Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Curso de Pós-Graduação em Ciências Médicas. / Made available in DSpace on 2012-10-19T08:29:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-09-25T23:46:20Z : No. of bitstreams: 1 181452.pdf: 8745989 bytes, checksum: ac53544010162dec1dd47e61fca15c5d (MD5) / O desenvolvimento de um novo modelo de estudo da resposta inflamatória induzido pela crioterapia, foi descrito . Nitrogênio líquido em jato foi aplicado sobre uma bolsa de ar subcutânea na pele normal do dorso de camundongos da linhagem suíça, para estudar a cinética da migração celular da resposta inflamatória induzida pelo processo; o exsudato inflamatório do interior da bolsa de ar foi retirado 3, 6, 12, 24, 48 e 72 horas depois da crioterapia; as quantidades de células leucocitárias e subpopulações foram medidas usando-se citometria de fluxo. O mesmo procedimento foi feito na orelha, e análise histopatólogica realizada nos mesmos pontos para comparação. A contagem de leucócitos no exsudato foi mais alta entre os pontos de 12 e 24 horas. O infiltrado foi predominantemente granulocítico nas primeiras 12 horas. Um infiltrado mononuclear, inicialmente correspondendo a aproximadamente 20% do total, evoluíu progressivamente, atingindo valores em torno de 50% na 48a e 72a hora após a crioterapia. Achados semelhantes foram observados no estudo anatomopatológico das amostras a partir das orelhas dos camundongos. Concluiu-se, portanto, que o infiltrado celular induzido pelo modelo da crioterapia, utilizado no presente trabalho, foi predominantemente granulocítico e induz uma inflamação aguda persistente por 72 horas.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-12-16Bitstream added on 2014-06-13T20:44:54Z : No. of bitstreams: 1 tchamo_cclm_dr_jabo.pdf: 1695408 bytes, checksum: 35b843331f0d7d9684e135a19a514e9a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Tendo em conta a importância do sangue do cordão umbilical (SCU) como fonte de células-tronco objetivou-se este estudo, visando quantificar células CD117+, CD45+ e subpopulações linfocitárias; e determinar os valores eritroleucométricos bem como a contagem de reticulócitos no sangue do cordão umbilical (SCU) e sangue periférico de suínos imediatamente ao nascimento (SPI) e quarenta e oito horas depois (SP48), utilizando-se de 48 amostras de SCU e periférico de neonatos. Comparando-se os grupos, a um nível de significância de 5% na quantificação de células CD117+ a marcação foi muito baixa presumivelmente porque o CD117 marca células em estágio de diferenciação. Pelo que se recomenda que mais estudos sejam feitos, combinando-o com o marcador da verdadeira célula- tronco. As contagens de células CD5+ , CD4+ e CD8+ por citometria de fluxo, no SCU e SPI foram inferiores àquelas reportadas para o sangue periférico de adultos, indicando um componente imunológico imaturo. A proporção CD4:CD8, tanto para o SCU quanto para SPI, assim como SP48, demonstrou dominância das células TCD4+. Relativamente ao eritrograma, houve diferença significativa entre as variáveis nos grupos estudados, excetuando-se o volume corpuscular médio (VCM), hemoglobina corpuscular média (HCM) e concentração da hemoglobina corpuscular média (CHCM) que não variaram entre os grupos, SCU e SPI; a contagem de reticulócitos no grupo SP48 foi superior ao dos grupos SCU e SPI. No leucograma, todas as variáveis mostraram diferença significativa, excetuando-se a contagem de monócitos, que não variou entre os grupos, SCU e SPI. Já nos grupos SPI e SP48 foi observada diferença significativa na contagem de neutrófilos segmentados e monócitos, enquanto o total de leucócitos, neutrófilos bastonetes e linfócitos não diferiram / Given the importance of Umbilical cord blood (UCB) as a source of stem cell, this study was aimed to quantify CD117+, CD45+ and lymphocyte subsets and determine the eritroleucometric values and the recticulocyte count in umbilical cord blood (UCB) and peripheral blood of piglets immediately at birth (PBI) and forty-eight hours late (PB48), using 48 samples of umbilical cord and peripheral blood of neonates. Comparing the groups at a significance level of 5 %, in the quantification of CD117+ cells, marking was very low presumably because CD117 mark cells in differentiation stage. It is recommended that more studies be done combining it with the marker of true stem cell marker. The lymphocyte subsets counts CD5+, CD4+ even CD8+ of UCB and PBI performed by flow citometry, were lower than those reported for peripheral blood of adult pigs, indicating an immature immunologic component. The ratio CD4:CD8 obtained in this trial, both UCB, PBI and PB48 showed dominance of CD4+ T cells lymphocytes. Regarding the erythrogram there was a significant difference between variables of groups with exception for mean corpuscular volume (MCV) mean corpuscular hemoglobin (MHC) and mean corpuscular hemoglobin concentration(MCHC) that did not vary between UCB and PBI groups; the reticulocyte count in PB48 group was higher than that of UCB and PBI groups. In the WBC, all variables showed significant differences, except for the number of monocytes, which vary between UCB and PBI groups. In PBI and PB48 groups there was no significant difference in the mature neutrophils and monocyte count, while the total leukocyte, band neutrophils and lymphocytes did not differ

