A influenza equina (EI) é uma enfermidade respiratória viral aguda que acomete equídeos de todas as idades. A doença é causada pelo vírus da influenza equina (EIV do inglês Equine Influenza Virus), que podem ser do subtipo viral H3N8 (antigo Equi-2), mundialmente distribuído, e o H7N7 (antigo Equi-1), considerado extinto desde 1980. Os EIVs pertencem à família Orthomyxoviridae, gênero Influenza A, possuem genoma RNA fita simples segmentado de senso negativo e são envelopados. A EI tem alta morbidade e baixa mortalidade leva a grandes perdas econômicas no ramo equestre. Os animais acometidos ficam impedidos de serem transportados ou de participarem de eventos equestres no Brasil. A rápida e fácil disseminação do EIV é bastante característico em surtos de EI. Surtos de EI foram descritos em 2012 em diversos países, incluindo o Brasil. Em 2015, um surto de EIV ocorreu em um Hospital Veterinário na cidade de São Paulo-SP. Os objetivos do presente trabalho foram: a) obter isolados do vírus da influenza equina de surtos recentes do estado de São Paulo, Brasil; b) realizar o sequenciamento dos EIVs isolados; c) promover a análise filogenética e evolutiva desses EIVs. Foram isolados 12 EIVs de um surto de EI em um hospital veterinário na cidade de São Paulo em 2015. Promoveu-se o sequenciamento dos oito genes virais dos isolados de 2015 e de uma estirpe de EIV de um surto brasileiro de 2012, e da hemaglutinina de outras duas estirpes do mesmo surto de 2012. Os vírus do surto de 2012 foram cedidos pelo Laboratório de Raiva e Encefalites Virais do Instituto Biológico de São Paulo para as análises. O sequenciamento dos genes HA e NA indicaram que os EIVs de 2012 e 2015 brasileiros são do subtipo H3N8 e pertencem à sublinhagem Flórida 1 e tiveram maiores identidades com os vírus de 2012 da América do Sul, Estados Unidos e Dubai de 2012. Os vírus de 2015 formaram um clado separado dos demais EIV Flórida 1, tanto na análise filogenética quanto na análise de relógio molecular. As análises de mutações de nucleotídeos e aminoácidos, associados à análise de perfil de hidrofobicidade sugerem mudanças em estruturas antigênicas que poderiam acarretar no maior distanciamento em relação à estirpe vacinal A/equine/South Africa/4/03. / The equine influenza (EI) is a viral acute respiratory disease that can affect equines of any age. The disease is caused by the equine influenza virus (EIV) and has two different subtypes H3N8 (formerly Equi-2) that occurs worldwide and H7N7 (formerly Equi-1), considered extinct since 1980. EIVs belong to the Orthomyxoviridae family, Influenza A genus, are enveloped and has negative segmented single strand RNA genome. EI causes high morbidity and low mortality and drives to high economic losses in equestrian industry. In Brazil, the transport and participation in equestrian events are not allowed when horses have EIV. The quickly spread pattern is easily seen in EIV outbreaks. EI outbreaks occurred in 2012 in several countries, including Brazil. In 2015, an outbreak occurred in a Veterinarian Hospital in São Paulo-SP. The objectives of the present study were: a) to obtain isolates of equine influenza virus from recent outbreaks in the State of São Paulo, Brazil; b) to promote the sequencing of these EIVs; c) to perform the phylogenetic and evolutive analysis of these EIVs. Twelve EIVs were isolated from an outbreak in a veterinarian hospital in the State of São Paulo in 2015. The eight viral genes were sequenced from EIVs of 2015 and from one EIV of a Brazilian outbreak, 2012. Also, the HA gene from two other EIVs from the same 2012-outbreak were sequenced. The viruses from the 2012-outbreak were from the Laboratory of Rabies and Viral Encephalitis, Instituto Biológico de São Paulo. Sequencing on HA and NA genes indicates that the Brazilian 2012 and 2015 EIVs are H3N8 subtype, belong to the Florida 1 sublineage and were more identical to the 2012 EIVs from South America, United States and Dubai. In the phylogenetic tree and the molecular clock the EIVs from 2015 grouped in a cluster that was separeted from other Florida 1 EIVs. The nucleotide, amino acid and hydrophobicity analysis suggest changes in antigenic structures that could lead to differences from the vaccine strain A/equine/South Africa/4/03.

