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Metamorfose do intestino medio de abelhas : proliferação ou migração celular? / Metamorphosis in the midgut of bees : proliferation or cellular migration?Cruz, Lilian Cota 26 February 2007 (has links)
Orientador: Mary Anne Heidi Dolder, Clovis Andrade Neves / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-10T19:24:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2008 / Resumo: As abelhas são insetos holometábolos, pois apresentam metamorfose completa. Na metamorfose destes insetos, o trato gastrointestinal é completamente remodelado. Poucos estudos enfatizam os aspectos que envolvem a reconstituição do epitélio do intestino médio de abelhas durante a metamorfose. Os trabalhos que destacam a proliferação das células digestivas durante a metamorfose carecem de documentação das figuras de mitose. O presente trabalho contribui para o conhecimento da biologia dos Hymenoptera, gerando dados que possam esclarecer aspectos da fisiologia digestiva durante a metamorfose dos insetos sociais. Comprovamos a necessidade de aumento do número de células digestivas do intestino médio de Melipona quadrifasciata anthidioides ao final da metamorfose sem, contudo, observar figuras de mitose que comprovassem a proliferação destas células, como notado em Nasutitermes rotundatus (Holmgren) (Isoptera). É possível que as células regenerativas tenham origem externa ao intestino médio e migrem através da membrana basal para se estabelecerem no epitélio. Além disso, nesse trabalho descrevemos a morfologia do epitélio do intestino médio com auxílio da microscopia eletrônica de varredura, demonstrando que somente a membrana peritrófica diferiu entre as castas / Abstract: Bees are holometabolus insects, since they present complete metamorphosis. During the metamorphosis of the insects the gut is completely remodeled. Few studies emphasize aspects of the renewal of the epithelium of bee¿s midgut during metamorphosis. Studies that describe digestive cell proliferation are lacking in images of mitosis. This research is a contribution to the understanding of Hymenoptera biology in relation to some aspects of digestive physiology during metamorphosis of social insects. We have established the necessity of increasing the number of cells in the median intestine of Melipona quadrifasciata anthidioides at the end of metamorfosis without having, however, observed mitosis, as was found for Nasutitermes rotundatus (Holmgren) (Isoptera). Possibly the regenerative cells arisen outside the midgut migrated through the basal membrane, to establish themselves in the epithelium. Also, in this study we describe the morphology of the median intestine epithelium, using scanning electron microscopy, showing that only the peritrophic membrane presented differences in the casts studied. / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural
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Determinação da relação entre proliferação celular, atividade metabólica e estágios da gestação e estabelecimento da ploidia e do ciclo celular em células de placentas bovinas / Relationship among cell proliferation, metabolic activity and days of pregnancy and determination of ploidy and cell cycle in bovine placentaPatricia dos Santos Carneiro 11 November 2003 (has links)
As regiões organizadoras de nucléolos (Nucleolar Organizer Regions - NORs) são regiões de cromatina levemente corada em volta da qual, no final da telófase, o nucléolo é novamente formado após a mitose. Um grupo peculiar de proteínas ácidas que têm alta afinidade por prata são localizadas nos mesmos locais que as NORs, o que confere as mesmas a propriedade de serem clara e rapidamente visualizadas por colorações que utilizam nitrato de prata. As NORs, quando coradas por prata são chamadas de AgNORs. O número de AgNORs está estritamente relacionado com a atividade transcricional do RNAr e com a agilidade e rapidez da proliferação celular. A homeostase celular utiliza-se de mecanismos através dos quais os tecidos de um organismo mantêm-se ou renovam-se, e para que isso ocorra, as células dispõe de dois programas genéticos principais: o ciclo celular e a apoptose. Considerando o crescimento da placenta e consequentemente das células trofoblásticas mono e binucleadas, esse trabalho teve dois principais objetivos: 1. determinar a relação quantitativa entre a proliferação celular e o estágio da gestação através da quantificação das AgNORs utilizadas como marcadores em placentas bovinas, evidenciando a intensa atividade proliferativa e metabólica das células binucleadas e estabelecendo o padrão de normalidade para gestações bovinas; e 2. determinar a ploidia das células do placentônio bovino e, através da análise dos estágios do ciclo celular, estabelecer a cinética celular envolvida na formação e diferenciação das células trofoblásticas binucleadas. Houve um aumento da quantidade de AgNORs nas células trofoblásticas mononucleadas a medida em que a gestação avançou, principalmente no terceiro trimestre de gestação. Isso indica um aumento na atividade proliferativa e/ou metabólica dessas células. O número de AgNORs expresso pela células binucleadas apenas aumentou do primeiro para o segundo trimestre, permanecendo, após esse estágio, praticamente constante. Isso nos leva a crer que a atividade das células binucleadas atinge seu ponto máximo no segundo trimestre e permanece com o seu metabolismo alto até o final da gestação. Além disso, esse número foi extremamente maior do que o observado nas células trofoblásticas mononucleadas, evidenciando a intensa atividade metabólica dessa célula. Na análise do ciclo celular, dois tipos celulares diferiam quanto ao seu tamanho (área) e quanto a sua granulosidade no placentônio, caracterizando diferenças quanto sua ploidia, sendo uma população diplóide e a outra tetraplóide. Para a fase G0-G1, a porcentagem obtida para o primeiro trimestre foi significativamente maior quanto comparada com o segundo e com o terceiro trimestre. Para a fase G2-M, encontramos um padrão inverso ao observado na fase G0-G1. Assim, podemos concluir que no primeiro trimestre de gestação as células tetraplóides estão formadas, mas não diferenciadas. A medida em que a gestação avança e a demanda metabólica fetal aumenta, essas células entram em processo de diferenciação para sua completa transformação em células capazes de produzir diversas substâncias e suprir as necessidades gestacionais maternas e fetais. / Nucleolar Organizer Regions (NORs) are weakly stained chromatin regions around which