Hypertension is associated with marked cardiac sympathetic over-activity and end organ hyper-responsiveness. The sympathetic dysfunction is caused by aberrant calcium (Ca²⁺) handling resulting in enhanced neurotransmission. However, it remains unclear whether the sympathetic neuron or the myocytes is the primary driver behind the initiation and maintenance of the autonomic phenotype. The work in this thesis characterises the Ca²⁺ dysfunction and regulation at the membrane level. Further, it employs physiologically coupled sympathetic neurons and ventricular myocytes to determine the cellular driver of cardiac dysautonomia in the pro-hypertensive state. <b>Chapter 1</b> provides a general overview of the field of autonomic hypertension with a specific focus on the sympathetic control of cardiac excitability. In particular, the role of Ca²⁺ and cyclic nucleotides in the facilitation of neurotransmission are explored. <b>Chapter 2</b> details the methods used in this thesis. It provides rationale for the approaches taken to record membrane Ca2+ currents, cyclic adenosine monophosphate (cAMP) levels and cAMP-activated protein kinase (PKA) activity, and the development and uses of a co-culture of coupled sympathetic neurons and ventricular myocytes. <b>Chapter 3</b> describes the successful development of an effective voltage clamp method to isolate whole cell Ca²⁺ currents in sympathetic neurons. It details the issue of space clamp problem when using this technique on peripheral neurons and provides experimental guidance on how to quantify and limit theses issues. <b>Chapter 4</b> identifies that the pro-hypertensive four-week old neurons from the spontaneously hypertensive rat (SHR) have significantly larger whole cell Ca²⁺ currents when compared to normotensive (Wistar Kyoto-WKY) neurons, that are largely N-type in nature. Restoring the cGMP cyclic nucleotide dysfunction seen in these cells, rescues the ion channel phenotype and bring the Ca²⁺ down to levels seen in the normotensive WKY neuron. Further, it identifies that phosphodiesterase (PDE) 2A inhibition differentially affects the currents in the WKY and SHR, further supporting the notion of PDE2A dominance. <b>Chapter 5</b> identifies the presence and functional relevance of cGMP cross-talk with the cAMP-PKA pathway in sympathetic neurons. This cross talk is significantly altered in the pro-hypertensive state, via the differential involvement of PDEs. It functionally identifies the presence of PDE3 and PDE2A and provides further evidence that these enzymes could be dysregulated in pro-hypertensive neurons. <b>Chapter 6</b> describes the use of a co-culture model of ventricular myocytes and sympathetic neurons. Physiological stimulation of the sympathetic neuron with nicotine whilst monitoring cAMP levels in the myocytes confirms that the cellular phenotypes seen in the individual cells are functionally present in the co-culture. Using cross-cultures, it identifies the neuron as the principal driver behind the cardiac sympathetic responses observed in pro-hypertension. The results provide evidence for a dominant role played by the neuron in driving the adrenergic phenotype seen in cardiovascular disease and highlights the potential of using healthy neurons to turn down the gain of neurotransmission, akin to a smart pre-synaptic &beta;-blocker. <b>Chapter 7</b> forms the concluding discussion that summarises the main findings of this thesis and attempt to place it in a clinical context, and highlights avenues of further research. In particular, the possibility of using a cell therapeutic approach to treat sympathetic hyperactivity.

Submitted by JULIANA DE CARVALHO MACHADO null (jcmjulianacarvalho@yahoo.com.br) on 2016-05-19T15:21:12Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Juliana Carvalho (Maio de 2016).pdf: 1590692 bytes, checksum: e5232c5b91f0ba6b25657c023b2ddc84 (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-05-23T16:56:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 machado_jc_me_araca.pdf: 1590692 bytes, checksum: e5232c5b91f0ba6b25657c023b2ddc84 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-23T16:56:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 machado_jc_me_araca.pdf: 1590692 bytes, checksum: e5232c5b91f0ba6b25657c023b2ddc84 (MD5) Previous issue date: 2016-05-16 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Terapias biológicas tem buscado novas substâncias/protocolos que promovam a eliminação microbiana e induzam ou estimulem a regeneração pulpar e o desenvolvimento completo radicular de dentes permanentes jovens com processos patológicos pulpares. Os objetivos do estudo foram avaliar a a tividade antimicrobiana/antibiofilme de algumas combinações de antibióticos sobre microrganismos de interesse endodôntico e analisar o efeito da combinação de antibióticos com melhor ação antimicrobiana associada à sinvastatina na expressão de marcadores odontoblásticos em células da polpa dental humana (CPDH). A atividade antimicrobiana dos seguintes antibióticos : Metronidazol (ME), Ciprofloxacina (CI), Minociclina (MI), Doxicilina (DO) e Fosfomicina (FO), isolados ou em combinação dupla (ME+CI, ME+MI, ME+DO, ME+FO, CI+MI, CI+DO, CI+FO, DO+FO, MI+FO) ou tripla (ME+CI+MI, ME+CI+FO, ME+MI+FO, ME+CI+DO, ME+DO+FO, CI+DO+FO, CI+MI+FO) foram testados contra Streptococcus mutans, Enterococcus faecalis, Actinomyces israelii e Candida albicans em condições planctônicas. Biofilmes mono-espécie de E. faecalis e biofilmes em dual-espécies de