Pas de résumé / Chronic mucocutaneous candidiasis (CMC) is seen in human patients with a variety of conditions and refers to recurrent or persistent infection of the skin, nails and/or mucosae by commensal Candida species. Its pathogenesis had long remained elusive, until human genetic studies of rare patients with inherited forms of idiopathic CMC (whether isolated or syndromic), incriminated impaired interleukin (IL)-17A/F immunity. The first genetic etiologies of idiopathic isolated CMC, autosomal dominant (AD) IL-17F and autosomal recessive (AR) IL-17 receptor A (IL-17RA) deficiencies, were reported in 2011 in a multiplex and in a sporadic case, respectively. Using Whole Exome Sequencing (WES), we identified 26 novel patients bearing 15 different homozygous mutations in the IL17RA gene. The mutations identified are either nonsense; missense; frameshift deletions; frameshift insertions; or non-coding essential splice site mutations. Interestingly, 2 alleles encode for surface expressed receptors, whereas all the other tested alleles are not detected at the surface of the patient’s cells (fibroblasts or leucocytes). IL-17RA deficiency is a fully penetrant AR disease, with early onset symptoms, usually within the first year of life. CMC is always present. In addition, 17 patients present with staphylococcal skin infections, and some patients with pyogenic infections of the respiratory tract, including pneumonia. Interestingly, tuberculosis occurred in two unrelated BCG-vaccinated patients. The response to IL-17A and IL-17F homo- and heterodimers is abrogated in fibroblasts, as well as the response to IL-17E/IL-25 in T cells. Human IL-17RA is thus essential for mucocutaneous immunity against Candida and Staphylococcus, but otherwise largely redundant. AR IL-17RA deficiency should be considered in children or adults with CMC, cutaneous staphylococcal disease, or both. In a separate project, I investigated a female child patient born to consanguineous parents who suffered from CMC, recurrent viral infections, disseminated BCG disease and biliary cryptosporidiosis, suggestive of combined immunodeficiency, and who is homozygous for a mutation in REL, encoding the NF-kB protein c-REL. Sanger sequencing confirmed that the patient is homozygous and that both parents are heterozygous for the mutation, consistent with an AR inheritance. The candidate mutation is a nucleotide substitution localized in an acceptor splice site; is not reported in available public databases; and is predicted to be damaging in silico. The mutation disrupts mRNA splicing and is loss-of expression. The patient shows normal counts of lymphoid subsets, with the exception of diminished frequencies of memory CD4+ T, Th2, Th1*, and memory B cells. The patient’s T cells fail to proliferate in response to recall antigens. Naïve CD4+ T cells produce little IL-2 and respond poorly to polyclonal stimulation, a phenotype reverted by exogenous IL-2. Memory CD4+ T cells also produce little amounts of IL-2, and strongly diminished amounts of key effector cytokines (IFN-γ, IL-4, IL-17A and IL-21). The patient exhibited with no detectable specific antibody response following vaccination. Survival and therefore proliferation of naïve B cells are compromised leading to poor generation of plasma cell, and immunoglobulins secretion. The patient shows normal counts of myeloid cells, and frequencies of dendritic cell subsets. IL-12 production is abolished in whole blood in response to BCG+IFN-γ and B-EBV cells in response to mitogens. Although further investigation is needed to fully characterize the patient’s phenotype, these results strongly suggest that the patient suffers from AR complete c-REL deficiency.