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-04-20Bitstream added on 2014-06-13T19:45:09Z : No. of bitstreams: 1 rodello_l_dr_botfmvz.pdf: 811998 bytes, checksum: 326e99e01eaabf8835bc27b587a40a8c (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Objetivou-se estudar as implicações da redução na proporção de gema de ovo no meio diluidor Glicina-Gema-Leite e testar a prevenção do estresse oxidativo utilizando os antioxidantes Trolox®, Catalase ou Glutationa no processo de criopreservação de sêmen ovino. No Experimento 1, determinou-se o efeito da redução na proporção da gema de ovo no meio diluidor Glicina-Gema-Leite, utilizando-se quatro ejaculados de cada carneiro das raças Santa Inês (n=4) e Dorper (n=4), colhidos por meio de vagina artificial. Após as avaliações macro e microscópicas, o sêmen foi mantido sob temperatura de 32oC e diluído para atingir-se concentração de 400 x 106 espermatozóides/mL no meio Glicina- Gema-Leite contendo 20% (GGL20), 15% (GGL15), 10% (GGL10) ou 5% (GGL5) (v/v) de gema de ovo. O sêmen foi envasado em palhetas de 0,25 mL, e em seguida, as amostras foram refrigeradas e congeladas em sistema com controle automatizado. A descongelação foi feita em banho-maria à 40oC/20 segundos. A cinética espermática foi determinada em sistema computadorizado de análise de sêmen (CASA) e a integridade total das membranas espermáticas pela combinação dos fluorocromos diacetato de carboxifluoresceína (DIC) e iodeto de propídio (IP). Na análise pósdescongelação, as motilidades total (MT) e progressiva (MP) nos tratamentos GGL10 e GGL5 foram maiores (P<0,05) do que no GGL20. A VAP foi menor em GGL20 dos demais meios (P<0,05) e a VSL foi maior em GGL5 do que em GGL20 (P<0,01). A VCL e o ALH apresentaram maiores valores no GGL10 e GGL5 do que no GGL15 e GGL20 (P<0,01). O BCF no GGL5 foi maior (P<0,05) do que nos demais diluidores e o sêmen criopreservado nos meios GGL10 e GGL5 apresentaram maior percentual de espermatozóides com membranas íntegras do que no meio GGL20 (P<0,05). Frente aos resultados obtidos, o GGL5 foi utilizado como meio base no experimento seguinte. No Experimento 2,... / The objective of the study was the implications of the reduction in the proportion of egg yolk in the extender Glycine-Yolk-Milk and to test the prevention of oxidative stress using antioxidants Trolox, Catalase or glutathione in the process of cryopreservation of ovine semen. In Experiment 1, we determined the effect of reduction in the proportion of egg yolk in the extender Glycine-yolk-milk, using four ejaculates from each ovine of Santa Inês breed (n=4) and Doper breed (n=4), collected using artificial vagina. After the assessment, macro and microscopic, semen was kept at a temperature of 32oC and diluted to achieve concentrations up to 400 x 106 sperm / mL in the extender Glycine-yolk-milk containing 20% (GGL20), 15% (GGL15), 10% (GGL10) ou 5% (GGL5) (v/v) of egg yolk. The semen was stored in straws of 0.25 mL, and then, samples were refrigerated and frozen in system with automated control. Thawing was done in a water bath to 40oC/20 seconds. The kinetics was determined in sperm computerized semen analysis (CASA) and the overall integrity of sperm membranes by the combination of fluorochromes carboxyfluorescein diacetate (DIC) and propidium iodide (IP). In analyzing post-thawing, motilities total (MT) and progressive (MP) in the treatments GGL10 and GGL5 were higher (P <0.05) than in GGL20. The VAP was lower in GGL20 of other means (P <0.05) and VSL was higher in GGL20 than in GGL20 (P <0.01). The VCL and ALH showed higher values in GGL10 and GGL5 than in GGL15 and GGL20 (P <0.01). The BCF in GGL5 was higher (P <0.05) than in the other extenders and cryopreserved semen in the environments GGL10 and GGL5 showed higher percentages of spermatozoon with intact membranes than in the extender GGL20 (P <0.05). Given our results, the GGL5 was used as a base extender in the experiment following. In Experiment 2, ...(Complete abstract click electronic access below)

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Botânica, Programa de Pós-Graduação em Botânica, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2017-04-17T16:24:41Z No. of bitstreams: 1 2016_AndréRodolfodeOliveiraRibeiro.pdf: 6580504 bytes, checksum: 0c7709089799b4ed79474e6fb445f5ee (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-04-17T20:15:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_AndréRodolfodeOliveiraRibeiro.pdf: 6580504 bytes, checksum: 0c7709089799b4ed79474e6fb445f5ee (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-17T20:15:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_AndréRodolfodeOliveiraRibeiro.pdf: 6580504 bytes, checksum: 0c7709089799b4ed79474e6fb445f5ee (MD5) / Em Poaceae, a subfamília Panicoideae possui cerca de 3500 espécies e é a mais diversa nas regiões tropicais. Os números cromossômicos básicos x = 5, x = 9 e x = 10 e genomas pequenos (2C/2n = 0,1 pg) predominam entre as espécies de Panicoideae. Os diploides têm meiose estável e alta viabilidade polínica, enquanto os poliploides apresentam viabilididade polínica variável e diretamente relacionada ao índice meiótico. Mesosetum Steud. possui 25 espécies e é o único gênero neotropical de Panicoideae com registro do número cromossômico 2n = 8 (x = 4), cuja origem a partir de x = 10, também encontrado no gênero, ainda não foi elucidada. O objetivo da presente tese de doutorado foi obter dados sobre número e morfologia cromossômica, tamanho do genoma e fertilidade do pólen e relacioná-los à árvore filogenética molecular de Mesosetum. Os dados sobre número cromossômico e tamanho do genoma foram obtidos em 20 acessos e 13 espécies de Paspaleae, sendo uma espécie de Arthropogon Nees, 10 espécies de Mesosetum, uma espécie