Orientador: Silvia Regina Rogatto / Resumo: O carcinoma de células escamosas de laringe (CCEL) é um dos mais comuns que acometem a região da cabeça e pescoço, representando aproximadamente 25% dos tumores malignos desta localização anatômica. Os fatores de risco associados ao desenvolvimento deste tumor são o consumo de tabaco e álcool, história familiar e a infecção pelo vírus do papiloma humano (HPV) em uma parcela dos casos. A ocorrência de segundos tumores primários e metástases é frequentemente relatada nos CCEL. Entretanto, até o momento, não há marcadores moleculares úteis na prática clínica que sejam capazes de predizer a progressão e a evolução clínica da doença. Neste contexto, as plataformas de microarranjos de oligonucleotídeos (microarrays), têm possibilitado uma análise mais ampla na busca por marcadores de detecção precoce, progressão, resposta e risco de recorrência e metástase. Foram incluídos neste estudo 88amostras de CCEL de pacientes não tratados. O grupo teste foi composto por 35 CCEL avaliados previamente para expressão gênica global (8x60K, Agilent Technologies) e 33 para a expressão de miRNAs (plataforma Array 8x60K, Agilent Technologies). O grupo de validação foi formado por 33amostras fixadas em formalina e em blocos de parafina (FFPE) e 19 amostras de tumor a fresco. O grupo teste foi avaliado para genotipagem para o HPV (LINEAR ARRAY HPV Genotyping Test, Roche), resultando em dois casos positivos para HPV16. A análise de expressão de transcritos revelou 1.680 genes diferencialmente expressos comparados aos tecidos normais de laringe (necrópsias). A análise de expressão global de miRNAs revelou 89 miRNAs diferencialmente expressos na comparação entre tecido normal e tumoral. A integração entre os dados de transcritos codificadores e de miRNAs (correlação negativa r<0) revelou alterações recorrentes em um subgrupo de genes associados com a degradação de componentes da matriz extracelular... / Abstract: Laryngeal squamous cell carcinoma (LSCC) is one of the most common head and neck malignancies representing approximately 25% of the tumors located in this region. Risk factors associated to development of LSCCs include alcohol and tobacco consumption, family history of cancer and human papilloma virus (HPV) infection. Second primary tumors and metastasis are frequently observed in patients with LSCC. To date, no useful molecular markers have been described that can successfully predict disease progression and clinical outcome. In this context, large scale molecular studies enable a global analysis of tumor molecular alterations aiming to reveal biomarkers for early diagnosis, prognosis and response to therapy. LSCC samples were obtained from 88 untreated patients. Global gene (Array plataform 8x60K, Agilent Technologies) and miRNA expression (Array platform 8x60K, Agilent Technologies) profiles were evaluated in 35 and 33 samples, respectively (Test group, N=36). An independent group of samples (N=33, validation group) was included, being 33 formalin fixed and paraffin embedded tissue samples and 19 fresh frozen tissues. HPV genotyping using LINEAR ARRAY HPV Genotyping Test (Roche) was performed in tumor samples from test group. Only two cases were HPV16-positive. The expression analysis revealed 1,680 differentially expressed genes in tumors compared to normal tissue (pool of normal laryngeal samples from necropsies). The miRNA analysis revealed 89 miRNAs differentially expressed. Integrative transcriptome and miRNAs analysis data (negative correlation r<0) revealed a subset of altered genes associated with the degradation of extracellular matrix components (MMP3, MMP9, MMP10, MMP13, COL10A1 and COL3A1) and neoplastic processes (CAV1, ERBB4, HLF,HMGA2, HOXB6, KLF2, PDCD4, PPP1R3 and TOP2), as well as their putative miRNA regulators (hsa-miR-199b-5p, hsa-miR-218-5p, hsa-miR-29c-3p, hsa-miR-21-5p, hsa-miR-204-5p, hsa-miR-125b-5p, hsa-miR- ... / Mestre

Orientador: Estela Kaminagakura Tango / Banca: Ana Lia Anbinder / Banca: Silvana Pasetto / Resumo: O carcinoma de células escamosas (CEC) de boca é uma neoplasia incomum em pacientes jovens. Na literatura de língua inglesa não há relatos de estudos que investiguem a amplificação do EGFR e a expressão desta proteína neste grupo etário. O objetivo deste estudo foi investigar a amplificação do EGFR através da técnica de hibridização por fluorescência in situ (FISH) e correlacionar os resultados obtidos através da imunomarcação da proteína EGFR com a epidemiologia e com o prognóstico dos pacientes avaliados. Ao final dos testes de FISH e imunohistoquímicos, 21 amostras do grupo teste (pacientes ≤ 40 anos) e 39 amostras do grupo controle (pacientes ≥ 50 anos) foram consideradas adequadas para avaliação. As variáveis clínicas e anatomopatológicas foram comparadas pelos testes Qui-Quadrado ou exato de Fisher. A expressão do marcador EGFR e do método de FISH foi comparada entre os grupos por meio do teste não paramétrico de Mann-Whitney. As curvas de sobrevida foram calculadas utilizando o método de Kaplan-Meier e suas curvas foram comparadas através do teste de log-rank. Houve maior número de pacientes do sexo masculino, leucodermas, tabagistas e etilistas. A amplificação do EGFR foi maior no grupo teste (p = 0,018). A amplificação do EGFR associou-se estatisticamente com a variável estadiamento clínico avançado (p = 0,013), independente do grupo. A expressão da proteína EGFR correlacionou-se com tumores bem diferenciados (p = 0,011) e a presença de metástase (p = 0,035), independente da idade. A presença de amplificação foi mais frequente no grupo tese. Alguns casos de pacientes ≥40 anos de idade podem ser adequados ao emprego da terapia anti-EGFR, devido à amplificação do EGFR / Abstract: Oral squamous cell carcinoma (OSCC) is uncommon neoplasia in young patients. In