Enquanto lesões cutâneas do líquen plano (LP) são autolimitantes, suas manifestações orais (LPO) têm comportamento crônico, raramente apresentam remissão espontânea, e podem sofrer transformação maligna, embora subsista controvérsia sobre esta ultima questão. A este respeito, alguns autores têm dado ênfase ao envolvimento da Candida spp. na malignização LPO devido à capacidade deste fungo em produzir enzima carcinogênica N-nitrobenzilmetilamina e sua relativa freqüência em lesões LPO. Adicionalmente, foi investigada a xerostomia que, além de ocorrer com maior freqüência em indivíduos da faixa etária em que o LPO é mais prevalente, é considerado fator predisponente à candidose. Portanto, a correlação entre xerostomia e colonização por Candida spp. apresente relevância de ser investigada. O presente estudo objetivou comparar a prevalência de Candida spp. e xerostomia em 37 pacientes com lesões LPO (grupo LPO) com a de 26 pacientes com lesões inflamatórias não-LPO (grupo não-LPO) e com a de 28 indivíduos sem lesões orais (grupo controle-saudável). Pacientes LPO foram predominantemente indivíduos do sexo feminino com média idade de 50 anos. Presença de xerostomia foi evidenciada em 35,1% dos pacientes do grupo LPO, em 38,5% do grupo não-LPO e em 25% do grupo controle-saudável, não havendo diferença estatisticamente significante entre os três grupos (p > 0,05). Nos três grupos, medicação sistêmica e presença de distúrbios emocionais (ansiedade e depressão) não foram estatisticamente significante associados como fatores ao desenvolvimento de xerostomia (p > 0,05). A presença de xerostomia não foi fator estatisticamente significante de predisposição à colonização por Candida spp. nos três grupos. Colonização por Candida spp foi maior no grupo controle-saudável (53,5%) que nos outros grupos (29,7% no LPO e 26,9% no não-LPO), porém, não houve diferença estatisticamente significante (p > 0,05). Formas clínicas do LPO não foram fatores de predisposição à colonização por Candida spp. Espécie mais freqüentemente isolada nos três grupos foi Candida albicans. Formas não-albicans, especificamente a C. dubliniensis, foram encontradas em três indivíduos do grupo controle-saudável. / While cutaneous lesions of lichen planus (LP) are self-limiting, its counterpart oral manifestations (OLP) are chronic, hardly ever undergo spontaneous remission, and may suffer malignant transformation, though this latter issue still bears some controversy. In this respect, some authors have believed that Candida spp. might play a part in the OLP process of malignant transformation since this fungi has the ability to produce carcinogenic N-nitrobenzilmetilamina enzyme and has been found in OLP lesions. Apart that, xerostomia is considered a predisposing factor to candidosis and occurs more frequently in individuals at an aging in which OLP is more prevalent. Therefore, the correlation between xerostomia and candidosis may be worth it investigating. This study aimed at comparing the prevalence of Candida spp. and xerostomia in 37 patients with OLP lesions (OLP group) with that of 26 patients with inflammatory non-OLP disease (non-OLP group) and with that of 28 subjects without oral mucosal lesions (healthy-control group). OLP patients occurred predominantly in females at a mean age of 50 years. Presence of xerostomia was seen in 35.1% of patients in the OLP group, in 38.5% of the non-OLP and in 25% of the healthy-control group with no statistically significant difference among the three groups (p > 0.05). In all the groups, systemic medication and the presence of psychological disorder (anxiety and depression) were not statistically significant factors associated with the development of xerostomia. The presence of xerostomia was not a statistically significant factor at predisposing the colonization by Candida spp. in the three groups (p > 0.05). Colonization by Candida species was higher in healthy-control group (53.5%) than in other groups (29.7% in OLP and 26.9% in non- LPO), but the difference among them did not reach a statistical significance (p > 0. 05). Clinical forms of OLP were not predisposing factors to the colonization by Candida spp. The most frequently isolated species in the three groups were Candida albicans. Non-albicans forms, specifically C. dubliniensis, was found in three patients in the healthy-control group.

