Orientador: Carminda da Cruz Landim / Banca: Ronaldo Zucchi / Banca: José Eduardo Serrão / Banca: Fabio Santos do Nascimento / Banca: Norberto Peporine Lopes / Resumo: As espécies de abelhas eussociais usam várias estratégias para a comunicação entre os membros da sociedade com a finalidade de coordenar as diferentes tarefas das quais esta sociedade depende. A comunicação através de sinais químicos é uma das mais difundidas e tem papel primordial na manutenção das colônias. As fontes dos compostos químicos usados na comunicação podem ser várias, mas boa parte dos compostos tem origem em glândulas exócrinas distribuídas pelo corpo das abelhas. O presente estudo abrange a análise da composição das glândulas salivares cefálicas (GSC) e da superfície cuticular através de cromatografia em fase gasosa e espectrometria de massas e de testes citoquímicos para detecção de compostos lipídicos e de atividade de fosfatases ácidas nas glândulas de operárias abelhas eussociais das espécies Apis mellifera, Scaptotrigona postica e Melipona quadrifasciata enquanto recém emergidas, trabalhando na área de cria e como forrageiras. As diferenças qualitativas e quantitativas obtidas na análise cromatográfica foram submetidas a análises estatísticas. O objetivo do estudo foi o de testar hipóteses de que há correlação entre a fisiologia das células glandulares e das substâncias presentes na secreção e na superfície cuticular, a fim de verificar: 1. Mudanças na composição celular relacionáveis à função secretora; 2. Relação entre a fase da vida/função das operárias e a composição da secreção glandular e dos compostos cuticulares, ou seja, que a composição da secreção pode funcionar na colônia como sinais, tanto de reconhecimento como de capacitação para determinada tarefa; 3. Se existe a possibilidade da contribuição da glândula para a formação do perfil químico cuticular nestas espécies de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Eusocial bees use several strategies for communication among the members of the society with the purpose of coordinating the different tasks necessary to colony maintenance. The communication by chemical cues is one of the most frequent. There are several sources for the chemicals used in the communication, but most of them are produced by exocrine glands distributed over all body of the bees The present study includes analysis of the secretion compounds from cephalic salivary glands (CSG) and from cuticular surface by gas chromatography-mass spectrometry and citochemical tests for lipid detection and acid phosphatase activities in CSG of workers' of Apis mellifera, Scaptotrigona postica and Melipona quadrifasciata in different phases of life: newly emerged, working in brood area and foragers. The qualitative and quantitative differences obtained in the chemical analysis were submitted to statistical analyses. The objective of the study was to correlate the glandular cells physiology comparing the substances in their cytoplasm and those found in glandular secretion and on cuticular surface in order to test some hypothesis and verify: 1. Changes in the cellular compounds related to the secretory function; 2. The relationship between the phase/task of the workers' and the compounds in glandular secretion and on cuticular surface; 3. If exist the possibility of gland contribution to forming the cuticular chemical profile in these species of bees. Previous morphological studies of glandular cells showed the lipid nature of the CSG secretion, therefore, glandular citochemical analysis aimed to show the presence of these compounds with the purpose of accompanying their production dynamics, storage, origin and discharge, while the research of acid phosphatase activity aimed to accompany the cellular development... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-12-31 / Objetivo: Estabelecer o diagnóstico laboratorial da leucemia mielóide aguda (LMA), leucemia aguda indiferenciada (LAI) e leucemia aguda bifenotípica (LAB), através de um estudo prospectivo, observacional e descritivo de 62 pacientes atendidos consecutivamente na Fundação de Hematologia e Hemoterapia do Amazonas – FHEMOAM, no período de Setembro de 2000 a Setembro de 2003, avaliar a freqüência, características clínicas e laboratoriais com a finalidade de permitir um diagnóstico mais preciso com conseqüente melhor escolha terapêutica. Método: A classificação da LMA foi realizada utilizando os critérios morfológicos do grupo cooperativo franco-americano-britânico (FAB). Estudos imunológicos foram realizados utilizando a técnica imunoenzimática EnVision System Alkaline Phosphatase (DAKO), que permite identificar a reação nas células leucêmicas em esfregaços de medula óssea e/ou sangue periférico e em preparados de citocentrífugas (spins), com a utilização de um amplo painel de anticorpos monoclonais. Os subtipos FAB de LMA foram analisados em relação a características clínicas idade (crianças e adultos), sexo, linfonodomegalias (>2cm), esplenomegalia (≥3cm), dados laboratoriais (níveis de hemoglobina, contagem de glóbulos brancos e plaquetas, características morfológicas, citoquímicas e perfil imunofenotípico dos blastos). Resultados: A LMA ocorreu em 62 pacientes sendo 25 crianças (40,3%, idade mediana de 6 anos e 9 meses) e 37 adultos (59,7%, com idade mediana de 30 anos); houve predomínio do sexo masculino (41 pacientes - 66% dos casos). A distribuição dos casos de acordo com os subtipos FAB foi 1 caso M0, 12 M1(19%), 15 M2(24%), 8 M3(13%), 6 M4 (10%), 15 M5 (24%), 1 M6 e 4M7(6%). Entre as crianças M2 foi o tipo mais comum (32%) e entre os adultos a LMA M5 (27%). Os antígenos mielóides mais freqüentes foram CD13, CD33 e anti– MPO. A LAI ocorreu em 3 pacientes e a