A cultura da laranja doce é muito importante ao redor do mundo, em especial no Brasil, maior produtor mundial dessas frutas. A produção citrícola sempre esteve ameaçada por muitas doenças de grande importância, tais como, o cancro cítrico, a clorose variegada dos citros (CVC) e pinta preta. Entretanto, em 2004, surgiu o huanglongbing (HLB) ou greening, que tem devastado pomares, e para a qual ainda não foi encontrada uma solução definitiva. A transgenia pode ser uma técnica auxiliar no manejo desta doença com a busca de cultivares mais tolerantes, em especial ao HLB. Neste trabalho, as pesquisas de transgenia não envolveram genes exógenos à planta como, por exemplo, genes de outros organismos ou genes sintéticos, ou seja, foi baseado em tecnologias mais recentes já aplicadas em outras espécies vegetais, nas quais a transgenia é utilizada para super-expressar genes dos sistemas de defesa da própria planta. Estudos indicam que a super-expressão de genes do sistema de Resistência Sistêmica Adquirida (SAR - do inglês, \"Systemic Acquired Resistance\") promove a resistência de plantas a doenças. Um gene importante para esse sistema é o gene npr1 que controla a expressão das proteínas relacionadas à patogênese (PR), em especial a PR1. Junto do gene npr1, os genes npr3 e npr4 também são reguladores desse sistema, atuando sobre o gene npr1 de acordo com os níveis de ácido salicílico presentes na célula, nível este que varia de acordo com o nível de infecção de cada célula. Porém, a avaliação de um evento transgênico de citros pode levar muitos anos. Desta forma, para diminuir esse tempo de avaliação, pensou-se em usar plantas modelos. O sistema escolhido foi o tomateiro Micro-Tom (Solanun lycopersicum L. cv. Micro-Tom). Para a obtenção das construções gênicas, foram identificados os genes Csnpr1, Csnpr3 e Csnpr4 de Citrus sinensis L. Osbeck a partir dos genes Atnpr1, Atnpr3 e Atnpr4 de Arabidopsis thaliana L.. Os genes de citros foram obtidos a partir de uma planta de laranja doce por RT-PCR e clonados no vetor pCambia 2201, que foi então inserido em Agrobacterium tumefaciens para a transformação genética. Foi feita a transformação genética de plantas de laranja doce (Citrus sinensis L. Osbeck) e do tomateiro Micro-Tom. Após o crescimento dos brotos regenerados, foi feita a avaliação das plantas obtidas por meio de PCR. As plantas geneticamente modificadas foram aclimatizadas. As plantas de citros foram enxertadas e mantidas em casa de vegetação. As plantas de tomateiro Micro-Tom foram propagadas por sementes. A progênie foi avaliada aplicando o antibiótico de seleção canamicina, obtendo-se assim uma linhagem transgênica homozigota. / The sweet orange industry is very important worldwide, specially in Brazil, considered the world´s largest producer. The citrus production has always been threatened by several diseases of great importance, such as canker, CVC, and black spot. However, in 2004, the huanglongbing (HLB) or greening has been detected and devastated many citrus groves, and no definitive solution has been found yet. Transgenes may be a helpful tool for the management of this diseases, leading to the production of tolerant cultivars, especially to HLB. In this work, research on transgenic did not include the use of exogenous genes to the plant, such as genes from other organism or synthetic genes, i.e, it was based on new emerging technologies, already used on other crops, in which transgeny is used to super express genes from the plants own defense system. Studies indicate that a super expression of genes from the system called Systemic Acquired Resistance (SAR) promotes disease resistance. One important gene to this system is the npr1 gene, which controls the expression of the pathogen related proteins (PR), in special the PR1. Together with the npr1 gene, the genes npr3 and npr4 are also regulators of this system, regulating the action of the npr1 gene according to the levels of salicylic acid present in the cell, this level varies with the level of infection in each cell. Nevertheless, evaluating a citrus transgenic event may take several years. In order to shorten this time, model plants were used. The model chosen was the Micro-Tom tomato (Solanun lycopersicum L. cv. Micro-Tom). In order to obtain the genetic constructions, the genes Csnpr1, Csnpr3 e Csnpr4 were identified in Citrus sinensis L. Osbeck from the genes, Atnpr1, Atnpr3 and Atnpr4 present in the Arabidopsis thaliana L. genome. The citrus genes were obtained from the citrus genome using RT-PCR procedure and cloned separately into the pCambia 2201 vector, which was inserted into Agrobacterium tumefaciens in order to perform the genetic transformation. Sweet orange (Citrus sinensis L. Osbeck) and Micro-Tom plants were genetically modified. After the growth of the regenerated shoots, the evaluation of the obtained plants was done through PCR analysis. The genetically modified plants were acclimatized, the citrus plants were grafted and kept in the greenhouse, the Micro-Tom plants were propagated trough seeds and its progeny was evaluated by applying the selection antibiotic kanamycin, thus obtaining a homozygous transgenic line.

