O Carcinoma Epidermóide do Esôfago (CEE) é uma das neoplasias malignas mais agressivas e letais do trato digestivo. Seu diagnóstico frequentemente ocorre em indivíduos com doença avançada, sendo baixas as possibilidades de cura. O Rio Grande do Sul é o estado brasileiro com maior número de diagnósticos, com estimativa de contribuir com 10% dos casos do país em 2008, atingindo uma incidência de 19,73 casos novos/100.000 habitantes do sexo masculino e 7,58 novos casos/100.000 habitantes do sexo feminino. O CEE permanece o tipo mais comum com mais de 80% dos casos. Tentativas de diagnóstico precoce do CEE em indivíduos sob risco têm sido feitas utilizando-se citologia coletada com balões abrasivos. Porém, tal técnica tem demonstrado que, apesar de obter boas amostras de células da mucosa esofágica, apresenta sensibilidade abaixo do esperado para sua aplicação na rotina. No presente estudo os autores se propõem estudar a prevalência da expressão da proteína p53 em material citológico coletado pelo Balão RS em indivíduos sob risco para CEE, além de verificar sua acurácia diagnóstica para rastreamento de CEE. Foram incluídos indivíduos assintomáticos que apresentassem ao menos um dos fatores de risco: a) consumo de mais de 40 gramas de etanol/dia por mais de 10 anos; b) consumo de mais de 10 cigarros/dia por mais de 10 anos; c) uso diário de chimarrão por mais de 10 anos; d) diagnóstico prévio de carcinoma epidermóide do trato aéro-digestivo superior (TADS). Foram excluídos indivíduos com: a) recusa em participar do estudo; b) agitação psicomotora que impossibilitasse a passagem do balão; c) varizes esofágicas; d) disfagia progressiva; e) hepatopatia crônica descompensada; f) hemorragia digestiva alta nos últimos 30 dias; g) sinais de encefalopatia metabólica; h) diagnóstico de divertículo de Zenker. Entre março de 2006 e dezembro de 2007, 171 indivíduos foram avaliados com citologia esfoliativa pelo Balão RS e as biópsias esofágicas guiadas pela cromoendoscopia com solução de Lugol. O material citológico foi analisado após coloração de Papanicolaou e imunocitoquímica p53. O material de biópsia foi corado pela Hematoxilina/Eosina e imunoistoquímica p53. Oito sujeitos foram excluídos (4,7%) por apresentarem material citológico inadequado coletado pelo Balão RS. A amostra de 163 pacientes consistiu de 150 homens (92%), com idade entre 28 e 84 anos (média= 52,6 ± 12 anos). Tabagismo ativo foi observado em 141 pacientes (86,5%), com mediana de carga tabágica de 39,5 maços/ano. Alcoolismo ativo foi observado em 114 indivíduos, com consumo de destilados em 78,1% dos casos e quantidade mediana de 320 gramas de álcool/dia. Alcoolismo e tabagismo ativos concomitantes foram observados em 63,8% da amostra estudada (104 sujeitos). Consumo de chimarrão diário foi observado em 69,9% no grupo estudado. Tabagismo, consumo de álcool e consumo de chimarrão em bases regulares foram identificados de maneira concomitante em 77 indivíduos (47,2%). Carcinoma do TADS foi o fator de inclusão em 42 pacientes (25,8%). A utilização do Balão RS foi fácil e rápida, sendo bem tolerado sem complicações. Os resultados dos exames citológicos foram os seguintes: 147 normais (90,2%), 10 alterações celulares reativas (6,1%), 3 alterações escamosas de significado indeterminado (ASCUS) (1,8%), 1 lesão intra-epitelial de baixo grau (LISL) (0,6%), 1 lesão intra-epitelial de alto grau (HSIL) (0,6%) e 1 carcinoma escamoso (0,6%). A cromoendoscopia com Lugol apresentava áreas descoradas em 65 indivíduos (40,1%). As áreas coradas apresentaram diagnóstico histopatológico normal em 110 (67,5%) e esofagite em 53 indivíduos (32,5%). Dos 65 pacientes com áreas descoradas foi atribuído diagnóstico anatomopatológico normal em 23 (35,4%), esofagite em 39 (60%), displasia de alto grau em 1 (1,5%), carcinoma in situ em 1 (1,5%) e carcinoma invasivo em 1 (1,5%). A citologia positiva (ASCUS, LSIL, HSIL, Carcinoma) coletada pelo Balão RS obteve sensibilidade de 66,7% (IC95% 22,0 – 93,6), especificidade de 97,5% (IC95% 96,7 – 98,0), acurácia de 96,9% (IC95% 95,3 – 97,9), valor preditivo positivo de 33,3% (IC95% 11,0 – 46,8) e negativo de 99,4% (IC95% 98,5 – 99,9) para identificação de lesões neoplásicas histológicas. A imunoistoquímica com p53 foi executada em 161 indivíduos, sendo que a expressão desta proteína foi positiva em 38 indivíduos (23,6%), com acometimento da camada basal em 29 (76,3%), camada média em 8 (21,1%) e camada superficial em 1 (2,6%). Não houve expressão imunocitoquímica da proteína p53 no material citológico obtido com Balão RS nesta amostra de indivíduos sob risco de CEE. Podemos concluir que, apesar do Balão RS ter apresentado um bom desempenho na coleta de amostras citológicas do esôfago, a negatividade da expressão da imunocitoquímica da proteína p53 em todas as amostras sugere que seu uso não contribui para a melhora da efetividade diagnóstica da citologia. / Squamous Cell Carcinoma of the Esophagus (SCCE) is one of the most aggressive and lethal digestive cancers. Unfavorable prognosis is common due to late diagnosis, resulting in low chances of curative treatment. Rio Grande do Sul is the leading Brazilian state in new cases, with an estimated 2008 prevalence of 19.73 new cases/100,000 male inhabitants and 7.58 new cases/100,000 female inhabitants. SCCE remains the most frequent histological type, contributing with 80% of the cases. Exfoliative cytology obtained with abrasive balloons has been used to attempt early diagnosis of SCCE. Although this technique collects good cytological samples from the esophageal mucosa, the low sensitivity of cytology precludes its use in clinical practice. In the current work the author studied the prevalence of p53 expression in cytologic smear collected by the RS Balloon in high risk individuals, and tested its yield in the cytological screening of SCCE and its precursor lesions. Asymptomatic individuals with at least one of the following risk factors for SCCE were included: a) current alcohol drinking (more than 40 g of alcohol/day); b) tobacco smoking (>10 cigarettes/day); c) maté drinking for more than 10 years; d) previous head and neck cancer. Exclusion criteria were: a) refusal to participate in the study; b) agitation that precludes the collection of cytologic material with the RS Ballon; c) esophageal varices; d) progressive dysphagia; e) unstable cirrhosis; f) upper digestive tract hemorrhage in the previous 30 days; g) metabolic encephalopathy; h) previous diagnosis of Zenker’s diverticulum. Between march/2006 and december/2007, 171 individuals were recruited and submitted to exfoliative cytology with RS Balloon, and esophageal biopsies guided by Lugol chromoendoscopy. Cytology samples were analyzed after Papanicolaou