The Amaryllidaceae alkaloids represent a large and still expanding group of isoquinoline alkaloids, usually classified into nine skeleton types whose representative compounds are: norbelladine, lycorine, homolycorine, crinine, haemanthamine, narciclasine, tazettine, montanine and galanthamine. To date, the alkaloids have been isolated from plants of this family, showing a broad range of biological effects, including acetylcholinesterase (AChE)-inhibitory, antitumor, antibacterial, antifungal, antiviral and antimalarial activities. The genus Lycoris, a group of Amaryllidaceae plants distributed in temperate regions of Eastern Asia, is already known for containing representative alkaloids typical of this botanical family with a wide range of biological activities (for example, lycorine and galanthamine). In the work, the alkaloid profiles of nine species, L. albiflora, L. aurea, L. chinensis, L. haywardii, L. incarnata, L. longituba, L. radiata, L. sprengeri, and L. squamigera, and one variety (L. radiata var. pumila) have been evaluated by GC-MS. This study has identified a total of 31 alkaloids. Structures belonging to the lycorine-, homolycorine-, haemanthamine-, narciclasine-, tazettine-, montanine- and galanthamine-series were identified and quantified, with galanthamine- and lycorine-type alkaloids predominating and usually showing a high relative abundance in comparison with other alkaloids of the extracts. All detected and identified alkaloids had been characterized previously. The analysis of bioactive Amaryllidaceae alkaloid profiles in 9 species and one variety of Lycoris by GC-MS revealed some similarities and differences. This kind of analysis could be useful in guiding the search for compounds with pharmacological activity. Among the species analyzed in the work, L. longituba revealed itself to be a potential commercial source of bioactive alkaloids (such as galanthamine and lycorine) due to its high content in comparison with the other species. In general terms, our results are consistent with the alkaloid profiles reported in the literature for previously studied species. Finally, the GC-MS technology applied has demonstrated to be sufficiently sensitive for the detection of Amaryllidaceae alkaloids, allowing the application of quantitative methodologies to obtain valuable information in relatively short times. The Hippeastrum is a well-known ornamental Amaryllidaceae genus from South America and South Africa, particularly Brazil. Three novel Amaryllidaceae alkaloids form the species Hippeastrum papilio were isolated, including hippapiline, papiline and 3-O-(3’-hydroxybutanoyl)haemanthamine. Their structures were determined by physical and spectroscopic methods. In addition, the known alkaloids haemanthamine, galanthamine, narwedine, 11β-hydroxygalanthamine, apogalanthamine and 9-O-demethyllycosinine B were identified. The unusual cis-B/C ring fusion for the new homolycorine representative hippapiline was ratified by NMR and CD spectroscopy. Besides, GC-MS analysis revealed that galanthamine was the main constituent in the n-hexane extract (86.3 %), also featuring as one of the major components in the EtOAc extract (39.0 %). A crinine-type alkaloid, 3-O-methyl-epimacowine was identificated in the indigenous Brazilian species Hippeastrum calyptratum. Furthermore, the ongoing search for alkaloids in the Amaryllidaceae species using GC-MS resulted in the identification of 18 alkaloids. In addition, the absolute stereochemistry of the 5,10b-ethano bridge in the crinine variants was determined by circular dichroism and X-ray crystallographic analysis, affording the first direct evidence for the presence of crinine-type alkaloids in the genus Hippeastrum. Parasitic protozoa in vitro assays were performed on the new alkaloids from H. papilio. The alkaloid papiline showed favorable activity against Trypanosoma brucei rhodesiense (STIB 900 strain, trypomastigotes stadium) with an IC50 of 0.523 mg/ml, and low activity against Leishmania donovani. Additionally, 3-O-(3’-hydroxybutanoyl)haemanthamine showed mild activity against T. cruzi, low activity against L. donovani and Plasmodium falciparum and also showed low cytotoxicity against myoblasts (L-6 cells). Overall, the research has once again demonstrated the enormous potential of the Amaryllidaceae (subfamily Amaryllidoideae) plants as sources of bioactive products and novel alkaloids, and confirmed the importance of continuing research on species not yet explored. / La familia Amaryllidaceae presenta un grupo específico de alcaloides isoquinolínicos, que suelen mostrar un amplio espectro de actividades biológicas. Se han seleccionado para su estudio 9 especies del género Lycoris (L. albiflora, L. aurea, L. chinensis, L. haywardii, L. incarnata, L. longituba, L. radiata, L. sprengeri, and L. squamigera) y una variedad L. radiata var. pumila. El género Lycoris presenta numerosos endemismos en China. Las especies Hippeastrum papilio y H. calyptratum originarias de Brasil también han sido objeto de estudio. Por lo que respecta a las especies estudiadas del género Lycoris, la identificación de sus alcaloides se ha llevado a cabo por GC-MS. Este estudio ha permitido identificar un total de 31 alcaloides. En el perfil de los extractos de las especies estudiadas predominan los alcaloides que presentan un acoplamiento fenol-oxidativo orto-para’ (tipo licorina) y para-orto’ (tipo galantamina). El número de alcaloides detectado en cada una de las especies estudiadas oscila entre 10 (L. incarnata y L. radiata var. pumila) y 20 (L. longituba) compuestos. Todos los alcaloides detectados e identificados habían sido caracterizados con anterioridad. En el estudio de Hippeastrum papilio se constató la presencia del alcaloide galantamina en cantidades notables –de interés por su utilización como tratamiento paliativo de la Enfermedad de Alzheimer-, además de los nuevos compuestos hippapilina, papilina y 3-O-(3’-hidroxibutanoil)hemantamina junto a los ya conocidos 11β-hidroxigalantamina, apogalantamina, hemantamina, narwedina y 9-O-demethyllycosinine B. El alcaloide hippapilina es el primer ejemplo de fusión cis B/C con los protones 10b y 1 en orientación beta. Por su parte, el alcaloide papilina muestra una remarcable actividad frente a Trypanosoma brucei rhodesiense (cepa STIB 900, estadio tripomastigote) con un IC50 de 0.523 μg/ml. Finalmente, el estudio de la especie Hippeastrum calyptratum nos ha permitido la identificación de 17 compuestos, de los cuales el alcaloide del tipo crinina 3-O-metilepimacowina, se aisla por primera vez de una fuente natural.