LAB em 1 paciente. Conclusão: Neste trabalho, observamos algumas diferenças em relação a estudos nacionais e internacionais como a faixa etária mais baixa e a menor freqüência da LMA M3 entre nossos pacientes. A classificação FAB é ainda de grande importância no diagnóstico da LMA, porém a contribuição dos dados da imunofenotipagem é fundamental na classificação da LMA subtipo M0 e M7, assim como na caracterização da leucemia aguda indiferenciada e bifenotípica. / Objective: The present study investigated the best laboratorial diagnosis methods to acute myeloid leukemia, acute undifferentiated leukemia and biphenotypic acute leukemia. We have prospective, observacional and descriptive study about 62 patients from Fundação de Hematologia e Hemoterapia do Amazonas - FHEMOAM, in the period of September of 2000 at June of 2003. The frequency, clinical and laboratories characteristics was analyzed. .Methods: The classification of the acute myeloid leukemia – LMA was stablished by morphological and cytochemical criteria according by the French-American-British (FAB) classification and immunologic aspects using the imunoenzymatic technique from DAKO - EnVision System Alkaline Phosphatase, that allows to identify to leukemia subgroups in bone marrow smears and/or peripheral blood and in cytospins, with a large monoclonal antibody panel. The LMA subtypes had been analyzed according age (children and adults), sex, morphologic and cytochemistry characteristics, immunophenotipic profile, lymph node and a variety of organs masses occurrence (lymph node ≥ 2 cm, spleen and liver ≥ 3 cm), laboratories findings as leucocytes and platelets counts, hemoglobin, countings. Results: We observed that the LMA occurred in 62 patients, being 25 children (40,3%) and 37 adults (60%); with predominance of the masculine sex happening in 66% of the cases (41 patients). The most common subtypes had been the LMA M2 in children and LMA M5, in adults; the phenotype more common had been CD13, CD33 and anti – MPO myeloid antigens. Auer’rod occurred in 26 cases (42%) and the more frequent laboratories findings had been leucocyte and platelets accounts below of 100.000/mm3 and hemoglobin below of 10g/dl. Limph node with more than 2 cm of diameter, spleen and liver with size bigger than 3 cm was observed in less than half of cases. The LAI was observed in 3 patients and the LAB in only 1 patient. Conclusion: The results indicate that FAB classification was very important at LMA diagnostic, however immunophenotyping has a strong importance in the M0 and M7 subtype of LMA classification, as well as in the characterization of the undifferentiated and biphenotypic acute leukemia. In this work, we observed some differences between data of the northeast region and Southeastern of Brazil as the frequency of the LMA M3 lower between our patients. In order hand, in our region we observed that LMA occurs in more young patients in relation to described in literature about other countries / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

The colleters of Apocynaceae are glands related to different types of protection of vegetative and floral meristems through the production of mucilage or a mixture of many different compounds. Although several anatomical papers have shown histological and histochemical aspects of colleters of the family, almost nothing is known about the secretory process of the cells of this gland. In this paper we studied two types of colleters that occur in the family: what produces exclusively mucilaginous secretion and what produces mucilage and lipophilic compounds, being analyzed in two species for each type of colleter. The secretory epidermis of the colleters of Allamanda schottii and Blepharodon bicuspidatum presents a large amount of dictiosomes and endoplasmic reticulum, a dispersed vacuoma composed of small vacuoles with fibrilar osmiophilic material, leucoplasts with large amount of starch and few thylakoids, as well as large mitochondria. The mode of secretion release is granulocrine and the exudate crosses the cuticle without breaking it by projections of pectin reaching the surface. The secretory cells of the colleters of Mandevilla splendens and Peplonia axillaris have completely different ultrastructure and secretion from those of Allamanda schottii and B. bicuspidatum. Plastids and mitochondria are observed, as well as a profusion of dictiosomes and their vesicles in association with the rough endoplasmic reticulum near the cell membrane. The secretion is mainly observed in the cisterns and vesicles of the trans face of the dictiosomes, indicating the production of a great amount of mucilage. The mechanism of secretion release is also granulocrine, but the secretion is temporarily accumulated in a large periplasmic space before crossing the cell wall and the cuticle. Two distinct patterns of secretion production and release were found in the colleters of Apocynaceae that are related to the composition of the secretion and not to the group to which the species analyzed belong. Although the colleters in the family are histologically similar, the present paper demonstrates a metabolic and subcellular variability until then unknown to the group / Os coléteres de Apocynaceae são glândulas relacionadas a diferentes tipos de proteção de meristemas vegetativos e florais através da produção de mucilagem ou uma mistura de muitos compostos distintos. Apesar de vários trabalhos anatômicos terem demonstrado aspectos histológicos e histoquímicos de coléteres da família, não se sabe quase nada sobre o processo secretor das células desta glândula. Neste trabalho estudamos dois tipos de coléteres que ocorrem na família: o que produz secreção exclusivamente mucilaginosa