous issue date: 2009-03-31 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Oral candidosis is an infection disease caused mainly by Candida albicans, normal commensal yeast in oral cavity of healthy individuals. The aim of this study was determine the prevalence of different species of Candida in patients of Basic Unit of Healthy (UBS)/SEMSA in Manaus city/Amazon state/Brazil, that wearing denture or present natural teeth. This transversal study was performed by analysis of oral mucosa samples. The samples were collected of 594 patients in ten UBS s and were cultured in Petri dishes containing Sabouraud Dextrose Agar with chloramphenicol and direct analysis (Gram method). The yeasts were submitted to biochemical identification with Candifast® (International Microbio) and morphological study on Corn Meal Tween 80 Agar. C. dubliniensis identification was carried out by primer-specific amplification. The analysis of the results was made by measurements of frequencies, average, median, standard deviation and confidence limits and also was used Student s t method, ANOVA tests, Pearson chi-square and Fischer Exact test. The data were analyzed by Epi-Info software, version 3.5. In the total 594 patients taken, 436 were women and 158 were men of ten UBS-SEMSA, with the average age of 32.5 ±11.6 years old. Candida species occurred in 50% of patients. C. albicans was the most prevalent species followed by C. parapsilosis, C. tropicalis, C. krusei, C. kefyr e C. glabrata. Factors like gender, age, medical treatment and use of medication were directly associated with the presence of Candida in oral cavity. In the patients taken, 188 wearing denture, with 75% of prevalence of Candida and present a significant statistical difference (p<0.05). It was confirmed, by PCR, the identity of 113 samples for C. albicans and 28 samples were identified as C. dubliniensis. We concluded that the prevalence of species of Candida in patients wearing denture, as well as individuals with natural teeth, was the same that observed in other regions of Brazil and other countries. The data suggested the specifics oligonucleotides CdF/CdR and CaF/CdR, used in this work, were effective to confirm C. albicans species and efficient to identification of C. dubliniensis species from theses isolates. / A candidíase oral é uma doença infecciosa causada geralmente pela Candida albicans, habitante comum da cavidade bucal de pessoas sadias. O objetivo deste estudo foi determinar a prevalência das diferentes espécies de Candida em pacientes atendidos nas Unidades Básicas de Saúde/SEMSA na cidade de Manaus/AM, usuários ou não de prótese dentária. Foi realizado um estudo transversal pela análise de amostras de Candida da cavidade oral. As amostras foram coletadas de 594 pacientes atendidos em 10 UBS s e cultivadas em placas de Petri contendo Ágar Sabouraud Dextrose com clorafenicol e feito exame direto (método de Gram). As leveduras foram submetidas à identificação bioquímica utilizando-se o Kit Candifast® e estudo morfológico com microcultivo em ágar fubá com Tween 80. A identificação de C. dubliniensis foi feita com primer espécie-específico. A análise dos resultados foi realizada através de medidas de freqüências, média, mediana, desvio-padrão e intervalo de confiança e utilizados os testes t de Student, ANOVA, qui-quadrado de Pearson e exato de Fisher. Os dados foram armazenados e analisados utilizado o software Epi-Info versão 3.5. Das 594 pessoas participantes, 436 são do gênero feminino e 158 do gênero masculino, com média de idade de 32,5 ± 11,6. Culturas positivas para Candida foram observadas em 50% dos pacientes. C. albicans foi a espécie mais prevalente seguida pela C. parapsilosis, C. tropicalis, C. krusei, C. kefyr e C. glabrata. Fatores como gênero, idade, tratamento médico e uso de medicamentos foram diretamente associados com a presença de Candida na cavidade oral. Do total de pacientes, 188 usavam prótese dentária, com prevalência de Candida de 75%, com diferença estatística significante (p < 0,05). Foi confirmada por PCR a identidade de 113 amostras de C. albicans e identificados 28 isolados de C. dubliniensis. Podemos concluir que a prevalência das espécies de Candida tanto em pacientes usuários de prótese como em indivíduos com dentição natural foi semelhante a prevalência encontrada em outras regiões do Brasil e outros países. Os dados sugerem, ainda, que oligonucleotídeos específicos CdF/CdR e CaF/CdR, utilizados neste estudo, foram efetivos para confirmar isolados de C. albicans e eficientes para identificar C. dubliniensis a partir desses isolados.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-03-26Bitstream added on 2014-06-13T19:16:49Z : No. of bitstreams: 1 sanita_pv_me_arafo.pdf: 1236296 bytes, checksum: 793fd4710489b2253297ebbc15835736 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A estomatite protética associada à Candida é a forma mais comum de candidíase oral e também uma das infecções oportunistas mais encontradas em pacientes infectados por HIV. Atualmente, a desinfecção de próteses totais através da irradiação por microondas tem sido recomendada para tratamento e prevenção da estomatite protética, tanto em indivíduos saudáveis, quanto em pacientes imunocomprometidos. O presente estudo avaliou a efetividade da irradiação por microondas na desinfecção de próteses totais simuladas contaminadas com 5 diferentes espécies do microorganismo Candida (C. albicans, C. glabrata, C. dubliniensis, C. tropicalis e C. krusei) isoladas de culturas padrão e de pacientes HIV positivo. Para isso, próteses totais simuladas foram confeccionadas, esterilizadas por meio de óxido de etileno e individualmente inoculadas com os microorganismos avaliados. Após o período de incubação (48 horas a 37°C), as próteses foram submetidas à irradiação por microondas a 650W durante 3 minutos. Próteses totais não irradiadas foram utilizadas como controle positivo. A seguir, uma alíquota de 25 æL da solução resultante das diluições seriadas de 10-1 a 10-4 foi semeada em placas de Petri em duplicata e todas as placas foram incubadas por 48 horas a 37°C. As colônias foram quantificadas em ufc/mL. Para verificar a efetividade da desinfecção por microondas a longo prazo, as próteses totais irradiadas foram incubadas a 37°C por 7 dias. Os resultados obtidos foram analisados estatisticamente pelos testes de ANOVA e de Tukey (a=0.05). As próteses totais contaminadas com todas as espécies de Candida