Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-08-23Bitstream added on 2014-06-13T20:06:09Z : No. of bitstreams: 1 davila_s_dr_arafo.pdf: 2082711 bytes, checksum: 82d60dc6354f3be897106558bb131668 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Este estudo avaliou a estomatite por prótese total e as variáveis relacionadas à sua etiologia, considerando as características clínicas do indivíduo, as características micológicas e de adesão das espécies de Candida e o grupo sangüíneo dos indivíduos. Sessenta indivíduos portadores de prótese total superior (grupo teste) e 15 indivíduos não usuários de próteses removíveis (grupo controle) foram avaliados. As amostras micológicas foram coletadas da mucosa do palato, face interna da prótese e dorso da língua, por imprint. A identificação das espécies de Candida foi realizada por métodos clássicos (cultura) e moleculares (RAPD). A avaliação da qualidade das próteses totais foi realizada com base em cinco indicadores (defeitos, material, estabilidade, retenção e oclusão) e a da qualidade da higiene da prótese total, por meio da visualização do biofilme com o uso de evidenciador de placa. Não houve diferença significativa no diagnóstico de EP e na detecção de Candida spp. entre o gêneros, hábito de fumar, presença de doença sistêmica, uso de medicamentos e hábitos de higiene (cavidade bucal e PT). A EP foi correlacionada com detecção de Candida spp. no palato e com indivíduos O Rh+. Entretanto não foi correlacionada com um perfil genotípico de Candida spp. ou uma espécie de Candida, com a quantidade de células aderidas nos corpos de prova de resina, com o estado secretor do indivíduo, com o uso contínuo ou qualidade e higiene da prótese total. A detecção de Candida spp. foi correlacionada com a presença de EP, com doença sistêmica, uso de medicamentos, com a qualidade e higiene das próteses e com indivíduos A Rh+. Com base nos resultados obtidos verificamos que a presença de estomatite por prótese total foi correlacionada com o grupo sangüíneo do indivíduo e com Candida spp., a qual também foi correlacionada com características do hospedeiro e da prótese total. / This study evaluated the denture stomatitis (DS) and clinical variables related with its etiology, considering the characteristics of clinical, mycological, adhesion profile and blood group of the subjects. 60 denture wearers (test group) and 15 subjects without removable appliances (control group) were evaluated. The mycological samples were taken from palate, denture and tongue by imprint method. The Candida species were identified by classical (culture) and molecular (RAPD) methods. The evaluation of denture quality was performed on basis of five parameters (defect, material, stability, retention, and occlusion) and the hygiene of the denture by means of plaque observation. Statistical difference was not observed between diagnosis of DS and Candida detection for gender, smoking, systemic diseases, medication, hygiene habits (oral cavity and denture). The DS was correlated with Candida spp. on the palate and with subjects O Rh+. However, there was no significance with genotypic profile with any species of Candida either clinical or molecular features. The detection of Candida was correlated with DS, systemic diseases, medication, quality and hygiene of denture in A Rh+ subjects. Within the limits of this study we conclude that denture stomatitis was correlated with blood group and Candida as well as the characteristics of the host and the denture.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-07-28Bitstream added on 2014-06-13T19:44:49Z : No. of bitstreams: 1 dovigo_ln_dr_arafo.pdf: 3524091 bytes, checksum: bd9c194e1468a342205c6be45f7e5d62 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Esta investigação teve como objetivo avaliar: 1. a viabilidade de utilização da curcumina como agente fotossensibilizador (PS) em Terapia Fotodinâmica (PDT) para inativação de uma cepa padrão de Candida albicans e seu efeito tóxico sobre culturas celulares de macrófagos; 2. a efetividade da PDT mediada pela curcumina para inativação de suspensões planctônicas e biofilmes formados por diferentes isolados clínicos de C. albicans, Candida tropicalis e Candida glabrata; 3. a fotoinativação de C. albicans, presente em candidose induzida em camundongos, por meio da utilização de diferentes concentrações de curcumina. No primeiro estudo, suspensões planctônicas de C. albicans (ATCC 90028) foram expostas a nove concentrações de curcumina (0,005; 0,01; 0,05; 0,1; 0,5; 1, 5, 10 e 20μM) e oito doses de luz (1,32; 2,64; 3,96; 5,28; 6,60; 13,20 e 26,4J/cm2). O efeito de diferentes tempos de pré-irradiação (PIT), a possível captação de curcumina pelas células fúngicas e participação do oxigênio singlete na fotoinativação também foram avaliados. Adicionalmente, a PDT mediada pela curcumina foi avaliada em biofilmes formados pela cepa de referência de C. albicans e sobre culturas celulares de macrófagos. Além disso, as características ópticas da solução de curcumina foram investigadas em função da dose de luz utilizada. Os resultados foram submetidos à análise descritiva, Análise de Variância (ANOVA) e Kruskal-Wallis (α= 5%). As suspensões planctônicas de C. albicans foram completamente inativadas com a utilização de 20μM de curcumina e 5,28J/cm2. Além disso, foi observada redução significativa na viabilidade celular dos biofilmes de C. albicans. O efeito fotodinâmico foi acentuado pela presença da curcumina durante a iluminação... / The aim of this investigation was to evaluate: 1. the Photodynamic Therapy (PDT) mediated by curcumin for in vitro inactivation of a reference strain of Candida albicans and its citotoxic effects against a macrofage cell line; 2. the effectiveness of PDT mediated by curcumin to inactivate clinical isolates of C. albicans, Candida tropicalis and Candida glabrata, both in planktonic and biofilm phases; 3. the photoinactivation of C. albicans in a murine model of oral candidiasis using different curcumin concentrations. In