de Spheneria Kuhlm. e uma espécie de Tatianyx Zuloaga & Soderstr. O número cromossômico 2n = 26 (x = 13) observado em M. exaratum (Trin.) Chase é aqui registrado pela primeira vez na subfamília Panicoideae. Em Mesosetum, é possível reconhecer pelo menos três linhagens relacionadas a distintos números cromossômicos. O clado com número cromossômico básico x = 10 é provavelmente o mais basal em Mesosetum e, a partir do qual, se derivaram o clado com x = 4 e a linhagem monoespecífica com x = 13. O clado com x = 4 provavelmente se derivou por fusão ou rearranjos cromossômicos. Os cromossomos das espécies com 2n = 8, 2n = 16 e 2n = 24 mostraram sinais de DNAr 5S e 45S que confirmaram a ocorrência de poliploidia no clado x = 4. Os dados de citometria de fluxo sugerem que o clado com x = 10 manteve genoma pequeno (2C/2n = 0,04 a 0,1 pg) com cromossomos menores (1,8-4,0 μm). No clado com x = 4 e na linhagem monoespecífica com x = 13 provavelmente ocorreu uma expansão do tamanho do genoma após os eventos de disploidia descendente. Foi verificada uma redução do genoma dos poliploides naturais, sugerindo que já houve algum grau de diploidização após o evento de poliploidização. Esta diploidização também suporta a estabilidade meiótica e alta fertilidade do pólen observadas na maioria dos poliploides de Mesosetum. / In Poaceae, the subfamily Panicoideae contains approximately 3500 species and is the most diverse grass subfamily of tropical regions. The basic chromosome numbers of x = 5, x = 9, x = 10, and small genomes (2C/2n = 0.1 pg) are predominant among Panicoideae species. Diploids have stable meiosis and high pollen viability, while polyploids have variable pollen viability, which is directly related to the meiotic index. Mesosetum Steud. is composed of 25 species and is the only neotropical genus of Panicoideae with a registered chromosome number of 2n = 8 (x = 4). The origin of x = 4 basic chromosome number from x = 10, which also found within the genus, is still unknown. The aim of the present doctoral thesis was to obtain data about chromosome number and morphology, genome size, pollen fertility, and to relate to the molecular phylogenetic tree of Mesosetum. The data concerning chromosome number and genome size were obtained from 20 accessions and 13 species, including one species of Arthropogon Nees, 10 species of Mesosetum, one species of Spheneria Kuhlm., and one species of Tatianyx Zuloaga & Soderstr. The chromosome number of 2n = 26 (x = 13), found in M. exaratum (Trin.) Chase, is registered here for the first time for the subfamily Panicoideae. In Mesosetum, at least three lineages can be possible related through distinct basic chromosome numbers. The clade with the basic chromosome number of x = 10 is probably the most basal in Mesosetum, from which x = 4 clade and x = 13 monospecific lineage were derived. The x = 4 clade was probably derived via fusion or chromosomal rearrangements. The chromosomes of the species with 2n = 8, 16, and 24 showed signals of 5S and 45S rDNA that confirmed the occurrence of polyploidy in the x = 4 clade. The flow cytometry data suggest that a small genome size (2C/2n = 0.04 a 0.1 pg) and the smallest chromosomes of the genus (1.8-4.0 μm) were conserved in the x = 10 clade. In the x = 4 clade and x = 13 lineage, a genome size expansion probably occurred after events of descending disploidy. A decrease in the genome size was verified in natural polyploids, suggesting that some level of diploidization occurred after the polyploidization event. This diploidization also supports the meiotic stability and high pollen fertility observed in the majority of Mesosetum polyploids.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Botânica, 2013. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-01-05T15:26:42Z No. of bitstreams: 1 2013_TatianeRosaMonteiro.pdf: 1181969 bytes, checksum: ddebb94d5e4df135650c9219569bfb53 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2016-01-06T14:44:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_TatianeRosaMonteiro.pdf: 1181969 bytes, checksum: ddebb94d5e4df135650c9219569bfb53 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-06T14:44:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_TatianeRosaMonteiro.pdf: 1181969 bytes, checksum: ddebb94d5e4df135650c9219569bfb53 (MD5) / O presente trabalho objetivou avaliar aspectos morfo-fisiológicos envolvidos na embriogênese somática e regeneração de plantas de dendezeiro (Elaeis guineensis Jacq.) a partir do uso de meios de consistência líquida e de cultivos em suspensão. Embriões zigóticos obtidos das variedades C 2501, C 2528 e C 7201 foram induzidos em meio de MS com 450 μM de Picloram, 30 g.L-1 de sacarose, 0,5 g.L-1 de glutamina, 2,5 g.L-1 de carvão ativado e 2,5 g.L-1 de Phytagel, sendo subcultivados ou não a cada 30 dias. Foi avaliado o efeito da passagem de calos embriogênicos por meios de cultura líquido e o estabelecimento de cultivos em suspensão sobre o processo de embriogênese somática e regeneração de plantas, porções embriogênicas foram transferidas para dois meios liquido: MeA (MS com 5 μM de Picloram) e MeB (MS com 5 μM de 2,4-D). Nessa fase foi possível separar dois tipos de propágulos: aqueles que não desagregaram completamente e aqueles considerados estabelecidos em suspensão. Num primeiro experimento, porções embriogênicas não desagregadas em meio líquido sob agitação (calos embriogênicos) foram transferidas para três meios de diferenciação: M1: ½ MS; M2: MS com 40 μM de Picloram e; M3: MS com 12,3 μM de 2iP e 0,6 μM de ANA. A partir dos