Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2008 / Inclui bibliografias / INTRODUÇÃO: O aparelho ortodôntico fixo pode produzir ulcerações, abrasão de tecidos moles e desconforto. Objetivou-se analisar as células epiteliais da mucosa bucal adjacente ao aparelho ortodôntico fixo com diferentes tipos de ligaduras. MÉTODOS: Foram / BACKGROUND: The fixed orthodontic appliance can produce ulcerations, soft tissue abrasion and discomfort. The purpose of this study was to analyze the epithelial cells of the oral mucosa adjacent to the fixed orthodontic appliance using different types of

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-08-14T17:52:05Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1240116 bytes, checksum: 2827eceaa6ac52c3f08054f9679e6b8b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-14T17:52:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1240116 bytes, checksum: 2827eceaa6ac52c3f08054f9679e6b8b (MD5) Previous issue date: 2016-08-26 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A família de transportadores mitocondriais (MCF) catalisam transportes específicos de vários substratos, tais como nucleotídeos, aminoácidos e cofatores. Embora alguns dos transportadores tenham sido identificados, muitas destas proteínas ainda não foram completamente caracterizadas. Do mesmo modo, o metabolismo mitocondrial sob estresse ainda não é completamente conhecido. Neste contexto, este trabalho apresenta inicialmente um estudo de um transportador mitocondrial previamente identificado e ainda não caracterizado, designado como AtSFC1, um potencial transportador de succinato/fumarato. Assim, para identificar a especificidade de substrato, a proteína AtSFC1 foi integrada em liposomas e ensaios bioquímicos foram realizados e para investigar a função fisiológica deste transportador, foram utilizadas plantas transgênicas de Arabidospis thaliana para o gene AtSFC1, cuja expressão foi reduzida pela técnica antisenso. Brevemente, a integração funcional do AtSFC1 na membrana citoplasmática de células de Escherichia coli revelou uma especificidade para citrato/isocitrato do tipo antiporte. Além disso, discutimos o potencial papel para AtSFC1 no fornecimento de intermediários para o ciclo ácido dos tricarboxílicos para suportar o crescimento nos tecidos heterotróficos. Na segunda parte desta tese, investigou-se a função de doadores de elétrons alternativos para a cadeia mitocondrial transportadora de elétrons (mCTE) sob deficiência de carbono, bem como após o fornecimento de aminoácidos. Os produtos de degradação de aminoácidos de cadeia ramificada podem doar elétrons para o mCTE através do complexo ETF/ETFQO (electron transfer flavoprotein: flavoprotein ubiquinone oxidoreductase). Este sistema está localizado na mitocôndria e induzido ao nível de transcrição em situações de estresse. Assim, a fim de obter um design detalhado de como essa via interage com outras e como ela se ajusta a diferentes requisitos celulares e metabólicas, foram realizadas abordagens metabólicas e fisiológicas utilizando cultura de células de Arabidopsis mutantes com inserção de T-DNA na região codificante do gene ETFQO. Os resultados são aqui discutidos, confirmam que o sistema ETF/ETFQO é uma via essencial capaz de doar elétrons para o pool de ubiquinona. Além disso, o comportamento dos complexos respiratórios sugere novos pontos de entrada de elétrons, os quais devem ser elucidados. / Mitochondrial carrier family (MCF) proteins catalyze the specific transport of various substrates, such as nucleotides, amino acids and cofactors. Although some of the mitochondrial transporters have been identified, many of these proteins have not yet been completely characterized. Likewise, the proteic machinery and mechanisms involved in the mitochondrial alternative respiration is still not well known. In this context, this work first presents a study of a previously identified but uncharacterized mitochondrial transporter AtSFC1, a potential succinate/fumarate carrier. Hence, to obtain the biochemical role of AtSFC1, we carried out substrate specificity and investigated its physiological function using 35S antisense transgenic lines in Arabidopsis thaliana. Briefly, the functional integration of AtSFC1 in the cytoplasmic membrane of intact Escherichia coli cells reveals a high specificity for a citrate/isocitrate in a counter exchange mode. Additionally, we discussed the potential role for AtSFC1 in the provision of intermediates of tricarboxylic acid cycle to provide carbon and energy to support growth in heterotrophic tissues. In the second part of this thesis, we investigated the function of alternative electron donors to the mitochondrial electron transport chain (mETC) during carbon deprivation as well as after the supply of amino acids. The breakdown products of branched chain amino acids can provide electrons to the mETC via the ETF/ETFQO (electron transfer flavoprotein: flavoprotein ubiquinone oxidoreductase) complex. This system is located in the mitochondria and induced at the level of transcription during stress situations. Thus, in order to obtain a comprehensive picture of how alternative respiration pathway interacts with other pathways and adjust to different cellular and metabolic requirements, we performed metabolic and physiological approaches using Arabidopsis cell culture ETFQO T-DNA insertion mutants. The results discussed here support that the ETF/ETFQO system is an essential pathway able to donate electrons to the ubiquinone pool. In addition, the behavior of the respiratory complexes suggest new electrons entry points, which must be elucidated.