the first study, suspensions of C. albicans were treated with nine curcumin concentrations (0.005; 0.01; 0.05; 0.1; 0.5; 1, 5, 10 and 20μM) and exposed to LED light at different fluences (1.32; 2.64; 3.96; 5.28; 6.60; 13.20 and 26.4J/cm2). The effect of the pre-irradiation time (PIT) on PDT effectiveness, the uptake of curcumin by C. albicans cells and the possible involvement of singlet oxygen in the photodynamic action was also evaluated. In addition, curcumin-mediated PDT was assessed against biofilms. Similar protocols were tested on a macrophage cell line and the effect was evaluated by MTT and SEM analysis. The optical properties of curcumin were investigated as a function of illumination fluence. Data were analyzed with Analysis of Variance (ANOVA), and Kruskal-Wallis test (α= 5%). The results showed a statistically significant reduction in C. albicans viability after PDT (p<0.05), for both planktonic and biofilm cultures. Photodynamic effect was greatly increased with the presence of curcumin in the surrounding media and the PIT of 20 minutes improved PDT effectiveness. Although PDT was phototoxic to macrophages, the therapy was more effective in inactivating the yeast cell than the defense cell. The spectral changes showed a high photobleaching rate of curcumin. In the second study, planktonic... (Complete abstract click electronic access below)

Espécies de Candida com relevância clínica diferem entre si com relação a aspectos como prevalência clínica, virulência e perfil de resistência a antifúngicos. Formulamos a hipótese de que estas diferenças podem ocorrer devidas em parte à capacidade relativa distinta destas espécies de resistirem ao estresse oxidativo que é imposto por fagócitos durante a patogênese da candidíase. Nesse contexto, poucos são os estudos de resposta ao estresse oxidativo (REO) em espécies que não Candida albicans. Assim, esse trabalho teve por objetivo investigar a REO in vitro em isolados de referência e clínicos de 8 espécies de Candida – C. albicans, C. dubliniensis, C. famata, C. glabrata, C. guilliermondii, C. krusei, C. parapsilosis e C. tropicalis. Para tal, foi avaliado o grau de resistência a oxidantes, a capacidade de adaptação, a indução de enzimas antioxidantes, os níveis de glutationa total, a capacidade antioxidante total e a indução de dano oxidativo a proteínas e lipídios através de metodologias atuais. C. albicans, C. glabrata e C. krusei apresentaram maior resistência ao estresse oxidativo nas condições testadas, C. parapsilosis e C. tropicalis resistência média e C. dubliniensis, C. famata e C. guilliermondii foram mais sensíveis. Todas as espécies demonstraram capacidade adaptativa e indução de enzimas antioxidantes. Os níveis de glutationa total mostraram redução intracelular frente ao estresse oxidativo. A capacidade antioxidante total foi variável entre espécies. Outros testes (efeito de meio condicionado e de moléculas quorum-sensing – tirosol e farnesol - no crescimento, capacidade de proteção cruzada e oxidante total) foram empregados sem sucesso. Ainda, verificamos em isolados de C. albicans a relação entre capacidade de resistirem a oxidantes e produção de fosfolipase e protease. Os resultados indicaram ausência de correlação entre estes fatores. Espécies com sistema antioxidante mais frágil são também as que ocorrem com menor frequência em infecções sistêmicas ou resistem menos ao efeito dos antifúngicos. É interessante investigar se C. albicans, C. glabrata e C. krusei tiram vantagem efetiva de um sistema antioxidante mais potente para causarem candidíase disseminada ou resistirem a drogas. A caracterização detalhada da REO pode proporcionar a descoberta de novos alvos para a ação de antifúngicos no futuro. / Candida species with clinical relevance differ in therms of clinical prevalence, virulence and profile of resistance to antifungal agents. We hypothesized that these differences may be due in part to the relative ability of these species to resist oxidative stress that is imposed by phagocytes in the pathogenesis of candidiasis. In this context, there are few studies of the oxidative stress response (OSR) in different species than C. albicans. Thus, this study aimed to investigate the in vitro OSR considering isolates of eight Candida species – C. albicans, C. dubliniensis, C. famata, C. glabrata, C. guilliermondii, C. krusei, C. parapsilosis and C. tropicalis. To this purpose, we evaluated the resistance degree to oxidants, the adaptability, the induction of antioxidant enzymes, levels of total glutathione, total antioxidant status and induction of oxidative damage to proteins and lipids by current methodologies. C. albicans, C. glabrata and C. krusei showed greater resistance to oxidative stress in the conditions tested; C. parapsilosis and C. tropicalis showed an intermediate resistance and C. dubliniensis, C. famata and C. guilliermondii were more sensitive to oxidative stress. All species showed adaptive capacity and induction of antioxidant enzymes. The levels of total glutathione showed intracellular reduction against oxidative stress. The total antioxidant capacity was variable between species. Other tests (effect of conditioned medium and quorum-sensing molecules - farnesol and tirosol – on growth, ability of cross-protection and total oxidant status) were tested without success. Still, we found in isolates of C. albicans the relationship between ability to resist oxidation and production of phospholipase and protease. The results indicated no correlation between these factors. Species with weaker antioxidant system are also those that occur less frequently in systemic infections or are less resistant to the effect of antifungal agents. It is interesting to investigate if C. albicans, C. glabrata and C. krusei take effective advantage of a more powerful antioxidant system to cause disseminated candidiasis or resist drugs. The detailed characterization of the OSR can provide the discovery of new targets for the action of antifungals in the future.