nucleoli reform after mitosis. A group of highly argyrophilic proteins are localized at the same sites as NORs, allowing NORs to be very clearly and rapidly visualized by silver nitrate staining procedures. They are called AgNORs. The number of AgNORs is strictly related to rRNA transcriptional activity and to the rapidity of cell proliferation. Cellular homeostasis uses two mechanisms to maintain or renew all tissues in organisms: the cell cycle and apoptosis. To comprehend the growth and the maturation of several tissues it is important to understand proliferation cellular kinetics and the cell cycle. The aim of this study was to evaluate the functional activity relation between the proliferative and metabolic capacity of trophoblastic mononucleate and binucleate cells from bovine placentomes at different stages of pregnancy. In addition, this study determined the ploidy and established the cellular kinetics involved in cell formation and differentiation through cell cycle analysis. The results demonstrated that: 1. The AgNOR number of mononucleate trophoblastic cells is related to their proliferative activity and stage of pregnancy; 2. The AgNOR number of binucleate trophoblastic cells is related to their level of metabolic activity and stage of pregnancy; 3. The AgNOR number of binucleate cell was just derived metabolic activity, and not proliferative activity, differing to mononucleate cells; 4. The AgNOR number was much greater in binucleate cells than in mononucleate cells, evidencing that the metabolism of binucleate cells was much higher than that of mononucleate cells; 5. Two cell populations form the bovine placentome: one is diploid cells and the other tetraploid; and 6. In the first trimester, the majority of tetraploid cells are not differentiated; with the progress of pregnancy and the increase in metabolic demands of fetus, the tetraploid cells begin a differentiation process and become cells that are able to supply maternal and fetal needs. These parameters could be applied to investigations about placental abnormalities due to pathologies or gestations derived from manipulated embryos.
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Análise microscópica e da imunoexpressão dos marcadores de proliferação celular Ki-67 e Ciclina B1 no epitélio gengival de pacientes sob terapia com nifedipinaCastro, Luciano Alberto de 28 February 2006 (has links)
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Previous issue date: 2006-02-28 / Drug induced gingival overgrowth (DIGO) is an adverse effect associated with the chronic use of three main drugs: phenytoin, an anticonvulsant, cyclosporin, an immunosuppressant drug and the pharmacological agents known as calcium channel blockers (CCB). Nifedipine is a calcium channel blocker, which because of its strong vessel dilating action has become widely used in cardiotherapy, in particular for the control of arterial hypertension. The aim of this study is to evaluate the microscopic characteristics and the epithelial proliferation index of gingival tissue in patients undergoing chronic treatment with nifedipine. To do so, twenty samples of gingival tissue of patients undergoing chronic treatment with nifedipine were obtained. The majority of these patients did not present clinically detectable gingival overgrowth. For comparative purposes, nine samples of gingival tissues of healthy patients who did not use drugs associated with gingival overgrowth (control) were used. The samples were microscopically analyzed using hematoxylin-eosin staining, to determine the size of the epithelial rete pegs. To carry out the epithelial proliferation index evaluation, a cellular identification of the Ki-67 and B1 Cyclin proteins was done using the immunohistochemical technique (streptavidin-biotin-peroxidase), as well as the quantification of positive cells (+cells) in mm².The results showed that the epithelial tissue of nifedipine users has considerably longer rete pegs that of the control group (Mann-Whitney, p=0.02). However, with regard to the proliferating activity of the keratinocytes, no significant difference was observed between the two groups (Mann-Whitney, p>0.05). The findings show that the microscopic alterations observed in the epithelium of nifedipine users are not caused by the mitotic activity of the keratinocytes but taking data from the literature into consideration, it is suggested that this increase might be caused by an inhibition of apoptosis rate of these same cells. / O crescimento gengival induzido por drogas (CGID) é um efeito adverso associado ao uso crônico de três medicamentos principais: a fenitoína, um anticonvulsivante, a ciclosporina, uma droga imunossupressora e os agentes farmacológicos conhecidos como bloqueadores dos canais de cálcio (BCC). A nifedipina é um bloqueador dos canais de cálcio que, por sua potente ação vasodilatadora, tornou-se uma droga largamente utilizada em cardioterapia, especialmente, para controle da hipertensão arterial. O presente trabalho teve como objetivo avaliar as características microscópicas e o índice proliferativo epitelial do tecido gengival de pacientes sob terapia crônica com nifedipina. Para este fim, foram obtidas vinte amostras de tecido gengival de usuários crônicos de nifedipina, sendo que, a maioria dos pacientes não apresentava CG clinicamente detectável. Para fins comparativos, foram utilizadas nove amostras de tecido gengival de pacientes saudáveis e não usuários de drogas indutoras de CG (controle). As amostras foram avaliadas microscopicamente, por meio da coloração de hematoxilina-eosina, quanto ao tamanho das cristas epiteliais. Para a avaliação do índice proliferativo epitelial, foi realizada a identificação celular das proteínas Ki-67 e Ciclina B1 pela técnica da imunoistoquímica (streptavidina-biotina-peroxidase), bem como a quantificação das células positivas (células +) por mm2. Os resultados revelaram que os pacientes usuários de nifedipina exibiram um tecido epitelial com cristas significativamente mais longas do que os pacientes do grupo controle (Mann-Whitney, p=0,02). No entanto, quanto à atividade proliferativa dos queratinócitos, não pôde ser observada diferença significante entre os dois grupos (Mann-Whitney, p>0,05). Os achados revelaram que as alterações microscópicas observadas no epitélio de pacientes usuários de nifedipina não ocorreram por aumento da atividade mitótica dos queratinócitos, mas considerando dados da literatura, sugere-se que este aumento possa ocorrer devido a uma inibição da taxa de apoptose destas células.