the English literature, there are no reports of studies that investigate the amplification of EGFR and expression of this protein in this age group. The aim of this study was to investigate the amplification of EGFR by fluorescence in situ hybridization (FISH) and to correlate the results by immunostaining of EGFR protein with clinicopathological features and prognosis. After FISH and immunohistochemistry, 21 samples of the test group (≤ 40 years) and 39 samples of control group (≥ 50 years) were suitable for evaluating. Categorical variables were compared by the Pearson chi-square test or Fisher's exact test. Associations between protein levels and FISH results with clinicopathological characteristics of the patients were analyzed by Mann-Whitney U test. Survival rates were calculated using the Kaplan-Meier method and the curves were compared by the log-rank test. There was predominance for male patients, leucoderma, smoking and alcohol consumption. The EGFR amplification was higher in the test group (p = 0.018) and it was associated statistically with advanced clinical stage (p = 0.013), independent of the group. The expression of EGFR protein was correlated to well differentiated tumors (p = 0.011) and presence of metastasis (p = 0.035), regardless of age. Presence of EGFR amplification and/or expression. Some cases of patients ≥40 years old might be suitable for anti-EGFR therapy because of EGFR amplification / Mestre

Orientadores: Nelson Adami Andreollo, Luiz Roberto Lopes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-16T06:07:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TerciotiJunior_Valdir_M.pdf: 3600998 bytes, checksum: 6867e524b51d1a71d777c2132d9f2244 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A neoplasia de esôfago é a oitava neoplasia mais incidente no Brasil, mantendo alta letalidade a despeito da melhora do tratamento cirúrgico nas últimas décadas. Os tratamentos utilizados dividem-se em: I) paliativos (sondas para nutrição enteral, próteses endoscópicas, gastrostomia, jejunostomia, derivação esôfago-gástrica, quimioterapia, radioterapia) e; II) curativos (esofagectomias isoladas, terapias neo-adjuvantes e terapias adjuvantes). Sendo assim, estratégias de tratamento neo-adjuvante tornam-se objeto de estudo. O objetivo do trabalho é avaliar em estudo retrospectivo não-randomizado a morbidade, a mortalidade e a sobrevida dos pacientes operados na Faculdade de Ciências Médicas da UNICAMP no período de 1979 a 2006, divididos em três grupos: I) esofagectomia; II) radioterapia neo-adjuvante seguido de esofagectomia; e III) radioterapia-quimioterapia neo-adjuvante seguido de esofagectomia. Na análise dos resultados, os grupos não diferem significativamente quanto ao sexo, cor, idade, alguns sintomas pré-operatórios (pirose, tabagismo), complicações pós-operatórias, mortalidade, N patológico, grau de diferenciação histológica e estadiamento; os grupos diferem significativamente em relação a outros sintomas (disfagia, dor retroesternal, etilismo), localização tumoral, T patológico e resposta tumoral. As conclusões mostram diferenças de sobrevida entre os grupos após a exclusão dos óbitos peri-operatórios, com benefício estatisticamente significativo para a terapêutica neo-adjuvante / Abstract: Neoplasm of esophagus cancer is the eighth highest incidence in Brazil, maintaining a high mortality rate despite the improvement of surgical treatment in recent decades. Treatments are divided into: I) palliative (nasogastric tube for enteral nutrition, prosthetics, endoscopic gastrostomy, jejunostomy, esophageal-gastric bypass, chemotherapy, radiotherapy) and; II) radical (esophagectomy isolated, neo-adjuvant therapy and adjuvant therapy) . Thus, neoadjuvant treatment strategies become the object of study. The objective is to evaluate with a non-randomized retrospective study morbidity, mortality and survival of patients operated in the Faculty of Medical Sciences of Campinas in the period 1979-2006, divided into three groups: I) esophagectomy; II) neoadjuvant radiotherapy followed by esophagectomy, and III) neoadjuvant radiotherapy and chemotherapy followed by esophagectomy. Results show that groups did not differ significantly regarding gender, race, age, some preoperative symptoms (heartburn, smoking), postoperative complications, mortality, N pathological, histological grade and stage; groups differ significantly for other symptoms (dysphagia, retrosternal pain, alcoholism), tumor location, T and pathological tumor response. Findings show differences in survival between groups after the exclusion of perioperative deaths, with statistically significant benefit for neoadjuvant therapy / Mestrado / Cirurgia / Mestre em Cirurgia

Orientadores: Jacks Jorge Júnior, Edgard Graner / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-17T01:40:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mesquita_AnaTerezinhaMarques_D.pdf: 4734511 bytes, checksum: 60ce7779298bc2952bb284c04946ae26 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A enzima ácido graxo sintase (FASN), responsável pela síntese endógena de ácidos graxos, apresenta elevada expressão em vários tipos de cânceres sendo necessária para a proliferação e sobrevivência das células malignas. O triclosan é um agente antibacteriano que inibe a atividade de FASN, podendo apresentar ação quimioterapêutica. O objetivo deste estudo foi avaliar as consequências da inibição de FASN pelo triclosan sobre os índices de proliferação, apoptose e produção das proteínas FASN, ErbB2, p27 e Skp2 pelas células SCC-9, derivadas de CECs bucais humanos, bem como verificar o efeito do triclosan durante a carcinogênese induzida pelo 4-NQO. A citometria de fluxo mostrou que o triclosan inibiu a proliferação das células SCC-9, com diminuição de 80% da fase S, e causou