Investigamos a ocorrência de espécies de leveduras isoladas em um hospital infantil. Pesquisamos a presença de C. dubliniensis; investigamos as espécies do complexo Candida parapsilosis e estudamos as espécies deste complexo quanto a produção de biofilme. Pesquisamos os fatores relacionados a virulência e o perfil de sensibilidade pelo método Etest®. Dentre os anos em estudo C. albicans foi a levedura mais isolada com 36.45% seguida de C. tropicalis 23.36%, C. parapsilosis sensu stricto 21.49%, Pichia anômala 5.61%, C. guilliermondii 4.67%, C. krusei 2.80%; C. orthopsilosis 1.87%, C. glabrata 1.87%, C. metapsilosis 0.94%, C. pararugosa 0.94%. C. dubliniensis não foi isolada nesta pesquisa. No estudo do complexo Candida parapsilosis, C. parapsilosis sensu estricto foi a espécie mais prevalente. Produziram biofilme apenas oito amostras de C. parapsilosis sensu estricto e uma amostra de C. orthopsilosis. As espécies não-albicans produziram mais proteinase e hialuronidase do que C. albicans. No estudo da fosfolipase e hemolisina, C. albicans foi a espécie mais produtora. Todas as amostras foram sensíveis para anfotericina B e para fluconazol quatro amostras foram resistentes. Duas amostras foram resistentes para caspofungina. / We investigated the occurrence of yeast species isolated in a public hospital. We researched the presence of C. dubliniensis and investigated the species within the complex Candida parapsilosis and studied this complex in relation to biofilm´s production. We also investigated the factors related to virulence and studied the sensibility profile by the \"Etest ®\" method. During the years of study, C. albicans was the most isolated yeast with 36.45% followed by C. tropicalis 23,36%, C. parapsilosis sensu stricto 21,49%, Pichia anomala 5,61%, C. guilliermondii 4.67%, C. krusei 2.80%, C. orthopsilosis 1.87%, C. glabrata 1.87%, C. metapsilosis 0.94%, C. pararugosa 0.94%. C. dubliniensis was not isolated in this study. In the study of Candida parapsilosis complex, C. parapsilosis sensu stricto was the most prevalent species. Only eight strains of C. parapsilosis sensu stricto and one strain of C. orthopsilosis produce biofilm. The non-albicans species showed greater activity of the proteinase and hyaluronidase than C. albicans. In the study of hemolysin and phospholipase, C. albicans was the most producer. All strains were susceptible to amphotericin B and to fluconazole four were resistant. For caspofungin, two strains were resistant.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-10Bitstream added on 2014-06-13T18:56:01Z : No. of bitstreams: 1 correa_pr_me_sjrp.pdf: 763319 bytes, checksum: 1d1304fe60a8bc1f5f7c29d67c166679 (MD5) / A candidíase vulvovaginal (CVV) é uma inflamação da mucosa genital decorrente de infecção por leveduras. Os principais sintomas são disúria, hiperemia, ardência, corrimento, prurido, dispareunia, fissuras. Aproximadamente 75% das mulheres sofrem ao menos um episódio de candidíase vulvovaginal, 40% apresentam mais de um episódio e menos de 5% tornam-se recorrentes (CVVR). A CVV tem como principal etiologia, Candida albicans, no entanto, episódios devido às espécies “não albicans” estão aumentando. O manejo das vaginites vem sendo realizado de modo empírico, levando a problemas quanto à terapêutica. Assim, este projeto teve como objetivos caracterizar fenotipicamente leveduras isoladas do conteúdo vaginal de 223 mulheres adultas, sintomáticas (S) e assintomáticas (A), atendidas pelo Serviço de Ginecologia do Hospital de Base de São José do Rio Preto e determinar os indicadores clínicos. Para tal, foi realizada análise micológica dos 223 isolados clínicos, sendo que, 87 amostras apresentaram cultura positiva. C. albicans foi a espécie mais prevalente nos dois grupos (A/S), seguida de Candida glabrata. A maior parte das mulheres era casada com média de idade de 30 a 40 anos, referiu uso de anticoncepcionais e ciclo menstrual regular. Em relação a práticas sexuais houve, para parte das pacientes, concomitância entre os hábitos, anal, oral e vaginal. Quando avaliado o tratamento prévio, não houve evidência de associação com sintomas particulares. A suscetibilidade a antifúngicos, realizada pelos dois métodos de referência disco-difusão e microdiluição, mostrou concordância, estatisticamente comprovada, apenas para o itraconazol. Em relação à produção de fator de virulência, apenas C. albicans produziu fosfolipase. Diferentemente, proteinase foi detectada em C. albicans, C. glabrata e Candida parapsilosis. Esse último fator de virulência... / Vulvovaginal candidiasis (CVV) is an inflammation of genital mucosa caused by infection by yeasts. The main symptoms are dysuria, hyperemia, burning, corrimento, pruritus, dyspareunia, cracks. Approximately 75% of women suffer at least one episode of vulvovaginal candidiasis, 40% have more than one episode and less than 5% become recurrent (CVVR). The main