Este estudo clínico-laboratorial identificou as espécies de Candida do palato e prótese de indivíduos desdentados totais com estomatite relacionada à prótese (ERP) e avaliou o efeito de soluções desinfetantes para higiene de próteses totais sobre Candida spp.. Sessenta participantes foram distribuídos aleatoriamente em 04 grupos paralelos (n=15); orientados a escovar as próteses e o palato 3 vezes ao dia e imergi-las nas soluções salina (C controle), Hipoclorito de sódio a 0,25% (HS0,25%), Ricinus communis a 10% (RC10%) ou Cloramina T a 0,5% (CT0,5%) por 20 minutos. Amostras de biofilme foram coletadas da prótese e palato no Baseline, após 7 e 37 dias do uso das soluções e semeadas em meio CHROMagar Candida. Após período de incubação foi realizada a identificação presuntiva, verificação da incidência e quantificação de crescimento das espécies de Candida (contagem de UFC). Cepas ATCC das espécies mais incidentes clinicamente foram avaliadas no estudo laboratorial. Biofilmes de C. albicans, C. tropicalis e C. glabrata foram formados sobre espécimes em resina acrílica termopolimerizável e imersos nas soluções por 20 minutos. Água destilada foi utilizada como controle. As variáveis de resposta foram crescimento de colônias (contagem de UFC), metabolismo celular (método de XTT), produção de enzimas hidrolíticas (kits específicos), formação de hifas (contagem de células em câmara de Newbauer) e quantificação de células vivas (microscopia de epifluorescência). A capacidade de remoção de biofilme pelas soluções também foi avaliada por meio de microscopia de epifluorescência. Para o estudo clínico, análises descritivas foram utilizadas para interpretação dos dados quanto às características sociodemográficas da amostra, identificação e incidência das Candida spp. Os resultados de crescimento celular (UFC) foram analisados pelos Testes Kruskal-Wallis e Friedman. Para o estudo laboratorial, os resultados foram analisados por teste Anova (One-way) e Tukey (capacidade de crescimento e metabolismo celular de C. albicans e C. tropicalis), teste de Kruskal-Wallis (metabolismo celular de C. glabrata; produção de enzimas hidrolíticas; formação de hifas; capacidade de remoção de biofilme) e teste de Wilcoxon (comparação entre quantidade de biofilme vivo e biofilme total). Empregou-se um nível de confiança de 95% (α= 0,05). As espécies mais incidentes foram C. albicans, seguida de C. tropicalis, C. glabrata e C. krusei. O HS 0,25% reduziu a incidência das três espécies na prótese e palato nos períodos de 7 e 37 dias; o CT 0,5% promoveu redução de Candida spp. somente nas próteses totais. O R. communis diminuiu a incidência de C. tropicalis em ambos os sítios de coleta. Para contagem de UFC, o HS 0,25% e CT 0,5% causaram redução significativa para cepas clínicas e ATCC. O R. communis, in vitro, reduziu a quantidade de UFC de C. glabrata. O HS 0,25% obteve os melhores valores contra atividade metabólica, formação de hifas, manutenção de células vivas e remoção do biofilme das espécies de Candida. As soluções de RC 10% e CT 0,5% causaram diminuição da atividade metabólica. Não houve diferença significante na produção de proteinase por C. albicans e C. tropicalis após exposição às diferentes soluções desinfetantes, com exceção da C. glabrata, em que todas as soluções causaram aumento significativo da produção desta enzima. As soluções não influenciaram a produção de fosfolipase. A CT 0,5% e RC 10% apresentaram resultados intermediários para manutenção de células vivas. A Cloramina T foi mais eficiente que o R. communis para remoção do biofilme de C. albicans e C. tropicalis e menos eficiente para remoção de biofilme de C. glabrata. As soluções de Hipoclorito de sódio a 0,25% e Cloramina T a 0,5% apresentaram os melhores resultados como solução de imersão frente às variáveis estudadas, podendo ser indicadas para uso clínico como desinfetantes para próteses totais. / This clinical-laboratory study identified the Candida species from the palate and complete dentures of edentulous individuals with prosthesis-related stomatitis (PRS) and evaluated the effect of disinfectant solutions for denture hygiene on Candida spp. Sixty participants were randomly assigned in 04 parallel groups (n = 15); They were oriented to brush their prostheses and the palate 3 times a day and immerse them in saline solution (C-control), 0.25% Sodium hypochlorite (HS0.25%), 10% Ricinus communis (RC10%) or 0.5% Chloramine T (CT 0.5%) for 20 minutes. Biofilm samples were collected from the prosthesis and palate in the baseline, after 7 and 37 days of use of the solutions and seeded in CHROMagar Candida medium. After incubation period, the presumptive identification, incidence verification and quantification of Candida species growth (CFU count) were performed. ATCC strains of the most clinically incident species were evaluated in the laboratory study. C. albicans, C. tropicalis and C. glabrata biofilms were formed on heatpolymerised acrylic resin specimens and immersed in the solutions for 20 minutes. Distilled water was used as control. The response variables were colony growth (UFC count), cell metabolism (XTT method), production of hidrolytic enzymes (specific kits), formation of hyphae (counting cells in Newbauer\'s chamber) and quantification of live cells (epifluorescence microscopy). The ability of biofilm removal by the solutions was also evaluated by means of epifluorescence microscopy. For the clinical study, descriptive analyzes were used to interpret the data regarding the sociodemographic characteristics of the sample, identification and incidence of Candida spp. The cell growth results (CFU) were analyzed by the Kruskal-Wallis and Friedman tests. For the laboratorial study, the results were analyzed by the Anova (One-way) and Tukey test (growth capacity and cellular metabolism of C. albicans and C. tropicalis), Kruskal-Wallis test (cellular metabolism of C. glabrata; hidrolytic enzymes production; formation of hyphae; ability to remove biofilm) and Wilcoxon\'s test (comparison of the amount of live biofilm and total biofilm). A confidence level of 95% (α = 0.05) was used. The most incident species were C. albicans, followed by C. tropicalis, C. glabrata and C. krusei. HS 0.25% reduced the incidence of the three species on the prosthesis and palate in the periods of 7 and 37 days; CT 0.5% promoted reduction of Candida spp. only in dentures. R. communis decreased the incidence of C. tropicalis in both collection sites. For CFU counts, HS 0.25% and CT 0.5% caused significant reduction for clinical strains and ATCC. R. communis, in vitro, reduced the amount of CFU of C. glabrata. The HS 0.25% obtained the best values compared to the metabolic activity, hyphae formation, maintenance of living cells and removal of the biofilm of Candida species. The solutions of RC 10% and CT 0.5% caused the decrease in the metabolic activity. There was no significant difference in proteinase production by C. albicans and C. tropicalis after exposure to different disinfectant solutions, except C. glabrata, in which all solutions caused a significant increase in the production of this enzyme. The solutions did not influence phospholipase production. A CT 0.5% and RC 10% presented intermediate results for the maintenance of living cells. Chloramine T was more efficient than R. communis for biofilm removal from C. albicans and C. tropicalis; and less efficient for biofilm removal from C. glabrata. The solutions of 0.25% Sodium Hypochlorite and 0.5% Chloramine T presented the best results as immersion solution compared to the studied variables and can be prescribed for clinical use as disinfectants for total dentures.