aumento da apoptose das células tratadas com 5 ?M e 10 ?M durante 48h. Os ensaios de western blotting revelaram aumento de FASN, discreta diminuição de ErbB2, aumento gradativo de p27 e diminuição de Skp2 nas células tratadas por 24h. Camundongos BALB/c foram tratados com 1000 p.p.m de triclosan na dieta, após e simultaneamente ao tratamento com 4-NQO. Após 28 semanas os camundongos tratados com triclosan após e simultaneamente ao 4-NQO apresentaram menor incidência de CECs em língua, 50% e 10% respectivamente, enquanto no grupo controle (4-NQO) a incidência foi de 100%. Os grupos tratados com triclosan e 4-NQO simultâneos por 24 semanas, não apresentaram CECs, enquanto no grupo controle a incidência de CECs foi de 40% (p = 0,01). A imunoistoquímica sugeriu menor expressão de FASN, ErbB2, Ki-67 e maior expressão de p27 nas displasias e CECs dos camundongos tratados com triclosan quando comparados aos controles (p = 0,05). Estes resultados sugerem que o bloqueio de FASN pelo triclosan pode ser uma alternativa quimiopreventiva e quimioterapêutica para os CECs bucais, reforçando os achados prévios de que os inibidores de FASN possuem ação antitumorigênica. / Abstract: Fatty acid synthase (FASN), the enzyme responsible for endogenous synthesis of fatty acids, presents overexpressed in several types of cancers being required for proliferation and survival of malignant cells. Triclosan is an antibacterial agent which inhibits the activity of FASN and can present chemotherapeutic action. The aim of this study was to assess the consequences of FASN inhibition by triclosan on the proliferation, apoptosis and production of FASN protein, ErbB-2, p27 and Skp2 by SCC-9 cell line derived from human oral squamous cell carcinoma, and evaluates the effect of triclosan during carcinogenesis 4-NQO-induced in mice. Flow cytometry showed that triclosan inhibited the proliferation of SCC-9 cells, and there was 80% reduction of S phase, and increased rates of apoptosis of cells treated with 5 ?M and 10 ?M by 48 hours. Western blotting assays revealed increase in FASN, mild reduction of ErbB2, gradual increase of p27, and decrease of Skp2 in cells treated for 24 hours. In the murine model BALB/c mice they were treated with 1000 p.p.m of triclosan dietary, simultaneously and after treatment with 4-NQO. Over a period of 28 weeks the mice treated with triclosan post and simultaneously treatment with 4-NQO showed lower incidence of tongue carcinomas, 50% and 10% respectively. In the control group (4-NQO) all mice developed carcinomas. The mice treated with simultaneously triclosan and 4-NQO by 24 weeks did not develop carcinomas, whereas in the control group the incidence of carcinomas was 40% (p = 0.01). Immunohistochemical suggested lower expression of FASN, ErbB-2, Ki-67, and higher expression of p27 in dysplasia and carcinomas of mice treated with triclosan when compared to controls (p = 0.05). These results suggest that blockade of FASN by triclosan may be an alternative for chemoprevention and chemotherapy of oral SCC supporting previous findings that inhibitors of FASN have antitumorigenic action. / Doutorado / Patologia / Doutor em Estomatopatologia

Orientador: Ricardo Della Coletta / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-18T03:02:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bitu_CarolinaCavalcante_D.pdf: 12909729 bytes, checksum: c5ca376c5fe8c4d1424a81763646b013 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Os membros da família HOX de genes homeobox são classicamente conhecidos por regular a proliferação e a diferenciação celular durante o desenvolvimento embrionário. Contudo, inúmeros estudos demonstraram uma expressão alterada de alguns membros desta família em neoplasias, incluindo melanomas, leucemias e cânceres de cólon, pulmão, rim e próstata. Estudos em nosso laboratório caracterizaram o perfil de expressão dos 39 genes da família HOX em amostras orais de tecido normal e carcinoma espinocelular (CEC), identificando alguns genes diferencialmente expressos. Dentre estes genes estavam HOXA1 e HOXB7. Interessantemente, as expressões aberrantes de HOXA1 e/ou HOXB7 em neoplasias malignas foram relacionadas a um controle da proliferação, desdiferenciação, invasão e efetividade no reparo do DNA. Os objetivos deste estudo foram compreender os efeitos da superexpressão e da neutralização dos genes HOXA1 e HOXB7 na modulação dos principais eventos biológicos associados aos fenótipos tumorais e determinar o valor prognóstico da expressão destes genes para pacientes afetados por CEC oral. Para alcançar estes objetivos, construímos clones da linhagem celular de queratinócitos normais HaCAT superexpressando os genes HOXA1 (HaCAT-HOXA1) ou HOXB7 (HaCAT-HOXB7), inibimos a expressão endógena destes genes na linhagem de CEC oral SCC-9 por meio da técnica de RNA de interferência e realizamos análise imunohistoquímica em 132 amostras de CEC oral para correlacionar às positividades de HOXA1 e HOXB7 com as características clínico-patológicas dos tumores. Nossos resultados revelaram que as superexpressões de HOXA1 e HOXB7 significantemente promoveram a proliferação das células HaCAT, enquanto que a inibição destes genes nas células SCC-9 resultou em uma dramática inibição da proliferação. As superexpressões de HOXA1 e HOXB7 não foram capazes de modular as taxas de apoptose, adesão e invasão, a expressão de marcadores da transição epitéliomesênquima (TEM) e não promoveu crescimento independente de ancoragem (softagar). Tumores classificados com expressão elevada de HOXA1 demonstraram estádio clínico T e N mais avançados, menor diferenciação das células neoplásicas e elevado potencial proliferativo. Pacientes apresentando tumores com elevada positividade para HOXA1 demonstraram uma sobrevida de 5 anos significantemente menor que pacientes