Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-10-05T14:02:26Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1221381 bytes, checksum: 8b7948dee7d4e851c051f3d03e863dcb (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-05T14:02:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1221381 bytes, checksum: 8b7948dee7d4e851c051f3d03e863dcb (MD5) Previous issue date: 2003-07-31 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A proteína de ligação (BiP) é um importante componente de resposta ao estresse no retículo endoplasmático (RE). Tem sido demonstrado que níveis elevados de BiP em tabaco transgênico de linhagens senso conferem tolerância à tunicamicina, um inibidor de glicosilação, durante a germinação e tolerância ao déficit hídrico durante o crescimento das plantas. Para avaliar a função protetora de BiP contra estresses abióticos, linhagens homozigotas T3 expressando o gene BiP da soja na orientação senso e anti-senso, foram obtidas através de análises de segregação do loco do T-DNA das gerações T2 e T3. Sob déficit hídrico progressivo, níveis de BiP em folhas de linhagens transgênicas com a orientação senso estão correlacionados com a manutenção da turgidez de broto e do conteúdo de água, independentemente do grau de intensidade do estresse. Contudo, o efeito protetor da superexpressão de BiP contra estresse hídrico não é perdido na expressão do cDNA de BiP da geração T4 das linhagens homozigotas anti-senso. A suscetibilidade das linhagens anti-senso ao déficit hídrico foi similar aos controles, plantas não-transformadas. Esse resultado pode indicar que ocorreu seleção natural dos transformantes com baixa expressão do gene anti- senso nas gerações subseqüentes. O caráter essencial dos genes BiP pode levar a uma pressão seletiva para o silenciamento do gene anti-senso. A função de BiP na tolerância contra estresses do RE foi investigada na geração T3 de plantas transgênicas senso e anti-senso de N. tabacum. Aparentemente, a superexpressão constitutiva de BiP não atenuou a letalidade ocasionada pela inibição da glicosilação pela tunicamicina nas concentrações de 0,6 a 1,0 μg/mL. Nessas condições, a tunicamicina inibe a indução de brotos mais eficientemente em plantas superexpressando BiP do que nas selvagens. Análises de immunoblottings detectaram aumento no nível de BiP nas concentrações de tunicamicina de 0,8 e 1,0 μg/mL. A indução de BiP foi coordenada com o acúmulo de um produto de degradação de 25-28 kDA, indicando a existência de uma co-regulação entre a via de resposta a proteínas mal dobradas (UPR) e o sistema de degradação de proteínas associadas ao RE em células de plantas. O aumento no nível de BiP em discos foliares transgênicos senso foi similar ao observado em controles após o tratamento com tunicamicina. Entretanto, o tratamento de discos foliares senso não promoveu acúmulo adicional de BiP nem do produto de degradação de 25-28 kDa. Tais resultados evidenciam que o nível de BiP pode atuar como sensor para ativação de resposta a estresses em plantas. Portanto, elevados níveis de BiP em células de plantas inibem a ativação da via UPR e podem evitar a ativação do sistema ERAD. / The binding protein (BiP) is an important component of endoplasmic reticulum stress response of cells. Elevated levels of BiP in sense transgenic tobacco (Nicotiana tabacum L. cv Havana) lines have been shown to confer tolerance to the glycosylation inhibitor tunicamycin during germination and tolerance to water deficit during plant growth. In order to further examine the protective function of BiP against abiotic stresses, homozygous T3 lines constitutively expressing a soybean BiP gene in the sense and antisense orientation were obtained by following the segregation of the T-DNA locus in the T2 and T3 generations. Under progressive drought, the leaf BiP levels in the sense transgenic lines correlated with the maintenance of the shoot turgidity and water content, regardless of stress intensity. Nevertheless, the protective effect of BiP overexpression against water stress was not disrupted by expression of an antisense BiP cDNA construct in the T4 generation of homozygous anti-sense lines. In fact, the susceptibility of the antisense lines to water deprivation was similar to the untransformed, control plants. This result may indicate the occurrence of natural selection for low antisense gene expression in the subsequent generations. The essential character of BiP genes may lead to a selective pressure towards antisense gene silencing. The BiP-mediated tolerance