E. faecalis and C. albicans foram preparados em blocos de dentina para testar a atividade antibiofilme das combinações de antibióticos com os melhores resultados microbiológicos. O efeito antibiofilme das combinações antibióticas sobre biofilme de E. faecalis dentro dos túbulos dentinários foi também avaliada por microscopia confocal. Culturas de CPDH foram expostas à combinação antibiótica com melhor resultado microbiológico e sinvastatina e determinada a viabilidade celular, atividade da fosfatase alcalina (ALP), deposição de nódulos de mineralização e expressão de DSPP (sialofosfoproteína dentinária), importante marcador odontoblástico de mineralização denti nária. Os dados foram 9 analisados estatisticamente, considerando p<0,05 . Todas as combinações de antibióticos reduziram o crescimento bacteriano, exceto por CI+DO e DO+FO para A. Israelii. ME+CI+MI e ME+MI+FO inibiram significantemente o crescimento de A. israelii e E. faecalis, e ME+MI+FO eliminou S. mutans. ME+MI+FO e ME+CI+FO tiveram o melhor efeito contra biofilme de E. faecalis, em mono ou dual-espécies e dentro dos túbulos dentinários. CI e ME+CI+FO afetaram a viabilidade das células pulpares, em 1 e 7 dias. A atividade de ALP aumentou com a presença de sinvastatina para todos os grupos, exceto para CI e ME+CI+FO. Grupos contendo sinvastatina mostram maior deposição de nódulos de mineralização e expressão de DSPP que os grupos sem sinvastatina. Pode-se concluir que a combinação de antibióticos tripla ME+CI+FO teve efeito marcante contra os microrganismos endodônticos, em condições planctônicas e em biofilme. A sinvastatina estimulou a expressão de marcadores odontoblásti cos de mineralização dentinária pelas HDPC; entretanto, seu efeito foi reduzido pela presença da CI. / Biological therapies have searching for substances/protocols, which promote microbial elimination and induce or stimulate pulp regeneration and completion of apical root development in young permanent teeth with pulp pathological processes . The objectives of this study were to evaluate the antimicrobial /anti-biofilm activity of some antibiotics combinations on endodontic microorganisms and the effect of the combination of antibiotics with the best antimicrobial action associated with simvastatin on expression of odontoblast markers by human dental pulp cells (HDPC). The antimicrobial activity of the following antibiotics : Metronidazole (ME), Ciprofloxacin (CI), Minocycline (MI), Doxycycline (DO) and Fosfomycin (FO), either alone or in double (ME+CI, ME+MI, ME+DO, ME+FO, CI+MI, CI+DO, CI+FO, DO+FO, MI+FO) or triple combinations (ME+CI+MI, ME+CI+FO, ME+MI+FO, ME+CI+DO, ME+DO+FO, CI+DO+FO, CI+MI+FO) were tested against Streptococcus mutans, Enterococcus faecalis, Actinomyces israelii and Candida albicans in planktonic conditions. Mono-species biofilm of E. faecalis and dual-species biofilms of E. faecalis and C. albicans were prepared in dentin blocks to test the anti -biofilm activity of antibiotic combinations with the best microbiological results. Antibiofilm effect of antibiotic combination on E. faecalis biofilm inside dentin tubules was also evaluated by confocal microscopy. Cultures of HDPC were exposed to the antibiotic combination with the best antimicrobial effect and simvastatin and determined cell viability, alkaline phosphatase activity, deposition of mineralization nodules and expression of Dspp (dentin sialophosphoprotein), important odontoblast markers of dentin mineralization. Data were analyzed statistically, considering p<0.05. All antibiotic combinations reduced statistically the growth of bacteria tested, except by CI+DO and DO+FO for A. israelii. ME+CI+MI and ME+MI+FO inhibited significantly growth of A. 11 israelii and E. faecalis, and ME+MI+FO eliminated S. mutans. ME+MI+FO and ME+CI+FO had the best effect against E. faecalis biofilm, in mono and dual -species biofilms and inside dentin tubules, similar to CHX. CI and ME+CI+FO affected HDPC viability, 1 and 7 days. ALP activity increased with the presence of simvastatin for all groups, except by CI and ME+CI+FO. Groups containing simvastatin had higher mineralized nodule deposition and higher DSPP expression than groups without simvastatin. It can be concluded that triple antibiotic combination of ME+CI+FO ha d remarkable effect against endodontic microorganisms, in planktonic and biofilm conditions. Simvastatin stimulated the expression of odontoblast markers of dentin mineralization by HDPC; however, its effect was reduced i n the presence of CI. / FAPESP: 2014/00589-7

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:01:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2001 / O presente estudo teve como objetivo verificar o estresse oxidativo causado a culturas de queratinocitos atraves de sua exposicao a privacao de glicose e a hipoxia, com e sem o uso de um antioxidante, o Dimetil Sulfoxido (DMSO), avaliado atraves da dosagem do malonaldeido (MDA). O material e metodo constituiu-se de tres experimentos. No primeiro deles, 12 garrafas de cultura de queratinocitos foram preparadas ate atingir-se a confluencia desejada e divididas em quatro grupos (com e sem uso de DIVISO, com e sem hipoxia). Foram colhidas amostras do meio de cultura para dosagem do malonaldeido em diferentes fases do experimento: a) pre-experimento, b) 24 horas apos o inicio da privacao de glicose (antes da provocacao de hipoxia), c) 24 horas apos o inicio da privacao de glicose e imediatamente depois da provocacao de hipoxia, d) 48 horas apos a