cause is to candidiasis is Candida albicans, however, episodes due to the species non albicans are increasing. The management of vaginitis has been done so empirically, leading to problems with therapy. Thus, this project aimed to phenotypically characterize yeasts isolated from vaginal content of 223 adult women, symptomatic (S) and asymptomatic (A), attended by the Service of Gynecology, Hospital de Base de São José do Rio Preto and determine the clinical indicators. This has mycological analysis of 223 clinical isolates, of which 87 samples showed positive culture. C. albicans was the species most prevalent in both groups (A / S), followed by Candida glabrata. Most women were married with an average age of 30 to 40 years, said use of contraceptives and menstrual cycle regularly. In relation to sexual practices was for the part of patients, concomitance between habits, anal, oral and vaginal. When assessing the previous treatment, there was no evidence of association with particular symptoms. The susceptibility to antifungal held by the two methods of reference disc-diffusion and microdilution, showed agreement, statistically proven, only to itraconazole. For the production of virulence factor, only C. albicans produced phospholipase. Conversely, proteinase was detected in C. albicans, C. glabrata and Candida parapsilosis. The latter factor was associated with virulence, mainly in isolates from symptomatic patients. Data from this study helped reveal association between virulence factors with clinical signs... (Complete abstract click electronic access below)

Submitted by Carolina Reis Zambom null (carolinarz@gmail.com) on 2018-03-20T17:16:52Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Carol_versão correçãotodos_versãofinalpósdefesa-edit.pdf: 2874016 bytes, checksum: 09ff8b1558d91035a2e106afc33f8bd8 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Carolina Gonçalves Bet null (abet@iq.unesp.br) on 2018-03-23T17:38:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 zambom_cr_me_araiq_int.pdf: 2737311 bytes, checksum: 4eca302db8e9f1efe9d15f6049d7aa9a (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-23T17:38:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 zambom_cr_me_araiq_int.pdf: 2737311 bytes, checksum: 4eca302db8e9f1efe9d15f6049d7aa9a (MD5) Previous issue date: 2018-03-02 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Atualmente aproximadamente 75-88% das infecções fúngicas são causadas por espécies de Candida, que geram um custo de 1,7 bilhões de dólares para a saúde pública, somente nos EUA. Candida albicans é o principal microrganismo causador da candidíase bucal, uma infecção da mucosa oral do organismo humano. A patogenicidade dessa espécie está relacionada com a formação de biofilmes, que agem como um revestimento impermeável e protetor, e tornam o microrganismo resistente a medicamentos convencionais. Neste caso, os antifúngicos mais comumente utilizados, não apresentam ação eficaz. Por esse motivo, a busca por novas opções de tratamento e por novos medicamentos está em constante desenvolvimento, principalmente na área da biotecnologia. Um exemplo disso são os peptídeos antifúngicos da família das Histatinas, entre eles a Histatina-5. Trata-se de um peptídeo naturalmente encontrado na saliva humana, mas que sofre rápida degradação quando presente na cavidade bucal, que é seu local de ação. Diante disto, o objetivo deste trabalho é o desenvolvimento de lipossomas de diferentes composições lipídicas, na intenção de proteger o peptídeo e melhorar sua ação, preservando seu potencial antifúngico. Para isso foi sintetizado o peptídeo 0WHistatina-5, um análogo do peptídeo Histatina-5, que contém o aminoácido triptofano em sua sequência. Foi utilizado o método de síntese em fase sólida, seguido de clivagem e purificação, com confirmação da massa molecular utilizando HPLC e ESI-MS. Os lipossomas foram produzidos pelo método de hidratação do filme lipídico, em 3 composições lipídicas diferentes, denominadas de F1, F2 e F3. F1 possui somente DPPC e Chol em sua composição, F2 contém, além desses componentes, PEG e F3 contém DPPC, Chol e POPG. Os lipossomas foram submetidos a processo de extrusão e sonicação para padronização do tamanho das vesículas, e estudo da melhor técnica para sua produção. Os lipossomas foram caracterizados por espalhamento de luz dinâmico determinação da eficiência de encapsulação, cinética de liberação, estabilidade e avaliação da atividade antifúngica. O método de síntese do peptídeo 0WHistatina-5 foi adequado e o processo de purificação possibilitou a obtenção do peptídeo com alto grau de pureza. Os lipossomas obtidos por extrusão apresentaram tamanho médio na faixa de 100 nm, enquanto os lipossomas obtidos por sonicação apresentaram tamanho menor, na faixa de 90 nm. Os lipossomas contendo 0WHistatina-5, apresentaram aumento em seu tamanho médio, indicando que o peptídeo está