against ER stressors was also investigated in the T3 generations of N. tabacum sense and antisense transgenic plants. Apparently constitutive overexpression of BiP did not attenuate the lethality caused by inhibition of protein glycosylation at 0,6 to 1,0 μg/mL of tunicamycin In fact, under this condition, tunicamycin inhibited the induction of shoots more efficiently in BiP overproducers than in wild type plants. Analysis of control disc leaves by immunoblottings detected a significant increase in BiP protein levels at 0,8 and 1,0 μg/mL of tunicamycin. The induction of BiP was coordinate with the accumulation of a 25-28 kDA specific degradation product of the protein, suggesting the existence of co- regulation between the activation of BiP synthesis via UPR (unfolded protein response ) and its specific degradation, probably via ERAD (ER-associated protein degradation) in plant cells. The enhanced level of BiP in the sense transgenic disc leaves was similar to that observed in wild type cells after treatment with tunicamycin. Nevertheless, treatment of sense disc leaves with tunicamycin did not promote an additional accumulation of BiP and did not cause accumulation of the 25-28 kDa specific degradation product. Taken together, these results suggest that the BiP levels may act as an ER sensor for activation of plant ER stress response. Therefore, elevated levels of BiP in plant cells inhibit activation of the unfolded protein pathway and, in turn, may prevent activation of the ERAD system upon accumulation of unfolded protein in the ER. / Dissertação importada do Alexandria

A citricultura brasileira destaca-se como a de maior expressão em nível mundial, com cerca de 27,9% da produção mundial de laranjas e 59% da produção global de suco concentrado congelado de laranja. No entanto, apresenta uma vulnerabilidade que é o predomínio de uma única espécie de porta-enxerto, o limão \'Cravo\', com aproximadamente 85% das plantas cítricas plantadas sobre ele. Assim, uma maior diversificação dos porta-enxertos é necessária mas isto depende também da obtenção e da disponibilização de variedades superiores ao limão Cravo. O porta-enxerto é de fundamental importância na formação da muda cítrica, visto que ele interfere em vários aspectos da planta enxertada, dentre eles o vigor da copa e o tamanho das plantas. Atualmente, devido ao surgimento de novas doenças e a necessidade de maximização dos recursos alocados na propriedade citrícola, tem sido utilizado o plantio de pomares mais adensados, com consequentemente aumento no interesse da produção de plantas com menor porte. Uma das possibilidades de se obter plantas de porte baixo é por meio do uso de portaenxertos ananicantes ou semi-ananicantes, sendo que alguns autores já verificaram que plantas autotetraplóides, quando usadas como porta-enxertos, induzem à formação de plantas de porte baixo. O objetivo inicial deste trabalho foi obter e identificar plantas autopoliplóides de limão Cravo, tangerinas Cleópatra e Sunki, utilizando-se o método de cultivo in vitro de segmentos de epicótilo temporariamente em meio de cultura contendo colchicina, seguido de regeneração das brotações em meio sem o alcalóide. A colchicina causou toxidez aos explantes, nos diversos tempos de cultivo e concentrações testadas. Várias plantas foram obtidas e dentre estas, 27 foram selecionadas por possuir características morfológicas semelhantes à plantas poliplóides. A seguir, foram realizados experimentos com seis plantas selecionadas (duas de cada espécie) visando confirmar a ploidia e a origem nucelar, além de caracterizar a morfologia das folhas, a densidade estomática e alguns parâmetros fisiológicos. Dentre as seis plantas, apenas quatro foram confirmadas como sendo autotetraplóides pelo método de citometria de fluxo. Estas, geralmente apresentaram folhas com comprimento significativamente menor, maior espessura do limbo foliar e menor densidade estomática nas folhas. Todas as seis plantas apresentaram alguma modificação em parâmetros fisiológicos, mas ainda não se pode determinar se estas modificações poderão afetar as taxas de crescimento. / The Brazilian citriculture stands out as the greatest expression worldwide, with about 27.9% of world production of oranges and 59% of global production of frozen orange juice concentrate. However, it presents a vulnerability that is the predominance of a single species of rootstock, the \'Cravo\' lemon, with approximately 85% of citrus planted on it. Thus, greater diversification of rootstocks is