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Efeitos do exercício físico resistido em neutrófilos e linfócitos de camundongo nocaute para o receptor 1 de TNF-<font face=\"Symbol\">a. / Effects of resistance physical exercise in neutrophils and lymphocytes from knockout mice for TNF-<font face=\"Symbol\">a receptor 1.Fabio Takeo Sato 13 March 2013 (has links)
O objetivo desse estudo foi verificar os efeitos do treinamento resistido agudo (única sessão - TA) e de 5 semanas de exercício crônico (TC) sobre a apoptose de neutrófilos e linfócitos de camundongos controle e nocaute para TNFR1. Determinamos: viabilidade, externalização de fosfatidilserina, fragmentação do DNA e potencial de membrana mitocondrial. O ensaio do conteúdo de lipídeos neutros foi realizado em neutrófilos e a proliferação em linfócitos. TA e TC não alteraram os parâmetros avaliados nos neutrófilos. Não houve alteração nos linfócitos dos camundongos que realizaram TA. Porém, o TC aumentou a porcentagem de linfócitos com externalização de fosfatidilserina e diminuiu a proliferação dessa células nos camundongos selvagens. O exercício crônico aumentou a proporção de linfócitos em apoptose e diminuiu a proliferação nos camundongos nocaute para TNFR1. Concluímos então que a via do TNFR1 está envolvida neste processo. / The aim of this study was to investigate the acute or chronic effects of resistance exercise training on apoptosis of neutrophils and lymphocytes from knockout mice for TNF-<font face=\"Symbol\">a receptor 1 and control mice. The following parameters were determined viability, externalization of phosphatidylserine on the plasma membrane, DNA fragmentation and mitochondrial membrane potential. The measurement of the content of neutral lipids was performed in neutrophils only and the proliferation assay in lymphocytes. The acute and chronic exercise did not alter the parameters evaluated in neutrophils. Acute exercised also did not affect lymphocyte function. However, chronic resistance exercise increased the percentage of lymphocytes with phosphatidylserine externalization and decreased lymphocyte proliferation capacity of wild type mice. Chronic exercise raised the proportion of lymphocytes in apoptosis and decreased lymphocyte proliferation in TNFR1 knockout mice. We concluded that the effect of chronic exercise on lymphocyte death involves the TNFR1 pathway.
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Ontogênese de conexinas no cerebelo. / Ontogenesis of connexins in the cerebellum.Vivian de Alvarenga Guedes 27 July 2012 (has links)
As junções comunicantes formadas por conexinas (Cx) ligam o citoplasma de células adjacentes e permitem a passagem de moléculas e íons entre elas. No sistema nervoso, esses canais constituem as sinapses elétricas e são fundamentais para a fisiologia glial. No desenvolvimento, as conexinas estão envolvidas nos processos de migração, proliferação e diferenciação celular. Caracterizamos a expressão gênica (RNAm) e protéica de duas importantes conexinas no cerebelo de aves: Cx36 (neuronal) e Cx43 (glial). Houve um aumento protéico e na expressão de RNAm tanto para a Cx36 quanto para a Cx43. Para a Cx43 esse aumento foi associado a sinaptogênese. A Cx36 foi observada em estágios mais precoces, na camada proliferativa cerebelar. No cerebelo pós-natal, A Cx36 foi observada nos dendritos das células de Golgi. A Cx43 encontra-se principalmente em astrócitos da camada granular e substância branca. Em conclusão, nós observamos uma padrão de expressão espaço-temporal distinto entre as duas conexinas, relacionado a papéis específicos na função de desenvolvimento cerebelares. / Gap junction channels composed of connexins (Cxs) connect the cytoplasm of adjacent cells and allow the flow of ions and molecules between them. In the nervous system, these channels constitute the electrical synapses and are fundamental for the glial physiology. In the development, Cx channels are involved in the processes of cell proliferation, migration and differentiation. We characterized the gene (mRNA) and protein expression of Cx36 (neuronal) and Cx43 (glial) in the embryonic and postnatal avian cerebellum. Cx36 and Cx43 mRNA and protein levels were upregulated during development. For Cx43 this increase was clearly associated with the synaptogenesis process. Cx36 was observed in earlier stages, localized in the cerebellar proliferative layer. In the postnatal period, Cx36 was observed in the dendrites of Golgi cells. Cx43 was localized in the astrocytes of the grey and white matter. In conclusion, we observed a distinct spatio-temporal expression pattern for Cx36 and Cx43, wich is likely related to particular roles in cerebellar development and function.
