Bmi-1 é uma proteína do grupo Polycomb capaz de induzir atividade de telomerase, levando à imortalização de células epiteliais. As células, quando imortalizadas, se tronam mais susceptíveis a danos em dupla fita (double-strand breaks (DSB))e a recombinação homóloga é uma das duas vias de reparo dos DSBs. Dentre os genes reguladores da recombinação homóloga temos o BRCA-1, que está envolvido na resposta ao dano associado à proteína RAD51, que por sua vez se acumula rapidamente nos focos de dano ao DNA após a sinalização do H2AX, que têm se mostrado um excelente marcador de dano celular por se acumular rapidamente nos focos de lesão, desencadeando o processo de reparo. Topoisomerase III (TopoIII) remove intermediários da recombinação homóloga antes da segregação de cromossomos, prevenindo danos à estrutura do DNA celular. O papel das proteínas envolvidas na recombinação homóloga, em carcinomas ductais invasores positivos para o BMI-1, necessita ser investigado. Utilizando-se tissue microarrays contendo 239 casos de carcinomas ductais mamários primários, foi analisada a expressão imunoistoquímica de BMI-1, receptor de estrógeno, receptor de progesterona, HER-2, Ki67, p53 e BRCA-1, H2AX, RAD51 e topoisomerase III. Positividade para o Bmi-1 foi encontrada em 66 casos (27.6%). A positividade imunoistoquímica do BMI-1 relacionou-se a RE (p=0,004), RP (p<0,001), Ki-67 (p < 0,001), p53 (p=0,003), BRCA-1(p= 0,003), H2AX (p= 0,024) e TopoIII (p < 0,001). Concluindo, nossos resultados mostraram haver relação entre o BMI-1 e genes reguladores da HR, sugerindo que a positividade de BMI-1 pode ser um importante evento na recombinação homóloga em carcinomas ductais invasores da mama. / Bmi-1 is a Polycomb group protein which is able to induce telomerase activity, enabling the immortalization of epithelial cells. Immortalized cells shown more susceptible to double-strand breaks (DSB) and the homologous recombination (HR) are one of DSB repair pathways. Among the regulatory genes in HR, there is BRCA1, involved in the response to DNA damage associated with the RAD51 protein, which accumulates in DNA damage foci after signaling H2AX. H2AX has also been shown to be a good marker of DNA damage. Topoisomerase III (TopoIII) removes HR intermediates before the segregation of chromosomes, preventing damage to the structure of the cellular DNA. The role of proteins involved in HR, in breast carcinomas positive for BMI-1, remains to be investigated. The aim of this study was evaluate the association between BMI-1 and homologous recombination proteins. Using tissue microarrays containing 239 cases of primary breast tumors, the expression of Bmi-1, BRCA-1, H2AX, Rad51, p53, Ki-67, topoisomerase III, RE, RP and HER-2 was analyzed by immunohistochemistry. We observe high expression of Bmi-1 in 66 cases (27.6%). Immunohistochemistry overexpression of BMI-1 was related to RE (p=0,004), RP (p<0,001), Ki-67 (p < 0,001), p53 (p=0,003), BRCA-1(p= 0,003), H2AX (p= 0,024) and TopoIII (p < 0,001). Our results showed a relation between the expression of BMI-1 and HR regulatory genes, suggesting that overexpression of Bmi-1 is an important event in breast cancer homologous recombination.

Bmi-1 é uma proteína do grupo Polycomb capaz de induzir atividade de telomerase, levando à imortalização de células epiteliais. As células, quando imortalizadas, se tronam mais susceptíveis a danos em dupla fita (double-strand breaks (DSB))e a recombinação homóloga é uma das duas vias de reparo dos DSBs. Dentre os genes reguladores da recombinação homóloga temos o BRCA-1, que está envolvido na resposta ao dano associado à proteína RAD51, que por sua vez se acumula rapidamente nos focos de dano ao DNA após a sinalização do H2AX, que têm se mostrado um excelente marcador de dano celular por se acumular rapidamente nos focos de lesão, desencadeando o processo de reparo. Topoisomerase III (TopoIII) remove intermediários da recombinação homóloga antes da segregação de cromossomos, prevenindo danos à estrutura do DNA celular. O papel das proteínas envolvidas na recombinação homóloga, em carcinomas ductais invasores positivos para o BMI-1, necessita ser investigado. Utilizando-se tissue microarrays contendo 239 casos de carcinomas ductais mamários primários, foi analisada a expressão imunoistoquímica de BMI-1, receptor de estrógeno, receptor de progesterona, HER-2, Ki67, p53 e BRCA-1, H2AX, RAD51 e topoisomerase III. Positividade para o Bmi-1 foi encontrada em 66 casos (27.6%). A positividade imunoistoquímica do BMI-1 relacionou-se a RE (p=0,004), RP (p<0,001), Ki-67 (p < 0,001), p53 (p=0,003), BRCA-1(p= 0,003), H2AX (p= 0,024) e TopoIII (p < 0,001). Concluindo, nossos resultados mostraram haver relação entre o BMI-1 e genes reguladores da HR, sugerindo que a positividade de BMI-1 pode ser um importante evento na recombinação homóloga em carcinomas ductais invasores da mama. / Bmi-1 is a Polycomb group protein which is able to induce telomerase activity, enabling the immortalization of epithelial cells. Immortalized cells shown more susceptible to double-strand breaks (DSB) and the homologous recombination (HR) are one of DSB repair pathways. Among the regulatory genes in HR, there is BRCA1, involved in the response to DNA damage associated with the RAD51 protein, which accumulates in DNA damage foci after signaling H2AX. H2AX has also been shown to be a good marker of DNA damage. Topoisomerase III (TopoIII) removes HR intermediates before the segregation of