La neumonía comunitaria es una enfermedad que representa un problema sanitario significativo que se asocia a elevada mortalidad y morbilidad. En el mundo occidental, pese a un aumento global de la supervivencia gracias al cambio de las políticas antibióticas, se ha documentado mayor mortalidad en pacientes mayores y en pacientes con comorbilidades y enfermedades crónicas. Por otro lado, se ha demostrado como la mortalidad por shock séptico y otras enfermedades graves ha disminuido. El impacto total de estos cambios demográficos y clínicos en la supervivencia en la neumonía comunitaria es de elevada importancia para los clínicos, pero no hay datos recientes publicados en la literatura. Nuestra hipótesis fue que la mejora de las políticas antibióticas contribuyó a disminuir la mortalidad en la neumonía comunitaria grave en pacientes admitidos en la UCI. Por esto, el objetivo primario fue comparar la mortalidad en UCI de pacientes ingresados en UCI, procedentes de dos periodos diferentes. El objetivo secundario fue buscar una asociación entre tratamiento antibiótico combinado y disminución de la mortalidad. Objetivo terciario fue buscar una asociación entre antibioticoterapia empírica precoz y disminución de la mortalidad. El estudio CAPUCI I es un estudio multicéntrico, prospectivo y observacional realizado en 33 hospitales de España desde 2000 hasta 2002. Todos los paciente fueron ingresados en la UCI con diagnostico de neumonía comunitaria grave. El estudio CAPUCI II es un estudio de seguimiento del CAPUCI I apoyado por la European Critical Care Research Network. El estudio se llevó a cabo en 29 UCIs de Europa, desde 2008 hasta 2014. En ambos estudios, los pacientes eran admitidos en UCI por necesidad de ventilación mecánica invasiva, presencia de shock séptico o por una situación de inestabilidad clínica. El trabajo se realizó mediante la publicación de dos artículos científicos. En el primer estudio caso-control, titulado: “Decrease in Mortality in Severe Community- Acquired Pneumococcal Pneumonia: Impact of Improving Antibiotic Strategies (2000-2013)”; ochenta pacientes diagnosticados de neumonía neumocócica severa comunitaria del estudio CAPUCI II fueron apareados con 80 del CAPUCI I a partir de las siguientes variables: shock, ventilación mecánica, COPD, inmunosupresión y edad. Entre los resultados, el tratamiento combinado aumento desde 66.2% en el estudio CAPUCI I hasta 87.5% en el CAPUCI II, y el percentil de pacientes que recibieron antibioticoterapia las primeras 3 horas de admisión pasó desde 27.5% hasta 70.0%. La mortalidad en UCI fue significativamente inferior en el grupo CAPUCI II. En el análisis multivariado, la mortalidad aumentó en pacientes que necesitaron ventilación mecánica y disminuyó en pacientes que recibieron tratamiento antibiótico combinado y antibioticoterapia precoz. El segundo articulo tiene como titulo: “Improvement of antibiotic therapy and ICU survival in severe non-pneumococcal community-acquired 
pneumonia: a matched case–control study“. Es un estudio caso-control que incluye 144 pacientes con neumonía grave no neumocócica: 72 pacientes del estudio CAPUCI I fueron apareados con 72 del CAPUCI II a través de las siguientes variables: microorganismo, shock, ventilación mecánica, COPD y edad. Se observó una reducción absoluta de la mortalidad en UCI entre los dos grupos. Además, el tratamiento combinado y antibioticoterapia precoz fueron significativamente mayores en el estudio CAPUCI II (76.4% frente a 90.3 % y 37.5% frente a 63.9 %). En el análisis multivariado la administración de tratamiento antibiótico combinado y antibioticoterapia precoz se asociaron a disminución de la mortalidad en UCI. En conclusión, el presente trabajo de tesis documenta una reducción de la mortalidad por neumonía comunitaria grave entre los dos periodos a estudio. Además, la administración de tratamiento combinado y precoz se asocia a disminución de mortalidad en UCI. / Community-acquired pneumonia is a major health problem associated with high morbidity and mortality. In Western countries, despite improved survival due to changes in antibiotic policies, poor prognosis is seen in older people with more comorbidities and chronic illness in whom life expectancy has been prolonged. On the other hand, it has been shown that septic shock mortality and mortality due to other severe diseases have decreased. The aggregate impact of these demographic and clinical trends on the community pneumonia survival rate is of great importance to clinicians, but no recent data are available in the literature, especially in critical patients with severe community-acquired pneumonia. Our hypothesis was that improvement in antibiotic policies contributed to reduce mortality due to severe community-acquired pneumonia in the ICU setting. For this reason, the primary objective of the present study was to compare ICU mortality due to severe community pneumonia in two different periods. Secondary objective was to identify an association between combination antibiotic therapy and decreased mortality. Tertiary objective was to identify an association between early antibiotic administration and decreased mortality. CAPUCI I was a multicenter, prospective, observational 
study carried out in 33 hospitals in Spain between 2000 
and 2002. All patients admitted to ICU with diagnosis of 
severe community pneumonia were included. CAPUCI II was a follow-up Project endorsed by the European Critical Care Research Network, carried out in 29 European ICUs from 2008 to 
2014. In both studies, patients were admitted to the ICU 
either to undergo IMV or because they were in an unstable clinical condition. All cases were followed until 
ICU discharge or death, and all clinical decisions were left 
to the discretion of the attending physician. The present manuscript was carried out after publication of two papers. The first one is a case control study titled: “Decrease in Mortality in Severe Community-Acquired Pneumococcal Pneumonia: Impact of Improving Antibiotic Strategies (2000-2013)”; eighty patients diagnosed with severe pneumococcal community pneumonia from the CAPUCI II study were matched with 80 patients from CAPUCI I based on the following: shock at admission, need of mechanical ventilation, COPD, immunosuppression, and age. As a result, combined antibiotic therapy increased from 66.2% in CAPUCI I to 87.5% in CAPUCI II, and the percentage of patients receiving the first dose of antibiotic within 3 h increased from 27.5% to 70.0%. ICU mortality was significantly lower in CAPUCI II group. In the multivariate analysis, ICU mortality increased in patients requiring mechanical ventilation and decreased in patients receiving early antibiotic treatment and combined therapy. The second article was titled: “Improvement of antibiotic therapy and ICU survival in severe non-pneumococcal community-acquired 
pneumonia: a matched case–control study“. This was a matched case–control study enrolling 144 patients with non-pneumococcal severe pneumonia: 72 patients from the CAPUCI I database were paired with 72 from the CAPUCI II matched by the following variables: microorganism, shock at admission, invasive mechanical ventilation, immunocompromise, chronic obstructive pulmonary disease, and age over 65 years. Again, we observed an absolute reduction of mortality between the two groups. Moreover, combined therapy and early antibiotic treatment were significantly higher in CAPUCI II (76.4 versus 90.3 % and 37.5 versus 63.9 %). In the multivariate analysis, combined antibiotic therapy and early antibiotic treatment were independently associated with decreased intensive care unit mortality. In conclusion, the present manuscript observed an absolute reduction of ICU mortality in patients with community-acquired pneumonia between the two study periods. Moreover, early combination antibiotic therapy was associated with decreased mortality.