Orientadora: Maria Aparecida Marin Morales / Banca: Alexeia Barufatti Grisolia / Banca: Edson Luis Maistro / Banca: Janira de Franceschi de Angelis / Banca: Jaqueline Bianchi Ambrosio / Resumo: A poluição e a preservação dos recursos hídricos são temas de grande preocupação mundial. As indústrias petroquímicas, cujas atividades têm sido intensas e crescentes nas últimas décadas, utilizam grandes volumes de água e geram grandes quantidades de efluentes. Dependendo da legislação do país e da conscientização da população sobre os prejuízos da poluição, muitas indústrias do petróleo têm também mostrado preocupação com o potencial poluidor de seus efluentes. Algumas indústrias deste setor têm se preocupado com a qualidade do ambiente do seu entorno, procurando minimizar os impactos gerados pela empresa, por meio do tratamento dos seus efluentes, bem como incentivando o monitoramento ambiental da área onde atuam. A maior refinaria de petróleo do Brasil está localizada na cidade de Paulínia/SP, entre dois grandes rios da região (Jaguari e Atibaia). Esta refinaria capta a água do rio Jaguari, a utiliza no processo de refino, trata a água servida e, só posteriormente, lança-a no rio Atibaia. Apesar de estes dois rios serem reconhecidamente impactados, devido à grande urbanização, industrialização e intensa atividade agrícola, eles servem para o abastecimento público das cidades da região e, portanto, devem ser preservados. Os objetivos deste trabalho foram: (i) avaliar a citotoxicidade, genotoxicidade e mutagenicidade de diversas amostras de água coletadas nestes rios por meio de dois organismos-teste (Allium cepa e Oreochromis niloticus); (ii) avaliar estes parâmetros, por meio dos mesmos organismosteste, das amostras de água coletadas em diferentes etapas do tratamento do efluente realizado pela refinaria, durante o período de 2009 a 2013; e (iii) correlacionar a influência dos fatores físicos e químicos sobre a biota endêmica e, consequentemente, na ecotoxicologia do ecossistema. As análises físicas e químicas destas amostras foram realizadas a fim de, traçar o perfil dessas águas... / Abstract: The pollution and the preservation of water resources are a global concern theme. The petrochemical industry, whose activities are high and have been increasing in the past decades, uses large volumes of water and generate big amounts of effluents. Depending on the laws of the country and the population awareness, many oil companies have shown a concern about their wastewater potential to pollute. Some industries of this sector have been worrying about the surrounding environment quality, attempting to minimize the impact by treating the wastewater, as well as stimulating the monitoring of the area where they operate. The largest oil refinery in Brazil is located in Paulínia municipality, São Paulo State, between two major rivers (Jaguari and Atibaia). This company gets water from the Jaguari river, treats the wastewater and discharge it in the Atibaia river. Despite the known impact on both rivers, mainly because of the urbanization, industrialization and the high agricultural activity, they supply the cities of the region and therefore should be preserved. The aims of this study were: (i) evaluate the cytotoxicity, genotoxicity and mutagenicity of several water samples collected from these rivers through two test organisms (Allium cepa e Oreochromis niloticus); (ii) evaluate those parameters, using the same test organisms, on the water samples collected at different stages of wastewater treatment performed by the refinery from 2009 to 2013, and (iii) correlate the influence of the physical, physicochemical and chemical factors on the endemic biota and, consequently, on the ecosystem ecotoxicology. The physicochemical and chemical analyses of these samples were also performed in order to make a profile of those waters in different seasons, compare the results of this analysis to the current Brazilian law and correlate them to the biological responses showed by the exposed organisms. Meteorological data of rainfall and climate were also... / Doutor