chromosomes, preventing damage to the structure of the cellular DNA. The role of proteins involved in HR, in breast carcinomas positive for BMI-1, remains to be investigated. The aim of this study was evaluate the association between BMI-1 and homologous recombination proteins. Using tissue microarrays containing 239 cases of primary breast tumors, the expression of Bmi-1, BRCA-1, H2AX, Rad51, p53, Ki-67, topoisomerase III, RE, RP and HER-2 was analyzed by immunohistochemistry. We observe high expression of Bmi-1 in 66 cases (27.6%). Immunohistochemistry overexpression of BMI-1 was related to RE (p=0,004), RP (p<0,001), Ki-67 (p < 0,001), p53 (p=0,003), BRCA-1(p= 0,003), H2AX (p= 0,024) and TopoIII (p < 0,001). Our results showed a relation between the expression of BMI-1 and HR regulatory genes, suggesting that overexpression of Bmi-1 is an important event in breast cancer homologous recombination.

INTRODUÇÃO: Estudos mostraram que, após a injeção de LDE na corrente sangüínea de mulheres portadoras de câncer de mama, ela encontra-se mais concentrada em tecido neoplásico que no tecido normal. Recentemente, estudos pré-clínicos comprovaram que a associação LDE-oleato de paclitaxel é estável, menos tóxica e com mais atividade terapêutica quando comparada ao uso de paclitaxel comercial em animais. O presente estudo teve como objetivo verificar a estabilidade dessa associação na circulação, a sua capacidade em se concentrar no tecido neoplásico e determinar os parâmetros farmacocinéticos em relação ao paclitaxel isolado. MÉTODOS: Para determinar os parâmetros farmacocinéticos foram administrados, por via intravenosa, [3H]-oleato de paclitaxel associado a [14C]- oleato de colesterol-LDE em três pacientes e [3H]-paclitaxel comercial em duas pacientes 24 horas antes do procedimento cirúrgico. Todas as pacientes eram portadoras de neoplasia maligna da mama. Amostras de sangue foram colhidas durante 24 horas. A radioatividade foi medida por cintilação líquida e os parâmetros farmacocinéticos foram calculados usando um modelo multicompartimental. Fragmentos de tecido neoplásico e de tecido normal mamário foram coletados durante a cirurgia e submetidos à contagem radioativa. RESULTADOS: As taxas fracionais de remoção da LDE e do oleato de paclitaxel foram semelhantes (0,0296 ± 0,0264 e 0,0182 ± 0,0186, respectivamente, p = 0,5742). A captação tanto da LDE quanto do oleato de paclitaxel mostrou concentração 2,5 a 3 vezes maior no tecido tumoral do que no tecido mamário normal. O tempo de meia vida do oleato de paclitaxel foi maior do que o da formulação comercial (18,97 ± 7,7 horas e 7,34 ± 0,40 horas) e, a depuração plasmática, menor (1,51 ± 0,18 (L/h) e 7,95 ± 4,32 (L/h)). CONCLUSÃO: A maior parte do fármaco ficou retido na microemulsão até sua remoção da circulação e captação pelas células. O oleato de paclitaxel associado à LDE mostrou-se estável na circulação sangüínea e apresentou tempo de meia vida maior e a depuração plasmática menor do que a formulação comercial, além de se concentrar mais no tecido neoplásico da mama. Os resultados permitem sugerir que essa associação pode se constituir em uma estratégia útil no tratamento de mulheres portadoras de câncer da mama. / INTRODUCTION: Studies had shown that, after the injection of LDE in the circulation of women with breast cancer, it was more concentrate in neoplastic tissue that in the normal tissue. Recently, studies had proven that the LDE-paclitaxel oleate association is steady, less toxic and with more therapeutical activity when compared with the commercial paclitaxel in animals. The present study was designed to verify the stability of this association in the circulation, its capacity in concentrating in the neoplastic tissue and to determine the plasma kinetics of the association compared to that of paclitaxel isolated. METHODS: To determine the pharmacokinetic parameters, [3H]-paclitaxel oleate associated to LDE labeled with [14C]-cholesterol oleate was intravenously injected into three patients and [3H]-commercial paclitaxel into two patients 24 hours before the surgical procedure. All the patients had breast cancer. Blood samples were collected during 24 hours. Radioactivity was quantified in a scintillation solution and the pharmacokinetic parameters were calculated by compartmental analysis. Specimens of tumoral and normal breast were excised during the surgery and submitted to a radioactive counting. RESULTS: Fractional clearance rate of LDE and of the paclitaxel oleate were similar (0,0296 ± 0,0264 and 0,0182 ± 0,0186, respectively, p = 0,5742). The uptake of both [14C]-LDE and [3H]-paclitaxel oleate by breast malignant tissue was two and three fold greater than that of the normal breast tissue. The paclitaxel oleate plasma half-life (h) was greater than the commercial paclitaxel (T1/2 = 18,97 ± 7,7 and 7,34 ± 0,40) and the total plasma clearence (L/h) of paclitaxel oleate was lesser than the commercial (CL = 1,51 ± 0,18 and 7,95 ± 4,32). CONCLUSION: Most of the drug was restrained in the microemulsion until its removal from the circulation and captation by the cells. The paclitaxel oleate associated to LDE is stable in the bloodstream and has greater plasma half-life and lesser clearence than those for commercial paclitaxel. In addition, the association could be concentrated more in malignant breast tissue. The results allow to suggest that this association can consist in a useful strategy in the treatment of women with breast cancer.