com tumores demonstrando baixa positividade para HOXA1 (p=0,026). A expressão imuno-histoquímica de HOXB7 correlacionou significantemente com consumo de bebidas alcoólicas, estádio clínico N, infiltração vascular e potencial proliferativo dos tumores. Expressão elevada de HOXB7 foi também significantemente correlacionada com menor sobrevida global (p=0,009) e uma tendência para menor sobrevida livre de doença foi observada para pacientes com tumores classificados com forte expressão de HOXB7 (p=0,083). Uma positiva correlação entre as expressões de HOXA1 e HOXB7 foi evidenciada (rs=0,25 e p=0,008). Em conclusão, nossos resultados sugerem que as superexpressões dos genes HOXA1 e HOXB7 podem contribuir para a progressão tumoral por promoverem a proliferação das células tumorais e indicam que HOXA1 e HOXB7 podem ser determinantes importantes do prognóstico de pacientes com CEC oral / Abstract: HOX genes are master regulators of cellular proliferation and differentiation during embryogenesis. However, some members of the HOX family have been shown to be dysregulated in malignancies, including melanomas, leukemias and cancers of colon, lung, kidney and prostate. In previous studies we have described the expression profile of all 39 HOX genes in oral samples from normal mucosa and squamous cell carcinoma (SCC), identifying some differentially expressed. Among those were HOXA1 and HOXB7. The aberrant expression of both genes has been related with the rgulation of proliferation, differentiation and invasion, and with the control of the DNA repair effectiveness. The goals of this study were to verify the role of HOXA1 and HOXB7 on modulation of tumor-associated phenotypes and to determine whether their expressions are associated with clinicopathological features of the tumors. To achieve our goals, we generated clones from HaCAT human epithelial cell line overexpressing HOXA1 (HaCAT-HOXA1) or HOXB7 (HaCAT-HOXB7), inhibited the endogenous levels of these genes in the SCC-9 human oral carcinoma cell line by interference RNA (iRNA), and performed immunohistochemical analysis in 132 oral SCC samples. Our results demonstrated that both HOXA1 and HOXB7 overexpression in HaCAT cells promote proliferation, whereas downregulation of HOXA1 and HOXB7 endogenous levels in SCC-9 cells decreases it. HOXA1 and HOXB7 overexpression did not influence apoptosis, cellular adhesion and invasion, expression of epithelial-mesenchymal transition (EMT) markers and also did not promote anchorage-independent growth (softagar). High number of HOXA1-positive cells significantly correlated with T and N stage, tumor cellular differentiation and proliferative potential of the tumors. Patients whose tumors contained high number of HOXA1-positive cells had shorter overall survival in 5 years than patients with low positivity of this protein (p=0.026). The immunohistochemical expression of HOXB7 was significantly correlated to alcohol consumption, clinical N stage, vascular infiltration and tumor proliferative potential. High expression of HOXB7 was also significantly correlated to shorter overall survival (p=0.009), and a tendency towards shorter disease-free survival was observed in patients with tumors containing elevate HOXB7 expression (p=0.083). A positive correlation between HOXA1 and HOXB7 immunohistochemical expression was observed (rs=0.25, p<0.008). In conclusion, our results suggest that overexpression of HOXA1 and HOXB7 can contribute to tumor progression by increasing tumor cell proliferation and indicate that both HOXA1 and HOXB7 may be important determinants of OSCC patient's prognosis / Doutorado / Patologia / Doutor em Estomatopatologia

Orientadores: Alan Roger dos Santos Silva, Ana Lúcia Carrinho Ayroza Rangel / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-26T01:17:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nakayama_GustavoKiyosen_D.pdf: 874889 bytes, checksum: 8f79039d9456156e4992c44ba80b30c1 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Pacientes em tratamento para o câncer de cabeça e pescoço frequentemente apresentam sequelas bucais oriundas da radioterapia. Neste contexto, o trismo pode gerar dificuldade de alimentação, perda de peso, dificuldade de fala, déficit de higiene bucal e diminuição da qualidade de vida. Este estudo teve como objetivo determinar a incidência de trismo induzido pela radioterapia em pacientes que foram tratados por carcinoma espinocelular (CEC) de cabeça e pescoço. Trinta pacientes foram divididos em 3 grupos; Grupo 1: Pacientes submetidos ao tratamento por meio de radioterapia modalidade bidimensional (RDT2D); Grupo 2: Pacientes submetidos ao tratamento por meio de radioterapia modalidade tridimensional (RDT3D) e Grupo 3 (controle). Medições prospectivas de abertura bucal foram realizadas semanalmente durante o tratamento e em dois períodos após a conclusão da radioterapia por meio da escala TheraBite®, seguindo os critérios de Dijkstra et al., 2006 e Kent et al., 2008. Foi identificada incidência global de 35% de trismo dentre os 20 pacientes com CEC de cabeça e pescoço, sendo de 30% nos pacientes tratados por RDT2D e de 40% naqueles tratados por RDT3D. Nenhum paciente do grupo controle desenvolveu trismo. A topografia tumoral mais frequentemente associada ao trismo foi a orofaringe, com tendência de diminuição da máxima dimensão vertical diretamente relacionada ao aumento da quantidade de radiação direcionada ao tumor primário e aos estágios clínicos mais avançados da doença. A modalidade de radioterapia (RDT), a associação da RDT com a quimioterapia e o estado odontológico dos pacientes não mostraram impacto significante no risco de desenvolvimento de trismo. Trismo associado à RDT2D se desenvolveu mais precocemente do que à RDT3D e o desenvolvimento do trismo parece estar restrido ao período do