Vírus da raiva provenientes de 23 morcegos de espécies hematófagas, frugívoras e insetívoras foram caracterizados geneticamente pelo seqüenciamento completo da região que codifica a nucleoproteína N. A análise filogenética das seqüências, incluindo lyssavirus e isolados de morcegos do Chile e Estados Unidos, mostrou que os diferentes isolados do vírus da raiva foram de modo geral segregados em quatro grupos genéticos distintas: morcegos hematófagos, morcegos insetívoros 1, 2 e 3. Os morcegos insetívoros 1 constituiram-se por isolados de Eptesicus furinalis: BR-EF1, BR-EF2, BREF3, BR-EF-4, BR-EA1 e BR-NL2; os morcegos insetívoros 2 consistiram de isolados de Molosssus spp: BR-MM1, BR-MM2 e BR- MA1 e os morcegos insetívoros 3 isolados de Nictinomops laticaudatus: BR-NL1 e BR-NL3. A homologia de nucleotídeos entre cada grupo de morcegos insetívoros 1, 2 e 3 foi maior que 99%, 97% e 99%, respectivamente. O grupo de morcegos hematófagos foi representado pelos isolados de: 3 morcegos hematófagos Desmodus rotundus (BR-DR1, BR-DR2 e BR-DR3); 5 morcegos frugívoros Artibeus lituratus BR-AL1, BR-AL2, BR-AL3, BR-AL4 e Artibeus planirostris BRAP1; 2 morcegos insetívoros (BR-MR1 e BR-EA2) e 2 de espécies não identificadas (BR-BAT1 e BR-BAT2). Entre as amostras seqüenciadas foram selecionadas cinco (BR-EF1, BR-NL1, BR-AL3, BR-MM1, BR-DR1) e um isolado de cão (BR-C) para os estudos de patogenicidade em camundongos albinos suíços inoculados pela vias intracerebral (IC) e intramuscular (IM). Todas as amostras quando inoculadas em camundongos pela via IC apresentaram-se patogênicas, provocando a morte dos mesmos num período de 4 a 14 dias pós-inoculação. No entanto, 500DLIC50 das mesmas amostras inoculadas pela via IM levaram a uma mortalidade de camundongos de: 60% (BR-DR1); 50% (BR-C, BR-NL); 40% (BR- AL3); 9,5% (BR-MM1); 5,2% (BR-EF10). As mesmas amostras foram utilizadas para a verificação de proteção cruzada, conferida por vacina comercial de uso animal, de camundongos que receberam uma ou duas doses de vacina pela via subcutânea (SC) e desafiados pelas vias IC e IM. Camundongos inoculados com duas doses de vacina foram protegidos quando desafiados pela via IC, com todas as amostras testadas. Quando os camundongos receberam uma dose da mesma vacina houve proteção parcial daqueles desafiados com as amostras de vírus PV e BR-C. Houve proteção de 100% dos camundongos desafiados pela via IM, com exceção daqueles vacinados com uma dose de vacina e desafiados com a amostra PV que apresentaram um índice de 66% de sobreviventes. Os resultados indicam a possibilidade de existir variantes do vírus da raiva espécies específicas circulando em morcegos. Sugerem ainda, que espécies de morcegos hematófagos, frugívoros e insetívoros compartilham o mesmo polimorfismo de vírus. A vacina comercial contra a raiva contendo vírus inativado e de uso veterinário protegeu os camundongos contra o desafio com as diferentes amostras testadas, sugerindo que as vacinas usualmente utilizadas são efetivas no tratamento profilático da raiva transmitida por morcegos, apesar da marcada diferença de neurovirulência dos diferentes isolados quando inoculados em camundongos pela via IM. / Twenty-three rabies viruses isolated from hematophagous, frugivorous and insectivorous bats were characterized genetically by complete sequencing of the region coding the nucleoprotein N. The phylogenetic analysis of the sequences, including the lyssavirus and the bat isolates from Chile and USA revealed that the isolates were segregated into four distinct genetic lineages: those related to the vampire bats and to the insectivorous bats 1, 2 and 3. The isolates related to the insectivorous bats 1 were from the Eptesicus furinalis: BR-EF1, BR- EF2, BREF3, BR-EF-4, BR-EA1 e BR-NL2; those of the insectivorous bats2 included the isolates from Molosssus spp: BR-MM1, BR-MM2 and BR-MA1 and the group 3, by the isolates from the Nictinomops laticaudatus: BR-NL1 and BR-NL3. The homology among each group of the insectivorous bats 1, 2 and 3 were greater than 99%, 97% and 99%, respectively. The lineage related to vampire bats was represented by three isolates from the D. rotundus (BR-DR1, BR-DR2 e BR-DR3); five from the fruit bats Artibeus lituratus (BR-AL1, BR-AL2, BR-AL3, BR-AL4) and Artibeus planirostris (BRAP1); two from insectivorous bats (BR-MR1 and BR-EA2) and two from unidentified species (BR-BAT1 and BR-BAT2). Among the sequenced amples, five bat isolates (BR-EF1, BR-NL1, BR-AL3, BR-MM1, BR- DR1) and one dog isolate (BR-C) were selected for the study of their pathogenicity in Swiss mice, inoculating through intracerebral (IC) and intramuscular (IM) routes. All the isolates, when inoculated via IC, were pathogenic, provoking death in 4 - 14 post inoculation days. However, mice inoculated with 500ICLD50 of the same isolates through IM route were found with different death rates: 60.0% (BR-DR1); 50.0% (BR-C, BR-NL); 40.0% (BR-AL3); 9.5% (BR-MM1) and 5.2% (BR-EF10). The same isolates were used for the assessment of cross protection conferred by a commercial vaccine of veterinary use. The mice were vaccinated subcutaneously, receiving either one or two shots of vaccine, and challenged through IC and IM routes. Mice receiving two shots were protected against all the isolates, when challenged intracerebrally. Mice receiving one shot were found only partially protected against the challenge with the fixed PV strain and BR-C isolate. Mice challenged intramuscularly showed 100.0% of protection, with the exception of those vaccinated with one dose and challenged with PV strain, which were found with 66.0% of survivors. These results indicate the possibility of the existence of rabies virus variants circulating in different species of bat population. The data also suggest that the vampires, frugivorous and insectivorous bats share the same lineage of rabies viruses. The commercial vaccine has protected the mice against the challenge with different rabies virus isolates, suggesting that the vaccines usually employed in the field are effective, although some marked difference in neurovirulence by IM inoculation was found among the isolates tested.