privacao de glicose (24 horas apos a hipoxia). O Experimento 2 constituiu-se das 12 garrafas do final do primeiro experimento e outras 12 garrafas que foram utilizadas como controle, sendo que foi colhido o material celular das 24 garrafas e realizada dosagem do MDA no homogeneizado celular de cada garrafa. O Experimento 3 foi realizado com 80 garrafas divididas em 10 grupos (meio de cultura com e sem glicose, uso ou nao de DIVISO, realizacao de hipoxia ou nao, alem das associacoes entre esses fatores), das quais foi colhido e homogeneizado o material celular para dosagem do MDA. A analise estatistica realizada com os resultados dos tres experimentos mostrou que o DIVISO foi eficiente na reducao do estresse oxidativo de culturas de queratinocitos, causado pela privacao de glicose e hipoxia, avaliado pelos valores de MDA comparando-se aos grupos controle / BV UNIFESP: Teses e dissertações

O sucesso do tratamento endodôntico depende da cuidadosa realização de todas as suas fases, terminando com uma obturação tridimensional que alcance todo o sistema de canais radiculares. Desta forma, os materiais obturadores, ou as substâncias liberadas, entrarão em contato com os tecidos perirradiculares, o que poderá influenciar a resposta inflamatória e o processo de reparo. A terapia laser de baixa potência (TLBP) tem sido estudada quanto à sua ação anti-inflamatória, favorecendo o reparo. O objetivo deste estudo foi investigar a produção das citocinas IL-1&#946;, IL-6 e IL-8 por fibroblastos de gengiva humana (linhagem FMM1) como resposta à presença dos extratos dos cimentos endodônticos AH Plus, MTA Fillapex e EndoSequence BC Sealer, bem como a eficácia da TLBP, neste modelo. Para isto, extratos destes cimentos, recém-manipulados e após 24 h do endurecimento, foram preparados em meio de cultura DMEM fresco, conforme as normas ISO 10993-12. Inicialmente, a citotoxicidade dos cimentos foi avaliada, após a interação das células com a diluição seriada destes extratos (1:1 a 1:16), por meio do ensaio MTT. Para a análise da produção de citocinas, 106 células por poço foram cultivadas em placas de cultura de 24 poços, para a interação com os extratos dos cimentos, na diluição 1:4. Estabeleceram-se os grupos não irradiado e irradiado. No grupo irradiado, as culturas celulares receberam duas irradiações do laser InGaAlP (660 nm, 30 mW, 5 J/cm2 e área do feixe de 0,028 cm2), com intervalo de 12 h. O grupo não irradiado foi submetido às mesmas condições ambientais que o irradiado. Os sobrenadantes das culturas foram coletados, centrifugados, aliquotados e armazenados congelados, para a posterior análise pelo ensaio de ELISA. Todos os dados obtidos (médias erro padrão) foram tratados estatisticamente por ANOVA one-way, complementado pelo teste de Tuckey e ANOVA two-way, com correção de Bonferroni (p< 0,05). A citotoxicidade dos cimentos AH Plus e EndoSequence BC Sealer revelou-se tempo/concentração-dependente, enquanto a do MTA Fillapex mostrou-se concentração-dependente. Os cimentos endodônticos induziram a produção das citocinas IL-1&#946;, IL-6 e IL-8 pelos fibroblastos, sem diferença significativa com os controles (p> 0,05). Somente o LPS de E. coli induziu a secreção de IL-8, com diferença estatística (p< 0,05). A TLBP não foi capaz de modular a produção das citocinas em questão, significativamente. / Endodontic treatment success depends on careful accomplishment of all steps, finishing with a three-dimensional obturation that reachs the entire root canal system. Thus, the obturation materials or the substances that are released will be in contact with perirradicular tissues, which may influence the inflammatory response and the repair process. Low-level laser therapy (LLLT) has been studied about its anti-inflammatory action, improving the repair. The aim of this study was to investigate the production of IL-1&#946;, IL-6 and IL-8 cytokines by human gingival fibroblasts (FMM1 lineage) as a response to the extracts of the endodontic cements AH Plus, MTA Fillapex and EndoSequence BC Sealer, besides the effectiveness of LLLT in this model. For that, freshly mixed and 24 h-set elutes of these sealers were prepared, in fresh DMEM, in accordance with ISO 10993-12. Firstly, cytotoxicity was assessed after cells were treated with cements extracts serial dilution (1:1 to 1:16), by MTT assay. To evaluate the cytokines production, 106 cells per well were cultured at 24-well-plates to interact with the 1:4 dilution of sealers extracts. Non-irradiated and irradiated groups were established. On the irradiated group, the cell culture received two InGaAlP laser irradiation (660 nm, 30 mW, 5 J/cm2, 0.028 cm2 spot size) at 12h-interval. The non-irradiated group was submitted to the same environment conditions of the irradiated group. The culture supernatants were collected, centrifuged, aliquoted and stored frozen to further analyse by ELISA assay. Data obtained (media standard error) were treated by ANOVA one-way, complemented by Tuckeys test and ANOVA two-way, with Bonferroni correction (p< 0.05). The cytotoxicity of AH Plus and EndoSequence BC Sealer was related to time/dose-dependent manner, whilst MTA Fillapex cytotoxicity was showed as dose-dependent manner. The endodontic sealers inducted the production of IL-1&#946;, IL-6 and IL-8 cytokines by fibroblasts similar to control (p> 0.05). Only E. coli LPS was capable to stimulate IL-8 secretion with statistic difference (p< 0.05). TLBP was not able to modulate the secretion of these cytokines, significantly.