El adenocarcinoma ductal pancreático (ADP) constituye aproximadamente el 85% de los tumores del páncreas. Es el tumor en el que menos avances clínicos se han producido en los últimos 50 años y sigue teniendo un pronóstico muy malo. Por ello, es necesaria la identificación de factores de riesgo y la caracterización del proceso de progresión tumoral, así como la identificación de nuevas dianas terapéuticas. En esta Tesis Doctoral estudiamos el estado de las vías de señalización celular en una serie de ADP convencionales, así como en ductos de pancreatitis crónicas (PC) y las lesiones precursoras asociadas (PanIN). El objetivo principal del presente trabajo es el estudio inmunohistoquímico y molecular de diversos factores implicados en las vías de señalización celular y de transición epitelio-mesénquima (PI-3K-AKT-mTOR, Ras-Raf-MAPK, Hippo, p53, N-cadherina y p16), con el objetivo de poder definir un modelo de progresión desde lesiones de PanIN en PC a ADP infiltrante , así como demostrar la relación de los niveles de expresión de dichos factores con una serie de parámetros clínico-patológicos con valor pronóstico, estado mutacional y supervivencias, en el ADP. Los resultados del estudio de nuestra serie validan, por una parte, los criterios establecidos como factores con valor pronóstico: tamaño tumoral, margen quirúrgico afecto (R1), invasión vascular, invasión linfática, invasión perineural, metástasi hepáticas y estadios avanzados. En relación al modelo de progresión PanIN-ADP, demostramos que existe un aumento en la expresión de la gran mayoría de proteínas estudiadas desde su expresión en ductos de PC y la expresión en ADP. Asimismo, porponemos un valor de Ki67 ≥ a 20% como biomarcador útil a la hora de discernir entre proliferación ductular reactiva o ADP bien diferenciado en las biopsias pequeñas o en los márgenes quirúrgicos de piezas de resección. En relación al estudio genético de RAS, confirmamos que ningún caso presenta mutación para NRAS, a diferencia del 89% de los ADP, que presentan mutaciones de KRAS, y que la presencia de dicha mutación implica peor pronóstico. En cuanto a los factores de señalización celular en ADP, se confirma que la expresión de algunas proteínas (p4E-BP1, eIF4E y YAP1) se asocia a factores de mal pronóstico y peor supervivencia. No evidenciamos en el estudio relación significativa entre la expresión de las proteínas estudiadas con parámetros clínico-patológicos relacionados con estroma peritumoral (p16, desmoplasia, inflamación). Nuestros resultados concluyen que el estudio de los factores de las vías de señalización celular complementan el estudio anatomopatológico de los ADP. La determinación de Ki67 con un valor superior a 20% permite discernir entre una proliferación ductular reactiva/metaplasia acinar ductal y ADP bien diferenciado y lo proponemos como marcador a la hora de valorar margen quirúrgico de piezas de resección y biopsias pequeñas. La sobreexpresión de YAP1 nuclear, eIF4E citoplasmático y p4E-BP1 nuclear definen un perfil molecular de ADP de peor pronóstico. Finalmente, resaltar la relevancia de caracterizar factores asociados al microambiente que rodea al ADP e influyan en el comportamiento biológico de los mismos. El grupo de tumores sin mutaciones de KRAS y NRAS es muy interesante de cara a identificar otras eventuales alteraciones moleculares, con incidencia en el desarrollo de los ADP. La intención en un futuro es ampliar la serie para conseguir resultados significativos que permitan obtener más conclusiones. / Pancreatic ductal adenocarcinoma (ADP) constitutes approximately 85% of pancreatic tumors. It is the tumor in which fewer clinical developments have occurred in the last 50 years and continues to have a very poor prognosis. Therefore, the identification of risk factors and characterization of tumor progression, as well as the identification of new therapeutic targets is necessary. In this Thesis we studied the state of the cell signaling pathways in a number of conventional ADP as well as ducts of chronic pancreatitis (CP) and the associated precursor lesions (PanIN). The main objective of this paper is the study of various factors involved in cell signaling pathways and epitelio-mesenchymal transition (PI-3K-AKT-mTOR, Ras-Raf-MAPK, Hippo, p53, N-cadherin and p16) by immunohistochemical and molecular study, with the aim to define a model of progression from precursor lesions of PanIN in PC to infiltrating ADP; and to demonstrate the relationship of the expression levels of these factors with a series of pathological parameters with prognostic value, mutational state and survival in the ADP. The survey results of our series validate the established prognostic criteria factors: tumor size, surgical margin affection (R1), vascular invasion, lymphatic invasion, perineural invasion, progression to liver metastasis and advanced stages. Regarding the progression model PanIN-ADP show an increased expression of the vast majority of proteins studied since its expression in ducts of PC to ADP expression. Also, we propose a value of Ki67 ≥ 20% as useful biomarker to discern between a benign reactive ductular proliferation/acinar ductal metaplasia and a well differentiated ADP in small biopsies or in surgical margins of resected specimens. In relation to genetic study of RAS, we confirm that no event has mutation to NRAS, unlike the 89% of ADP showing KRAS mutations, and the presence of said mutation confers decreased survival. As for cell signaling factors in ADP, it is confirmed that the expression of some proteins (p4E-BP1, eIF4E and YAP1) factors associated with poor prognosis and shorter survival. No we show in the study significant relationship between the expression of the proteins with pathological parameters related to peritumoral stroma (p16, desmoplasia, inflammation). Our results conclude that the study of the factors of cellular signaling pathways complement the pathological report of the ADP. Ki67 determining a value greater than 20% can discern between a benign reactive ductular proliferation and a well differentiated ADP and propose it as a marker in assessing surgical resection margin and small biopsies. Overexpression of YAP1 nuclear, eIF4E cytoplasmic and p4E-BP1 nuclear define a molecular profile of ADP with worse prognosis. Finally, highlight the importance of characterizing factors associated with ADP microenvironment and their influence on biological behavior. The group of tumors without KRAS mutations and NRAS is very interesting in order to identify other molecular alterations, with impact on the development of ADP. The intention in the future is to expand the series to achieve significant results that allow more conclusions.

Introducción: La arteriopatía periférica es la manifestación de la arteriosclerosis en aquellos territorios que no sean en el coronario, intracraneal ni cerebral. Se trata de una enfermedad ampliamente estudiada que es considerada como un indicador de riesgo cardiovascular sobre todo para cardiopatía isquémica y enfermedad cerebrovascular. Suele ser asintomática y su primera manifestación es habitualmente la claudicación intermitente. Objetivos: En esta tesis se presentan dos trabajos donde se analiza la influencia de la anemia en el pronóstico de los pacientes estables con enfermedad arterial periférica así como si el tratamiento con cilostazol, fármaco que aumenta la distancia de claudicación, influye negativamente en la aparición de nuevos eventos cardiovasculares ya sea en forma de infarto agudo de miocardio, hemorragia o muerte. Pacientes y métodos: Para ello se han obtenido datos del FRENA, un registro prospectivo que incluye pacientes con arteriopatía periférica seguidos una media de 18 meses. Se recogen características clínicas de los pacientes, su tratamiento farmacológico y cada uno de los eventos cardiovasculares, hemorragia o muerte durante este periodo. Resultados: De 1663 pacientes con arteriopatía periférica, 208 (12.5%) tenían anemia, tras 18 meses aquellos con anemia presentaban una mayor tasa de infarto agudo de miocardio (RR 2.10; 95% intervalo de confianza (CI): 1.04-3.99), amputación (RR: 2.98; 95% CI: 1.70-5.05), mortalidad (RR: 3.58; 95% CI: 2.39-5.28), con tasas de isquemia cerebrovascular y hemorragia similares. En el análisis multivariante tener anemia se asoció a un incremento del riesgo de muerte. De los 1317 pacientes con arteriopatía periférica analizados en el segundo trabajo, aquellos que tomaban cilostazol (14.5%) no presentaron diferencias estadísticamente significativas de eventos cardiovasculares, hemorragia o muerte con respecto a los que no lo tomaban. Conclusiones: Podemos concluir que la anemia, en pacientes estables con arteriopatía periférica, se asocia a un incremento de la mortalidad. De los pacientes con claudicación intermitente, aquellos tratados con cilostazol no tanían mayor número de eventos cardiovasculares, hemorragias o muerte. / Introduction: Peripheral artery disease (PAD) is one of the symptoms of arteriosclerosis out of coronary or cerebral arteries. PAD has been widely studied and it is considered as an indicator of cardiovascular risk, especially for coronariopaty and cerebrovascular disease. It is usually asymptomatic and when symptomatic it is commonly in form of intermittent claudication. Objectives: In this work we present two articles where the influence of anemia in the prognosis on outpatients with symptomatic PAD and the influence of the treatment with cilostazol, pharmacological treatment of intermittent claudication, and its risk for subsequent ischemic events, myocardial infarction, bleeding or death. Patients and Methods: We have used data from the FRENA Registry, a prospective registry of patients with PAD with mean follow up of 18 months. We collect data from clinical characteristics, pharmacological treatment, cardiovascular events, bleeding or death during this period. Results: Of 1663 patients with PAD, 208 (12.5%) had anemia. Over 18 months, patients with anemia had a higher rate of myocardial infarction (RR 2.10; 95% Confidence interval (CI): 1.04-3.99), limb amputation (RR: 2.98; 95% CI: 1.70-5.05), mortality (RR: 3.58; 95% CI: 2.39-5.28), with similar results for ischemic stroke and major bleeding. On multivariate analysis, anemia was associated with an increased risk to die. Of 1317 patients with intermittent claudication those who received cilostazol (14.5%) had no significant differences in the rate of subsequent ischemic events, major bleeding or death than those without cilostazol. Conclusions: In stable outpatients with PAD, anemia was associated with increased mortality but not with an increased rate of subsequent ischemic events or major bleeding. In stable outpatients with intermittent claudication, the use of cilostazol was not associated with increased rates of subsequent ischemic events, major bleeding or death.