Episódios de sibilância secundários a infecções respiratórias virais são comuns nos primeiros anos de vida. Contudo, sua patogênese e relação com o posterior surgimento de asma permanecem ainda pouco esclarecidos. Com o objetivo de analisar a resposta celular e da IL-10 em lactentes com sibilância, foram analisadas amostras de aspirado nasofaríngeo de 71 lactentes. Os pacientes foram classificados em três grupos: primeiro episódio de sibilância (n=36), sibilância recorrente (n=18) e infecção de vias aéreas superiores (n=17). O exame citológico da secreção nasofaríngea demonstrou uma predominância de neutrófilos em todos os grupos. Não foi evidenciada a presença de eosinófilos na secreção nasofaríngea de nenhum paciente, exceto em um caso do grupo de sibilância recorrente, cujo percentual dessas células foi de 1%. Foram encontrados níveis de IL-10 significativamente aumentados no aspirado nasofaríngeo do grupo com primeiro episódio de sibilância, quando comparados ao grupo de infecção de vias aéreas superiores (p=0,017). Não foi encontrada correlação significativa entre os níveis de IL-10 em secreção nasofaríngea e gravidade do episódio de sibilância. Conclui-se que os neutrófilos são as células que predominam na resposta inflamatória em lactentes com sibilância secundária à infecção respiratória viral e que a IL-10 pode ser uma citocina com participação importante na predisposição à doença obstrutiva brônquica do lactente. / Wheezing in infancy during viral respiratory infections is common. However, the pathogenesis and the relationship with the development of asthma later in life are not well understood. The aim of this study was to evaluate the cellular pattern and IL-10 responses in nasopharyngeal secretions in these patients. Seventy one children were recruited and classified in 3 groups: first episode of wheezing (n=36), recurrent wheezing (n=18) and upper respiratory tract infections (n=17). Neutrophils were the predominant cells in cytologic analysis. Except in one recurrent wheezing infant, which accounted for 1% of the total cells, no eosinophils were detected in any sample. The IL-10 concentrations in nasopharyngeal samples from infants with the first episode of wheezing were significantly greater than those in samples obtained from patients with upper respiratory tract infections (p=0,017). There was no correlation between IL-10 levels and severity of the wheezing episodes. We conclude that neutrophils are the predominant cells in the airways of wheezy infants with viral respiratory infections and we suggest that IL-10 may play an important role in the pathogenesis of obstructive airway disease of infancy.

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:34:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-11-14. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:49:02Z : No. of bitstreams: 1 000832960_20181114.pdf: 199800 bytes, checksum: 8f56d1ade1d2b4922b0f911ea4057271 (MD5) Bitstreams deleted on 2018-11-21T11:44:53Z: 000832960_20181114.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2018-11-21T11:45:56Z : No. of bitstreams: 1 000832960.pdf: 1098873 bytes, checksum: 26fed1238f50bf19e60d13ef4e6f5aed (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A poluição e a preservação dos recursos hídricos são temas de grande preocupação mundial. As indústrias petroquímicas, cujas atividades têm sido intensas e crescentes nas últimas décadas, utilizam grandes volumes de água e geram grandes quantidades de efluentes. Dependendo da legislação do país e da conscientização da população sobre os prejuízos da poluição, muitas indústrias do petróleo têm também mostrado preocupação com o potencial poluidor de seus efluentes. Algumas indústrias deste setor têm se preocupado com a qualidade do ambiente do seu entorno, procurando minimizar os impactos gerados pela empresa, por meio do tratamento dos seus efluentes, bem como incentivando o monitoramento ambiental da área onde atuam. A maior refinaria de petróleo do Brasil está localizada na cidade de Paulínia/SP, entre dois grandes rios da região (Jaguari e Atibaia). Esta refinaria capta a água do rio Jaguari, a utiliza no processo de refino, trata a água servida e, só posteriormente, lança-a no rio Atibaia. Apesar de estes dois rios serem reconhecidamente impactados, devido à grande urbanização, industrialização e intensa atividade