Orientadora: Profa. Dra. Christiane Bertachini Lombello / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC. Programa de Pós-Graduação em Engenharia Biomédica, 2016. / A pele está sujeita a lesões por diversos fatores e dimensões. Essas lesões podem ser amenizadas e o tecido original recuperado devido às propriedades regenerativas deste tecido. Porém, nos casos em que a lesão é extensa e o paciente não possui quantidade de tecido suficiente para recompor a área perdida uma solução é o uso de substitutos dérmicos aplicados na reconstrução da ferida. Dentre os materiais disponíveis na engenharia como substitutos de pele, o colágeno e a gelatina estão entre os mais promissores devido a suas características químicas, físicas e biológicas similares a derme natural. Devido ao baixo custo em sua obtenção e grande disponibilidade, a utilização de gelatina de origem porcina, como substitutos de pele homogênea em reconstrução de tecidos vem sendo usada desde a década de 60, e atualmente novas formas de aplicação vem sendo estudadas. No presente trabalho, foram feitas caracterizações físico-químicas e biológicas da gelatina porcina, inicialmente indicada para uso como agente hemostático. Dos resultados foi possível inferir que o biomaterial apresenta estrutura e comportamento similares a outras estruturas usadas como matrizes de cultivo para células, apresentando boa interação com o biomaterial, proliferação e crescimento celular tanto ao redor, quanto em sua superfície e parede dos poros. Desta forma pode-se afirmar que o biomaterial é biocompatível, sendo possivelmente uma alternativa a matrizes para cultura celularaplicada a engenharia tecidual. / The skin is subject to injury due to various factors and dimensions. These lesions can be softened and the original tissue recovered due to the regenerative properties of this tissue. However, in cases where the lesion is extensive and the patient does not have sufficient tissue to recover the lost area, a solution is the use of dermal substitutes applied in the reconstruction of the wound. Among the materials available in engineering as skin substitutes, collagen and gelatin are among the most promising because of their chemical, physical and biological characteristics similar to natural dermis. Due to the low cost of obtaining and high availability, the use of porcine gelatine as homogeneous skin substitutes in tissue reconstruction has been used since the 1960s, and currently new forms of application have been studied. In the present work, physico-chemical and biological characterizations of porcine gelatine were made, initially indicated for use as hemostatic agent. From the results it was possible to infer that the biomaterial presents structure and behavior similar to other structures used as cell culture matrices, showing good interaction with the biomaterial, proliferation and cell growth both around and on the surface and wall of the pores. In this way it is possible to affirm that the biomaterial is biocompatible, being possibly an alternative to matrices for cellular culture applied to tissue engineering.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This thesis was carried out in three distinct stages; the first being intended to analyzing the cell therapy of skin wound healing in rabbits. The aim of this work was to evaluate the healing potential of the stromal vascular fraction (SVF) and mesenchymal stromal cells (MSC) and to compare which one presents better efficiency and ease of use. For this study we used 15 rabbits divided into three groups. A skin wound of 4 cm2 was created in all rabbits. The animals of group A did not receive any kind of treatment, whereas in group B they were treated with SVF from adipose tissue, and in group C they were treated with MSC. Histological analysis demonstrated that the healing stages occurred more satisfactorily in the treated groups. In the statistical analysis, the two treated groups showed no significant difference between them, but when compared with the control group there was a significant difference. It was found that both the use of SVF as well as MSC are viable and showed better results that the control, even making the resulting scar of the process aesthetically acceptable. In the second step we determined the degree of oxidative stress in the cultured MSC. The goal of this study was to evaluate the isolation and culture of MSC from adipose tissue samples from three rabbits, processed immediately after harvest and within 12 or 24 hours intervals, keeping them in culture until the ninth pass. The samples from each animal were divided into three new samples, the first of which was processed immediately after harvest, and the others within 12 and 24-hour intervals. The dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA) assay demonstrated that immediate cultures had an increased overall rate of reactive oxygen species (ROS) from the fourth passing, cultured cells after 12 hours, from the third passage and after 24 hours, after the third pass, but with another episode during the ninth passage. The PicoGreen test demonstrated that the immediate cultures obtained a greater release of DNA only in the seventh and ninth passages, 12 hours, cell death only in the ninth passageway and 24 hours, during the last passes evaluated. In conditions in which the experiment was conducted, and based on the results, we conclude that adipose tissue may be cultured until 24 hours after harvest, since kept in ideal conditions. In the third step, the