embriões somáticos diferenciados, a regeneração de plantas foi realizada em meio de MS desprovido de reguladores de crescimento. Posteriormente, as plantas foram individualizadas e transferidas para meio de MS dupla-fase com 57 μM de AIB para induzir a formação de raízes, antes de serem aclimatizadas e transferidas para casa de vegetação. As plantas foram analisadas por citometria de fluxo para verificar possíveis alterações no conteúdo genômico. Os resultados revelaram que a condição de subcultivar a cada 30 dias foi determinante para estimular a formação de calos embriogênicos (20,8%). Verificou-se que a passagem de calos embriogênicos por meio líquido na presença de 2,4-D (MeB) proporcionou aumentos significativos na percentagem de calos com embriões somáticos diferenciados. Entre os meios testados, o M1 foi o que proporcionou os melhores resultados, com até 58,2% dos calos com embriões somáticos diferenciados. A variedade C 2528 no meio M3 apresentou os maiores índices de calos com embriões somáticos (80,2%), embora tenha sido no meio M1 que essa variedade apresentou o maior número de embriões tipo torpedo por calo (8,3). Embriões somáticos oriundos dos meios M1 e M3 também foram os que apresentaram as maiores frequências de regeneração, com 29,5% e 31,7% respectivamente. Na fase de aclimatização a percentagem de sobrevivência das mudas foi de 95,2%, ao final de 90 dias. Nas plantas regeneradas, a citometria de fluxo não evidenciou diferenças significativas no conteúdo médio de DNA nuclear quando comparadas com as plantas controle, tendo sido observado valores na ordem de 2C = 3,89±0,16 pg. Num segundo experimento, calos embriogênicos da variedade C 2528, estabelecidos e multiplicados em meio líquido MeB por um período de 210 dias, sob forma de agregados celulares, foram utilizados para diferenciação de embriões somáticos. Para tanto, os agregados foram transferidos para meio líquido de MS com 0,1 mg.L-1 de 2,4-D onde permaneceram por 0, 30 e 60 dias. Após os respectivos tempos, os agregados foram plaqueados em meio semissólido com a mesma constituição do meio anterior e acondicionados na ausência e presença de luz por até 90 dias. Para avaliar a influência do tamanho dos agregados na formação de embriões somáticos e regeneração de plantas durante o plaqueamento, os agregados foram divididos em duas classes: classe 1 e classe 2 (2 mm e 4 mm, respectivamente). Após 120 dias em meio semissólido, embriões somáticos foram transferidos para meio de MS para regeneração de plantas. Neste experimento, análises anatômicas foram realizadas para caracterizar e descrever as etapas envolvidas na diferenciação dos agregados celulares. Verificou-se que acima de 90% de ambas as classes de propágulos produzidos progrediram após serem plaqueados em meio semissólido. Quanto a taxa de embriões somáticos diferenciados, não foram observadas diferenças significativas entre as classes 1 e classe 2 de agregados (18,8% e 13,1%, respectivamente). No entanto, quando se avaliou agregados da classe 1, após 30 dias de diferenciação em meio sob suspensão, verificou-se que até 33,3% dos explantes apresentaram diferenciação de embriões somáticos, com a maior quantidade de embriões somáticos no estádio torpedo (8,3 por explante). ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The aim of this study is to evaluate morpho-physiological aspects involved in somatic embryogenesis and plant regeneration of the African oil palm (Elaeis guineensis Jacq.) based on the use of liquid consistency media and cultures in suspension. Zygotic embryos of the varieties C 2501, C 2528 and C 7201 were induced in an MS medium with 450 μM Picloram, 30 g.L-1 sucrose, 0.5 g.L-1 glutamine, 2.5 g.L-1 activated charcoal and 2.5 g.L-1 Phytagel, being subcultured (or not) every 30 days. The effect of the passage of embryogenic calluses through a liquid culture media and the establishment of cultures in suspension on the processes of somatic embryogenesis and plant regeneration was evaluated. The embryogenic portions were transferred to two liquid media: MeA (MS with 5 μM Picloram) and MeB (MS with 5 μ2,4-D). In this stage it was possible to separate two types of propagules: those that did not completely disaggregate and those considered as established in suspension. In the first experiment, embryogenic portions that were not disaggregated in a liquid medium under agitation (embryogenic callus) were transferred to three differentiation media: M1 - ½ MS; M2 - MS with 40 μM Picloram and; M3 - MS with 12.3 μM 2iP and 0.6 μM NAA. Based on the differentiated somatic embryos, plant regeneration was performed in an MS medium devoid of growth regulators. Subsequently, the plants were individualized and transferred to a double-phase MS medium with 57 μM IBA to induce rooting, before being acclimatized and transferred to greenhouse. The plants were analyzed by flow cytometry to verify changes in genomic content. The results showed that the condition of subculturing every 30 days was a determining factor to stimulate the formation of embryogenic callus (20.8%). It was found that the passage of embryogenic calluses through a liquid medium in the presence of 2,4-D (MeB) provided significant increases in the percentage of calluses with differentiated somatic embryos. Among the media tested, M1 was the one that provided the best results, with up to 58.2% of the calluses with differentiated somatic embryos. The C 2528 variety in M3 medium showed the highest rates of calluses with somatic embryos (80.2%), although it was in the M1 medium that this variety