La síndrome d’apnea-hipoapnea del son (SAHS) és una malaltia amb una elevada prevalença en la població general que ha estat associada a entitats oftalmològiques diverses, sent la més prevalent la síndrome de la parpella laxa i, entre les que comporten més risc de pèrdua visual permanent el glaucoma i la neuropatia òptica. No es coneix la relació fisiopatològica entre les manifestacions oftalmològiques i la SAHS. La hipòxia intermitent secundària a les apnees crea una disfunció de l’autoregulació del flux vascular i un increment de l’estrès oxidatiu que s’han proposat com a factors de risc pel glaucoma. La nostra hipòtesis fou que la SAHS és un factor de risc de patir dany papil·lar glaucomatós independentment de la PIO, i que la laxitud palpebral i el dany glaucomatós de la papil·la estan relacionats en aquests pacients. L’objectiu de l’estudi fou definir les característiques glaucomatoses d’aquests pacients, tenint en compte la PIO, el dany papil·lar i el dany en el camp visual. Els objectius secundaris van ser relacionar les manifestacions oftalmològiques amb la severitat del SAHS i valorar la possible relació entre el glaucoma i la laxitud palpebral. El disseny de l’estudi fou transversal sobre una població de sospitosos de SAHS. Es va realitzar polisonmografia completa i exploració oftalmològica que inclogué PIO en diferents posicions amb tonòmetre de Perkins, camp visual i retinografia seqüencial estereoscòpica. Per la classificació de la SAHS es va tenir en compte l’Índex Apnea- Hipoapnea del son (IAH). L’estudi estadístic es va realitzar amb STATA 11. Com a resultats destacats vam observar que no hi havia diferències en la PIO mitjana en posició assegut entre el grup SAHS moderat/sever i el grup SAHS no/lleu mentre que la PIO en decúbit supí va ser més elevada i amb diferència estadísticament significativa en el grup SAHS moderat/sever respecte el grup SAHS no/ lleu. La PIO en supí i en decúbit lateral per l’ull inferior van presentar una correlació positiva i amb significació estadística amb l’IAH. Aquesta relació no s’ha descrit fins ara. En el grup SAHS moderat/sever el 12,9% va presentar papil·les sospitoses de glaucoma i el 32% un camp visual anòmal. Les diferències respecte al grup SAHS no/lleu foren estadísticament significatives p=0,002 i p=0,013 respectivament. La flaccidesa palpebral fou més freqüent en el grup SAHS moderat/sever respecte el grup SAHS no/lleu, si bé no es van detectar diferències entre el grup amb papil·la sospitosa de glaucoma respecte el grup sense sospita. En l’exploració fundoscòpica vam observar un major percentatge d’estries angioides idiopàtiques en la mostra respecte a l’esperat en la població general. Tres pacients (3/49) amb SAHS sever van presentar estries angioides bilaterals, representant el 6% del grup SAHS sever. Que en tinguem coneixement no s’ha descrit fins ara aquesta associació. A partir d’aquests resultats ens plantegem que hi hagi una relació entre la SAHS i les estries degut a una lesió dels teixits connectius en la SAHS, ja sigui primària o secundària a les conseqüències fisiopatològiques de la SAHS. Les limitacions principals de l’estudi van ser l’elecció d’una mostra no representativa de la població general i el disseny transversal que no permet fer un diagnòstic de certesa del glaucoma basat en la progressió. Com a fortaleses cal destacar l’homogeneïtat de la mostra: pacients sospitosos de SAHS, i l’estudi del glaucoma tenint en compte les diferents variables. Com a conclusions els pacients amb SAHS moderat o sever haurien de ser considerats un grup de risc de patir glaucoma. Seria adequada la derivació a oftalmologia per realitzar la mesura de PIO en decúbit supí i lateral, realitzar un fons d’ull i una prova de camp visual per valorar el risc de glaucoma i descartar altres patologies associades / Sleep Hipoapnea-apnea syndrome (OSA) is a disease with a high prevalence in the general population that has been associated with various ophthalmic manifestations, the most prevalent is the floppy eye syndrome whereas glaucoma and ischemic optic neuropathy involve greater risk of permanent visual loss. Pathophysiological relationship between OSA and the ocular manifestations is not completely understood. Nocturnal apnea causes intermittent hypoxia, increased oxidative stress and dysfunction of the vascular tone; these factors have been proposed as risk factors for glaucoma. Our hypothesis was that OSA is a risk factor for glaucomatous changes in the optic nerve regardless of the IOP; and that eyelid laxity and glaucoma could be related in these patients. The aim of the study was to define the characteristics of glaucomatous patients, taking into account IOP, optic disk and visual field characteristics. The secondary objectives were to correlate them with the severity of OSA and to evaluate the possible relationship between glaucoma and eyelid laxity. The study design was cross-sectional in a population of suspected SAHS. We conducted polysomnography and a comprehensive ophthalmic test including IOP in different positions with Perkins tonometer, a sequential stereoscopic retinography and a visual field test. Classification of the OSA was based on the Apnea- Hipoapnea Index (AHI). The statistical study was performed with STATA 11. We observed no differences in mean IOP in sitting position between the moderate/severe OSA group and no/mild OSA. In supine position, IOP was higher in the moderate/severe OSA group compared to the no/mild OSA group. This difference was statistically significant. IOP in supine and lateral decubitus in the lower eye showed a statistically significant positive correlation with AHI. This relationship has not been described before. In the moderate/severe OSA group 12.9% of the eyes had a glaucomatous optic disk and 32% presented an abnormal visual field test. Differences between this group and the no / mild OSA were statistically significant, p = 0.002 and p = 0.013 respectively. Floppy eyelid was more frequent in the moderate/severe OSA group compared to the no/mild OSA. Nevertheless, no differences were found regarding the presence of floppy eyelid between eyes with glaucomatous optic disk or those without suspicion of optic disk glaucomatous changes. On funduscopic examination with stereoscopic retinography we observed a higher percentage of idiopathic angioid streaks compared to the expected in the general population. Three patients (6%; 3/49) of the severe OSA group (AHI>30) showed angioid streaks in both eyes. This association has not been described. Considering these results, we suggest that there can be a relationship between OSA and angioid streaks due to the connective tissue abnormalities present in OSA, either primary or secondary to the pathophysiological consequences of OSA. The main limitations of the study were the selection of the sample, which was not representative of the general population and the cross-sectional design, which does not allow a final diagnosis of glaucoma based on the progression. The main strengths include the homogeneity of the sample, patients with suspicion of SAHS and the wide analysis of glaucoma considering different parameters. As conclusions, patients with moderate or severe OSA should be considered a group of risk for glaucoma. It would be appropriate an ophthalmic referral that should include IOP measurement in supine and lateral position, fundus examination to check retina and optic disk and a visual field test to rule out glaucoma or other ophthalmic manifestations.