Espécies de Candida com relevância clínica diferem entre si com relação a aspectos como prevalência clínica, virulência e perfil de resistência a antifúngicos. Formulamos a hipótese de que estas diferenças podem ocorrer devidas em parte à capacidade relativa distinta destas espécies de resistirem ao estresse oxidativo que é imposto por fagócitos durante a patogênese da candidíase. Nesse contexto, poucos são os estudos de resposta ao estresse oxidativo (REO) em espécies que não Candida albicans. Assim, esse trabalho teve por objetivo investigar a REO in vitro em isolados de referência e clínicos de 8 espécies de Candida – C. albicans, C. dubliniensis, C. famata, C. glabrata, C. guilliermondii, C. krusei, C. parapsilosis e C. tropicalis. Para tal, foi avaliado o grau de resistência a oxidantes, a capacidade de adaptação, a indução de enzimas antioxidantes, os níveis de glutationa total, a capacidade antioxidante total e a indução de dano oxidativo a proteínas e lipídios através de metodologias atuais. C. albicans, C. glabrata e C. krusei apresentaram maior resistência ao estresse oxidativo nas condições testadas, C. parapsilosis e C. tropicalis resistência média e C. dubliniensis, C. famata e C. guilliermondii foram mais sensíveis. Todas as espécies demonstraram capacidade adaptativa e indução de enzimas antioxidantes. Os níveis de glutationa total mostraram redução intracelular frente ao estresse oxidativo. A capacidade antioxidante total foi variável entre espécies. Outros testes (efeito de meio condicionado e de moléculas quorum-sensing – tirosol e farnesol - no crescimento, capacidade de proteção cruzada e oxidante total) foram empregados sem sucesso. Ainda, verificamos em isolados de C. albicans a relação entre capacidade de resistirem a oxidantes e produção de fosfolipase e protease. Os resultados indicaram ausência de correlação entre estes fatores. Espécies com sistema antioxidante mais frágil são também as que ocorrem com menor frequência em infecções sistêmicas ou resistem menos ao efeito dos antifúngicos. É interessante investigar se C. albicans, C. glabrata e C. krusei tiram vantagem efetiva de um sistema antioxidante mais potente para causarem candidíase disseminada ou resistirem a drogas. A caracterização detalhada da REO pode proporcionar a descoberta de novos alvos para a ação de antifúngicos no futuro. / Candida species with clinical relevance differ in therms of clinical prevalence, virulence and profile of resistance to antifungal agents. We hypothesized that these differences may be due in part to the relative ability of these species to resist oxidative stress that is imposed by phagocytes in the pathogenesis of candidiasis. In this context, there are few studies of the oxidative stress response (OSR) in different species than C. albicans. Thus, this study aimed to investigate the in vitro OSR considering isolates of eight Candida species – C. albicans, C. dubliniensis, C. famata, C. glabrata, C. guilliermondii, C. krusei, C. parapsilosis and C. tropicalis. To this purpose, we evaluated the resistance degree to oxidants, the adaptability, the induction of antioxidant enzymes, levels of total glutathione, total antioxidant status and induction of oxidative damage to proteins and lipids by current methodologies. C. albicans, C. glabrata and C. krusei showed greater resistance to oxidative stress in the conditions tested; C. parapsilosis and C. tropicalis showed an intermediate resistance and C. dubliniensis, C. famata and C. guilliermondii were more sensitive to oxidative stress. All species showed adaptive capacity and induction of antioxidant enzymes. The levels of total glutathione showed intracellular reduction against oxidative stress. The total antioxidant capacity was variable between species. Other tests (effect of conditioned medium and quorum-sensing molecules - farnesol and tirosol – on growth, ability of cross-protection and total oxidant status) were tested without success. Still, we found in isolates of C. albicans the relationship between ability to resist oxidation and production of phospholipase and protease. The results indicated no correlation between these factors. Species with weaker antioxidant system are also those that occur less frequently in systemic infections or are less resistant to the effect of antifungal agents. It is interesting to investigate if C. albicans, C. glabrata and C. krusei take effective advantage of a more powerful antioxidant system to cause disseminated candidiasis or resist drugs. The detailed characterization of the OSR can provide the discovery of new targets for the action of antifungals in the future.