possible immunosuppressive potential of MSC was tested. The aim of this work was to assess the viability of the fresh allograft skin in rabbits, using as an immunomodulatory agent, mesenchymal stromal cells, associated or not to cyclosporine. To prepare this experiment, 20 New Zealand White male rabbits were used, randomly divided into four experimental groups. Group A: only transplantation done. Group B: application of MSCs on days -1, 0, 3, 7 and 10, always associated with cyclosporine. Group C: only the application of MSC in the same periods that in the previous group. Group D: only injectable cyclosporine. The Tukey test, at 5% probability level, was used to compare the means. The graft survival rates were 7.2 days (± 3.49) for group B, 11.5 days (± 3.58) for group C, 9.0 days (± 1.22) for group D, and 13.0 days (± 1.41) for group A. Interleukins were evaluated in groups A, B and C, and at this point, the combined use of cyclosporine with the MSC, appears to have been beneficial for inhibition of some of these factors. It can be concluded that both application of cyclosporine as well as the halogen MSC, when administered alone were not able to increase the rate of skin graft survival, but both therapies, when associated, were responsible for causing a faster rejection of transplanted tissue than the control group. Still, the measured values of the key pro-inflammatory interleukins were lower when this association occurred. / Esta tese foi realizada em três etapas distintas, sendo a primeira destinada a analisar a terapia celular na cicatrização de pele em coelhos. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial de cicatrização da fração vascular estromal (FVE) e das células estromais mesenquimais (CEM) e comparar qual apresenta melhor eficácia e maior facilidade de uso. Para este estudo foram utilizados 15 coelhos divididos em três grupos. Foi criada uma ferida de pele de 4 cm2 em todos os coelhos. Os animais do grupo A não receberam nenhum tipo de tratamento, enquanto que no grupo B foram tratados com FVE do tecido adiposo e no grupo C foram tratados com CEM. A análise histológica demonstrou que as etapas da cicatrização ocorreram de maneira mais satisfatória nos grupos tratados. Na análise estatística, os dois grupos tratados não apresentaram diferença significativa entre si, mas quando comparados com o grupo controle houve diferença significativa. Concluiu-se que tanto o uso da FVE quanto das CEM são viáveis e apresentaram melhores resultados que o controle, inclusive tornando a cicatriz resultante do processo esteticamente aceitável. Na segunda etapa foi determinado o grau de estresse oxidativo das CEM em cultivo. O objetivo deste trabalho foi avaliar o isolamento e o cultivo das CEM a partir de amostras de tecido adiposo de três coelhos, processadas imediatamente após a colheita e com 12 ou 24 horas de intervalo, mantendo-as em cultivo até a nona passagem. As amostras de cada animal foram divididas em três novas amostras, sendo que a primeira foi processada imediatamente após a colheita, e as demais com 12 e 24 horas de intervalo. O ensaio da diclorofluoresceína diacetato (DCFH-DA) demonstrou que os cultivos imediatos tiveram um aumento da taxa total de espécies reativas de oxigênio (EROs) a partir da quarta passagem, células cultivadas após 12 horas, a partir da terceira passagem e após 24 horas, a partir da terceira passagem, mas com um outro 9 episódio durante a nona passagem. O teste de PicoGreen demonstrou que os cultivos imediatos obtiveram uma maior liberação de DNA apenas na sétima e nona passagens; 12 horas, morte celular somente na nona passagem e 24 horas, durante as três últimas passagens avaliadas. Nas condições em que o experimento foi realizado e com base nos resultados obtidos é possível concluir que o tecido adiposo pode ser cultivado até 24 horas após a colheita, desde que mantido em condições ideais. Na terceira etapa foi testado o possível potencial imunossupressor das CEM. O objetivo deste trabalho foi avaliar a viabilidade do alotransplante de pele a fresco em coelhos, utilizando como agente imunomodulador células estromais mesenquimais, associadas ou não à ciclosporina. Para a elaboração deste experimento foram utilizados 20 coelhos machos, da raça Nova Zelândia Branco, divididos aleatoriamente em quatro grupos experimentais. Grupo A: realizado apenas o transplante. Grupo B: aplicação de CEM nos dias -1, 0, 3, 7 e 10, associado ao uso da ciclosporina. Grupo C: somente a aplicação de CEM, nos mesmos períodos que o grupo anterior. Grupo D: apenas ciclosporina injetável. Para a comparação das médias foi usado o teste de Tukey, ao nível de 5% de probabilidade. As taxas de sobrevivência do enxerto foram de 7,2 dias (± 3,49) para o grupo B; 11,4 dias (± 3,58) para o grupo C; 9,0 dias (± 1,22) para o grupo D e 13,0 dias (± 1,41) para o grupo A. As interleucinas foram avaliadas nos grupos A, B e C e neste ponto, a utilização associada da ciclosporina com as CEM, parece ter sido benéfica para a inibição de alguns destes fatores. Pode-se concluir que tanto a aplicação da ciclosporina quanto das CEM alógenas, quando administradas isoladamente, não foram capazes de aumentar a taxa de sobrevida do enxerto de pele, mas as duas terapias, quando utilizadas de maneira associada, foram responsáveis por causar uma rejeição mais rápida do tecido transplantado do que o grupo controle. Ainda assim, os valores mensurados das principais interleucinas pró-inflamatórias foram menores quando esta associação ocorreu.