L'obesitat és una situació d'excés de massa de greix corporal que pot conduir a la síndrome metabòlica (SM). Omentin es produeix i és secretada pel TAV i pot tenir un paper antiinflamatori important en estats pro-inflamatoris. La disminució dels nivells circulants i de l'expressió génica de vaspina s'associa a empitjorament de la diabetis i la pèrdua de pes corporal. Simultàniament a l'augment de la incidència de l'obesitat i la diabetis, augmenta la prevalença de l'hepatopatia grassa no alcohòlica (HGNA). La prova gold standard per al diagnòstic histològic és la biòpsia hepàtica. Atès que és una tècnica invasiva, hi ha un interès en el desenvolupament de biomarcadors no invasius per a la identificació d'esteatohepatitis. Els objectius van ser analitzar els nivells circulants d’omentin i vaspina, la seva expressió gènica en teixit adipós en dones amb obesitat mórbida (OM) enfront de dones amb normopès. Es va examinar la seva associació amb les diferents variables bioquímiques, així com l'ús clínic dels nivells circulants d’omentin i vaspina com a potencials biomarcadors de la presència de HGNA. Primer, es van analitzar els nivells circulants i expressió génica de vaspina i omentina en individus amb pes normal i OM. Després, es van analitzar 40 mostres de fetge de les dones amb OM. Els resultats mostraren disminució dels nivells circulants d’omentin a l'OM, presentant correlació inversa amb els paràmetres glucèmics i amb el SM. L'expressió d’Omentin estava disminuïda en OM. En contrast, els nivells de vaspina en els OM no van ser diferents dels controls, amb una correlació inversa amb els nivells de lipocalina-2 i IL6. L'expressió de vaspina va ser significativament més gran en els OM. Quant a l’HGNA, els resultats van objectivar augment dels nivells circulants d’omentin en els pacients amb EHNA respecte l’esteatosi simple. D'altra banda, el rendiment dels nivells d’omentin per al diagnòstic d’EHNA va mostrar una excel•lent AUROC. Les principals conclusions són que omentin sembla exercir un efecte protector front l'obesitat, mentre que els seus nivells circulants augmenten paradoxalment en els pacients amb EHNA. / La obesidad es una situación de exceso de masa grasa corporal que puede conducir al síndrome metabólico (SM). Omentin se produce y es secretada por el TAV y puede tener un papel antiinflamatorio importante en estados pro-inflamatorios. La disminución de los niveles circulantes y de la expresión génica de vaspina se asocia a empeoramiento de la diabetes y la pérdida de peso corporal. Simultaneamente al aumento de la incidencia de la obesidad y la diabetes, aumenta la prevalencia de la hepatopatía grasa no alcohólica (HGNA). Dado que la biopsia hepática es una técnica invasiva, existe un interés en el desarrollo de biomarcadores no invasivos para la identificación de esteatohepatitis. Los objetivos fueron analizar los niveles circulantes de omentin y vaspina, su expresión génica en el tejido adiposo en mujeres con obesidad mórbida frente a mujeres con peso normal. Se examinó su asociación con las variables bioquímicas así como el uso clínico de los niveles circulantes de omentin y vaspina como potenciales biomarcadores de la presencia de la HGNA. Primero, se analizaron los niveles circulantes y la expresión génica de vaspina y omentin en sujetos con normopeso y obesidad mórbida (OM). Después, se analizaron 40 muestras de hígado de las mujeres con OM. Los resultados mostraron disminución de los niveles de omentin en la OM, presentando correlación inversa con los parámetros glucémicos y el SM. La expresión de Omentin estaba disminuida en la OM. En contraste, los niveles séricos de vaspina en los OM no fueron diferentes de los controles, con una correlación inversa con los niveles de lipocalina-2 e IL6. La expresión de vaspina fue mayor en los OM. En cuanto a la HGNA, demostramos un aumento de los niveles circulantes de omentin en los pacientes con EHNA respecto a aquellos con ES. El rendimiento de los niveles de omentin para el diagnóstico de EHNA mostró una excelente AUROC. Las conclusiones son que omentin parece ejercer un efecto protector frente la obesidad, mientras que sus niveles circulantes aumentan paradójicamente en los pacientes con EHNA. / Obesity is a situacion with excess of body fat mass that can lead to metabolic syndrome. Omentin is produced and secreted by VAT and may have an important anti-inflammatory role in pro-inflammatory states. Decreases in vaspin expression and plasma levels accompany worsening of diabetes and body weight loss. In parallel with increased incidence of obesity and type 2 diabetes, the prevalence of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) is growing worldwide. Because liver biopsy is an invasive procedure there is strong interest in developing non-invasive biomarkers for identifying steatohepatitis in NAFLD. The main objectives of this doctoral thesis were to analyze omentin and vaspin gene expression in VAT and SAT as well as circulating levels in a group of morbidly obese women versus normal-weight control women and its associations with the clinical-biochemical variables as well as the clinical use of circulating omentin and vaspin levels as biomarkers for the presence of NAFLD. First, we analyzed the circulating levels and gene expression of vaspin and omentin in normal-weight and morbidly obese (MO) subjects. Then, we analyzed 40 liver samples from MO women. We showed lower circulating omentin levels in the MO, correlating inversely with glucidic metabolism parameters and also with MetS. Omentin mRNA expression in VAT was reduced in MO. In contrast, serum vaspin levels in the MO were not significantly different from those in the controls, correlating inversely with lipocalin-2 and interleukin-6 levels. Vaspin mRNA expression was significantly higher in the MO. Regarding NAFLD, we revealed increased circulating omentin levels in NASH patients in comparison with SS. The performance of omentin in diagnosing NASH showed an excellent AUROC. In conclusion, the main findings of this doctoral thesis are that omentin appears to exert a protective effect against obesity, whereas circulating omentin levels are paradoxically increased in patients with NASH.

Tot i que les teràpies per les infeccions fúngiques han millorat molt en els últims 10 anys, les infeccions per fongs oportunistes segueixen sent una greu amenaça, especialment pels pacients inmunocompromesos. La baixa incidéncia d’aquestes infeccions ha dificultat l’adopció d’estratègies terapeútiques eficaces pel que, estàn associades a una elevada mortalitat. L’objectiu d’aquesta tesi ha estat contribuir al desenvolupament d’alternatives terapeútiques experimentals per les micosis oportunistes causades pels patògens emergents Saprochaete capitata, Cryptococcus albidus, Cryptococcus laurentii, Rhodotorula mucilaginosa i Saccharomyces cerevisiae. Avaluacions in vitro i in vivo es van portar a terme i han permès proposar noves alternatives terapeútiques per les infeccions causades per aquests patògens. / Aunque las terapias para las infecciones fúngicas han mejorado mucho en los últimos 10 años, las infecciones por hongos oportunistas siguen siendo una grave amenaza, especialmente para los pacientes inmunocomprometidos. La baja incidencia de estas infecciones ha dificultado la adopción de estrategias terapéuticas eficaces por lo que, están asociadas a una elevada mortalidad El objetivo de esta tesis ha sido contribuir al desarrollo de alternativas terapéuticas experimentales para las micosis oportunistas causadas por los patógenos emergentes Saprochaete capitata, Cryptococcus albidus, Cryptococcus laurentii, Rhodotorula mucilaginosa y Saccharomyces cerevisiae. Evaluaciones in vitro e in vivo se llevaron a cabo y han permitido proponer nuevas alternativas terapéuticas para las infecciones causadas por estos patógenos. / Although therapies for fungal infections have improved much during last 10 years, infections by opportunistic fungus still are a serious threat, especially for immune-compromised patients. The low influence of these infections have complicated the adoption of effective therapeutic strategies, hence they’re associated with a high mortality rate. The goal of this thesis has been to contribute the development of experimental therapies alternative for opportunistic mycoses originated by emerging pathogens Saprochaete capitata, Cryptococcus albidus, Cryptococcus laurentii, Rhodotorula mucilaginosa and Saccharomyces cerevisiae. In vitro and in vivo evaluations were carried out and they have led us to propose new therapeutic alternatives for the infections caused by these pathogens.