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2004 / Inclui bibliografias / Devido à influência de medicamentos e de doenças sistêmicas que agravam o estado da candidose em pacientes usuários de próteses totais, propôs-se, neste trabalho realizar a análise quantitativa das espécies mais freqüentes de Candida em pacientes com sina

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-27T12:50:24Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2223653 bytes, checksum: 8768097f77a47ecf8e794f97d9e1d85a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-27T12:50:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2223653 bytes, checksum: 8768097f77a47ecf8e794f97d9e1d85a (MD5) Previous issue date: 2004-02-26 / A monilíase, causada por Moniliophthora roreri, uma das doenças mais importantes do cacaueiro no Peru, pode causar perdas totais na produção. Considerando a importância da doença e a escassez de informações a seu respeito, nesse trabalho avaliaram-se: i- o avanço, a distribuição geográfica e as perdas decorrentes da doença; ii- o progresso e a influência de condições ambientais sobre a doença; iii- a resistência de cultivares de cacau ao patógeno; e iv- os efeitos de remoção de frutos doentes, de fungicidas e da associação remoção de frutos-resistência, no progresso da doença. Detectou-se a doença pela primeira vez no Peru em 1988, na região de Bagua (Marañon); em 1989 e 1990, em 48 e 85%, respectivamente, das localidades avaliadas na região Jaen-Bagua; em 1992, na região de Tingo Maria (Huallaga); em 1992, em Juanjui; em 1993, em Tocache; em 1994, no Valle do Pachitea; em 1995, na região de San Francisco (Apurimac-Ene); em 1997, na de Satipo (Perene-Ene); e, em 1998, na de La Convención (Urubamba). Atualmente, a doença ocorre nas cinco principais regiões produtoras de cacau, ocasionando perdas de 19 a 100% de frutos. Em vista do comércio e do tráfego nas regiões fronteiriças, há risco iminente de introdução da monilíase no Brasil e na Bolívia. Na região de Tingo Maria, de 1996 a 1999, a doença ocorreu em todos os meses do ano. Identificaram-se picos de infecção, principalmente de janeiro a julho, resutado de condições de alta precipitação pluviométrica em outubro a abril, existência de inóculo e de frutos em estádio suscetível em dezembro a maio. No banco de germoplasma da Universidad Nacional Agraria de la Selva (Tingo María) e no viveiro da Cooperativa Agraria (Tocache), em 1997/98 e 1998/99, avaliou-se a resistência de cultivares ao patógeno, por meio de inoculações artificiais e de observações em condições de inóculo natural no campo. Em ambas as condições e os locais, no cultivar 'ICS 95' detectou-se maior resistência à doença. A remoção semanal de frutos doentes reduziu significativamente a doença em relação à remoção a cada duas semanas. Em outros ensaios, a remoção semanal e a diferenciada (semanal, de dezembro a maio, e a cada duas semanas, de junho a novembro) reduziram mais eficientemente a incidência da monilíase e aumentaram a produção que a remoção a cada duas semanas, durante todo o ano. A remoção diferenciada é recomendável aos produtores para implementação. A incidência da monilíase foi significativamente menor com aplicação de hidróxido de cobre, óxido cuproso ou clorotalonil, que no tratamento testemunha. Nas cultivares testadas, houve diferenças quanto à suscetibilidade à doença. Obtiveram-se menor incidência de monilíase e maior produção em 'ICS 95', que deve ser recomendada para plantios comerciais. / Moniliasis, which is caused by Moniliophthora roreri, is a very important cocoa disease in Peru and can cause complete production losses. Because of disease importance and the lack of information regarding it, there were evaluated: i- disease spread, its geographical distribution, and losses it is being causing; ii- disease progress and the effect of climate variables on it; iii- the resistance of cocoa cultivars to the pathogen; and iv- the effects of diseased fruits removal, fungicides, and the combination fruit removal-resistance on moniliasis progress. The disease was first found in Peru in 1988 in Bagua region (Marañon); 1989 and 1990 in 48 and 85%, respectively, of localities sampled in Jaen-Bagua region; 1992 in Tingo Maria region (Huallaga); 1992 in Juanjui; 1993 in Tocache; 1994 in Pachitea Valley; 1995 in San Francisco region (Apurimac-Ene); 1997 in Satipo region (Perene-Ene); and 1998, in La Convención (Urubamba). Currently, moniliasis is found at the five major Peruvian cocoa producing regions, causing fruit losses between 19 to 100%. Considering intense trade and people movement in Peruvian border, there is a risk of introducing moniliasis on Brazil and Bolivia. In Tingo Maria region, from 1996 to 1999, the disease occurred throughout all the months. Infection peaks were detected, mostly from January to July, which coincided with high rainfall levels (October to April) and availability of inoculum and stage susceptible fruits (December to May). At the germplasm collection of the Universidad Nacional Agraria de la Selva (Tingo María) and at the nursery of the Cooperativa Agraria (Tocache), in 1997/98 and 1998/99, cultivar resistance to M. roreri was evaluated, by artificially inoculating fruits and by observing fruit reactions to natural inoculation under field conditions. At both places and inoculation conditions, 'ICS 95' was the most resistant cultivar to the pathogen. Weekly removals of diseased fruits were more efficient than biweekly removals in reducing disease incidence. Similarly either weekly removals or variable removals (weekly from December to May and biweekly from June to November) were more efficient in reducing disease incidence and increasing yield than biweekly removals. Variable removals should be recommended to growers. Moniliasis incidence was significantly lower with copper hydroxide, cuprous oxide or chlorotalonil than in control treatment. Differences regarding disease resistance were found in the tested cultivars. Less disease incidence and more yield were gotten in ICS 95 , which should be recommended to growers. stage susceptible fruits (December to May). At the germplasm collection of the Universidad Nacional Agraria de la Selva (Tingo María) and at the nursery of the Cooperativa Agraria (Tocache), in 1997/98 and 1998/99, cultivar resistance to M. roreri was evaluated, by artificially inoculating fruits and by observing fruit reactions to natural inoculation under field conditions. At both places and inoculation conditions, 'ICS 95' was the most resistant cultivar to the pathogen. Weekly removals of diseased fruits were more efficient than biweekly removals in reducing disease incidence. Similarly either weekly removals or variable removals (weekly from December to May and biweekly from June to November) were more efficient in reducing disease incidence and increasing yield than biweekly removals. Variable removals should be recommended to growers. Moniliasis incidence was significantly lower with copper hydroxide, cuprous oxide or chlorotalonil than in control treatment. Differences regarding disease resistance were found in the tested cultivars. Less disease incidence and more yield were gotten in 'ICS 95', which should be recommended to growers. / Tese importada do Alexandria