avaliadas demonstraram esterilização após irradiação por microondas durante 3 minutos a 650W. Todas as próteses do grupo controle positivo demonstraram crescimento microbiológico após incubação nas placas de Petri. / The most common form of oral candidiasis is Candida-associated denture stomatitis. Oral candidiasis is also a frequent manifestation of HIV infection. Microwave disinfection of complete dentures has been recommended to treat and prevent denture stomatitis in non-immune compromised patients. The present study evaluated the effectiveness of microwave irradiation on the disinfection of simulated complete dentures inoculated with ATCC and HIV isolates of 5 species of Candida (C. albicans, C. glabrata, C. dubliniensis, C. tropicalis and C. krusei). Simulated complete dentures were made, sterilized and individually inoculated with the tested microorganisms. After incubation for 48 hours at 37°C, dentures were submitted to microwave irradiation (650W for 3 minutes). Non-irradiated dentures were used as positive controls. Replicate aliquots of suspensions were plated at dilutions 10-1-10-4 and incubated for 48 hours at 37°C. Colonies counts (cfu/mL) of each plate were quantified. To verify the long-term effectiveness of microwave disinfection, dentures were incubated at 37°C for 7 days. Data were analyzed with two-way ANOVA and Tukey HSD tests (a=0.05). The results indicated that complete dentures contaminated with all Candida yeasts showed sterilization after microwave irradiation for 3 minutes at 650W. All control dentures showed microbial growth on the plates. The cfu/mL for C. glabrata was significantly higher than those of C. albicans, C. dubliniensis and C. tropicalis whereas the cfu/mL for C. krusei was significantly lower. The cfu/mL for clinical isolates was significantly higher than those of ATCC yeasts. Microwave irradiation for 3 minutes at 650W resulted in sterilization of complete dentures contaminated with the 5 species of Candida isolated from HIV-infected patients.

Orientador: Ewerton Garcia de Oliveira Mima / Resumo: Um dos principais mecanismos de resistência microbiana são os sistemas de efluxo, que transportam medicamentos antimicrobiano para fora da célula. A eficácia de alguns agentes de inibição dos sistemas de efluxo tem sido reportada para reverter a resistência microbiana e também para potencializar as terapias antimicrobianas. Além disso, métodos alternativos aos agentes antimicrobianos convencionais têm sido investigados, como a Terapia Fotodinâmica antimicrobiana (aPDT). O objetivo desse estudo foi avaliar in vitro o efeito da aPDT e de dois inibidores de sistemas de efluxo microbiano (curcumina e verapamil) na resistência à inativação de C. albicans. Foram utilizadas duas cepas de C. albicans, uma susceptível (CaS) e outra resistente (CaR) a fluconazol. Os parâmetros de inativação fúngica foram determinados submetendo-se culturas planctônicas de ambas as cepas à curcumina, ao verapamil, ao fluconazol e também à aPDT (mediada pela curcumina 40 μM (14,73 μg/mL) e luz de LED azul de ≅455 nm a 5,28 J/cm2). As duas cepas foram cultivadas e tratadas associando-se os agentes de inibição do efluxo ao fluconazol em concentrações não letais. Os dados de UFC/mL foram analisados pelos testes paramétricos t de Student, ANOVA/Welch e post-hoc de Games-Howell e pelo teste não paramétrico de Mann-Whitney (α=0,05; n=12). Os resultados demostraram que aPDT promoveu uma redução significativa (p<0,001) de 4,5 e 4,42 log10 para CaS e CaR, respectivamente. Para CaS, os valores de Concentrações Ini... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: One of the major mechanisms of microbial resistance is the efflux systems, or efflux pumps, present in the plasma membrane of microorganisms that carry an antimicrobial drug out of the cell. The efficacy of some inhibitors of efflux systems has been reported to reverse microbial resistance, including C. albicans, and also to potentiate antimicrobial therapies. In addition, alternative methods to conventional antimicrobial agents have been investigated, such as antimicrobial Photodynamic Therapy (aPDT). The objective of this study was to evaluate in vitro the effect of aPDT and two inhibitors of microbial efflux systems (curcumina and verapamil) on the resistance to inactivation of C. albicans. For this, two strains of C. albicans, one susceptible (CaS) and another resistant (CaR) to fluconazol were used. Fungal inactivation parameters were determined by subjecting planktonic cultures of both strains to curcumina, verapamil, fluconazol, and also aPDT (mediated by curcumin at 40 μM (14.73 μg/mL) and blue LED light of ≅455 nm and 5.28 J/cm2). These strains were then cultured and treated associating one of the efflux inhibitors with fluconazole using non-lethal concentrations. For the statistical analysis, the normality and the homogeneity of variances were evaluated by the Shapiro-Wilk and Levene tests, respectively. Data were analyzed by Student's t-tests, Welch-corrected ANOVA and Games-Howell post-hoc and Mann-Whitney non-parametric test (α = 0.05) (n = 12). aPDT promoted a s... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Ana Claudia Pavarina / Banca: Marco Antonio Compagnoni / Banca: Ana Lucia Machado / Banca: Juliana Campos Junqueira / Banca: Karin Hermana Neppelenbroek / Resumo: Estes estudos in vivo tiveram como objetivos: 1 - avaliar a efetividade da terapia fotodinâmica (PDT) na inativação de Candida albicans em um modelo murino de candidose bucal; 2 - comparar a eficácia clínica e microbiológica da PDT com a da terapia antifúngica tópica (nistatina suspensão oral) no tratamento da estomatite protética, assim como identificar e determinar a prevalência das espécies de Candida dessa patologia. Na primeira investigação, camundongos foram imunossuprimidos com injeções subcutâneas de prednisolona. Tetraciclina foi fornecida na água de beber para promover alteração da microbiota bucal dos camundongos. Os animais foram sedados com injeção de cloridrato de clorpromazina e um swab oral embebido em uma suspensão de C. albicans (107 UFC/mL) foi esfregado na cavidade bucal dos animais. Quatro dias após a inoculação, a PDT foi realizada no dorso lingual utilizando administração tópica de Photogem® a 400, 500 ou 1000 mg/L e, após 30 minutos, iluminação com 305 J/cm² de luz de LED a 455 ou 630 nm. Posteriormente, a quantidade de fungos viáveis foi determinada (UFC/mL) e analisada pelos testes de ANOVA e Holm- Sidak (P < 0,05). Os camundongos foram sacrificados, e as línguas foram removidas e processadas para avaliação histológica de presença de fungos e reação inflamatória. No estudo clínico, pacientes (n = 40) foram aleatoriamente atribuídos a um dos seguintes grupos de 20 indivíduos cada; grupo NYS: pacientes receberam tratamento tópico com nistatina (100.000 UI) quatro vezes ao dia por 15 dias e; grupo PDT: prótese total superior e o palato dos pacientes foram borrifados pelo Photogem® a 500 mg/L e, após 30 minutos de incubação, iluminado por luz de LED a 455 nm (37,5 e 122 J/cm2, respectivamente) três vezes por semana durante 15 dias. Culturas micológicas de amostras das próteses e das mucosas palatinas e fotografias... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: These in vivo studies evaluated 1 - the effectiveness of photodynamic therapy (PDT) on the inactivation of Candida albicans in a murine model of oral candidosis; 2 - compared the clinical and mycological efficacy of PDT with that of topical antifungal therapy (nystatin oral suspension) for the treatment of denture stomatitis (DS) as well as to identify and determine the prevalence of Candida species in DS. In the first investigation, mice were immunosupressed with subcutaneous injections of prednisolone. Tetracycline hydrochloride on drinking water was managed to change the oral microflora. They were kept in a sedative state after injection of chlorpromazine chloride and a suspension of C. albicans (107 CFU/mL) was swabbed in the oral cavity. Four days after oral infection, PDT was performed on the dorsum of the tongue using a topical administration of Photogem® at 400, 500 or 1000 mg/L and, after 30 minutes, illumination with 305 J/cm² of LED light at 455 or 630 nm. Then, the number of surviving yeast was determined (CFU/mL) and analyzed by ANOVA and Holm- Sidak tests (P < 0.05). Animals were sacrificed, the tongues surgically removed and processed for histological evaluation of yeast presence and inflammatory reaction. In the clinical trial, patients (n = 40) were randomly assigned to one of two groups of 20 subjects each; NYS group: patients received topical treatment with nystatin (100,000 IU) four times daily for 15 days; PDT group: maxillary denture and palate of patients were sprayed with 500 mg/L of Photogem® and, after 30 min of incubation, illuminated by LED light at 455 nm (37.5 and 122 J/cm2, respectively) three times a week for 15 days. Mycological cultures taken from dentures and palates and standard photographs of the palates were performed at baseline (day 0), at the end of the treatment (day 15) and at the follow-up (days 30, 60 and 90 after the beginning... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao de Fabiola Assad Antunes.pdf: 1198565 bytes, checksum: b69b6f1c8452db9273610372ef55084c (MD5) Previous issue date: 2011-12-13 / A transmissão domiciliar de cepas de Candida spp. é um assunto pouco discutido na literatura médica, embora a transmissão no ambiente nosocomial e entre parceiros sexuais já esteja bem estabelecida. Os sujeitos do nosso estudo foram agrupados da seguinte forma: pacientes HIV positivos com candidíase oral (Grupo 1), pacientes HIV positivos com cavidade oral colonizada por isolados de Candida spp. (Grupo 2) e um grupo controle, formado por doadores de sangue HIV negativos (Grupo 3), além dos seus respectivos contatos domiciliares, totalizando 343 indivíduos. Foram obtidos dados referentes à idade, sexo, uso prévio de azólicos, história prévia de candidíase oral, sorologia para o HIV, contagem de carga viral do HIV e células CD4, tabagismo, uso de prótese dentária, ao status de parceiro sexual e outros tipos de imunossupressão para os participantes envolvidos; os isolados foram submetidos a testes fenotípicos para definição de espécie e susceptibilidade aos antifúngicos. Entre os pacientes HIV positivos, a taxa de colonização assintomática da cavidade oral por isolados de Candida spp. foi de 34,3%, e entre os sujeitos HIV negativos, a taxa foi de 19,3%; não houve diferença estatística entre os dois grupos. Após análise multivariada, apenas a infecção por HIV manteve-se como fator de risco para a colonização de cavidade oral por isolados de Candida spp. O fator de risco associado ao aparecimento de candidíase oral após análise multivariada foi a idade. Entre os pacientes HIV positivos, a contagem de células CD4 inferior a 200 também foi fator de risco para candidíase oral, embora carga viral elevada para o HIV não tenha se confirmado como tal. A espécie com maior prevalência foi Candida albicans (77,98%), e os testes de susceptibilidade revelaram 14,7% das cepas resistentes ou pertencentes à categoria DDS para azólicos. A maioria dos isolados que apresentaram resistência aos antifúngicos pertencia ao Grupo 1. O isolamento simultâneo de cepas da mesma espécie dentro de um mesmo domicílio ocorreu em 46 isolados de Candida albicans, provenientes de 22 famílias, que foram submetidas ao RAPD, utilizando-se os primers M2 e RP-2. Os resultados do RAPD não mostraram correlação entre cepas de participantes residentes no mesmo domicílio, porém evidenciaram correlação entre várias cepas pertencentes a sujeitos sem proximidade geográfica, mostrando que a técnica utilizada não teve poder discriminatório para genotipagem adequada das cepas avaliadas / Household transmission of Candida spp isolates is a little discussed topic in the medical literature, though transmission in the nosocomial enviroment and between sexual partners is already well stablished. The subjects in our study were divided into the following groups: HIV-positive patients with oral candidiasis (Group 1), HIV-positive patients colonized by isolates of Candida spp in the oral cavity (Group 2) and a control group, comprised of HIVnegative blood donors (Group 3) and their respective household contacts, in a total of 343 subjects. Data were obtained regarding age, sex, previous exposure to azoles, previous history of oral candidiasis, HIV sorology, HIV viral load, CD4 cell count, tabagism, denture use, sexual partner status and other imunossupressive underlying conditions from the subjects; the recovered isolates were phenotipically tested for species differentiation and were submitted to antifungal drugs susceptibility tests. Among the HIV-positive patients, assymptomatic oral Candida spp. carriage rate was 34,3%, and among the HIV-negative subjects the rate was 19,3%; there was no statistical