necessary, which also depends on obtaining and provision of superior kind of lemon Cravo. The rootstock is of fundamental importance in shaping the citrus scion, since it interferes with various aspects of graft, such as the vigour of the graft and plant size. Currently, due the appearance of new diseases and the need to maximize resources allocated in the citrus farm, more dense citrus orchards have been used, increasing the interest in the production of smaller plants. One of the possibilities of obtaining plants of small size is through the use of dwarf or semi-dwarf rootstocks, and some authors have found that plants autotetraploids, when used as rootstock, induce the formation of small-sized plants. The initial objective of this study was to obtain and identify plants autopoliploids of \'Cravo\' lemon, \'Cleopatra\' and \'Sunki\' tangerines, using the method of in vitro culture of segments of epicotyl temporarily in the culture medium containing colchicine, followed by shoots regeneration in medium without the alkaloid. The colchicine caused toxicity in explants, at the different times of cultivation and concentrations tested. Several plants were obtained and among these, 27 were selected for morphological characteristics similar to polyploid plants. Afterwards, trials were conducted with six selected plants (two of each kind) to confirm the nucelar ploidy origin, and to characterize the morphology of the leaves, stomatal density and some physiological parameters. Among the six plants, only four were confirmed as autotetraploids by method of flow cytometry. These, generally presented leaves with small length, greater thickness of the leaf lamina and lower stomatal density in leaves. All six plants showed some change in physiological parameters, but data could not determine whether these changes could affect the plants growth rates

A citricultura brasileira destaca-se como a de maior expressão em nível mundial, com cerca de 27,9% da produção mundial de laranjas e 59% da produção global de suco concentrado congelado de laranja. No entanto, apresenta uma vulnerabilidade que é o predomínio de uma única espécie de porta-enxerto, o limão \'Cravo\', com aproximadamente 85% das plantas cítricas plantadas sobre ele. Assim, uma maior diversificação dos porta-enxertos é necessária mas isto depende também da obtenção e da disponibilização de variedades superiores ao limão Cravo. O porta-enxerto é de fundamental importância na formação da muda cítrica, visto que ele interfere em vários aspectos da planta enxertada, dentre eles o vigor da copa e o tamanho das plantas. Atualmente, devido ao surgimento de novas doenças e a necessidade de maximização dos recursos alocados na propriedade citrícola, tem sido utilizado o plantio de pomares mais adensados, com consequentemente aumento no interesse da produção de plantas com menor porte. Uma das possibilidades de se obter plantas de porte baixo é por meio do uso de portaenxertos ananicantes ou semi-ananicantes, sendo que alguns autores já verificaram que plantas autotetraplóides, quando usadas como porta-enxertos, induzem à formação de plantas de porte baixo. O objetivo inicial deste trabalho foi obter e identificar plantas autopoliplóides de limão Cravo, tangerinas Cleópatra e Sunki, utilizando-se o método de cultivo in vitro de segmentos de epicótilo temporariamente em meio de cultura contendo colchicina, seguido de regeneração das brotações em meio sem o alcalóide. A colchicina causou toxidez aos explantes, nos diversos tempos de cultivo e concentrações testadas. Várias plantas foram obtidas e dentre estas, 27 foram selecionadas por possuir características morfológicas semelhantes à plantas poliplóides. A seguir, foram realizados experimentos com seis plantas selecionadas (duas de cada espécie) visando confirmar a ploidia e a origem nucelar, além de caracterizar a morfologia das folhas, a densidade estomática e alguns parâmetros fisiológicos. Dentre as seis plantas, apenas quatro foram confirmadas como sendo autotetraplóides pelo método de citometria de fluxo. Estas, geralmente apresentaram folhas com comprimento significativamente menor, maior espessura do limbo foliar e menor densidade estomática nas folhas. Todas as seis plantas apresentaram alguma modificação em parâmetros fisiológicos, mas ainda não se pode determinar se estas modificações poderão afetar as taxas de crescimento. / The Brazilian citriculture stands out as the greatest expression worldwide, with about 27.9% of world production of oranges and 59% of global production