contido no compartimento interno aquoso dos lipossomas. A eficiência de encapsulação foi maior para os lipossomas obtidos por sonicação, sendo de 34,5% para a formulação F1, que contém DPPC e Chol em sua composição. A composição lipídica dos lipossomas está relacionada com a sua eficiência de encapsulação, e a presença de colesterol dificultou a encapsulação do peptídeo. A estabilidade das formulações também está relacionada com sua composição, sendo a formulação F3, obtida por sonicação e com POPG em sua formulação, a que apresentou melhor estabilidade quando armazenada por 60 dias a temperatura de 4°C. As formulações desenvolvidas apresentaram capacidade de liberar o peptídeo pelo tempo total de 96 horas, com o primeiro pico de liberação após 5 horas, e novo aumento do conteúdo liberado após 30 horas. O ensaio antimicrobiano foi realizado utilizando C. albicans ATCC 10231, e demostrou que no tempo de 4 horas a inibição para F1 foi de 66,5%. Assim, este trabalho demonstrou que a utilização de sistemas nanoestruturados é de grande importância para viabilizar a aplicação do peptídeo Histatina-5 em estudos terapêuticos, e em estudos in vivo no futuro. / Currently, approximately 75-88% of fungal infections are caused by Candida species, which generate a cost of $ 1.7 billion for public health in the US. Candida albicans is the main microorganism that causes oral candidiasis, an infection of the oral mucosa of the human organism. The pathogenicity of this species is related to the formation of biofilms, which act as an impermeable and protective coating, and make the microorganism resistant to conventional drugs. In this case, the most commonly used antifungals, have no effective action. For this reason, the search for new treatment options and new drugs is in constant development, especially in the biotechnology area. The antifungal peptides of the Histatin family, including Histatin-5, are an example. The Histatin-5 is a peptide naturally found in human saliva, but it undergoes rapid degradation when present in the oral cavity, which is its place of action. For this reason, this work aimed at developing liposomes of different lipid compositions, in order to protect the peptide, improve its action, and preserve its antifungal potential. For this, the peptide 0WHistatin-5, an analog of the peptide Histatin-5, was synthesized, which contains the amino acid tryptophan in its sequence. Therefore, the peptide was synthesized manually by the solid phase synthesis method, followed by cleavage and purification. The molecular weight was confirmed by using HPLC and ESI-MS. The liposomes were produced by the lipid film hydration method, with three different lipid compositions, named F1, F2 and F3. F1 has only DPPC and Chol in its composition, F2 contains, in addition to these components, PEG and F3 contains DPPC, Chol and POPG. The liposomes were submitted to extrusion and sonication processes, in order to standardize their vesicle size, and determine the best technique for their production. The dynamic light scattering technique was used to characterize the liposomes, which were tested for encapsulation efficiency, release kinetics, stability and evaluation of the antifungal activity. The synthesis method of the Histatin-5 was adequate and the purification process allowed to obtain the peptide in high purity. The liposomes obtained by extrusion presented average size in the range of 100 nm, while the liposomes obtained by sonication presented a smaller size, in the range of 90 nm. Liposomes loaded with Histatin-5 showed an increase in their mean size, which indicated that the peptide was contained in the intern aqueous compartment of the liposomes. The encapsulation efficiency was higher for the liposomes obtained by sonication. The F1 formulation presented an encapsulation efficiency of 34.5%, which contains DPPC and Chol in its composition. The lipid composition of the liposomes was related to their encapsulation efficiency, and the presence of cholesterol hindered the encapsulation of the peptide. The stability of the formulations was also related to their compositions. The F3 formulation obtained by sonication and containing POPG presented a higher stability when stored for 60 days at 4°C. The formulations showed the ability to release the peptide in the total period of 96 hours. The first release peak was observed after 5 hours, and a further increase of the released content was verified after 30 hours. The antimicrobial assay was performed using C. albicans ATCC 10231. It demonstrated that the inhibition for F1 was 66.5% after four hours of incubation, and it was maintained at 30% until the end of the experiment. Thus, this work conclusions showed that the use of nanostructured systems is of great importance to enable the application of Histatin-5 in therapeutic studies, and in vivo studies in the future. / 132393/20166