O adenocarcinoma de ducto pancreático é reconhecido mundialmente como uma doença extremamente agressiva a qual apresenta um prognóstico desfavorável para pacientes sem cirurgia de ressecção. Portanto, é fundamental ampliar o conhecimento sobre os mecanismos biológicos envolvidos no câncer pancreático a fim de permitir a identificação de marcadores moleculares e alvos terapêuticos com o intuito de melhorar o diagnóstico precoce e tratamento. Os fatores de transcrição, reconhecidos por serem os efetores finais de vias de sinalização, regulam diversas funções celulares e, alterações na expressão transcricional destes podem contribuir para a transformação celular bem como para a progressão tumoral. Assim, o objetivo do presente estudo foi identificar os reguladores mestres da transcrição, possivelmente envolvidos no câncer pancreático. Para tanto, utilizamos dados de microarranjos para associar os reguladores mestres com o fenótipo tumoral. As análises foram realizadas no ambiente estatístico R utilizando os pacotes RTN, Limma e Survival. O gene TULP3 foi identificado como um regulador mestre da transcrição em amostras de câncer pancreático. O valor prognóstico de TULP3 foi verificado através de análises de sobrevivência em três coortes independentes. Estas análises revelaram que pacientes com adenocarcinoma pancreático, exibindo altos níveis de expressão do gene TULP3, apresentam uma sobrevida global desfavorável. Os altos níveis transcricionais de TULP3 podem desempenhar um papel fundamental na progressão do adenocarcinoma pancreático e conduzir a um resultado clínico desfavorável. Contudo, este estudo destaca a potencial aplicação de TULP3 como um biomarcador de prognóstico clínico para pacientes com adenocarcinoma pancreático. / Pancreatic ductal adenocarcinoma is world-wide recognized as an aggressive disease with poor prognosis in patients who did not undergo resection. Efforts to better comprehend the biological mechanisms of pancreatic cancer are needed to enable the identification of novel molecular markers and therapeutic targets for improving early diagnosis and treatment. Transcription factors are the final effectors of signaling pathways and regulate a number of cellular functions. Changes in expression of transcription factors may contribute to cellular transformation and tumor progression. Thus, the aim of the present study was to identify transcriptional master regulators potentially involved in pancreatic cancer disease. To achieve this goal, we utilized microarray data to associate master regulators with tumor phenotype. Analyses were performed with RTN, Limma, and Survival packages at R environment. We identified TULP3 as a master regulator of transcription in pancreatic cancer samples. TULP3 prognostic value was accessed in three independent cohort analyses. Our data demonstrate that patients with pancreatic cancer, exhibiting high TULP3 transcriptional levels, show a poor overall survival. High levels of TULP3 expression may play an essential role in pancreatic cancer progression and lead to poor clinical outcome. Our results highlight the potential use of TULP3 as a clinical prognostic biomarker for pancreatic adenocarcinoma.