staining and p53 immunostaining. Biopsy samples were analyzed after Hematoxilin/Eosin staining and p53 immunostaining. RS Balloon cytological samples were inadequate in eight (4.7%) individuals who were excluded from the analysis. The final sample consisted of 163 individuals where 150 were male (92%), with ages ranging between 28 and 84 years old (mean 52.6 ± 12.0). Current tobacco smoke was observed in 141 patients (86.5%), with a median of 39.5 pack/year. Current alcoholism was found in 114 individuals, who consumed mainly distilled beverages, (median = 320 g of alcohol/day). Concomitant alcoholism and tobacco smoking were observed in 104 (63.8%) subjects. Daily Maté consumption was observed in 69.9%. Current smoking, daily Maté and alcohol drinking were observed in 77 individuals (47.2%). Previous head and neck cancer was the inclusion criterion in 42 patients (25.8%). Using the RS Balloon was quick, easy and well tolerated by patients (no complications observed). The cytological results were: 147 normal (90.2%), 10 benign reactive cellular changes (6.1%), 3 atypical squamous cells of undetermined significance (ASCUS) (1.8%), 1 low grade squamous intraepithelial lesion (LISL) (0.6%), 1 high grade squamous intraepithelial lesion (HSIL) (0.6%) and 1 squamous carcinoma (0.6%). Lugol chromoendoscopy showed unstained areas in 65 patients (40.1%). Biopsies from normally stained areas were diagnosed as normal in 110 (67.5%) and esophagitis in 53 (32.5%) individuals. Biopsies from unstained areas were diagnosed as normal in 23 (35.4%), esophagitis in 39 (60%), high grade dysplasia in 1 (1.5%), carcinoma in situ in 1 (1.5%), and invasive carcinoma in 1 (1.5%). Positive cytology (ASCUS, LSIL, HSIL, Carcinoma) collected by the RS balloon had a sensitivity of 66.7% (IC95% 22.0 – 93.6), a specificity of 97.5% (IC95% 96.7 – 98.0), a positive predictive value of 33.3% (IC95% 11 – 46.8), a negative predictive value of 99.4% (IC95% 98.5 – 99.9) and accuracy of 96.9% (IC95% 95.3 – 97.9) for the diagnosis of histopathological neoplastic lesions. Immunohistochemical expression of p53 protein was analyzed in 161 individuals, out of which 38 (23.6%) were positive, with basal layer expression in 29 (76.3%), middle layer expression in 8 (21.1%) and superficial layer in 1 (2.6%). Immunocytochemical expression of p53 protein in cytologic smear was negative in all cytology samples. In summary, even though the RS Balloon collected adequate samples, the negative results of immunocytochemical expression of p53 protein suggest that its use does not contribute to improving the performance of conventional cytology of the esophagus in the screening for SCCE and its precursor lesions. XIV

O carcinoma espinocelular (CEC) de cabeça e pescoço é uma neoplasia maligna de prognóstico desfavorável e baixa taxa de sobrevida. Entender os processos biológicos envolvidos na carcinogênese poderá ser de extrema importância para o desenvolvimento de novas tecnologias de tratamento e melhora do prognóstico em pacientes acometidos pela doença. A maior causa de insucessos clínicos em termos de terapia e prognóstico em pacientes com câncer é a invasão tecidual e o desenvolvimento de potencial metastático. A migração celular é indispensável para a progressão tumoral e as células apresentam motores moleculares desempenhados especialmente pela família da Miosina II não muscular (MNMII). Codificadas por diferentes genes, existem três isoformas conhecidas em células de mamíferos (MNMIIA, MNMIIB, MNMIIC). As MNMIIs estão envolvidas em funções celulares como migração, adesão e citocinese. Sendo o entendimento da migração, adesão celular e citocinese fatores chave na progressão tumoral, e que o a invasão tecidual e o desenvolvimento de potencial metastático são essenciais na definição do prognóstico dos pacientes, o objetivo deste estudo foi descrever o perfil e exposição à fatores de risco como álcool e fumo dos pacientes diagnosticados com CEC de cabeça e pescoço, graduação histológica, parâmetros clínicos tumorais (TNM), padrão de expressão das isoformas de MNMII (MNMIIA, MNMIIB, MNMIIC) no centro do tumor, zona de invasão e tecido epitelial não neoplásico adjacente ao tumor, relacionando a expressão e localização dessas proteínas com os dados descritos bem como evolução dos pacientes após 5 anos de acompanhamento. De acordo com os resultados sugere-se que a MNMIIB expressa no EA possa indicar o potencial de metástase regional do CEC e a MNMIIC presente na zona de invasão tumoral (ZI) seja um fator predictor de prognóstico ruim da doença. Sendo assim, é possível propor que a avaliação de imunorreatividade da MNMIIB no EA e MNMIIC na ZI seja utilizada na análise das peças operatórias, como complemento à análise morfológica de rotina. / Squamous cell carcinoma (SCC) of the head and neck is a malignant neoplasm of poor prognosis and low survival rate. Understand the biological processes involved in carcinogenesis can be extremely important for the development of new treatment technologies and improved prognosis in patients affected by the disease. The major cause of clinical failure in terms of therapy and prognosis in cancer patients is the development of tissue invasion and metastatic potential. Cell migration is essential for tumor progression and the cells have molecular motors especially formed from non-muscular myosin II family (NMMII). Encoded by different genes, there are three known isoforms in mammalian cells (NMMIIA, NMMIIB, NMMIIC). The NMMIIs are involved in cellular functions such as migration, adhesion, and cytokinesis. As the understanding of migration, cell adhesion and cytokinesis key factors in tumor progression, and that the tissue invasion and metastatic potential for development are essential in defining the prognosis of patients, the objective of this study was to describe the profile and exposure to risk factors such as alcohol and tobacco of patients diagnosed with head and neck SCC, histological grading, tumor clinical parameters (TNM), pattern of expression of isoforms NMMII (NMMIIA, NMMIIB, NMMIIC) in the center of the tumor (CT), tumor invasion zone area and not neoplastic adjacent to the tumor (AE), relating the expression and localization of these proteins with the data described and outcome of patients after 5 years of follow-up. According to the results it is suggested that the NMMIIB expressed in AE may indicate the potential regional metastasis of SCC and NMMIIC present in the tumor invasion zone (IZ) is a predictor factor of poor prognosis of the disease. Therefore, it is possible to propose that immunoreactivity assessment of NMMIIB in EA and NMMIIC in IZ could be used in the analysis of operative parts, as a complement to routine morphological analysis.