La candidose oropharyngée (COP) constitue l’infection fongique opportuniste la plus fréquente chez les patients infectés au VIH-1. Malgré la profonde immunosuppression causée par le VIH-1, l’infection à Candida albicans demeure confinée au niveau de la muqueuse buccale sans dissémination aux organes profonds. La souris transgénique (Tg) CD4C/HIVMut exprimant le génome tronqué du VIH-1 présente, suite à l’inoculation orale de C. albicans, une COP chronique reproduisant fidèlement l’infection chez les patients séropositifs. Cette souris Tg a donc été utilisée afin de déterminer si les macrophages contribuent au confinement de C. albicans à la muqueuse buccale. Cette étude a permis de démontrer que i) les macrophages sont recrutés aux muqueuses buccale et gastrique en réponse au champignon malgré l’expression du transgène, ii) les macrophages de ces souris Tg présentent une polarisation vers un phénotype d’activation alternative et iii) la production de monoxyde d’azote par les macrophages des souris Tg n’est pas requise pour limiter la prolifération de Candida à la muqueuse buccale et pour restreindre sa dissémination aux organes profonds. Les macrophages ne semblent donc pas directement responsables de l’établissement de l’infection chronique à Candida chez la souris Tg CD4C/HIVMut. / Oropharyngeal candidiasis (OPC) is the most frequent opportunistic fungal infection among HIV-infected patients. Despite the profound immunosuppression caused by HIV-1, Candida albicans infection is limited to the oral epithelium and rarely disseminates to deep organs. The CD4C/HIVMut transgenic (Tg) mice, which expresses the truncated HIV-1 genome, developed a chronic OPC after oral inoculation with C. albicans that closely reproduces infection in seropositive patients. Here, we used this Tg mouse to investigate the contribution of macrophages in limiting candidiasis to the oral mucosa. This study shows that i) macrophages are recruited to the oral and gastric mucosa in response to C. albicans despite transgene expression, ii) the macrophages of this Tg mouse exhibited a polarization toward an alternatively activated phenotype and iii) nitric oxide production by these macrophages is dispensable for limiting chronic oral carriage and for preventing systemic dissemination of the fungi in these Tg mice. Overall, these result indicate that macrophage do not directly determine the susceptibility to chronic carriage of Candida in these CD4C/HIVMut Tg mice.

Mon projet de thèse a consisté en l'identification et la caractérisation moléculaire et immunologique de patients présentant une susceptibilité accrue aux infections fongiques par Candida sp. dans le syndrome Mendélien de candidose cutanéo-muqueuse chronique (CCMC).La CCMC est caractérisée par des infections persistantes ou récurrentes de la peau, des ongles et des muqueuses par les champignons Candida, principalement C. albicans. Elle est fréquemment associée à d'autres infections opportunistes dans certaines immunodéficiences primaires ou acquises, ou bien elle peut être associée à un tableau auto-immun. La CCMC peut finalement être isolée (CCMCi) sans autre tableau clinique sévère: la plupart des cas rapportés sont sporadiques, mais il existe également des cas familiaux avec une hérédité mendélienne autosomique principalement dominante (AD) ou plus rarement récessive (AR).Basés sur les données de la littérature, qui démontrent un rôle majeur de l'immunité dépendante des IL-17s dans la résistance aux infections mucocutanées vis-à-vis de C. albicans et nos résultats récents, qui démontrent un défaut de cette immunité dans certaines immunodéficiences primaires associées à une CCMC [les syndromes AD-HIES et AR APS-1, ainsi que chez les patients déficients en CARD9, nous avons émis l'hypothèse que parmi les patients atteints de CCMCi, certains pourraient présenter un défaut génétique affectant spécifiquement l'immunité IL-17-dépendante. Au début de ma thèse, j'ai participé à l'identification des deux premières étiologies génétiques de la CCMCi : le défaut autosomique récessif (AR) complet en IL-17RA et autosomique dominant (AD) en IL-17F. Plus récemment, j'ai identifié la troisième et la plus fréquente étiologie génétique de la CCMC par l'identification de mutations gain de fonction dans le gène STAT1 suite à une approche explorant l'ensemble du génome (séquençage de l'ensemble des exons). Ces mutations engendrent une " hyper-réponse " aux interférons de type I et II et à l'IL-27 qui inhibent la différentiation des lymphocytes T sécréteurs d'IL-17, impliqués dans l'immunité mucocutanée vis-à-vis de C. albicans chez l'homme.En conclusion, nous avons identifié, en 2011, des trois premières étiologies génétiques de la CCMCi, avec les défauts AR en IL-17RA, AD en IL-17F et des mutations gain-de-fonction de STAT1, toutes associées à un défaut de l'immunité dépendante de l'IL-17. Des mutations gain-de-fonction de STAT1 représentent à ce jour la cause génétique la plus fréquente de la CCMCi avec au total 94 patients rapportés dans la littérature depuis 2011. Nous avons ainsi démontré que la CCMCi est une immunodéficience primaire, associée à un défaut de l'immunité réalisée par les IL-17s. Ces travaux ont des implications majeures dans le domaine immunologique avec la description et la caractérisation des mécanismes biologiques impliqués dans l'immunité protectrice spécifique de C. albicans et une meilleure compréhension des mécanismes physiopathologiques associés à une susceptibilité accrue aux infections fongiques, dans des conditions naturelles d'infection ; et dans le domaine médical, avec la possibilité de diagnostics moléculaires, un conseil génétique en cas de diagnostic positif, une meilleure prise en charge des patients.