Tesi realitzada al Centre de Recerca en Agrigenómica (CRAG) / SUMO, Small Ubiquitin-related MOdifier, es un modificador post-traduccional de la familia de la Ubiquitina, ya que presentan estructuras y mecanismo de conjugación conservados. La unión de SUMO al sustrato puede modificar la actividad, localización y estabilidad de la proteína diana. En plantas, la conjugación de SUMO es un proceso esencial durante los primeros estadíos del desarrollo embrionario y que regula las respuestas de las plantas a hormonas y su adaptación frente a diferentes estreses abióticos y bióticos. La conjugación de SUMO al sustrato es el resultado de la acción secuencial de tres reacciones enzimáticas: la activación de SUMO, catalizada por el heterodímero SAE2/SAE1, la conjugación a la enzima conjugadora SCE1 y su transferencia al sustrato en una reacción facilitada por E3 ligasas. En Arabidopsis, existen cuatro isoformas de SUMO, SUMO1, 2, 3 y 4, y dos isoformas de la subunidad pequeña de la enzima activadora, SAE1a y b. Con el objetivo de analizar las bases moleculares de la función de SUMO in vivo, se ha procedido a la caracterización molecular de la maquinaria de SUMOylación. El análisis bioquímico de los parálogos de SUMO de Arabidopsis ha puesto de manifiesto la existencia de un mecanismo de regulación que permite la conjugación preferencial de las isoformas esenciales AtSUMO1/2. Este mecanismo consiste en una mayor afinidad de la enzima activadora E1 por SUMO1/2, de manera que la primera enzima de la vía seleccionaría la isoforma de SUMO que entra en la cascada de conjugación. Además, en Arabidopsis, existen dos isoformas de la enzima activadora E1 que difieren en la composición de la subunidad pequeña, SAE1a y SAE1b. Plantas mutantes de Arabidopsis que carecen de la subunidad SAE1a presentan deficiencias en las respuestas frente a estrés térmico e hídrico, sugiriendo que la subunidad pequeña podría tener un papel regulador en el mantenimiento de la homeostasis de SUMO in vivo. En resumen, los resultados indican que la enzima E1 activadora regularía la conjugación de SUMO mediante la selección de las isoformas de SUMO que entran en la cascada de conjugación y la cinética de conjugación mediante la expresión diferencial de las isoformas SAE1a y SAE1b. Resultados adicionales indican la existencia de modificaciones post-traduccionales que podrían regular la actividad de la enzima activadora in vivo. Por un lado, se ha identificado un procesamiento del extremo C-terminal de la enzima activadora que participa en la regulación de la localización subcelular de esta enzima. Por otro lado, se ha identificado la SUMOilación de diferentes componentes de la maquinaria de SUMO in vitro, entre los que se encuentran SAE2, SAE1, SUMO y SCE1. Estas modificaciones podrían estar regulando la actividad, estabilidad y localización de estas enzimas in vivo. Los resultados obtenidos han sentado las bases para el desarrollo de una herramienta molecular que permite la inhibición moderada de la SUMOylación in vivo. Esta herramienta consiste en la generación de una forma de SAE2 que actúa como dominante negativo, bloqueando la transferencia de SUMO desde la enzima activadora a la conjugadora. La expresión de este dominante negativo mimetiza los defectos de desarrollo característicos de plantas mutantes que presentan una SUMOilación disminuida, validando esta estrategia para el estudio de la función de SUMO en plantas in vivo. Mediante el uso de estas plantas, se ha establecido que un sistema de SUMOilación funcional es necesario para la activación de las respuestas de defensa de las plantas frente a patógenos. Además, como abordaje adicional para estudiar la función biológica de SUMO, se han realizado aproximaciones proteómicas en semilla y se han identificado proteínas potenciales sustrato de SUMO que podrían regular transiciones de desarrollo en semilla. / SUMO, Small Ubiquitin-related Modifier, is a post-translational modifier belonging to the ubiquitin family, as they present preserved structures and mechanism of conjugation. In plants, SUMO conjugation is essential in the early stages of embryonic development and regulates plant responses to hormones and abiotic and biotic stresses. SUMO conjugation is the result of the three sequential enzymatic reactions: SUMO activation catalyzed heterodimer SAE2 / SAE1, conjugation to SCE1 conjugating enzyme and its transfer to the substrate in a reaction facilitated by E3 ligases. In Arabidopsis, there are four SUMO isoforms, SUMO1, 2, 3 and 4, and two isoforms of the small subunit of the activating-enzyme, SAE1a and b. In order to analyze the molecular basis of the role of SUMO in vivo, we performed the molecular characterization of SUMOylation machinery. Biochemical analysis of the Arabidopsis SUMO paralogs revealed the existence of a regulatory mechanism that allows the preferential conjugation of the essential isoforms AtSUMO1 / 2, which is mediated by the E1 activating enzyme. Also, there are two isoforms of the activating enzyme E1 which differ in the composition of the small subunit, SAE1a and SAE1b. We have shown that the SAE1a subunit is necessary for maintaining SUMOylation homeostasis in vivo. In summary, the results indicate that the E1 regulates SUMO conjugation by selecting SUMO isoforms entering the conjugation pathway and the conjugation rate by the differential expression of SAE1a/b isoforms. Additional results indicate that post-translational modifications may regulate the activity of the E1-activating enzyme. We have identified a processing of the E1 C-terminus involved in the regulation of its subcellular localization. Furthermore, we have identified the SUMOylation of different components of SUMO machinery, including SAE2, SAE1 SUMO and SCE1. We have advanced our knowledge of the SUMO biology by using a molecular tool that allows moderate inhibition of in vivo SUMOylation. We have engineered an E1 dominant negative which mimics plant responses typical of SUMOylation mutants. By using these plants, we have uncovered a new role of SUMOylation in defense responses against pathogens. Furthermore, proteomic approaches have been identified potential SUMO protein substrates that could regulate seed developmental transitions.

La cepa bacteriana AL 1.1 se aisló de una muestra de suelo de la isla Decepción del continente Antártico. Inicialmente se observó que dicha cepa tenía la capacidad de reducir la tensión superficial del medio, por lo que fue seleccionada para realizar la presente tesis doctoral. Después de confirmar la identificación del aislado como un Bacillus licheniformis se caracterizó el biotensioactivo (BT) producido como liquenisina (LchAL1.1). El estudio de las propiedades físico-químicas de la LchAL1.1 mostró que es capaz de reducir la tensión superficial del agua de 72 a 30 mN/m y posee una concentración micelar crítica de 15 mg/L, indicando una elevada eficacia y eficiencia. La LchAL1.1 tiene la capacidad de formar cristales líquidos del tipo de cruces de malta, lo cual sugiere una importante capacidad de agregación y abre un campo importante en la encapsulación de compuestos de interés. La primera parte del trabajo se centró en el estudio de la producción del BT. Al analizarse diversas fuentes de carbono se observó que la cepa AL 1.1 solo producía liquenisina con hidratos de carbono. Dicha información fue de utilidad para la selección de las melazas como fuente de carbono ya que es un sustrato rico en dichos componentes y además es una fuente residual de bajo coste. Utilizando dicho sustrato se diseñó el medio de producción óptimo mediante la aplicación de la metodología de superficie de respuesta (107,82 g/L de melazas, 6,47 g/L de NaNO3 y 9,7 g/L de K2HPO4/KH2PO4), obteniendo rendimientos cercanos a los 3,2 g/L de liquenisina, lo que representa un incremento de 15 veces con respecto al medio inicial. Se han estudiado las propiedades biológicas de la LchAL1.1 para conocer su posible aplicación en diferentes ámbitos. A pesar de su débil acción antimicrobiana, la LchAL1.1 se presenta como una alternativa interesante para evitar la adherencia y eliminación de biofilms microbianos, encontrando una mayor eficacia para evitar la adherencia microbiana y una alta eficiencia para la eliminación del biofilm pre-formado. Adicionalmente se estudió la interacción de la LchAL1.1 con membranas biológicas y vesículas fosfolipídicas con el objetivo de conocer el mecanismo molecular de su acción. La LchAL1.1 produce hemólisis a concentraciones por debajo de su concentración micelar crítica. Las medidas cinéticas muestran que con la adición de la LchAL1.1, la salida de K+ precede a la de la hemoglobina, y que la adición de protectores osmóticos de tamaño apropiado al medio externo hace posible disminuir y hasta evitar la hemólisis. Estos resultados sugieren que la hemólisis de los eritrocitos humanos ocurre por un proceso coloide-osmótico. Por otro lado, la adición de la LchAL1.1 a vesículas unilamelares (LUV) de POPC produce la salida selectiva de solutos atrapados en su interior al medio externo, encontrando que la composición de la membrana modula el proceso de salida en gran medida. Esto nos indica que la incorporación de la LchAL1.1 en membranas tanto experimentales como modelos, provoca la formación de dominios laterales, los cuales forman defectos o “poros” a través de los cuales tiene lugar la salida de solutos con un tamaño determinado. Con respecto a su acción sobre células eucariotas, la liquenisina induce apoptosis en un 96,5% de las células epiteliales de cáncer de colón (Caco-2). Dicho efecto puede estar relacionado con la interacción de las