e o que produz mucilagem e compostos lipofílicos, sendo analisada em duas espécies para cada tipo de coléter. A epiderme secretora dos coléteres de Allamanda schottii e Blepharodon bicuspidatum apresenta grande quantidade de dictiossomos e retículo endoplasmático, um vacuoma disperso composto por pequenos vacúolos com material osmiofílico fibrilar, leucoplastos com grande quantidade de amido e poucos tilacóides, além de mitocôndrias grandes. O modo de liberação da secreção é granulócrino e o exsudato atravessa a cutícula sem rompê-la por meio de projeções de pectina que alcançam a superfície. As células secretoras dos coléteres de Mandevilla splendens e Peplonia axillaris possuem ultraestrutura e secreção e completamente distintos dos de Allamanda schotti e B. bicuspidatum. Observam-se plastídeos e mitocôndrias, além de uma profusão de dictiossomos e de suas vesículas em associação ao retículo endoplasmático rugoso próximo à membrana plasmática. A secreção é principalmente observada nas cisternas e vesículas da face trans dos dictiossomos, indicando a produção de grande quantidade de mucilagem. O mecanismo de liberação da secreção também é granulócrino, mas a secreção é temporariamente acumulada em um amplo espaço periplasmático, antes de atravessar a parede celular e a cutícula. Dois padrões distintos de produção e liberação da secreção foram encontrados nos coléteres de Apocynaceae que estão relacionados à composição da secreção e não ao grupo ao qual as espécies analisadas pertencem. Embora os coléteres na família sejam histologicamente semelhantes, o presente trabalho demonstra uma variabilidade metabólica e subcelular até então desconhecida para o grupo

Submitted by Geyciane Santos (geyciane_thamires@hotmail.com) on 2015-08-25T14:09:38Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Marcio Quara de Carvalho Santos.pdf: 1229782 bytes, checksum: 8267f9cceff2df674e6c6cc9de3ac713 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-08-26T20:31:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Marcio Quara de Carvalho Santos.pdf: 1229782 bytes, checksum: 8267f9cceff2df674e6c6cc9de3ac713 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-08-26T20:38:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Marcio Quara de Carvalho Santos.pdf: 1229782 bytes, checksum: 8267f9cceff2df674e6c6cc9de3ac713 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-08-26T20:38:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Marcio Quara de Carvalho Santos.pdf: 1229782 bytes, checksum: 8267f9cceff2df674e6c6cc9de3ac713 (MD5) Previous issue date: 2011-05-31 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Irapuca, Podocnemis erythrocephala, is the poorly studied turtle species among the Amazonian Podocnemis and suffers from large predatory pressure by the human population, causing a decline in their natural stocks. This study aimed to determine the hematological parameters, the morphological and cytochemical features of blood cells, as well as the effect of forced diving on the blood profile of P. erythrocephala, generating relevant information to the proposition of management plans and conservation strategies for this species. Analysis revealed that sex exercised little influence on the blood profile of the animals, unlike the growth. It was found that hatchlings showed lower eritrogram than immature and mature animals, unlike the concentrations of glucose and total cholesterol that were higher, confirming the high metabolic rate of hatchlings. Overall, the changes found in blood parameters reflected changes in physiological function of the behavior and natural history of the species. Due the effect of sex and development phase on the blood parameters, reference ranges were established for hatchlings, immature males, mature males, immature females and mature females. From the morphological analysis of blood cells from irapuca erythrocytes, thrombocytes, lymphocytes, azurophilic, heterophils, eosinophils and basophils were identified with morphological characteristics similar to those described for other Podocnemidid species. Cytochemical analysis indicated that heterophils, eosinophils and basophils are the most active cells of the immune system of this species, being primarily responsible for phagocytic activity due the presence of glycogen, lipid and peroxidase. No changes were observed on the eritrogram of animals subjected to 30 and 60 minutes of forced submersion. Increased levels of plasma lactate, calcium and magnesium, according to the dive time, reflected physiological adjustments to maintain the acid-base balance, whereas changes in the levels of total cholesterol and triglycerides indicated that during anoxia, the irapuca activated the ATP production from lipid catabolism, as a complementary way to anaerobic glycolysis. The irapuca proved to be a tolerant species to 60 minutes of forced diving, although higher periods might cause metabolic acidosis and depletion of energy substrates. These values constitute a basis for assessing the health status of wild irapucas. / A irapuca, Podocnemis erythrocephala, é a espécie menos estudada entre os podocnemidídeos amazônicos e vem sofrendo grande pressão antrópica, que tem contribuído para o declínio de seus estoques naturais. Este trabalho teve como objetivo determinar os parâmetros hematológicos, as características morfológicas e citoquímicas das células do sangue, bem como o efeito do mergulho forçado sobre o perfil sanguíneo de P. erythrocephala, gerando informações relevantes para a elaboração de planos de manejo e estratégias de conservação para a espécie. As análises revelaram que o sexo exerceu menor influência sobre o perfil hematológico dos animais, diferentemente do crescimento. Foi