Cerca de 38% das árvores cítricas do Estado de São Paulo são afetadas pela Clorose Variegada dos Citros - CVC, causando perdas anuais de cerca de 100 milhões de dólares para as indústrias citrícolas. O agente causal da CVC é uma bactéria gram-negativa, fastidiosa e habitante dos vasos de xilema denominada Xylella fastidiosa, transmitida por cigarrinhas pertencentes à família Cicadellidae, subfamília Cicadellinae. Já foi observado que laranjas doces jovens, na faixa de 3 a 4 anos de idade, são mais sensíveis à CVC do que as plantas adultas. A doença é mais severa em regiões onde estresses adicionais ocorrem, como alta demanda atmosférica por água (decorrente do aumento da temperatura e do déficit de pressão de vapor) e déficit hídrico no solo. Os mecanismos fisiológicos e químicos que caracterizam o estabelecimento da CVC ainda não foram totalmente compreendidos, especialmente sob condições de estresse. Sendo assim, estudos que consideram a interação entre época do ano, regime hídrico e o estabelecimento da CVC em plantas jovens são necessários para auxiliar na elaboração de programas de manejo da doença. O presente trabalho avaliou a sobrevivência de infecções iniciais de X. fastidiosa em plantas cítricas jovens no campo, mantidas com e sem irrigação, 6, 12 e 18 meses após inoculações mecânicas realizadas no verão (mês de janeiro) e inverno (mês de julho). Visando analisar a influência do regime hídrico isoladamente foram realizadas, na época do outono (final de maio e início de junho), inoculações mecânicas e inoculações com as cigarrinhas vetoras Bucephalogonia xanthophis e Dilobopterus costalimai em plantas cítricas jovens mantidas em capacidade de campo e déficit hídrico em casa-de-vegetação; as plantas inoculadas mecanicamente foram avaliadas 5 meses após a data de inoculação, enquanto que as plantas inoculadas com insetos foram avaliadas 10 meses após a data de inoculação. Em condições naturais, foram observadas, 6 meses da data de inoculação, maiores taxas de sobrevivência de infecções iniciais de X. fastidiosa em plantas jovens inoculadas na época de inverno na ausência de estresse hídrico; no entanto, 12 meses da data de inoculação, as plantas inoculadas mantidas com e sem irrigação apresentavam médias populacionais bacterianas estatisticamente iguais. As plantas mantidas em casa-devegetação e inoculadas mecanicamente apresentaram resultados semelhantes àqueles obtidos 6 meses da data de inoculação em condições naturais; no caso da inoculação com cigarrinhas vetoras, foi detectada a presença da bactéria apenas em plantas em capacidade de campo. Estes resultados indicam que o déficit hídrico é um fator desfavorável para o estabelecimento de infecções primárias de X. fastidiosa em plantas cítricas jovens. Os resultados obtidos 12 meses após a inoculação mecânica em condições naturais, logo após a estação de chuva, indicam que, uma vez retirado o estresse hídrico, tal influência negativa deixa de existir e a bactéria readquire sua capacidade de infecção e colonização do hospedeiro. / In Brazil, about 38% of the citric trees of the São Paulo State are affected by the Citrus Variegated Chlorosis - CVC, causing annual losses of about 100 million dollars for the citrus industries. The causal agent of CVC is a gram-negative, fastidious bacterium inhabitant of the xylem vessels called Xylella fastidiosa. It is vectored by sharpshooter leafhoppers pertaining to family Cicadellidae and subfamily Cicadellinae. It was observed that young citrus plants, between 3 and 4 years of age, are more susceptible to CVC than adult plants. The disease is more severe in regions where additional stresses occur, such as high atmospheric demand (due to the increase of temperature and vapor pressure deficit) and water deficit in the soil. The physiological and chemical mechanisms that characterize the establishment of CVC within the host have not yet been totally understood, especially under conditions of stress. Therefore, studies that consider the interaction between seasons, water regime and the establishment of CVC in young plants are necessary in the elaboration of more efficient management programs. The survival of initial infections of X. fastidiosa in young citrus plants mechanically inoculated during the summer and winter, and kept in the field with and without irrigation, were evaluated 6, 12 and 18 months after mechanical inoculations. To analyze the influence of water regime separately, an experiment was carried through during the autumn (final of May and beginning of June) in a greenhouse. Young citrus plants kept in field capacity and water deficit were mechanically inoculated and inoculated with sharpshooter leafhoppers Bucephalogonia xanthophis and Dilobopterus costalimai. The mechanically inoculated plants were evaluated 5 months after the date of inoculation, whereas the plants inoculated with insect vectors were evaluated 10 months after the date of inoculation. In natural conditions, 6 months of the date of inoculation, higher survival rates of initial infections of of X. fastidiosa were detected in inoculated young plants during winter in the absence of water deficit; however, 12 months after inoculation, the young citrus plants kept with and without irrigation presented statistically equal bacterial population averages. The mechanically inoculated plants kept in the greenhouse presented similar results to those kept in natural conditions and analyzed 6 months after mechanical inoculation. In the case of inoculation with sharpshooter leafhoppers, the presence of the bacterium was detected only in plants kept in field capacity. The results demonstrate that the water deficit is unfavorable for the establishment of primary infections of X. fastidiosa in young citrus plants. The results obtained 12 months after mechanical inoculation in natural conditions, right after the rainy season, indicate that, once the water deficit is removed, its negative influence ceases to exist and the bacterium reacquires its capacity of infection and colonization of the host.