of frozen orange juice concentrate. However, it presents a vulnerability that is the predominance of a single species of rootstock, the \'Cravo\' lemon, with approximately 85% of citrus planted on it. Thus, greater diversification of rootstocks is necessary, which also depends on obtaining and provision of superior kind of lemon Cravo. The rootstock is of fundamental importance in shaping the citrus scion, since it interferes with various aspects of graft, such as the vigour of the graft and plant size. Currently, due the appearance of new diseases and the need to maximize resources allocated in the citrus farm, more dense citrus orchards have been used, increasing the interest in the production of smaller plants. One of the possibilities of obtaining plants of small size is through the use of dwarf or semi-dwarf rootstocks, and some authors have found that plants autotetraploids, when used as rootstock, induce the formation of small-sized plants. The initial objective of this study was to obtain and identify plants autopoliploids of \'Cravo\' lemon, \'Cleopatra\' and \'Sunki\' tangerines, using the method of in vitro culture of segments of epicotyl temporarily in the culture medium containing colchicine, followed by shoots regeneration in medium without the alkaloid. The colchicine caused toxicity in explants, at the different times of cultivation and concentrations tested. Several plants were obtained and among these, 27 were selected for morphological characteristics similar to polyploid plants. Afterwards, trials were conducted with six selected plants (two of each kind) to confirm the nucelar ploidy origin, and to characterize the morphology of the leaves, stomatal density and some physiological parameters. Among the six plants, only four were confirmed as autotetraploids by method of flow cytometry. These, generally presented leaves with small length, greater thickness of the leaf lamina and lower stomatal density in leaves. All six plants showed some change in physiological parameters, but data could not determine whether these changes could affect the plants growth rates

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-02-17T10:47:26Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 766457 bytes, checksum: ac59c216446c63aa0ca28c4f516c455f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-17T10:47:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 766457 bytes, checksum: ac59c216446c63aa0ca28c4f516c455f (MD5) Previous issue date: 2005-02-16 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O presente trabalho teve por objetivos: a) avaliar o efeito dos reguladores de crescimento 2,4-D, dicamba e picloram na indução de embriogênese somática em explantes juvenis de Eucalyptus grandis; b) avaliar o efeito dos meios de cultura MS, WPM e JADS na indução de calos embriogênicos em cotilédones de E. grandis e em folhas e entrenós de um clone híbrido de E. urophylla x E. grandis; e c) avaliar o efeito de fontes de carboidratos na indução de calos embriogênicos em cotilédones de E. grandis. Os parâmetros avaliados foram o percentual de explantes calejados, a intensidade de calejamento, a oxidação, a massa fresca de calos, a rizogênese, a coloração e a textura dos calos, bem como a presença de estruturas embriogênicas. Nos experimentos em que se utilizou 2,4-D, melhores resultados de calogênese foram observados em cotilédones, nas concentrações de 5 e 10 mg L-1, sendo 30 dias no escuro o melhor tempo e condição de indução. Os calos apresentaram coloração amarelo-clara a amarelo-escura e textura semicompacta a semifriável, porém não foram observadas estruturas embriogênicas. Os tratamentos de subcultivo em meio contendo diferentes combinações de reguladores de crescimento, acrescidos de PVP ou carvão ativado, não mostraram resultados satisfatórios. As auxinas dicamba e picloram demonstraram-se promissoras no desenvolvimento de um protocolo de embriogênese somática para E. grandis, sendo observadas estruturas semelhantes a embriões somáticos em diferentes estádios de desenvolvimento quando se utilizou 0,5 mg L-1 de dicamba ou 5,0 e 10,0 mg L-1 de picloram, em explantes cotiledonares. Em relação aos meios de cultura MS, WPM e JADS, maior massa fresca de calos e menores percentuais de oxidação e de regeneração de raízes foram observados em cotilédones de E. grandis, utilizando-se o meio MS. Diferença expressiva foi observada em calos obtidos em folhas do clone híbrido de E. urophylla x E. grandis, onde o meio WPM foi mais efetivo na formação de raízes em