Submitted by ROSANA FERREIRA SILVA (rosanafsilva@hotmail.com) on 2017-01-30T17:37:11Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO CORRIGIDA APROVADA 27.01.pdf: 1086012 bytes, checksum: 936dc95381491fd885964319d807944c (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-02-03T15:53:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 silva_rf_me_sjc.pdf: 1086012 bytes, checksum: 936dc95381491fd885964319d807944c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-03T15:53:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 silva_rf_me_sjc.pdf: 1086012 bytes, checksum: 936dc95381491fd885964319d807944c (MD5) Previous issue date: 2016-12-01 / Outra / Micro-organismos como fungos do gênero Candida, são habitantes comensais da cavidade bucal; em condições normais, co-existem com a microbiota normal sem provocar doenças. Entretanto, alterações locais ou sistêmicas como imunossupressão, desequilíbrio da microbiota oral, hipossalivação e mucosite, secundárias ao tratamento quimioterápico, predispõem pacientes com câncer a um alto risco de infecções fúngicas orais e sistêmicas. O objetivo desse trabalho foi avaliar a presença de leveduras do gênero Candida na cavidade bucal de pacientes onco-hematológicos submetidos a transplante autólogo de células-tronco hematopoiéticas (TACTH). Foram avaliados 27 pacientes, nos períodos pré, e pós-transplante. As amostras da cavidade bucal foram obtidas pela técnica de enxágüe bucal e semeadas em Chromagar Candida para triagem das cepas isoladas. Após o crescimento, foi extraído o DNA e submetido a identificação molecular (PCR) utilizando iniciadores para os genes ribossomais dessa levedura. Após a amplificação do fragmento esperado, as cepas foram sequenciadas utilizando sequenciador automático.Para análise descritiva e estatística dos resultados obtidos, os dados foram submetidos ao teste de Shapiro-Wilk para avaliação da normalidade. Em seguida, o teste de variância Wilcoxon foi utilizado. A significância adotada foi de 5%. Candida spp foi encontrada em 40,74% (11 pacientes), sendo que 2 (18,18%) possuíam mais de uma espécie, dos 9 pacientes colonizados por apenas uma espécie, 7 eram portadores de Candida albicans (77,77%) e 1 Candida dubliniensis (11,11%) e 1 C. krusei (11,11%). As colonizações mistas, nos outros dois pacientes, foram compostas de C. albicans + C. glabrata; C. albicans + C. dubliniensis. Na segunda coleta (C2), 9 (81,81%) dos portadores de Candida permaneciam colonizados, inclusive por espécies não albicans. A homologia na identificação das espécies com cepas padronizadas foi de 85 a 99%. Dentro das condições deste trabalho foi possível determinar, com precisão as espécies de Candida na cavidade oral dos pacientes, bem como observar que o uso profilatico de clorexidina tópica não elimina a colonização alertando para possibilidade de infecções sistêmicas. / Microorganisms such as fungi of the genus Candida, are commensal inhabitants of the oral cavity; under normal conditions co-exist with normal microflora without causing disease. However, local or systemic changes such as immunosuppression, imbalance in the oral microbiota, hyposalivation and mucositis, secondary to chemotherapy, predispose cancer patients at high risk of oral and systemic fungal infections. The aim of this project is to evaluate the presence of Candida species in the oral cavity of hematological malignances patients undergoing autologous transplantation of hematopoietic stem cells (HSCT). We evaluated 27 patients in pre- and post-transplant. Samples of the oral cavity were obtained by oral rinse technique and plated on Chromagar Candida for screening of the strains. After growth, the DNA was extracted and subjected to molecular identification (PCR) using primers for the ribosomal genes in this yeast. After amplification of the expected fragment, the strains were sequenced using the sequencer automático. For descriptive and statistical analysis of the results, the data will be submitted to the Shapiro-Wilk test for evaluation of normality. Then the variance Wilcoxon test was used. The significance of 5% was adopted. Candida spp was found in 40.74% (11pacientes), and 2 (18.18%) had more than one species, of the 9 patients colonized by only one species, 7 patients had Candida albicans (77.77%) and 1 Candida dubliniensis (11.11%) and 1 C. krusei (11.11%). Mixed settlements, in the other two patients were composed of C. albicans + C. glabrata; C. albicans + C. dubliniensis. In the second collection (C2), 9 (81.81%) of Candida carriers remained colonized, including by non albicans species. The homology identification of species standardized strains was 85 99%. Within the conditions of this study it was possible to determine with precision the species of Candida in the oral cavity of patients, and noted that the prophylactic use of topical chlorhexidine does not eliminate the possibility of colonization warning of systemic infections.