Submitted by Claudinei Pracidelli (cpracide@ipen.br) on 2014-12-19T17:52:28Z No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-12-19T17:52:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Dissertação (Mestrado em Tecnologia Nuclear) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Submitted by LISSETH PATRÍCIA CLÁUDIO CONTRERAS null (lpatycc@gmail.com) on 2017-01-30T13:49:39Z No. of bitstreams: 1 Lisseth Patricia Claudio Contreras (5) (1).pdf: 2571557 bytes, checksum: 78dc304f1754247470830ef4eba24fa3 (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-02-02T19:12:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 contreras_lpc_me_sjc.pdf: 2571557 bytes, checksum: 78dc304f1754247470830ef4eba24fa3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-02T19:12:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 contreras_lpc_me_sjc.pdf: 2571557 bytes, checksum: 78dc304f1754247470830ef4eba24fa3 (MD5) Previous issue date: 2017-01-19 / O objetivo deste estudo foi avaliar a topografia e a formação de biofilme na superfície de cerâmicas feldspáticas obtidas através de duas técnicas de confecção e dois tratamentos de superfície, assim como avaliar a viabilidade do crescimento de fibroblastos gengivais humanos (FMM-1) sobre estes materiais. Foram confeccionados 52 blocos de cada tipo de cerâmica feldspática: VM9 obtida através da técnica da estratificação e cerâmica Vita Blocs Mark II (VMII) para o sistema CAD/CAM (ambas, Vita Zahnfabrik). As superfícies dos blocos foram padronizadas em politriz nas dimensões de 4,5 x 4,5 x 1,5 mm e os blocos foram divididos em dois tratamentos de finalização de superfície: polimento com borrachas Ceramisté + pasta de polimento e aplicação de glaze spray + sinterização. Os parâmetros de rugosidade Ra e Rsm foram mensurados através de um rugosímetro de contato. As amostras foram esterilizadas e, em seguida contaminadas (n=10) para formação de biofilme heterotípico inicial de S. mutans, S. sanguinis e C. albicans, cuja aderência foi quantificada por contagem de unidades formadoras de colônias (UFC/mL). O teste MTT foi empregado para avaliação da viabilidade celular dos materiais ao crescimento de fibroblastos gengivais humanos (FMM-1) em 24 h e 7 dias (n=12). Foram realizadas análises qualitativas da superfície dos espécimes através de microscopia eletrônica de varredura (MEV) e perfilometria óptica 3D. A energia livre de superfície (ELS) foi calculada a partir de análises de goniômetria com líquidos polar e apolar em 10 amostras de 15 x 1 5 x 1,5 mm. Os resultados de Ra, RSm e ELS foram submetidos à análise de variância ANOVA 2 fatores (material x tratamento de superfície) seguido por teste de Tukey (ambos, α=95%), e os dados de UFC fatores (material x tratamento x micro-organismos) e MTT (material x tratamento x tempo) foram avaliados por ANOVA 3 fatores e teste Tukey (α=95%). As imagens de MEV e perfilometria foram descritas. As cerâmicas polidas apresentaram menor rugosidade (Ra p=0,015; RSm p=0,049) e maior ELS (p=0,00), sendo que a mais alta Ra foi verificada para VM9 glazeada. A aderência bacteriana foi influenciada pela interação de todos os fatores (p=0,018). Os Streptococcus formaram em maior número em todos os materiais, mas sobre VMII polida não houve aderência de C. albicans. Inicialmente, os materiais apresentaram ausência de citotoxicidade, mas a viabilidade celular de todos os grupos foi reduzida após 7 dias (p=0,00). As micrografias mostram que a aderência de micro-organismos ocorreu independente de irregularidades na topografia dos materiais, e as imagens de perfilometria ressaltaram o padrão de ranhuras das amostras polidas e o acúmulo de glaze em “ilhas” nas amostras glazeadas. Foi possível concluir que ambas técnicas de obtenção resultam em cerâmicas feldspáticas biocompatíveis e que a finalização da superfície por polimento resultou em menor rugosidade média, maior ELS e menor aderência de C. albicans. / The objective of this study was to evaluate the topography and surface biofilm formation of feldspathic ceramics obtained through two techniques of preparation and two surface treatments, as well as to evaluate the viability of human gingival fibroblasts (FMM-1) growth on these materials. A total of 52 blocks of each type of feldspathic ceramic were made: VM9 obtained by the stratification technique and Vita Blocs Mark II (VMII) for the CAD/CAM system (both, Vita Zahnfabrik). The blocks’ surfaces were standardized in a polishing machine to the dimensions of 4.5 x 4.5 x 1.5 mm and blocks were divided into two surface finishing treatments: polishing with Ceramisté rubbers + polishing with paste; and glaze application + sintering. The Ra and RSm roughness parameters were measured through a contact rugosimeter. Samples were sterilized and then contaminated (n = 10) for initial heterotypic biofilm formation of S. mutans, S. sanguinis and C. albicans, whose adherence was quantified by counting colony forming units (CFU/mL). The MTT test was used to evaluate the