agrícola, eles servem para o abastecimento público das cidades da região e, portanto, devem ser preservados. Os objetivos deste trabalho foram: (i) avaliar a citotoxicidade, genotoxicidade e mutagenicidade de diversas amostras de água coletadas nestes rios por meio de dois organismos-teste (Allium cepa e Oreochromis niloticus); (ii) avaliar estes parâmetros, por meio dos mesmos organismosteste, das amostras de água coletadas em diferentes etapas do tratamento do efluente realizado pela refinaria, durante o período de 2009 a 2013; e (iii) correlacionar a influência dos fatores físicos e químicos sobre a biota endêmica e, consequentemente, na ecotoxicologia do ecossistema. As análises físicas e químicas destas amostras foram realizadas a fim de, traçar o perfil dessas águas... / The pollution and the preservation of water resources are a global concern theme. The petrochemical industry, whose activities are high and have been increasing in the past decades, uses large volumes of water and generate big amounts of effluents. Depending on the laws of the country and the population awareness, many oil companies have shown a concern about their wastewater potential to pollute. Some industries of this sector have been worrying about the surrounding environment quality, attempting to minimize the impact by treating the wastewater, as well as stimulating the monitoring of the area where they operate. The largest oil refinery in Brazil is located in Paulínia municipality, São Paulo State, between two major rivers (Jaguari and Atibaia). This company gets water from the Jaguari river, treats the wastewater and discharge it in the Atibaia river. Despite the known impact on both rivers, mainly because of the urbanization, industrialization and the high agricultural activity, they supply the cities of the region and therefore should be preserved. The aims of this study were: (i) evaluate the cytotoxicity, genotoxicity and mutagenicity of several water samples collected from these rivers through two test organisms (Allium cepa e Oreochromis niloticus); (ii) evaluate those parameters, using the same test organisms, on the water samples collected at different stages of wastewater treatment performed by the refinery from 2009 to 2013, and (iii) correlate the influence of the physical, physicochemical and chemical factors on the endemic biota and, consequently, on the ecosystem ecotoxicology. The physicochemical and chemical analyses of these samples were also performed in order to make a profile of those waters in different seasons, compare the results of this analysis to the current Brazilian law and correlate them to the biological responses showed by the exposed organisms. Meteorological data of rainfall and climate were also...

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Educação. Programa de Pós-graduação em Educação Científica e Tecnológica / Made available in DSpace on 2015-03-18T19:58:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 221324.pdf: 799377 bytes, checksum: 922f41a6f08d9bc3f507eb971b4c5358 (MD5) Previous issue date: 2005 / O presente trabalho teve como objetivo central investigar o uso e o funcionamento de analogias em textos didáticos de Biologia, enfocando conceitos/fenômenos de citologia. Nossas análises são permeadas por discussões que levam em conta a linguagem em uma perspectiva discursiva, tomando como referencial teórico/metodológico a Análise de Discurso francesa. Apontamos para as condições de produção do livro didático, abordando questões relacionadas à sua linguagem e a relação com a construção de sentidos. Em um segundo momento, focamos nosso olhar sobre as analogias presentes no material de análise. Nossos resultados apontam para diferenças no modo de funcionamento das mesmas ao longo dos textos. Entre as principais evidências, constatamos o uso de analogias mascarado por uma intenção de linguagem científica, sua naturalização nos textos, produzindo um apagamento das mesmas e a tentativa de proximidade com o leitor por meio de uma linguagem mais próxima da comum.