micelas con la bicapa lipídica, ya que el efecto ocurre a concentraciones de la LchAL1.1 que están por encima de su concentración micelar crítica (50 – 100 µg/mL). Un nuevo enfoque para potenciar las propiedades biológicas de los compuestos bioactivos, es la posibilidad de utilizarlos en combinación. En este sentido, se evaluó la interacción de la LchAL1.1 con tensioactivos sintéticos geminales derivados de aminoácidos como el C3(LA)2 y C6(LL)2, encontrando que con el C3(LA)2 se produce una respuesta sinérgica en sus propiedades antimicrobianas, mejorando la acción de ambos compuestos especialmente contra bacterias Gram negativas / Biosurfactants are of great interest due to the demand for natural products with low toxicity. Strain AL 1.1, isolated on Deception Island (Antarctica) and identified as Bacillus licheniformis, produce lipopeptide when grow under a variety of carbohydrates. The lipopeptide was characterised as lichenysin (LchAL1.1). The LchAL1.1 reduced surface tension to 30 mN/m and had a critical micelle concentration of 15 mg/L. This highly effective and efficient characterized the product as a powerful surfactant. Besides, the formation of liquid crystalline by LchAL1.1 in form of Maltese crosses was revealed. This suggested important properties to self-aggregate and opens an important field in the compounds encapsulation. Nevertheless, their production is not competitive when cost is a limiting factor. For this reason, an economical medium, containing molasses, was optimized to enhance lichenysin production by response surface methodology (RSM). A production of 3.2 g l-1 of lichenysin was achieved with an optimum medium containing 107.82 g l-1 of molasses, 6.47 g l-1 of NaNO3 and 9.7 g l-1 of K2HPO4/KH2PO4, in which, molasses and phosphate salts had a significant effect on biosurfactant production. This medium resulted in a fifteen times increase in production compared with the non-optimized medium. The LchAL1.1 showed a weak antimicrobial activity, however, it had notable anti-adhesion activity, and was able to prevent and eliminate the biofilm formation by pathogenic strains associated with foodborne illness. Lychenysin was effectively applied in a surface pre-treatment to avoid microbial biofilm. It was also very efficient in removing biofilms in surface post-treatment. In addition, the molecular mechanism underlying permeabilization of model and biological membranes by the lipopeptide lichenysin was evaluated. The LchAL1.1 caused hemolysis of human erythrocytes, which varied with LchAL1.1 concentration in a sigmoidal manner. The LchAL1.1-induced K+ release from red blood cells preceded the leakage of hemoglobin, and in addition, hemolysis could be impeded by the presence of compounds in the external medium having a size larger than PEG 4000, indicating a colloid-osmotic mechanism for hemolysis. Lichenysin also caused permeabilization of model phospholipid membranes, as monitored by the release of carboxyfluorescein, from large unilamellar vesicles (LUV). Lipid membrane composition plays a role in the target membrane selectivity of lichenysin. The experimental results support a pore-type behaviour that can be explained by the formation of enhanced permeability domains in the erythrocyte membrane, as observed in model membranes. Furthermore, the LchAL1.1 induced apoptosis in non-differentiated intestinal Caco-2 cells (96.5%). The action can be due to the micelles interaction with lipid bilayer, because the effect occurred to LchAL1.1 concentration above critical micelle concentration (50-100 µg ml-1). Finally, the interaction between lichenysin, arginine (C3(LA)2) and lysine (C6(LL)2) surfactants was evaluated. Thus, when the LchAL1.1 act as co-surfactant improved the antimicrobial activity of arginine (C3(LA)2) surfactant, showing a synergistic effect, mainly in front to Gram negatives bacteria.

Al igual que en muchos países industrializados de América y Europa, en Chile ha habido una transición demográfica y epidemiológica caracterizada por un considerable aumento de enfermedades crónicas no transmisibles relacionadas con la dieta (Enfermedades coronarias, diabetes, obesidad, hipertensión, apoplejía y cáncer) (Aedo M., et al., 2010; Caro S., 2015; Marin & Wallace, 2002). El objetivo de este estudio es comprender la efectividad de la estrategia comunicativa en el tiempo, con la cual se implantó e implementó en la comunidad de Villarrica, Chile la intervención educativa sanitaria relativa a evaluar el Estilo de Vida Promotor de Salud (EVPS) total, así como, para cada una de las sub-escalas o factores de vida saludable de acuerdo al modelo de Pender, tales como autorrealización, responsabilidad de salud, ejercicio, nutrición, apoyo interpersonal y manejo de estrés. Este es un estudio longitudinal y comparativo, entre los indicadores que muestran los resultados del programa EVPS obtenidos en el estudio realizado en el año 2002 y los indicadores obtenidos en el año 2010, complementando lo que refleja la investigación cuantitativa y las entrevistas en profundidad (EEP) con su análisis argumentativo mostrando la investigación cualitativa, en Mujeres de la comuna, con el propósito de determinar las conductas promotoras de salud adquiridas o no, por las mujeres participantes, lo cual refleja la eficiencia de la estrategia comunicativa usada en la intervención. La presente investigación se considera desde el período de re-test y EEP efectuadas en el mes de mayo del año 2010, es decir, ocho años después de finalizada la intervención, Programa Estilo de Vida Promotor de Salud (PEVPS). El objetivo fue determinar el impacto del programa, a largo plazo, tanto en las conductas de EVPS global, como en las seis dimensiones, es decir, Autorrealización, Responsabilidad en Salud, Ejercicio, Nutrición, Apoyo Interpersonal, Manejo del estrés. Para tal efecto, se aplicó el instrumento para medir el EVPS de Pender, al igual que en los períodos de pre-test y post-test, luego se aplicaron las EEP con su respectiva matriz de análisis argumentativo para formar los mapas conceptuales que nos brindaron la información necesaria para contrastar los resultados cuantitativos y cualitativos. La estrategia comunicativa empleada en la intervención, fue importante para lograr el cambio de comportamiento en el año 2002, permitiendo a las personas adoptar conductas promotoras de vida saludable en algunas dimensiones, como en el EVPS total. Esto muestra la importancia de un refuerzo de estas conductas en forma permanente post intervención, los comportamientos saludables se mantuvieron en el tiempo por el refuerzo de redes de apoyo social, contando principalmente con la familia, ya que las mujeres de la comuna mantienen estas conductas, probablemente debido a su autorealización como a la red social que mantienen considerando una mayor frecuencia de relaciones a nivel familiar y social. / Like many industrialized countries in Europe and the Americas, Chile has undergone a demographic and epidemiological transition characterized by a considerable increase in chronic and non-transmissible diseases linked to diet (heart disease, diabetes, obesity, hypertension, stroke and cancer) (Aedo M., et al., 2010; Caro S., 2015; Marin & Wallace, 2002). The objective of this study is to understand the effectiveness over time of a communication strategy applied during the implementation of a health education intervention based on the evaluation of Health Promoting Lifestyle (HPL), in general and for each of the sub-scales or healthy living factors according to the Pender model, namely self-actualization, responsibility for health, exercise, nutrition, interpersonal support and stress management, in the community of Villarica, Chile. This is a longitudinal comparative study based on indicators from the results of the study carried out in 2002 and indicators obtained in 2010. This quantitative analysis is complemented by a qualitative component consisting of in-depth interviews carried out with women from the community and submitted to argument analysis, in order to detect health-promoting behaviors acquired by the participants and determine the effectiveness of the communication strategy applied during the intervention. The present study is based on the re-test and in-depth interviews which took place in May 2010, eight years after the end of the Health Promoting Lifestyle Program (HPLP). The objective is to determine the long-term impact of the program on general HPL behaviors as well as each of the six dimensions, that is, Self-Actualization, Responsibility for Health, Exercise, Nutrition, Interpersonal Support and Stress Management. To this effect, Pender’s model for measurement of HPL was applied, as in the pre-test and post-test, and in-depth interviews were then carried out and an argument analysis matrix performed in order to form the conceptual maps that provided the information necessary to compare and contrast quantitative and qualitative results. The communication strategy employed during the intervention was important in order to achieve behavioral changes in 2002, allowing for the adoption of health-promoting behavior in some of the measured dimensions as well as for overall HPL. The results demonstrate the importance of ongoing reinforcement of positive behaviors in the post-intervention period. Healthy behaviors were maintained over time through social support networks, especially the family, as women from the area studied maintained these behaviors probably due to the degree of self-actualization and the social network that they possess, with a higher frequency of social and family relationships.