relação aos meios MS e JADS. Quanto à fonte de carboidrato, as combinações de glicose e sacarose com maltose ou frutose, em algumas situações, apresentaram maior percentual de calejamento e massa fresca de calos em relação à utilização de sacarose como única fonte de carboidrato. No entanto, quanto ao aspecto dos calos, melhores resultados foram obtidos quando se utilizaram 1,5 e 3% de sacarose, sendo observados calos de textura semifriável e de coloração amarelo-clara, enquanto em concentrações mais altas de sacarose houve tendência de maior compactação e oxidação. O glicerol promoveu aumento na massa fresca de calos nas concentrações de 0,5 e 1%, sendo, a partir dessa concentração, observado decréscimo dos valores desse parâmetro. Os resultados obtidos neste trabalho são concordantes com os da literatura existente, em que se relata a dificuldade de obtenção de um protocolo eficiente e reproduzível de embriogênese somática para espécies de Eucalyptus. Entretanto, em virtude da importância e do potencial de aplicação da embriogênese somática na silvicultura clonal, salienta-se a necessidade de realização de novos estudos relacionados a essa área de conhecimento, os quais envolvam espécies do gênero Eucalyptus. / The present work had the following objectives: a) to evaluate the effect of the growth regulators 2,4-D, dicamba and picloram on the induction of somatic embryogenesis from juvenile explants of Eucalyptus grandis; b) to evaluate the effect of MS, WPM and JADS culture media, on embryogenic callus induction from cotyledons of E. grandis and leaves and stem internodes of a E. urophylla x E. grandis hybrid clone; and c) to evaluate the effect of carbohydrate sources on the embryogenic callus induction from cotyledons of E. grandis. The appraised parameters were the percentage of explant producing calli, the intensity of callus formation, oxidation, callus fresh weight, rhizogenesis, callus coloration and texture, as well as the presence of embryogenic structures. In experiments with 2,4-D the best results for callus production were found with cotyledons, being 5 and 10 mg L-1 and 30 days in the dark the best time and induction conditions. Callus coloration varied from light yellow to dark yellow and semi-compact to semi-friable texture, however no embryogenic structures were observed. Subculture in medium containing different combinations of growth regulators, added of PVP or activated charcoal, did not give good results. Dicamba and picloram showed potential for developing a protocol for somatic embryogenesis of E. grandis, producing structures similar to somatic embryos in different developmental stages with dicamba (0.5 mg L-1) or picloram (5.0 and 10.0 mg L-1), from cotyledon explants. In relation to the culture media MS, WPM and JADS, larger callus fresh weight and smaller percent of oxidation and root regeneration were observed in cotyledons of E. grandis with MS medium. Significant difference was observed in calli obtained from leaves of E. urophylla x E. grandis hybrid, where WPM medium was more effective for root formation compared to MS and JADS. Regarding to the carbohydrate source, the combinations of glucose and sucrose with maltose or fructose, in some situations, presented larger percent of callus production and callus fresh weight compared to the use of sucrose as only carbohydrate source. However, in relation to the callus aspect, better results were obtained with 1,5 and 3% of sucrose, giving semi-friable light-yellow calli, whereas in higher sucrose concentrations there was a tendency for increased hardness and oxidation. Glycerol at 0,5 and 1% increased callus fresh weight, but higher concentrations lowered these values. The results obtained in this work agrees with the existent literature on the difficulty of obtaining an efficient and reproducible protocol for somatic embryogenesis of Eucalyptus species. However, because of the importance and potential for application of somatic embryogenesis in clonal silviculture, it is emphasized the need for new studies on this area, involving species of the Eucalyptus.