A influenza equina (EI) é uma enfermidade respiratória viral aguda que acomete equídeos de todas as idades. A doença é causada pelo vírus da influenza equina (EIV do inglês Equine Influenza Virus), que podem ser do subtipo viral H3N8 (antigo Equi-2), mundialmente distribuído, e o H7N7 (antigo Equi-1), considerado extinto desde 1980. Os EIVs pertencem à família Orthomyxoviridae, gênero Influenza A, possuem genoma RNA fita simples segmentado de senso negativo e são envelopados. A EI tem alta morbidade e baixa mortalidade leva a grandes perdas econômicas no ramo equestre. Os animais acometidos ficam impedidos de serem transportados ou de participarem de eventos equestres no Brasil. A rápida e fácil disseminação do EIV é bastante característico em surtos de EI. Surtos de EI foram descritos em 2012 em diversos países, incluindo o Brasil. Em 2015, um surto de EIV ocorreu em um Hospital Veterinário na cidade de São Paulo-SP. Os objetivos do presente trabalho foram: a) obter isolados do vírus da influenza equina de surtos recentes do estado de São Paulo, Brasil; b) realizar o sequenciamento dos EIVs isolados; c) promover a análise filogenética e evolutiva desses EIVs. Foram isolados 12 EIVs de um surto de EI em um hospital veterinário na cidade de São Paulo em 2015. Promoveu-se o sequenciamento dos oito genes virais dos isolados de 2015 e de uma estirpe de EIV de um surto brasileiro de 2012, e da hemaglutinina de outras duas estirpes do mesmo surto de 2012. Os vírus do surto de 2012 foram cedidos pelo Laboratório de Raiva e Encefalites Virais do Instituto Biológico de São Paulo para as análises. O sequenciamento dos genes HA e NA indicaram que os EIVs de 2012 e 2015 brasileiros são do subtipo H3N8 e pertencem à sublinhagem Flórida 1 e tiveram maiores identidades com os vírus de 2012 da América do Sul, Estados Unidos e Dubai de 2012. Os vírus de 2015 formaram um clado separado dos demais EIV Flórida 1, tanto na análise filogenética quanto na análise de relógio molecular. As análises de mutações de nucleotídeos e aminoácidos, associados à análise de perfil de hidrofobicidade sugerem mudanças em estruturas antigênicas que poderiam acarretar no maior distanciamento em relação à estirpe vacinal A/equine/South Africa/4/03. / The equine influenza (EI) is a viral acute respiratory disease that can affect equines of any age. The disease is caused by the equine influenza virus (EIV) and has two different subtypes H3N8 (formerly Equi-2) that occurs worldwide and H7N7 (formerly Equi-1), considered extinct since 1980. EIVs belong to the Orthomyxoviridae family, Influenza A genus, are enveloped and has negative segmented single strand RNA genome. EI causes high morbidity and low mortality and drives to high economic losses in equestrian industry. In Brazil, the transport and participation in equestrian events are not allowed when horses have EIV. The quickly spread pattern is easily seen in EIV outbreaks. EI outbreaks occurred in 2012 in several countries, including Brazil. In 2015, an outbreak occurred in a Veterinarian Hospital in São Paulo-SP. The objectives of the present study were: a) to obtain isolates of equine influenza virus from recent outbreaks in the State of São Paulo, Brazil; b) to promote the sequencing of these EIVs; c) to perform the phylogenetic and evolutive analysis of these EIVs. Twelve EIVs were isolated from an outbreak in a veterinarian hospital in the State of São Paulo in 2015. The eight viral genes were sequenced from EIVs of 2015 and from one EIV of a Brazilian outbreak, 2012. Also, the HA gene from two other EIVs from the same 2012-outbreak were sequenced. The viruses from the 2012-outbreak were from the Laboratory of Rabies and Viral Encephalitis, Instituto Biológico de São Paulo. Sequencing on HA and NA genes indicates that the Brazilian 2012 and 2015 EIVs are H3N8 subtype, belong to the Florida 1 sublineage and were more identical to the 2012 EIVs from South America, United States and Dubai. In the phylogenetic tree and the molecular clock the EIVs from 2015 grouped in a cluster that was separeted from other Florida 1 EIVs. The nucleotide, amino acid and hydrophobicity analysis suggest changes in antigenic structures that could lead to differences from the vaccine strain A/equine/South Africa/4/03.

Submitted by Socorro Pontes (socorrop@ufersa.edu.br) on 2017-07-25T14:20:23Z No. of bitstreams: 1 EduardoCP_TESE.pdf: 2355961 bytes, checksum: 8690e3719791c5d601f48f7ac2d5517a (MD5) / Approved for entry into archive by Vanessa Christiane (referencia@ufersa.edu.br) on 2017-07-25T14:45:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 EduardoCP_TESE.pdf: 2355961 bytes, checksum: 8690e3719791c5d601f48f7ac2d5517a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-25T14:46:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 EduardoCP_TESE.pdf: 2355961 bytes, checksum: 8690e3719791c5d601f48f7ac2d5517a (MD5) Previous issue date: 2017-02-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The use of water-repellent polymer in agriculture has been growing in recent years because it has the capacity to retain and provide water slowly to the plants and still be a conditioner for soils. However, the lack of studies for the guava crop and its ideal dose for use in substrates makes its use limited in this context. Another important aspect of guava culture is the study of diversity, which is one of the most important indicators evaluated by plant breeders in the initial phase of a breeding program. The aim of this work was to evaluate the effects of different hydrogel doses and irrigation shifts on the growth of guinea - pig grafts and to evaluate the diversity of guava accesses using morphoagronomic descriptors for qualitative variables in the plant and qualitative and quantitative variables in the fruits. In the experiment I, the experimental design was a randomized block design, with four replications, in the 4 x 3 factorial scheme, corresponding to four doses of the Biogel Aqua Plus® hydrogelent polymer (0.0, 1.0, 2.5 e 5.0 g L-1) and three irrigation shifts (T1 - daily irrigation; T2 - irrigation on alternate days and T3 - irrigation every two days). The following variables were evaluated: height of the portagrafts (cm); Lap diameter (mm); Number of leaves per plant; Dry shoot mass (g), root dry mass weight (g) and total dry weight weight (g); Height / diameter ratio of the neck; Dry height / dry matter ratio; Dry mass ratio of aerial part / root dry mass and content index of chlorophyll. The 1g L-1 dose of the hydrogel incorporated into the substrate is indicated for the production of guinea-pig portagrafts and with the incorporation thereof, irrigation of the guinea-pig portagrafts can be performed frequently within one day. In the experiment II, the morphoagronomic descriptors were evaluated in 84 accessions of seminiferous guava trees cultivated at the experimental farm of UFERSA (Alagoinha), in the region of Mossoró-RN. We evaluated 26 descriptors in the plant, observed in four quadrants. The evaluation through morphoagronomic descriptors showed a partial agreement between the clusters methods studied. The technique of genetic dissimilarity