Thèse (M.Sc.)--Université Laval, 2004. / Bibliogr.: f. 105-110. Publié aussi en version électronique.

Enquanto lesões cutâneas do líquen plano (LP) são autolimitantes, suas manifestações orais (LPO) têm comportamento crônico, raramente apresentam remissão espontânea, e podem sofrer transformação maligna, embora subsista controvérsia sobre esta ultima questão. A este respeito, alguns autores têm dado ênfase ao envolvimento da Candida spp. na malignização LPO devido à capacidade deste fungo em produzir enzima carcinogênica N-nitrobenzilmetilamina e sua relativa freqüência em lesões LPO. Adicionalmente, foi investigada a xerostomia que, além de ocorrer com maior freqüência em indivíduos da faixa etária em que o LPO é mais prevalente, é considerado fator predisponente à candidose. Portanto, a correlação entre xerostomia e colonização por Candida spp. apresente relevância de ser investigada. O presente estudo objetivou comparar a prevalência de Candida spp. e xerostomia em 37 pacientes com lesões LPO (grupo LPO) com a de 26 pacientes com lesões inflamatórias não-LPO (grupo não-LPO) e com a de 28 indivíduos sem lesões orais (grupo controle-saudável). Pacientes LPO foram predominantemente indivíduos do sexo feminino com média idade de 50 anos. Presença de xerostomia foi evidenciada em 35,1% dos pacientes do grupo LPO, em 38,5% do grupo não-LPO e em 25% do grupo controle-saudável, não havendo diferença estatisticamente significante entre os três grupos (p > 0,05). Nos três grupos, medicação sistêmica e presença de distúrbios emocionais (ansiedade e depressão) não foram estatisticamente significante associados como fatores ao desenvolvimento de xerostomia (p > 0,05). A presença de xerostomia não foi fator estatisticamente significante de predisposição à colonização por Candida spp. nos três grupos. Colonização por Candida spp foi maior no grupo controle-saudável (53,5%) que nos outros grupos (29,7% no LPO e 26,9% no não-LPO), porém, não houve diferença estatisticamente significante (p > 0,05). Formas clínicas do LPO não foram fatores de predisposição à colonização por Candida spp. Espécie mais freqüentemente isolada nos três grupos foi Candida albicans. Formas não-albicans, especificamente a C. dubliniensis, foram encontradas em três indivíduos do grupo controle-saudável. / While cutaneous lesions of lichen planus (LP) are self-limiting, its counterpart oral manifestations (OLP) are chronic, hardly ever undergo spontaneous remission, and may suffer malignant transformation, though this latter issue still bears some controversy. In this respect, some authors have believed that Candida spp. might play a part in the OLP process of malignant transformation since this fungi has the ability to produce carcinogenic N-nitrobenzilmetilamina enzyme and has been found in OLP lesions. Apart that, xerostomia is considered a predisposing factor to candidosis and occurs more frequently in individuals at an aging in which OLP is more prevalent. Therefore, the correlation between xerostomia and candidosis may be worth it investigating. This study aimed at comparing the prevalence of Candida spp. and xerostomia in 37 patients with OLP lesions (OLP group) with that of 26 patients with inflammatory non-OLP disease (non-OLP group) and with that of 28 subjects without oral mucosal lesions (healthy-control group). OLP patients occurred predominantly in females at a mean age of 50 years. Presence of xerostomia was seen in 35.1% of patients in the OLP group, in 38.5% of the non-OLP and in 25% of the healthy-control group with no statistically significant difference among the three groups (p > 0.05). In all the groups, systemic medication and the presence of psychological disorder (anxiety and depression) were not statistically significant factors associated with the development of xerostomia. The presence of xerostomia was not a statistically significant factor at predisposing the colonization by Candida spp. in the three groups (p > 0.05). Colonization by Candida species was higher in healthy-control group (53.5%) than in other groups (29.7% in OLP and 26.9% in non- LPO), but the difference among them did not reach a statistical significance (p > 0. 05). Clinical forms of OLP were not predisposing factors to the colonization by Candida spp. The most frequently isolated species in the three groups were Candida albicans. Non-albicans forms, specifically C. dubliniensis, was found in three patients in the healthy-control group.