Uma das principais doenças da citricultura é o Huanglongbing (HLB, Greening). Não há métodos curativos para o manejo do HLB e minimizam-se seus danos com a eliminação de plantas com sintomas da doença e com o controle do inseto vetor. A manutenção de áreas com plantas doentes e sem o controle de D. citri resulta em risco para a viabilidade econômica de pomares nos quais são empregadas essas estratégias de controle. Os objetivos do presente trabalho foram avaliar o progresso temporal de plantas com sintomas de HLB, a distribuição espacial dessas plantas e seu vetor, a dinâmica populacional de D. citri e estimar o número de armadilhas adesivas amarelas para detecção de adultos do vetor. Os dados de campo foram obtidos de três áreas destinadas à produção de citros, que realizavam o controle para o vetor, e outras duas áreas vizinhas que tinham plantas cítricas sem esse controle. Essas áreas foram amostradas de 2012 a 2016 com o emprego de armadilhas adesivas amarelas. As frequências de captura de D. citri, as médias de adultos/armadilha e as incidências de plantas com HLB, foram maiores em lotes vizinhos de áreas não comerciais, em comparação com lotes vizinhos de áreas comerciais regularmente pulverizadas com inseticidas. As áreas comerciais apresentaram médias de 0,01 a 0,05 adulto/armadilha, enquanto as áreas não comerciais apresentaram médias de 0,20 a 1,32 adulto/armadilha. A proporção desses adultos detectados como bacterilíferos variou de 18% a 72%. Os adultos de D. citri foram detectados quase que exclusivamente em armadilhas localizadas nas bordas dos lotes, em comparação com armadilhas colocadas internamente. Oitenta porcento das plantas com HLB estavam até 80 a 160 metros da borda. O modelo exponencial negativo se ajustou aos dados referente à proporção de plantas com HLB em função da distância da borda, com valores do coeficiente angular de 0,01 a 0,02. Plantas com HLB detectadas nesses lotes apresentaram-se distantes entre si até 90,7 metros, indicando que a infecção das plantas foi relacionada à dispersão de adultos de D. citri provenientes de áreas externas. Estimativas precisas para a média de adultos/armadilha exigem o emprego de dezenas a centenas de armadilhas, o que torna esse procedimento impraticável em áreas regularmente pulverizadas com inseticidas. Os modelos de progresso temporal logístico e de Gompertz se ajustaram à maioria dos dados de proporção de plantas com HLB, com taxas de progresso de 0,43 a 1,18 para o modelo logístico e 0,01 a 0,46 para o modelo de Gompertz. Áreas comerciais, mantidas sem a eliminação frequente de plantas com HLB, mas com controle frequente do vetor, podem ser menos importantes como fontes de inóculo do HLB que plantas não comercias, infectadas e sem tratamentos com inseticidas, o que exige ações adicionais, destinadas às áreas não comerciais, na tentativa de se reduzir as infecções primárias de HLB. / Citrus Huanglongbing, also called HLB or Greening, is one of the most important diseases of citrus. There are no curative methods for HLB management. By consequence, roguing and vector control are recommended measures to prevent new infections. The maintenance of areas with infected trees and without D. citri control put under risk the viability of orchards in which HLB control strategies are employed. The objectives of this work were to evaluate the temporal progress of HLB-symptomatic trees, the spatial distribution of HLB-symptomatic trees and its vector, the population dynamics of D. citri and to estimate the number of yellow sticky traps for adult detection. Data were obtained from three commercial areas where HLB were under management by roguing and insecticide sprays, and two additional neighboring areas without HLB control. All areas were sampled from 2012 to 2016 and adults of psyllid vector were sampled by yellow traps. The capture frequencies of D. citri, the average of adults/trap, and the incidences of HLB-symptomatic plants were higher in plots neighboring non-commercial areas, compared to plots neighboring commercial areas regularly sprayed with insecticides. Commercial areas presented averages ranging from 0.01 to 0.05 adult/trap, while non-commercial areas presented averages between 0.20 to 1.32 adult/trap. The proportion of bacteriliferous adults ranged from 18% to 72%. Adults of D. citri were detected almost exclusively in traps located on the edge of the plots, compared to traps placed internally. Eighty percent of the plants with HLB were distant up to 80 to 160 meters from the edge. The negative exponential model was adjusted to the data concerning the proportion of plants with HLB as a function of distance from the edge, with values of the angular coefficient from 0.01 to 0.02. Affected plants detected in those plots were distant to each other up to 90.7 meters, indicating that infection process was related to D. citri adults from external areas. Precise estimates of adults/trap require the adoption of tens to hundred traps per plot, which makes this procedure impractical in areas regularly sprayed with insecticides. Logistic and Gompertz models fitted for the majority of affected plants proportion data. Rates ranged from 0.43 to 1.18 for Logistic and 0.01 to 0.46 for Gompertz model. Commercial areas, maintained without frequent HLB-plant eradication, but with regular vector control, maybe are less important as HLB sources of inoculum than non-commercial HLB-infected plants, never treated with insecticides, which requires additional efforts to attempt a reduction on the primary spread of HLB.