exhibited the highest number of embryos per torpedo-shaped callus (8.3). Somatic embryos originating from M1 and M3 media were also the ones that showed the highest frequency of regeneration, with 29.5% and 31.7% respectively. During the acclimatization phase, the seedling survival percentage was 95.2% at the end of 90 days. In regenerated plants, flow cytometry showed no significant differences in the average nuclear DNA content when compared with control plants; values in the range of 2C = 3.89±0.16 pg were observed. In the second experiment, calluses of the C 2528 variety, established and multiplied in MeB liquid medium for a period of 210 days, in the form of cell aggregates, were used for the differentiation of somatic embryos. For both, the aggregates were transferred to liquid MS medium with 0.1 mg.L-1 2,4-D, where they remained for 0, 30 and 60 days. After the respective periods, the aggregates were plated in a semi-solid medium with the same constitution as the previous medium and placed in the absence and presence of light for up to 90 days. To assess the influence of the size of the aggregates on the formation of somatic embryos and regeneration of plants during plating, the aggregates were divided into two classes: Class 1 and Class 2 (2 mm and 4 mm, respectively). After 120 days in a semi-solid medium, the somatic embryos were transferred to an MS medium for plant regeneration. In this experiment, anatomical analyses were performed to characterize and describe the steps involved in the differentiation of the cell aggregates. It was found that over 90% of both classes of propagules produced progressed after being plated in a semi-solid medium. Regarding the rate of differentiated somatic embryos, no significant differences were observed between class 1 and class 2 of aggregates (18.8% and 13.1%, respectively). However, when the class 1 aggregates were evaluated, after 30 days of differentiation in a medium under suspension, it was found that 33.3% of the explants displayed differentiation of somatic embryos, with the highest number of embryos in the torpedo stage (8.3 per explant).

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-17Bitstream added on 2014-06-13T20:17:37Z : No. of bitstreams: 1 costa_ccmr_me_botfmvz.pdf: 292935 bytes, checksum: 632cc3655cad59e9e602b2040d94e522 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O concentrado de plaquetas é um hemocomponente importante para a transfusão de grandes quantidades de plaquetas. Durante a estocagem, as plaquetas sofrem lesões que devem ser analisadas por meio de testes laboratoriais. O objetivo do presente estudo foi avaliar as qualidades físicas, químicas, microbiológicas, estruturais e funcionais plaquetárias em concentrados de plaquetas caninos estocados durante 5 e 7 dias. Foram realizadas contagem de plaquetas, leucócitos e hemácias por unidade, mensuração do pH, glicose, avaliação do swirling, análise microbiológica, avaliação da agregação plaquetária e da expressão da GPIIbIIIa pela citometria de fluxo. As análises foram realizadas logo após a centrifugação, e no quinto (grupo I) e sétimo (grupo II) dias de estocagem dos concentrados de plaquetas obtidos de 22 cães hígidos. Todas as bolsas foram negativas para o isolamento de microorganismos. Houve diminuição significativa nas contagens de plaquetas e leucócitos, pH, glicose e swirling nos dois grupos. Ocorreu diminuição na resposta agregatória nos dois grupos, com o uso isolado e associado de ADP e epinefrina. Os anticorpos CD41 e CD61 apresentaram alta porcentagem de fluorescência em todos os momentos, e não houve variação significativa na média de intensidade de fluorescência das plaquetas durante a estocagem. Conclui-se que, mantida a esterilidade microbiológica, os concentrados de plaquetas caninas podem ser estocados por até 7 dias, no entanto, há uma maior perda da viabilidade plaquetária e qualidade dos concentrados quando comparados ao grupo armazenado durante 5 dias. Houve perda funcional das plaquetas durante a estocagem pela redução da agregação plaquetária. Os anticorpos CD41 e CD61 podem ser utilizados na avaliação da GPIIbIIIa de plaquetas caninas estocadas durante os períodos avaliados / Platelet concentrate is an important blood component for platelet transfusion. During storage, platelets undergo lesions that should be evaluated by laboratory assays. The aim of this study was to evaluate the physical, chemical, microbiological, structural and functional platelet qualities in canine platelet concentrate stored for 5 and 7 days. Platelet, leukocytes and erythrocytes concentrations per unit, pH and glucose measurements, swirling observation, microbiological analysis, assessment of platelet agregation and expression of GPIIbIIIa by flow cytometry were performed. Analyses were performed after centrifugation, and the fifth (group I) and seventh (group II) days of platelet concentrate storage obtained from 22 healthy dogs. All platelet concentrate bags were negative for microorganisms isolation. Platelet and leukocytes concentrations, pH, glucose, and swirling decreased significantly during storage, in both groups. A significant reduction in aggregatory response was detected in both groups, in the presence of ADP, epinephrine or both simultaneously. CD41 and CD61 antibodies showed high fluorescence at all times, and no significant variation in mean fluorescence intensity during storage. In conclusion, canine platelet concentrates should be stored for 5 days, however, can be stored for up to 7 days with greater loss of viability and quality of bags during this period. There was functional loss observed by the reduction of platelet aggregation during storage in both groups. CD41 and CD61 antibodies can be used to assess GPIIbIIIa in canine platelets stored during the evaluated period