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007 / Introdução: De acordo com estudos retrospectivos previos, a candiduria ocorre em 11 a 20 por cento de todos os pacientes transplantados renais. Contudo, existe pouco conhecimento sobre a sua incidencia em estudos prospectivos, as suas caracteristicas clinico-¬epidemiologicas, e a sua repercussao na funcao do enxerto em curto prazo. Objetivos: Descrever a incidencia, etiologia, caracteristicas clinico-laboratoriais, repercussao na funcao do enxerto, e fatores de risco para candiduria nos dois primeiros meses pos¬ transplante renal. Casuistica e Metodos: Estudo observacional prospectivo realizado entre Agosto de 2005 e Julio de 2006. Incluiram-se 67 adultos transplantados renais no Hospital do Rim e Hipertensao, mantendo-se a proporcao de 30 por cento de receptores de transplantes de doador falecido. Os pacientes foram acompanhados clinicamente uma vez por semana durante o primeiro mes e a cada 15 dias durante o segundo mes pos-transplante. Duas uroculturas consecutivas, com intervalo de no maximo 24 horas, foram obtidas em cada uma das seis visitas programadas para coleta (semanas 1, 2, 3, 4, 6 e 8 pos-transplante). Culturas quantitativas para bacterias e fungos foram realizadas simultaneamente. Realizaram-se tambem exame do sedimento urinario, bioquimica sanguinea e hemograma. A associacao de variaveis com predicao de candiduria foi incluida em um modelo de regressao logistica multipla. Resultados: A candiduria ocorreu em 36 por cento dos pacientes, com um total de 30 episodios e uma media de 1.25 episodios por paciente. O tempo medio de aparecimento foi de 24 dias. C. albicans foi o agente mais comumente isolado (67 por cento). Noventa por cento dos episodios foram as sintomaticos e vinte por cento tiveram aumento de creatinina de 0,13 mg/dl em media. Oitenta por cento dos episodios nao receberam tratamento antifungico, e a candiduria desapareceu em 50 por cento dos episodios nao tratados. Nao houve complicacoes relacionadas com a candiduria mesmo em pacientes com episodios persistentes. As medias de creatinina e depuracao de creatinina em pacientes nao tratados, nao mostraram diferencas estatisticamente significantes entre o dia 7 e o dia 15 apos o aparecimento da candiduria. A unica variavel independentemente relacionada com candiduria foi o uso previo de sonda vesical (OR=14; IC95 por cento: 3,4-60,9; p=0,0000). Conclusoes: A candiduria foi um evento frequente, com uma incidencia de 36 por cento, superior a relatada em estudos retrospectivos previos. Apresentou-se mais frequentemente de forma assintomatica e benigna, sem repercussao na funcao do enxerto em curto prazo e nao esteve associada a complicacoes como candidemia, uropatia obstrutiva, pielonefrite e bola fungica. O uso de sonda vesical no mes anterior a candiduria foi fator preditivo independente para candiduria / Background: Candiduria is estimated to occur in 11-20% of all kidney transplant patients according to retrospective studies. However, little is known regarding incidence in prospective studies as well as clinical and epidemiological characteristics and its shortterm impact on graft function. Objective: To describe the incidence, etiology, clinical and laboratorial characteristics, impact on graft function and risk factors for candiduria in the first two months after renal transplantation. Methods: Observational prospective study conducted from August 2005 to July 2006. Sixty seven kidney transplant adults in the Hospital do Rim e Hipertensão were included, keeping the proportion of 30% of deceaseddonor transplantation recipients. Patients were assessed clinically once weekly during the first month and every other week during the second month. Two consecutive urine cultures were performed at least 24 h apart, in each of the six scheduled visits for collection (weeks 1,2,3,4,6 and 8 after transplantation). Quantitative cultures both bacteria and yeasts were performed together. Urinalysis, hematological studies and serum chemistries were also performed. The association of variables with prediction to candiduria was included in a stepwise logistic regression model. Results: Candiduria occurred in 36% of the patients, with a total of 30 episodes and a mean of 1.25 episodes per patient. The first episode of candiduria was detected a mean of 24 days after transplantation. C. albicans was the most frequently isolated agent (67%). Ninety percent of all episodes were asymptomatic and twenty percent had a mean creatinine increase of 0.13 mg/dl. Eighty percent of episodes did not receive antifungal treatment and candiduria resolved in 50% of untreated episodes. There were no complications related to candiduria even in patients with persistent episodes. Mean serum creatinine value and mean creatinine clearance level in untreated episodes did not show significant statistically differences between day 7 and day 15 after candiduria appearance. The only variables independently related to candiduria was the previous use of an indwelling bladder catheter (OR=14, CI: 3.4-60.9, p=0,0000). Conclusions candiduria was a common event, with incidence of 36% and higher than reported by retrospective studies. Most episodes of candiduria were asymptomatic and candiduria is usually benign, without short-term repercussion on graft function and not associated to complications such as candidemia, obstructive uropathy, pyelonephritis and fungal ball. The use of an indwelling bladder catheter in the month before occurrence of candiduria was an independently predictive factor for candiduria. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-08-26 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A candidíase nosocomial é grande preocupação em hospitais terciários em todo o mundo. A infecção ocorre geralmente em pacientes com doenças neoplásicas e degenerativas e é considerada a quarta causa mais freqüente de infecções sangüíneas. O diagnóstico da candidemia ou candidíase hematogênica tem sido problemático porque os sinais e sintomas clínicos são inespecíficos, o que conduz a atrasos no diagnóstico e, conseqüentemente, na terapia antifúngica apropriada. Desenvolvemos a técnica de ELISA de inibição para a detecção do antígeno de 65 kDa em modelo experimental de candidemia e para o diagnóstico de pacientes em UTI com suspeita de candidemia. Anticorpo monoclonal anti-65 kDa foi produzido e testado para a detecção do antígeno comum de 65 kDa produzido por C. albicans, C. tropicalis, C. parapsilosis em modelos murinos candidemia. No modelo experimental o antígeno de 65 kDa foi detectado no soro do camundongos em concentrações variando de 0,012 a 3,25 μg / ml. Vinte pacientes com candidemia foram avaliados pelo teste de ELISA de inibição em soros seqüenciais. Dezesseis (80%) pacientes apresentavam o antígeno de 65 kDa em concentrações variando de 0,07 a 5,0 μg/ml. Os soros sequenciais de pacientes com candidemia apresentaram 3 diferentes padrões de antigenemia; 1 – clareamento total da antigenemia; 2-clareamento inicial e recidiva da antigenemia; e 3 – clareamento parcial da antigenemia. Nossos resultados indicam que a detecção da molécula de 65 kDa pode ser muito útil para o diagnóstico de candidemia por C. albicans, C. tropicalis e C. parapsilosis. Avaliamos também um possível papel biológico da molécula de 65 kDa. Os ensaios demonstraram que a proteína de 65 kDa tem ligantes de fibronectina de matriz extracelular, tendo um possível papel da adesão do fungo no hospedeiro. / Nosocomial candidiasis is a major concern in tertiary care hospitals worldwide. This infection generally occurs in patients with degenerative and neoplastic diseases and is considered the fourth most frequent cause of bloodstream infections. Diagnosis of candidemia or hematogenous candidiasis has been problematic because clinical signs and symptoms are nonspecific, leading to delays in diagnosis and, consequently, in appropriate antifungal therapy. We developed an inhibition ELISA for detection of a 65 kDa-antigen in an experimental model of candidemia and for diagnosis of patients in ICUs with suspected candidemia. An anti-65 kDa monoclonal antibody was tested for detection of the 65 kDa antigen produced by C. albicans, C. tropicalis, and C. parapsilosis in murine candidemia models. The 65 kDa-antigen was detected in sera at concentrations ranging from 0.012 to 3.25 μg/ml. A total of 20 human patients with candidemia were then evaluated with the inhibition ELISA using sequential sera. Sixteen (80%) patients had the 65 kDa-antigen in concentrations ranging from 0.07 to 5.0 μg/ml. Sequential sera from patients with candidemia presented 3 different patterns of antigenemia of the 65 kDa molecule; 1- total clearance of antigenemia; 2-initial clearance and relapse of antigenemia; and 3- partial clearance of antigenemia. Our results indicate detection of the 65 kDa protein may be a valuable tool in the diagnosis of candidemia by C. albicans, C. tropicalis, and C. parapsilosis. We also evaluated a possible biological role of the molecule of 65 kDa from C. albicans. The tests showed that the protein of 65 kDa is bound to fibronectin from extracellular matrix, and a possible role of the adhesion of the fungus in the host. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2014-08-26T17:15:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 86.pdf: 4313185 bytes, checksum: 841992629bd3bcc0ae5285c8796f0995 (MD5) Previous issue date: 2009 / Universidade Federal do Rio de Janeiro. Faculdade de Farmácia, Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / Infecções invasivas são um problema crescente em hospitais terciários no Brasil e no mundo. Dentre os diversos agentes etiológicos encontrados no ambiente hospitalar, o gênero Candida tem sido o terceiro ou quarto patógeno mais isolado. De maneira geral, infecções fúngicas invasivas estão associadas a altas taxas de morbidade e mortalidade, dificuldades de diagnóstico, resistência a antimicrobianos, extensão do tempo de internação e aumento dos custos hospitalares. O presente trabalho objetivou avaliar o desempenho de métodos fenotípicos e moleculares na identificação de espécies de Candida recuperadas de casos de infecção hospitalar e descrever seus perfis de susceptibilidade a drogas antifúngicas através de metodologias de referência e comerciais. Para tanto, 113 isolados clínicos (108 Candida spp., 2 Rhodotorula glutinis e 1Trichosporon sp.) de 100 pacientes hospitalizados no estado do Rio de Janeiro foram submetidos a provas em CHROMagar, do tubo germinativo e do clamidósporo, análises bioquímicas em aparelho VITEK e identificação molecular por multiplex-PCR. A susceptibilidade ao fluconazol, itraconazol e anfotericina B foi avaliada conjuntamente pelos métodos de difusão em ágar (CLSI/M44-A e CECON) e microdiluição em caldo (CLSI/M27-A2 e EUCAST/E.Dis.7.1) conforme os protocolos de referência do CLSI e EUCAST, bem como pelas instruções do fabricante do método comercial CECON. Com relação às características demográficas dos pacientes, 47% eram do sexo masculino e 37% do sexo feminino, a maioria se encontrava na faixa de 0-20 anos (33%) e as leucemias foram os principais processos de base (20%). Candida albicans (41,5%), C. parapsilosis (29,2%), C. guilliermondii (10,6%) e C. tropicalis (9,7%) foram as espécies mais isoladas, considerando a totalidade dos espécimens clínicos. Em cultura de sangue, C. albicans (38,4%) também foi preponderante. A identificação cromogênica mostrou 100% de sensibilidade e especificidade para C. albicans, C. tropicalis e C. krusei. As provas do tubo germinativo e do clamidósporo para identificação de C. albicans apresentaram 89,4% de sensibilidade e 100% de especificidade. Os testes bioquímicos permitiram a detecção correta e completa de 78,8% dos isolados. A multiplex-PCR identificou adequadamente todas as espécies para os quais primers tinham sido desenhados. Alta taxas (≥92,9%) de susceptibilidade aos 3 antifúngicos testados foram observadas em todas as metodologias empregadas. Resistência foi verificada apenas em C. krusei e Rhodotorula glutinis frente ao fluconazol. No entanto, concentrações inibitórias mínimas (CIM) mais elevadas foram, igualmente, encontradas em itraconazol. O cálculo do coeficiente