O adenocarcinoma de ducto pancreático é reconhecido mundialmente como uma doença extremamente agressiva a qual apresenta um prognóstico desfavorável para pacientes sem cirurgia de ressecção. Portanto, é fundamental ampliar o conhecimento sobre os mecanismos biológicos envolvidos no câncer pancreático a fim de permitir a identificação de marcadores moleculares e alvos terapêuticos com o intuito de melhorar o diagnóstico precoce e tratamento. Os fatores de transcrição, reconhecidos por serem os efetores finais de vias de sinalização, regulam diversas funções celulares e, alterações na expressão transcricional destes podem contribuir para a transformação celular bem como para a progressão tumoral. Assim, o objetivo do presente estudo foi identificar os reguladores mestres da transcrição, possivelmente envolvidos no câncer pancreático. Para tanto, utilizamos dados de microarranjos para associar os reguladores mestres com o fenótipo tumoral. As análises foram realizadas no ambiente estatístico R utilizando os pacotes RTN, Limma e Survival. O gene TULP3 foi identificado como um regulador mestre da transcrição em amostras de câncer pancreático. O valor prognóstico de TULP3 foi verificado através de análises de sobrevivência em três coortes independentes. Estas análises revelaram que pacientes com adenocarcinoma pancreático, exibindo altos níveis de expressão do gene TULP3, apresentam uma sobrevida global desfavorável. Os altos níveis transcricionais de TULP3 podem desempenhar um papel fundamental na progressão do adenocarcinoma pancreático e conduzir a um resultado clínico desfavorável. Contudo, este estudo destaca a potencial aplicação de TULP3 como um biomarcador de prognóstico clínico para pacientes com adenocarcinoma pancreático. / Pancreatic ductal adenocarcinoma is world-wide recognized as an aggressive disease with poor prognosis in patients who did not undergo resection. Efforts to better comprehend the biological mechanisms of pancreatic cancer are needed to enable the identification of novel molecular markers and therapeutic targets for improving early diagnosis and treatment. Transcription factors are the final effectors of signaling pathways and regulate a number of cellular functions. Changes in expression of transcription factors may contribute to cellular transformation and tumor progression. Thus, the aim of the present study was to identify transcriptional master regulators potentially involved in pancreatic cancer disease. To achieve this goal, we utilized microarray data to associate master regulators with tumor phenotype. Analyses were performed with RTN, Limma, and Survival packages at R environment. We identified TULP3 as a master regulator of transcription in pancreatic cancer samples. TULP3 prognostic value was accessed in three independent cohort analyses. Our data demonstrate that patients with pancreatic cancer, exhibiting high TULP3 transcriptional levels, show a poor overall survival. High levels of TULP3 expression may play an essential role in pancreatic cancer progression and lead to poor clinical outcome. Our results highlight the potential use of TULP3 as a clinical prognostic biomarker for pancreatic adenocarcinoma.

Carcinoma da mama com apresentação bilateral é uma doença pouco avaliada na literatura, com raros trabalhos científicos que comparam os aspectos moleculares de ambos os tumores. No presente estudo, analisamos os tumores de 45 pacientes portadoras de carcinoma ductal invasivo bilateral em relação às expressões de claudinas-4 e 7, de E-caderina e de -catenina por meio de imunoistoquímica em TMA. Além desses marcadores, analisamos o estado dos receptores de estrógeno e de progesterona, bem como diversas características histopatológicas (grau histológico, nuclear, mitose, infiltrado, desmoplasia e necrose). A amostra foi caracterizado por média de idade de 52,4 anos e os tumores foram divididos em mama primário (MP) e mama secundário (MS). Não houve diferenças entre os dois grupos (MP e MS) nos marcadores testados, sendo que a expressão foi coincidente nas seguintes proporções: claudina-4 (83,8%, p=0,61), claudina-7 (82,2%, p=0,29), E-caderina (81%, p=0,48), -catenina (89,7%, p=0,48), receptor de estrogeno (66%, p=0.75) e receptor de progesterona (55%, p=0.99). Em relação aos aspectos morfológicos, grau histológico (SBR) II, infiltrado inflamatório discreto, necrose, desmoplasia moderada e índice mitótico (<10fm/10cga) foram coincidentes em 57,8%, 60%, 55,6%, 63,6% e 55,6%, respectivamente. Os presentes resultados nos permitem inferir que os tumores de apresentação bilateral são, em sua maioria, similares do ponto de vista morfológico e da expressão dos marcadores testados / Forty-five patients with invasive ductal carcinoma were evaluated for the expression of claudin-4, claudin-7, E-cadherin, and -catenin through tissue microarray (TMA) and immunohistochemistry (IHC) analysis. Besides these markers, estrogen (ER) and progesterone receptor (PR) status was analyzed, in addition to histopathologic characteristics, i.e., histologic grade, nuclear, mitoses, infiltrate, desmoplasia, and necrosis. Tumors were divided into primary breast (PB) and