O carcinoma espinocelular é responsável por 90% das lesões malignas na cavidade bucal, sendo o oitavo tipo de câncer em todo o mundo e apresenta uma taxa de sobrevida de apenas 50% em 5 anos. Os carcinomas podem se desenvolver diretamente de células epiteliais normais ou a partir das desordens potencialmente malignas, as quais envolvem as hiperplasias e as displasias. Para que estas lesões se desenvolvam é necessário que nutrientes e oxigênio sejam disponibilizados, o que ocorre a partir da formação de uma nova vasculatura. Este processo, denominado angiogênese, é complexo e envolve a regulação de diferentes fatores indutores, como as moléculas Angiopoetina 1 (ANG1) e Trombospondina 1 (TSP1), cuja ação pode ser influenciada tanto pelas células de origem epitelial quanto pelos componentes do microambiente da lesão. O objetivo deste projeto foi descrever o perfil de expressão das moléculas angiopoetina 1 e trombospondina 1 em biópsias de desordens potencialmente malignas e em carcinoma espinocelular oral. A amostra foi composta por biópsias de pacientes que apresentaram diagnóstico de hiperplasia (n=6), displasia epitelial leve (n=7), displasia epitelial severa (n=15), carcinoma espinocelular oral grau 1 e 2 (n= 13) e 3 e 4 (n=13). As lâminas histológicas foram submetidas à reação de imunoistoquímica para ANG1 e TSP1, das quais foi realizada uma análise descritiva quanto ao perfil de marcação tanto em epitélio quanto em tecido conjuntivo subjacente à lesão. Angiopoetina apresentou uma marcação concentrada principalmente nas células endoteliais e com leve marcação nas células da camada basal do epitélio, sendo observada uma redução da intensidade de marcação de acordo com o grau de severidade da desordem epitelial, porém com um aumento de marcação em células do microambiente tumoral. Trombospondina apresentou marcação heterogênea tanto em tecido epitelial, endotelial e conjuntivo, com um aumento da marcação em macrófagos e fibroblastos de acordo com a severidade da lesão. Este perfil diferenciado de expressão destes marcadores do processo de angiogênese, tanto por células epiteliais modificadas quanto por células do microambiente celular, evidencia a necessidade de mais estudos que explorem a diversidade celular das lesões neoplásicas, com o objetivo de aprimorar as terapias anti-angiogênicas vigentes para o tratamento de desordens potencialmente malignas. / Oral squamous cell carcinoma is the eight most common cancer and it accounts for 90% of malignant lesions in the oral cavity, presenting a survival rate of only 50% after 5 years. Carcinomas may develop directly from normal epithelial cells or from the potentially malignant disorders, such as hyperplasia and dysplasia. During the carcinogenesis process, it is necessary an increase on nutrients and oxygen supply, which occurs through the formation of new vasculature. This process, known as angiogenesis, is complex and involves the regulation of various inducing factors such as angiopoietin molecules 1 (ANG1) and Thrombospondin 1 (TSP1), whose action can be influenced both by epithelial cells or cells from the lesion microenvironment . The objective of this project was to describe the expression profile of molecules angiopoietin 1 and thrombospondin 1 in biopsies of potentially malignant disorders and oral squamous cell carcinoma. The sample consisted of biopsies from patients who were diagnosed with hyperplasia (n = 6), mild dysplasia (n=7), severe dysplasia (n=15), squamous cell carcinoma grade 1 and 2 (n=13) and 3 and 4 (n=13). The histological slides were submitted to immunohistochemical reaction to ANG1 and TSP1, which underwent a descriptive analysis of the staining profile in both epithelium and in the underlying connective tissue to injury. Angiopoietin showed staining mainly in endothelial cells and a subtle staining on cells at the basal layer of the epithelium, and it was observed a reduction in the intensity of the staining in accordance with the severity of epithelial disorder, but with an increase of staining of cells from the microenvironment. Thrombospondin presented a heterogeneous staining among epithelial, endothelial, and connective tissue, with an increase in the staining on macrophages and fibroblasts according to the severity of injury. This differential expression profile of these markers of angiogenesis process, which was observed in both epithelial cells and cells from the microenvironment, highlights the need for more studies exploring the cellular diversity of neoplastic lesions, in order to improve the existing anti-angiogenic therapies for the treatment of malignant disorders.