tratamento radioterápico, sem progressão relevante da limitação de abertura bucal após a conclusão da RDT. Palavras-chave: Carcinoma espinocelular, Câncer Oral, Radioterapia, Trismo / Abstract: Patients undergoing treatment for head and neck cancer often develop oral toxicities relataed to radiotherapy. In this context, trismus can lead to feeding difficulties, weight loss, impaired speech, limited oral hygiene and decreased quality of life. This study aimed to determine the incidence of trismus induced by radio-therapy in patients who have undergone treatment for head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC). Thirty patients were distributed into 3 groups; Group 1: Patients submitted to bidimensional radiotherapy (2DRDT); Group 2: Patients submitted three-dimensional radiotherapy (3DRDT) and Group 3 (control). Prospective measurements of the mouth-opening hability were performed weekly during radiation therapy and in two different time points after the conclusion of radiotherapy using the criteria proposed by Dijkstra et al., 2006 and Kent et al., 2008 with the assistance of the scale TheraBite®. The global incidence of trismus was 35%, of which 30% affected RDT2D patients and 40% RDT3D. None of the patients from the control group developed trismus. Advanced tumors of the oropharynx were those more often associated with the development of trismus and there was a tendency to the reduction of the mouth-openning ability directly related to the increase in the amount of radiation delivered to the primary tumor. Radiotheray modality, association with chemotherapy and dental status of patients were not significantly associated to an increased risk for developing trismus. The onset of 2DRDT-related trismus developed earlier than 3DRDT-related trismus and the development of trismus was mainly observed during the course of radiotherapy in both groups, with no relevant signs of trismus progression after the conclusion of radiotherapy. Key Words: Squamos Cell Carcinoma, Oral Cancer, Radiotherapy, Trismus / Doutorado / Patologia / Doutor em Materiais Dentários

Orientadores: Ricardo Della Coletta, Ana Lucia Carrinho Ayroza Rangel / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-26T02:30:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sawazaki-Calone_Iris_D.pdf: 3631303 bytes, checksum: c364dea5f91c7e7903cb384af31b128a (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: O carcinoma espinocelular (CEC) representa cerca de 95% de todas as neoplasias malignas que acometem a cavidade oral. Rotineiramente o tratamento e prognóstico desta doença são baseados na localização do tumor e no sistema TNM de classificação dos tumores malignos, no entanto há uma grande variação no comportamento biológico entre tumores no mesmo sítio e dentro do mesmo estadio clínico. Diante deste problema, vários sistemas de gradação histopatológica foram propostos para determinar o prognóstico e o plano do tratamento de pacientes com carcinoma espinocelular (CEC) oral. Este estudo avaliou quatro sistemas de gradação histopatológica ¿ (1) sistema OMS (Organização Mundial de Saúde), (2) sistema MG (gradação de malignidade de margens invasivas profundas), (3) modelo HR (modelo de risco histológico) e (4) escore de risco BD (ninho de células tumorais e profundidade de invasão) ¿ e comparou com dados clínico-patológicos e sobrevida em uma amostra de 113 pacientes com CEC oral primário, excluindo lábios. Os critérios de inclusão foram: pacientes diagnosticados e tratados entre 1998 e 2008, dados clínicos e demográficos completos, tratamento baseado em cirurgia radical com ou sem radioterapia e/ou quimioterapia pós-operatória e disponibilidade de todos os blocos de parafina. Associações significativas com sobrevida na análise univariada foram observadas com todos os sistemas de gradação histopatológica, excetuando o sistema MG. No entanto, aplicando a análise multivariada de COX, apenas o escore de risco BD foi significativamente associado com sobrevida livre de doença como um marcador prognóstico independente. A idade (>56 anos), o tamanho do tumor (estágio T3/T4) e a presença de metástase regional (estágio N+) foram também apontados como marcadores independentes da sobrevida dos pacientes. Nenhuma correlação clara entre os quatro sistemas de gradação foi observada aplicando o teste de correlação de Spearman. Os resultados do presente estudo revelaram uma associação significativa entre o escore de risco BD e a evolução clínica dos pacientes com CEC oral, reforçando a importância deste novo sistema de gradação histopatológica como possível ferramenta prognóstica no pós-operatório / Abstract: Squamous cell carcinoma (SCC) represents almost 95% of all malignant tumors that affect the oral cavity. Routinely the treatment and prognosis of this disease are based on its location and in the TNM classification of malignant tumors, however there is a great variation in the biological behavior among tumors at same location and clinical stage. In the view of those difficulties, several histopathological grading systems were proposed in order to determine the prognostic and the treatment plan of patients with oral squamous cell carcinoma (OSCC). This study evaluated four histopathological grading systems ¿ (1) WHO (World Health Organization) system, (2) MG (malignancy grading of the deep invasive margins) system, (3) HR (histological risk ) model and (4) BD (tumor budding and depth of tumor invasion) risk score ¿ and compared with clinicopathological data and survival in a sample of 113 patients with primary OSCC, excluding lips. The inclusion criteria included who were diagnosed and treated from 1998 to 2008, complete demographic and clinical data, treatment based on radical surgery with or without postoperative radiotherapy and/or chemotherapy, and availability of all paraffin-embedded blocks. Significant associations with survival were observed for all histopathological grading systems, with exception of the MG system. However, when multivariate regression analysis was applied, only BD risk score was significantly associated with disease-free survival as an independent prognostic marker. Age (>56 years), tumor size (T3/T4 stage) and presence of regional metastasis (N+ stage) were also independent markers of reduced survival. No clear correlation between the four grading systems was observed applying the Spearman¿s rank test. The results of the present study revealed a significant association between BD risk score and outcome of OSCC patients, reinforcing the importance of this new histopathological grading system as a possible postoperative prognostic tool / Doutorado / Patologia / Doutora em Estomatopatologia