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-01-25T10:55:52Z No. of bitstreams: 1 Ana Carolina borella anhe.pdf: 14934696 bytes, checksum: 8837678c96ca7fb7e6fb4a64a9f5b3a8 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-01-25T10:55:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ana Carolina borella anhe.pdf: 14934696 bytes, checksum: 8837678c96ca7fb7e6fb4a64a9f5b3a8 (MD5) Previous issue date: 2011 / Os triatomíneos são vetores do Trypanosoma cruzi e do Trypanosoma rangeli. Apresentam hábito hematófago durante todo o ciclo de vida. Durante o repasto, secretam uma saliva que antagoniza os sistemas hemostático, inflamatório e imunológico do hospedeiro vertebrado. A fim de caracterizar os aspectos morfológicos da glândula salivar, foi desenvolvido um estudo do crescimento desse órgão em triatomíneos de três espécies: Rhodnius prolixus, Panstrongylus megistus e Triatoma infestans. Os insetos foram cedidos pelo insetário do Laboratório de Triatomíneos e Epidemiologia da Doença de Chagas (CPqRR - FIOCRUZ). As glândulas salivares foram dissecadas e processadas para microscopia de luz, de fluorescência, laser confocal e eletrônica de varredura. Os resultados indicaram que a glândula é morfologicamente semelhante durante todo o ciclo de vida do inseto, sendo formada por um par de lobos, cada qual formado por dois (R. prolixus) ou três lóbulos (P. megistus e T. infestans). Durante o ciclo de vida, a glândula quadruplicou o seu tamanho inicial, devido ao crescimento celular, visto que o número de células permaneceu constante. Os lóbulos se mostraram formados por um epitélio simples que delimita o lúmen (onde a saliva é armazenada), revestidos por fibras musculares (cuja contração permite a liberação da saliva), traquéias e nervos. Serotonina apresentou intensa atividade na glândula das três espécies analisadas durante alimentação. Em R. prolixus, atividade dopaminérgia e de tirosina-hidroxilase (enzima da via das catecolaminas) também foram observadas. Dobras de membrana foram visualizadas na região apical das células e associadas ao aumento da área de secreção (tipo merócrina). Além disso, a presença de vesículas de secreção e células inteiras (estas observadas apenas em R. prolixus) no lúmen indicaram secreções do tipo apócrina e holócrina, respectivamente. Bactérias Gram-negativas e Gram-positivas foram observadas dentro das células e do lúmen do lóbulo posterior de T. infestans. / Triatomines are vectors of Trypanosoma cruzi e Trypanosoma rangeli. They are hematophagous during all life cycle. During the bite, they secrete saliva that antagonizes hemostatic, inflammatory and immunological systems imposed by the vertebrate host. In order to understand gland structure, a study of the organ growth was carried out with three important species: Rhodnius prolixus, Panstrongylus megistus e Triatoma infestans. The triatomines were provided by the Insectary of the Insectary of the Laboratory of Triatomines and Epidemiology of Chagas Disease (CPqRR - FIOCRUZ). Glands were dissected and processed routinely for light, fluorescence, laser scanning confocal and scanning electron microscopies. The results indicated that the gland is very similar during all cycle. It is formed by a pair of lobes, each one formed by two (R. prolixus) or three lobules (P. megistus e T. infestans). During the life cycle, salivary gland grew four times. This happened because cell volume increased, since the number of cells was the same during all life. The results showed that lobules are formed by a single epithelium that delimits a large central lumen (where saliva is stored), covered by muscle fibers (gland contraction and saliva releasing), trachea and nerves. Serotonin was considered an important neurotransmitter released during feeding, since it showed intense activity in the gland of the three species. In R. prolixus, activity of dopamine and tyrosine-hydroxylase (indicative of the presence of catecholamines) were also visualized. Membrane infoldings were observed in the apical surface of the cells, increasing the membrane area available for secretion (merocrine type). In addition, the presence of secretion vesicles and entire cells in the lumen (just in R. prolixus) indicated aprocrine and holocrine types of secretion, respectively. Gram-negative and Gram-positive bacteria were observed inside the cells and in the lumen of the posterior lobule of T. infestans.