de correlação intraclasse (CCI) demonstrou alta correlação (0,88-0,97) entre todos os métodos utilizados para avaliação das susceptibilidades aos antifúngicos. Os resultados apresentados demonstraram que C. albicans foi a espécie mais prevalente e também que, depois de C. albicans, C. glabrata, C. krusei e C. lambica foram as espécies menos susceptíveis aos antifúngicos azólicos. Além disto, o CHROMagar e a multiplex-PCR foram os mais efetivos na identificação preliminar e na identificação definitiva dos isolados clínicos, respectivamente. As metodologias de difusão em ágar e microdiluição em caldo foram também efetivas tanto na triagem quanto na confirmação das susceptibilidades. / Invasive infections are a increasing problem in tertiary care hospital in the Brazil and in the world. The predominant etiologic agents in the nosocomial environment include the genus Candida that is the third ou fourth most common isolate. In generaly, invasive fungal infections are associated with high morbidity and mortality, difficulties in the diagnosis, acquisition of resistance, prolonged hospital stay, and high hospitalar costs. The aim of the present work was to evaluate the performance of phenotypic and molecular methods in the identification of Candida spp. isolated from nosocomial infection cases as well as to describe their antifungal drug susceptibility profliles by reference and commercial methodologies. For this, 113 clinical isolates (108 Candida spp., 1 Rhodotorula glutinis, 1 Trichosporon sp.) from 100 hospitalized patients in the Rio de Janeiro state were submmited to CHROMagar, germ tube and chlamydospore testing, biochemistry analysis in VITEK equipament, and molecular identification by multiplex-PCR. The susceptibility to fluconazole, itraconazol, and amphotericin B was evaluated by disk-diffusion method (CLSI/M44-A, CECON) and broth microdilution method (CLS/M27-A2, EUCAST/E.Dis.7.1.) according to the CLSI and EUCAST reference protocols and the manufacturer’s instructions, in case of CECON. Relatively of the demographic patient characteristics, 47% were male, 37% were female, the majority was between 0-20 years (33%), and leukemias were the main base diseases (20%). Candida albicans (41,5%), C. parapsilosis (29,2%), C. guilliermondii (10,6%) e C. tropicalis (9,7%) were the most frequently isolated Candida species from all clinical specimens. In hemoculture C. albicans (38,4%) was prevalent. The chromogenic identification showed susceptibility and specificity of 100% to C. albicans, C. tropicalis, and C. krusei. The germ tube and chlamydospore formation to C. albicans identification presented sensibility of 89,4% and specificity of 100%. The biochemistry tests were capable to correct and complete detection of 78% of the isolates. All Candida species could be accuracely identified by using the designed species-specific primers by multiplex-PCR analysis. High rates (≥92,9%) of susceptibility to 3 antifungal drug tested were verified for all methodologies. Resistance was found only in C. krusei and Rhodotorula glutinis to fluconazole. However high minimum inhibitory concentrations (MIC) were found to itraconazole as well. The intraclass correlation coefficient (ICC) showed high correlation (0,88-0,97) between all methods used to antifungal susceptibility evaluation. The results demonstrated that C. albicans was the most predominant specie, and also that after C. albicans, C. glabrata, C. krusei and C. lambica were the less susceptibility to azoles drug. Besides this, CHROMagar and multiplex-PCR were more effective in the preliminar and definitive identification of clinical isolates, respectively. The disk-diffusion and broth microdilution methods were effective to screening and confirm the susceptibilities.

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Salvador, BA, Brasil / A candidíase é uma infecção oportunista provocada por diversas espécies de fungos do gênero Candida, frequentemente encontrados integrando a microbiota, da superfície cutânea, no trato gastrointestinal e cavidades mucosas do ser humano desde o seu nascimento. A incidência das infecções fúngicas sistêmicas têm aumentado consideravelmente nas últimas décadas em função do grande número de pacientes com SIDA, a grande quantidade de transplantes e condições crônicas como o câncer, a terapia prolongada com imunossupressores e o uso de agentes corticosteroides. Além disso, a exposição prolongada aos antifúngicos azólicos promove a seleção de patógenos resistentes. No presente estudo avaliou-se a atividade antifúngica do complexo Rutênio-pirocatecol (RPC) frente a um isolado clinico de Candida tropicalis resistente ao fluconazol. A metodologia empregada para os testes de susceptibilidade foi de acordo com o documento M27-A3 do National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS, 2008). Esplenócitos de camundongos Balb/c foram obtidos de forma asséptica para avaliar a citotoxicidade do composto para células de mamíferos. O estresse oxidativo promovido pelo composto foi avaliado através da reação ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e ensaios de fluorescência com a sonda diclorodihidrofluoresceína diacetato (DCFH2DA). O Calcofluor White foi empregado para avaliar a integridade da parede celular. A análise ultraestrutural foi realizada através da microscopia eletrônica de varredura e transmissão. Os resultados encontrados para os testes de atividade antifúngica foram analisados através do teste estatístico ANOVA e pós-teste Dunnett. Os resultados encontrados para os testes de atividade antifúngica do RPC mostraram uma Concentração Inibitória de 50% (IC50) de 20,3 μM, enquanto em esplesnócitos a concentração efetiva de 50% foi de 325 μM mostrando um índice de seletividade igual a 16. O referido composto também mostrou um elevado efeito pró-oxidante quando avaliamos os níveis de estresse oxidativo através da TBARS e por meio da sonda DCFH2DA. Quando as leveduras foram tratadas por 24 h com o referido composto, observamos na microscopia de varredura o desenvolvimento de pseudo-hifas com 9 μM, a formação de fissuras em sua parede e uma forte agregação das células com 18 μM, além disso, encontramos uma intensa redução na quantidade de células e muito debris celular com 38 μM. Na microscopia de transmissão observamos estruturas vesiculares no espaço periplasmático associado a grânulos eletrondensos, os quais também foram vistos associados a parede celular, quando tratadas por 3h com 40 μM. No tratamento por 24h com 