El productes de plasma dessecat per esprai (SDP) tenen un alt contingut proteic i són components útils per a moltes aplicacions, principalment com a productes valuosos per la nutrició animal. El plasma s'obté a partir de sang de porcs sans aptes pel consum humà. Durant l’obtenció, s’afegeixen anticoagulants i la sang s’emmagatzema en tancs refrigerats. Un cop a la planta de processament, la sang es centrifuga, per separar el plasma de la fracció cel∙lular. El plasma es deshidrata en un procés d'assecat per polvorització per produir un producte final en pols. El dispositiu assecador crea microgotes per aspersió del plasma a alta pressió, l’aigua s'evapora per l'entrada d'aire a 170‐250°C i una temperatura de sortida a 80°C. L'assecat per esprai o polvorització produeix diferents efectes simultanis de deshidratació, canvis de temperatura i altres efectes com canvis osmòtics, dany oxidatiu i desnaturalització proteica que podrien contribuir a explicar un procés encara poc entès d'inactivació microbiana. L'objectiu d'aquesta tesi va ser avaluar si el plasma porcí assecat per aerosol (SDPP), en forma de producte comercial i obtingut a partir de lots de milers de porcs y sotmès a tractament, podria transmetre o no alguns dels virus més resistents a altes temperatures y que per altra banda, de forma molt freqüent, afecten a la producció porcina. Atès que la majoria d'elles poden produir infeccions inaparents, fins i tot a l’edat de final d’engreix, el risc que es puguin trobar a a la sang de recollida d’escorxador no és menyspreable. En el primer estudi es va fer el seguiment de la transmissió del Parvovirus porcí (PPV) durant el subministra d’SDPP comercial, com a model de detecció de virus d'alta resistència tèrmica, en porcs susceptibles. Trenta‐sis porcs Landrace x Duroc deslletats (28 d d'edat) van ser alimentats amb dietes que contenien 0 o 8% SDPP. El lot d’SDPP utilitzat contenia anticossos (ABs) per PPV (títol 1: 400). Es varen prendre mostres de sang dels porcs els dies 0 i 63 per a determinar si l'alimentació SDPP havia causat el desenvolupament d'ABs contra PPV, Virus de la síndrome reproductiva i respiratòria (PRRSV) o el Virus de la malaltia d'Aujeszky (ADV). La inclusió de SDPP a la dieta va millorar el creixement dels porcs sense seroconversió contra els virus estudiats. L'objectiu del segon estudi fou avaluar si l’SDPP comercial que conté genoma del Circovirus porcí tipus 2 (PCV2) podia ser un vehicle de transmissió d'aquest virus. Es varen utilitzar garrins Landrace recent deslletats de truges no virèmiques i seleccionats per baixos títols d'ABs. En aquest estudi, l'absència d'ABs enfront PCV2 en porcs experimentals no era necessari ja que els anticossos materns són comuns a les granges comercials. L’SDPP es va incloure en les dietes d'assaig a 0 o 8%. El lot SDPP utilitzat a l'estudi contenia 2,47 x 105 còpies d'ADN de PCV2 / ml mesurats per PCR quantitativa en temps real (qrt‐PCR). Els porcs van ser mostrejats a dies 0, 10, 35 i 45 . No es va observar virèmia o seroconversió enfront PCV2 en porcs alimentats amb SDPP i tampoc no es va observar seroconversió a cap altre dels virus analitzats (PPV, el virus de la malaltia vesicular porcina i ADV). En el tercer estudi, l’SDPP que contenia ADN de PCV2 es va utilitzar per provar la potencial transmissió del PCV2 de porcs inoculats amb el PRRSV. El PRRSV és un virus amb efectes immunomoduladors que normalment facilita les infeccions concurrents. Vint‐i‐tres porcs Landrace de 3,5 setmanes d'edat distribuïts en un arranjament factorial 2 x 2 i assignats a corralines de nivell de bioseguretat 3 (BSL3) per evitar la contaminació creuada per PRRSV (ja que és un virus molt estès en la producció comercial). Les dietes contenien 0 o 8% SDPP. El lot comercial específic de SDPP utilitzat en aquest estudi contenia 7,56 x 105 còpies del genoma de PCV2 per gram. Els porcs varen ser mostrejats a 0, 14 i 28 dies després de l'exposició PRRSV. Tant els grups desafiats amb PRRSV com amb SDPP no varen donar lloc a la transmissió de PCV2. El quart estudi es va dirigir a avaluar si l’SDPP comercial podia estar involucrat en la transmissió del Virus de l'hepatitis E (VHE), una infecció viral freqüent entre la població de porcs i que ha estat reconegut com a zoonotic potencial. Es van trobar ABs enfront HEV en el 100% de les 84 mostres analitzades de diferents lots comercials d’SDPP d'origen espanyol, mentre que només el 22,4% de les mateixes mostres varen ser positives a l'ARN del VHE. En conseqüència, era un motiu de preocupació saber si SDPP pot contribuir a la transmissió del VHE per SDPP. Es varen analitzar mostres de sèrum d'estudis previs en els quals s'havien alimentat els porcs amb dietes comercials SDPP al 0 o 8% per detectar HEV. L’edat dels porcs va variar de 3 a 15 setmanes d’edat i la durada d'alimentació va ser entre 4 a 9 setmanes, depenent de l'experiment. En una de les mostres d’SDPP es va confirmar que contenia VHE ARN. No es va detectar seroconversió en cap dels animals pertanyents als diferents estudis, el que va portar a la conclusió que l’SDPP no representa un risc per a la transmissió del VHE. Es pot concloure que els resultats dels estudis abans esmentats van contribuir a aclarir que SDPP no sembla ser un vector de patògens i, per tant, és un ingredient d’alt contingut de proteïna natural segur i d'alta qualitat per al seu ús en l'alimentació animal. / El plasma desecado por aerosol (SDP) tiene un alto contenido proteico, que lo convierte en un componente útil para muchas aplicaciones, y de alto valor para la nutrición animal. El plasma se obtiene a partir de sangre de cerdos sanos, aptos para el consumo humano. Durante su obtención, se añaden anticoagulantes y la sangre se almacena en tanques refrigerados. Una vez en la planta de procesado, la sangre se centrifuga, para separar el plasma de la fracción celular. El plasma se deshidrata mediante un proceso de secado por pulverización en aerosol para producir un producto final en polvo. El dispositivo crea un espray de microgotas por aspersión del plasma a alta presión, el agua se evapora por la entrada de aire a 170‐250°C y una temperatura de salida de 80°C. El secado por pulverización produce distintos efectos simultáneos, incluyendo: deshidratación, cambios bruscos de temperatura y otros efectos tales como cambios osmóticos, estrés oxidativo y desnaturalitzación proteica que podrían contribuir a explicar un proceso aún poco entendido de inactivación microbiana. El objetivo de esta tesis fue el de evaluar si el plasma porcino desecado por aerosol (SDPP) en forma de producto comercial y obtenido a partir de lotes de miles de cerdos podría transmitir o no algunos de los virus más resistentes a altas temperaturas y que frecuentemente afectan a la producción porcina. Dado que la mayoría de ellos pueden producir infecciones inaparentes, incluso a la edad de final de engorde, el riesgo que puedan encontrarse en la sangre recogida en matadero no es despreciable. En el primer estudio se realizó un seguimiento de transmisión del Parvovirus porcino (PPV) durante el aporte de SDPP comercial en la dieta, como un modelo de detección de virus de alta resistencia térmica, en cerdos susceptibles. Treinta y seis cerdos Landrace x Duroc recién destetados (28 de edad) se alimentaron con dietas que contenían 0 o 8% SDPP. El lote de SDPP utilizado contenía anticuerpos (ABs) para PPV (título 1: 400). Se tomaron muestras de sangre de cerdos en el día 0 y 63 para determinar si la inclusión de SDPP en el alimento había causado el desarrollo de ABs frente PPV, el Virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino (PRRSV) o el Virus de la enfermedad de Aujeszky (ADV). La inclusión de SDPP en la dieta mejoró el crecimiento de los cerdos sin seroconversión frente a los virus estudiados. El objetivo del segundo estudio consistió en evaluar si el SDPP comercial que contenía genoma de Circovirus porcino tipo 2 (PCV2) podía ser un vehículo de transmisión de este virus. Se utilizaron lechones Landrace recién destetados de cerdas no virémicas y seleccionados por presentar bajos títulos de ABs. En este estudio, la ausencia de ABs frente PCV2 en cerdos experimentales no era una condición excluyente, ya que los anticuerpos maternos son un factor común en los cerdos de granjas comerciales. El SDPP se incluyó en las dietas de ensayo a 0 o 8%. El lote de SDPP utilizado en el estudio contenía 2,47 x 105 copias de ADN de PCV2 / ml medidos por PCR cuantitativa de tiempo real PCR (qrtPCR). Los cerdos fueron muestreados a 0, 10, 35 y 45 días. No se observó viremia o seroconversión frente PCV2 en los cerdos alimentados con SDPP y tampoco se observó seroconversión frente a ninguno de los otros virus analizados (PPV, el virus de la enfermedad vesicular porcina, y ADV). En el tercer estudio, el SDPP que contenía ADN de PCV2 se utilizó para probar la potencial transmisión del PCV2 en cerdos inoculados con el PRRSV. El PRRSV es un virus con efectos inmunomoduladores que normalmente facilita las infecciones concurrentes. Veintitrés cerdos Landrace de 3,5 semanas de edad fueron distribuidos en un diseño factorial 2 x 2 y asignados a corralinas BSL3 para evitar la contaminación cruzada por PRRSV (un virus ampliamente extendido en condiciones de producción comercial). Las dietas contenían 0 o 8% SDPP. El lote comercial específico de SDPP utilizado en este estudio contenía 7,56 x 105 copias del genoma de PCV2 por gramo. Los cerdos se muestrearon a 0, 14 i 28 d después de la exposición al PRRSV. Los grupos desafiados con PRRSV y alimentados con SDPP no dieron lugar a transmisión del PCV2. El cuarto estudio se dirigió a evaluar si el SDPP comercial estaba involucrado en la transmisión del Virus de la Hepatitis E (VHE), una infección viral frecuente entre la población de cerdos que ha sido reconocido como un virus con potencial zoonótico. Se encontraron ABs frente a HEV en el 100% de las 84 muestras analizadas de distintos lotes comerciales de SDPP de origen español, mientras que solo el 22,4% de las mismas muestras fueron positivas por ARN del VHE. En consecuencia, era un motivo de preocupación conocer si el SDPP puede contribuir a la transmisión del el VHE. Se analizaron muestras de estudios previos en los que se habían alimentado los cerdos con dietas comerciales con SDPP al 0 o 8% para detectar HEV. La edad de los cerdos varió entre 3 a 15 semanas de edad y la duración de la alimentación fue entre 4 a 9 semanas, dependiendo del experimento. Una de las muestras de SDPP se confirmó que contenía ARN del VHE. No se detectó la seroconversión en ninguno de los animales pertenecientes a los distintos estudios, lo que condujo a la conclusión que el SDPP no representa un riesgo para la transmisión del VHE. Se concluyó que los resultados de los estudios mencionados contribuyeron a aclarar que el SDPP no parece ser un vector de los agentes patógenos estudiados y, por lo