Introdução: HER2 tem sido identificado em muitos tumores e no câncer mamário melhorou significativamente o prognóstico quando utilizada a terapia-alvo. No entanto, pouco se sabe sobre HER2 no câncer esofágico. Objetivo: O objetivo deste estudo foi investigar a prevalência da expressão de HER2 no câncer esofágico de células escamosas. Pacientes e Métodos: Estudo preliminar para avaliar HER2 (Método do ABC, HercepTest®) foi realizado em 10 e 75 amostras aleatórias de tumores precoces e avançados de pacientes submetidos a ressecção cirúrgica no Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA), da Faculdade da Medicina, UFRGS, Porto Alegre, RS, Brasil. Resultados: 60 homens (70%) e 25 mulheres (30%); a mediana de idade (variação) foi 59 (29 a 85) anos. A maioria dos casos eram de estágios mais precoces I-IIb (n=57; 67%), graus I ou II (n=69; 81%), Tis-T2 (n=44; 52%), com linfonodos negativos (n=44; 54%), medindo (DP) 4,7 (2,0) e variando de 2,0 a 9,0 cm. Quanto maior a profundidade de invasão, tanto mais linfonodos envolvidos (p< 0,03). Imunoreação citoplasmática de HER2 ocorreu em 15 (18%) casos. Somente em três casos (3%), houve reação considerada positiva (2+/3+) pelo HercepTest® (todos avançados). Nenhuma diferença significativa foi observada quanto ao HER2 em relação a diferenciação, profundidade da invasão, metástase linfonodal ou estágio tumoral. Conclusão: HER2 não parece estar implicado nas fases iniciais da carcinogênese esofágica. A elevada expressão citoplasmática sugere prosseguimento na investigação com a inclusão de adenocarcinomas e avaliação por FISH/CISH.

O carcinoma epidermóide do esôfago é neoplasia com alta taxa de mortalidade e distribuição geográfica peculiar. O estudo da célula tumoral ou suas diferenciações pré-tumorais, demonstraram ter por análise imunohistoquímica e genética, inúmeros determinantes que podem ajudar no tratamento. Neste trabalho foi avaliada a expressão imunohistoquímica de p53 e ki-67 na carcinogênese esofágica induzida quimicamente através do uso de dietilnitrosamina, em um grupo de 100 camundongos fêmeas. O estudo experimental foi realizado com 4 grupos de animais, onde os grupos I e II foram considerados controles, sendo diferenciados por gavagem esofágica, uma vez semana, com água fria (temperatura ambiente) ou quente (60º-70ºC). E os grupos III e IV foram considerados estudos, os quais receberam dietilnitrosamina por 3 dias consecutivos semanalmente, também sendo diferenciados por gavagem, uma vez por semana, com água fria ou quente. O estudo apresentou data progressiva de sacrifícios com colheita de peças esofágicas, que iniciava aos 30 dias de experimento e terminava aos 150 dias. Demonstrou-se que não houve diferença na incidência tumoral quando foi acrescida a variável temperatura da água; provavelmente devido ao episódio único semanal que era adicionado ao animal em experimentação. A análise imunohistoquímica do p53 não evidenciou diferença estatística durante a evolução da carcinogênese até 150 dias, porém quando analisado a relação com alterações patológicas demonstra-se que apresenta significância em relação à patologia baixo grau de displasia, alto grau e carcinoma. A análise imunohistoquímica do ki-67 demonstrou diferença estatística durante a evolução da carcinogênese a partir do dia 120 de experimento e quando analisada a relação com alterações patológicas demonstrou-se que apresenta significância também em relação à lesão intraepitelial de alto grau e carcinoma.

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-07-04T22:43:03Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Mecciene Mendes Rodrigues.pdf: 1757056 bytes, checksum: f628906644213b57e7cae213366211b2 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-04T22:43:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Mecciene Mendes Rodrigues.pdf: 1757056 bytes, checksum: f628906644213b57e7cae213366211b2 (MD5) Previous issue date: 2017-02-22 / CNPQ / A UVBSuscetibilidade é fator de risco de Carcinoma Espinocelular em pele fotoexposta. O HPVBeta associa-se ao Carcinoma Espinocelular em pele fotoexposta de imunossuprimidos, e, em não imunossuprimidos, há relatos, necessitando-se confirmação da associação, e, quais os fatores facilitadores da infecção e persistência do HPVBeta no Carcinoma Espinocelular em pele fotoexposta de adultos e idosos. Os mecanismos de imunossupressão pela exposição à Radiação Ultravioleta B necessitam esclarecimentos, porém, sabe-se que, a exposição leva à produção de padrões moleculares associados ao dano, reconhecidos pelos Toll Like Receptors 9. Os Toll Like Receptors 9 são receptores transmembrana, importantes na imunidade inata à oncogênese, não havendo estudos sobre os Toll Like Receptors 9 no Carcinoma Espinocelular em pele fotoexposta. Na Tese, portanto, verificamos a UVBSuscetibilidade e o HPVBeta no Carcinoma Espinocelular em pele fotoexposta de Adultos e idosos, cujo produto é o Artigo 1. Desenho do estudo: Caso-controle. A UVBSuscetibilidade e a Expressão Toll Like Receptors 9 no Carcinoma Espinocelular em pele fotoexposta de adultos e idosos, cujo produto é o Artigo 2. Desenho do Estudo: Caso-Controle (Subamostra do Artigo 1). O estudo foi realizado com a colaboração dos pacientes diagnosticados com Carcinoma Espinocelular no ambulatório de