difference between the two groups. Using multivariate analysis, HIV infection was the only risk factor associated with assymptomatic oral Candida spp cariage. Multivariate analysis was also employed to evaluate risk factors associated with oral candidiasis; age was the only identified risk factor. Among the HIV-positive patients, though, CD4 count below 200 was also associated with oral candidiasis; the same did not occur with high HIV viral load. The most prevalent species was Candida albicans (77,98%), and 14,7% of the isolates were azole-resistant or DDS. Most of the resistant isolates belonged to Group 1. The simultaneous isolation of 46 strains of Candida albicans, wich belonged to 22 households, were submitted to RAPD, using the primers M2 and RP-2. The RAPD results did not show any correlations between the same household strains, but showed a relationship between strains obtained from subjects who lived within no geographical proximity, showing that the technique employed had no discriminatory power for genotyping the involved strains

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This work aimed the preparation of clotrimazole-loaded nanocapsule suspensions for vulvovaginal fungal infections treatment. For the first time, virgin coconut oil and medium chain triglycerides were used as an oil core of polymeric nanocapsules containing clotrimazole. The analytical method for quantification of this drug into nanoparticles was developed and validated. The method proved to be selective, linear, precise, accurate and robust. Using the method of interfacial deposition of preformed polymer, the nanoparticles were successfully prepared at three different concentrations of clotrimazole (1, 2 and 3 mg/mL). The physicochemical parameters measured were pH, particle diameter, polydispersity index, drug content, encapsulation efficiency, zeta potential and stability in storage during 60 days. The encapsulation efficiency was near to 100%, zeta potential was positive due to the cationic polymer employed, the pH was around 5.6 and drug contents were close to the theoretical values. The size distribution was nanometer (140-200 nm) with polydispersity index lower than 0.2. The formulations had adequate physicochemical characteristics and were stable during storage. Photodegradation studies have shown that the nanoencapsulation improved the stability of clotrimazole against UVC radiation compared to free drug solution after 14 hours of experiment. The in vitro drug release using the dialysis bag technique was characterized by a prolonged release. No burst effect was observed. Profilesare based on an anomalous transport and first order kinetics, regardless of the oil used. The in vitro microbiological test of nanocapsules suspensions was performed against Candida albicans and Candida glabrata susceptible and resistant to fluconazole by microdilution method. In combination with clotrimazole into nanoparticles, medium chain triglycerides was reported to have similar MICs of methanolic solution containing the oil and the drug. In addition to the antifungal activity in solution, coconut oil did not lose its activity after incorporation into the nanostructures and, in combination with drug, showed greater inhibition of microbial growth than the nanocapsules of medium chain triglycerides with clotrimazole. Finally nanoparticle suspensions were incorporated into hydrogels containing polymers with mucoadhesive properties, Pemulen® and Pullulan, which presented appropriate drug content, pH and spreadability. The formulations developed in this study represent promising alternatives for treatment of vulvovaginal candidiasis. / Este trabalho objetivou a preparação de suspensões de nanocápsulas contendo clotrimazol para o tratamento de infecções fúngicas vulvovaginais. Pela primeira vez, o óleo de coco virgem e os triglicerídeos de cadeia média foram empregados como núcleo oleoso de nanocápsulas poliméricas contendo clotrimazol. A metodologia analítica para a quantificação do fármaco nas nanopartículas foi desenvolvida e validada. O método mostrou-se seletivo, linear, preciso, exato e robusto. A partir do método de deposição interfacial do polímero pré-formado, as nanopartículas foram preparadas com sucesso em três concentrações diferentes de clotrimazol (1, 2 e 3 mg/mL). Os parâmetros físico-químicos avaliados foram pH, diâmetro de partícula, índice de polidispersão, teor, eficiência de encapsulamento, potencial zeta e estabilidade frente ao armazenamento por 60 dias. A eficiência de encapsulamento foi próxima a 100%, o valor do potencial zeta foi positivo devido ao polímero catiônico empregado, valor de pH em torno de 5,6 e teores de fármaco próximos aos teóricos. A distribuição de tamanho foi nanométrica (140-200 nm), com índice de polidispersão menor que 0,2. As formulações apresentaram características físico-químicas adequadas e foram estáveis durante o armazenamento. Estudos de fotodegradação mostraram que o nanoencapsulamento melhorou a estabilidade do clotrimazol sob radiação UVC, em comparação com a solução do fármaco livre, após 14 horas de experimento. A liberação do fármaco in vitro, a partir da técnica de sacos de diálise, foi caracterizada como uma liberação prolongada sem efeito burst, que foi mediada por transporte anômalo e seguiu cinética de primeira ordem, independente do óleo utilizado. As suspensões foram capazes de diminuir a velocidade de liberação do clotrimazol nas 24 horas de experimento. A partir do método de microdiluição, procedeu-se a avaliação microbiológica in vitro das suspensões de nanocápsulas contra Candida albicans e Candida glabrata sensíveis e resistentes ao fluconazol. Em combinação com o clotrimazol nas nanopartículas, os triglicerídeos de cadeia média apresentaram valores de CIMs semelhantes à solução metanólica contendo o óleo e o fármaco. Além de apresentar atividade antifúngica em solução, o óleo de coco não perdeu sua atividade após a incorporação na nanoestrutura e, em associação com o fármaco, apresentou maior inibição do crescimento microbiano do que as nanocápsulas de triglicerídeos de cadeia média com clotrimazol. Por fim, as suspensões nanoparticuladas foram incorporadas em hidrogéis contendo polímeros com propriedades mucoadesivas, Pemulen® e Pullulan, que apresentaram teor, pH e espalhabilidade adequados. As formulações desenvolvidas neste estudo representam alternativas promissoras para o tratamento da candidíase vulvovaginal.