INTRODUCCIÓN: Los pacientes cirróticos tienen una elevada susceptibilidad a las infecciones, siendo la peritonitis bacteriana espontánea especialmente grave. Pese a que el tratamiento antibiótico es eficaz, la mortalidad todavía es elevada. Los modelos experimentales descritos hasta el momento son modelos de cirrosis que pueden llegar a desarrollar ascitis y peritonitis bacteriana espontánea, aunque con dificultades metodológicas. Para validar nuevos tratamientos es imprescindible disponer de un modelo experimental que se asemeje al máximo a la patología humana a estudiar. OBJETIVOS: Desarrollar modelos experimentales de peritonitis bacteriana inducida en ratas con cirrosis que permita evaluar nuevas estrategias terapéuticas MATERIAL Y MÉTODOS: Para el desarrollo del modelo experimental de peritonitis bacteriana inducida se utilizó ratas Sprague-Dawley con cirrosis inducida mediante la administración orogástrica de CCl4 con o sin ascitis. Recibieron una inyección intraperitoneal de diferentes concentraciones de E. coli diluido en 1 ml de agua estéril y diferentes volúmenes de agua estéril. Un subgrupo de animales sin ascitis recibió ceftriaxona 4 horas después de la inoculación de E. coli. En el segundo protocolo se utilizaron ratas a las que se les indujo PBI mediante una inyección intraperitoneal de 109 ufc de E. coli diluido en 20 ml de agua estéril. Fueron aleatorizados a recibir por vía subcutánea: placebo, ceftriaxona, anti-TNFα y ceftriaxona, o anti-TNFα solo. RESULTADOS: Las ratas con ascitis mostraron una menor mortalidad que las ratas sin ascitis a las que se les inyectó 108 o 109 ufc de E. coli (p<0.05). La mortalidad fue mayor con 109 ufc respecto 108 ufc de E. coli tanto en ratas con ascitis (pNS) como en las ratas sin ascitis (p<0.01). Se observó una tendencia a una menor mortalidad en las ratas inoculadas con 108 ufc de E. coli y mayor volumen de líquido inoculado. Se observó una marcada respuesta de las células polimorfonucleares peritoneales 4 horas después de la inyección de E. coli tanto en ratas con o sin ascitis. La terapia con antibióticos redujo significativamente la mortalidad en las ratas infectadas con 108 ufc de E. coli (p<0.01). En el segundo protocolo la mortalidad en las ratas tratadas con ceftriaxona y anti-TNFα fue menor que en los animales que recibieron placebo (53% vs 100%, p<0.01). Los niveles TNFα en suero se redujeron significativamente en las ratas que sobrevivieron tratadas con ceftriaxona y anti-TNFα pero no en aquellas tratadas con antibiótico solo. CONCLUSIONES: Hemos desarrollado un nuevo modelo experimental de peritonitis bacteriana inducida en ratas cirróticas con o sin ascitis, que es fácilmente reproducible, mediante la inoculación intraperitoneal de E. coli y que podría ser de gran utilidad para evaluar nuevas estrategias terapéuticas, como la administración de anti-TNFα asociada a antibióticos. / INTRODUCTION: Spontaneous bacterial peritonitis (SBP) is a common and severe infection in patients with cirrhosis. Although antibiotic treatment is effective, mortality is still high. The experimental model of cirrhosis induced by carbon tetrachloryde administration has been used to study the pathogenesis of ascites formation, renal dysfunction and bacterial translocation and to evaluate the effect of administration of different drugs on portal pressure and water and sodium renal excretion. However, this model has not been used to evaluate spontaneous bacterial peritonitis and the effect of different therapies. It is very important to design an experimental model of bacterial peritonitis in cirrhotic rats that remembers the outcome of the disease in cirrhotic patients. AIM: To develop an available experimental model of induced bacterial peritonitis in cirrhosis and to evaluate the efficacy of new therapeutic interventions in this model of induced bacterial peritonitis (IBP). MATERIAL AND METHODS: We used Sprague-Dawley rats with carbon-tetrachloride-induced cirrhosis with or without ascites. Rats were randomized to receive an intraperitoneal administration of different concentrations of Escherichia coli (E. coli) diluted in 1 ml of sterile water in ascitic rats and in different volumes in nonascitic rats. A subgroup of nonascitic animals received ceftriaxone 4 h after E. coli inoculation. In the second protocol cirrhotic rats without ascites were infected with an intraperitoneal injection of 109 cfu of E. coli diluted in 20 ml of sterile water to induce bacterial peritonitis and then were randomized to receive placebo, ceftriaxone, anti-TNFα and ceftriaxone, or anti-TNFα alone administered subcutaneously. RESULTS: Ascitic rats showed a lower mortality rate than nonascitic rats infected with 108 or 109 cfu of E. coli (p<0.05). Mortality was higher with 109 cfu than with 108 cfu of E. coli in ascitic (pNS) and nonascitic (p<0.01) rats. A trend was noted to ward higher mortality in nonascitic rats inoculated with 108 cfu with increasing water volumes. A marked peritoneal polymorphonuclear cell response was observed 4 h after E. coli injection in both ascitic and nonascitic rats. Antibiotic therapy significantly reduced the mortality rate of rats infected with 108 cfu (p<0.01). In the second protocol mortality in rats treated with ceftriaxone and anti-TNFα was significantly lower than in animals receiving placebo (53% vs. 100%, p<0.01). Serum TNFα decreased significantly in surviving rats treated with ceftriaxone plus anti-TNFα but not in treated with antibiotics alone. CONCLUSIONS: We have developed a new experimental model of induced bacterial peritonitis in cirrhotic rats with or without ascites, which is easily reproducible by intraperitoneal inoculation of E. coli and may represent a useful tool for the study of pathogenic events postinfection and for the design of new therapeutic strategies to treat patients with SBP such as the administration of anti-TNFα associated with antibiotics.