Orientador: Ricardo Della Coletta / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-23T10:39:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rodrigues_PriscilaCampioni_M.pdf: 27970537 bytes, checksum: eb1771ac3c81d257542caac03773b5c0 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Embora várias características histopatológicas e moleculares tenham sido propostas como fatores prognósticos do carcinoma espinocelular (CEC) oral, nenhuma ainda é utilizada rotineiramente. Estudos prévios demonstraram que a presença de miofibroblastos no estroma de CECs orais é associada a um pior prognóstico e que pacientes jovens apresentam tumores com comportamento biológico distinto quando comparado ao de pacientes idosos. Os objetivos deste estudo foram 1) avaliar a influência das características demográficas, clínicas e histopatológicas no prognóstico dos CECs de língua, 2) avaliar a frequência de miofibroblastos em displasias orais (leve, moderada e severa), CECs (lesões bem diferenciadas e pobremente diferenciadas) e carcinomas verrucosos (uma variante bem diferenciada do CEC oral) e comparar a frequência destas células com hiperplasias fibrosas (HF) e 3) comparar a densidade de miofibroblastos entre CEC orais de pacientes jovens (<40 anos) e pacientes idosos (>45 anos). Para determinar a influência das características clínicas, demográficas e histopatológicas (risco histológico de Brandwein-Gensler) no prognóstico dos CECs de língua, um estudo retrospectivo com 202 pacientes foi realizado. A detecção de miofibroblastos foi realizada por reações de imuno-histoquímica para a isoforma ? da actina de músculo liso (?-SMA) em HFs com epitélio normal (n=29), displasias (n=69), CECs bem diferenciados (n=19), CECs pobremente diferenciados (n=18) e carcinomas verrucosos (n=8). A comparação entre CECs de pacientes jovens e de pacientes idosos foi realizada em um segundo grupo contendo 29 amostras pareadas para localização, estádio clínico e graduação histológica. A análise multivariada de Cox revelou que estádio T, estádio N e recorrência foram fatores independentes das sobrevidas global, específica e livre de doença para os pacientes com CEC de língua. O risco histológico não correlacionou com o prognóstico destes pacientes. HFs e displasias orais não apresentam miofibroblastos, enquanto que 62,2% dos CECs demonstraram miofibroblastos no estroma tumoral. A presença de miofibroblastos foi significantemente mais frequente nos CECs pobremente diferenciados em comparação aos CECs bem diferenciados ou aos carcinomas verrucosos. Não houve diferença estatisticamente significante entre a densidade de miofibroblastos nos CECs de pacientes jovens e idosos. Os resultados deste estudo demonstram que as características clínicas são melhores fatores preditivos para o prognóstico do CEC de língua do que o risco histológico e que a presença de miofibroblastos não é associada com displasias orais, mas tumores pobremente diferenciados apresentam uma densidade significantemente maior que tumores bem diferenciados. O estudo revelou também que a presença de miofibroblastos no estroma dos CECs de língua não diferencia entre tumores em pacientes jovens e idosos / Abstract: Although several histopathological and molecular features have been proposed as prognostic factors of the oral squamous cell carcinoma (OSCC), any is routinely used. Previous studies have demonstrated that the presence of myofibroblasts in the stroma of the OSCC is associated with a worse prognosis and that young patients have tumors with a particular biological behavior when compared with older patients. The aims of this study were 1) to evaluate the influence of the demographics, clinical and histopathological features in the prognostic of SCC of tongue, 2) to determine the frequency of myofibroblasts in the oral dysplasias (mild, moderate and severe), OSCC (well differentiated and poorly differentiated) and verrucous carcinoma (a well differentiated variant of the OSCC) and compare the density of this cell with fibrous hyperplasias and 3) to compare the density of myofibroblasts among OSCC of young patients (< 40 years) and older patients (> 45 years). To determine the influence of the clinical, demographic and histopathological (histologic risk of Brandwein-Gensler) features in the prognostic of SCCs of tongue, a retrospective study was realized with 202 patients. Myofibroblasts were detected by immunohistochemical analysis of ? smooth muscle actin (?