Dermatologia do Hospital de Câncer de Pernambuco, entre agosto de 2014 e novembro de 2016. Realizou-se a Dermatoscopia e biópsia por exérese e diagnóstico histopatológico da lesão; escarificação de lesões de Carcinoma Espinocelular, de pele espelho da lesão, e, em dorso de punho e mão esquerda, nos pacientes com Carcinoma Espinocelular e nos Controles. A Reação em Cadeia da Polimerase e identificação do HPVBeta; Teste de contato com a Difenciprona em área de pele previamente irradiada (24 horas) para classificação dos pacientes em UVBSuscetíveis e UVBResistentes. Citometria de fluxo e verificação da Média de Intensidade de Fluorescência da Expressão Toll Like Receptors 9 em Leucócitos e Linfócitos Totais, Linfócitos CD20, Granulócitos e Monócitos, em sangue periférico. Resultados: Foram associados ao Carcinoma Espinocelular em pele fotoexposta de adultos e idosos: UVBSuscetibilidade (OR 3,69 IC 1,01 – 13,5); ao menos, um subtipo de HPVBeta (OR 9,38 IC 0,46 – 189,5); Fotoreatividades I e II da classificação de Fitzpatrick (OR 40,2 IC 9,34 – 172,9); Queimadura solar antes dos 20 anos (OR 7,95 IC 1,34 – 47,1); 60 anos ou mais (OR 1,11 IC 1,05 – 1,17); Sexo Masculino (OR 9,35 IC 2,26 – 38,8). A Média de Intensidade de Fluorescência da Expressão Toll Like Receptors 9 em linfócitos totais estava diminuída nos pacientes com Carcinoma Espinocelular comparado aos controles (p<0.04), e, em leucócitos totais, linfócitos totais e células B nos pacientes UVBSuscetíveis comparados aos UVB-Resistentes (p<0.01, 0.004 e 0,01, respectivamente). Conclusão: A UVBSuscetibilidade e o HPVBeta associaram-se ao Carcinoma Espinocelular em pele fotoexposta de adultos e idosos. A deficiência na Expressão Toll Like Receptors 9 constituiu-se em fator de imunossupressão da imunidade inata em UVBSuscetíveis e no Carcinoma Espinocelular em pele fotoexposta de adultos e idosos. Faz-se necessário a reprodução deste estudo com número maior de participantes. / UVB susceptibility is a risk factor for squamous cell carcinoma of photo-exposed skin. HPV-β is associated with squamous cell carcinoma of photo-exposed skin in immunosuppressed and in non-immunosuppressed patients there are reports needing confirmation on whether there is association and the factors that facilitate the infection and persistence of HPV-β in squamous cell carcinoma on photo-exposed skin of adults and older people. The mechanisms of immunosuppression through exposure to UVB require clarification, since it is known that exposure leads to the production of damage-associated molecular patterns, recognized by toll-like receptors 9. The TLR9 are transmembrane receptors, and important in the innate immune system. There have been no studies regarding the role of TLR9 in squamous cell carcinoma on photo-exposed skin. Thus, in this thesis we investigated UVB susceptibility and HPV-β in squamous cell carcinoma on the photo-exposed skin of adults and older people, which is the product of Article 1. Study design: Case-control. The TLR9 expression and UVB susceptibility in squamous cell carcinoma in photo-exposed skin of adults and older people, the product of which is Article 2. Study Design: Case-Control (Subsample of Article 1). The study was performed with the collaboration of patients diagnosed with squamous cell carcinoma at the Dermatology Outpatient Clinic at the Hospital de Câncer de Pernambuco, between August 2014 and November 2016. We peformed the dermatoscopy, and the biopsy was performed by excision and histopathological diagnosis of the lesion; a squamous cell carcinoma lesion scraping, skin mirror lesion, and on the back of the wrist and hand in patients with squamous cell carcinoma, and in the control patients. We conducted a Polymerase Chain Reaction and HPV-β identification; a diphencyprone contact test on a previously irradiated skin area (24 hours) and classified UVB susceptibility and UVB-resistant patients. Flow cytometry was performed and the mean fluorescence intensity of the TLR9 expression was investigated in total leukocytes and lymphocytes, CD20 lymphocytes, granulocytes and monocytes in peripheral blood. Results: The following were associated with squamous cell carcinoma on the photo-exposed skin in adults and older people: UVB susceptibility (OR 3.69 CI 1.01 - 13.5); at least one subtype of HPV-β (OR 9.38 CI 0.46 - 189.5), photo-reactivity I and II of the Fitzpatrick classification (OR 40.2 CI 9.34 - 172.9); sunburn before 20 years (OR 7.95 CI 1.34 - 47.1); 60 years or older (OR 1.11 CI 1.05 - 1.17) and male (OR 9.35 CI 2.26 - 38.8). The mean fluorescence intensity of the TLR9 expression in total lymphocytes was lower in patients with squamous cell carcinoma when compared to the controls (p <0.04), and also in the total leukocytes, total lymphocytes and B cells in UVB susceptibility patients compared to UVBr (p <0.01, 0.004 and 0.01, respectively). Conclusion: UVB susceptibility and HPV-β were associated with squamous cell carcinoma in the photo-exposed skin of adults and older people. The deficiency in TLR9 expression was immunosuppressive factor of the innate immune system in UVB susceptibility patients in squamous cell carcinoma of the photo-exposed skin of adults and older people. It is necessary to reproduce this study with a larger number of participants.