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Influência de agentes antiangiogênicos (propranolol) em endometriose experimentalmente induzida em ratas / Effect of anti-angiogenics drugs (propranolol) in experimentally induced endometriosis in ratsJosé Vitor Cabral Zanardi 24 January 2017 (has links)
Propõe-se que a angiogênese represente um importante passo no processo de adesão, implantação, invasão e crescimento das células endometriais, visto que, semelhante aos tumores metastáticos, implantes endometrióticos dependem de neovascularização para se proliferarem. Tal constatação sugere que a supressão do desenvolvimento de vasos sanguíneos por meio da inibição de fatores angiogênicos específicos pode ser uma nova oportunidade terapêutica na abordagem da endometriose. Estudos demonstram um efeito antiangiogênico do propranolol anticancerígeno em diferentes tipos de tumores. Tal achado sugere que o propranolol pode contribuir clinicamente exercendo papel sobre a inibição de neoangiogênese, e tal efeito resultar em um impacto sobre as lesões de endometriose. Foi estudado o efeito do propranolol sobre marcadores de diferenciação (Metalotioneínas MT1 e MT2), invasão (MMP9 e TIMP2), proliferação celular (PCNA) e apoptose (CASP8 - caspase 8) por coloração imunohistoquímica, e também a influência sobre a adesão, motilidade e angiogênese das lesões de endometriose por quantificação da expressão relativa (RQ) por PCR em tempo real dos genes Vegf, Cald1, Pcna, Tnf e Sparc. Foram utilizadas 30 ratas adultas Wistar, fêmeas, virgens que foram submetidas a laparotomia para indução de lesões de endometriose. As ratas foram separadas em três grupos, e sacrificados após 14 dias de tratamento de dose baixa (PB, n = 10) e dose elevada (PA, n = 10) de propranolol; e o grupo de controlo (C, n = 10) sem tratamento. As lesões foram excisadas para análise histológica com o corno uterino contralateral, com confirmação da presença de tecido glandular e estroma endometrial. No presente estudo foi observada uma redução na marcação imunohistoquímica para Metalotioneínas, com 60% de positividade no grupo controle, 10% e 11,1% para o PA, PB, respectivamente (p <0,05). Também observamos uma diminuição na expressão do gene de Pcna (C = 1,04; PA = 0,32; PB = 0,69). Em outros marcadores de imunohistoquímica e quantificação da expressão gênica nas lesões e no tecido uterino não foram observadas diferenças significativas. O tratamento com drogas antiangiogênicas como propranolol oferece novas perspectivas de abordagem terapêutica para pacientes com endometriose. / Since endometrial implants rely on neovascularization to proliferate, in a similar way to metastatic tumors, it is proposed that angiogenesis represents an important step in the process of adhesion, implantation, invasion and growth of ectopic endometrial cells. These findings suggest that the suppression of the development of blood vessels by inhibition of specific angiogenic factors may be a new therapeutic opportunity in endometriosis approach. Studies demonstrate an antiangiogenic anticancer effect of propranolol in different types of tumors. This drug can play a role in the inhibition of neoangiogenesis, which could interfere on the growth of endometriotic lesions. The effect of propranolol on markers of differentiation (Metallothionein, MT1 and MT2), invasion (MMP9 and TIMP2), cell proliferation (PCNA) and apoptosis (CASP8 - caspase 8) was evaluated by immunohistochemical staining, as well as the influence of propranolol on adhesion, motility and angiogenesis of both endometriotic lesions and endometrial tissue through quantification of relative expression (RQ) by real-time PCR of the genes Vegf, Cald1, Pcna, Tnf and Sparc. Thirty Wistar adult rats, females, virgins who underwent laparotomy for induction of endometriosis lesions were used. The rats were divided into three groups, and sacrificed after 14 days of low (BP, n = 10) and high dose treatment (AP, n = 10) of propranolol; and the control group (C, n = 10), untreated. The lesions were excised for histological analysis with the contralateral uterine horn, with confirmation of the presence of glandular tissue and endometrial stroma. In the present study we observed a reduction in immunostaining for Metallothioneins, with 60% positive in the control group, in comparison to 10% and 11.1% for PA and PB, respectively (p <0.05). Furthermore, there was a decrease in expression of Pcna gene (C = 1.04; PA = 0.32; PB = 0.69) which was statistically significant (p<0.05). However, quantification of gene expression regarding other immunohistochemical markers evaluated both in the endometriotic lesions and uterine tissue showed no statistically significant difference. In conclusion, antiangiogenic drugs like propranolol may offer new perspectives for the therapeutic approach of patients with endometriosis.