Les patients de réanimation sont des patients à très haut risque de survenue de candidoses invasives associées à une importante mortalité. Les espèces du genre Candida sont retrouvées en troisième position des agents infectieux les plus fréquemment isolés au cours des septicémies. Le diagnostic reste difficile en raison d’une clinique aspécifique et d’une sensibilité médiocre des hémocultures. Des scores prédictifs, des biomarqueurs ou encore des PCR ont été développés de manière à améliorer le diagnostic et l’identification des patients à risque. Dans ce travail, la première partie présente les données de l’évolution de l’écologie fongique, des candidoses invasives, des prescriptions d’antifongiques et des sensibilités aux antifongiques sur une période de dix ans dans un service de réanimation. Au cours de cette période, les changements observés dans la prescription d’antifongiques n’ont pas entrainé de modifications significatives de l’écologie fongique ni d’apparition de résistances. Dans une deuxième partie, nous présentons les résultats d’une étude prospective observationnelle bicentrique réalisée chez 435 patients non neutropéniques de réanimation. L’analyse de plusieurs variables (facteurs de risque de candidose invasive, colonisation à Candida sp., dosages d’antigène mannane et d’anticorps anti-mannane) a permis l’élaboration d’un score prédictif de survenue de candidose invasive. Finalement, la dernière partie du travail présente la mise au point de PCR Candida en temps réel dans le sang ainsi qu’une évaluation de la technologie de digital PCR. / Patients in intensive care units (ICU) are at very high risk of invasive candidiasis associated with high mortality rate. Candida species are the third cause of septicemia. Clinical signs lack of specificity and blood cultures lack of sensitivity, and therefore the diagnosis remains a challenge. In order to improve the identification of patients with invasive candidiasis, predictive rules, biomarkers and PCR have been developed. The first part of this work describes the evolution over a ten years period in one ICU in Candida species distribution, susceptibility to antifungal drugs and consumption of antifungal agents. Changes in antifungal drug consumption were observed but they were not associated with significant changes in fungal ecology or with the emergence of resistant species. In a second part, we present a prospective, observational and bicentric study performed in 435 non-neutropenic patients in ICU. Several variables (risk factors of invasive candidiasis, Candida colonization, mannan antigen and anti-mannan antibodies) were analyzed and a predictive score of invasive candidiasis has been developed. Finally, the last part presents the development of Candida real-time PCR in blood, as well as the evaluation of a digital PCR.

La candidose oro-pharyngée (COP) est l’infection opportuniste la plus répandue chez les patients infectés au VIH-1. Un modèle de COP chez la souris transgénique (Tg) exprimant une partie du génome du VIH-1 (CD4C/HIVMutA) est maintenant disponible. Grâce à ce modèle, il est possible d’étudier les perturbations quantitatives et fonctionnelles des macrophages exprimant les gènes nef, rev et env du VIH-1 dans le contexte d’une COP. Cette étude démontre que la présence du transgène n’influence pas le pourcentage des macrophages dans la muqueuse buccale et le petit intestin, malgré le fait que la charge buccale de C. albicans soit significativement plus élevée chez les souris Tg. Cependant, l’expression du transgène cause une diminution de la production de H2O2 par les macrophages, ainsi que l’augmentation de la production de la cytokine proinflammatoire IL-6 et de la chimiokine MCP-1. / Oro-pharyngeal candidiasis (OPC) is the most common opportunistic infection in HIV-1 infected patients. An OPC model using transgenic mice (CD4C/HIVMutA) expressing selected genes of the HIV-1 genome is now available. Using this model, it is now possible to study potential quantitative and functional disturbances in macrophages expressing the nef, rev and env genes of HIV-1 in the context of OPC. This study shows that transgene expression does not affect quantitative percentage values of macrophages in the oral mucosa and the small intestine, although burdens of C. albicans loads are increased in Tg mice. Transgene expression does induce diminished H2O2 production in macrophages, while increasing production of the proinflammatory cytokine IL-6 and the chemokine MCP-1.