secondary breast (SB). The expression of claudin-4 and -7 was coincident in PB and SB in 83.78% and 82.22% respectively. The expression of -catenin and E-cadherin in PB and SB was coincident in 89.74% and 80.95% respectively. Estrogen receptor status was (+) in both breasts in 66%, while progesterone receptor status (+) was in 55%. The histological grade using the Nottingham-modified Scarff-Bloom-Richardson grading system (MSBR) showed mild infiltrate, necrosis (+), moderate desmoplasia and mitotic index (<10) was coincident in 57.77%, 60.00%, 55.55%, 63.63% and 55.55% respectively. The degree of agreement showed claudin-4 (p=0.61), claudin-7 (p=0.29), E-cadherin (p=0.48), and -catenin (p=0.48). The expression of claudin-4 and -7, E-cadherin and -catenin present a strong agreement between tumors, showing that bilateral tumors are not different. Histopathologic characteristics showed a lesser agreement between tumors

O adenocarcinoma de ducto pancreático é reconhecido mundialmente como uma doença extremamente agressiva a qual apresenta um prognóstico desfavorável para pacientes sem cirurgia de ressecção. Portanto, é fundamental ampliar o conhecimento sobre os mecanismos biológicos envolvidos no câncer pancreático a fim de permitir a identificação de marcadores moleculares e alvos terapêuticos com o intuito de melhorar o diagnóstico precoce e tratamento. Os fatores de transcrição, reconhecidos por serem os efetores finais de vias de sinalização, regulam diversas funções celulares e, alterações na expressão transcricional destes podem contribuir para a transformação celular bem como para a progressão tumoral. Assim, o objetivo do presente estudo foi identificar os reguladores mestres da transcrição, possivelmente envolvidos no câncer pancreático. Para tanto, utilizamos dados de microarranjos para associar os reguladores mestres com o fenótipo tumoral. As análises foram realizadas no ambiente estatístico R utilizando os pacotes RTN, Limma e Survival. O gene TULP3 foi identificado como um regulador mestre da transcrição em amostras de câncer pancreático. O valor prognóstico de TULP3 foi verificado através de análises de sobrevivência em três coortes independentes. Estas análises revelaram que pacientes com adenocarcinoma pancreático, exibindo altos níveis de expressão do gene TULP3, apresentam uma sobrevida global desfavorável. Os altos níveis transcricionais de TULP3 podem desempenhar um papel fundamental na progressão do adenocarcinoma pancreático e conduzir a um resultado clínico desfavorável. Contudo, este estudo destaca a potencial aplicação de TULP3 como um biomarcador de prognóstico clínico para pacientes com adenocarcinoma pancreático. / Pancreatic ductal adenocarcinoma is world-wide recognized as an aggressive disease with poor prognosis in patients who did not undergo resection. Efforts to better comprehend the biological mechanisms of pancreatic cancer are needed to enable the identification of novel molecular markers and therapeutic targets for improving early diagnosis and treatment. Transcription factors are the final effectors of signaling pathways and regulate a number of cellular functions. Changes in expression of transcription factors may contribute to cellular transformation and tumor progression. Thus, the aim of the present study was to identify transcriptional master regulators potentially involved in pancreatic cancer disease. To achieve this goal, we utilized microarray data to associate master regulators with tumor phenotype. Analyses were performed with RTN, Limma, and Survival packages at R environment. We identified TULP3 as a master regulator of transcription in pancreatic cancer samples. TULP3 prognostic value was accessed in three independent cohort analyses. Our data demonstrate that patients with pancreatic cancer, exhibiting high TULP3 transcriptional levels, show a poor overall survival. High levels of TULP3 expression may play an essential role in pancreatic cancer progression and lead to poor clinical outcome. Our results highlight the potential use of TULP3 as a clinical prognostic biomarker for pancreatic adenocarcinoma.

INTRODUÇÃO: Os microRNAs (miRNAs) são uma classe de pequenas moléculas não codificadoras de proteínas que regulam a expressão gênica durante a etapa de tradução. Esta regulação é feita pelo pareamento de bases com o mRNA-alvo (RNA mensageiro), resultando na supressão da tradução ou na clivagem do mRNA. A depender se os miRNAs têm como alvo genes supressores de tumor ou oncogenes, eles podem atuar como supressores tumorais ou oncogenes. A imunoistoquímica triplo negativa, no câncer de mama, é, comumente, utilizada como substituto clínico para identificação dos tumores basaloides, que se caracterizam pela expressão de genes epiteliais basais, sendo associados a menores taxas de sobrevida livre de doença e sobrevida global. O câncer de mama triplo negativo faz com que seja necessária a descoberta de marcadores moleculares que possam servir de alvos terapêuticos ou, pelo menos, que sirvam como marcadores preditivos da resposta aos quimioterápicos. OBJETIVO: avaliar a expressão de microRNAs, por PCR em tempo real, no carcinoma