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:22:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE_Paulo_Sergio_Gomes_da_Rocha.pdf: 4345555 bytes, checksum: fc4e983fbe38c737dd47b9126efe2f3c (MD5) Previous issue date: 2008-02-21 / nus. To obtain peach plants that produce fruits of high quality and to obtain high productivity, it is necessary a modern and tecnified nursery plant production. The objective for this study was to establish an appropriated and low cost methodology for production of nursery Prunus plants. The experiments were carried out at the Faculdade de Agronomia Eliseu Maciel Universidade Federal de Pelotas during the period from 2003 to 2005. For the in vitro establishment phase were used explants of peach rootstocks cvs. Mr. S. 2/5, Sírio, Tsukuba, Nemaguard, Nemared and Flordaguard. The variables evaluated on the establishment phase were: type of explant; culture medium solidifiers; light quality; bud location; type of culture medium; and different BAP concentrations in the media culture. Regarding to the in vitro multiplication phase, the peach rootstocks cultivars tested were: Mr. S. 2/5; Sírio; and Tsukuba, which were evaluated about the effects of the following variables: light quality; BAP concentrations; type of explant; and type of culture medium. Regarding to the in vitro rooting phase, the peach rootstock tested was the cv. Mr. S. 2/5, which was evaluated about the following variables: light quality; vermiculite as a substitute of agar in culture media; and sucrose and AIB concentrations in culture medium. In the phase of in vitro establishment it was observed that: in general the best explant was nodal segment; the best culture medium solidifier was agar; the culture medium solidifier phytagel caused explants vitrification; and the nº 088 green filter for light promoted shoot morfogenesis on rootstock cv. Mr. S. 2/5. On the in vitro multiplication phase it was observed that: light quality had no effect on sprouting; addition of BAP 1,2 mg L-1 to the culture media had no effect on adventitious shooting in the Tsukuba rootstocks; the sprouts from shoot tip explants had more growth; and the MS culture medium gave the best results. On the in vitro rooting phase it was observed that: sucrose was essential for in vitro rooting; vermiculite substituted for agar in medium without affecting in vitro rooting; and the different light filters did not increase the. / Na cultura do pessegueiro, a implantação de um sistema moderno e tecnificado de produção de mudas é determinante para a obtenção de frutos de qualidade e uma alta produtividade. Desta forma, a qualidade genética e sanitária do material propagativo é imprescindível para alcançar o sucesso no empreendimento agrícola. Com o objetivo de adequar uma metodologia de propagação e de redução dos custos para a produção de mudas, foram desenvolvidos uma série de experimentos com porta-enxertos de Prunus spp. nas fases de estabelecimento, multiplicação e enraizamento in vitro. Os experimentos foram realizados na Faculdade de Agronomia Eliseu Maciel durante o período de 2003 a 2005. Para a fase de estabelecimento foram utilizados os porta-enxertos cvs. Mr. S. 2/5, Sírio, Tsukuba, Nemaguard, Nemared e Flordaguard. Nesta fase foram testados os tipos de explantes, solidificantes do meio de cultura, qualidade da luz através da utilização de filtros, efeito da localização da gema no ramo, tipos de meio de cultura e diferentes concentrações de BAP. Na segunda fase, a de multiplicação, para os porta-enxertos cvs. Mr. S. 2/5, Sírio e Tsukuba, avaliou-se a qualidade daxvii luz, diferentes concentrações de BAP, tipos de explantes e meios de cultura. Na terceira, a de enraizamento in vitro, avaliou-se a qualidade da luz, a vermiculita como substituto do ágar no meio de cultura, diferentes concentrações de sacarose e AIB no enraizamento do porta-enxerto de Prunus cv. Mr. S. 2/5. Na fase de estabelecimento observou-se que o melhor tipo de explante é o segmento nodal e o ágar foi o melhor solidificante, pois, o phytagel causou vitrificação. Em relação à qualidade da luz, o filtro verde nº 088 favoreceu a morfogênese das brotações do porta-enxerto cv. Mr. S. 2/5. A melhor região no ramo para a coleta dos explantes pode variar de acordo com o porta-enxerto. Na fase de multiplicação verificou-se que a qualidade da luz não influenciou a formação das brotações. Não houve formação de brotações adventícias no porta-enxerto cv . Tsukuba cultivado no meio acrescido de até 1,2 mg L-1 de BAP. Dos explantes testados na cv . Tsukuba, aquele contendo o ápice proporcionou o maior crescimento dos explantes. O meio de cultura MS foi o que apresentou os melhores resultados na multiplicação. Para a fase de enraizamento verificou-se que a adição de sacarose no meio de cultura é imprescindível e que a vermiculita pode substituir o ágar no meio. Os filtros utilizados para modificar as condições de luz não contribuíram para aumentar o potencial de enraizamento.