Resumo: A criacao de aves para consumo ou para a producao de ovos passou por um longo processo de aperfeicoamento para atingir os niveis atuais de produtividade, como melhoras na nutricao e melhoramento genetico dos animais para os parametros zootecnicos. A intensa selecao de indices ligados a produtividade a que esses animais foram submetidos atingiu inversamente parametros associados com a capacidade metabolica (fitness) . como o sistema imunologico. O tenue balanco entre repouso/ativacao imune e a capacidade produtiva tornam relevante avaliar como o sistema imune de aves de producao se comporta. Os objetivos deste trabalho foram estabelecer como os parametros imunes . medidos pela quantidade de celulas circulantes atraves de citometria de fluxo para determinados marcadores . comportam-se diante de diferentes situacoes, desde higiene controlada a desafios experimentais. A definicao de parametros que sejam consistentemente ligados a alguma alteracao, ou a uma situacao especifica de desafio, por exemplo, pode ser util para que a metodologia possa servir como um metodo analitico para criacoes comerciais ou industrias envolvidas na avicultura. Foi evidenciado que diversas subpopulacoes de linfocitos apresentam flutuacoes, em porcentagem de celulas circulantes, com o passar do tempo (como CD4 e CD8) . em geral as mudancas observadas indicam uma maturacao imunologica. Contudo, as aves SPF demonstram um estado de menor uso e ativacao imunitaria do que aves mantidas em condicoes sanitarias comuns. A avaliacao por citometria do sistema imune de aves submetidas a diferentes infeccoes indica que alguns parametros sao consistentemente alterados sob os varios estimulos, e tem grande valor na compreensao da evolucao da infeccao. Entre esses parametros, destacam-se, por exemplo, as celulas CD8+CD28- e as portadoras de TCRVƒÀ1 e seus subgrupos (CD4+ ou CD8+). A importancia da avaliacao dos parametros imunes por citometria pode ser exemplificado atraves da sua associacao com a capacidade zootecnica de frangos de corte. Os parametros CD4+TCRVƒÀ1+ e CD4:CD8 em conjuncao foram negativamente correlacionados com o ganho de peso dos animais. A resposta imune medida por citometria pode ser associada a uma ativacao generalizada do sistema imune, conforme medido por outros parametros, como a atividade do sistema complemento.

Made available in DSpace on 2015-05-29T12:50:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000469532-Texto+Completo-0.pdf: 772339 bytes, checksum: b1ca6d60639abd0248f0ea693f8f7d1f (MD5) Previous issue date: 2015 / Introduction : There has been a continuous search for safe tests that can predict antibody-mediated rejection in organ transplants, and the positive complement dependent cytotoxic crossmatch, developed in the 1960’s, was until recently considered the gold standard and the main test for prediction of rejection. The new methods for assessing humoral immunity, notably flow cytometric crossmatching and the Luminex® technology significantly increased the sensitivity of these assessments, but also the complexity in the interpretation of these results, as well as in the correlation of different methodologies. Despite the sensitivity of these methods, not any donor-specific antibody detected by solid phase assay results in positive or negative crossmatch. Information obtained with the specificities (such as fluorescence intensity) of anti-HLA antibodies may define the immunological risk for the patient, assisting in the selection of the ideal donor, as well as in the immunosuppressive regimen, for prophylactic and therapeutic uses.Objectives : The present study aimed to establish a cut-off point at the fluorescence intensity of antibodies detected by the panel Single Antigen Beads of class I and II that correlates to positive flow cytometric crossmatching (FCXM). It also aimed to assess whether there are differences between the use of DSAs with higher MFI alone and the sum of all the DSAs of a given patient.Methodology : A cross-sectional study of two databases of results of panels (Luminex®) and flow cytometric crossmatching of patients on a waiting list for kidney transplantation registered at the Laboratório de Imunologia de Transplantes da Santa Casa de Misericórdia, in Porto Alegre. Database 1 was composed of 1,316 crossmatches against deceased donors and panels of anti-HLA antibodies for loci A, B and DRB1 performed in 2010. Database 2 was composed of 2,288 crossmatches against deceased donors and panels of anti-HLA antibodies for loci C and DQB1 performed between July 2013 and July 2014. As an inclusion criterion for both databases, only samples with results available in the Panel on the same date of the serum tested in flow cytometry crossmatches were used resulting in 834 samples in database 1. Besides, for database 2 only samples with donor-specific antibody (DSA) for loci C and or DQB1, resulting in 348 crossmatches.Results and Conclusions : we demonstrated that 97. 6% of the patients with DSAs anti-HLA- ABDRB1 with MFI ≥ 5000 resulted in positive FCXM. These were the optimal MFI cut-off values for donor selection when we assessed sensitivity and specificity for correlation with positive flow cytometric crossmatching. For DSAs HLA-DQB1, fluorescence intensities above 15,000 MFI offer high specificity (97. 