tanto, según los estudios realizados se trata de un ingrediente natural seguro de alta calidad con un alto contenido de proteínas para su uso en nutrición animal. / Spray dried plasma (SDP) products have high protein contents and, therefore, are useful components for many applications, mainly as valuable products for animal nutrition. Plasma is obtained from blood of healthy pigs fit for slaughter for human consumption. Blood is pooled from many animals, collected in tanks with anticoagulant and chilled. In the processing plant, blood is centrifuged to separate the plasma from cellular fraction and dehydrated by a spray‐drying process to produce a powered ingredient. The spray dryer device creates micro‐drops and evaporates water by inlet air at 170‐250°C and outlet temperature at 80°C. Spray‐drying produces concurrent effects of dehydration, changes of temperature and others effects such as osmotic changes, oxidative damage, and protein denaturizing stress that could contribute to explain a poorly understood process of microbial inactivation. The objective of this thesis was to evaluate if commercial spray dried porcine plasma (SDPP) obtained from batches of thousands of pigs could transmit or not some of most common high heat resistant viruses that affect swine production. Since most of them may produce unapparent infections at slaughter age, the risk to be found in collected blood at slaughterhouse is not negligible. In the first study, Porcine parvovirus (PPV) transmission throughout commercial SDPP, as model of high thermally resistant virus, was explored in susceptible naïve pigs. Thirty‐six Landrace × Duroc weanling pigs (28 d of age) were fed with diets containing either 0 or 8% SDPP. The SDPP lot used contained antibodies (ABs) to PPV (titer 1:400). Blood samples were collected from pigs on d0 and 63 to determine whether feeding SDPP caused development of ABs against PPV, Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) or Aujezsky disease virus (ADV). Inclusion of SDPP in the diet improved growth of pigs without seroconversion against studied viruses. The objective of the second study was to assess if commercial SDPP containing Porcine circovirus type 2 (PCV2) genome may be a vehicle of transmission for this virus. Weaned Landrace piglets from non viremic sows and selected for low ABs titres were used. In this study, absence of ABs against PCV2 in experimental pigs was not required because maternal antibodies are widespread in commercial farms. SDPP were included in the test diets at 0 or 8%. The SDPP lot used in the study contained 2.47 x 105 PCV2 DNA copies/ml measured by quantitative real time PCR (qPCR). Pigs were sampled at 0, 10, 35 and 45 d. No viremia or seroconversion against PCV2 was observed in pigs fed with SDPP and also no seroconversion to other virus analyzed (PPV, ADV and Swine vesicular disease virus, SVDV) was observed. In the third study, SDPP containing PCV2 DNA was used to test the potential transmission of PCV2 to pigs challenged with PRRSV. PRRSV is a virus with immunomodulatory effects that usually facilitates concurrent infections. Twenty‐three Landrace pigs of 3.5 weeks (w) of age were distributed in a 2 x 2 factorial arrangement and allocated in BSL3 boxes to avoid PRRSV cross‐contamination (since it is a widely spread virus under commercial production conditions). The diets contained 0 or 8% SDPP. The specific commercial lot of SDPP used in this study contained 7.56 x 105 PCV2 genome copies per gram. Pigs were sampled at 0, 14 and 28 d post PRRSV challenge. PRRSV challenged groups and SDPP groups, did not result in PCV2 transmission. The fourth study was addressed to assess if commercial SDPP was involved in the transmission of Hepatitis E virus (HEV), a prevalent viral infection within the pig population that has been recognized with zoonotic potential. HEV ABs were found in 100% of 84 samples of different commercial SDPP lots from Spanish origin, while only 22.4% of the same samples were positive for HEV RNA. Accordingly, it was of concern to know if SDPP may contribute to HEV transmission by SDPP. Serum samples from previous studies in which naïve pigs were fed with commercial SDPP diets at 0 or 8% were analysed to detect HEV. Age of pigs ranged from 3 to 15w of age and the feeding duration was between 4 to 9w, depending on the experiment. One of the lots of SDPP was confirmed to contain HEV RNA. HEV seroconversion was not detected in any of the animals belonging to the different studies, leading to the conclusion that SDPP does not represent a risk for HEV transmission. It can be concluded that the results of the above mentioned studies contributed to clarify that SDPP seems not to be a vector for pathogens and, therefore, it is a natural, safe, high‐quality ingredient with high protein contents for use in animal nutrition.

Los Torque teno sus viruses pertenecen a la familia Anelloviridae, e infectan tanto a cerdos como a jabalíes. En la actualidad, los TTSuVs se dividen en dos géneros, Iotatorquevirus para los TTSuV1, que incluye las especies: TTSuV1a y TTSuV1b; y Kappatorquevirus para los TTSuV2, que incluye las especies: TTSuVk2a y TTSuVk2b. Ambos géneros se caracterizan por tener una organización similar del genoma y por una gran variabilidad genética. Las consecuencias de la infección de los TTSuVs sobre su hospedador no son del todo claras. Ambos géneros se detectan con una prevalencia muy alta, tanto en poblaciones de cerdos sanos como enfermos. El virus se transmite principalmente tanto por vía horizontal como vertical; sin embargo, la ruta parenteral también sería posible, ya que se ha detectado la presencia de TTSuVs contaminando productos vacunales veterinarios. Tras la infección, los TTSuVs se distribuyen por la mayoría de los tejidos y órganos del cerdo. Aunque en la actualidad el papel patogénico de los TTSuVs aún no está claro, se cree que estos virus pueden agravar el curso de la enfermedad en asociación con otros patógenos comunes de los cerdos domésticos. Entre los virus concomitantes con los que se asocian destaca el Circovirus porcino tipo 2 (PCV2), responsable de la circovirosis porcina (CP), una enfermedad con consecuencias devastadoras en la población porcina. La relación existente entre los TTSuV y el PCV2 se basa en la mayor prevalencia de los TTSuVs en cerdos afectados por CP comparada con la de cerdos sanos. Sin embargo, la alta prevalencia de los TTSuVs en la población porcina y su alta variabilidad genética, combinados con una alta prevalencia de otros virus que también infectan a los cerdos, constituyen varios obstáculos en la comprensión del papel patogénico asociado a la infección por los TTSuVs. Al mismo tiempo, la falta de herramientas de diagnóstico eficaces ha sido una barrera en el progreso del conocimiento de los TTSuVs. El diagnóstico de la infección de los TTSuV se ha basado principalmente en la detección mediante la técnica de la PCR. El objetivo de los estudios realizados en esta Tesis fue el de contribuir a la comprensión del papel que desempeñan los TTSuVs en la infección del cerdo. Para poder llevarlo a cabo fue necesario desarrollar técnicas de diagnóstico eficaces para estudiar la epidemiología de TTSuVs. En el primer estudio se investigó la dinámica de la infección y la carga viral en suero de los TTSuV1 y TTSuV2. Se seleccionaron sueros de cerdos afectados de CP y, se compararon los valores de carga viral y prevalencia en sueros de cerdos sanos criados en condiciones equivalentes. Para poder llevar a cabo el estudio, previamente se puso a punto una técnica de PCR cuantitativa a tiempo real (qPCR). Se observó que la prevalencia de los TTSuVs era alta en los dos grupos de cerdos estudiados y para los dos virus. En el caso del TTSuV2, la carga viral fue significativamente mayor en los cerdos afectados por la CP. Tal diferencia no se observó en el caso del TTSuV1. También cabe destacar que los cerdos infectados por el TTSuV2 a edades más tempranas (semanas 1 y 3 de vida) fueron más propensos a desarrollar la CP. Por el contrario, dicha correlación no se observó para TTSuV1. En conjunto, los resultados obtenidos refuerzan la hipótesis de la asociación entre la infección por los TTSuVs y el desarrollo de la CP. En el segundo estudio se investigaron las cargas virales tanto del TTSuV1 como del TTSuV2 en tejidos de 20 cerdos (divididos en dos grupos: 10 sanos y 10 afectados por CP). De cada cerdo se investigaron un total de 7 tejidos, incluyendo pulmón, riñón, hígado, íleon, médula ósea, y los nódulos linfáticos mesentéricos y mediastínicos. La determinación de las cargas de TTSuV1 y TTSuV2 en tejidos se llevó a cabo usando la qPCR descrita anteriormente. Las cargas del TTSuV2 fueron significativamente mayores en los tejidos procedentes de cerdos afectados por la CP que en sus homólogos sanos y que las cargas virales del TTSuV1 para ambos grupos de cerdos. Las mayores cargas del TTSuV2 se observaron en la médula ósea, los nódulos linfáticos mediastínicos y en el hígado. Las mayores cargas del TTSuV1 se detectaron en la médula ósea, pulmón e hígado. Independientemente del estado de salud, la médula ósea fue el tejido donde se observaron las cargas virales más altas. En este estudio se concluyó que las cargas de TTSuV2 fueron significativamente mayores que las cargas de TTSuV1 en los tejidos analizados. Además, las cargas de TTSuV2 en tejidos de cerdos afectados por la CP fueron significativamente mayor que las cargas de TTSuV2 en los mismos tejidos procedentes de cerdos sanos. Por último, los TTSuVs se hallaron en un gran número de tejidos diferentes, e incluso es muy probable que otros tejidos que no se incluyeron en este estudio también pudieran estar infectados por TTSuVs. En el tercer estudio se desarrolló una técnica