Nos anos recentes, a atividade agrícola da citricultura vem enfrentando grandes problemas fitossanitários, principalmente, com relação à viabilidade econômica decorrente do controle das doenças. A bactéria Candidatus Liberibacter spp. está associada ao HLB, a principal doença que limita a produção das plantas cítricas. Assim, muitos pesquisadores têm voltado suas atenções para estudarem e encontrarem genes-alvo na resposta do hospedeiro a este patógeno para utilização no melhoramento genético. Nesse sentido, métodos de transformação genética das plantas cítricas são essenciais, porém características inerentes à espécie limitam seu cultivo in vitro e requerem um maior tempo para crescimento e propagação. Com isso, torna-se importante o estudo em plantas modelo, principalmente, para seguir protocolos de validação de genes. De acordo com o exposto, o gene EDS5 isolado de Citrus sinensis, associado ao mecanismo de Resistência Sistêmica Adquirida (SAR) foi superexpresso por meio da transformação genética em tomateiro (Solanum lycopersicum L. Micro-Tom). Após o crescimento dos brotos regenerados, foram identificadas as plantas positivas por meio de análise de GUS e PCR. Linhagens transgênicas homozigotas foram obtidas com avaliação da resistência ao antibiótico canamicina. / In the recent years, the agricultural activity of the citrus industry has been facing big phytosanitary problems, mainly with regard to economic viability arising from disease control. The bacterium Candidatus Liberibacter spp. is associated with HLB, the main disease that limits the production of citrus trees. Thus, many researchers have been returning their attentions to study and find target genes in the host response to this pathogen for use in the genetic improvement. In this way, methods of genetic transformation of citrus plants are essential, but the inherent characteristics of the species border your in vitro cultivation and require a longer time for growth and propagation. Therefore, it is important to study of model plants, mainly for genetic validation protocols. Thus, the EDS5 gene isolated from Citrus sinensis, associated with Systemic Acquired Resistance mechanism (SAR) was overexpressed by genetic transformation in tomato (Solanum lycopersicum L. Micro-Tom). After the growth of regenerated shoots, positive plants were identified by PCR and GUS analysis. Homozygous transgenic lines were obtained with evaluation of resistance to kanamycin.

A citricultura brasileira destaca-se como a de maior expressão em nível mundial, com cerca de 27,9% da produção mundial de laranjas e 59% da produção global de suco concentrado congelado de laranja. No entanto, apresenta uma vulnerabilidade que é o predomínio de uma única espécie de porta-enxerto, o limão \'Cravo\', com aproximadamente 85% das plantas cítricas plantadas sobre ele. Assim, uma maior diversificação dos porta-enxertos é necessária mas isto depende também da obtenção e da disponibilização de variedades superiores ao limão Cravo. O porta-enxerto é de fundamental importância na formação da muda cítrica, visto que ele interfere em vários aspectos da planta enxertada, dentre eles o vigor da copa e o tamanho das plantas. Atualmente, devido ao surgimento de novas doenças e a necessidade de maximização dos recursos alocados na propriedade citrícola, tem sido utilizado o plantio de pomares mais adensados, com consequentemente aumento no interesse da produção de plantas com menor porte. Uma das possibilidades de se obter plantas de porte baixo é por meio do uso de portaenxertos ananicantes ou semi-ananicantes, sendo que alguns autores já verificaram que plantas autotetraplóides, quando usadas como porta-enxertos, induzem à formação de plantas de porte baixo. O objetivo inicial deste trabalho foi obter e identificar plantas autopoliplóides de limão Cravo, tangerinas Cleópatra e Sunki, utilizando-se o método de cultivo in vitro de segmentos de epicótilo temporariamente em meio de cultura contendo colchicina, seguido de regeneração das brotações em meio sem o alcalóide. A colchicina causou toxidez aos explantes, nos diversos tempos de cultivo e concentrações testadas. Várias plantas foram obtidas e dentre estas, 27 foram selecionadas por possuir características morfológicas semelhantes à plantas poliplóides. A seguir, foram realizados experimentos com seis plantas selecionadas (duas de cada espécie) visando confirmar a ploidia e a origem nucelar, além de caracterizar a morfologia das folhas, a densidade estomática e alguns parâmetros fisiológicos. Dentre as seis plantas, apenas quatro foram confirmadas como sendo autotetraplóides pelo método de citometria de fluxo. Estas, geralmente apresentaram folhas com comprimento significativamente menor, maior espessura do limbo foliar e menor densidade estomática nas folhas. Todas as seis plantas apresentaram alguma modificação em parâmetros fisiológicos, mas ainda não se pode determinar se estas modificações poderão afetar as taxas de crescimento. / The Brazilian citriculture stands out as the greatest expression worldwide, with about 27.9% of world production of oranges and 59% of global production of frozen orange juice concentrate. However, it presents a vulnerability that is the predominance of a single species of rootstock, the \'Cravo\' lemon, with approximately 85% of citrus planted on it. Thus, greater diversification of rootstocks is necessary, which also depends on obtaining and provision of superior kind of lemon Cravo. The rootstock is of fundamental importance in shaping the citrus scion, since it interferes with various aspects of graft, such as the vigour of the graft and plant size. Currently, due the appearance of new diseases and the need to maximize resources allocated in the citrus farm, more dense citrus orchards have been