8%). Anti-HLA-C sensitization is less frequent (n=40). Only 5 patients showed MFI≥5000. Of these, the crossmatch was positive in only one patient (20%). Virtual crossmatch is a resource that can assist in making pre-kidney transplantation decisions. / Introdução : A busca por testes seguros que possam prever a rejeição mediada por anticorpo em transplantes de órgãos tem sido contínua e a prova cruzada por citotoxicidade dependente de complemento, desenvolvida na década de 60, até pouco tempo era considerada padrão ouro e principal teste preditor de rejeição. Os novos métodos de aferição da imunidade humoral, notadamente a prova cruzada por citometria de fluxo e a tecnologia Luminex®, aumentaram significativamente a sensibilidade destas avaliações, mas também a complexidade na interpretação destes resultados, assim como na correlação das diferentes metodologias Embora bastante sensível, nem todo anticorpo doador específico detectado pelo teste de fase sólida resulta em uma prova cruzada positiva ou com rejeição. As informações obtidas com as especificidades (assim como a intensidade de fluorescência) dos anticorpos anti-HLA podem definir o risco imunológico do paciente, auxiliando a escolha do doador ideal, bem como do esquema imunossupressor, tanto profilático quanto terapêutico.Objetivos : O objetivo deste trabalho foi estabelecer um ponto de corte no nível de fluorescência de anticorpos detectados pelo painel Single Antigen Beads de classe I e II que se correlacione com a prova cruzada positiva por citometria de fluxo (XMCF). Também objetivou-se avaliar se existem diferenças entre o emprego de apenas DSAs com maior MFI e a soma de todos os DSAs de um determinado paciente.Metodologia : Foi realizado estudo transversal de dois bancos de dados de resultados de Paineis (Luminex®) e prova cruzada por citometria de fluxo de pacientes em lista de espera para transplante renal cadastrados no Laboratório de Imunologia de Transplantes da Santa Casa de Misericórdia de Porto Alegre. O banco número 1 era composto de 1316 provas cruzadas contra doadores falecidos e painéis de anticorpos anti-HLA dos loci A, B e DRB1, realizados no ano de 2010. O banco número dois era composto de 2288 provas cruzadas contra doadores falecidos e painéis de anticorpos anti-HLA dos loci C e DQB1 realizadas entre julho de 2013 e julho de 2014. Como critério de inclusão para ambos os bancos de dados foram utilizadas somente amostras que possuíam resultados de Painel na mesma data do soro testado nas provas cruzadas por citometria de fluxo, resultando em 834 amostras no banco de número 1. Além disso, para o banco de dados número 2 foram utilizados apenas amostras que possuíam anticorpo específico contra o doador (DSA) dos loci C e ou DQB1, resultando em 348 provas cruzadas.Resultados e Conclusões : demonstramos que 97,6% dos pacientes com DSAs anti-HLA- ABDRB1 com MFI≥5000 resultaram em XMCF positiva. Os níveis de MFI nesta faixa corresponderam aos melhores pontos de corte de escolha quando avaliamos a sensibilidade e especificidade para a correlação com a prova cruzada positiva por citometria de fluxo. Para os DSAs HLA-DQB1, níveis de fluorescência acima de 15. 000 MFI ofereceram elevada especificidade (97,8%). A sensibilização anti-HLA-C é menos frequente (n=40). Apenas 5 pacientes apresentaram MFI≥5000. Destes, apenas em um (20%) a prova cruzada foi positiva. A prova cruzada virtual é um recurso que pode auxiliar na tomada de decisões pré-transplante renal.

Orientador: Áureo Evangelista Santana / Banca: Márcia Ferreira da Rosa Ferreira / Banca: Aparecido Antonio Camacho / Banca: Raimundo Souza Lopes / Banca: Wanderson Adriano Biscola Pereira / Resumo: Tendo em conta a importância do sangue do cordão umbilical (SCU) como fonte de células-tronco objetivou-se este estudo, visando quantificar células CD117+, CD45+ e subpopulações linfocitárias; e determinar os valores eritroleucométricos bem como a contagem de reticulócitos no sangue do cordão umbilical (SCU) e sangue periférico de suínos imediatamente ao nascimento (SPI) e quarenta e oito horas depois (SP48), utilizando-se de 48 amostras de SCU e periférico de neonatos. Comparando-se os grupos, a um nível de significância de 5% na quantificação de células CD117+ a marcação foi muito baixa presumivelmente porque o CD117 marca células em estágio de diferenciação. Pelo que se recomenda que mais estudos sejam feitos, combinando-o com o marcador da verdadeira célula- tronco. As contagens de células CD5+ , CD4+ e CD8+ por citometria de fluxo, no SCU e SPI foram inferiores àquelas reportadas para o sangue periférico de adultos, indicando um componente imunológico imaturo. A proporção CD4:CD8, tanto para o SCU quanto para SPI, assim como SP48, demonstrou dominância das células TCD4+. Relativamente ao eritrograma, houve diferença significativa entre as variáveis nos grupos estudados, excetuando-se o volume corpuscular médio (VCM), hemoglobina corpuscular média (HCM) e concentração da hemoglobina corpuscular média (CHCM) que não variaram entre os grupos, SCU e SPI; a contagem de reticulócitos no grupo SP48 foi superior ao dos grupos SCU e SPI. No leucograma, todas as variáveis mostraram diferença significativa, excetuando-se a contagem de monócitos, que não variou entre os grupos, SCU e SPI. Já nos grupos SPI e SP48 foi observada diferença significativa na contagem de neutrófilos segmentados e monócitos, enquanto o total de leucócitos, neutrófilos bastonetes e linfócitos não diferiram / Abstract: Given the importance of Umbilical cord blood (UCB) as a source of stem cell, this study was