Orientadores: Nelson Adami Andreollo, Luiz Roberto Lopes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-16T06:07:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TerciotiJunior_Valdir_M.pdf: 3600998 bytes, checksum: 6867e524b51d1a71d777c2132d9f2244 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A neoplasia de esôfago é a oitava neoplasia mais incidente no Brasil, mantendo alta letalidade a despeito da melhora do tratamento cirúrgico nas últimas décadas. Os tratamentos utilizados dividem-se em: I) paliativos (sondas para nutrição enteral, próteses endoscópicas, gastrostomia, jejunostomia, derivação esôfago-gástrica, quimioterapia, radioterapia) e; II) curativos (esofagectomias isoladas, terapias neo-adjuvantes e terapias adjuvantes). Sendo assim, estratégias de tratamento neo-adjuvante tornam-se objeto de estudo. O objetivo do trabalho é avaliar em estudo retrospectivo não-randomizado a morbidade, a mortalidade e a sobrevida dos pacientes operados na Faculdade de Ciências Médicas da UNICAMP no período de 1979 a 2006, divididos em três grupos: I) esofagectomia; II) radioterapia neo-adjuvante seguido de esofagectomia; e III) radioterapia-quimioterapia neo-adjuvante seguido de esofagectomia. Na análise dos resultados, os grupos não diferem significativamente quanto ao sexo, cor, idade, alguns sintomas pré-operatórios (pirose, tabagismo), complicações pós-operatórias, mortalidade, N patológico, grau de diferenciação histológica e estadiamento; os grupos diferem significativamente em relação a outros sintomas (disfagia, dor retroesternal, etilismo), localização tumoral, T patológico e resposta tumoral. As conclusões mostram diferenças de sobrevida entre os grupos após a exclusão dos óbitos peri-operatórios, com benefício estatisticamente significativo para a terapêutica neo-adjuvante / Abstract: Neoplasm of esophagus cancer is the eighth highest incidence in Brazil, maintaining a high mortality rate despite the improvement of surgical treatment in recent decades. Treatments are divided into: I) palliative (nasogastric tube for enteral nutrition, prosthetics, endoscopic gastrostomy, jejunostomy, esophageal-gastric bypass, chemotherapy, radiotherapy) and; II) radical (esophagectomy isolated, neo-adjuvant therapy and adjuvant therapy) . Thus, neoadjuvant treatment strategies become the object of study. The objective is to evaluate with a non-randomized retrospective study morbidity, mortality and survival of patients operated in the Faculty of Medical Sciences of Campinas in the period 1979-2006, divided into three groups: I) esophagectomy; II) neoadjuvant radiotherapy followed by esophagectomy, and III) neoadjuvant radiotherapy and chemotherapy followed by esophagectomy. Results show that groups did not differ significantly regarding gender, race, age, some preoperative symptoms (heartburn, smoking), postoperative complications, mortality, N pathological, histological grade and stage; groups differ significantly for other symptoms (dysphagia, retrosternal pain, alcoholism), tumor location, T and pathological tumor response. Findings show differences in survival between groups after the exclusion of perioperative deaths, with statistically significant benefit for neoadjuvant therapy / Mestrado / Cirurgia / Mestre em Cirurgia

Orientadores: Jacks Jorge Júnior, Edgard Graner / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-17T01:40:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mesquita_AnaTerezinhaMarques_D.pdf: 4734511 bytes, checksum: 60ce7779298bc2952bb284c04946ae26 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A enzima ácido graxo sintase (FASN), responsável pela síntese endógena de ácidos graxos, apresenta elevada expressão em vários tipos de cânceres sendo necessária para a proliferação e sobrevivência das células malignas. O triclosan é um agente antibacteriano que inibe a atividade de FASN, podendo apresentar ação quimioterapêutica. O objetivo deste estudo foi avaliar as consequências da inibição de FASN pelo triclosan sobre os índices de proliferação, apoptose e produção das proteínas FASN, ErbB2, p27 e Skp2 pelas células SCC-9, derivadas de CECs bucais humanos, bem como verificar o efeito do triclosan durante a carcinogênese induzida pelo 4-NQO. A citometria de fluxo mostrou que o triclosan inibiu a proliferação das células SCC-9, com diminuição de 80% da fase S, e causou aumento da apoptose das células tratadas com 5 ?M e 10 ?M durante 48h. Os ensaios de western blotting revelaram aumento de FASN, discreta diminuição de ErbB2, aumento gradativo de p27 e diminuição de Skp2 nas células tratadas por 24h. Camundongos BALB/c foram tratados com 1000 p.p.m de triclosan na dieta, após e simultaneamente ao tratamento com 4-NQO. Após 28 semanas os camundongos tratados com triclosan após e simultaneamente ao 4-NQO apresentaram menor incidência de CECs em língua, 50% e 10% respectivamente, enquanto no grupo controle (4-NQO) a incidência foi de 100%. Os grupos tratados com triclosan e 4-NQO simultâneos por 24 semanas, não apresentaram CECs, enquanto no grupo controle a incidência de CECs foi de 40% (p = 0,01). A imunoistoquímica sugeriu menor expressão de FASN, ErbB2, Ki-67 e maior expressão de p27 nas displasias e CECs dos camundongos tratados com triclosan quando comparados aos controles (p = 0,05). Estes resultados sugerem que o bloqueio de FASN pelo triclosan pode ser uma alternativa quimiopreventiva e quimioterapêutica para os CECs bucais, reforçando os achados prévios de que os inibidores de FASN possuem ação antitumorigênica. / Abstract: Fatty acid synthase (FASN), the enzyme responsible for endogenous synthesis of fatty acids, presents overexpressed in several types of cancers being required for proliferation and survival of malignant cells. Triclosan is an antibacterial agent which inhibits the activity of FASN and can present chemotherapeutic action. The aim of this study was to assess the consequences of FASN inhibition by triclosan on the proliferation, apoptosis and production of FASN protein, ErbB-2, p27 and Skp2 by SCC-9 cell line derived from human oral squamous cell carcinoma, and evaluates the effect of triclosan during carcinogenesis 4-NQO-induced in mice. Flow cytometry showed that triclosan inhibited the proliferation of SCC-9 cells, and there was 80% reduction of S phase, and increased rates of apoptosis of cells treated with 5 ?M and 10 ?M by 48 hours. Western blotting assays revealed increase in FASN, mild reduction of ErbB2, gradual increase of p27, and decrease of Skp2 in cells treated for 24 hours. In the murine model BALB/c mice they were treated with 1000 p.p.m of triclosan dietary, simultaneously and after treatment with 4-NQO. Over a period of 28 weeks the mice treated with triclosan post and simultaneously treatment with 4-NQO showed lower incidence of tongue carcinomas, 50% and 10% respectively. In the control group (4-NQO) all mice developed carcinomas. The mice treated with simultaneously triclosan and 4-NQO by 24 weeks did not develop carcinomas, whereas in the control group the incidence of carcinomas was 40% (p = 0.01). Immunohistochemical suggested lower expression of FASN, ErbB-2, Ki-67, and higher expression of p27 in dysplasia and carcinomas of mice treated with triclosan when compared to controls (p = 0.05). These results suggest that blockade of FASN by triclosan may be an alternative for chemoprevention and chemotherapy of oral SCC supporting previous findings that inhibitors of FASN have antitumorigenic action. / Doutorado / Patologia / Doutor em Estomatopatologia