using multicastropic characteristics was effective to investigate the diversity among the accessions of guava trees, showing that the population has wide genetic variability. The evaluation through morphoagronomic descriptors showed a partial agreement between the clusters methods studied. The technique of genetic dissimilarity using multicastropic characteristics was effective to investigate the diversity among the accessions of guava trees, showing that the population has wide genetic variability. In the experiment III, the quality and the morphoagronomic characteristics of fruits of 37 guinea-fowl accesses propagated semen, cultivated in the experimental farm of Ufersa (Alagoinha), in the region of Mossoró-RN, were evaluated. Five fruits were collected from each access and transported to the UFERSA post-harvest laboratory at the CPVSA. For the quality variables, 11 parameters were evaluated. Morphological variables were analyzed according to 13 descriptors. The Tocher optimization clustering methods and the UPGMA method demonstrated wide divergence in the division of groups into the quantitative characteristics. In the grouping carried out for the qualitative variables, the Tocher and UPGMA methods observed great variability among the accessions. The fruit length, fruit weight, firmness, septal shape, fruit shape and color of the epidermis were the main contributors to dissimilarity among the accessions / A utilização do polímero hidrorretentor na agricultura vem crescendo nos últimos anos pelo fato de ter a capacidade de reter e disponibilizar água lentamente para as plantas e ainda ser um condicionador para os solos. Porém, a falta de estudos para a cultura da goiaba e sua dose ideal para utilização nos substratos torna seu uso limitado nesse contexto. Outro aspecto importante da cultura da goiabeira é o estudo da diversidade, que é um dos mais importantes indicadores avaliados por melhoristas de plantas na fase inicial de um programa de melhoramento genético. Portanto, necessita-se de algumas atividades para caracterizá-los. Frente ao exposto, teve-se por objetivo avaliar os efeitos de diferentes doses de hidrogel e turnos de rega na produção de portaenxertos de goiabeira, avaliar os descritores multicategóricos/morfoagrônomicos como método de avaliação da diversidade genética. No experimento I, o delineamento experimental foi em blocos casualizados, com quatro repetições, no esquema fatorial 4 x 3, correspondendo a quatro doses do polímero hidrorretentor Biogel Aqua Plus® (hidrogel) (0,0; 1,0; 2,5 e 5,0 g L-1) e três turnos de rega (T1 - irrigação diária; T2 - irrigação em dias alternados e T3 - irrigação a cada dois dias). Foram avaliadas as seguintes variáveis: altura dos portaenxertos (cm); diâmetro do colo (mm); número de folhas por planta; massa seca da parte aérea (g), peso da massa seca das raízes (g) e peso da massa seca total (g); relação altura/diâmetro do colo; relação altura/massa seca da parte aérea; relação massa seca da parte aérea/massa seca da raiz e o índice de conteúdo de clorofila. A dose de 1g L-1 do hidrogel incorporado ao substrato é indicada para a produção de portaenxertos de goiabeira, e com sua incorporação a irrigação dos portaenxertos de goiabeira pode ser realizada com frequência em intervalo de um dia. No experimento II, foram avaliados os descritores morfoagronômicos em 84 acessos de goiabeiras propagadas seminalmente, cultivadas na fazenda experimental da Ufersa (Alagoinha), na região de Mossoró-RN. Foram avaliados 26 descritores na planta, observados em quatro quadrantes. A avaliação através de descritores morfoagronômicos mostrou uma concordância parcial entre os métodos de agrupamentos estudados. A técnica de dissimilaridade genética utilizando características multicategóricas foi eficaz para investigar a diversidade entre os acessos de goiabeiras, mostrando que a população possui ampla variabilidade genética. No experimento III, avaliou-se a qualidade e as características morfoagronômicas de frutos de 37 acessos de goiabeira propagadas seminalmente, cultivadas na fazenda experimental da Ufersa (Alagoinha), na região de Mossoró-RN. Foram colhidos cinco frutos de cada acesso e transportados para o laboratório de pós-colheita da Ufersa, no CPVSA. Para as variáveis de qualidade, avaliou-se 11 parâmetros. As variáveis morfológicas foram analisadas de acordo com 13 descritores. Os métodos de agrupamento de otimização de Tocher e o método UPGMA demonstraram ampla divergência na divisão dos grupos para as características quantitativas. No agrupamento realizado para as variáveis qualitativas os métodos de Tocher e UPGMA observaram grande variabilidade entre os acessos. Os caracteres comprimento do fruto, peso do fruto, firmeza, formato das sépalas, forma do fruto e coloração da epiderme foram os que mais contribuíram para a dissimilaridade entre os acessos / 2017-07-24

Candida species have emerged as the second most common cause of vulvovaginitis in the world, producing infections that can cause unwanted symptoms such as itching, discharge, dyspareunia and burning. The objective of this study was to evaluate the genetic variability and the antifungal susceptibility profile of Candida yeasts isolated from vaginal secretions of patients Maceió - Alagoas. The yeasts were collected weekly in the sector of five clinical microbiology laboratories located in the city of Maceió between March and December 2010. For each isolate was performed through a purification of seeding a suspension of yeast in YPD solid medium. DNA extraction was performed by phenol / chloroform and identification by PCR with primers species specific for C.albicans, C. glabrata, C. tropicalis, C. krusei and C. parapsilosis. The patients with vaginal candidiasis were evaluated for the presence of symptoms and risk factors for acquiring the disease. The patterns of sensitivity to ketoconazole, fluconazole, itraconazole and amphotericin B were evaluated according to CLSI standards (M27-A2).Molecular typing was used in the microsatellite (GTG) 5 and the fragments separated on 1.5% agarose gel at 75 volts / cm for 120 minutes, stained with ethidium bromide and viewed on photodocumentation system. Banding patterns were analyzed by BioNumerics 6.5 soltware to obtain electropherogram using the similarity coefficient Jacard. We obtained 296 isolates of Candida yeasts, and C. albicans (82.45%) the most frequent species, followed by C. glabrata with 7.75%, C. parapsilosis with 4.05%, C. tropicalis witn 3.75% and C. krusei 2%. These isolates exhibited resistance profile of 66,7% for amphotericin B, fluconazole for 52,6%, 89,7% for itraconazole and to ketoconazole 21,3%. Among the risk factors for acquiring the disease stands out pregnancy with 24.66% and history of VVC in 15.52%. The main clinical sign was presented discharge in 77,13% of cases. The species analyzed showed a high diversity for the genetic marker (GTG)5, with values ranging from 0.7470 to 0.9963, which allowed the formation of genetic patterns 172 for C. albicans, 10 for C. tropicalis, 11 for C. parapsilosis, 8 for C. glabrata and 4 for C. krusei. The incidence of Candida species with a profile of resistance to itracozaol, amphotericin B, fluconazole and ketoconazole, provides epidemiological data for the study area and reinforces the importance of identifying yeasts to the species level and testing of in vitro antifungal susceptibility. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As espécies de Candida têm emergido como a segunda causa mais comum de vulvovaginites no mundo, produzindo infecções, que podem causar sintomas indesejáveis como, prurido, corrimento, dispareunia e ardor. O objetivo desse estudo foi avaliar a variabilidade genética e o perfil de susceptibilidade aos antifúngicos em leveduras do gênero Candida isoladas de secreção vaginal de pacientes de Maceió Alagoas. As amostras foram coletadas no setor de microbiologia clínica de cinco laboratórios localizados na cidade de Maceió, entre Março e Dezembro de 2010. Para cada isolado foi realizada uma purificação por meio de semeio de uma suspensão da levedura em meio YPD sólido. A extração do DNA foi realizada pelo método do fenol/clorofórmio e a identificação por PCR com iniciadores espécie-específicos para C. albicans, C. glabrata, C. tropicalis, C. krusei e C. parapsilosis. As pacientes com candidíase vulvovaginal foram avaliadas quanto à presença de sintomas e fatores de risco para aquisição da doença. Os padrões de sensibilidade ao cetoconazol, fluconazol, itraconazol e anfotericina B foram avaliados de acordo com as normas do CLSI (M27-A2). Na tipagem molecular foi utilizado o microssatélite (GTG)5 e os fragmentos separados em gel de agarose 1,5 % a 75 volts/cm por 120 minutos, corados com brometo de etideo e visualizados em sistema fotodocumentação. Os padrões de bandas obtidos foram analisados pelo soltware BioNumerics 6.5 para obtenção de eletroferograma utilizando o coeficiente de similaridade Jacard. Foram obtidos 296 isolados de leveduras do gênero Candida, sendo C. albicans (82,45%) a espécie mais frequente, seguida de C. glabrata com 7,75%, C. parapsilosis com 4,05%, C. tropicalis com 3,75% e C. krusei com 2%. Esses isolados exibiram perfil de resistência de 66,7% para anfotericina B, 52,6% para fluconazol, 89,7% para itraconazol e 21,3% para cetoconazol. Entre os fatores de risco para aquisição da doença destaca-se gravidez com 24,66% e histórico prévio de CVV em 15,54%. O principal sinal clínico apresentado foi corrimento em 77,13% dos casos. As espécies analisadas apresentaram elevada diversidade para o marcador genético (GTG)5, com valores que variaram de 0,7470 a 0,9963, o que possibilitou a formação de 172 padrões genéticos para C. albicans, 10 para C. tropicalis, 11 para C. parapsilosis, 8 para C. glabrata e 4 para C. krusei. O aparecimento de espécies de Candida com perfil de resistência ao itraconazol, anfotericina B, fluconazol e cetoconazol, fornece dados epidemiológicos para região estudada e reforça a importância da identificação das leveduras em nível de espécie e da realização de testes de sensibilidade antifúngica in vitro.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2017-05-16T13:53:09Z No. of bitstreams: 1 Regina Cely Benecio da Silva.pdf: 1919366 bytes, checksum: cdb5728624f53470f1e2dc26e936d882 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-16T13:53:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Regina Cely Benecio da Silva.pdf: 1919366 bytes, checksum: cdb5728624f53470f1e2dc26e936d882 (MD5) Previous issue date: 2007-02-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / A total of 290 sheep of breed Morada Nova (MN), Cariri (Ca),Dorper (D) and Cara Curta (CC) and Barriga Negra (BN) genetic groups of Paraíba State it was investigated to quantify the genetic variability inter and intra-population through protein polymorphisms and microsatelite. The blood samples were collected and the plasm used in the analyses of isoelectric focusing of the albumin (Alb) and transferrin (Tf); the eritrocites to analyse malic enzyme (EM), peptidase-B (Pep-B), fosfogliconato desidrogenase (PGD), diaforase I and II (DIA-I and DIA-II) and hemoglobin (Hb) by conventional eletroforese and the leucocites were used in DNAanalyses. The results showed that 73% of the investigated locos were polimorphic. The albumin (Alb), Peptidase-B (Pep-B) and diaforase-II (DIA-II) loci was monomorphic. The markers investigated in this work was efficient and could be considered very informative for the identification and investigation of paternity of the studied genetic groups. Based on GST values , the EM, Tf, DIA-I and Hb locos had the most contribution in differentiation among the five populations. In despit of many more advanced techniques, the proteins polymorphisms presentes useful information in genetic characterization studies. The dendrogram built starting from the genetic distances with base in the five loci of proteins and three microsatellities structured the five populations, presenting two main clusters: one containing the four native breed and another with the exotic breed. Morada Nova and Cara Curta breed presented the largest genetic similarity. The Barriga Negra and Cariri group in spite of they share the same cluster they meet distant to each others native groups and Dorper breed, suggesting belong to different groups. / Um total de 290 ovinos das raças Morada Nova (MN), Cariri (Ca) e Dorper (D) e dos grupos genéticos Cara Curta (CC) e Barriga Negra (BN), do estado da Paraíba, foi investigado visando quantificar a variabilidade genética inter e intra-populacional, através de polimorfismos de proteínas e microssatélites. As amostras sanguíneas foram coletadas ao acaso e o plasma usado nas análises de focalização isoelétrica da albumina (Alb) e transferrina (Tf); os eritrócitos, para análises da enzima málica (EM), peptidase-B (Pep-B), fosfogliconato desidrogenase (PGD), diaforase I e II (Dia-I e Dia-II) e hemoglobina (Hb) por eletroforese convencional e, os leucócitos foram usados nas análises de DNA. Os resultados obtidos revelaram que 73% dos locos investigados foram polimórficos. Os locos da albumina (Alb), peptidase-B (Pep-B) e diaforase-II (DIA-II) foram monomórficos. O conjunto de marcadores investigados neste trabalho foi eficiente e pode ser considerado muito informativo para a identificação e investigação de paternidade nos estudos de grupos genéticos. Com base nos valores de GST, os locos EM, Tf, DIA-I e Hb, foram os que mais contribuíram nas estimativas de diferenciação entre as cinco populações. Tais resultados mostram que apesar de existir técnicas mais avançadas, os polimorfismos de proteínas continuam apresentando informações úteis nos estudos de caracterização genética. O dendrograma construído a partir das distâncias genéticas com base nos cinco locos de proteínas e três microssatélites estruturou as cinco populações, apresentando dois clusters principais: um agrupando as quatro raças nativas e, o outro, a raça exótica. Dentre as raças nativas, Morada Nova e Cara Curta foram as que apresentaram as maiores similaridades. Os animais Barriga Negra e Cariri apesar de compartilharem o mesmo cluster encontram-se distantes entre si e das demais populações nativas e da raça Dorper, sugerindo pertencer a grupos distintos.