Submitted by Cristhiane Guerra (cristhiane.guerra@gmail.com) on 2017-02-01T13:46:41Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2056832 bytes, checksum: dd1f04e5a02bdef6bb3220514f057563 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-01T13:46:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2056832 bytes, checksum: dd1f04e5a02bdef6bb3220514f057563 (MD5) Previous issue date: 2016-10-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The incidence of vulvovaginal fungal infections has increased dramatically over the last decades, therefore being the second most common cause of vulvovaginal candidiasis (VVC) placed after bacterial vaginosis diagnosed in 40% of the women with vaginal discharge. The increasing resistance of micro-oganismos pathogens to existing antimicrobial market has driven the search for new therapeutic alternatives, such as natural herbal products belonging to various families of the plant kingdom, such as Poaceae and Myrtaceae, which are presented as a viable solution due to the low cost and easy access of the population. Highlighted, the genus Cymbopogon and the Eucalyptus plants is one of the main sources of biologically active molecules, among them the monoterpenes holds a huge biological potential of human interest. However, the research of plant-derived compounds with pharmacological properties must always be attached to toxicity studies in order to show the absence of these substances harm to the human body. Given this context, it has studied the biological activity of enantiomers (R)-(+)- and (S)-(-)-citronellal against C. albicans and C. tropicalis strains derived from in vitro vulvovaginal secretions, as well as the parameters toxicological to predict the theoretical oral toxicity in silico. To achieve the antimicrobial in vitro studies; determination of minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum fungicidal concentration (MFC) was used microdilution test. Also it was applied to disk diffusion technique on solid medium for comparative study of antifungal resistance/sensitivity profile used in the treatment of vulvovaginal candidiasis isolated and associated with monoterpenes studieds. The MIC's and MFC's of the (R)-(+)- and (S)-(-)-citronellal to 90% of fungal strains were respectively (R)MIC90% 16μg/mL and (R)MFC90% 32μg/mL; (S)MIC90% 64μg/mL and (S)MFC90% 128μg/mL (Strong antifungal activity against C. albicans and C. tropicalis). Were observed high resistance of C. albicans to fluconazole and itraconazole 12 (92.30%) strains. However, this resistance was reversed in 9 (75%) and 7 (58.33%) respectively, when combined with (R)-(+)-citronellal and 6 (50%) in combination with (S)-(-)-citronellal. Furthermore, it was also observed C. tropicalis high resistance to amphotericin B, itraconazole and miconazole. However, the resistance was reversed to amphotericin B and itraconazole, as a result of the synergistic effect in 2 (66.65%) of yeast. For miconazole resistance was reversed in 3 (100%) of the strains for both enantiomers. In the in silico analysis, both enantiomers have good oral bioavailability theoretically, however, a potential irritant was observed as possible toxic effect on these monoterpenes. In conclusion, these results suggest that the (R)-(+)- and (S)-(-)-citronellal have antimicrobial effect, and which also exert effect modifier activity when antifungal agents in combination. However, although presenting good oral bioavailability theoretically, the varied toxicological profile suggests the need to assess the risk-benefit of this compound in the production of a new antifungal drug, by conducting in vivo trials. / A incidência de infecções fúngicas vulvovaginais aumentou dramaticamente ao longo das últimas décadas, constituindo assim a segunda causa mais comum de candidíase vulvovaginal (CVV) após a vaginose bacteriana diagnosticada em 40% das mulheres com corrimento vaginal. O aumento da resistência dos micro-organismos patógenos aos antimicrobianos existentes no mercado tem impulsionado a busca de novas alternativas terapêuticas, como os produtos naturais a base de plantas pertencentes a várias famílias do reino vegetal, como por exemplo a Poaceae e a Myrtaceae, que se apresentam como uma solução viável devido ao baixo custo e fácil acesso da população. Em destaque, as plantas do gênero Cymbopogon e Eucalyptus constitui uma das principais fontes de moléculas biologicamente ativas, dentre elas os monoterpenos são detentores de um enorme potencial biológico de interesse humano. No entanto, as pesquisas de compostos derivados de plantas com propriedades farmacológicas devem sempre ser unida aos estudos toxicológicos, afim de se comprovar a ausência de malefícios destas substâncias ao organismo humano. Diante deste contexto, foi estudado a atividade biológica dos enantiômeros (R)-(+)- e (S)-(-)-citronelal contra cepas de C. albicans e C. tropicalis oriundas de secreções vulvovaginais in vitro, bem como os parâmetros toxicológicos para a previsão da toxicidade oral teórica in silico. Para a realização dos estudos antimicrobianos in vitro; determinação da concentração inibitória mínima (CIM) bem como da concentração fungicida mínima (CFM), utilizou-se o teste de microdiluição. Também foi aplicada a técnica de disco-difusão em meio sólido para estudo comparativo do perfil de resistência/sensibilidade a antifúngicos utilizados na terapêutica da candidíase vulvovaginal isolados e associados aos monoterpenos em estudo. As CIM’s e as CFM’s dos enantiômeros (R)-(+)- e (S)-(-)-citronelal para 90% das cepas fúngicas foram respectivamente (R)CIM90% 16μg/mL e (R)CFM90% 32 μg/mL; (S)CIM90% 64μg/mL e (S)CFM90% 128 μg/mL (forte atividade antifúngica contra C. albicans e C. tropicalis). Foram constatados alta resistência de C. albicans ao fluconazol e ao itraconazol 12 (92.30%) das cepas testadas. Mas, essa resistência foi revertida em 9 (75%) e 7 (58.33%) respectivamente, quando em associação com o (R)-(+)-citronelal e em 6 (50%) em combinação com o (S)-(-)-citronelal. Além disso, também foi observado alta resistência de C. tropicalis a anfotericina B, itraconazol e miconazol. Porém a resistência foi revertida para a anfotericina B e para o itraconazol, resultado do efeito sinérgico em 2 (66.65%) das leveduras. Para o miconazol a resistência foi revertida em 3 (100%) das cepas para ambos os enantiômeros. Na análise in silico, ambos os enantiômeros apresentaram boa biodisponibilidade oral teórica, no entanto, um potencial irritante foi observado como possível efeito tóxico para estes monoterpenos. Em conclusão, estes resultados sugerem que os enantiômeros (R)-(+)- e (S)-(-)-citronelal apresentam efeito antimicrobiano, e que também exercem efeito modificador de atividade aos agentes antifúngicos quando em combinação. No entanto, embora tenha apresentado boa biodisponibilidade oral teórica, o perfil toxicológico variado sugere a necessidade em avaliar o risco-benefício desse composto na produção de um novo medicamento antifúngico, por realização de ensaios in vivo.