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:56:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Rita.pdf: 1033738 bytes, checksum: b6ca7aa55aa541bcd80db56cb0fd2e96 (MD5) Previous issue date: 2008-04-25 / Gerbera, from South Africa, belongs to Asteraceae family. They are herbaceous with flowers grouped in a head inflorescence. They are very popular and used as decorative garden plant, cut flowers and as experimental organism. São Paulo state leads the market of Brazilian ornamental flowers. Among the species produced by Brazilian companies, Gerbera is one of the very well accepted into the market. In the beginning XXth century micro propagation calls the attention of scientists; the pioneer was Haberlandt in 1902 with somatic cells. The studies on tissue culture, in Brazil, started at the 50´s in São Paulo Biological Institute. The chemical control of the differentiation of the aerial part was observed in culture of tobacco callus. This was the observation that the in vitro organogenesis process is controlled by hormonal substances that control the development in canopy, root or callus depending on the balance between auxins and cytokines. Some substances, even when in small amounts, delay or inhibit the substratum oxidation and can act at different levels on the oxidative sequence, these substances are called antioxidants. The living organisms possess natural scavenging mechanisms, enzymatically or not, of free radicals, not allowing their transformation in more toxic products for the cells. The enzyme superoxide dismutase, together with others is the main antioxidant defences that act in eukaryotic organisms. / As Gerberas são oriundas da África do Sul, pertencem à família Asteraceae e são herbáceas dotadas de flores em capítulos. São muito populares e utilizadas como planta decorativa de exterior, flores de corte e como organismo de experimentos. O estado de São Paulo lidera o mercado de flores ornamentais no Brasil. Dentre as várias espécies produzidas pelas empresas brasileiras, a Gerbera está inclusa com boa aceitação no mercado. No início do século XX a micropropagação chama a atenção de estudiosos, o pioneiro nesta área foi Haberlandt em 1902 com células de tecidos somáticos. No Brasil os estudos sobre cultura de tecidos começam na década de 50 em São Paulo no Instituto Biológico. O controle químico da diferenciação da parte aérea foi observado em cultura de calo de tabaco. Esta foi à constatação de que o processo de organogênese in vitro é controlado por substâncias hormonais sendo que o desenvolvimento de parte aérea, raiz ou calo é determinado pelo balanço entre auxinas e citocininas. Existem substâncias que, quando presentes em pequenas quantidades, retardam ou inibem a oxidação de substratos e podem agir em diferentes níveis da seqüência oxidativa, estas substâncias são denominadas antioxidantes. Os organismos vivos possuem mecanismos naturais de eliminação de radicais livres por intermédio de enzimas ou não, impedindo sua transformação em produtos mais tóxicos para as células. A enzima denominada superóxido dismutase, junto com outras são as principais defesas antioxidantes que atuam nos organismos superiores.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:51:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Rita.pdf: 1033738 bytes, checksum: b6ca7aa55aa541bcd80db56cb0fd2e96 (MD5) Previous issue date: 2008-04-25 / Gerbera, from South Africa, belongs to Asteraceae family. They are herbaceous with flowers grouped in a head inflorescence. They are very popular and used as decorative garden plant, cut flowers and as experimental organism. São Paulo state leads the market of Brazilian ornamental flowers. Among the species produced by Brazilian companies, Gerbera is one of the very well accepted into the market. In the beginning XXth century micro propagation calls the attention of scientists; the pioneer was Haberlandt in 1902 with somatic cells. The studies on tissue culture, in Brazil, started at the 50´s in São Paulo Biological Institute. The chemical control of the differentiation of the aerial part was observed in culture of tobacco callus. This was the observation that the in vitro organogenesis process is controlled by hormonal substances that control the development in canopy, root or callus depending on the balance between auxins and cytokines. Some substances, even when in small amounts, delay or inhibit the substratum oxidation and can act at different levels on the oxidative sequence, these substances are called antioxidants. The living organisms possess natural scavenging mechanisms, enzymatically or not, of