Vírus da raiva provenientes de 23 morcegos de espécies hematófagas, frugívoras e insetívoras foram caracterizados geneticamente pelo seqüenciamento completo da região que codifica a nucleoproteína N. A análise filogenética das seqüências, incluindo lyssavirus e isolados de morcegos do Chile e Estados Unidos, mostrou que os diferentes isolados do vírus da raiva foram de modo geral segregados em quatro grupos genéticos distintas: morcegos hematófagos, morcegos insetívoros 1, 2 e 3. Os morcegos insetívoros 1 constituiram-se por isolados de Eptesicus furinalis: BR-EF1, BR-EF2, BREF3, BR-EF-4, BR-EA1 e BR-NL2; os morcegos insetívoros 2 consistiram de isolados de Molosssus spp: BR-MM1, BR-MM2 e BR- MA1 e os morcegos insetívoros 3 isolados de Nictinomops laticaudatus: BR-NL1 e BR-NL3. A homologia de nucleotídeos entre cada grupo de morcegos insetívoros 1, 2 e 3 foi maior que 99%, 97% e 99%, respectivamente. O grupo de morcegos hematófagos foi representado pelos isolados de: 3 morcegos hematófagos Desmodus rotundus (BR-DR1, BR-DR2 e BR-DR3); 5 morcegos frugívoros Artibeus lituratus BR-AL1, BR-AL2, BR-AL3, BR-AL4 e Artibeus planirostris BRAP1; 2 morcegos insetívoros (BR-MR1 e BR-EA2) e 2 de espécies não identificadas (BR-BAT1 e BR-BAT2). Entre as amostras seqüenciadas foram selecionadas cinco (BR-EF1, BR-NL1, BR-AL3, BR-MM1, BR-DR1) e um isolado de cão (BR-C) para os estudos de patogenicidade em camundongos albinos suíços inoculados pela vias intracerebral (IC) e intramuscular (IM). Todas as amostras quando inoculadas em camundongos pela via IC apresentaram-se patogênicas, provocando a morte dos mesmos num período de 4 a 14 dias pós-inoculação. No entanto, 500DLIC50 das mesmas amostras inoculadas pela via IM levaram a uma mortalidade de camundongos de: 60% (BR-DR1); 50% (BR-C, BR-NL); 40% (BR- AL3); 9,5% (BR-MM1); 5,2% (BR-EF10). As mesmas amostras foram utilizadas para a verificação de proteção cruzada, conferida por vacina comercial de uso animal, de camundongos que receberam uma ou duas doses de vacina pela via subcutânea (SC) e desafiados pelas vias IC e IM. Camundongos inoculados com duas doses de vacina foram protegidos quando desafiados pela via IC, com todas as amostras testadas. Quando os camundongos receberam uma dose da mesma vacina houve proteção parcial daqueles desafiados com as amostras de vírus PV e BR-C. Houve proteção de 100% dos camundongos desafiados pela via IM, com exceção daqueles vacinados com uma dose de vacina e desafiados com a amostra PV que apresentaram um índice de 66% de sobreviventes. Os resultados indicam a possibilidade de existir variantes do vírus da raiva espécies específicas circulando em morcegos. Sugerem ainda, que espécies de morcegos hematófagos, frugívoros e insetívoros compartilham o mesmo polimorfismo de vírus. A vacina comercial contra a raiva contendo vírus inativado e de uso veterinário protegeu os camundongos contra o desafio com as diferentes amostras testadas, sugerindo que as vacinas usualmente utilizadas são efetivas no tratamento profilático da raiva transmitida por morcegos, apesar da marcada diferença de neurovirulência dos diferentes isolados quando inoculados em camundongos pela via IM. / Twenty-three rabies viruses isolated from hematophagous, frugivorous and insectivorous bats were characterized genetically by complete sequencing of the region coding the nucleoprotein N. The phylogenetic analysis of the sequences, including the lyssavirus and the bat isolates from Chile and USA revealed that the isolates were segregated into four distinct genetic lineages: those related to the vampire bats and to the insectivorous bats 1, 2 and 3. The isolates related to the insectivorous bats 1 were from the Eptesicus furinalis: BR-EF1, BR- EF2, BREF3, BR-EF-4, BR-EA1 e BR-NL2; those of the insectivorous bats2 included the isolates from Molosssus spp: BR-MM1, BR-MM2 and BR-MA1 and the group 3, by the isolates from the Nictinomops laticaudatus: BR-NL1 and BR-NL3. The homology among each group of the insectivorous bats 1, 2 and 3 were greater than 99%, 97% and 99%, respectively. The lineage related to vampire bats was represented by three isolates from the D. rotundus (BR-DR1, BR-DR2 e BR-DR3); five from the fruit bats Artibeus lituratus (BR-AL1, BR-AL2, BR-AL3, BR-AL4) and Artibeus planirostris (BRAP1); two from insectivorous bats (BR-MR1 and BR-EA2) and two from unidentified species (BR-BAT1 and BR-BAT2). Among the sequenced amples, five bat isolates (BR-EF1, BR-NL1, BR-AL3, BR-MM1, BR- DR1) and one dog isolate (BR-C) were selected for the study of their pathogenicity in Swiss mice, inoculating through intracerebral (IC) and intramuscular (IM) routes. All the isolates, when inoculated via IC, were pathogenic, provoking death in 4 - 14 post inoculation days. However, mice inoculated with 500ICLD50 of the same isolates through IM route were found with different death rates: 60.0% (BR-DR1); 50.0% (BR-C, BR-NL); 40.0% (BR-AL3); 9.5% (BR-MM1) and 5.2% (BR-EF10). The same isolates were used for the assessment of cross protection conferred by a commercial vaccine of veterinary use. The mice were vaccinated subcutaneously, receiving either one or two shots of vaccine, and challenged through IC and IM routes. Mice receiving two shots were protected against all the isolates, when challenged intracerebrally. Mice receiving one shot were found only partially protected against the challenge with the fixed PV strain and BR-C isolate. Mice challenged intramuscularly showed 100.0% of protection, with the exception of those vaccinated with one dose and challenged with PV strain, which were found with 66.0% of survivors. These results indicate the possibility of the existence of rabies virus variants circulating in different species of bat population. The data also suggest that the vampires, frugivorous and insectivorous bats share the same lineage of rabies viruses. The commercial vaccine has protected the mice against the challenge with different rabies virus isolates, suggesting that the vaccines usually employed in the field are effective, although some marked difference in neurovirulence by IM inoculation was found among the isolates tested.