Submitted by Maike Costa (maiksebas@gmail.com) on 2017-03-06T11:14:23Z No. of bitstreams: 1 arquivo total.pdf: 786129 bytes, checksum: 1e08eca0cb38b5c895cff1f2cbb20f5c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-06T11:14:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivo total.pdf: 786129 bytes, checksum: 1e08eca0cb38b5c895cff1f2cbb20f5c (MD5) Previous issue date: 2016-12-13 / Oral candidiasis is a fungal infection caused by yeasts of the genus Candida, with C. albicans being the main pathogen. The emergence of resistant species against the available therapeutic arsenal as well as its adverse effects has driven new research on natural products. In view of this problem, the present study sought to investigate the antifungal activity of essential oil (OE) obtained from the leaves of Melissa officinalis L (lemon balm), isolated and associated with antifungal agents licensed on C. albicans strains. Two strains of the American Type Culture Collection (ATCC) and eight from the oral cavity (LM) were selected. The microdilution and sowing of subcultures were used to determine, respectively, the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Fungicidal Concentration (CFM). The antifungigram was performed using the disc diffusion technique with the antifungal agents nystatin, amphotericin B, miconazole and fluconazole, evaluating them in isolation and associated with OE. MIC and MFC ranged from 64 to 128 μg/mL and 256 to 512 μg/mL, respectively. The presence of resistance of the strains to the antifungal agents nistatin (LM-38 and LM-65), amphotericin B (ATCC-76485, LM-3A, LM-38, LM-62 and LM -65) and fluconazole (LM-1A, LM- 1B, LM-38, LM-62 and LM-65). In the association tests, the results showed the influence of the essential oil on the antifungal activity, with synergism (S), indifference (I) and antagonism (A) being observed. The percentages found for each antifungal in the order (S, I and A) were: nystatin (30%, 30% , 40%), amphotericin B (30%, 50%, 20%), fluconazole (20% ,40% , 40%) and miconazole (100%, 0,0). In view of the above, it is concluded that the OO of M. Officinalis may become a promising product in the fight against oral candidiasis, since it has a strong antifungal activity against Candida albicans and that the use of this product associated with the licensed antifungal can, in some situations, potentiate its effectiveness of use in treatment. / A candidíase oral é uma infecção fungica causada por leveduras do gênero Candida, sendo a espécie C. albicans apontada como principal patógeno. O surgimento de espécies resistentes frente ao arsenal terapêutico disponível assim como seus efeitos adversos tem impulsionado novas pesquisas voltadas para os produtos naturais. Diante dessa problemática o presente trabalho buscou investigar a atividade antifúngica do óleo essencial (OE) obtido das folhas de Melissa officinalis L (erva-cidreira), isolado e associado a antifúngicos licenciados sobre cepas de C. albicans. Para tanto, foram selecionadas duas cepas da American Type Culture Collection (ATCC) e oito provenientes de cavidade oral (LM). Utilizou-se a técnica da microdiluição e semeadura de subcultivos para determinar, respectivamente, a Concentração Inibitória Mínima (CIM) e a Concentração Fungicida Mínima (CFM). O antifungigrama foi realizado a partir da técnica de difusão de disco com os antifúngicos nistatina, anfotericina B, miconazol e fluconazol avaliando-os de forma isolada e associada ao OE. A CIM e CFM variaram, respectivamente, de 64 a 128 μg/mL e 256 a 512 μg/mL. Quanto ao teste de sensibilidade de forma isolada observou-se a presença de resistência das cepas aos antifúngicos nistatina (LM-38 e LM-65), anfotericina B (ATCC- 76485, LM-3A, LM-38, LM-62 e LM-65) e fluconazol (LM-1A, LM-1B, LM-38, LM- 62 e LM-65). Nos ensaios de associação os resultados mostraram influência do óleo essencial sobre a atividade dos antifúngicos sendo observado sinergismo (S), indiferença (I) e antagonismo (A). As porcentagens encontradas para cada antifúngico, na ordem (S, I e A), foram: nistatina (30%, 30% e 40%), anfotericina B (30%, 50%, 20%), fluconazol (20%, 40% e 40%) e miconazol (100%,0,0). Perante o exposto conclui-se que o OE de M. Officinalis pode se tornar um produto promissor no combate a candidose oral, visto que apresenta forte atividade antifungica contra Candida albicans e que o uso desse produto associado à antifungicos licenciados pode, em algumas situações, potencializar sua efetividade de uso no tratamento.