-SMA) in fibrous hyperplasia with normal epithelium (n=29), oral dysplasias (n=69), well differentiated OSCC (n=19), poorly differentiated OSCC (n=18) and verrrucous carcinoma (n=8). The comparison between OSCC affecting young patients and older patients was realized in a second group containing 29 samples paired to localization, clinical stage and histological differentiation. Cox multivariate analysis revealed that the T stage, N stage and recurrence were independent factors of overall survival, disease-especific survival and disease-free survival. The histologic risk was not correlated with the prognostic of the patients. Fibrous hyperplasia and oral dysplasias did not show myofibroblasts in the stroma. The presence of myofibroblasts was higher in the poorly differentiated OSCCs when compared with well differentiated OSCC or with verrucous carcinomas. No significant differences existed between the presence of stromal myofibroblasts of OSCC affecting young and old individuals. The results of this study demonstrated that the clinical features were best predictive factors to the SCC of tongue prognostic than the histologic risk, and the presence of myofibroblasts was not associated with the oral dyspasias. However the poorly differentiated tumors demonstrated a higher expression of myofibroblasts than well differentiated tumors. The study also revealed that the presence of myofibroblasts in the OSCC not show differences among young and older patients / Mestrado / Patologia / Mestra em Estomatopatologia

Intermittent blood flow in tumour microvasculature is believed to contribute to heterogeneity in tumour oxygen delivery; transient vessel nonperfusion is thought to result in acutely hypoxic cells resistant to conventional radiotherapy. This thesis describes three main areas of work: (1) the development of a histologic method capable of detecting intermittent blood flow in experimental tumours at the single vessel level; (2) the quantification and characterization of tumour blood flow fluctuations in the murine SCCVII carcinoma; and (3) the modification of tumour blood flow and the reduction of flow heterogeneity using vasoactive drugs. A double staining technique involving the sequential intravenous injection of two fluorescent vascular markers was used to detect transient episodes of tumour vessel nonperfusion. The stains employed were Hoechst 33342 and the carbocyanine dye, DiOC₇(3), both of which have short (< 3 minutes) circulation half-lives and preferentially stain cells adjacent to perfused blood vessels. When injections of the vascular markers are separated by some interval, each stain defines only those tumour vessels which were perfused during the few minutes immediately post-injection; thus, two "pictures" of tumour microvascular flow are obtained and tumour vessels subject to periods of nonperfusion can be easily visualized in frozen sections since they are outlined by one stain but not the other. Using the double staining technique, in which Hoechst 33342 and then DiOC₇(3) are administered intravenously 20 minutes apart to unrestrained C3H/He mice, staining mismatch (indicative of transient vessel nonperfusion) is regularly observed in subcutaneous SCCVII carcinoma. Vessels stained with DiOC₇(3) only (reperfusion of previously nonperfused vessels) or with H33342 only (nonperfusion of previously perfused vessels) are observed in approximately equal numbers. The percentage of tumour vessels subject to intermittent flow is a function of SCCVII tumour size: tumours ≤100 mg do not exhibit statistically significant amounts of mismatch. At sizes > 100 mg, overall staining mismatch is significantly increased over background levels and maximum mismatch is observed at tumour sizes >400 mg (8.6 ±2.9%). In most tumours, transient vessel nonperfusion is more pronounced in central tumour regions. In addition to mismatch observed in individual vessels, large "patches" of unequal staining are also seen. Anaesthesia or restraint do not significantly influence intermittent blood flow. The above information suggests that transient episodes of tumour vessel nonperfusion occur as a consequence of flow reduction in a feeding vessel; vessels in central regions of large tumours may be susceptible to collapse as a result of elevated tumour interstitial pressure. In the SCCVII tumour, a small number of peripheral vessels possess vascular smooth muscle and thus may be capable of vasomotor activity. The importance of perfusion pressure in the control of tumour microcirculatory flow was examined using vasoactive drugs. Hydralazine, a vasodilator which lowers blood pressure, causes a profound reduction in tumour RBC flow to 8.7 + 6.4% of pretreatment values in unanaesthetized mice. The drug causes collapse of central tumour vessels: following a dose of 10mg/kg intravenously, 36±16% of vessels are completely nonperfused, as detected using the double staining technique. Conversely, elevation of blood pressure using the vasoconstrictor angiotensin II results in a 2-3x increase in tumour blood flow. In addition, angiotensin II infusion significantly reduces the number of tumour vessels subject to transient nonperfusion from 8.1 % to 2.0%. However, intermittent blood flow in the SCCVII carcinoma can also be influenced by nonvasoactive drugs: nicotinamide, the amide form of vitamin B3, reduces episodes of transient nonperfusion. In summary, intermittent blood flow has been characterized in a transplanted murine squamous cell carcinoma using a novel fluorescent double staining method which allows the detection of flow fluctuations in solid tumours at the microvascular level. If transient episodes of nonperfusion occur in human tumours and result in impaired oxygen or drug delivery, then such flow fluctuations may be an important factor limiting tumour cure or local control by radiotherapy or chemotherapy. / Medicine, Faculty of / Pathology and Laboratory Medicine, Department of / Graduate