O presente trabalho analisou as etapas de formação de rudimentos seminais e grãos de pólen de Passiflora elegans e P. haematostigma. As espécies foram analisadas fazendo-se o uso de microscopia fotônica e microscopia eletrônica de varredura e transmissão. O gineceu apresenta um estigma com emergências estigmáticas, estilete sólido e ovário tricarpelar e unilocular. O ovário apresenta inúmeros rudimentos seminais que formam-se a partir de divisões periclinais da camada central. Os rudimentos são crassinucelados e os tegumentos têm origem dérmica. A célula arquesporial divide-se mitoticamente antes da meiose. A meiose resulta em uma tétrade linear, com ginósporo calazal viável. A ginogametogênese é do tipo Poligonum e, durante a diferenciação do ginófito, os estratos parietais do nucelo são parcialmente consumidos e a epiderme nucelar divide-se periclinalmente na porção apical. As antípodas são efêmeras e o ginófito maduro apresenta duas sinérgides com aparelho fibrilar desenvolvido, oosfera e núcleo secundário no pólo micropilar. O rudimento seminal é anátropo, arilado, bitegumentado e com micrópila em “zig-zag”. O androceu é constituído por cinco anteras tetrasporangiadas. Os estratos parietais desenvolvem-se do tipo Dicotiledôneo e as camadas médias são persistentes na antera madura de P. haematostigma. As células do tapete são poliplóides e colapsam liberando os conteúdos no interior do lóculo. A citocinese é do tipo simultânea e as tétrades são tetraédricas na maioria. O pólen é liberado na fase bicelular, apresenta número de colpos variável em P. elegans e seis colporos em P. haematostigma. A esporoderme não apresenta camada basal em P. elegans e é mais espessa do que em P. haematostigma. Plastídios e mitocôndrias são englobados durante a formação da célula generativa e persistem até a fase de pólen maduro. / The present work analyzed the different developmental stages of the ovule and of the pollen grain in Passiflora elegans and P. haematostigma. The species were analyzed using photonic microscopy and scanning and transmission electron microscopy. The gynoecium has a stigma with stigmatic outgrowths, solid style and tricarpelar and unilocular ovary. The ovary has several seminal rudiments that are originated from the periclinal divisions of the central layer. The ovule is crassinucelate and the dermal layer originates the integuments. The arquesporial cell divides mitotically before meiosis. The meiosis results into a linear tetrad and only the chalazal gynospore is viable. The gynogametogenesis is of the Poligonum type, the nucellus parietal layers are partially degraded during the gynophyte differentiation, and nuclear epidermis divides periclinally in the apical portion. The antipodal cells are ephemeral and the mature gynophyte has two synergids with a developed filiform apparatus, egg cell and secondary nuclei in the micropilar pole. The ovule is anatropous, arillate, bitegmic and with zig-zag micropile. The androecium is constituted of five tetrasporangiate anthers. The parietal layers develop like the Dicotiledoneous type and middle layers are persistent in the mature anther of P. haematostigma. The tapetal cells are polyploids and collapse releasing their contents to the locus. The cytokinesis is of the simultaneous type and most of the tetrads are tetrahedral. The pollen is released during the bicellular stage, has a variable number of colpus in P. elegans and six colporus in P. haematostigma. The sporoderm does not have a basal layer in P. elegans and is thicker than in P. haematostigma. Plastids and mitochondria are enclosed during the generative cell formation and persist until the mature pollen stage.