El virus de la gripe porcina (SwIV) es una zoonosis. El hecho de que los cerdos pueden actuar como "cocteleras virales" del virus de la gripe potencialmente infecciosos para el ser humano pone de manifiesto su relevancia y la necesidad de comprender la interacción de los diferentes virus de la gripe y otros patógenos respiratorios con el sistema inmune porcino. Además, el estado clínico de los cerdos infectados con gripe puede agravarse debido a una infección bacteriana secundaria. Algunas de estas bacterias como el Haemophilus parasuis son comensales del tracto respiratorio y producen la enfermedad de Glässer, una enfermedad de las granjas de cerdos con alto impacto económico. Por otro lado, las células dendríticas (DCs) son importantes en la inducción de una respuesta inmune efectiva contra los patógenos. Su localización en las vías respiratorias como células centinelas, les convierte en dianas de los patógenos. Sin embargo, su interacción con los virus de la gripe o su papel en las co-infecciones no ha sido totalmente caracterizado. Con el objetivo de entender al nivel celular la interacción de los virus de la gripe y el H. parasuis como patógenos comunes del trato respiratorio de los cerdos, tres estudios fueron desarrollados y presentados en esta tesis. En el primer estudio, las células dendríticas derivadas de la médula ósea de cerdos (poBMDCs) fueron expuestas a una cepa circulante de la gripe porcina H3N2. En el segundo estudio, las poBMDCs fueron infectados con diferentes virus de la gripe que el sistema inmune porcino puede encontrar en la naturaleza como son: el A/Swine/Spain/SF32071/2007(H3N2), el virus de la gripe pandémica de 2009 A/Catalonia/63/2009(H1N1), el virus de la gripe aviar de baja patogenicidad Anas/plathyrhynchos/Spain/1877/2009(H7N2) y el virus de la gripe aviar de alta patogenicidad A/Chicken/Italy/5093/1999(H7N1); y finalmente en el tercer estudio, las poBMDCs fueron infectadas o co-infectadas con el H3N2-SwIV y H. parasuis no virulenta (SW114) o virulenta (Nagasaki). De estos estudios, tres conclusiones generales se pueden extraer: (i) las poBMDCs se infectan con el virus de la gripe porcina H3N2 y transmiten la infección a las células permisivas sólo cuando se favorece la interacción célula-célula, (ii) el perfil de secreción de citoquinas, la expresión de los mRNA de citoquinas y factores de transcripción después de la infección con los virus H3N2 SwIV, hH1N1 y aH7N2 o aH7N1 pueden indicar una activación de la respuesta inmune específica contra estos virus, (iii) la previa infección de las poBMDCs con el H3N2-SwIV seguida por la infección con H. parasuis resultó en un perfil de citoquinas sesgada mayoritariamente hacia una respuesta inflamatoria. En conjunto, estos datos nos ayudan a comprender la interacción entre los patógenos respiratorios como los virus de la gripe porcina y/o H. paraseis, con las células dendríticas así como conocer posibles mecanismos involucrados en el desarrollo de la respuesta inmune protectora. / Swine influenza virus (SwIV) is considered a zoonosis and the fact that swine may act as “mixing vessels” of influenza viruses potentially infectious for humans illustrates its relevance and the need to understand the interaction of different influenza viruses and other respiratory pathogens with the porcine immune system. Moreover, the clinical status of influenza infected animals may deteriorate due to secondary bacterial infection. Some of these bacteria such as Haemophilus parasuis are commensal of the respiratory tract of pigs and the causal agent of Glässer’s disease, an important disease in swine herds that results in high economical loses. In other hand, dendritic cells (DCs) mediate the induction of immunity against pathogens and the location of DCs beneath the epithelium of respiratory organs makes them suitable targets for pathogens. However, their interaction with different influenza viruses or the role of DCs in co-infections has not been fully characterized. With the aim to understand at cellular level the interaction of influenza virus and H. parasuis as common pathogens of pig’s respiratory tract, three studies were undertaken and are presented in this thesis. In the first study, porcine bone marrow derived DCs (poBMDCs) were exposed to a circulating strain of H3N2-SwIV. In the second study, poBMDCs were infected with different influenza viruses that would enter in contact with the porcine immune system, such as: SwIV A/Swine/Spain/SF32071/2007(H3N2), the 2009 pandemic influenza virus A/Catalonia/63/2009(H1N1), the low pathogenic avian influenza virus A/Anas plathyrhynchos/Spain/1877/2009(H7N2) and the high pathogenic avian influenza virus A/Chicken/Italy/5093/1999(H7N1); and finally in the third study, poBMDCs were infected or co-infected with the H3N2-SwIV and H. parasuis non-virulent (SW114) or virulent (Nagasaki). From these studies, three general conclusions can be drawn: (i) poBMDCs are infected by H3N2-SwIV and they transmit the infection to permissive cells only when cell-to-cell contact was favoured; (ii) the cytokine profile and the mRNA expression of transcription factors after H3N2-SwIV, hH1N1 and aH7N2 or aH7N1 may indicate a specific immune response activation against these viruses; (iii) previous infection of poBMDCs with H3N2-SwIV followed by H. parasuis infection resulted in a profile of cytokines biased mainly towards inflammatory response. Overall, these data pave the way for understanding the relation between respiratory pathogens such as influenza viruses and/or H. parasuis and porcine dendritic cells for triggering possible mechanisms driving to protective immune response.

Introducció: L’exposició al fum ambiental del tabac (FAT) és causa important de morbimortalitat. Particularment en el nadó, ja que la seva freqüència respiratòria és superior a la dels adults, el pulmó encara és immadur i ell per si sol no pot voluntàriament evitar l’exposició. L’exposició al FAT es relaciona amb un increment del risc de malalties pediàtriques com la síndrome de mort sobtada, malalties respiratòries agudes, empitjorament de l’asma, malalties agudes-cròniques de l’oïda mitjana i alentiment en el creixement pulmonar. No obstant, no es coneix l’eficàcia d’una intervenció en pares per reduir el FAT. Objectius: Valorar l’efecte d’una intervenció breu per evitar l’exposició al FAT adreçada als pares de nadons menors de 18 mesos, basades en les creences sobre tabaquisme passiu i les conductes dels cuidadors del nadó, realitzada per professionals de pediatria als 3 mesos de la intervenció. Material i mètodes: Assaig aleatoritzat, per conglomerats (grup control: GC i grup intervenció: GI), controlat, paral·lel, obert i multicèntric. La unitat d’aleatorització és l’Equip d’Atenció Primària (EAP), format per un pediatre/a i un infermer/a de pediatria, ambdós responsables d’una mateixa població infantil (aproximadament 2000 nens/es). Els criteris d’inclusió eren nadons de menys de 18 mesos, que el pare o mare fumessin, que es visitessin als EAP i donessin el consentiment per participar a l’estudi. Els criteris exclusió eren malalties greus dels pares o del nadó, malaltia psiquiàtrica dels pares, addicció dels pares a substàncies psicoactives, pares en procés de deshabituació tabac i previsió d’un canvi de domicili durant l’estudi. El GI rep una intervenció breu, basada en el consell personalitzat segons l’exposició i l’entrevista motivacional, de 10 minuts/sessió per 3 sessions en total, segons el model transteòric del canvi de Prochaska i Di Clemente i en l’estratègia de les 5’As (Ask, Advise, Assess, Assist, Arrange), per evitar l’exposició al FAT dels nadons i el GC fa les revisions habituals de pediatria. Es realitzen 3 controls (basal, 3 mesos i 6 mesos), tot i que en la present tesi només es valoraran la visita basal i el primer control als 3 mesos. En la visita basal es recullen, mitjançant un qüestionari de recollida de dades, variables clíniques del nadó, antecedents i característiques de l’exposició al FAT, i es recullen mostres de cabell del nadó només al primer i últim control als 6 mesos, per tal d’analitzar el nivell de nicotina en cabell, tot i que aquestes dades no formen part d’aquesta tesi. Les variables recollides dels progenitors són dades sociodemogràfiques, variables lligades al consum de tabac, dependència i estadi de canvi. En les visites de seguiment (als 3 i 6 mesos de la visita basal) es recullen dades d’exposició al FAT dels nadons. Resultats: Van participar a l’estudi 83 centres d’AP que van reclutar 937 nadons amb una edat mediana de 7,89 mesos (P25=4,17, P75=12,25). Als 3 mesos de la intervenció, el 35,7% de les famílies del GI i el 26,7% del GC (p=0,003) prenien mesures útils dins de casa, i el 58,6% del GI i el 50,9% del GC (p=0,018) les adoptaven dins del cotxe per evitar l’exposició al FAT. El 38,4% dels progenitors del GI i el 31,6% (p=0,029) del GC havien adoptat com a mínim un canvi de conducta per evitar l’exposició al FAT, als 3 mesos de la intervenció. Conclusions: La intervenció breu dirigida als progenitors és efectiva per disminuir-ne l’exposició al fum ambiental del tabac als seus fills a dins de casa i al cotxe. / Background: Second Hand Smoke (SHS) from tobacco is clearly associated to an increased risk or morbidity and mortality. Particularly in the newborn, who has a higher respiratory frequency compared to adults, their lungs are still immature and voluntarily cannot avoid SHS exposition. Exposition to SHS is related to an increased risk to suffer some pediatric illnesses such as syndrome of sudden death, acute respiratory illnesses, worsening of asthma, eacute- chronic illnesses- of the middle ear and average hearing and slow pulmonary growth. However, no Known effective intervention for parents to reduce SHS. Objectives: To value the effect of a brief intervention to avoid SHS exposition in newborns and child aged <18 months. The intervention was undertaken by pediatrics professionals and was addressed to child’s parents on the beliefs and behaviors of the carers of the newborn at three months post intervention. Methods: Community based open, parallel, multicentric and conglomerate based randomized trial. The unit of randomization was the primary care team composed by a pediatrician and a pediatric nurse, both responsible of the same pediatric population (around 2000 children). A total of 937 children aged 18 months or younger with at least one of their parents being a current smoker and who are attended in any of the participating primary care center of Catalunya (North east of Spain) were included in the study. All parents signed the informed consent. The inclusion criteria were babies under 18 months of age whose parents smoke and who give their informed consent to participate in the study. The exclusion criteria was any pathology or parents or baby’s illness, Known addiction in the parents to other substances, parent in smoking cessation process or foreseeable change in residency. Intervention group received a brief intervention based on counseling, cognitive theory and motivational interviewing (5’As intervention: Ask, Advise, Assess, Assist, Arrange), to avoid SHS exposition in the children and control group received habitual care. Three controls were made, although for the present dissertation we included results for basal timeline and at three month post intervention. Basal information on children’s clinical data, past and recent SHS exposition and parent’s sociodemographic data and variables related to tobacco consumption (including dependency and state of change) was gathered with a face to face interview with the parent. At three and six months post intervention we gathered information on SHS exposure. Besides, at the beginning of the study and at six months post intervention children’s hair samples were collected to analyze nicotine levels, but this information is not offered in the present dissertation. Results: Eighty-three primary care centers participated in the study. The study included 937 children (median age: 7.89 months, P25=4,17, P75=12,25). At three months post intervention we observed an improvement on the measures to avoid SHS exposition among the intervention group compared to the control group: inside the house and in the car the percentage of families that undertook improvements were 35.7% 8 (vs. 26.7%, p=0.003) and 58.6% (vs. 50.9%, p=0.018). Globally, 38.4% of the parents of the intervention group (compared to the 31.6% of the control group, p=0.029) has adopted at least one behavior change to avoid SHS exposition at three months post-intervention. Conclusions: The present brief intervention addressed to parents who smoke to avoid SHS in their children is effective to reduce exposition inside the house and the car.