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Avaliação de marcadores de proliferação celular e apoptose em tecido endometrial eutópico e ectópico em modelo experimental de endometriose em coelhas / Evaluation of cell proliferation and apoptosis markers on eutopic and ectopic endometrium in a rabbit experimental modelJulio Cesar Rosa e Silva 10 December 2007 (has links)
Objetivo:Caracterizar o padrão de homeostase (proliferação celular e apoptose) de tecido endometrial eutópico e ectópico de coelhas submetidas à indução de lesões de endometriose por modelo experimental já conhecido, quatro e oito semanas após o procedimento de implantação endometrial. Material e Métodos:Estudo experimental animal sendo utilizado 20 coelhas adultas Nova Zelândia, fêmeas e virgens, submetidas à laparotomia para indução da lesão de endometriose, através da ressecção de um corno uterino e fixação no peritônio pélvico de fragmento de 5mm. As coelhas foram divididas em dois grupos de 10 animais, sendo os animais do grupo 1, sacrificados após 4 semanas da indução da lesão endometrial ectópica e os do grupo 2 após 8 semanas. A lesão foi excisada para análise histológica juntamentecom o corno uterino contralateral, comprovando a presença de tecido endometrial glandular e estromal. Reações de imunohistoquímica foram realizadas, no tecido endometrial eutópico e ectópico, para proliferação celular através do PCNA e para apoptose através do fas, na glândula e estroma, sendo obtido o índice de proliferação celular (IPC) e de apoptose (IA) através do número de células marcadas por 1000 contadas, e o índice dehomeostase tecidual através do coeficiente entre o IPC e IA. Resultados:Observou-se maior índice de proliferação no tecido ectópico, tanto glandular como estromal, quando comparado com o endométrio eutópico, com 4 e 8 semanas após a indução da lesão. Contudo, quando as lesões ectópicas foram comparadas entre si, com 4 e 8 semanas, não foi observada diferença significativa. Quando comparamos o índice de apoptose, observamos que não houve diferença entre o tecido ectópico e o eutópico, tanto glandular como estromal nas lesões induzidas e analisadas com 4 semanas, porém no tecido glandular das lesões analisadas com 8 semanas houve diferença significativa entre a lesão ectópica e o tecido endometrialeutópico 0,0819 ± 0,0213 e 0,0995 ± 0,01336, respectivamente (p=0,04). A homeostase tecidual foi calculada e observou-se uma tendência destes tecidos a proliferação, sempre com índicesde homeostase tecidual (IPC/IA) acima de 1. Conclusão:As lesões ectópicas parecem ter uma proliferação celular maior que o endométrio eutópico levando a uma tendência ao crescimento tecidual descontrolado nas lesões de endometriose induzidas. / Objective: To characterize the pattern of tissue homeostasis (cell proliferation and apoptosis) of eutopic and ectopic endometrium in rabbitsfour and eight weeks after endometrium implantation for induction of endometriotic lesions by experimental standardized method. Material and methods: Animal experimental study with 20 female, virgins and adult New Zeland rabbits, submitted to laparotomy for endometriosis induction by resection of one uterine horn, isolation of the correspondent endometrium and fixation of a 5mm tissue segment to the pelvic peritoneum. The animals were divided in two groups of 10, group 1 was sacrificed after 4 weeks of endometriosis induction and group 2 eight weeks after the procedure. The lesion was excised for later histological analysis together with the opposite uterine horn, just to verify the presence of endometrial gland and stroma. Immunohistochemistry reactions were performed in order to study cell proliferation (by PCNA technique) and apoptosis (by fastechnique) in the eutopic and ectopic endometrium, and a Cell Proliferation Index (CPI) and an Apoptotic Index (AI) werecalculated based on these findings, considering the number of marked cellsper 1000 counted cells. The Homeostatic Tissue Index (HTI) was considered to be the relation between CPI and AI (CPI/AI). Gland and stroma were analyzed separately. Results: There was an increase in the CPI of the ectopic tissue, considering gland and stroma, after four and eight weeks of endometriosis induction when comparing to the eutopic one. However, when comparing the ectopic lesions, there was no difference between four and eight weeks of induction. Analyzing the only the AI, there was no difference between the eutopic and the ectopic endometrium with four weeks,nevertheless there was a significant difference in the glandular tissue of the lesions with eight weeks when comparing eutopic and ectopic tissues (0.0819 ± 0.0213 e 0.0995 ± 0.01336, respectively (p=0,04)). Based on HTI there was a tendency to cell proliferation on these tissues, always with and HTI (CPI/AI) higher than 1. Conclusions: Ectopic lesions seem to have a higher cell proliferation than the eutopic endometrium, tending to present an uncontrolled tissue growth in the endometriotic inducted lesions.