Submitted by Maike Costa (maiksebas@gmail.com) on 2017-03-06T13:18:25Z No. of bitstreams: 1 arquivo total.pdf: 1622677 bytes, checksum: 4910b306e46e741a75cc3d2047affa2c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-06T13:18:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivo total.pdf: 1622677 bytes, checksum: 4910b306e46e741a75cc3d2047affa2c (MD5) Previous issue date: 2015-08-17 / Introduction: Faced with limitations to the use of sodium hypochlorite in the disinfection of dental prostheses and the need to control fungal proliferation in these sites, it is necessary to study new substances for this purpose. Objectives: To evaluate the antifungal activity, mechanism of action, cytotoxicity and antibiofilm action of chloramine T (CAT) on Candida spp. The minimum inhibitory concentration (MIC) of the substance on Candida albicans, Candida tropicalis, Candida krusei and Candida glabrata was determined by the microdilution technique and the minimum fungicidal concentration (CFM) was calculated through the subculture in Sabouraud Dextrose Agar (ASD) . The growth inhibition kinetics of C. albicans were evaluated by the method of counting colony forming units (CFU) at different times and concentrations. A microculture of C. albicans was performed on fowl agar plus tween 80 to evaluate the possible alteration of micromorphology against different concentrations of the substance. The possible mechanism of action on wall and fungal cell membrane was verified by the determination of MIC in the presence of sorbitol and ergosterol respectively. The inhibition of the initial adherence of fungal cells, formation and reduction of C. albicans biofilm were evaluated after short (1 min) and prolonged (8 h) contact with the substance and formation of the biofilm was measured by absorbance at 600 nm, Transformed into scores referring to the percentage of inhibition obtained based on the values ​​of the control group. The cytotoxicity of the substance was evaluated by the hemolysis method. Nystatin and sodium hypochlorite were used as positive controls. A descriptive and inferential analysis was performed considering α = 5%. Results: The CIM75% found for CAT was 781.3 μg / mL and the CFM / MIC ratio suggests a fungicidal activity against most of the strains tested, with probable action on cell wall and membrane. The substance showed immediate and prolonged action on the kinetic test and caused reduction of the filamentous form and inhibition of chlamydoconidia. In the biofilm assay, it presented similar results to sodium hypochlorite for inhibition of initial adherence and formation of mature biofilm (p> 0.05) and was more effective in reducing mature biofilm in the short contact groups at MIC concentration x2 (24 H) and CIM x 4 (48 h) (p <0.05). Conclusion: CAT shows antifungal activity on Candida spp. And shows fungicidal action on most of the strains tested. Its action is immediate and prolonged in the inhibition of C. albicans growth and probably occurs both in the wall and in the cell membrane. CAT causes alterations in the micromorphology of C. albicans and has antibiofilm activity, being effective in inhibiting the initial adherence of fungal cells, as well as in the formation and reduction of biofilm. / Introducao: Diante das limitacoes para o uso do hipoclorito de sodio na desinfeccao de proteses dentarias e da necessidade do controle da proliferacao fungica nestes sitios, faz-se necessario o estudo de novas substancias para este fim. Objetivos: Avaliar a atividade antifungica, mecanismo de acao, citotoxicidade e acao antibiofilme da cloramina T (CAT) sobre Candida spp. Materiais e Metodos: Foi determinada a concentracao inibitoria minima (CIM) da substancia sobre Candida albicans, Candida tropicalis, Candida krusei e Candida glabrata pela tecnica da microdiluicao e calculada a concentracao fungicida minima (CFM) atraves do subcultivo em Agar Sabouraud Dextrose (ASD). Foi avaliada a cinetica de inibicao do crescimento de C. albicans pelo metodo de contagem de unidades formadoras de colonias (UFC) em diferentes tempos e concentracoes. Foi realizado microcultivo de C. albicans em agar fuba acrescido de tween 80 para avaliacao da possivel alteracao da micromorfologia frente a diferentes concentracoes da substancia. O possivel mecanismo de acao sobre parede e membrana celular fungica foi verificado atraves da determinacao da CIM na presenca, respectivamente, de sorbitol e ergosterol. A inibicao da aderencia inicial de celulas fungicas, formacao e reducao do biofilme de C. albicans foram avaliados apos contato curto (1 min) e prolongado (8 h) com a substancia e a formacao do biofilme foi mensurada atraves de absorbancia a 600 nm, transformada em escores referentes a porcentagem de inibicao obtida com base nos valores do grupo controle. A citotoxicidade da substancia foi avaliada pelo metodo da hemolise. Nistatina e hipoclorito de sodio foram utilizados como controles positivos. Foi realizada analise estatistica descritiva e inferencial, considerando α=5%. Resultados: A CIM75% encontrada para a CAT foi de 781,3 µg/mL e a relacao CFM/CIM sugere uma atividade fungicida frente a maioria das cepas testadas, com provavel acao em parede e membrana celulares. A substancia mostrou acao imediata e prolongada no teste de cinetica e provocou reducao da forma filamentosa e inibicao de clamidoconidios. No ensaio do biofilme, apresentou resultados semelhantes ao hipoclorito de sodio para inibicao da aderencia inicial e formacao do biofilme maduro (p>0,05) e foi mais efetiva na reducao do biofilme maduro nos grupos de contato curto na concentracao CIM x 2 (24 h) e CIM x 4 (48 h) (p < 0,05). Conclusao: A CAT apresenta atividade antifungica sobre Candida spp. e apresenta acao fungicida sobre a maioria das cepas testadas. Sua acao e imediata e prolongada na inibicao do crescimento de C. albicans e provavelmente ocorre tanto em parede quanto em membrana celular. A CAT causa alteracoes na micromorfologia de C. albicans e possui atividade antibiofilme, sendo efetiva na inibicao da aderencia inicial das celulas fungicas, bem como na formacao e reducao do biofilme.