mamário ductal invasivo (CDI) triplo negativo. MÉTODOS: Foram avaliados materiais em parafina de tumor de 31 pacientes com as seguintes características: carcinoma invasivo de mama, receptores de estrogênio e de progesterona negativos e HER 2 negativo, bem como tecido mamário histologicamente normal. Foram utilizados kit para extração de RNA de amostras fixadas e parafinadas - miRNeasy FFPE; kit para síntese de cDNA - miScript II RT; kit miScript SYBR Green PCR e miScript miRNA PCR Arrays para análise de 84 sequências de miRNA de câncer humano. Foram avaliados dados clínicos, como idade, paridade, amamentação, status menopausal; variáveis histológicas, como tamanho do tumor, status linfonodal, invasão linfática; características imunoistoquímicas, como expressão de Ki-67, EFGR e CK 5/6. O seguimento das pacientes buscou verificar a ocorrência e o tempo de aparecimento de recidiva loco regional, metástase à distância e óbito. Para análise estatística foi utilizado o software miScript miRNA PCR Array Data Analysis, que utiliza o método de quantificação relativa DeltaCt. RESULTADOS: A análise comparativa dos 31 casos de CDI triplo negativo com os 18 casos de parênquima mamário normal definiu microRNAs hiperexpressos, sendo eles: miR-96-5p (fold-regulation(FR) = 9,68, p = 0,000008), miR-21-5p (FR = 4,47, p = 0,00), miR-7-5p (FR = 5,8, p = 0,00137) , miR-182-5p (FR= 7,92, p = 0,000001), miR-210-3p (FR = 11,83, p = 0,000048), miR-18a-5p (FR = 9,51, p = 0,000034), miR-155-5p (FR= 4,40 , p = 0,00019) e miR-93-5p (FR= 4,15, p = 0,000023). Aponta, ainda, microRNAs com hipoexpressão, a saber: miR-204-5p (FR = -10,26, p = 0), miR-205-5p (FR= -4,07, p = 0,019822), miR-125b-5p (FR= -4,29, p=0) e let 7c-5p (FR= -4,91, p=0). CONCLUSÃO: a expressão de microRNAs no carcinoma ductal invasivo triplo negativo permite diferenciá-lo do tecido normal / INTRODUCTION: MicroRNAs (miRNAs) are a class of small non-coding protein molecules that regulate gene expression during the translation stage. This adjustment is made by base pairing with the mRNA (messenger RNA) target resulting in suppression of translation or cleavage of the mRNA. Depending on whether miRNAs target tumor suppressor genes or oncogenes, they can act as tumor suppressors or oncogenes. The triple negative immunohistochemistry in breast cancer is commonly used as a substitute for clinical identification of basaloid tumors, which are characterized by the expression of basal epithelial genes and are associated with lower rates of disease-free survival and overall survival. The triple negative breast cancer makes necessary the discovery of molecular markers that may serve as therapeutic targets or at least as predictive markers of response to chemotherapy. OBJECTIVE: evaluate the expression of microRNAs by RT-PCR in triple negative breast invasive ductal carcinoma (IDC). METHODS: Paraffin embedded tumor material from 31 patients with the following characteristics were evaluated: invasive breast carcinoma, negative estrogen and progesterone receptor, negative HER 2, and histologically normal breast tissue. Were used: Kit for RNA extraction from fixed and paraffin embedded samples - miRNeasy FFPE; cDNA synthesis kit - miScript II RT; miScript SYBR Green PCR Kit and miScript miRNA PCR Arrays for analysis of 84 miRNA sequences of human cancer. Clinical data such as age, parity, breastfeeding, menopausal status; histological variables such as tumor size, lymph node status, lymphatic invasion; immunohistochemical characteristics, such as expression of Ki-67, EFGR and CK 5/6 were evaluated. The follow-up of patients aimed to verify the occurrence and time of appearance of loco regional recurrence, distant metastasis and death. For statistical analysis the miScript miRNA PCR Array Data Analysis software, which uses the method of relative quantification DeltaCt, was used. RESULTS: A comparative analysis of 31 cases of triple negative IDC with 18 cases of normal breast parenchyma defined microRNAs overexpressed, as follows: miR-96-5p (fold-regulation (FR) = 9.68, p = 0.000008), miR -21-5p (FR = 4.47, p = 0.00), 5p, miR-7 (FR = 5.8, p = 0.00137), miR-182-5p (FR = 7.92, p = 0.000001), miR-210-3p (FR = 11.83, p = 0.000048), miR-18a-5p (FR = 9.51, p = 0.000034), miR-155-5p (FR = 4.40, p = 0.00019) and miR-93-5p (FR = 4.15, p = 0.000023). Furthermore, microRNAs with reduced expression, as follows: miR-204-5p (FR = -10.26, p = 0), miR-205-5p (FR = -4.07, p = 0.019822), miR -125b-5p (FR = -4.29, p = 0) and Let-7c 5p (FR = -4.91, p = 0). CONCLUSION: the expression of microRNAs in triple negative invasive ductal carcinoma allows to differentiate it from normal tissue