cellular viability of the materials to the growth of human gingival fibroblasts (FMM-1) in 24 h and 7 days (n=12). Qualitative analyzes of the specimens’ surface were performed using a scanning electron microscopy (SEM) and 3D optical profilometry. Surface free energy (SFE) was calculated from goniometry analyzes of polar and apolar liquids in 10 samples of 15 x 15 x 1.5 mm. The results of Ra, RSm and ELS were subjected to 2-way ANOVA (Material x surface treatment) followed by Tukey’s test (both, α=95%), and UFC (material x surface treatment x microorganisms) and MTT (material x surfacetreatment x time) data were evaluated by 3-way ANOVA and Tukey’s test (α=95%). SEM and profilometry images were described. The polished ceramics presented lower roughness (Ra p=0.015; RSm p=0.049) and higher SFE (p=0.00), with the highest Ra being verified for glazed VM9. Bacterial adherence was influenced by the interaction of all factors (p=0.018). Streptococcus formed in greater number in all materials, but on polished VMII there was no adherence of C. albicans. Initially, the materials showed no cytotoxicity, but the cell viability of all groups was reduced after 7 days (p=0.00). Micrographs showed that microorganisms adherence occurred regardless of irregularities in the topography of the materials, and the profilometry images emphasized the grooved pattern of the polished samples and the glaze accumulation in "islands" in glazed samples. The surface treatments had greater influence than the technique of making the feldsphapatic ceramics. It could be concluded that both obtaining techniques resulted in biocompatible feldsphatic ceramics and that the surface finishing by polishing resulted in lower mean roughness, higher SFE and lower C. albicans adhesion.

O sucesso do tratamento endodôntico depende da cuidadosa realização de todas as suas fases, terminando com uma obturação tridimensional que alcance todo o sistema de canais radiculares. Desta forma, os materiais obturadores, ou as substâncias liberadas, entrarão em contato com os tecidos perirradiculares, o que poderá influenciar a resposta inflamatória e o processo de reparo. A terapia laser de baixa potência (TLBP) tem sido estudada quanto à sua ação anti-inflamatória, favorecendo o reparo. O objetivo deste estudo foi investigar a produção das citocinas IL-1&#946;, IL-6 e IL-8 por fibroblastos de gengiva humana (linhagem FMM1) como resposta à presença dos extratos dos cimentos endodônticos AH Plus, MTA Fillapex e EndoSequence BC Sealer, bem como a eficácia da TLBP, neste modelo. Para isto, extratos destes cimentos, recém-manipulados e após 24 h do endurecimento, foram preparados em meio de cultura DMEM fresco, conforme as normas ISO 10993-12. Inicialmente, a citotoxicidade dos cimentos foi avaliada, após a interação das células com a diluição seriada destes extratos (1:1 a 1:16), por meio do ensaio MTT. Para a análise da produção de citocinas, 106 células por poço foram cultivadas em placas de cultura de 24 poços, para a interação com os extratos dos cimentos, na diluição 1:4. Estabeleceram-se os grupos não irradiado e irradiado. No grupo irradiado, as culturas celulares receberam duas irradiações do laser InGaAlP (660 nm, 30 mW, 5 J/cm2 e área do feixe de 0,028 cm2), com intervalo de 12 h. O grupo não irradiado foi submetido às mesmas condições ambientais que o irradiado. Os sobrenadantes das culturas foram coletados, centrifugados, aliquotados e armazenados congelados, para a posterior análise pelo ensaio de ELISA. Todos os dados obtidos (médias erro padrão) foram tratados estatisticamente por ANOVA one-way, complementado pelo teste de Tuckey e ANOVA two-way, com correção de Bonferroni (p< 0,05). A citotoxicidade dos cimentos AH Plus e EndoSequence BC Sealer revelou-se tempo/concentração-dependente, enquanto a do MTA Fillapex mostrou-se concentração-dependente. Os cimentos endodônticos induziram a produção das citocinas IL-1&#946;, IL-6 e IL-8 pelos fibroblastos, sem diferença significativa com os controles (p> 0,05). Somente o LPS de E. coli induziu a secreção de IL-8, com diferença estatística (p< 0,05). A TLBP não foi capaz de modular a produção das citocinas em questão, significativamente. / Endodontic treatment success depends on careful accomplishment of all steps, finishing with a three-dimensional obturation that reachs the entire root canal system. Thus, the obturation materials or the substances that are released will be in contact with perirradicular tissues, which may influence the inflammatory response and the repair process. Low-level laser therapy (LLLT) has been studied about its anti-inflammatory action, improving the repair. The aim of this study was to investigate the production of IL-1&#946;, IL-6 and IL-8 cytokines by human gingival fibroblasts (FMM1 lineage) as a response to the extracts of the endodontic cements AH Plus, MTA Fillapex and EndoSequence BC Sealer, besides the effectiveness of LLLT in this model. For that, freshly mixed and 24 h-set elutes of these