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A junção aderente (JA) é um dos principais componentes do complexo juncional apical. Esta juncão é um complexo multiprotéico em que a E-caderina, uma glicoproteína transmembrana, atua como principal mediadora da adesão célula-célula. Sua ancoragem ao citoesqueleto de actina ocorre via proteínas da família das cateninas. Modificações pós-traducionais da E-caderina, como fosforilação e glicosilação, podem modular a estabilidade e organização das JAs. Muitos estudos têm sugerido que no câncer a invasão e a metástase podem estar associadas a arranjos de glicanos na superfície celular. Em câncer colo-retal, o papel de alterações na expressão de glicanos sobre a estabilidade da adesão mediada por Ecaderina ainda não está claro. Neste estudo, investigamos a relação entre estas alterações e a estabilidade das JAs em células de câncer colo-retal. Nós utilizamos duas linhagens celulares com diferentes potenciais metastáticos, Caco-2 and HCT- 116, que constituem dois modelos de JAs: estáveis e instáveis, respectivamente. Ensaios de precipitação de lectinas e immunoblotting demonstraram que em HCT- 116, a linhagem mais invasiva, a E-caderina apresenta uma diminuição de glicanos reconhecidos pelas lectinas HPA e WGA, que reconhecem resíduos de Nacetilgalactosamina e, _-N-acetilhexosaminas e ácido siálico, respectivamente. Concomitantemente, em HCT-116 também foi observado um aumento de glicanos reconhecidos pelas lectinas L-PHA e E-PHA, que reconhecem respectivamente: acetilglicosamina_1,6-ligada formando N-glicanos tri- e tetraantenados e, Nacetilglicosamina bisectante _1,4-ligada formando N-glicanos biantenados. Ensaios de imunofluorescência mostraram que a presença desses glicanos reconhecidos por L-PHA, em HCT-116, é intensa na região de contato célula-célula quando comparada com células Caco-2, em que a marcação foi observada, predominantemente, na região apical. Além disso, a inibição completa da Nglicosilação por tunicamicina ou a inibição da síntese de N-glicanos complexos por swainsonina, aumentou a associação da E-caderina com o citoesquleto de actina em células HCT-116, mas não em Caco-2. Em células HCT-116, a inibição de Nglicosilação por tunicamicina produziu uma diminuição da atividade de ERK1/2 e a formação de adesão célula-célula foi mais evidente. Estes dados sugerem que alterações na expressão e localização subcelular de diferentes glicanos podem ser importantes eventos associados à perda da estabilidade das JAs em câncer coloretal. / The adherent junction (AJ) is one of the main components of the apical junctional complex. It is a multiprotein complex where E-cadherin, a transmembrane glycoprotein, acts as the main mediator of cell-cell adhesion in epithelium. This protein is anchored to the actin cytoskeleton via proteins of the catenin family. Posttranslational modifications of E-cadherin, such as phosphorylation and glycosylation, can modulate the assembly of AJs. Various studies have suggested that invasion and metastasis is associated to glycan patterns on the cell surface of tumor cells. In colorectal cancer the role of altered glycans expression and stability of E-cadherin-mediated adhesion is not clear. In this study we investigated the relation between changes of the glycans expression and AJs stability in colorectal cancer cells. We used two colon adenocarcinoma cell lines with different metastatic potential, Caco-2 and HCT-116, both models of stable and unstable AJs, respectively. Lectin binding assays demonstrated that in HCT-116, the more invasive cell line, E-cadherin presents a decrease of the glycans recognized by HPA and WGA lectins, which recognize N-acetylgalactosamine and, _-N-acetylhexosamines and sialic acid, respectively. Conversely, in HCT-116, there was an increase of glycans recognized by E-PHA and L-PHA lectins, which recognize bisecting _1,4- branched and _1,6-branched N-acetylglucosamine, respectively. Immunofluorescence assays showed a stronger L-PHA binding on cell-cell contact regions of HCT-116 cells when compared with Caco-2. Furthermore, in HCT-116 cells a complete inhibition of N-glycosylation by tunicamycin or inhibition of complex N-glycans synthesis by swainsonine increased the association of E-cadherin with the actin cytoskeleton. Finally, it was possible to observe that the inhibition of N-linked glycosylation by tunicamycin, leaded to a decreasing of ERK1/2 phosphorylation concomitantly with the formation of more intimate cell-cell contacts. These findings suggest that altered expression and subcellular localization of different glycans can be important events associated to loss of AJs stability in colorectal cancer.