Orientador: Ricardo Della Coletta / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-18T03:02:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bitu_CarolinaCavalcante_D.pdf: 12909729 bytes, checksum: c5ca376c5fe8c4d1424a81763646b013 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Os membros da família HOX de genes homeobox são classicamente conhecidos por regular a proliferação e a diferenciação celular durante o desenvolvimento embrionário. Contudo, inúmeros estudos demonstraram uma expressão alterada de alguns membros desta família em neoplasias, incluindo melanomas, leucemias e cânceres de cólon, pulmão, rim e próstata. Estudos em nosso laboratório caracterizaram o perfil de expressão dos 39 genes da família HOX em amostras orais de tecido normal e carcinoma espinocelular (CEC), identificando alguns genes diferencialmente expressos. Dentre estes genes estavam HOXA1 e HOXB7. Interessantemente, as expressões aberrantes de HOXA1 e/ou HOXB7 em neoplasias malignas foram relacionadas a um controle da proliferação, desdiferenciação, invasão e efetividade no reparo do DNA. Os objetivos deste estudo foram compreender os efeitos da superexpressão e da neutralização dos genes HOXA1 e HOXB7 na modulação dos principais eventos biológicos associados aos fenótipos tumorais e determinar o valor prognóstico da expressão destes genes para pacientes afetados por CEC oral. Para alcançar estes objetivos, construímos clones da linhagem celular de queratinócitos normais HaCAT superexpressando os genes HOXA1 (HaCAT-HOXA1) ou HOXB7 (HaCAT-HOXB7), inibimos a expressão endógena destes genes na linhagem de CEC oral SCC-9 por meio da técnica de RNA de interferência e realizamos análise imunohistoquímica em 132 amostras de CEC oral para correlacionar às positividades de HOXA1 e HOXB7 com as características clínico-patológicas dos tumores. Nossos resultados revelaram que as superexpressões de HOXA1 e HOXB7 significantemente promoveram a proliferação das células HaCAT, enquanto que a inibição destes genes nas células SCC-9 resultou em uma dramática inibição da proliferação. As superexpressões de HOXA1 e HOXB7 não foram capazes de modular as taxas de apoptose, adesão e invasão, a expressão de marcadores da transição epitéliomesênquima (TEM) e não promoveu crescimento independente de ancoragem (softagar). Tumores classificados com expressão elevada de HOXA1 demonstraram estádio clínico T e N mais avançados, menor diferenciação das células neoplásicas e elevado potencial proliferativo. Pacientes apresentando tumores com elevada positividade para HOXA1 demonstraram uma sobrevida de 5 anos significantemente menor que pacientes com tumores demonstrando baixa positividade para HOXA1 (p=0,026). A expressão imuno-histoquímica de HOXB7 correlacionou significantemente com consumo de bebidas alcoólicas, estádio clínico N, infiltração vascular e potencial proliferativo dos tumores. Expressão elevada de HOXB7 foi também significantemente correlacionada com menor sobrevida global (p=0,009) e uma tendência para menor sobrevida livre de doença foi observada para pacientes com tumores classificados com forte expressão de HOXB7 (p=0,083). Uma positiva correlação entre as expressões de HOXA1 e HOXB7 foi evidenciada (rs=0,25 e p=0,008). Em conclusão, nossos resultados sugerem que as superexpressões dos genes HOXA1 e HOXB7 podem contribuir para a progressão tumoral por promoverem a proliferação das células tumorais e indicam que HOXA1 e HOXB7 podem ser determinantes importantes do prognóstico de pacientes com CEC oral / Abstract: HOX genes are master regulators of cellular proliferation and differentiation during embryogenesis. However, some members of the HOX family have been shown to be dysregulated in malignancies, including melanomas, leukemias and cancers of colon, lung, kidney and prostate. In previous studies we have described the expression profile of all 39 HOX genes in oral samples from normal mucosa and squamous cell carcinoma (SCC), identifying some differentially expressed. Among those were HOXA1 and HOXB7. The aberrant expression of both genes has been related with the rgulation of proliferation, differentiation and invasion, and with the control of the DNA repair effectiveness. The goals of this study were to verify the role of HOXA1 and HOXB7 on modulation of tumor-associated phenotypes and to determine whether their expressions are associated with clinicopathological features of the tumors. To achieve our goals, we generated clones from HaCAT human epithelial cell line overexpressing HOXA1 (HaCAT-HOXA1) or HOXB7 (HaCAT-HOXB7), inhibited the endogenous levels of these genes in the SCC-9 human oral carcinoma cell line by interference RNA (iRNA), and performed immunohistochemical analysis in 132 oral SCC samples. Our results demonstrated that both HOXA1 and HOXB7 overexpression in HaCAT cells promote proliferation, whereas downregulation of HOXA1 and HOXB7 endogenous levels in SCC-9 cells decreases it. HOXA1 and HOXB7 overexpression did not influence apoptosis, cellular adhesion and invasion, expression of epithelial-mesenchymal transition (EMT) markers and also did not promote anchorage-independent growth (softagar). High number of HOXA1-positive cells significantly correlated with T and N stage, tumor cellular differentiation and proliferative potential of the tumors. Patients whose tumors contained high number of HOXA1-positive cells had shorter overall survival in 5 years than patients with low positivity of this protein (p=0.026). The immunohistochemical expression of HOXB7 was significantly correlated to alcohol consumption, clinical N stage, vascular infiltration and tumor proliferative potential. High expression of HOXB7 was also significantly correlated to shorter overall survival (p=0.009), and a tendency towards shorter disease-free survival was observed in patients with tumors containing elevate HOXB7 expression (p=0.083). A positive correlation between HOXA1 and HOXB7 immunohistochemical expression was observed (rs=0.25, p<0.008). In conclusion, our results suggest that overexpression of HOXA1 and HOXB7 can contribute to tumor progression by increasing tumor cell proliferation and indicate that both HOXA1 and HOXB7 may be important determinants of OSCC patient's prognosis / Doutorado / Patologia / Doutor em Estomatopatologia