Submitted by Maike Costa (maiksebas@gmail.com) on 2017-03-06T13:42:11Z No. of bitstreams: 1 arquivo total.pdf: 3124767 bytes, checksum: 920ef6140aafef097406f7ff339fa3eb (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-06T13:42:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivo total.pdf: 3124767 bytes, checksum: 920ef6140aafef097406f7ff339fa3eb (MD5) Previous issue date: 2016-01-20 / Introduction: The phytotherapy has encouraged the evaluation of different herbal products activity to control dental problems, by creating new strategies for the chemical control of oral cavity infections, in an attempt to overcome the drawbacks and weaknesses of market products. Objective: To isolate, identify Candida genus yeasts from denture wearers (removable partial dentures or complete dentures) and evaluate the in vitro antifungal activity of an essential oil extracted from the leaves of Schinus terebinthifolius Raddi. Materials and Methods: It was collected biological material from 23 prosthesis wearers and the identification of yeasts was based on macro and micro-morphology, physiological and biochemical tests. In the antifungal activity tests of S. terebinthifolius Raddi was used four strains of Candida albicans (C. albicans LM-1A, C. albicans LM-3A, C. albicans LM-16B, C. albicans LM-19A), four strains of Candida tropicalis (C. tropicalis LM-2A, C. tropicalis LM-7A, C. tropicalis LM-11A, C. tropicalis LM-13A) of yeasts isolated and identified by biological material collect and standard strains of the american collection ATCC (American Type Culture Collection): C. albicans ATCC 76485 and C. tropicalis ATCC 13803. The sensitivity profile to synthetic antifungal was evaluated by diffusion technique in solid medium suitable for antifungal susceptibility test. The antifungal agents used were amphotericin B (100 μg), fluconazole (25 μg), itraconazole (10 μg), miconazole (50 μg), nystatin (100 I.U.), ketoconazole (50 μg). It was determined the minimum inhibitory concentration (MIC) of essential oil by the microdilution technique and calculated the minimum fungicidal concentration (MFC) by subculture on Sabouraud Dextrose Agar (SDA). Results: Most of the denture wearers were female (78%) and the average age was 48 years and two months. C. albicans and C. tropicalis were the most prevalent species in samples taken in the palatal mucosa (17.39% each) and the bases of prostheses (21.73% each). The antifungal that all strains tested were sensitive to was amphotericin B followed by nystatin, ketoconazole and miconazole with respectively 90%, 80%, 50% of the susceptible strains. Most strains (90%) were resistant to fluconazole and all were to itraconazole. The MIC values varied from 128μg/mL to 256μg/mL, being determined the MIC100% as 256μg/mL. For nystatin, the MIC100% was 16μg/mL. The MFC/MIC ratio indicates fungicidal activity against 80% of the strains tested and is considered fungistatic against C. tropicalis LM-7A and C. tropicalis LM-13A. For nystatin, indicated fungicidal activity against all tested strains. Conclusion: The most prevalent species in denture wearers were C. albicans and C. tropicalis, with a varied susceptibility profile compared to synthetic antifungal, highlighting a pattern of resistance of some strains, particularly to fluconazole and itraconazole. The essential oil of S. terebinthifolius Raddi showed fungicidal activity against most of the strains tested. / Introdução: A fitoterapia tem estimulado a avaliação da atividade de diferentes produtos à base de plantas para o controle de problemas bucais, visando criar novas estratégias para o controle químico das infecções da cavidade bucal, na tentativa de suprir os incovenientes e fragilidades dos produtos do mercado. Objetivo: isolar, identificar leveduras do gênero Candida da cavidade bucal de usuários de prótese (parcial e total removível) e avaliar a atividade antifúngica in vitro do óleo essencial extraído das folhas de Schinus terebinthifolius Raddi (aroeira). Materiais e Métodos: Foram coletados material biológico de 23 usuários de prótese e a identificação das leveduras foi realizada com base na macro e micromorfologia, provas fisiológicas e bioquímicas. Para os ensaios da atividade antifúngica de S. terebinthifolius Raddi foram utilizadas quatro cepas de Candida albicans (C. albicans LM-1A, C. albicans LM-3A, C. albicans LM-16B, C. albicans LM-19A), quatro cepas de Candida tropicalis (C. tropicalis LM-2A, C. tropicalis LM-7A, C. tropicalis LM-11A, C. tropicalis LM-13A) de leveduras isoladas e identificadas da coleta do material biológico e cepas padrão da coleção americana ATCC (American Type Culture Collection) C. albicans ATCC 76485 e C. tropicalis ATCC 13803. O perfil de sensibilidade aos antifúngicos sintéticos foi avaliado pela técnica de difusão em meio sólido indicada para antifungigrama. Os antifúngicos utilizados foram anfotericina B (100 μg), fluconazol (25 μg), itraconazol (10 μg), miconazol (50μg), nistatina (100 U.I.), cetoconazol (50μg). Foi determinada a concentração inibitória mínima (CIM) do óleo essencial e da nistatina (controle) pela técnica da microdiluição e calculada a concentração fungicida mínima (CFM) através do subcultivo em Agar Sabouraud Dextrose (ASD). Resultados: A maioria dos usuários de prótese eram do sexo feminino (78%) e a média de idade de 48 anos e dois meses. C. albicans e C. tropicalis foram as espécies mais prevalentes nas coletas realizadas nas mucosas palatinas (17,39% cada) e nas bases das próteses (21,73% cada). O antifúngico que todas as cepas testadas apresentaram-se sensíveis foi a anfotericina B, seguida da nistatina, cetoconazol e miconazol com respectivamente 90%, 80%, 50% das cepas sensíveis. A maioria das cepas (90%) foram resistentes ao fluconazol e todas foram ao itraconazol. Os valores da CIM do óleo essencial variaram entre 128μg/mL (CIM60%) e 256μg/mL (CIM100%). Para a nistatina a CIM100% foi de 16μg/mL. A relação CFM/CIM do óleo essencial indica atividade fungicida frente a 80% das cepas testadas, sendo considerada fungistática diante da C. tropicalis LM-7A e C. tropicalis LM-13A. E a relação CFM/CIM da nistatina indica atividade fungicida frente a todas as cepas estudadas. Conclusão: As espécies mais prevalentes nos usuários de prótese foi C. albicans e C. tropicalis, com perfil de sensibilidade variado em relação aos antifúngicos sintéticos, com destaque para um padrão de resistência de algumas cepas, especialmente ao fluconazol e itraconazol. O óleo essencial de S. terebinthifolius Raddi apresentou atividade fungicida sobre a maioria das cepas testadas.