Objetivo: El objetivo principal fue el de conocer cuáles son las necesidades físicas, psicológicas y sociales que presentan las personas que han finalizado tratamientos oncológicos; además de identificar la necesidad de implementar un plan de seguimiento estandarizado para supervivientes de cáncer. Metodología: Esta es una investigación de tipo descriptiva, trasversal y mixta donde que utilizaron métodos de recogida de la información de tipo cualitativos y cuantitativos, según las distintas fases de realización del estudio. La fase 1 sirvió para la revisión de la literatura científica, durante la fase 2 se desarrolló un estudio cualitativo para conocer la calidad de vida y las necesidades no cubiertas de los supervivientes de cáncer en España. Durante la fase 3, se desarrolló el Cuestionario Español para Medir Necesidades no Cubiertas de Supervivientes de Cáncer (CESC) y en la fase 4 se aplicó este cuestionario a una población de más de 2067 supervivientes. En la fase 5, se desarrolló un estudio cualitativo para conocer las necesidades relativas al plan de seguimiento de los supervivientes de esta enfermedad. Resultados: La fase 2 se centró en la calidad de vida y las necesidades no cubiertas de esta población. Se utilizó metodología cualitativa que incluyó la realización de 9 entrevistas semi-estructuradas con expertos y la realización de 4 grupos focales con la participación de afectados y familiares. Entre los resultados principales, se describe una situación de desorientación en relación al itinerario médico a seguir y sensación de abandono. Advirtieron la permanencia de distintos síntomas físicos, además de necesidades a nivel psicológico, relacionadas con el miedo a una posible recaída, angustia y preocupación por el futuro. La fase 3 tuvo por objetivo construir y evaluar el Cuestionario Español para Medir Necesidades no Cubiertas de Supervivientes de Cáncer (CESC). Se elaboró una versión preliminar con la colaboración de expertos y luego fue sometido a una prueba piloto a una muestra de 109 participantes, a fin de analizar sus propiedades psicométricas. En la fase 4, se aplicó el cuestionario CESC a una muestra de 2067 supervivientes de cáncer que participaron en una encuesta online auto-administrada. Entre los resultados principales se observó que más de la mitad de los participantes reportaron más de una necesidad no cubierta en al menos dos dominios. Las tres necesidades no cubiertas más prevalentes fueron: pérdida de energía y cansancio casi todo el día (64 %), el miedo a la recaída (61 %); además de la angustia, la ansiedad y la preocupación por el futuro (53 %). Los participantes consideraron necesario recibir seguimiento en unidades específicas (p < 0,001), tener una copia del Plan de seguimiento del Superviviente, de fácil comprensión (p < 0,007), además de un contacto telefónico disponible para hacer consultas (p < 0,001). Se constató además, que los participantes con niveles bajos de educación presentaron un mayor riesgo de tener necesidades no cubiertas en los tres dominios (psicológico, social y físico), resultando estadísticamente significativo. En la fase 5 se desarrolló un estudio cualitativo para conocer la información que debería incluir un plan de seguimiento y se organizaron 3 grupos focales: uno con profesionales sanitarios, uno con supervivientes de cáncer y otro con familiares. Entre las conclusiones principales de esta fase se constata la importancia de poder recibir un documento escrito que, además de incluir un resumen de los eventos clínicos, incorpore una valoración de la situación psicosocial del afectado. Conclusiones: Es necesario organizar unidades de atención multidisciplinar que garanticen un seguimiento de aspectos clínicos y psicosociales a través de la implementación de un plan de seguimiento estandarizado. / Aim: To understand the physical, emotional and psychosocial needs of cancer survivors and the need or a follow up plan. Methods: This is a descriptive, transversal and mix method (qualitative and quantitative) research developed in different phases. In phase 1, the scientific literature was reviewed, in phase 2, in order to understand needs and quality of life of cancer survivors a qualitative study was undertaken with the organization of 9 semi-strcutures interview to experts and the organization of 4 focus groups with cancer survivors and caregivers. During phase 3, the aim of the study was the construct and evaluation of the Spanish Questionnaire to Assess Unmet Needs of Cancer Survivors (CESC) which was administrated to a sample of 109 cancer survivors. During phase 4, CESC questionnaire was undertaken to a sample of 2067 cancer survivors who participated in an online self-report survey. Finally, in phase 5 a qualitative study was made in order to understand the characteristic of a survivorship follow up plan. To achieved this, 3 focus groups were organized with the participation of professionals, cancer survivors and caregivers. Results: In phase 2 a qualitative study was conducted in order to understand main needs and quality of life of cancer survivors. Methodology included 9 semi-structured interviews with the participation of experts and the organization of 4 focus groups with cancer survivors and caregivers. Among the main results of this phase, participants described feeling disoriented with regard to the medical process and sense of abandonment. They noted physical symptoms that remained after finishing treatments, along with a variety of psychological needs such as, fear of recurrence, anxiety and concern about the future. The aim of phase 3 was to construct and evaluate the Spanish Questionnaire to Assess Unmet Needs of Cancer Survivors (CESC), that after been was successively evaluated by a panel of experts, was tested by a total of 109 cancer survivors. Its implementation could be useful for referring patients to specific care services. The results, although preliminary, are very encouraging and show good psychometric properties. In phase 4, CESC was undertaken to a sample of 2067 cancer survivors who participated in an online self-report survey. Results showed that more than half of participants had reported more than one unmet need in at least two domains. The three most prevalent unmet needs were: energy loss and tiredness most of the day (64%); fear of recurrence (61%); and grief, anxiety and concern regarding the future (53%). Participants considered it necessary to receive follow up care in specific units (p < 0.001), to have an easily understandable copy of the Survivorship Plan (p < 0.007) and a phone contact available to answer their questions (p < 0.001). Findings suggest a need to enhance follow ups and the provision of supportive care services for survivorship along a continuum of care. In order to understand the type of document patients and professionals needs to follow up care, a qualitative study was conducted in Phase 5. To achieve this, 3 focus groups were organized, one with health professionals; one with cancer survivors and the third, with families and caregivers. Among the key findings, there exist consensus among participants regarding the importance of receiving a written document which include a summary of the most important clinical events. Moreover, to incorporate the systematic assessment of psychological and social needs. Personalized recommendations for nutrition and physical exercise must be included in such document. Conclusions: Survivorship units must be organized, with the participation of multidisciplinary team that ensures clinical and psychosocial follow up through the implementation of a survivorship cancer follow up plan.