aimed to quantify CD117+, CD45+ and lymphocyte subsets and determine the eritroleucometric values and the recticulocyte count in umbilical cord blood (UCB) and peripheral blood of piglets immediately at birth (PBI) and forty-eight hours late (PB48), using 48 samples of umbilical cord and peripheral blood of neonates. Comparing the groups at a significance level of 5 %, in the quantification of CD117+ cells, marking was very low presumably because CD117 mark cells in differentiation stage. It is recommended that more studies be done combining it with the marker of true stem cell marker. The lymphocyte subsets counts CD5+, CD4+ even CD8+ of UCB and PBI performed by flow citometry, were lower than those reported for peripheral blood of adult pigs, indicating an immature immunologic component. The ratio CD4:CD8 obtained in this trial, both UCB, PBI and PB48 showed dominance of CD4+ T cells lymphocytes. Regarding the erythrogram there was a significant difference between variables of groups with exception for mean corpuscular volume (MCV) mean corpuscular hemoglobin (MHC) and mean corpuscular hemoglobin concentration(MCHC) that did not vary between UCB and PBI groups; the reticulocyte count in PB48 group was higher than that of UCB and PBI groups. In the WBC, all variables showed significant differences, except for the number of monocytes, which vary between UCB and PBI groups. In PBI and PB48 groups there was no significant difference in the mature neutrophils and monocyte count, while the total leukocyte, band neutrophils and lymphocytes did not differ / Doutor

Orientador: Sony Dimas Bicudo / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Banca: Marciane da Silva Maia / Banca: Maria Denise Lopes / Banca: Cezinande de Meira / Resumo: Objetivou-se estudar as implicações da redução na proporção de gema de ovo no meio diluidor Glicina-Gema-Leite e testar a prevenção do estresse oxidativo utilizando os antioxidantes Trolox®, Catalase ou Glutationa no processo de criopreservação de sêmen ovino. No Experimento 1, determinou-se o efeito da redução na proporção da gema de ovo no meio diluidor Glicina-Gema-Leite, utilizando-se quatro ejaculados de cada carneiro das raças Santa Inês (n=4) e Dorper (n=4), colhidos por meio de vagina artificial. Após as avaliações macro e microscópicas, o sêmen foi mantido sob temperatura de 32oC e diluído para atingir-se concentração de 400 x 106 espermatozóides/mL no meio Glicina- Gema-Leite contendo 20% (GGL20), 15% (GGL15), 10% (GGL10) ou 5% (GGL5) (v/v) de gema de ovo. O sêmen foi envasado em palhetas de 0,25 mL, e em seguida, as amostras foram refrigeradas e congeladas em sistema com controle automatizado. A descongelação foi feita em banho-maria à 40oC/20 segundos. A cinética espermática foi determinada em sistema computadorizado de análise de sêmen (CASA) e a integridade total das membranas espermáticas pela combinação dos fluorocromos diacetato de carboxifluoresceína (DIC) e iodeto de propídio (IP). Na análise pósdescongelação, as motilidades total (MT) e progressiva (MP) nos tratamentos GGL10 e GGL5 foram maiores (P<0,05) do que no GGL20. A VAP foi menor em GGL20 dos demais meios (P<0,05) e a VSL foi maior em GGL5 do que em GGL20 (P<0,01). A VCL e o ALH apresentaram maiores valores no GGL10 e GGL5 do que no GGL15 e GGL20 (P<0,01). O BCF no GGL5 foi maior (P<0,05) do que nos demais diluidores e o sêmen criopreservado nos meios GGL10 e GGL5 apresentaram maior percentual de espermatozóides com membranas íntegras do que no meio GGL20 (P<0,05). Frente aos resultados obtidos, o GGL5 foi utilizado como meio base no experimento seguinte. No Experimento 2, ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of the study was the implications of the reduction in the proportion of egg yolk in the extender Glycine-Yolk-Milk and to test the prevention of oxidative stress using antioxidants Trolox, Catalase or glutathione in the process of cryopreservation of ovine semen. In Experiment 1, we determined the effect of reduction in the proportion of egg yolk in the extender Glycine-yolk-milk, using four ejaculates from each ovine of Santa Inês breed (n=4) and Doper breed (n=4), collected using artificial vagina. After the assessment, macro and microscopic, semen was kept at a temperature of 32oC and diluted to achieve concentrations up to 400 x 106 sperm / mL in the extender Glycine-yolk-milk containing 20% (GGL20), 15% (GGL15), 10% (GGL10) ou 5% (GGL5) (v/v) of egg yolk. The semen was stored in straws of 0.25 mL, and then, samples were refrigerated and frozen in system with automated control. Thawing was done in a water bath to 40oC/20 seconds. The kinetics was determined in sperm computerized semen analysis (CASA) and the overall integrity of sperm membranes by the combination of fluorochromes carboxyfluorescein diacetate (DIC) and propidium iodide (IP). In analyzing post-thawing, motilities total (MT) and progressive (MP) in the treatments GGL10 and GGL5 were higher (P <0.05) than in GGL20. The VAP was lower in GGL20 of other means (P <0.05) and VSL was higher in GGL20 than in GGL20 (P <0.01). The VCL and ALH showed higher values in GGL10 and GGL5 than in GGL15 and GGL20 (P <0.01). The BCF in GGL5 was higher (P <0.05) than in the other extenders and cryopreserved semen in the environments GGL10 and GGL5 showed higher percentages of spermatozoon with intact membranes than in the extender GGL20 (P <0.05). Given our results, the GGL5 was used as a base extender in the experiment following. In Experiment 2, ...(Complete abstract click electronic access below) / Doutor