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Anormalidades citogenéticas e sua relação com a proliferação e a apoptose celular em portadores de mieloma múltiplo / Cytogenetic abnormalities and their relation to cell proliferation and apoptosis in multiple myeloma patientsCamila da Cruz Gouveia Linardi 14 January 2011 (has links)
Anormalidades citogenéticas recorrentes são encontradas nas células tumorais de portadores de mieloma múltiplo. No momento do diagnóstico a t(4;14)(p16;q32) e a del(17p13) ocorrem em 10-20% e 5-10% dos casos, respectivamente, e são associadas à evolução clínica desfavorável. A del(13q14), por sua vez, ocorre em cerca de metade dos pacientes, porém não apresenta valor prognóstico importante. Entretanto, há evidências na literatura de que a del(13q14) seja um pré requisito para a expansão tumoral. O objetivo deste trabalho foi determinar a prevalência destas anormalidades cromossômicas em portadores de mieloma múltiplo recém diagnosticado e correlacioná-las com as taxas de proliferação e apoptose celular na medula óssea e a quantificação de plasmócitos em sangue. Amostras de aspirado de medula óssea provenientes de 84 portadores de mieloma múltiplo recém diagnosticado foram avaliadas quanto à presença de del(13q14), t(4;14)(p16;q32) e del(17p13) pela técnica de marcação fluorescente dos plasmócitos seguida pela hibridação in situ por fluorescência (cIg-FISH). Desta forma, foi realizada a correlação entre estas alterações e a quantificação de plasmócitos em sangue periférico, a proporção de plasmócitos positivos para o marcador de proliferação celular Ki-67 e para o marcador de apoptose anexina V, obtidos pela técnica de citometria de fluxo. Concomitantemente, foram avaliados parâmetros clínicos e laboratoriais e realizada a análise de sobrevida global (SG) e sobrevida livre de eventos (SLE). Os pacientes foram divididos em quatro grupos de acordo com a anormalidade citogenética presente: (1) grupo com t(4;14)(p16;q32), (2) grupo com del(17p13), (3) grupo com del(13q14) e sem nenhuma das outras alterações e (4) grupo sem nenhuma das anormalidades pesquisadas. Foi possível realizar a pesquisa de todas as anormalidades cromossômicas em 76 pacientes dos quais: vinte nove (38,1%) possuíam somente del(13q14), seis (7,89%) possuíam t(4;14)(p16;q32) e seis (7,89%) possuíam del(17p13). Não foi observada diferença estatisticamente significante entre os diferentes grupos de anormalidades citogenéticas quanto à mediana de expressão de Ki-67 em plasmócitos (p=0,7), a mediana de marcação dos plasmócitos com anexina V (p=0,94), a razão entre expressão de Ki-67 e marcação com anexina V (p=0,57) e a quantidade de plasmócitos em sangue periférico (p=0,07). Entretanto, observou-se tendência à correlação entre porcentagem de células acometidas pela del(13q14) e expressão de Ki-67 (p=0,06). A maior expressão de Ki-67 e a maior quantidade de plasmócitos circulantes se associaram a características clínicas e laboratoriais de mau prognóstico. Em análise multivariada somente níveis séricos elevados de desidrogenase lática (DHL) (p=0,002) se associaram à SLE e DHL elevado (p=0,013), a não realização de quimioterapia em altas doses com resgate de células tronco hematopoéticas (p=0,016), sistema de estadiamento internacional (ISS) III (p=0,001) e t(4;14)(p16;q32) (p=0,04) se associaram à pior SG / Recurrent cytogenetic abnormalities are found in multiple myeloma tumour cells. Among them, t(4;14)(p16;q32) e a del(17p13) occur respectively in 10-20% and 5-10% cases in the moment of diagnosis, and are associated with unfavorable clinical outcome. Del(13q14) occurs in half of patients, although, it has no important prognostic value. However, there are evidence in literature that del(13q14) is a pre requisite for tumour expansion. The purpose of this work was to determine the prevalence of chromosomal abnormalities in newly diagnosed multiple myeloma patients and correlate these abnormalities with the quantification of plasmocytes in blood and the rates of cellular proliferation and apoptosis. Bone marrow samples from eighty four newly diagnosed multiple myeloma patients were evaluated for the presence of del(13q14), t(4;14)(p16;q32) and del(17p13) by fluorescent in situ hybridization coupled to cytoplasmic staining of specific imunoglobulin (clg-FISH). Therefore, a correlation between these alterations and the proportion of plasmocytes positive for the proliferation antigen Ki-67 and for the apoptosis marker annexin V, measured by flow cytometry, was done. The quantification of plasmocytes in peripheral blood by flow cytometry was also made. Concurrently, clinical and laboratorial parameters, overall survival (OS) and event free survival (EFS) were also evaluated. Patients were divided in four groups accordingly to the cytogenetical abnormality present (1) t(4;14)(p16;q32), (2) del(17p13), (3) del(13q14) and none of the other alterations and (4) group with no researched abnormality. The research of all chromosomal abnormalities was possible in 76 patients: 29 (38,1%) had only del(13q14), six (7,89%) had t(4;14)(p16;q32) and six (7,89%) had del(17p13). No significant statistical difference was observed between different groups comparing the median expression of Ki-67 in plasmocytes (p=0,7), the median plasmocytes positive for annexin V (0,94), the ratio between Ki-67 and annexin V (p=0,57), and the quantity of plasmocytes in peripheral blood (p=0,07). However, there was a tendency for a correlation between proportion of cells with del(13q14) and Ki-67 expression (p=0,06). Higher Ki-67 expression and higher number of blood plasmocytes correlated to clinical and laboratorial features associated with unfavorable outcome. In multivariate analyses, only elevated lactate dehydrogenase (p=0,002) was associated to inferior EFS, and elevated lactate dehydrogenase (p=0,013), treatment without high dose chemotherapy with stem cell support (p=0,016), International Staging System III (p=0,001) and presence of t(4;14)(p16;q32) (p=0,04) were associated to inferior OS