verificado que espécimes recém-eclodidos apresentaram valores do eritrograma inferiores em relação aos animais imaturos e maduros, ao contrário das concentrações de glicose e colesterol total, que foram superiores, confirmando a alta demanda metabólica que os recém-eclodidos possuem. De forma geral, as alterações encontradas nos parâmetros sanguíneos refletiram adaptações fisiológicas em função do comportamento e da história natural da espécie. Em função do efeito do sexo e da fase de crescimento sobre os parâmetros sanguíneos, foram estabelecidos intervalos de referência para recém-eclodidos, machos imaturos, machos maduros, fêmeas imaturas e fêmeas maduras. A partir da análise morfológica das células sanguíneas da irapuca, foram identificados eritrócitos, trombócitos, linfócitos, azurófilos, heterófilos, eosinófilos e basófilos com características morfológicas semelhantes às descritas para outros podocnemidídeos. As análises dos constituintes citoquímicos indicaram que os heterófilos, eosinófilos e basófilos são as células mais ativas do sistema imunológico nesta espécie, sendo responsáveis principalmente pela atividade fagocítica, devido a presença de glicogênio, lipídeos e peroxidase. Não foram observadas alterações no eritrograma dos animais submetidos a 30 e 60 minutos de submersão forçada. O aumento nos níveis plasmáticos de lactato, cálcio e magnésio, em função do tempo de mergulho, refletiram ajustes fisiológicos para a manutenção do equilíbrio ácido-base, enquanto que as alterações nos níveis de triglicerídeos e colesterol total indicam que, em situações de anóxia, a irapuca ativa o catabolismo lipídico para a produção de ATP, de forma complementar à glicólise anaeróbica. A irapuca demonstrou ser uma espécie resistente à 60 minutos de mergulho forçado, entretanto períodos superiores podem causar acidose metabólica e exaustão dos substratos energéticos. As informações geradas no presente estudo servirão de base para a avaliação do estado de saúde desta espécie de quelônio amazônico.

Orientador : Debora de Queiroz Tavares / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-03T22:28:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Martini_MariaHelena_D.pdf: 15024202 bytes, checksum: 22ab2ff6f88e02fc090f712bfba73cea (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Nos estudos sobre as reservas do mesofilo cotiledonar do gênero Theobroma destacam-se os trabalhos sobre sementes de T. cacao, fonte única da matéria prima do chocolate. Estas pesquisas preferenciam as mudanças ocorridas na estrutura celular durante a fermentação, secagem, torração; etapas do processo de produção do chocolate. Mais recentes são os trabalhos com sementes de T. grandiflorum utilizadas na elaboração do cupulate, produto com características semelhantes ao chocolate. O presente trabalho analisa as células de reserva lípide-proteicas e idioblastos de polifenóis de T. cacao, T. grandiflorum, T. subincanum, T. bicolor e T. speciosum. Em T. obovatum e T. microcarpum o estudo apresentou apenas as células polifenólicas. A distribuição dos glóbulos lipídicos nas células são análogas nestas espécies, isto é, localização periférica e extrema susceptibilidade ao calor, coalescendo sob condições térmicas acima de 30°C. A proteína de reserva apresenta-se entremeada com os glóbulos lipídicos e alguns grãos de amido. As células polifenólicas, em T. bicolor e T. speciosum, localizam-se na região do feixe vascular e parênquima da radícula e nas outras espécies estudadas estão dispersas pelo mesofilo e próximas ao feixe vascular. A mucilagem é uma secreção celular constante em cinco espécies estudadas, não se acumulando dentro das células, porém com raras exceções ocorrem células com mucilagem na epiderme do mesofilo (T. subincanum). T. speciosum caracteriza-se por efetivamente apresentar células de mucilagem. Estas células são abundantes no mesofilo e cerca de 10% alcançam grandes dimensões sem rompimento do tecido. As células polifenólicas apresentam características histoquímicas semelhantes a mucilagem, porém sua estreita relação com os feixes vasculares direciona seu desenvolvimento para a síntese de polifenóis. O tecido do mesofilo cotiledonar é semelhante em todas as espécies aqui estudadas devido a predominância de reserva lípide-proteica. Células imaturas de sementes verdes demonstram capacidade para sintetizar todas as reservas; na maturidade celular demonstram predominância de reservas lípide-proteicas ou de mucilagem ou de polifenóis. A distribuição das reservas no mesofilo aproximam T. grandiflorum à T. subincanum. A maior quantidade de proteínas está em T. bicolor. Esta espécie apresenta menor quantidade de lipídeos e de células polifenólicas / Abstract: Many investigations on the cellular reserves within the cotyledon mesophyll of the Theobroma have been carried out on Theobroma cacao seeds, the source of raw for the production of chocolate. These studies demonstrated structural cellular changes due to fermentation, drying, and roasting processes during chocolate production. Recently the seeds of the T. grandiflorum have been analyzed due to their importance in the production of ¿cupulate¿, a new product similar to chocolate. In the present work, we analyze the lipid-protein reserve cells and polyphenolic idioblasts derived from T. cacao, T. grandiflorum, T. subincanum, T. bicolor, T. speciosum and T. obovatum. Only phenolic cells were studied in T.obovatum and T. microcarpum.The distribution of lipid bodies was similar in all the species studied; that is, they were located at the periphery of the cell wall and demonstrated extremely susceptibly to heat, coalescing at temperatures above 30°C. The reserve protein was interspersed with lipid bodies