Hipótesis: La estimación del riesgo de muerte puede optimizar el manejo de los pacientes ambulatorios con insuficiencia cardíaca (IC). Objetivos: Analizar el patrón cronobiológico de muerte de estos pacientes, y desarrollar un modelo predictivo de mortalidad que mejore la estimación del riesgo. Métodos: Se han recogido, de manera prospectiva, variables demográficas, clínicas, bioquímicas y ecocardiográficas de dos cohortes diferentes de pacientes ambulatorios con IC. La “cohorte UIC- Sant Pau”, está formada por 1233 pacientes controlados en la Unidad de Insuficiencia Cardíaca del Hospital de la Santa Creu i Sant Pau, entre los años 2003 y 2008. Y, la “cohorte REDINSCOR”, está constituida por 1293 pacientes del registro REDINSCOR (Red Nacional de Insuficiencia Cardíaca en España). Estudio observacional prospectivo realizado con pacientes de 18 hospitales españoles diferentes, incluidos entre los años 2007 y 2011. A partir de la “cohorte UIC- Sant Pau”, en primer lugar, se realiza un análisis retrospectivo para describir la distribución de muerte de los pacientes según el patrón circadiano, día de la semana, mensual y estacional (cronobiología). Posteriormente, con 653 pacientes de esta misma cohorte (se excluyen los pacientes incluidos simultáneamente en la “cohorte REDINSCOR”), se define la “cohorte UIC Sant Pau reducida” como cohorte de derivación para desarrollar modelos predictivos de muerte a 1 y 4 años. Aplicamos métodos estadísticos tradicionales (regresión de Cox) y métodos basados en la utilización de árboles de clasificación y regresión (Classification and regression tree analysis – CART) como técnica alternativa a los métodos estadísticos tradicionales. Comparamos el rendimiento predictivo de los modelos obtenidos por regresión de Cox y por análisis de CART. Finalmente realizamos dos tipos de validación de los modelos predictivos obtenidos. Una interna, por validación cruzada. Y una validación externa, aplicando los modelos obtenidos a la muestra de validación (“cohorte REDINSCOR”). Resultados: En la cohorte UIC- Sant Pau los pacientes no presentaron picos de mortalidad circadianos ni dependientes del día de la semana. Se observa un marcado pico de mortalidad en invierno. Los modelos predictivos obtenidos por regresión de Cox y análisis de CART muestran una capacidad discriminatoria muy similar. El modelo CART de predicción de muerte a 1 año utiliza sólo tres variables (NT-proBNP, edad y score clínico) para clasificar a los pacientes en grupos de alto, intermedio y bajo riesgo de mortalidad. Tiene una notable precisión predictiva (AUC: 0,72; IC(95%): 0,67-0,77), reproducida cuando el modelo se aplica a la cohorte de validación ( AUC: 0,67; IC(95%): 0,62-0,71) (p= 0,12). El árbol CART de predicción de muerte a 4 años, con las variables NT-proBNP, score clínico y sodio, discrimina a los pacientes en los tres grupos de riesgo. Su precisión predictiva es buena (AUC: 0,70; IC(95%): 0,66-0,74), y también se reproduce al aplicarla a la cohorte de validación (AUC: 0,66; IC(95%): 0,63-0,70) (p= 0,23). Conclusiones: La mortalidad de los pacientes ambulatorios con IC no sigue el patrón circadiano observado en la población general para eventos cardiovasculares. Sí se detecta un ritmo estacional con mayor mortalidad en invierno. Proponemos nuevos modelos pronósticos de muerte a 1 y 4 años, fáciles de implementar e interpretar, que quizás ayuden a progresar en el estudio, manejo y pronóstico de estos pacientes. / Hypothesis: Risk of death estimation can optimize the management of ambulatory patients with heart failure (HF). Objectives: To determine the chronobiology of death in these patients, and develop a mortality predictive model that improves the estimation of risk. Methods: Prospectively, demographic, clinical, biochemical and echocardiographic variables of two ambulatory HF patients cohorts were collected. The UIC-Sant Pau cohort consists of 1233 patients and they were controlled at the Hospital de la Santa Creu i Sant Pau HF unit from 2003 till 2008. The REDINSCOR cohort consists of 1293 patients from the REDINSCOR registry (National network of HF in Spain). Prospective observational study conducted with patients of 18 different Spanish hospitals that were included between 2007 and 2011. Firstly, we did a retrospective analysis to describe the distribution of patients death according to the circadian pattern, day of the week, monthly and seasonal (chronobiology) from the UIC - Sant Pau cohort. Subsequently, with 653 patients of the same cohort (excluding patients included simultaneously in the REDINSCOR cohort), we defined the UIC Sant Pau reduced cohort as a derivation cohort to develop predictive models of death at 1 and 4 years. We applied traditional statistical methods (Cox regression) and methods based on the use of Classification and regression tree analysis (CART) as an alternative to traditional statistical methods. We compared the predictive performance of the models obtained by Cox regression and CART analysis. Finally, we performed two types of validation of the obtained predictive models: an internal cross-validation and an external validation, by applying the models obtained to the sample of validation ("REDINSCOR cohort"). Results: In the UIC Sant Pau cohort patients did not show circadian or dependent on the day of the week mortality peaks. There is a marked mortality peak during the winter season. Predictive models obtained by Cox regression and analysis of CART showed a very similar discriminatory capacity. Prediction of death at 1 year CART’s model uses only three variables (NT-proBNP, age and clinical score) to classify patients into groups of high, intermediate and low risk of mortality. It has remarkable predictive accuracy (AUC: 0.72; 95% CI: 0,67-0,77), reproduced when the model is applied to the validation cohort (AUC: 0.67; 95% CI: 0,62-0,71) (p=0.12). CART's prediction model of death at 4 years, uses the NT-proBNP, clinical score and sodium variables, to discriminate patients in the three risk groups. Its predictive accuracy is good (AUC: 0.70; 95% CI: 0,66-0,74), and is also reproduced when applied to the validation cohort (AUC: 0.66; 95% CI: 0,63-0,70) (p=0.23). Conclusions: The mortality of ambulatory HF patients does not follow the circadian pattern observed in the general population for cardiovascular events, but a seasonal rhythm with higher mortality in winter is detected. We propose new predictive mortality models at 1 and 4 years, easy to implement and interpret. That may help to advance in the study, management, and prognosis of ambulatory patients with heart failure.