60 μM observamos a referida estrutura granular eletrondensa no citoplasma envolta por membrana, uma grande quantidade destas estruturas no espaço citoplasmático e associado a parede da célula, além disso, também observamos trechos de membrana associado a estas estruturas no espaço extracelular. Em conclusão, a atividade antifúngica e o índice de seletividade do RPC contra uma cepa resistente é consideravelmente interessante devido as suas possibilidades de aplicações na descoberta de novos antifúngicos / Candidiasis is an opportunistic infection caused by several species of fungi of the genus Candida, often found is the microbiota, on the skin, gastrointestinal tract and mucous cavities of the human beings birth. The incidence of systemic fungal infections have increased considerably in recent decades due to the large number of AIDS patients, the large number of transplants and chronic conditions such as cancer, prolonged therapy promotes the selection of resistant pathogen with immunosuppressant and corticosteroid agents. Also prolonged exposure azole antifungals to make them strong candidates for patients resistance. In the present study we evaluated the antifungal activity of Ruthenium-pyrocatechol complex (RPC) against a clinical isolate of Candida tropicalis resistant to fluconazole. The methodology for susceptibility testing was in accordance with the M27-A3 document of there National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS, 2008). Splenocytes from Balb/c mice were obtained aseptically to evaluate the cytotoxicity of the compound to mammalian cells. Oxidative stress caused by the compound was assessed by reaction to thiobarbituric acid (TBARS) and fluorescence assays with the probe diclorodihidrofluoresceína diacetate (DCFH2DA). The Calcofluor White was used to evaluate the integrity of the cell wall. The ultrastructural analysis was performed by scanning and transmission electron microscopy. The results for the antifungal activity tests were analyzed using ANOVA and pos-test Dunnett test statistic. The results for the tests of antifungal activity of the RPC showed a 50% inhibitory concentration (IC50) of 20.3 μM while in splenocytes the 50% effective concentration was 325 μM showing a selectivity index of 16. The compound also showed that a high pro-oxidant effect when evaluated levels of oxidative stress by TBARS and through DCFH2DA staining. When yeast cells were treated for 24 h with this probe, in scanning microscopy we observed the development of pseudohyphae 9 μM, the formation of cracks on their fungal walls and in these cell aggregation with 18 μM furthermore found a remarkable reduction in the number of cells, and cell debris with 38 μM. In transmission microscopy vesicular structures observed in the periplasmic space associated with electrondense granules, which were also seen associated with the cell wall, when there cells were treated for 3 h with 40 μM. In the treatment for 24h with 60 μM observed that the grain structure in the clusters in periplasmic, a large amount of these structures in the cytoplasmic space and associated with the cell wall, moreover, we also observe membrane portions associated with these structures in the extracellular space. In conclusion, the antifungal activity and the selectivity index RPC against a resistant strain is pretty interesting because of its possible applications in the discovery of new antifungal agents.

A infecção pelo Papilomavírus Humano (HPV) é a principal responsável pelo desenvolvimento de lesões intraepiteliais e, potencialmente, do câncer cervical (CC). A presença de fatores como inflamação e outros agentes infecciosos contribuem para a instalação e persistência do vírus. A inclusão da pesquisa do HPV e de outros agentes infecciosos relacionados junto a programas de rastreamento do CC ainda é controversa. Além disso, sabe-se que o processo inflamatório e as lesões celulares decorrentes da presença de HPV e seus cofatores provocam alterações na expressão de diversas proteínas, entre elas a S100A4, que poderia funcionar como biomarcador de exposição. Desta forma, foram analisadas amostras de esfregaços cervicais para investigação da relação do diagnóstico citológico com a presença de agentes infecciosos, além do padrão de expressão da proteína S100A4. Nossos resultados demonstraram que o aparecimento de lesões ou atipias citológicas apresentou associação com a presença de HPV, tanto na infecção simples como na infecção por múltiplos genótipos de alto risco oncogênico, sugerindo a pesquisa molecular do HPV complementar à citologia. A presença de infecção latente pelo HPV também foi observada, a qual deve ser acompanhada com exames citológicos periódicos. A infecção por Chlamydia trachomatis desempenha importante papel como cofator para o desenvolvimento do CC e foi prevalente na população estudada, demonstrando associação com a presença de diferentes genótipos de HPV. Tanto nas pacientes sintomáticas como nas assintomáticas houve a detecção de leveduras do gênero Candida, sendo que a mais prevalente foi a C. albicans apresentando-se sensível à Anidulafungina e Anfotericina B, na maioria dos casos, e resistente ao Fluconazol. Com relação à expressão da proteína S100A4, houve associação com as alterações citológicas características do HPV, nas quais houve redução de sua expressão à medida que aumentou o grau da lesão. No entanto, também observamos que há expressão fisiológica da proteína S100A4 no epitélio escamoso estratificado da ectocérvice que varia de acordo com o grau de maturação celular e a presença de alterações citológicas inflamatórias, onde foi demonstrado aumento da sua expressão. Portanto, a avaliação da expressão da proteína S100A4 pode auxiliar no diagnóstico precoce do câncer de colo do útero nas lesões intraepiteliais cervicais positivas para HPV. Analisando-se globalmente, estes resultados sugerem a inclusão da pesquisa molecular de HPV e C. trachomatis, bem como a identificação de leveduras do gênero Candida complementares à citologia esfoliativa junto a programas de rastreamento. Além disso, a proteína S100A4, mostrou-se promissora como biomarcador dos efeitos celulares dos fatores associados. Observa-se que a associação de diferentes metodologias permite a detecção precoce de lesões e, consequentemente, contribuem para a redução da incidência do CC. / Human papillomavirus (HPV) infection is the main responsible for the development of intraepithelial lesions and potentially cervical cancer (CC). The