and some starch granules. The polyphenolic cells were dispersed throughout the mesophyll and around the vascular bundles in all the species studied. In T. bicolor and T. speciosum the polyphenolic cells were only observed around the vascular bundle and radicle parenchyma. Mucilage is a cellular secretion in the five species studied. Mucilage does not accumulate intracellularly; however, rarely we did observe mucilage in the cells of the mesophyll epidermis of T. subincanum. In T. speciosum, mucilage cells were abundant in the mesophyll and about 10% reached large dimensions without tissue disruption. The polyphenolic cells presented characteristic mucilage histochemistry, however their strict association with vascular bundles should direct their development towards polyphenol synthesis. Cotyledon mesophyll tissue is similar in all the species studied with respect to lipid-protein reserve. Immature cells demonstrated the capacity to synthesize all the reserves, but this capacity is not retained in the mature cell. The distribution of reserves in the mesophyll are most similar in T. grandiflorum and T. subincanum. T. bicolor showed a high protein content, lower lipid levels and low levels of polyphenolic cells / Doutorado / Doutor em Alimentos e Nutrição

Orientador: Lilian Madi-Ravazzi / Coorientador: Maria Tercília Vilela de Azeredo-Oliveira / Banca: Blanche Christine Pires de Bitner-Mathé Leal / Banca: Maria Izabel Camargo Mathias / Banca: Hermione Elly Melara de Campos Bicudo / Banca: Patrícia Vilamaior / Resumo: Zaprionus indianus é um drosofilídeo nativo da região Afrotropical que colonizou o continente Sul Americano, apresentando uma ampla distribuição geográfica enquanto Z. sepsoides é restrita a algumas regiões africanas. As duas espécies diferem em relação ao tamanho dos testículos e dos espermatozoides que é maior em Z. indianus do que em Z. sepsoides. Com o intuito de conhecer aspectos da biologia e o grau de diferenciação destas espécies, o presente estudo avaliou a espermatogênese de machos de diferentes idades (1, 3, 5 e 8 dias) de ambas as espécies por meio de técnicas de coloração convencional e de ultraestrutura. A espermatogênese e ultraestrutura dos espermatozoides foram semelhantes nas espécies em que foi confirmado o número diploide de cromossomos com 2n = 12. Entretanto, foi observada uma quantidade maior de espermatozoides em machos jovens (1 a 3 dias de idade) em Z. indianus do que em Z. sepsoides, o qual apresentou maior frequência de estágios iniciais da espermatogênese nestas idades. A porção da cabeça dos espermatozoides foi fortemente marcada nas duas espécies pela coloração por prata (AgNOR), orceína lacto-acética e pela reação de Feulgen. Quando submetidos à reação de P.A.S., os testículos de Z. sepsoides e Z. indianus apresentaram grânulos de glicogênio. As espécies possuem a mesma ultraestrutura flagelar, em que o axonema mostra um arranjo de 9+9+2 microtúbulos, com a presença de dois derivados mitocondriais de diferentes tamanhos e o número de 64 espermatozoides por feixe, em ambas as espécies. A grande semelhança observada no padrão do arranjo de microtúbulos do axonema e nos derivados mitocondriais com diferentes tamanhos nas espécies de Zaprionus, comparadas com outras espécies de Drosophila, é indicativa da conservação destas estruturas na família Drosophilidae... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Zaprionus indianus is a drosophilid native to the Afrotropical region that has colonized South America. Z. indianus exhibits a wide geographical distribution, whereas Z. sepsoides is restricted to certain African regions. The two species differ in the size of their testes, which are larger in Z. indianus than in Z. sepsoides. To better understand the biology and the degree of differentiation of these species, the current study evaluated spermatogenesis in males of different ages (1, 3, 5 and 8 days old) from both species by conventional staining techniques and ultrastructural analysis. Spermatogenesis and the ultrastructure of spermatozoa were similar in the two species, for which the diploid number was confirmed to be 2n = 12 chromosomes. However, a greater number of spermatozoa were observed in young Z. indianus males (1-3 days old) than in young Z. sepsoides males, which showed a higher frequency of cells at the early stages of spermatogenesis at this age. A portion of the head of the sperm was strongly marked in both species by silver staining (AgNOR), lacto-acetic orcein and the Feulgen reaction. Additionally, when submitted to P.A.S. reaction, the testes of both Z. sepsoides and Z. indianus exhibited glycogen granules. The two species also presented the same flagellar ultrastructure, in which the axoneme includes a 9+9+2 arrangement of microtubules, two mitochondrial derivatives of different sizes are present and the number of spermatozoa per bundle is 64. The great similarity in the pattern of microtubule arrangement in the axoneme and in the mitochondrial derivatives of the species Zaprionus, as compared with other species of Drosophila, indicates that these structures are preserved in the family Drosophilidae. The differences observed between the young males of Z. indianus and Z. sepsoides, including the number and frequency of sperm... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Maria Tercília Vilela Azeredo Oliveira / Coorientador: Patrícia Simone Leite Vilamaior / Banca: Alba Regina de Abreu Lima / Banca: Silvana Gisele Pegorin de Campos / Resumo: Os triatomíneos são insetos hematófagos de grande importância para a saúde pública, uma vez que são considerados como a principal forma de transmissão do protozoário Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas. Além da importância epidemiológica, esses insetos se destacam em estudos celulares, pois apresentam algumas peculiaridades, como cromossomos holocêntricos, meiose invertida para os cromossomos sexuais e persistência nucleolar durante a meiose. O fenômeno de persistência nucleolar é definido pela presença do nucléolo ou corpúsculos nucleolares durante todas as fases da meiose. Esse fenômeno foi descrito, até o momento, para 24 espécies de triatomíneos, dos gêneros Triatoma, Rhodnius e Panstrongylus. No entanto, somente a presença dessa estrutura nuclear em todas as fases da meiose não garante a sua atividade transcricional. Diante disso, o presente estudo teve como objetivo descrever a nucleologênese em novas espécies de, pelo menos, sete novos gêneros (Cavernicola, Psammolestes, Dipetalogaster, Eratyrus, Meccus, Mepraia, Nesotriatoma), com o intuito de analisar se a persistência nucleolar é uma sinapomorfia da subfamília Triatominae. Além disso, esse trabalho também teve como finalidade avaliar a atividade nucleolar durante a meiose das espécies Triatoma infestans, Rhodnius montenegrensis e Panstrongylus megistus, por meio da técnica citoquímica Acridine Orange, com o objetivo de caracterizar, com base na presença de RNA, se existe atividade transcricional... / Abstract: Triatomines are hematophagous insects of great importance for public health, since they are considered as the main form of transmission of the protozoan Trypanosoma cruzi, etiologic agent of Chagas disease. Besides the epidemiological importance, these insects stand out in cellular studies, as they present some peculiarities, such as holocentric chromosomes, inverted meiosis for sex chromosomes and nucleolar persistence during meiosis. The phenomenon of nucleolar persistence is defined by the presence of the nucleolus or nucleolar corpuscles during all phases of meiosis. So far, this phenomenon has been described for 24 triatomine species of the genus Triatoma, Rhodnius and Panstrongylus. However, only the presence of this nuclear structure in all phases of meiosis does not guarantee its transcriptional activity. So, the objective of the present study was to describe the nucleologenesis in new species of at least seven new genera (Cavernicola, Psammolestes, Dipetalogaster, Eratyrus, Meccus, Mepraia, Nesotriatoma), in order to analyze if nucleolar persistence is a synapomorphy of the subfamily Triatominae. Besides that, this work had the purpose to evaluate the nucleolar activity during the meiosis of the species Triatoma infestans, Rhodnius montenegrensis and Panstrongylus megistus, by means of the cytochemical technique Acridine Orange, with the objective of characterizing, based on the presence of RNA, if there is transcriptional activity in the persistent nucleolar material. All 59 species analyzed, distributed in seven genera, presented nucleolar persistence during meiosis, thus corroborating that this phenomenon is a synapomorphy of the subfamily Triatominae. By means of the fluorochrome Acridine Orange, the persistent nucleolus has been found to be transcriptionally active. Thus, it was evident, for the first time, that the nucleolus is present in the spermatogenesis of ... / Mestre

Este estudo apresenta um painel de dados hematológicos, bioquímicos, morfológicos e citoquímicos para um grupo de serpentes dos gêneros Bothrops e Crotalus mantidas em cativeiro no Instituto Butantan. Para tanto, amostras de sangue foram colhidas da veia coccígea ventral e processadas de acordo com métodos padronizados. Os resultados alcançados foram analisados para determinar diferenças interespecíficas e sexuais. A avaliação citoquímica incluiu Sudan Black B (SBB), Ácido Periódico de Schiff (PAS) e Benzidina Peroxidase (BP). Os resultados hematológicos e bioquímicos mais relevantes indicaram um número significativamente mais alto de basófilos em B. jararaca e níveis mais altos de cálcio nas fêmeas da maioria das espécies. Os azurófilos marcaram positivamente para todas as colorações. A diferenciação entre trombócitos e linfócitos foi facilmente obtida com PAS. Os basófilos marcaram positivamente apenas com PAS em Bothrops alternatus. A marcação em heterófilos variou consideravelmente entre as espécies. Ultra-estruturalmente, os leucócitos foram semelhantes ao já descrito em literatura com algumas variações no tipo dos grânulos dos basófilos e heterófilos. Os grânulos dos basófilos apresentaram-se redondos em sua maioria, com tamanho e densidade variadas, enquanto que os nos heterófilos foram heterogêneos em forma, tamanho e densidade. / This study reports a panel for hematological, biochemical, morphological and cytochemical data for a group of captive snakes belonging to the genus Bothrops and Crotalus mantained at Instituto Butantan, São Paulo, Brazil. Blood samples were collected from ventral coccigeal vein and were processed according to standard protocols. Cytochemical staining including Sudan Black B (SBB), Periodic Acid-Schiff (PAS) and Benzidine peroxidase (BP) were conducted. Blood values were evaluated to determine interspecific and sex differences. We found a significant increase of basophils in Bothrops jararaca and higher levels of calcium in females. Azurophils stained positively for all stains and a differentiation between lymphocytes and thrombocytes was easily obtained with PAS stain. Basophils stained positively only with PAS in Bothrops alternatus. Heterophils staining varied between species. The ultrastructure of leucocytes were similar within described in literature, with some variations on granules of basophils and heterophils. Basophils granules were round, with heterogeneous size and density; whereas, heterphils granules were heterogeneous in shape, size and density.