Resumo: Este estudo avaliou a estomatite por prótese total e as variáveis relacionadas à sua etiologia, considerando as características clínicas do indivíduo, as características micológicas e de adesão das espécies de Candida e o grupo sangüíneo dos indivíduos. Sessenta indivíduos portadores de prótese total superior (grupo teste) e 15 indivíduos não usuários de próteses removíveis (grupo controle) foram avaliados. As amostras micológicas foram coletadas da mucosa do palato, face interna da prótese e dorso da língua, por imprint. A identificação das espécies de Candida foi realizada por métodos clássicos (cultura) e moleculares (RAPD). A avaliação da qualidade das próteses totais foi realizada com base em cinco indicadores (defeitos, material, estabilidade, retenção e oclusão) e a da qualidade da higiene da prótese total, por meio da visualização do biofilme com o uso de evidenciador de placa. Não houve diferença significativa no diagnóstico de EP e na detecção de Candida spp. entre o gêneros, hábito de fumar, presença de doença sistêmica, uso de medicamentos e hábitos de higiene (cavidade bucal e PT). A EP foi correlacionada com detecção de Candida spp. no palato e com indivíduos O Rh+. Entretanto não foi correlacionada com um perfil genotípico de Candida spp. ou uma espécie de Candida, com a quantidade de células aderidas nos corpos de prova de resina, com o estado secretor do indivíduo, com o uso contínuo ou qualidade e higiene da prótese total. A detecção de Candida spp. foi correlacionada com a presença de EP, com doença sistêmica, uso de medicamentos, com a qualidade e higiene das próteses e com indivíduos A Rh+. Com base nos resultados obtidos verificamos que a presença de estomatite por prótese total foi correlacionada com o grupo sangüíneo do indivíduo e com Candida spp., a qual também foi correlacionada com características do hospedeiro e da prótese total. / Abstract: This study evaluated the denture stomatitis (DS) and clinical variables related with its etiology, considering the characteristics of clinical, mycological, adhesion profile and blood group of the subjects. 60 denture wearers (test group) and 15 subjects without removable appliances (control group) were evaluated. The mycological samples were taken from palate, denture and tongue by imprint method. The Candida species were identified by classical (culture) and molecular (RAPD) methods. The evaluation of denture quality was performed on basis of five parameters (defect, material, stability, retention, and occlusion) and the hygiene of the denture by means of plaque observation. Statistical difference was not observed between diagnosis of DS and Candida detection for gender, smoking, systemic diseases, medication, hygiene habits (oral cavity and denture). The DS was correlated with Candida spp. on the palate and with subjects O Rh+. However, there was no significance with genotypic profile with any species of Candida either clinical or molecular features. The detection of Candida was correlated with DS, systemic diseases, medication, quality and hygiene of denture in A Rh+ subjects. Within the limits of this study we conclude that denture stomatitis was correlated with blood group and Candida as well as the characteristics of the host and the denture. / Orientador: Maria Regina Sposto / Coorientador: Maria José Soares Mendes Giannini / Banca: Gelson Luis Adabo / Banca: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Luciene Cristina de Figueiredo / Banca: Jacks Jorge Júnior / Doutor

Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Juliana Campos Junqueira / Banca: Aguinaldo Silva Garcez Segundo / Resumo: Os objetivos do presente estudo foram avaliar a ação antifúngica da Terapia Fotodinâmica (TFD) em culturas planctônicas e biofilmes de Candida albicans formados in vitro e em modelo de candidose experimental em camundongos, bem como sua interferência na aderência de C. albicans às células epiteliais bucais humanas in vitro. Foi utilizada cepa padrão de C. albicans (ATCC 18804) para os ensaios. Como fonte de luz foi utilizado o Diodo Emissor de Luz (LED) com emissão de luz verde (532±10 nm) com potência de 90 mW e fotossensibilizador eritrosina nas concentrações variando de 200 a 0,39 μM para os ensaios em cultura plactônica. O biofilme foi formado em placas de 96 poços e tratado com o fotossensibilizador eritrosina na concentração de 400 μM e luz LED. 56 camundongos machos e adultos foram imunossuprimidos e inoculados com suspensões contendo 108 células/mL de C. albicans. Os animais foram submetidos a TFD mediada pelo corante eritrosina (400 μM) e irradiados por LED. Antes e após os tratamentos, foram recuperadas leveduras da cavidade bucal dos animais. As leveduras recuperadas após a TFD e grupo controle foram avaliadas quanto a interferência da TFD na aderência de C. albicans às células do epitélio bucal humano. Em seguida, os animais foram sacrificados e as línguas retiradas para análise macroscópica e histológica. Os biofilmes, línguas e lâminas de aderência foram também analisados por Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV). A análise dos dados foi feita por ANOVA e Teste de Tukey, teste t de Student e Kruskal-Wallis (P < 0,05). A TFD aplicada à cultura planctônica de C. albicans foi dose-dependente com redução significativa a partir da menor concentração testada (0,39 μM) e 100% de morte das células a partir de 3,12 μM. A TFD em biofilme formado in vitro reduziu 0,74 log10 de C. albicans com redução de leveduras e hifas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aims of the present study were evaluate the antifungal action of Photodynamic Therapy (PDT) on Candida albicans planktonic cultures and biofilms formed in vitro and experimental candidosis model in mice, as well as its interference on C. albicans adherence on humans buccal epithelial cells in vitro. Standard strain of C. albicans (ATCC 18804) was used for assays. Green Light Emitting Diode (LED- 532 ± 10 nm) was used as light source with an output power of 90 mW and erythrosine photosensitizer at concentrations range from 200 to 0.39 μM for the assays on plaktonic cultures. The biofilm was formed on plates of 96- wells and treated with the erythrosine photosensitizer at a concentration of 400 μM and LED light. 