Introdução: Os tumores de mama apresentam uma grande heterogeneidade molecular e clínica. Uma das classificações mais utilizadas no carcinoma de mama, baseia-se em seus aspectos moleculares e subdivide o câncer de mama em cinco grandes grupos baseados na expressão de alguns genes: luminais (A e B), super-expressor de HER-2, tipo basal e aqueles semelhantes à mama normal. Para melhor definirmos estes subgrupos de carcinomas mamários, analisamos diferentes marcadores imunoistoquímicos em dois estádios de pacientes: IIA e IIIB. Objetivo: O objetivo de nosso estudo foi avaliar quais fatores seriam importantes na determinação do prognóstico, tanto nas pacientes estadiadas como IIA quanto nas IIIB, com um período de seguimento de 120 meses, levando em conta dados clínicos e demográficos, características tumorais, tipos de tratamento, diferentes marcadores moleculares da transição epitélio-mesênquima (e-caderina, pcaderina, n-caderina, vimentina, twist, snai l, slug), o EGFR, a NOS-2 e os diferentes fenótipos (Luminal A, Luminal B, super-expressor de HER-2, basal e triplo-negativo) em câncer de mama. Pacientes e Métodos: A casuística deste estudo é constituída por 268 pacientes portadoras de tumor de mama operadas no Hospital A C Camargo, no período de 1980 a 1999. Foi realizado estudo imunoistoquímico para análise de nove marcadores moleculares e cada tumor foi classificado de acordo com a expressão do receptor de estrogênio, progesterona e expressão do HER-2 em uma das categorias luminais, basal, triplo-negativo e super-expressor de HER-2. Resultados: Observamos que a maioria dos tumores media de 2,1 a 5,0 cm (57,8%), pertenciam ao grau histológico 2 (57,1%), eram grau nuclear 3 (61,6%), possuíam de 0 a 9 mitoses por campo de grande aumento (CGA) e 59% apresentavam metástase linfonodal. As pacientes analisadas pertenciam a dois subgrupos de estadiamento, sendo que 86 casos pertenciam ao EC IIA (32,1%) e 182 ao EC IIIB (67,9%). Na análise multivariada, observamos em nosso estudo que a presença de diversos fatores clínicos e demográficos, de variáveis histopatológicas, formas de tratamento, os diversos marcadores moleculares não parecem conferir um pior prognóstico às pacientes do grupo IIA. Neste grupo, os fatores que mostraram estar associados a um pior prognóstico foram o fato destas pacientes pertencerem ao padrão fenotípico triplo negativo ou ao padrão basal. Quando realizamos a análise multivariada para avaliação do risco de óbito em 120 meses, observamos que no estádio IIIB, o padrão fenotípico luminal A, luminal B, super-expressor de HER-2 e triplo-negativo, não esteve relacionado com óbito. O risco de óbito esteve associado com a presença de metástase linfonodal e a não realização de quimioterapia adjuvante. Conclusão: Com estes achados podemos concluir que os padrões fenotípicos basal e triplo-negativo estão relacionados com uma pior sobrevida nas pacientes IIA. Entretanto, os subtipos de câncer de mama não estão relacionados com o prognóstico no grupo de mulheres do estádio IIIB. A presença de metástase nos linfonodos e a não realização de quimioterapia adjuvante são fatores de risco para estas mulheres. / Introduction: The breast cancer is a great molecular and clinical heterogeneous disease. One of the most used breast cancer classification involves molecular events and classify breast cancer into distinct groups based on gene expression patterns: luminal (A and B), overexpression of HER-2, basal and and normal breast like. Once the breast subgroups have been identified, we used a large panel of different tumour markers, to differenciated to groups of patients: IIA and IIIB. Objectives: The aim of our study was to identify which factors could be necessary to determine the prognosis, in both patients group (IIA and IIIB), until 10 years of follow-up, when we consider clinical and demographics aspects, histopathologic characteristics of the tumour, treatment, molecular markers of the epithelial-mesenchymal transition (e-cadherin, p-cadherin, n-cadherin, vimentin, twist, snai l, slug), EGFR and NOS 2 and molecular subgroups (luminal A, luminal B, basal, triplenegative and overexpressor of HER-2), in breast cancer. Patients and Methods: Cases for this study were selected from Hospital A C Camargo, and included 268 patients with diagnosis of breast cancer submitted to surgery between 1980 and 1999. We applied immunohistochemical to analyse nine different molecular markers and each tumour was classified according to estrogen receptor, progesterone receptor and HER-2 expression in one of the molecular cathegories. Results: We observed that the size of most tumours varied 2.1 to 5.0 cm (57.8%), that they had histologic grade 2 (57.1%), nuclear grade 3 (61.6%), they showed 0 to 9 m mitoses and 59% had dissemination to lymph nodes. Eighty six patients were staged as IIA (32.1%) and 182 were staged as IIIB (67.9%). The multivarieted analysis showed that different clinical and demographics factors, histopathologic characteristics of the tumour, different treatment and some molecular markers didnt confer a worse prognostic to patients staged as IIA. The factors that showed an association with a worse prognosis were: tumor belongs to triple-negative or basal phenotype. When we realize the multivarieted analysis in stage IIIB, to look for the death risk in ten years, we observed that luminal A or B, over expression of HER-2 and triplenegative phenotype, didnt had any relation with death. The death risk was associated with dissemination to lymph nodes and with no adjuvant chemotherapy. Conclusion: We concluded that in stage IIA, the factors that showed an association with a worse prognosis were triple-negative or basal phenotype. And that the phenotype subgroups were not related to prognoses in stage IIIB and that the presence of lymph node dissemination and no adjuvant chemotherapy were risk factors for these patients.