Os fibrócitos foram inicialmente identificados pelo seu recrutamento rápido para os tecidos lesionados e por atuar diretamente na resposta imune através do reconhecimento, apresentação antigênica e produção de citocinas e quimiocinas. Segundo Grab (2004) fibrócitos podem participar da resposta imune na leishmaniaose e por isso no presente estudo propomos analisar a resposta celular e apresentação antigênica dos fibrócitos na infecção por L. (L.) amazonensis. Para os experimentos in vivo camundongos C57BL/6 e knockout para o receptor TLR-2 foram inoculados na derme auricular com 105 formas promastigotas de L. (L.) amazonensis e 1, 7, 15 dias após a infecção as regiões de inóculo e os linfonodos foram retirados e processados para citometria de fluxo. Para os experimentos in vitro fibrócitos foram obtidos de mononucleares do sangue periférico de camundongos C57BL/6. Os fibrócitos foram avaliados quanto às suas características morfológicas e fenotípicas, infecção, expressão de MHC-II/B7-1/B7-2 e ativação de linfócitos T CD4+. As análises na região de inóculo mostraram o aumento no percentual de fibrócito na derme de camundongos após 15 dias de infecção tanto em animais C57BL/6 quanto em animais KO TLR-2. Neste sítio, os fibrócitos produziram citocinas e expressaram MHC-II, B7-1 e B7-2 podendo participar da resposta imune. As análises no linfonodo mostraram a existência de um alto percentual de fibrócitos nos animais controle, contudo, após infecção este percentual foi reduzido. Após infecção verificamos que os fibrócitos de animais WT C57BL/6 foram capazes de produzir as citocinas IL-4, IL-10 e IFN- durante o primeiro dia. Entretanto, na ausência de TLR-2 os fibrócitos presentes no linfonodo produziram TNF-α e IFN- que podem estar relacionadas com a ativação celular e aumento da capacidade de apresentação antigênica destas células durante a infecção. No linfonodo verificamos que os fibrócitos podem participar da apresentação antigênica após a infecção por L. (L.) amazonensis. Contudo, nos linfonodos de animais WT C57BL/6 observamos a redução significativa no percentual destas células expressando MHC-II e B7-1, o que pode estar relacionada a presença do TLR-2. Nos ensaios in vitro fibrócitos de camundongos C57BL/6 apresentaram alta capacidade endocítica, eliminaram os parasitas nas primeiras 24 horas de infecção, expressaram MHC-II/B7-1/B7-2 e foram capazes de ativar linfócitos T CD4+. Com isso, nossos resultados sugerem que os fibrócitos podem atuar na resposta celular e na apresentação antigênica durante a infecção por L. (L.) amazonensis, contudo estas funções podem ser moduladas pela participação do TLR-2 e pelo microambiente onde estes se encontram. / Fibrocytes were initially identified by their fast recruitment to the injured tissues and by acting directly on the immune response through recognition, antigen presentation and production of cytokines and chemokines. According to Grab et al., 2004 fibrocytes may participate in the immune response to leishmaniasis and therefore, in this study we propose to examine the cellular response and antigen presentation of fibrocytes in infection by L. (L.) amazonensis. In vivo experiments C57BL/6 and knockout receptor TLR-2 animals were inoculated in the ear dermis with 105 promastigotes of L. (L.) amazonensis and 1,7, 15 days after infection ears and lymph nodes were removed and processed for flow cytometry. For in vitro experiments peripheral blood fibrocytes from C57BL/6 mice were evaluated for their morphological and phenotypic, MHC-II/B7-1/B7-2 expression and ability to activate CD4+ T cells. The analyses in the inoculum region showed significant increase in the percentage of fibrocyte in the C57BL/6 and TLR-2 knockout mice after 15 days of infection. At this site fibrocytes part of the immune response by cytokines production and MHC-II, B7-1 and B7-2 expression. The analyses in the lymph node showed the existence of a high percentage of fibrocytes in the control animals, however, after infection, this percentage was reduced. After infection it was verified that the fibrocytes of C57BL/6 were able to produce cytokines IL-4, IL-10 and IFN- during the first days. However, in the absence of TLR-2 fibrocytes in the lymph produced TNF-α and IFN- that may be related to cell activation and increased antigen presentation capacity of these cells during infection. In the lymph node it was found that fibrocytes may participate in antigen presentation after infection with L. (L.) amazonensis. However, in lymph nodes of mice C57BL/6 it was observed the significant reduction in the percentage of those cells expressing MHC-II, B7-1, which can be related to the presence of the TLR-2. In vitro fibrocytes of C57BL/6 showed high endocytic capacity, eliminating the parasites within the first 24 hours after infection, and expressed MHC-II/B7-1/B7-2 being were able to activate CD4 + T cells. Thus, our results suggest that fibrocytes may act in cellular response and antigen presentation during infection by L. (L.) amazonensis, however these functions can be modulated by the involvement of TLR-2 and the in microenvironment.