used, increasing the interest in the production of smaller plants. One of the possibilities of obtaining plants of small size is through the use of dwarf or semi-dwarf rootstocks, and some authors have found that plants autotetraploids, when used as rootstock, induce the formation of small-sized plants. The initial objective of this study was to obtain and identify plants autopoliploids of \'Cravo\' lemon, \'Cleopatra\' and \'Sunki\' tangerines, using the method of in vitro culture of segments of epicotyl temporarily in the culture medium containing colchicine, followed by shoots regeneration in medium without the alkaloid. The colchicine caused toxicity in explants, at the different times of cultivation and concentrations tested. Several plants were obtained and among these, 27 were selected for morphological characteristics similar to polyploid plants. Afterwards, trials were conducted with six selected plants (two of each kind) to confirm the nucelar ploidy origin, and to characterize the morphology of the leaves, stomatal density and some physiological parameters. Among the six plants, only four were confirmed as autotetraploids by method of flow cytometry. These, generally presented leaves with small length, greater thickness of the leaf lamina and lower stomatal density in leaves. All six plants showed some change in physiological parameters, but data could not determine whether these changes could affect the plants growth rates

A transformação genética é uma alternativa ao melhoramento convencional de citros que permite a modificação de genótipos pela introdução de um ou mais genes oriundos de organismos semelhantes ou filogeneticamente distantes do hospedeiro. Os genes transferidos para espécies de interesse devem ser controlados por promotores, os quais regulam a expressão gênica de forma temporal, espacial e na magnitude desejada. Na maioria dos casos, os genes são expressos de forma constitutiva utilizando o promotor CaMV35S isolado do Vírus do Mosaico da Couve Flor. No entanto, o desenvolvimento de novas abordagens de transformação de plantas (cisgenia e intragenia), que fazem o uso de genes e sequências regulatórias derivadas da mesma espécie ou espécies relacionadas, requer a disponibilidade de elementos genéticos, incluindo promotores constitutivos, isolados de citros. Assim, o objetivo do trabalho foi clonar e caracterizar promotores constitutivos de Citrus sinensis. Para isso, a região promotora dos genes Fator de elongação 1-α (CsEF1), Gliceraldeido-3-fosfato-desidrogenase C2 (CsGAPC2) e Cyclofilina (CsCYC) foi isolada e avaliados pela fusão ao gene repórter uidA. A funcionalidade dos três promotores foi confirmada por ensaio histoquímico da atividade GUS em folhas, caules e raízes de plantas transgênicas de citros cv. \'Hamlin\'. A análise de RT-qPCR mostra que a expressão do gene uidA sob controle dos promotores CsCYC, CsGAPC2 e CsEF1 correspondeu a uma atividade aproximada de 64%, 58% e 47%, respectivamente em comparação com o promotor CaMV35S. A análise in silico dos promotores CsGAPC2, CsCYC e CsEF1 mostra que a atividade de cada um é controlada por uma série de putativos elementos cis-regulatórios. A sequência completa e versões truncadas originadas a partir de deleções em cada promotor foram fundidas ao gene uidA e analisadas em plantas transgênicas de Nicotiana benthamiana pelo ensaio histoquímico e fluorimétrico da atividade GUS. As análises de deleções não causaram perda de função dos promotores em estudo, mas afetaram a expressão gênica nos promotores CsGAPC2 e CsEF1. Os promotores isolados representam bons candidatos a serem utilizados em trabalhos de transformação genética de citros. / Genetic transformation is an alternative to citros conventional breeding that allows the modification of genotypes by the introduction of one or more genes derived from different organisms that can not be crossed by natural means. The transferred genes to the species of interest are controlled by promoters, which regulate a gene expression temporally, spatially and in the desired magnitude. In most cases, the introduced genes have been constitutively expressed using the CaMV35S promoter obtained from the cauliflower mosaic virus. However, the development of novel plant transformation approaches (cisgenesis and intragenesis) imply the use of genetic material from the same species or from closely related species capable of sexual hybridization, which requires the isolation of genetic elements, including citros constitutive promoters. The objective of this study was clone and characterize Citrus sinensis constitutive promoters. For this, the promoter region of the genes Elongation Factor 1-α (CsEF1), Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase C2 (CsGAPC2) and Cyclofiline (CsCYC) was isolated and evaluated by fusion to the uidA reporter gene. The functionality of three promoter was confirmed by histochemical GUS assay in leaves, stems and roots of transgenic citrus plants cv. \'Hamlin\'. RT-qPCR analysis revealed that uidA gene expression under control of the CsCYC, CsGAPC2 and CsEF1 promoters was approximately 64%, 58% and 47% expression compared with the CaMV35S promoter. In silico analysis of the CsGAPC2, CsCYC and CsEF1 promoters displays their activity is controlled by a series of putative cis-regulatory elements. The full length promoter and truncated versions originated from deletions in promoters sequences were fused to the uidA gene and analyzed in Nicotiana benthamiana transgenic plants by histochemical and fluorimetric GUS assay. Deletion analysis did not cause loss of function on any of the promoters, but affected the gene expression on CsGAPC2 and CsEF1 truncated versions. The isolated promoters represent good candidates to be used in citros genetic transformation.