serológica de ELISA basada en la detección de la proteína recombinante ORF1-A de los TTSuVs. Al mismo tiempo, la carga de los TTSuVs en suero se cuantificó usando la qPCR desarrollada previamente. El ensayo ELISA se usó para estudiar el desarrollo de la respuesta inmune humoral frente a TTSuV1 y TTSuV2. Para ello, se realizó un estudio longitudinal en cerdos clínicamente sanos y en sus madres. Se detectaron IgGs anti ORF1-A en las muestras de suero, tanto frente al TTSuV1 como al TTSuV2. En el caso de TTSuV1, se observó una gran prevalencia de cerdos seropositivos en la semana 4 de vida; por el contrario, para el TTSuV2, el porcentaje de cerdos seropositivos en esa semana fue muy bajo. Se concluyó que los cerdos son capaces de desarrollar una respuesta inmune frente a la infección por los TTSuVs; sin embargo, la alta prevalencia de cerdos virémicos en presencia de IgGs anti ORF1-A sugiere que los anticuerpos no son capaces de eliminar los TTSuVs de la sangre. / Torque teno sus viruses (TTSuVs) belong to the family Anelloviridae and they infect swine and wild boar. Currently, TTSuVs infecting swine are divided into two separated genera, Iotatorquevirus for TTSuV1, including species: TTSuV1a and TTSuV1b, and Kappatorquevirus for TTSuV2, including species TTSuVk2a and TTSuVk2b. Both genera are characterized by similar genomic organization and high genomic variability. The impact of TTSuVs infection for the host is under discussion, since TTSuVs have been detected in high prevalence in healthy and diseased swine populations. Main described transmission routes are horizontal and vertical; nevertheless, the parenteral route is also possible due to the presence of TTSuVs contaminating veterinary vaccine products. In the infected host, TTSuVs are able to infect a variety of tissues and organs. However, the pathogenic role of TTSuVs is not yet clear. It is assumed they can be associated with other well-known swine pathogens, potentially worsening the prognosis of the disease. One of the most studied and harmful viruses in pig production is Porcine circovirus type 2 (PCV2), which is the essential cause of PCV2-systemic disease (PCV2-SD), a devastating disease for the swine industry. In fact, TTSuVs were linked to PCV2-SD triggering, based on the higher prevalence of TTSuVs observed in pigs suffering from PCV2-SD when compared with healthy counterparts. However, the high prevalence of TTSuVs in the swine population, the high genetic variability of TTSuVs, combined with high prevalence of other swine infecting viral pathogens constitute a hindrance in the understanding of the pathogenic role associated to TTSuVs infection. At the same time, the lack of effective diagnostic tools has been a barrier in the understanding of TTSuVs role or biology, as diagnosis of TTSuVs infection has been mainly based on polymerase chain reaction (PCR) detection. The studies carried out in this Thesis aimed to contribute to the understanding of the role played by TTSuVs in the pig. To go further into the study of TTSuVs, it was necessary to develop effective tools to study the epidemiology of TTSuVs. In the first study, the dynamics of TTSuV1 and TTSuV2 loads was studied. For this, serum TTSuV loads of pigs affected by PCV2-SD were compared with appropriate healthy control animals. Such study was carried out by means of a newly developed real-time quantitative PCR (qPCR) method. Results from this study showed that TTSuVs prevalence was high in all studied pigs. TTSuV2 viral load was significantly higher in PCV2-SD affected pigs. Such difference was not observed for TTSuV1. Importantly, it was observed that early TTSuV2 infected pigs were more prone to develop PCV2-SD; on the contrary, such correlation was not observed for TTSuV1. Altogether, obtained data reinforced the hypothesis of the association between TTSuVs infection and PCV2-SD development. In the second study, TTSuV1 and TTSuV2 loads were investigated in tissues of 20 pigs (10 healthy and 10 PCV2-SD affected pigs). For each pig a total of 7 different tissues were analysed, including lung, kidney, liver, ileum, bone marrow, and mesenteric and mediastinal lymph nodes. TTSuV1 and TTSuV2 tissue loads were quantified by the previously developed qPCR. TTSuV2 load was significantly higher in tissues of PCV2-SD affected pigs when compared with healthy counterparts and with TTSuV1 load. For TTSuV2, the highest viral load was observed in bone marrow, mediastinal lymph node and liver, while it was bone marrow, lung and liver for TTSuV1. Regardless of the health status, bone marrow contained the highest viral load. It was observed that TTSuV2 loads in tissues were significantly higher than TTSuV1 tissue loads. Moreover, TTSuV2 tissue load in PCV2-SD affected pigs was significantly higher than TTSuV2 load in tissues of healthy pigs. Finally, TTSuVs had a wide range of tissue distribution, so, it is very likely that other tissues not included in this study would also be infected by TTSuVs. In the third study, Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay (ELISA) assays to detect antibodies against TTSuVs were developed based on the open reading frame (ORF) 1-A recombinant protein of both viruses. Concomitantly, the viral loads in the same examined sera were quantified using the developed qPCR. The ELISA assay was used to study the development of the humoral immune response against TTSuV1 and TTSuV2 in longitudinally sampled clinically healthy pigs and their dams. Anti-ORF1-A IgGs were found in serum of pigs and sows for both TTSuVs. In case of TTSuV1, a high percentage of seropositive pigs were detected at 4 weeks of age; on the contrary, for TTSuV2, percentage of seropositive pigs at the same age was very low. It was concluded that, pigs are able to mount a humoral immune response against TTSuVs. However, based on the high prevalence of viremic pigs in the presence of anti ORF1-A IgGs, it was suggested that these antibodies are not able to remove TTSuVs from blood circulation.

Los ecógrafos de bolsillo ofrecen la posibilidad de realizar una ecografía cardíaca (ecoscopia) en la cabecera del paciente mediante la técnica bidimensional y el Doppler color. El presente estudio es un estudio prospectivo observacional realizado en un centro de salud urbano de Atención Primaria diseñado en dos fases. La primera fase incluyó 397 pacientes con sospecha de cardiopatía y el objetivo principal fue determinar la utilidad de la ecoscopia en el diagnóstico de la patología cardiovascular. Los objetivos secundarios fueron definir la exactitud diagnóstica de la ecoscopia realizada por el médico de familia, con una formación básica en ecocardiografía y soporte telemático de un experto, y determinar su impacto en la práctica clínica. La segunda fase incluyó 393 pacientes hipertensos y el objetivo principal fue valorar el rendimiento diagnóstico de la ecoscopia por el médico de familia en una patología con una prevalencia alta de afectación cardíaca, como es la hipertensión arterial. Los objetivos secundarios fueron definir el subgrupo de pacientes que presentó alteraciones cardíacas y por tanto precisó una estrategia de manejo más agresiva. El médico de familia realizó la ecoscopia en todos los casos en < 5 minutos. En la primera fase, el médico de familia subió 8-10 imágenes (loops) a una plataforma on-line después de realizar la ecoscopia, con su diagnóstico preliminar y manejo del paciente. El experto, de forma ciega, interpretó las imágenes y respondió en < 24h-48h. La concordancia global entre el médico de familia y el experto fue buena (κ 0,64), coincidiendo en 316 (80%) estudios. La concordancia fue buena en la valoración de la insuficiencia aórtica, insuficiencia tricuspídea, insuficiencia mitral, hipertrofia del ventrículo izquierdo y dilatación de la aurícula izquierda (κ 0,71-0,83); y fue moderada para la dilatación de la raíz aórtica o aorta ascendente, disfunción o dilatación del ventrículo izquierdo, estenosis aórtica y estenosis mitral (κ 0,50-0,54). A todos los pacientes, excepto a 23, se les realizó un ecocardiograma convencional. No obstante, la concordancia global entre la valoración de las ecoscopias del médico de familia y el ecocardiograma convencional fue moderada (κ 0,58). El médico de familia diagnosticó patología significativa en 135 (34,2%) pacientes. Después del soporte remoto del experto, el médico de familia modificó la estrategia del manejo en 192 (48,6%) pacientes, solicitando 219 (83,9%) ecocardiogramas convencionales menos de los que había indicado antes de realizar la ecoscopia, proporcionando un ahorro de 40€ por ecocardiograma no realizado. En el periodo de seis meses que duró el estudio, se hubiera producido un ahorro de 7.920€. Además, es importante añadir el beneficio del diagnóstico precoz y las molestias y coste del desplazamiento del paciente al centro terciario. Respecto al estudio de la población afecta de hipertensión arterial, el estudio demostró que la ecoscopia es muy útil en el diagnóstico precoz de la cardiopatía hipertensiva, demostrándose una buena concordancia con el experto en el diagnóstico de hipertrofia ventricular izquierda (κ 0,97), dilatación de aurícula izquierda (κ 0,85) y dilatación de la raíz aórtica o aorta ascendente (κ 0,96). La ecografía de bolsillo parece una buena herramienta para la detección de lesión de órgano diana en los pacientes hipertensos. Los resultados de este estudio demuestran la utilidad de implementar la ecoscopia realizada por el médico de familia en Atención Primaria. Sin embargo, esta estrategia precisa, al menos en la fase inicial, del soporte del experto que puede establecerse mediante la telemedicina. / Pocket size ultrasound cardiac devices offer the possibility to perform cardiac ultrasound (echoscopy) at the point