Le cancer de la cavité orale représente un problème important de santé publique en France où les taux d'incidence sont parmi les plus élevés au monde. Bien qu'une détection précoce soit possible, ces tumeurs sont souvent diagnostiquées à un stade avancé et sont ainsi responsables de plus de 1500 décès par an. L'objectif général est de clarifier le rôle et l'impact des différents facteurs de risque dans la survenue des cancers de la cavité orale en France, notamment d'examiner de façon détaillée le rôle du tabac et de l'alcool par localisation anatomique précise, et d'étudier les associations avec d'autres facteurs de risque potentiels (indice de masse corporelle, antécédents médicaux, antécédents familiaux de cancer, consommations de café et de thé). Ce travail s'appuie sur les données d'une large étude cas-témoins en population générale, l'étude ICARE. Il porte sur un sous-ensemble de ces sujets (772 cas de cancer de la cavité orale et 3555 témoins). Les résultats montrent que le tabac augmente le risque de cancer de la cavité orale même pour des quantités et/ou durées faibles, alors que l'augmentation de risque liée à l'alcool n'est observée que pour de fortes consommations. L'effet conjoint du tabac et de l'alcool est plus que multiplicatif. Les associations avec les consommations d'alcool et de tabac varient selon la sous localisation : les associations les plus fortes sont observées pour le plancher buccal, les plus faibles pour les gencives. L'étude des autres facteurs de risque a mis en évidence : une association inverse entre risque de cancer de la cavité orale et indice de masse corporelle, avec un risque plus faible chez les personnes en surpoids ou obèses ; un risque augmenté lorsqu'un parent du 1er degré a été atteint d'un cancer des voies aéro-digestives supérieures ; un risque élevé chez les personnes présentant des antécédents de candidose buccale ; un risque diminué chez les consommateurs de thé ou de café. A partir de ces premiers résultats, il est envisagé de construire un score prédictif de cancer de la cavité orale permettant d'identifier les sujets à risque élevé sur lesquels cibler préférentiellement les actions de dépistage.

La candidose oro-pharyngée (COP) est l’infection opportuniste la plus répandue chez les patients infectés au VIH-1. Un modèle de COP chez la souris transgénique (Tg) exprimant une partie du génome du VIH-1 (CD4C/HIVMutA) est maintenant disponible. Grâce à ce modèle, il est possible d’étudier les perturbations quantitatives et fonctionnelles des macrophages exprimant les gènes nef, rev et env du VIH-1 dans le contexte d’une COP. Cette étude démontre que la présence du transgène n’influence pas le pourcentage des macrophages dans la muqueuse buccale et le petit intestin, malgré le fait que la charge buccale de C. albicans soit significativement plus élevée chez les souris Tg. Cependant, l’expression du transgène cause une diminution de la production de H2O2 par les macrophages, ainsi que l’augmentation de la production de la cytokine proinflammatoire IL-6 et de la chimiokine MCP-1. / Oro-pharyngeal candidiasis (OPC) is the most common opportunistic infection in HIV-1 infected patients. An OPC model using transgenic mice (CD4C/HIVMutA) expressing selected genes of the HIV-1 genome is now available. Using this model, it is now possible to study potential quantitative and functional disturbances in macrophages expressing the nef, rev and env genes of HIV-1 in the context of OPC. This study shows that transgene expression does not affect quantitative percentage values of macrophages in the oral mucosa and the small intestine, although burdens of C. albicans loads are increased in Tg mice. Transgene expression does induce diminished H2O2 production in macrophages, while increasing production of the proinflammatory cytokine IL-6 and the chemokine MCP-1.