Analisou-se 54 amostras de vírus da raiva isoladas de diferentes espécies animais e de seres humanos do Estado do Maranhão, inicialmente pelas técnicas tradicionais de imunofluorescência direta (IFD) e de inoculação intracerebral em camundongos (ICC), com o objetivo de realizar um estudo de epidemiologia da doença. No reteste, todas as amostras foram positivas na IFD e 19 resultaram negativas à ICC. O comportamento biológico dos isolados foi estudado em camundongos, revelando um período de incubação entre 7 e 17 dias, com sinais clínicos variados e duração média de 4 dias. Para a avaliação da patogenicidade, foram selecionadas cinco amostras do estudo, oriundas de diferentes espécies, como vírus de desafio nos camundongos imunizados com uma vacina comercial de vírus inativado. Os resultados do desafio indicaram que a proteção conferida pela vacina foi baixa para todas as amostras. A presença de anticorpos no soro dos camundongos vacinados foi demonstrada em diferentes períodos de vacinação. A tipificação antigênica de quatro amostras de vírus foi realizada pela imunofluorescência indireta (IFI) utilizando um painel de anticorpos monoclonais (MAbs) procedentes do Canadian Food and Inspection Agency, Ottawa, Canadá, identificando o perfil correspondente à variante de morcego hematófago Desmodus rotundus. Na caracterização genética com base nos genes que codificam a glicoproteína G e nucleoproteína N, observou-se que os isolados foram divididos em dois grupos genéticos independentes associados a ciclos endêmicos distintos. Esses resultados permitem concluir que no Estado do Maranhão circulam pelo menos duas variantes do vírus da raiva, mantidas por carnívoros terrestres e morcegos hematófagos. Destaca-se que houve variação regional entre as amostras isoladas em diferentes áreas geográficas. Além disso, foram constatados hospedeiros inesperados nos clados formados. Também, não houve variação temporal nas amostras pesquisadas. / Fifty four rabies virus samples isolated from different animal species and humans, diagnosed positive by means of the direct fluorescent antibody test (dFA) and mouse inoculation test (MIT) in the State of Maranhão were selected for an epidemiologic study. In the retest, all these samples were dFA-positive, but 19 were negative by the MIT. The biologic behavior of these samples was assessed in mice by intracerebral inoculation and the incubation period was between 7 and 17 days, showing varied clinical signs with an average duration of 4 days. For the evaluation of the pathogenicity, five rabies viruses isolated from different species were selected, and used as the challenge viruses to be inoculated into mice been vaccinated previously with an inactivated commercial rabies vaccine. The results of the challenge experiments indicated low protection of the vaccine against the challenge viruses. The presence of rabies antibody was demonstrated in the sera of vaccinated mice taken at different intervals after vaccination. The antigenic typing was performed in four samples by using the indirect fluorescent antibody test (IFI) with a panel of monoclonal antibodies (MAbs) provided by the Canadian Food and Inspection Agency, Ottawa, Canada, and the profile identified was closely related to that of the Desmodus rotundus vampire bat. The genetic characterization based on genes coding the glycoprotein G and nucleoprotein N genes indicated that isolates were divided into two independent genetic groups associated to distinct endemic cycles. With the results obtained, we conclude that in the State of Maranhão there are circulating at least two distinct variants of rabies viruses, maintained by terrestrial carnivores and vampire bats. Regional variation among the isolates taken from different geographic areas has been found. And the rabies virus isolates grouped into clades were associated with unusual host species and no temporal variation was observed among the isolates.