presence of factors such as inflammation and other infectious agents contribute to the onset and persistence of the virus. The inclusion of HPV research and other infectious agents associated in the CC screening programs is still controversial. In addition, it is known that inflammation and cell injury caused by the presence of HPV and their cofactors cause changes in gene expression and function of several proteins, including the S100A4 which could function as a biomarker of exposure. Thereby, samples of cervical specimens were analyzed to investigate the relationship of cytological diagnosis in the presence of infectious agents, other than the standard expression of S100A4 protein. Our results demonstrated that the development of lesions or cytological atypia was associated with the presence of HPV in either simple infection or infection by multiple genotypes of high oncogenic risk, indicating the importance of molecular HPV analysis complementary to cytology. The presence of latent infection was also observed and must be monitored with periodic cytological examinations. The Chlamydia trachomatis infection plays an important role as a cofactor for the development of CC and was prevalent in the population studied, demonstrating association with the presence of different HPV genotypes. For both symptomatic and asymptomatic patients there was a yeast detection of Candida, and the most prevalent was the Candida albicans presenting sensitive to Anidulafungin and Amphotericin B, in most cases, and resistant Fluconazole. Regarding the S100A4 protein expression, there was association with abnormal cytological HPV characteristics where a reduction of expression could be observed and the degree of injury increased. However, we also observed that there are physiological expression of S100A4 protein in the stratified squamous epithelium of the ectocervix and this varies according to the degree of cell maturation and the presence of inflammatory cell alterations, increased expression where demonstrated. Therefore, the evaluation of the expression of S100A4 protein may assist in the early diagnosis of cervical cancer in cervical intraepithelial lesions positive for HPV. Overall, these results suggest the inclusion of molecular research of HPV and C. trachomatis, and the identification of yeasts Candida complementary to exfoliative cytology in screening programs. In addition, the S100A4 protein has shown to be promising as a biomarker for cellular effects of associated factors. It was observed that the association of different methodologies allows early detection of lesions and therefore contribute to reducing the incidence of CC.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-02-15Bitstream added on 2014-06-13T21:07:02Z : No. of bitstreams: 1 campanha_nh_dr_arafo.pdf: 977237 bytes, checksum: 5b32a545cb85496214f5511a317955fa (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A irradiação com microondas tem sido recomendada para a desinfecção de próteses odontológicas de resinas acrílicas devido ao seu poder inibitório sobre os microrganismos. Entretanto, as alterações celulares provocadas pela irradiação e que levam à inativação dos microrganismos presentes nas próteses não estão esclarecidas. O objetivo do presente estudo foi investigar os efeitos das microondas sobre células de Candida albicans, por meio de parâmetros de contagem celular e de liberação de substâncias intracelulares. Foram obtidas culturas de C. albicans de 24 horas em Tryptic Soy Broth (TSB) a partir de cepas padrão (ATCC 10231). As células foram centrifugadas, lavadas e ressuspensas em 400 mL de água destilada gelada na concentração de 108 cél/mL. Essa suspensão foi dividida em experimental e controle. A suspensão experimental (200 mL) foi colocada em um béquer de 500 mL contendo uma prótese total acrílica estéril e irradiada por microondas durante 6 min a 650 W. A suspensão controle não foi submetida à irradiação. Para ambas as suspensões, foram realizadas diluições seriadas para contagem celular em câmara de Neubauer, utilizando a entrada do corante azul de Metileno, como indicativo de alteração de permeabilidade de membrana. Alíquotas diluídas também foram semeadas em Agar Sabouraud Dextrose (ASD). Alíquotas não diluídas foram analisadas quanto à densidade óptica (DO) a 550 nm. Para a quantificação de substâncias liberadas, as células foram eliminadas das suspensões por centrifugação e filtragem e a solução resultante foi liofilizada. O conteúdo liofilizado foi ressuspenso em 5 mL de água destilada e analisado pelos seguintes métodos: Microprote e Sensiprote, para quantificação de proteínas; potenciometria, para quantificação de Na+ e K+; Liquiform,... / Microwaves have been used in the disinfection of acrylic resin dentures as a result of its inhibitory effect on microorganisms. However, much controversy exists concerning the lethal effects of microwave radiation on microorganisms. Evaluating the presence of significant differences on cell counts and substances released between irradiated and non-irradiated Candida albicans cell suspensions was the aim of this study. A stock C. albicans strain (ATCC 10231) was cultured in 600 mL of Tryptic Soy Broth (TSB) at 37ºC on a rotating shaker. The cells were centrifuged, water-washed and resuspended in distilled cold water to a final concentration of 108 cell/mL. The cell suspensions were equally divided in a 200 mL experimental suspension, which was placed in a 500 mL beaker with an acrylic resin denture inside and irradiated for 6 min at 650 W. The control suspension (200 mL) was not submitted to irradiation. Aliquots of both suspensions were serially diluted and counting in a Neubauer chamber using the uptake of Methylene blue dye as indicative of alterations in membrane cell permeability. Serially diluted aliquots were spread on Agar Sabouraud dextrose (ASD) plates for viability assay. Non-diluted aliquots were spectrophotometrically measured at 550 nm. To quantify the intracellular released substances, the cells were separated from the suspensions by centrifugation followed by filtering, and the resulting solution was freeze-dried. This liophylized was resuspended in 5 mL of cold water and submitted to optical density (OD) analyses of protein contents by the Microprote and Sensiprote systems; potenciometry analysis of Na+ and K+ contents; Ca++ contents analysis by Liquiform; and nucleic acids contents analysis by OD measurements at 260 nm...(Complete abstract, click electronic access below)