Introducció. La investigació va estar emmarcada en el context de les transformacions del treball, especialment del situat a l'acadèmia. El seu focus d'anàlisi va ser la configuració del significat del treball i del sentit de la professió en un col·lectiu de professorat universitari colombià. Es va desenvolupar en dues parts: un marc teòric i un estudi empíric. La primera va consistir en una aproximació general al constructe treball i en una descripció dels canvis en les seves condicions de realització, així com de la seva relació amb el benestar laboral. Sobre aquesta base, va ser analitzada la metamorfosi de la universitat -especialment la irrupció del capitalisme acadèmic-. I també les seves repercussions en el significat del treball i en el sentit de la professió del professorat docent-investigador, entès en termes de professionalisme acadèmic. Mètode. Per a l’estudi empíric, es va aplicar un disseny mixt que va permetre la combinació de diverses tècniques de recollida d'informació: Les dades quantitatives van ser col·lectades mitjançant un qüestionari d'avaluació de condicions de treball, càrrega de treball, benestar laboral, burnout i engagement. Aquest qüestionari va ser aplicat a grups de professors pertanyents a diverses universitats colombianes elegits amb criteris de representativitat teòrica. La informació qualitativa va ser obtinguda a través de dues vies: En primer lloc, mitjançant una sèrie de preguntes obertes incloses en el mateix qüestionari. Entre elles figura la que convida als participants a definir la seva experiència laboral mitjançant 5 paraules clau. Aquesta informació es va complementar amb l'obtinguda mitjançant una entrevista grupal semiestructurada. Per a l'estudi de les dades quantitatives van ser aplicats estadístics descriptius i anàlisi de correspondències. Per al tractament de la informació qualitativa van ser utilitzades tècniques d'anàlisi textual i d'anàlisi de contingut, així com mapes d'associació d'idees. Resultats. Els professionals enquestats van expressar numèricament una moderada satisfacció amb les seves condicions de treball a l'acadèmia. Aquesta visió es va corroborar i matisar amb la informació lèxica i textual. La informació obtinguda del professorat investigat evidencià certes tendències generals a la configuració del significat del treball acadèmic realitzat en condicions laborals flexibles. Entre els elements sortints d'aquesta configuració va destacar cert malestar associat a la percepció de sobrecàrrega de treball, de precarització de les condicions contractuals i de pèrdua de vincle identitari amb l'acadèmia. Això es va reflectir especialment a través de les anàlisis de correspondències i de l'anàlisi de contingut de mapes d'associació d'idees. D'altra banda, l'anàlisi de correspondències va descobrir components positius del sentit de la professió, entre els quals destaquen els relatius a entrega, dedicació i compromís amb les tasques acadèmiques i un notable sentit del professionalisme associat a la vocació docent. Conclusions. Les anàlisis de correspondències van mostrar una configuració del significat del treball i del sentit de la professió acadèmica incloent dues cares contraposades: benestar i malestar. El professorat universitari colombià investigat va pensar el seu treball i la seva professió per una banda en termes de realització personal i d'exercici responsable docent i investigador. I per un altre es va mostrar preocupat per la fragmentació del seu treball i per la pressió a competir, especialment en el camp de la investigació, per exigències de la nova gestió acadèmica. Aquesta tensió entre el sentit de la professió i els imperatius del nou ordre acadèmic va ser viscuda com a font d'estrès psicosocial afectant la pròpia qualitat de vida laboral i també la qualitat del treball realitzat. Aquestes observacions assenyalen uns problemes que cal prevenir i uns desafiaments que cal afrontar. / Introducción. La investigación estuvo enmarcada en el contexto de las transformaciones del trabajo, en especial del situado en la academia. Su foco de análisis fue la configuración del significado del trabajo y del sentido de la profesión en un colectivo de profesorado universitario colombiano. Se desarrolló en dos partes: un marco teórico y un estudio empírico. La primera consistió en una aproximación general al constructo trabajo y en una descripción de los cambios en sus condiciones de realización, así como de su relación con el bienestar laboral. Sobre esta base, fue analizada la metamorfosis de la universidad –en especial la irrupción del capitalismo académico-. Y también sus repercusiones en el significado del trabajo y en el sentido de la profesión del profesorado docente-investigador, entendido en términos de profesionalismo académico. Método. Para estudio empírico, se aplicó un diseño mixto que permitió la combinación de diversas técnicas de recogida de información: Los datos cuantitativos fueron colectados mediante un cuestionario de evaluación de condiciones de trabajo, carga de trabajo, bienestar laboral, burnout y engagement. Este cuestionario fue aplicado a grupos de profesores pertenecientes a diversas universidades colombianas elegidos con criterios de representatividad teórica. La información cualitativa fue obtenida a través de dos vías: En primer lugar, mediante una serie de preguntas abiertas incluidas en el mismo cuestionario. Entre ellas figura la que invita a los participantes a definir su experiencia laboral mediante 5 palabras clave. Esta información se complementó con la obtenida mediante una entrevista grupal semiestructurada. Para el estudio de los datos cuantitativos fueron aplicados estadísticos descriptivos y análisis de correspondencias. Para el tratamiento de la información cualitativa fueron utilizadas técnicas de análisis textual y de análisis de contenido, así como mapas de asociación de ideas. Resultados. Los profesionales encuestados expresaron numéricamente una moderada satisfacción con sus condiciones de trabajo en la academia. Esta visión se corroboró y matizó con la información léxica y textual. La información obtenida del profesorado investigado evidenció ciertas tendencias generales a la configuración del significado del trabajo académico realizado en condiciones laborales flexibles. Entre los elementos salientes de esta configuración destacó cierto malestar asociado a la percepción de sobrecarga de trabajo, de precarización de las condiciones contractuales y de pérdida de vínculo identitario con la academia. Ello se reflejó especialmente a través de los análisis de correspondencias y del análisis de contenido de mapas de asociación de ideas. Por otra parte, el análisis de correspondencias descubrió componentes positivos del sentido de la profesión, entre los que destacan los relativos a entrega, dedicación y compromiso con las tareas académicas y un notable sentido del profesionalismo asociado a la vocación docente. Conclusiones. Los análisis de correspondencias mostraron una configuración del significado del trabajo y del sentido de la profesión académica incluyendo dos caras contrapuestas: bienestar y malestar. El profesorado universitario colombiano investigado pensó su trabajo y su profesión por un lado en términos de realización personal y de ejercicio responsable docente e investigativo. Y por otro se mostró preocupado por la fragmentación de su trabajo y por la presión a competir, especialmente en el campo de la investigación, por exigencias de la nueva gestión académica. Esta tensión entre el sentido de la profesión y los imperativos del nuevo orden académico fue vivida como fuente de estrés psicosocial afectando la propia calidad de vida laboral y también la calidad del trabajo realizado. Estas observaciones señalan unos problemas que hay que prevenir y unos desafíos que cabe afrontar. / Introduction. The research was framed in the context of the transformation of work, especially the located in the academy. Their focus was the analysis of the configuration of the meaning of work and the sense of the profession in a group of Colombian university teachers. It was conducted in two parts: a theoretical framework and an empirical study. The first was to construct a general approach to work and a description of changes in their conditions of implementation, as well as their relationship with the labor wellbeing. On this basis, it was analyzed the metamorphosis of the university, especially the emergence of academic-capitalism, and also their impact on the meaning of work and the sense of the profession of teaching and research, understood in terms of academic professionalism. Method. Quantitative data were collected through a questionnaire assessing working conditions, workload, work wellbeing, burnout and engagement: for empirical study, a mixed design that allowed the combination of different data collection techniques applied. This questionnaire was administered to groups of teachers from various Colombian universities chosen by criterion of theoretical representativeness. Qualitative information was obtained through two ways: First, through a series of open questions in the same questionnaire. These include which invites participants to define their work experience with five keywords. These data were supplemented with information obtained through a semistructured group interview. To study the quantitative data were applied descriptive statistics and correlation analysis. For the treatment of qualitative information they were used techniques of textual analysis and content analysis, as well as maps of association of ideas. Results. The surveyed professionals expressed numerical moderate satisfaction with their working conditions at the academy. This view was corroborated and nuance to the lexical and textual information. The information obtained from teachers investigated showed some general trends to the configuration of the meaning of academic work in flexible working conditions. Among the salient elements of this configuration highlighted some discomfort associated with the perception of work overload, of precarious contractual conditions and loss of identity links with academia. This was especially reflected through correspondence analysis and content analysis of maps of association of ideas. Moreover, correlation analysis found positive components of sense of profession, most notably those relating to commitment, dedication and engagement to academic work and a remarkable sense of professionalism associated with the teaching vocation. Conclusions. The correspondence analysis showed a configuration of the meaning of work and the meaning of the academic profession which included two opposing sides: wellbeing and discomfort. The investigated Colombian university teachers thought their work and profession on the one hand in terms of personal fulfillment and responsible exercise in teaching and research. And on the other they were concerned by the fragmentation of their work and the pressure to compete, especially in the field of research, due to requirements of the new academic management. This tension between the sense of the profession and the imperatives of the new academic order was lived as a source of psychosocial stress affecting one's quality of working life and quality of work performed. These observations indicate a need to prevent problems and challenges which should be addressed.