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Gotas lipídicas intracitoplasmáticas em carcinomas de glândulas salivares = estudo imunohistoquímico / Intracytoplasmic lipid droplets in salivary gland carcinomas : immunohistochemical studySantos, Harim Tavares dos, 1989- 24 August 2018 (has links)
Orientadores: Albina Messias de Almeida Milani Altemani, Fernanda Viviane Mariano / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-24T17:05:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2014 / Resumo: Introdução: Gotas lipídicas (GL) são organelas altamente reguladas envolvidas na ativação e metabolismo celular assim como em processos inflamatórios e neoplásicos. O aumento da lipogênese levando a um aumento no número de GL é um fenótipo comum a numerosos carcinomas humanos e tem sido associado com: diferenciação, proliferação e agressividade tumoral. Objetivo: Avaliarem carcinomas salivares: a) a frequência e quantidade das GLs citoplasmáticas, correlacionando-as com a morfologia tumoral, grau de diferenciação e proliferação celular e b) a expressão de proteínas relacionadas ao processo secretório celular (STAT5a e mamoglobina). Material e métodos:em 79 casos de carcinomas de glândulas salivares foram utilizados os anticorpos Ki-67, adipophilin, STAT 5a e mamoglobina. A quantificação da imunoreatividade ao adipophilin, STAT 5a e mamoglobina foi através de uma escala semi-quantitativa. A intensidade de marcação do STAT 5a e mamoglobina foi subjetivamente avaliada como fraca/moderada ou intensa. A positividade ao Ki-67 foi calculada através da relação entre o número de células positivas e o número total de células tumorais em três áreas selecionadas da amostra. Resultados:os subtipos histopatológicos que apresentaram positividade ao adipophilin em 50% ou mais das células, foram os casos: MASC (100%), CCA (85,64%), CM (83%), CDS (75%) e CSeb (50%). Índice de proliferação maior que 10% das células tumorais foi observado no CSeb (Ki-67 = 29%), seguido do CDS (Ki-67 = 23,11%) e do CM (Ki-67 = 12,15%). Nos casos de CAC com transformação para alto grau a área transformadaapresentou maior proliferação e lipogênese quando comparada à área convencional. Somente os casos de MASC apresentaram imunorreatividade acentuada para STAT5a e mamoglobina. Conclusões: Embora exista correlação entre o acúmulo de gotas lipídicas e o índice proliferativo do tumor, em alguns tipos de carcinomas salivares tal depósito está possivelmente relacionado à diferenciação celular (CSeb e MASC) ou alteração metabólica (CCA). O acúmulo de Gl refletindo diferenciação celular se apresenta como gotas maiores em contraste com as microgotas frequentemente detectadas nos carcinomas com alto índice proliferativo. No MASC a forte expressão de STAT5a e mamoglobina sugere que a que o acúmulo de GL possivelmente reflete diferenciação do tipo lactacional.Mais estudos são necessários para entender o papel das gotas lipídicas citoplasmáticas em carcinomas de glândulas salivares. (Apoio FAPESP: 2012/18104-4 e 2012/18086-6) / Abstract: Introduction: Lipid droplets (LD) are highly regulated organelles involved in cell activation and metabolism as well as in inflammatory and neoplastic processes Upregulated lipogenesis leading to an increased number of cytoplasmic LD is a common phenotype to numerous human carcinomas and has been associated with: differentiation, proliferation and aggressiveness of the tumor. Objective: to evaluate in salivary carcinomas: a) the frequency and quantity of cytoplasmics LDs, correlating it with tumoral morphology, differentiation grade e cellular proliferation and b) the expression of proteins associated with cellular secretor process (STAT5a and mammaglobin). Material and Methods:in 79 cases of salivary gland carcinomas, an immunohistochemical study was performed with the antibodies Ki-67, adipophilin, STAT 5a and mammaglobin. The positive neoplastic cells were assessed regarding quantity using a semi-quantitative scale. The intensity of expression for each antibody was subjectively evaluated as weak/ moderate or intense.The positivity for Ki-67 was calculated based on the relation between the number of positive cells and the total number of the tumoral cells in three selected areas. Results: the histopatologic subtypes that presented positivity for adipophilin in 50% or more of cells were: AciCC (85,64%), MASC (100%), MC (83%), SDC (75%), SebC (50%). Proliferation index higher than 10% of tumoral cells was observed in SebC (Ki-67 = 29%), SDC (Ki-67 = 23,11%) and MC (Ki-67 = 12,15%). In ACC with high grade transformation the, the transformed area presented both higher proliferation and lipogenesis when compared to the convencional area. Only the cases of MASC presented accentuated immunoreactivity for STAT5a and mammaglobin. Conclusions: Although in salivary carcinomas there is correlation between the accumulation of lipid droplets and the proliferative index of the tumor, in some types of carcinomas such deposit is possibly related to cellular differentiation (SebC and MASC) or metabolic alteration (AciCC). The accumulation of LD that reflects cellular differentiationpresents features of macro droplets in contrast to micro-droplets frequently detected in carcinomas with high proliferative index. In MASC, the strong expression of STAT5a and mammaglobin suggests that LD accumulation is probably due to lactational-like differentiation. More studies are necessary to understand the role of cytoplasmic lipid droplets in salivary gland carcinomas (Supported by FAPESP: 2012/18104-4and2012/18086-6) / Mestrado / Patologia / Mestre em Estomatopatologia