of care using two-dimensional and colour Doppler imaging. The current study is a prospective observational study performed in an urban medical center and it was designed in two phases. The first phase included 397 consecutive patients with suspect of cardiovascular illness and the principal aim was to test the usefulness of cardiac echoscopy in the cardiovascular diagnosis. The second aims were to test the echoscopy diagnosis accuracy performed by a general practitioner, with a brief training in echocardiography and a telematic support of an expert, and to define its impact in the clinical practice. The second phase included 393 hypertensive patients and the principal aim was test the echoscopy diagnosis feasibility by the general practitioner in the arterial hypertension. The second aims were to define the patients who present cardiovascular alterations and needed a more aggressive management strategy. The general practitioner performed all the studies in < 5 minutes. During the first phase, the general practitioner uploaded 8 to 10 images (video loops) to the on-line platform and a provisional ecochocardiographic report on completion of each study. The expert, blinded to the results, interpreted the images and answered in < 24-48h. General practitioner and expert diagnoses agreement was good (κ 0,64), they agreed in 316 (80%) studies. Agreement was also good in the diagnosis of aortic regurgitation, tricuspid regurgitation, mitral regurgitation, left ventricular hypertrophy and left atrial enlargement (κ 0,71-0,83); and agreement was moderate in the diagnosis of aortic root dilation, left ventricular dysfunction, aortic stenosis and mitral stenosis (κ 0,50-0,54). All patients were indicated with a conventional echocardiography, except in 23. However, the global agreement of the general practitioner echoscopy interpretation and the conventional echocardiography was moderate (κ 0,58). General practitioner diagnosed significant diseases in 135 (34,2%) patients. After the expert remote support, the general practitioner changed the management strategy in 192 (48,6%) patients, requesting 219 (83,9%) conventional echocardiography less than before the echoscopy, with a saving of 40€ for ehcocardiopgrahy not performed. During the six-month period that the study took place a total saving of 7.920€ would have been generated. In addition, it is important to add the benefit of the early diagnoses and the trouble and cost of the journey of the patient to a tertiary center. In respect to the study of the population affected with arterial hypertension, the study demonstrated that echoscopy is useful for the early diagnoses of hypertensive heart disease, demonstrating a good agreement with the expert in the left ventricular hypertrophy diagnoses (κ 0,97), left atrial enlargement (κ 0,85) and aortic root dilation (κ 0,96). The pocket size echography seems to be a good tool detecting target organ damage in hypertensive patients. The results of this study show the usefulness of introducing the echoscopy performed by a general practitioner in Primary Care. This strategy needs, at least in the early phase, the expert support using telemedicine.

El objetivo de la presente tesis ha sido obtener información sobre la epidemiología de la Tuberculosis Bovina (TBb) en rebaños vacunos así como la obtención de datos para la implementación de un posible sistema de vigilancia basado en riesgo. En el primer estudio se analizó la variación espacio-temporal del riesgo de TBb en rebaños vacunos desde el año 2006 hasta el 2011. Los resultados indicaron que la prevalencia y la incidencia fueron más elevadas en algunas comarcas y en algunos años, comparando con la evolución global a nivel de país. El análisis de potenciales factores de riesgo indicaron que tanto los movimientos entre granjas provenientes de zonas de elevada incidencia (>1%) como la presencia de ganado de lidia, incrementaban el riesgo de infección. En el segundo estudio se describió una aproximación a un sistema de vigilancia basado en riesgo que se está evaluando actualmente en Nueva Zelanda. Dado que la presencia de TBb en granjas está conducida por un número de factores que incluyen: historial de infección previo en la explotación, frecuencia de test diagnósticos llevados a cabo en la explotación, localización geográfica y los movimientos de animales; el objetivo del estudio fue calcular una puntuación de riesgo de infección para cada granja utilizando datos recogidos durante la campaña de erradicación de forma rutinaria. De esta forma, los rebaños podrían ser clasificados en función de su riesgo de infección y así la vigilancia se podría focalizar en intentar detectar, de una forma más eficiente y economizando los costes, aquellas granjas con la puntuación de riesgo más elevada. En el tercer estudio, la sensibilidad individual de la vigilancia de TBb en mataderos de Cataluña fue evaluada. La probabilidad de detectar un bovino infectado fue estimada mediante el producto de las siguientes probabilidades: 1) probabilidad de que un bovino infectado llegue a matadero presentando lesiones compatibles y detectables macroscópicamente (LDM), 2) probabilidad de que LDM sean detectadas durante la inspección en matadero, 3) probabilidad de que el veterinario oficial de matadero sospeche de TBb y envíe las muestras al laboratorio para su confirmación. La sensibilidad individual de la vigilancia de TBb en los mataderos de bovino de Cataluña, resultó ser de un 31.4% (CI 95%: 28.6-36.2). En el cuarto estudio, la dinámica de transmisión de TBb dentro de un rebaño fue analizada. Para ello se desarrolló un modelo compartimental estocástico SEI (Susceptibles, Expuestos e Infecciosos). Con este modelo se infirieron los parámetros relacionados con la transmisión, en particular el ratio de transmisión (β) y el ratio en el que los animales infectados pasan a ser infecciosos (α). También, debido a la controversia sobre las sensibilidades reportadas de la prueba de la intradermo-tuberculinización simple (IDTs) en condiciones de campo, la probabilidad de detectar tanto los animales infectados como los infecciosos (ϕ y ρ, respectivamente) fue también evaluada. Las distribuciones posteriores de los parámetros modelizados fueron obtenidas mediante el método de las cadenas de Markov Chain Monte Carlo y por métodos de aproximación por computación bayesiana (MCMC-ABC). El promedio obtenido, de 33 rebaños de diferentes áreas de España, para el ratio de transmisión varió entre 0.0001 y 0.0002 por día, y el promedio del ratio de transición de bovinos infectados a infecciosos varió entre 0.011 y 0.0001. / The present PhD Thesis aimed to provide information about the epidemiology of bovine tuberculosis (bTB) in cattle and relevant data for the implementation of a risk based surveillance system. In the first study the space-time variation of the risk of bTB in cattle between 2006 and 2011 was analyzed. The results indicated that in some counties, between some years, the prevalence and the incidence of the disease was higher as compared to the global rate in the rest of the counties of Spain. The analysis of potential risk factors indicated that both, a large number of movements from counties with high incidence (>1%), and presence of bullfighting cattle herds increased the bTB risk. In the second study it was described a risk-based approach for bTB surveillance that is under development in New Zealand. Given that the presence of bTB in a herd is driven by a number of factors including previous infection history, the amount of testing carried out on individual herds, geographic location or herd movement behavior, the objective was to use routinely recorded data to derive a ‘risk score’ for each of these factors and then to combine them to return a composite bTB risk score for each herd. By this way, herds could be ranked and this would enable to focus surveillance in those herds with the highest risk score, providing effective surveillance coverage at a reasonable overall cost. In the third study the individual sensitivity of bovine tuberculosis surveillance in Catalonian slaughterhouses of cattle was assessed. The probability of detection of a bTB-infected cattle by the slaughterhouses in Catalonia was estimated as the product of three consecutive probabilities: P1) the probability that a bTB-infected animal arrived at the slaughterhouse presenting Macroscopically Detectable Lesions (MDL); P2) the probability that MDL were detected by the routine meat inspection procedure, and P3) the probability that the veterinary officer suspected of bTB and sent the sample for laboratory confirmation. The mean individual bTB surveillance sensitivity of the different cattle slaughterhouses in Catalonia obtained in this study was 31.4% (CI 95%: 28.6-36.2). In the fourth study a stochastic compartmental SEI (Susceptible, Exposed (latent), and Infectious) model was developed to mimic Bovine tuberculosis (bTB) within-herd transmission dynamics. This model was used to infer several parameters related to bTB spread within Spanish cattle farms, in particular the cattle-to-cattle transmission rate (β) and the rate at which infected cattle become infectious (α). Also, given the controversy over the sensitivities of the single intradermal tuberculin test (SIT) application in field conditions, the probability of detection of both infected and infectious cattle (ϕ and ρ, respectively), were also evaluated. A Markov Chain Monte Carlo-Approximate Bayesian Computation (MCMC-ABC) method was used to generate posterior distributions and the mean within herd transmission rate (β) estimated in 33 Spanish herds varied between 0.0001 and 0.0002 per day, and the mean rate at which infected cattle become infectious (α) varied between 0.011 and 0.0001.