A implantação embrionária e a placentação em cobaios são caracterizadas pela presença trofoblastos que se destacam da placenta principal, semelhantes ao trofoblasto extra-viloso de humanos. Nestes animais ultrapassam os limites, e podem ser encontrados infiltrados no profundamente no endométrio e no em ambiente externo ultrapassando aos limites da parede uterina. A cobaia desenvolve uma importante estrutura fisiológica de troca materno-embrionária, denominada de placenta vitelina invertida, definidas como membrana fetal destituída parcial ou totalmente do revestimento trofoblástico que permite a exposição do endoderma extra-embrionário em contato direto com o tecido materno. Tais características denotam um mecanismo de controle da resposta imune materna distinta dos paradigmas estabelecidos na reprodução humana e de roedores, assim como ratos e camundongos. Sendo a mais intrigante, a destituição do trofoblasto como célula da interface-materno-fetal que controla a tolerância imune-materna.No presente trabalho, procurou-se estabelecer a organização da placenta vitelina de cobaios a partir da identificação das células que compõe esta membrana extra-embrionária e identificar em que momento ocorre à remoção das células trofoblásticas, e a subseqüente forma de interação das células da placenta vitelina na interface com o tecido materno. Para tanto foram utilizados cobaias fêmeas com idade gestacional conhecida, sacrificadas para coleta de segmentos uterinos nos períodos iniciais da gestação e destinados ao processamento histotógico de embebição em parafina. Na ausência de marcadores celulares específicos conhecidos para cobaios, foram realizados testes prospectivos com reações: citoquímicas de PAS e azul de toluidina (AT; um painel de lectinas biotinadas com afinidade específica para diferentes açúcares; e imunocitoquímica para citoqueratina. As reações realizadas com PAS e AT não identificaram populações celulares com marcação seletiva. Contudo dentre as lectinas tetadas, a Erytrina cristagali lectin (ECL) apresentou reação altamente seletiva para a população de trofoblasto mural (TM) que se origina do trofectoderma, mantendo esta reatividade ao longo da gestação. Esta marcação permitiu avaliar temporal e espacialmente o destino destas células que ao longo da gestação eram mantidas como monocamada de TM revestindo externamente a placenta vitelina e, portanto, não expondo as células do endoderma parietal ou visceral ao ecido materno. Pelo acompanhamento do desenvolvimento embrionário nos cortes seriados, foi constatada no interior do blastocisto a organização de duas massas celulares internas em pólos opostos desde a fase de pré-eclosão. Uma das massas celulares constituída de embrioblastos que dará origem aos os folhetos embrionários nas fases subseqüentes, enquanto a outra formada as células tronco trofoblásticas precursora do cone ectoplacentário (CE). A cavidade da blastocele que separa estas duas massas celulares tem a sua parede revestida pelo endoderma parietal em fase tardia, após a formação da cavidade amniótica. Estes achados demonstram a pecularidade da embriogênese no cobaio, diferente daquelas descritas para humanos e outros roedores, não permitem analogias diretas, o que pode ter contribuído para o equívoco na descrição clássica da organização e constituição da placenta vitelina invertida de constituição córion-amniótica. Isto é, o trofoblasto participa da organização da placenta vitelina inicial e permanece na membrana âmnion-córion-vitelina perfazendo todo o limite do embrião ao longo da gestação. Portanto a hipótese da placenta vitelina parcial ou totalmente invertida baseada na descrição clássica em cobaios é decorrente da interpretação equivocada da embriogênese destes animais. / The guinea pig embryo implantation and placentation is characterized by trophoblast cells detaching from the main placenta in a similar way of human extra-villous trophobasts that deeply intrude inside the endometrium and sometimes also found outside the uterine wall. Furthermore, this animal also develops inverted yolk sac placenta defined as fetal membrane partially or fully devoided of trophoblast sheet that allows extra-embryonic endoderma direct exposition to the maternal environment. These characteristics denote a distinct control mechanism of maternal immune response from the established paradigm for human and rodents (rat and mouse) reproduction, being most intriguing the depriving of trophoblast as cells of maternal-fetal interface regulating the maternal immune tolerance. The present work aimed to establish the organization of guinea pig yolk sac based on identification of cell populations composing this membrane and identification if, or, when the trophoblast cells are removed from and subsequent interaction way of yolk sac cell in interface with maternal tissue. It