Orientador: Ana Paula de Souza Pardo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-27T07:52:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Portinho_Danielle_D.pdf: 3218538 bytes, checksum: 09966eb0179669b7c0b2ceee93e7f695 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: A associação entre inflamação e câncer vem sendo há tempo estudada, havendo atualmente fortes evidências que mostram o microambiente inflamatório como fator de risco para tumorigênese. Dentre os tipos de câncer mais frequentes, o câncer de boca ocupa a sexta colocação como maior causa de óbitos em todo o mundo. Os fatores que levam ao aparecimento do câncer oral são variados, entretanto existe dependência de um acúmulo de mutações as quais levam a alterações genéticas e epigenéticas das células afetadas, sendo que estas alterações influenciam diretamente no prognóstico da doença. Nos últimos anos, o estudo das alterações epigenéticas relacionadas aos diversos tipos de câncers vem se destacando, havendo marcadores epigenéticos já descritos para diferentes tipos de tumores. Dentre as alterações epigenéticas mais estudadas está a metilação do DNA que acontecem normalmente em regiões com grandes concentrações de citocina que precedem guanina (CpG). Estas regiões ricas em dinucleotídeos CpGs são denominadas ilhas CG. Ilhas CG são frequentes em regiões promotoras dos genes, sendo a metilação um mecanismo de controle do nível transcricional. Ilhas CGs metiladas na região promotora são esperadas em genes pouco expressos, podendo haver até mesmo o completo silenciamento da expressão do gene. No caso de genes supressores de tumor, pode provocar o aparecimento e o descontrole no crescimento tumoral. Assim, o objetivo deste estudo foi analisar o padrão de metilação do DNA em sequências LINE1 e nos genes supressores tumorais: SFRP1, SFRP2 e TP73, em amostras de gengiva coletadas de pacientes, pacientes com periodontite crônica e pacientes diagnosticados com carcioma espinocelular (CEC). A metilação do DNA foi analisada utilizando-se a metodologia COmbined Bisulfite Restriction Analysis (COBRA) em tecidos homogeneizados e microdissecados. A análise de expressão gênica dos genes foi realizada pela técnica qPCR amostras de tecido gengival e CEC. Os resultados obtidos pelas análises COBRA evidenciaram um desequilíbrio no estado de metilação todo DNA anto nos tecidos inflamados quanto nos tumorais. Entretanto, as regiões CpG analisadas não demonstraram estar diretamente relacionadas com o nível de expressão gênica. Adicionalmente, os resultados das análises da metilação global (LINE1) do tecido homogeneizado em comparação com as amostras microdissecadas indicam que os dados obtidos podem ser contraditórios aos reais podendo interferir no prognóstico do paciente. Esta contradição possivelmente se deve a contaminação do tecido tumoral por tecidos adjacentes a ele. As análises estatísticas dos resultados foram realizadas pelos testes Kruskall-Wallis e correlação de Pearson ao nível de significância de 5%. Alterações no padrão de metilação do DNA dos genes estudados são encontradas tanto em tecidos inflamados quanto em amostras de câncer bucal. A metodologia de escolha para análise destes tecidos pode influenciar nos resultados obtidos, gerando falsos negativos e consequentemente comprometendo o tratamento da doença / Abstract: The association between inflammation and cancer has always been sought by researchers. Nowadays, there are evidences of the role of the inflammatory microenvironment in tumorigenesis. Among the most common types of cancer, oral cancer is the sixth type that causes more deaths worldwide. The factors that lead to the development of an oral cancer are varied, depending on an accumulation of mutations that lead to genetic and epigenetic alterations of the affected cells, and these changes directly influence the prognosis of the disease. In recent years epigenetic have been widely studied in this field of researchs, and several genes have been described as markers for different types of tumors. Among the most studied epigenetic changes there is the DNA methylation in areas with large concentrations of the cytokine that precedes guanine (CpG), these regions are called CpG islands. GpC islands are fairly common in the promoter regions of the genes, being the methylation a control mechanism of gene level transcripts and it can even silence the expression of a gene. In the case of tumor suppressor genes this silencing can lead to uncontrolled tumor growth. The aim of this study was to analyse the DNA methylation status of LINE1 sequences and specific genes (SFRP1, SFRP2 e TP73) from human tissue collected from gingival normal tissue from patients underwent aesthetic surgery, patients with cronic periodontitis and patients with oral squamous cell carcinoma (OSCC). The extracted DNA was analysed by Combined Bisulfite Restriction Analysis (COBRA) submitting the DNA to bisulfite conversion by MethylSEQrBisulfiteConversion Kit from homogenized and microdissected tissues. Through qPCR technique, samples from gingival tissue and OSCC were subjected to RNA expression analysis of candidate genes. The results of COBRA analysis of genes exhibited an imbalance in methylation state of inflamed and tumor tissues. However, the CpG regions analyzed have not shown to be directly related to the level of expression of these genes. The results of the analysis of the global methylation (LINE1) of the homogenized tissue compared with microdissected samples showed that the obtained data may be contradictory to the real one and may interfere in the prognosis of the patient. This inconsistency is probably due to contamination of tumor tissue by adjacent tissues. Statistical analysis of results was performed by Kruskal-Wallis test and Pearson correlation at the 5% confidence level. Changes in DNA methylation pattern of the genes studied are found in both inflamed tissues as oral cancer samples. The choice of methodology for the analysis of these tissues can influence results, and consequently generating false negative results affecting the treatment of disease / Doutorado / Histologia e Embriologia / Doutora em Biologia Buco-Dental