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:38:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CAROLINE STEGLICH RAMOS.pdf: 1233030 bytes, checksum: 0c294f9932ce70c185a878b013b4d356 (MD5) Previous issue date: 2012-02-07 / The breast cancer constitutes most common malignancy pathology among women where the knowledge of prognostic aspects suggest the clinical course of disease and patient survival. Detection of HLA-G has been described as prognostic factor for many cancers, this molecule, expresses in ectopic way in certain types of tumors, where induce the immunotolerance and, favors the tumoral immune escape. Thereby, this study aimed to evaluate the expression of the molecule HLA-G in infiltrating ductal breast carcinomas (CDI), as well as evaluate the polyphormism of the gene encoding HLA-G to determine possible correlation between these and the molecule expression. Thus, to meet these objectives, we evaluated the expression of HLA-G protein in forty-five patients with IDC by immunohistochemistry and also the insertion and deletion polymorphism of 14pb gene HLA-G in 80 samples of paraffin tumors, obtained from the Service of Anatomic Pathology at Araújo Jorge Hospital, and a group of 191 healthy people was used as control. All the statistical analyses were made using the programs GraphPad Instat version 5.01 and Genepop version 2.0. Our results showed that the group of patients were inbalance in Hardy-Weinberg (p=0,01), due to the excess of heterozygotes (p=0,0007), there is not statistically significant difference in the allelic frequencies in locus HLA-G, when compared the group of patients with the control group, however, there were difference in the genotypics frequencies when comparing the same groups (p=0,012), being the genotypic frequency deletion/insertion significantly higher in the group of patients. Also, the expression of HLA-G was observed in 62% of the samples analyzed by immunohistochemistry and this expression was observed an mostly in tumor cells and also by intra-tumoral inflammatory infiltrate (p=0,03). The analysis showed that the expression of HLA-G was significantly higher in patients that had shorter survival (log rank = 0,03), after 5 years of follow up and still there was also a correlation between the expression of HLA-G and increased incidence of lymph node metastases (p=0,01). Thus, the results suggest that the HLA-G expression in patients with CDI may be associate to poor clinical evolution, with the reduced survival. / O câncer de mama constitui-se na patologia maligna mais comum entre as mulheres onde o conhecimento dos aspectos prognósticos sugerem o curso clínico da doença e a sobrevida dos pacientes. A detecção da molécula HLA-G tem sido descrita como fator prognóstico para inúmeras neoplasias, esta molécula, expressa de maneira ectópica em certos tipos de tumores, onde induz a imunotolerância e favorece o escape imunológico tumoral. Desse modo, esse estudo objetivou avaliar a expressão da molécula HLA-G em carcinomas ductais infiltrantes da mama (CDI), bem como, avaliar polimorfismo do gene codificador de HLA-G para determinar possível correlação entre estes e a expressão da molécula. Assim, para cumprir tais objetivos, avaliou-se a expressão da proteína HLA-G em quarenta e cinco pacientes com CDI por imunoistoquímica, e ainda, o polimorfismo de deleção e inserção de 14pb do gene HLAG, em 80 amostras de tumores parafinados, obtidas junto ao Serviço de Anatomia Patológica do Hospital Araújo Jorge e um grupo composto por 191 indivíduos saudáveis foi utilizado como controle. Todas as análises estatísticas foram feitas utilizando os programas GraphPad Instat versão 5.01 e Genepop versão 2.0. Os resultados mostraram que o grupo de pacientes encontrava-se em desequilíbrio de Hardy-Weinberg (p= 0,01), devido ao excesso de heterozigotos (p= 0,0007), não havendo diferença estatisticamente significante nas freqüências alélicas no loco HLA-G quando comparado o grupo de pacientes com o grupo controle, no entanto, houve diferença nas freqüências genotípicas ao comparar os mesmos grupos (p= 0,012), sendo a freqüência do genótipo deleção/inserção significantemente maior no grupo de pacientes. Também foi observada a expressão de HLA-G em 62% das amostras totais analisadas por imunoistoquímica e essa expressão foi apresentada principalmente, em células tumorais havendo, no entanto, também expressão pelas células do infiltrado inflamatório intratumoral (p= 0,03). As analises mostram que a expressão de HLA-G foi significantemente maior em pacientes que tiveram menor sobrevida (log rank= 0,03), após 5 anos de seguimento clínico e ainda houve correlação entre a expressão de HLA-G e aumento naincidência de metástases em linfonodos (p= 0,01). Com isso, os resultados sugerem que a expressão de HLA-G em pacientes com CDI pode estar associada à pior evolução clínica dos mesmos havendo redução na taxa de sobrevida.