Analisou-se 54 amostras de vírus da raiva isoladas de diferentes espécies animais e de seres humanos do Estado do Maranhão, inicialmente pelas técnicas tradicionais de imunofluorescência direta (IFD) e de inoculação intracerebral em camundongos (ICC), com o objetivo de realizar um estudo de epidemiologia da doença. No reteste, todas as amostras foram positivas na IFD e 19 resultaram negativas à ICC. O comportamento biológico dos isolados foi estudado em camundongos, revelando um período de incubação entre 7 e 17 dias, com sinais clínicos variados e duração média de 4 dias. Para a avaliação da patogenicidade, foram selecionadas cinco amostras do estudo, oriundas de diferentes espécies, como vírus de desafio nos camundongos imunizados com uma vacina comercial de vírus inativado. Os resultados do desafio indicaram que a proteção conferida pela vacina foi baixa para todas as amostras. A presença de anticorpos no soro dos camundongos vacinados foi demonstrada em diferentes períodos de vacinação. A tipificação antigênica de quatro amostras de vírus foi realizada pela imunofluorescência indireta (IFI) utilizando um painel de anticorpos monoclonais (MAbs) procedentes do Canadian Food and Inspection Agency, Ottawa, Canadá, identificando o perfil correspondente à variante de morcego hematófago Desmodus rotundus. Na caracterização genética com base nos genes que codificam a glicoproteína G e nucleoproteína N, observou-se que os isolados foram divididos em dois grupos genéticos independentes associados a ciclos endêmicos distintos. Esses resultados permitem concluir que no Estado do Maranhão circulam pelo menos duas variantes do vírus da raiva, mantidas por carnívoros terrestres e morcegos hematófagos. Destaca-se que houve variação regional entre as amostras isoladas em diferentes áreas geográficas. Além disso, foram constatados hospedeiros inesperados nos clados formados. Também, não houve variação temporal nas amostras pesquisadas. / Fifty four rabies virus samples isolated from different animal species and humans, diagnosed positive by means of the direct fluorescent antibody test (dFA) and mouse inoculation test (MIT) in the State of Maranhão were selected for an epidemiologic study. In the retest, all these samples were dFA-positive, but 19 were negative by the MIT. The biologic behavior of these samples was assessed in mice by intracerebral inoculation and the incubation period was between 7 and 17 days, showing varied clinical signs with an average duration of 4 days. For the evaluation of the pathogenicity, five rabies viruses isolated from different species were selected, and used as the challenge viruses to be inoculated into mice been vaccinated previously with an inactivated commercial rabies vaccine. The results of the challenge experiments indicated low protection of the vaccine against the challenge viruses. The presence of rabies antibody was demonstrated in the sera of vaccinated mice taken at different intervals after vaccination. The antigenic typing was performed in four samples by using the indirect fluorescent antibody test (IFI) with a panel of monoclonal antibodies (MAbs) provided by the Canadian Food and Inspection Agency, Ottawa, Canada, and the profile identified was closely related to that of the Desmodus rotundus vampire bat. The genetic characterization based on genes coding the glycoprotein G and nucleoprotein N genes indicated that isolates were divided into two independent genetic groups associated to distinct endemic cycles. With the results obtained, we conclude that in the State of Maranhão there are circulating at least two distinct variants of rabies viruses, maintained by terrestrial carnivores and vampire bats. Regional variation among the isolates taken from different geographic areas has been found. And the rabies virus isolates grouped into clades were associated with unusual host species and no temporal variation was observed among the isolates.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O feijão-caupi constitui-se uma das leguminosas de grande importância para o Estado de Roraima e seu cultivo pode ser encontrado em diversas áreas da região. É uma leguminosa que pode beneficiar da fixação biológica de nitrogênio, através da simbiose com bactérias do gênero Bradyrhizobium. Desta forma, objetivou-se neste trabalho caracterizar e avaliar a eficiência simbiótica de 41 estirpes de rizóbios isoladas de ambientes de mata e cerrado em Roraima. As estirpes foram caracterizadas morfologicamente e agrupadas de acordo com os perfis gerados, em seguida foram caracterizadas geneticamente através da amplificação e sequênciamento parcial do gene 16S rRNA. Utilizando o feijão-caupi como planta isca, foi conduzido um experimento em casa de vegetação para avaliação da eficiência simbiótica, do qual determinou-se a matéria seca da parte aérea, número e massa seca de nódulos. Deste experimento, oito estirpes que se mostraram mais eficientes foram testadas em campo. No campo dois experimentos foram conduzidos, um em área sem cultivo anterior com feijão-caupi e outro em área cultivada por dois anos. Dos experimentos de campo, aos 30 dias foram avaliados, massa seca e N-total da parte aérea, número e massa seca de nódulos e no final do ciclo determinou-se a produtividade de grãos. Do total de estirpes caracterizadas, a maioria apresentou crescimento lento (58%) e reação neutra (51 %) do meio de cultura, características que foram compatíveis com as do gênero Bradyrhizobium. A análise do sequênciamento parcial do gene 16S rRNA revelou que as estirpes obtidas de feijão-caupi apresentam elevada diversidade fenotípica e genotípica, com predominância de estirpes do gênero Bradyrhizobium e em menor proporção estirpes com características semelhantes ao gênero Rhizobium. Os resultados obtidos no ensaio de eficiência simbiótica mostrou que 20 estirpes foram eficientes, sendo todas pertencentes ao gênero Bradyrhizobium. Três estirpes (ERR 24, ERR40 e ERR 510) apresentam bons resultados para os atributos avaliados em condições de campo, apresentado valores satisfatórios quanto à eficiência simbiótica igual ou superior as estirpes atualmente recomendadas e ao controle nitrogenado, sendo indicadas como novos inoculantes. / The cowpea constitutes one of the legume plants of great importance to the State of Roraima and its cropping can be found in several areas of the region. It is a legume plant which can benefit from the biological fixation through symbiosis with bacteria of the genus Bradyrhizobium. In this way, it was aimed in this work to characterize and evaluate the symbiotic efficiency of strains of rhizobia isolated from Forest and cerrado (savannah-like vegetation) environment in Roraima. The strains were characterized morphologically and grouped together according to the profiles generated; next, they were characterized genetically through the amplification and partial sequencing of gene 16S rRNA. Utilizing the cowpea as a bait plant, an experiment was conducted in a greenhouse for evaluating of the symbiotic efficiency, from which the dry matter of the shoot, number and dry matter of nodules were determined. Of this experiment, eight strains which proved more efficient were tested in field. In the field, two experiments were conducted, one in an area with no previous cropping with cowpea and the other in an area cultivated for two years. Of the Field experiments, at 30 days, dry matter and total-N of the shoot, number and dry mass of nodules were evaluated and at the end of the cycle, grain yield was determined. Of the total of strains characterized, most of them presented slow growth (58%) and neutral reaction (51 %) of the culture medium, characteristics which were consistent with those of the genus Bradyrhizobium. The analysis of the partial sequencing of gene 16SrRNA revealed that the strains obtained of cowpea present a high phenotypic and genotypic diversity, with predominance of strains of the genus Bradyrhizobium ADN to a smaller extent strains with characteristics similar to the genus Rhizobium. The results obtained in the symbiotic efficiency assay showed that 20 strains were efficient, all of them belonging to the genus Bradyrhizobium. Three strains (ERR 24, ERR40 and ERR 510) present good results as regards the symbiotic efficiency for the attributes evaluated under field conditions, presenting satisfactory values concerning the symbiotic efficiency equal or superior to the strains currently recommended and to the nitrogen-containing control, they being recommend as new inoculants.