A citricultura brasileira destaca-se como a de maior expressão em nível mundial, com cerca de 27,9% da produção mundial de laranjas e 59% da produção global de suco concentrado congelado de laranja. No entanto, apresenta uma vulnerabilidade que é o predomínio de uma única espécie de porta-enxerto, o limão \'Cravo\', com aproximadamente 85% das plantas cítricas plantadas sobre ele. Assim, uma maior diversificação dos porta-enxertos é necessária mas isto depende também da obtenção e da disponibilização de variedades superiores ao limão Cravo. O porta-enxerto é de fundamental importância na formação da muda cítrica, visto que ele interfere em vários aspectos da planta enxertada, dentre eles o vigor da copa e o tamanho das plantas. Atualmente, devido ao surgimento de novas doenças e a necessidade de maximização dos recursos alocados na propriedade citrícola, tem sido utilizado o plantio de pomares mais adensados, com consequentemente aumento no interesse da produção de plantas com menor porte. Uma das possibilidades de se obter plantas de porte baixo é por meio do uso de portaenxertos ananicantes ou semi-ananicantes, sendo que alguns autores já verificaram que plantas autotetraplóides, quando usadas como porta-enxertos, induzem à formação de plantas de porte baixo. O objetivo inicial deste trabalho foi obter e identificar plantas autopoliplóides de limão Cravo, tangerinas Cleópatra e Sunki, utilizando-se o método de cultivo in vitro de segmentos de epicótilo temporariamente em meio de cultura contendo colchicina, seguido de regeneração das brotações em meio sem o alcalóide. A colchicina causou toxidez aos explantes, nos diversos tempos de cultivo e concentrações testadas. Várias plantas foram obtidas e dentre estas, 27 foram selecionadas por possuir características morfológicas semelhantes à plantas poliplóides. A seguir, foram realizados experimentos com seis plantas selecionadas (duas de cada espécie) visando confirmar a ploidia e a origem nucelar, além de caracterizar a morfologia das folhas, a densidade estomática e alguns parâmetros fisiológicos. Dentre as seis plantas, apenas quatro foram confirmadas como sendo autotetraplóides pelo método de citometria de fluxo. Estas, geralmente apresentaram folhas com comprimento significativamente menor, maior espessura do limbo foliar e menor densidade estomática nas folhas. Todas as seis plantas apresentaram alguma modificação em parâmetros fisiológicos, mas ainda não se pode determinar se estas modificações poderão afetar as taxas de crescimento. / The Brazilian citriculture stands out as the greatest expression worldwide, with about 27.9% of world production of oranges and 59% of global production of frozen orange juice concentrate. However, it presents a vulnerability that is the predominance of a single species of rootstock, the \'Cravo\' lemon, with approximately 85% of citrus planted on it. Thus, greater diversification of rootstocks is necessary, which also depends on obtaining and provision of superior kind of lemon Cravo. The rootstock is of fundamental importance in shaping the citrus scion, since it interferes with various aspects of graft, such as the vigour of the graft and plant size. Currently, due the appearance of new diseases and the need to maximize resources allocated in the citrus farm, more dense citrus orchards have been used, increasing the interest in the production of smaller plants. One of the possibilities of obtaining plants of small size is through the use of dwarf or semi-dwarf rootstocks, and some authors have found that plants autotetraploids, when used as rootstock, induce the formation of small-sized plants. The initial objective of this study was to obtain and identify plants autopoliploids of \'Cravo\' lemon, \'Cleopatra\' and \'Sunki\' tangerines, using the method of in vitro culture of segments of epicotyl temporarily in the culture medium containing colchicine, followed by shoots regeneration in medium without the alkaloid. The colchicine caused toxicity in explants, at the different times of cultivation and concentrations tested. Several plants were obtained and among these, 27 were selected for morphological characteristics similar to polyploid plants. Afterwards, trials were conducted with six selected plants (two of each kind) to confirm the nucelar ploidy origin, and to characterize the morphology of the leaves, stomatal density and some physiological parameters. Among the six plants, only four were confirmed as autotetraploids by method of flow cytometry. These, generally presented leaves with small length, greater thickness of the leaf lamina and lower stomatal density in leaves. All six plants showed some change in physiological parameters, but data could not determine whether these changes could affect the plants growth rates

Submitted by CAROLINA DE MARCHI SANTIAGO DA SILVA null (carolmsantiago@gmail.com) on 2018-01-26T00:36:21Z No. of bitstreams: 1 tese_ repositório.pdf: 9864100 bytes, checksum: 750ed24c6bf82e4cb76088a6ef42e3ee (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Santulo Custódio de Medeiros null (asantulo@rc.unesp.br) on 2018-01-26T11:13:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 silva_cms_dr_rcla.pdf: 9847207 bytes, checksum: d4dc0d33ef54769d644003d06014b328 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-26T11:13:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 silva_cms_dr_rcla.pdf: 9847207 bytes, checksum: d4dc0d33ef54769d644003d06014b328 (MD5) Previous issue date: 2017-11-28 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Presente em solos ácidos, o alumínio principalmente encontrado na sua forma tóxica (Al3+) tem como principal efeito a diminuição do crescimento radicular. O Cerrado ocorre no centro-oeste do Brasil sob solos ácidos (pH <4) e com alto teor de alumínio (Al). Citrus limonia cv ‘Cravo’ Osbeck e Styrax camporum Pohl compartilham localização geográfica e características edáficas em que se estabelecem, no entanto exibem respectivamente sensibilidade e tolerância ao Al. O presente trabalho visa elucidar mecanismos envolvidos no estresse por Al3+ a nível de expressão gênica radicular. Para as duas espécies foi feita uma análise de transcriptoma para avaliar os efeitos do Al por uma perspectiva global, e a partir destes resultados alguns genes foram selecionados para avaliação ao longo de experimentos de hidroponia mantido por 60 dias. São discutidas estratégias de tolerância e sensibilidade ao Al nas duas espécies, juntamente