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Atividade biológica do composto trans-[Ru(NO)Cl(cyclam)](PF6)2 na proliferação/migração de células endoteliais e na adesão de plaquetária / Biological activity of the compound trans-[Ru(NO)Cl(cyclam)](PF6)2 in the proliferation/migration of endothelial cell and platelet adhesionNegreti, Amanda Alvim, 1987- 04 April 2014 (has links)
Orientador: Marta Helena Krieger / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-25T08:07:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2014 / Resumo: O óxido nítrico (NO) é um agente biológico multifuncional que vem sendo alvo de diversos estudos. A sua capacidade de promover a reendotelização ou inibir a formação da neointima após injúria vascular é reconhecida nos últimos anos devido a sua eficácia em atuar na proliferação e na migração de células endoteliais, bem como na sua capacidade de inibir a adesão e agregação plaquetária. A neointima intra-stent pode ser combatida com o desenvolvimento de stents eluidores de drogas (SED). Os nitrosilos complexos de rutênio se destacam dentre os doadores de NO, devido a sua capacidade de liberar o NO de forma controlada e incorporados a veículos. Este estudo se propôs padronizar as condições de cultivo das células endoteliais umbilicais humana (HUVEC) "saudáveis", verificar a margem de segurança do composto trans-[Ru(NO)Cl(cyclam)](PF6)2, nomeado Ru(cyclam)NO, em células HUVEC por meio de ensaios de citotoxicidade, verificar sua capacidade de promover proliferação/migração celular e a inibição da adesão de plaquetas humanas, e, também verificar a biocompatibilidade deste composto quando incorporados em plataformas de aço. Expressão de proteínas fenotípicas da célula endotelial foi utilizada para padronização de cultivo de HUVEC. A concentração de 0,5mM foi definida como ótima nas condições experimentais. A ação do composto foi caracterizada pelas respostas de manutenção da proliferação (incorporação de timidina triciada - 3HT) e no aumento da migração celular (ensaio transwell), entretanto foi capaz de reduzir as ações estimulatórias do fator de crescimento epidermal (EGF). A citotoxicidade do complexo e das plataformas de incorporação foi determinada por ensaio de redução do 3-brometo de 4,5-dimetil-2-tiazolil-2,5-difenil-tetrazólio (MTT). Em relação ao nitroprussiato de sódio (SNP) a toxicidade induzida pelo composto nas concentrações de 0,5mM a 2,0mM foi reduzida, mesmo na maior concentração após 24 horas de exposição (MTT: 59% ± 4,42). O complexo mostrou ser capaz de reduzir a adesão ao fibrinogênio de plaquetas humanas ativadas ou não. A biocompatibilidade total das plataformas de inox, matriz de siloxano e matriz de siloxano incorporado com Ru(cyclam) foram demonstradas pelo ensaio de redução de MTT e a funcionalidade pelo ensaio de migração transwell. A margem de segurança do Ru(cyclam)NO e de suas respectivas plataformas de imobilização foram caracterizadas como baixa e ausente citotoxicidade. As avaliações funcionais evidenciaram que o Ru(cyclam)NO manteve a proliferação celular, estimulou a migração das HUVEC e inibiu a adesão de plaquetas humanas. Estas evidências constituem-se de pontos fundamentais para se obter a reendotelização / Abstract: Nitric oxide (NO) is a multifunctional biological agent that has been the subject of several studies. In recent years, its ability to promote re-endothelialization or inhibit neointimal formation after vascular injury is recognized due to its efficacy in stimulates proliferation and migration of endothelial cells, as well as its ability to inhibit platelet adhesion and aggregation. The in-stent neointimal can be prevented with the development of drug-eluting stents (DES). Nitrosyl ruthenium complexes highlighted from the NO donors, due to their ability to release NO in a controlled manner and incorporated into vehicles. This study aimed to: 1) standardize the cultivation conditions of " healthy " human umbilical endothelial cells (HUVEC); 2) verify the safety margin of the compound trans - [Ru(NO)Cl(cyclam)](PF6)2, named Ru(cyclam) O, in HUVEC cells by cytotoxicity assay; 3) determine its ability to promote proliferation/migration cell and inhibition adhesion of human platelets; and also 4) verify biocompatibility of this compound when incorporated in slides. Phenotypic expression of the endothelial cell protein was used to standardize cultured HUVEC. A concentration of 0.5 mM was set to the optimal experimental conditions. The Ru(cyclam)NO action was characterized by responses of the proliferation maintenance (tritiated thymidine incorporation - 3HT ) and migration cell increased (transwell assay), however was able to reduce the stimulatory actions of epidermal growth factor (EGF). The cytotoxicity of the compound and its incorporation slides was determined by reduction of 3- bromide, 4,5-dimethyl -2-thiazolyl -2 ,5 -diphenyl tetrazolium bromide (MTT). In relation to sodium nitroprusside (SNP), Ru(cyclam)NO showed reduced toxicity from 0.5 mM to 2.0 mM, even at the highest concentration that was 59% ± 4.42 of the cell viability. The Ru(cyclam)NO was shown to reduce adhesion to fibrinogen of human platelets activated or not. The total biocompatibility of stainless slide with siloxane matrix and siloxane matrix incorporated with Ru(cyclam)NO were demonstrated by MTT reduction assay and their functionality by transwell migration assay. The safety margin of Ru(cyclam)NO and their respective slide incorporated were characterized as low or absent cytotoxicity, respectively. Functional evaluations showed that the Ru(cyclam)NO maintained cell proliferation and stimulated the migration of HUVEC, well as well, inhibited adhesion of human platelets. These obtained evidences are key points to get the re-endothelialization / Mestrado / Fisiologia / Mestra em Biologia Funcional e Molecular
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