was used pregnant guinea pig sacrificed on established gestational day to collect uterine fragments on early pregnancy stage and processed by conventional paraffin embedding. Due to absence of known specific cell markers for guinea pig, was performed the prospective evaluation using PAS and toluidine blue (TB) cytochemistry and a screening using a panel of biotinylated lectin specific for different sugars and, anti-cytokeratin. The PAS and TB staining did not identify any specific cell population, however, among the lectins used, Erytrina cristagali lectin (ECL) showed high selective labeling to the trophoblast cells originated from the trophectoderm that was kept through the gestational period. This reaction pattern was useful to evaluate chronologically and topologically the fate of this cell and confirmed the constancy of these cells layering the yolk sac placenta in contact with maternal tissue and therefore, endodermal cells were not exposed to maternal environment. Evaluation of embryo development step by step in the serial sections showed the presence of two inner cell mass in opposite sites inside the pre-hatched blastocyst. One of this, was formed with embryoblast that latter will originate the embryonic sheets and the other formed with trophoblast stem cells (ST) will originate the ectoplacental-cone. The wall of blastocele cavity separate these two inner cell mass was initially covered by a single ECL positive mural trophoblast and only later after the amniotic cavity is formed the extraembyonic endodermal cells migrate from the embryonic sheets to cover internally the blastocele cavity to organize the yolk sac placenta. These findings show the peculiarity of guinea pig embryogenesis, quite different from those described for human and rodents and therefore, does not allow direct analogy and seems to contribute in the misunderstanding of classic description of inverted yolk sac placenta and its cellular organization. It means, the trophoblast cell participates in the early organization of yolk sac placenta and remains in chorioamniotic yolk sac fetal membrane constantly limiting the embryo surface in contact with maternal environment. Therefore, the hypothesis of complete or partially inverted yolk sac placenta seems to be a miss understanding of guinea pig embryogenesis.

Este estudo apresenta um painel de dados hematológicos, bioquímicos, morfológicos e citoquímicos para um grupo de serpentes dos gêneros Bothrops e Crotalus mantidas em cativeiro no Instituto Butantan. Para tanto, amostras de sangue foram colhidas da veia coccígea ventral e processadas de acordo com métodos padronizados. Os resultados alcançados foram analisados para determinar diferenças interespecíficas e sexuais. A avaliação citoquímica incluiu Sudan Black B (SBB), Ácido Periódico de Schiff (PAS) e Benzidina Peroxidase (BP). Os resultados hematológicos e bioquímicos mais relevantes indicaram um número significativamente mais alto de basófilos em B. jararaca e níveis mais altos de cálcio nas fêmeas da maioria das espécies. Os azurófilos marcaram positivamente para todas as colorações. A diferenciação entre trombócitos e linfócitos foi facilmente obtida com PAS. Os basófilos marcaram positivamente apenas com PAS em Bothrops alternatus. A marcação em heterófilos variou consideravelmente entre as espécies. Ultra-estruturalmente, os leucócitos foram semelhantes ao já descrito em literatura com algumas variações no tipo dos grânulos dos basófilos e heterófilos. Os grânulos dos basófilos apresentaram-se redondos em sua maioria, com tamanho e densidade variadas, enquanto que os nos heterófilos foram heterogêneos em forma, tamanho e densidade. / This study reports a panel for hematological, biochemical, morphological and cytochemical data for a group of captive snakes belonging to the genus Bothrops and Crotalus mantained at Instituto Butantan, São Paulo, Brazil. Blood samples were collected from ventral coccigeal vein and were processed according to standard protocols. Cytochemical staining including Sudan Black B (SBB), Periodic Acid-Schiff (PAS) and Benzidine peroxidase (BP) were conducted. Blood values were evaluated to determine interspecific and sex differences. We found a significant increase of basophils in Bothrops jararaca and higher levels of calcium in females. Azurophils stained positively for all stains and a differentiation between lymphocytes and thrombocytes was easily obtained with PAS stain. Basophils stained positively only with PAS in Bothrops alternatus. Heterophils staining varied between species. The ultrastructure of leucocytes were similar within described in literature, with some variations on granules of basophils and heterophils. Basophils granules were round, with heterogeneous size and density; whereas, heterphils granules were heterogeneous in shape, size and density.