Oral and oropharyngeal squamous cell carcinoma (OOSCC) is a malignant neoplasm of epithelial origin that accounts for 90 to 95% of tumors in oral cavity. Alcohol and tobacco consumption are main risk factors, but the formation of reactive oxygen species (ROS) and presence of chronic inflammatory processes have been shown to favor the carcinogenesis process. Human serum paraoxonase 1 (PON1) is a protein with an important antioxidant action and prevents oxidative stress induced by ROS, in turn, high levels of tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) and transforming growth factor-beta (TGF-β) are commonly found in inflammatory processes, and changes in these proteins have been related to development of different neoplasms. Present study aims to investigate the prognostic value of functional polymorphisms in PON1, TNF-α and TGF-β genes in OOSCC. This is a prospective cohort study with patients attended at the Advanced Oncology Center of the North-Riograndense League against Cancer. Data collection of clinical variables was done through the form: gender, age, tumor site, TNM (primary tumor, regional nodule and distant metastasis) classification, clinical stage; and through interview: smoking habits and alcohol intake by the patient. A total of 163 samples from patients with OOSCC and 146 control samples were genotyped by real-time PCR. It was observed that 76.1% of the population was males, 84% older than 52 years, with a more frequent intra-oral clinical presentation (53.4%), in the tongue region (21.5%), tumors greater than 4cm (56.45%), presence of nodal involvement (58.9%) and stages III and IV (79.15%). There was a positive association between drinking and smoking habits in patients with OOSCC and between clinical stage and tumor site (p <0.05). The polymorphisms were in Hardy-Weinberg equilibrium, with exception of rs662 of PON1. TNF-α wild-type GG homozygous genotype (rs1800629) was associated with intra-oral lesions, clinical stage of the most advanced disease (III and IV), and decreased overall disease survival, whereas the polymorphic AA genotype was associated with lip lesion, clinical stage I and II and a longer overall disease survival (p <0.05). It was observed association of TGF-β polymorphic AG and AA genotypes (rs1800469) with larger diameter tumors (T3 and T4) (p <0.05). Finally, the polymorphic TT genotype of PON1 (rs662) in recessive model was associated with a shorter disease survival time within threshold of significance (p = 0.05). In view of the findings, it is suggested that wild-type GG homozygous genotype of TNF-α rs1800629 and TGF-β rs1800469 polymorphic AG and AA genotypes may exert an influence on more aggressive biological behavior of OOSCC and that AG genotype of TNF-α rs1800629 and TT genotype of PON1 rs662 could be prognostic markers in OOSCC. In the clinical practice of oncology, these genotypes can be used to perform early diagnosis, knowledge of the biological behavior of the tumor and choice of appropriate individualized therapy / O carcinoma de células escamosas oral e orofaríngeo (CCEO) é uma neoplasia maligna de origem epitelial que representa 90 a 95% dos tumores da cavidade oral. O consumo de álcool e de tabaco são os principais fatores de risco, mas a formação de espécies reativas de oxigênio (EROs) e a presença de processos inflamatórios crônicos têm-se mostrado favorável ao processo de carcinogênese. A paraoxonase de soro humano 1 (PON1) é uma proteína com importante ação antioxidante e previne o estresse oxidativo induzido pelas EROs, por sua vez, elevados níveis do fator de necrose tumoral-alfa (TNF-α) e do fator de crescimento transformante-beta (TGF-β) são comumente encontrados em processos inflamatórios, e alterações nessas proteínas têm sido relacionadas com o desenvolvimento de diferentes neoplasias. O presente estudo tem por objetivo investigar o valor prognóstico dos polimorfismos funcionais nos genes da PON1, TNF-α e TGF-β no CCEO. Trata-se de um estudo coorte prospectivo com pacientes atendidos no Centro Avançado de Oncologia da Liga Norte-Riograndense contra o Câncer. Realizou-se a coleta de dados das variáveis clínicas por meio de formulário: gênero, idade, localização do tumor, classificação TNM (Tumor primário, nódulo regional e metástase à distância), estadiamento clínico (EC); e por meio de entrevista: hábitos de fumo e ingestão alcoólica pelo paciente. Foram genotipadas 163 amostras de pacientes com CCEO e 146 amostras controle por meio de PCR em tempo real. Observou-se que 76,1% da população era do gênero masculino, sendo 84% com mais de 52 anos, com apresentação clínica mais frequente intra-oral (53,4%), na região da língua (21,5%), tumores maiores que 4cm (56,45%), presença de envolvimento nodal (58,9%) e em estágios III e IV (79,15%). Evidenciou-se associação positiva entre os hábitos de beber e fumar com pacientes portadores de CCEO e entre o EC e a localização do tumor (p<0,05). Os polimorfismos encontravam-se em equilíbrio de Hardy-Weinberg, com exceção do rs662 da PON1. O genótipo homozigoto selvagem GG do TNF-α (rs1800629) associou-se com lesões intra-orais, EC da doença mais avançado (III e IV) e menor sobrevida global da doença, enquanto o genótipo AA polimórfico associou-se a lesão de lábio, EC I e II e maior sobrevida global da doença (p<0,05). Observou-se associação dos genótipos AG e AA polimórfico do TGF-β (rs1800469) com tumores de maior diâmetro (T3 e T4) (p < 0,05). Por fim, o genótipo TT polimórfico da PON1 (rs662) no modelo recessivo apresentou associação com menor tempo de sobrevida da doença dentro do limiar de significância (p=0,05). Diante dos achados, sugere-se que o genótipo GG selvagem do rs1800629 do TNF-α e os genótipos AG e AA polimórfico do rs1800469 do TGF-β podem exercer influência no comportamento biológico mais agressivo do CCEO e que o genótipo AG do rs1800629 do TNF-α e o genótipo TT polimórfico do rs662 da PON1 poderiam ser marcadores com valor prognóstico no CCEO. Na prática clínica da oncologia, esses genótipos podem ser utilizados para realização de diagnóstico precoce, conhecimento do comportamento biológico do tumor e escolha da terapêutica individualizada adequada. / Lagarto, SE