56 adults and males mice were immunosuppressed and inoculated with suspensions containing 108 cells/ mL of C. albicans. The animals were submitted to erythrosine dye- mediated PDT (400 μM) and irradiated by LED. Before and after the treatments, yeasts from the animals' oral cavities were recovered. The yeasts recovered after PDT and control group were evaluated for interference of PDT on C. albicans adherence to humans buccal epithelial cells. Following, the animals were sacrified and their tongues taken away for macroscopic and histological analysis. The biofilms, tongues and adherence slices were also analized by Scanning Electron Microscopy (SEM). The analysis of the dates were done by ANOVA and Tukey test, Student t test and Kruskal-Wallis (P < 0.05). PDT applied on C. albicans planktonic culture was concentrationdependent with significant reduction from minor concentration tested (0.39 μM) and 100% of cells death from 3.12 μM. C. albicans biofilm formed in vitro was reduced 0.74 log10 by PDT with reduction of yeasts and hyphaes verified by SEM. In vivo, 0.73 log10 of C. albicans and 35% adherence on buccal epithelial cells were reduced, but there was not... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Ana Cláudia Pavarina / Banca: Carlos Eduardo Vergani / Banca: Iguatemy Lourenço Brunetti / Banca: Helena de Freitas Oliveira Paranhos / Banca: Marcelo Fabiano Gomes Boriollo / Resumo: A irradiação com microondas tem sido recomendada para a desinfecção de próteses odontológicas de resinas acrílicas devido ao seu poder inibitório sobre os microrganismos. Entretanto, as alterações celulares provocadas pela irradiação e que levam à inativação dos microrganismos presentes nas próteses não estão esclarecidas. O objetivo do presente estudo foi investigar os efeitos das microondas sobre células de Candida albicans, por meio de parâmetros de contagem celular e de liberação de substâncias intracelulares. Foram obtidas culturas de C. albicans de 24 horas em Tryptic Soy Broth (TSB) a partir de cepas padrão (ATCC 10231). As células foram centrifugadas, lavadas e ressuspensas em 400 mL de água destilada gelada na concentração de 108 cél/mL. Essa suspensão foi dividida em experimental e controle. A suspensão experimental (200 mL) foi colocada em um béquer de 500 mL contendo uma prótese total acrílica estéril e irradiada por microondas durante 6 min a 650 W. A suspensão controle não foi submetida à irradiação. Para ambas as suspensões, foram realizadas diluições seriadas para contagem celular em câmara de Neubauer, utilizando a entrada do corante azul de Metileno, como indicativo de alteração de permeabilidade de membrana. Alíquotas diluídas também foram semeadas em Agar Sabouraud Dextrose (ASD). Alíquotas não diluídas foram analisadas quanto à densidade óptica (DO) a 550 nm. Para a quantificação de substâncias liberadas, as células foram eliminadas das suspensões por centrifugação e filtragem e a solução resultante foi liofilizada. O conteúdo liofilizado foi ressuspenso em 5 mL de água destilada e analisado pelos seguintes métodos: Microprote e Sensiprote, para quantificação de proteínas; potenciometria, para quantificação de Na+ e K+; Liquiform, ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Microwaves have been used in the disinfection of acrylic resin dentures as a result of its inhibitory effect on microorganisms. However, much controversy exists concerning the lethal effects of microwave radiation on microorganisms. Evaluating the presence of significant differences on cell counts and substances released between irradiated and non-irradiated Candida albicans cell suspensions was the aim of this study. A stock C. albicans strain (ATCC 10231) was cultured in 600 mL of Tryptic Soy Broth (TSB) at 37ºC on a rotating shaker. The cells were centrifuged, water-washed and resuspended in distilled cold water to a final concentration of 108 cell/mL. The cell suspensions were equally divided in a 200 mL experimental suspension, which was placed in a 500 mL beaker with an acrylic resin denture inside and irradiated for 6 min at 650 W. The control suspension (200 mL) was not submitted to irradiation. Aliquots of both suspensions were serially diluted and counting in a Neubauer chamber using the uptake of Methylene blue dye as indicative of alterations in membrane cell permeability. Serially diluted aliquots were spread on Agar Sabouraud dextrose (ASD) plates for viability assay. Non-diluted aliquots were spectrophotometrically measured at 550 nm. To quantify the intracellular released substances, the cells were separated from the suspensions by centrifugation followed by filtering, and the resulting solution was freeze-dried. This liophylized was resuspended in 5 mL of cold water and submitted to optical density (OD) analyses of protein contents by the Microprote and Sensiprote systems; potenciometry analysis of Na+ and K+ contents; Ca++ contents analysis by Liquiform; and nucleic acids contents analysis by OD measurements at 260 nm...(Complete abstract, click electronic access below) / Doutor