com análises de biometria, quantificação hormonal e anatomia que corroboram o comportamento sensível de Citrus e tolerante de Styrax por diversas vias. Além disso, o último capítulo trata da dependência do pH em um importante mecanismo de tolerância ao Al em trigo envolvendo exsudação de ácido orgânico. / Present in acid soils, aluminum mainly found in its toxic form (Al3+) has as main effect the decrease of root growth. Cerrado occurs in central-western Brazil under acid soils (pH <4) and high aluminum content (Al). Citrus limonia (Osbeck) and Styrax camporum (Pohl) share geographic location and edaphic characteristics in where they are settled, however exhibiting respectively Al-sensitivity and Al-tolerance. The present work aims to elucidate the mechanisms involved in Al3+ stress at root gene expression level. For both species, a transcriptome analysis was performed to evaluate the effects of Al in a global perspective, and from these results some genes were selected for evaluation in hydroponic experiments maintained for 60 days. Al tolerance and sensitivity strategies are discussed in both species, together with analyzes of biometrics, hormonal quantification and anatomy data that corroborate the Al-sensitive behavior of Citrus and Al-tolerance in Styrax by several routes. In addition, the last chapter deals with the dependence of pH on one important mechanism of Al tolerance in wheat involving organic acid exudation. / FAPESP: 2013/11370-3

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-04-27T17:06:11Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 670459 bytes, checksum: 8266d1cee24912d4e54135393a125da7 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-27T17:06:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 670459 bytes, checksum: 8266d1cee24912d4e54135393a125da7 (MD5) Previous issue date: 2001-03-22 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Este experimento teve como objetivo avaliar os efeitos de cinco concentrações de alumínio (0, 50, 100, 200 e 400 μmol L-1 de Al) sobre as trocas gasosas, a fluorescência da clorofila, o crescimento e a composição mineral dos porta-enxertos limoeiros Cravo (Citrus limonia Osbeck ) (CR) e Volkameriano (Citrus volkameriana Hort. ex Tan.) (VL), e tangerineiras Cleópatra (Citrus reshni Hort. ex Tan) (CL) e Sunki (Citrus sunki Hort. ex Tan.) (SK), em cultivo hidropônico. O experimento foi montado segundo o esquema de parcelas subdivididas, tendo nas parcelas as concentrações de Al e nas subparcelas os porta-enxertos. Os tratamentos foram distribuídos no delineamento de blocos casualizados, com quatro repetições. A presença de 14, 18 e 55 μmol L-1 de Al na solução nutritiva, aumentou a taxa fotossintética líquida (A) nos porta-enxertos CR, SK e CL, respectivamente, verificando-se decréscimo com o aumento da concentração de Al. No VL houve efeito inibitório do Al sobre a A, mesmo em baixas concentrações. Com o aumento da concentração de Al, houve incremento da concentração interna de CO2 em todos os porta-enxertos. A condutância estomática ao vapor de água (gs) e a taxa transpiratória (E) aumentaram na presença do Al nas duas tangerineiras. Todas as características relacionadas com a fluorescência da clorofila diminuíram em função da concentração de Al, com exceção da relação Fv/Fm na tangerineira CL. Em todos os porta-enxertos, a taxa relativa de crescimento da massa de matéria fresca total da planta aumentou na presença de baixas concentrações de Al (15 a 35 μmol L-1) na solução nutritiva, decrescendo na presença de maiores concentrações. O crescimento da parte aérea, a relação de área foliar e a relação de massa foliar diminuíram em todos os porta- enxertos na presença do Al. No limoeiro Cravo verificou-se decréscimo de crescimento do sistema radicular a partir de 23 μmol L-1 de Al. Nos demais porta-enxertos, esse crescimento atingiu valores máximos na presença de 91 a 117 μmol L-1 de Al. Com o aumento da concentração de Al na solução nutritiva, verificou-se, na matéria seca do sistema radicular de todos os porta-enxertos, decréscimos dos teores de N-orgânico, P, Cu, Mn e Zn. Na matéria seca da parte aérea de todos os porta-enxertos, houve decréscimos dos teores de P e S em função da concentração de Al. Houve aumento do teor de Al no sistema radicular e na parte aérea de todos os porta-enxertos, em função da concentração de Al na solução nutritiva; esse acúmulo no sistema radicular foi de 11,4 a 30,6 vezes maior em comparação à parte aérea. Considerando-se as características das trocas gasosas, da fluorescência da clorofila e do crescimento de planta, o limoeiro Cravo foi o mais sensível ao Al, enquanto que a tangerineira Cleópatra , foi o porta-enxerto mais tolerante. / The objective of this experiment was to evaluate the effects of five aluminium (Al) concentrations (0, 50, 100, 200, and 400 μmol L-1) on gas exchange, chlorophyll fluorescence, growth and mineral composition of the following lemon rootstocks: 'Cravo'(Citrus limonia Osbeck) (CR) and 'Volkameriano' (Citrus Volkameriana Hort. Ex Tan. (VL) and tangerine rootstocks 'Cleopatra'(Citrus reshni Hort. Ex Tan) (CL) and 'Sunki' (Citrus sunki Hort. Ex Tan.) (SK), in hydroponic culture. The experiment followed a split plot scheme with the plots being the Al concentrations and the subplots, the rootstocks, arranged in a randomized block design, with four replications. The presence of 14, 18 and 55 μml L-1 of Al in the nutritive solution increased the net photosynthesis (A) in the rootstocks CR, SK and CL, respectively, decreasing with increased Al concentration. Al inhibited A in the VL, even under low concentrations. Increased Al concentration increased internal CO2 concentration, in all rootstocks. Stomatal conductance to water vapor (g s) and transpiration rate (E) increased under Al, for both tangerine. All the characteristics related with chlorophyll fluorescence decreased as a function of Al concentration, except the Fv/Fm relation in the tangerine CL. In all rootstocks, the relative growth rate of the plant's total fresh matter mass increased under low Al concentrations (15 to 35 μmol L-1) in the nutritive solution, decreasing under larger concentrations. Growth of the shoot, leaf area ratio and leaf weight ratio decreased in all rootstocks in the presence of Al. The 'Cravo' lemon had a decrease in the root system growth, starting from 23 μmol L-1 of Al. For the remaining rootstocks, this growth reached maximum values with 91 to 117 μmol L-1 of Al. Increased Al concentration in the nutritive solution caused decrease in organic-N, P, Cu, Mn and Zn concentration in the root system's dry matter of all rootstocks. There was decrease of P and S concentration in the dry matter of the shoots of all rootstocks, as a function of Al concentration. Al concentration in the roots and shoot of all rootstocks increased as a function of Al concentration in the nutritive solution; this accumulation in the roots was 11.4 to 30.6 times higher than that in the shoots. Considering the characteristics of the gas exchange, chlorophyll fluorescence and plant growth, the lemon 'Cravo' was the most susceptible to Al, while the tangerine 'Cleopatra' was the most tolerant. / Não foi localizado o cpf do autor.