sealers were prepared, in fresh DMEM, in accordance with ISO 10993-12. Firstly, cytotoxicity was assessed after cells were treated with cements extracts serial dilution (1:1 to 1:16), by MTT assay. To evaluate the cytokines production, 106 cells per well were cultured at 24-well-plates to interact with the 1:4 dilution of sealers extracts. Non-irradiated and irradiated groups were established. On the irradiated group, the cell culture received two InGaAlP laser irradiation (660 nm, 30 mW, 5 J/cm2, 0.028 cm2 spot size) at 12h-interval. The non-irradiated group was submitted to the same environment conditions of the irradiated group. The culture supernatants were collected, centrifuged, aliquoted and stored frozen to further analyse by ELISA assay. Data obtained (media standard error) were treated by ANOVA one-way, complemented by Tuckeys test and ANOVA two-way, with Bonferroni correction (p< 0.05). The cytotoxicity of AH Plus and EndoSequence BC Sealer was related to time/dose-dependent manner, whilst MTA Fillapex cytotoxicity was showed as dose-dependent manner. The endodontic sealers inducted the production of IL-1&#946;, IL-6 and IL-8 cytokines by fibroblasts similar to control (p> 0.05). Only E. coli LPS was capable to stimulate IL-8 secretion with statistic difference (p< 0.05). TLBP was not able to modulate the secretion of these cytokines, significantly.

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:30:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RodrigoAR_DISSERT.pdf: 1824764 bytes, checksum: fbfdfd8c2f743e113f6663106fda888b (MD5) Previous issue date: 2011-02-04 / In the last years, many scientific researches in implantology have been focused on alternatives that would provide higher speed and quality in the process of osseointegration. Different treatment methods can be used to modify the topographic and chemical properties of titanium surface in order to optimize the tissue-implant reactions by a positive tissue response. This study aimed to evaluate the adhesion and proliferation of mesenchymal cells from human periodontal ligament on two different titanium surfaces, using cell culture techniques. Grade II titanium discs received different surface treatments, forming two distinct groups: polished and cathodic cage plasma nitriding. Human periodontal ligament mesenchymal cells were cultured on titanium discs in 24-well cell culture plates, at a density of 2 x 104 cells per well, including wells with no discs as positive control. Data obtained by counting the cells that adhered to the titanium surfaces (polished group and cathodic cage group) and to the plastic surface (control group), in the 24, 48 and 72-hour periods after plating, were used to analyze cell adhesion and proliferation and to obtain the cell growing curve in the different groups. The data were submitted to nonparametric analysis and the differences between groups were compared by Kruskal-Wallis and Friedman statistical tests. No statistically significant differences were found in the cells counts between the groups (p>0.05). It was concluded that both treatments produced surfaces compatible with the adhesion and proliferation of human periodontal ligament mesenchymal cells / Nos ?ltimos anos, v?rias pesquisas cient?ficas em Implantodontia t?m buscado alternativas que proporcionem maior rapidez e qualidade no processo de osseointegra??o. Diferentes m?todos de tratamento podem ser utilizados para modificar as propriedades topogr?ficas e qu?micas da sua superf?cie do tit?nio, a fim de otimizar as rea??es tecido-implante atrav?s de uma resposta tecidual favor?vel. O presente trabalho teve como objetivo analisar a ades?o e prolifera??o de c?lulas mesenquimais de ligamento periodontal humano a diferentes superf?cies de tit?nio, atrav?s de t?cnicas de cultivo celular. Discos de tit?nio grau II receberam diferentes tratamentos de superf?cie, constituindo dois grupos distintos: polido e nitretado a plasma na configura??o de gaiola cat?dica. C?lulas mesenquimais obtidas do ligamento periodontal de dentes humanos h?gidos foram cultivadas sobre os discos de tit?nio em placas de cultivo de 24 po?os, na densidade de 2 x 104 c?lulas/po?o, incluindo po?os sem discos como controle positivo. Os dados obtidos das contagens das c?lulas aderidas ?s superf?cies de tit?nio (grupo polido e grupo gaiola cat?dica) e ? superf?cie pl?stica (grupo controle), nos intervalos de 24, 48 e 72 horas ap?s o plaqueamento, foram utilizados para analisar a ades?o e prolifera??o celular e obter a curva de crescimento celular nos diferentes grupos. Os dados foram submetidos a an?lises n?o param?tricas e as diferen?as entre os grupos foram comparadas pelos testes estat?sticos Kruskal-Wallis e Friedman. N?o foram encontradas diferen?as estat?sticas significativas nas contagens celulares entre os grupos estudados (p>0,05). Conclui-se que ambos os tratamentos produziram superf?cies compat?veis com ades?o e prolifera??o de c?lulas mesenquimais do ligamento periodontal humano