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-21T11:47:30Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 298427 bytes, checksum: c46dd68ae5f9facc96a28c7cde074e74 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-21T11:47:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 298427 bytes, checksum: c46dd68ae5f9facc96a28c7cde074e74 (MD5) Previous issue date: 2002-12-12 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A caracterização física de dois solos típicos de Tabuleiros Costeiros da Bahia e a avaliação do sistema radicular de citros em tais solos foi realizada em 2001, visando estabelecer atributos que melhor identifiquem a camada coesa. Em cada um dos solos foram abertas três trincheiras de 3,00 x 2,00 x 1,20 m (Latossolo Amarelo, Cruz das Almas) e 3,00 x 2,00 x 0,85 m (Argissolo Acinzentado, Rio Real), amostrando-se o solo dos primeiros quatro horizontes, em cinco posições na trincheira (duas em relação à linha e três em relação à entrelinha do pomar), para as análises físicas de granulometria, argila dispersa em água, densidade do solo, porosidade total, macroporosidade, microporosidade, condutividade hidráulica em meio saturado, diâmetro médio ponderado de agregados, densidade máxima do solo e umidade crítica de compactação. Também foram determinadas a resistência à penetração e a umidade crítica de resistência à penetração. Amostras de raízes foram coletadas nos mesmos horizontes, em dois planos perpendiculares (linha e entrelinha), semelhante a um sistema de eixos cartesianos, com a planta no ponto zero. O primeiro local de amostragem foi a 0,50 m do tronco, seguindo viiide 0,50 em 0,50 m até a distância média da próxima planta. As imagens digitalizadas das raízes foram processadas no aplicativo GSRoot, expressando-se os dados em cm de raízes/cm3 de solo. Foi brusca a diminuição da densidade de raízes de citros nos horizontes AB, Bw1, BA e Bt1, associada ao aspecto coeso. A densidade do solo pode ser considerada um atributo para avaliar a presença de horizontes coesos, tendo como limitações à amplitude de variação e a interferência da granulometria na manifestação dos seus valores. A macroporosidade revelou-se um atributo importante para identificar a coesão, devido à sua grande redução nos horizontes coesos, por ser a integração de atributos importantes envolvidos na coesão e por apresentar regressões positivas com a densidade de raízes de citros. A condutividade hidráulica em meio saturado foi outro atributo que se revelou adequado para avaliar a coesão, podendo, devido à dificuldade de sua medição, ser substituída pela macroporosidade. A resistência do solo à penetração foi quem melhor identificou a coesão, discriminando muito bem os horizontes coesos. Os dados de umidade crítica de resistência à penetração obtidos indicam a umidade do solo em que se deve avaliar a resistência à penetração para identificar a presença de coesão. Os indicadores de coesão recomendados permitem detectar a sua presença, orientando intervenções de manejo para superar os problemas de aprofundamento do sistema radicular que tais solos apresentam. / Physical characterization of two typical soils of Coastal Table Lands of Bahia, and evaluation of citros root system in such soils were carried out in 2001, in order to establish attributes that best identifies the cohesive layer. In each soil were open three trenches of 3.00 x 2.00 x 1.20 m (Yellow Latosol, Cruz das Almas county) and 3.00 x 2.00 x 0.85 m (Gray Argisol, Rio Real county). In each trench were sampled the first four horizons, in five sampling positions (two in relation to the row and three in relation to the interrow of the orchard), for the physical analyses of particle size distribution, water clay dispersed, soil bulk density, total porosity, macroporosity, microporosity, saturated hydraulic conductivity, aggregate mean wheight, maximum bulk density of compaction, and soil critical humidity of compaction. Soil resistance to penetration and critical humidity of soil resistance to penetration were made. Samples of citros roots were collected in the same horizons, in two perpendicular plans (row and interrow), in similar way to a Cartesian system, with the tree in the zero point. First sampling was 0.50 m from the trunk tree, proceeding of 0.50 in 0.50 m toward the next plant. Scanned root images were xprocessed in the software GSRoot. Root data were expressed in cm of roots by cm3 of soil. Citros root system density decreased abruptly in AB, Bw1, BA, and Bt1 horizons, associated to the cohesion. Soil bulk density can be considered an attribute to evaluate the presence of cohesive horizons, having as limitations the variation and the interference of the particle size in its values. Macroporosity was revealed an important attribute to identify the cohesion, due to its great reduction in the cohesive horizons, besides could be considered as an integration of important soil attributes involved in the cohesion, and for presenting positive regressions with the citros root density. Saturated hydraulic conductivity was another attribute that was revealed appropriate to evaluate the cohesion; due to its difficult measurement, can be substituted by macroporosity. The best attribute to identify the cohesion was the soil resistance to penetration, which discriminated very well the cohesive horizons. The data of critical humidity of soil resistance to penetration are an important indication of the soil humidity to evaluate soil resistance to penetration to identify the cohesion presence. The cohesion indicators recommended allow to detect its presence, guiding soil management practices to overcome the impediment problems to root growth in depth that such soils present.