free radicals, not allowing their transformation in more toxic products for the cells. The enzyme superoxide dismutase, together with others is the main antioxidant defences that act in eukaryotic organisms. / As Gerberas são oriundas da África do Sul, pertencem à família Asteraceae e são herbáceas dotadas de flores em capítulos. São muito populares e utilizadas como planta decorativa de exterior, flores de corte e como organismo de experimentos. O estado de São Paulo lidera o mercado de flores ornamentais no Brasil. Dentre as várias espécies produzidas pelas empresas brasileiras, a Gerbera está inclusa com boa aceitação no mercado. No início do século XX a micropropagação chama a atenção de estudiosos, o pioneiro nesta área foi Haberlandt em 1902 com células de tecidos somáticos. No Brasil os estudos sobre cultura de tecidos começam na década de 50 em São Paulo no Instituto Biológico. O controle químico da diferenciação da parte aérea foi observado em cultura de calo de tabaco. Esta foi à constatação de que o processo de organogênese in vitro é controlado por substâncias hormonais sendo que o desenvolvimento de parte aérea, raiz ou calo é determinado pelo balanço entre auxinas e citocininas. Existem substâncias que, quando presentes em pequenas quantidades, retardam ou inibem a oxidação de substratos e podem agir em diferentes níveis da seqüência oxidativa, estas substâncias são denominadas antioxidantes. Os organismos vivos possuem mecanismos naturais de eliminação de radicais livres por intermédio de enzimas ou não, impedindo sua transformação em produtos mais tóxicos para as células. A enzima denominada superóxido dismutase, junto com outras são as principais defesas antioxidantes que atuam nos organismos superiores.

O boro e o cálcio são nutrientes essenciais para o desenvolvimento das plantas, entretanto existem poucos registros da atuação destes dois nutrientes de forma conjunta em organismos vegetais. Buscando identificar e quantificar as possíveis implicações do micro e macronutriente no desenvolvimento morfogenético de Eucalyptus urophylla, calos foram cultivados in vitro com diferentes concentrações de boro (0, 25, 50, 100 e 200 µM.L-1) e cálcio (0; 3,75; 7,50; 11,25 e 15 mM.L-1) sendo avaliados posteriormente quanto a morfologia externa, morfologia interna, tamanho, conteúdo de massa fresca e seca e variação das respostas bioquímicas para o teor de prolina, carboidratos não estruturais solúveis totais, proteína solúveis totais e eletroforese em gel de poliacrilamida. De maneira geral, pode-se verificar que nos dois períodos avaliados as concentrações combinadas de boro e cálcio interferiram em aspectos da morfologia interna que ocasionaram respostas diretas em aspectos visuais das estruturas calogênicas. Da mesma forma, os parâmetros bioquímicos avaliados sofreram a ação das interações nutricionais testadas, determinando a importância desta interação em mecanismos metabólicos, celulares e bioquímicos. / Boron and calcium are essential nutrients in a plant development, but there are few registers of the common action of these two nutrients in a vegetal organisms. In order to identify and to quantify the possible implications of the micro and macronutrient in the morphogenetic development of Eucalyptus urophylla, calluses were cultivated in vitro with different concentrations of boron (0, 25, 50, 100 and 200 µM.L-1) and calcium (0; 3,75; 7,50; 11,25 and 15 mM.L-1) and evaluated in relation to external and internal morphology, morphology, size, fresh and oven dry weight, and the variation of biochemical responses to proline, total non-structural soluble carbohydrates, total soluble proteins and eletrophoresys in poliacrilamida gel. In general, it could be verified that in two evaluation periods the combined concentrations of boron and calcium had intervened in aspects of the internal morphology that had caused direct answers in visual impact in visual aspects of the calluses. Similarly, the biochemical parameters evaluated had suffered action from the tested nutritional interactions, determining the importance of this interactions in metabolic, cellular and biochemical mechanisms.

Made available in DSpace on 2016-04-28T14:56:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Desiane Amaral de Deus.pdf: 1202162 bytes, checksum: 1428622ab0c470123554489695966980 (MD5) Previous issue date: 2010-02-26 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Wood is the fifth most consumed product on the world market and has the expectation of consumption growth of 20% for the next decade. Their structural constitution is formed by cellulose, hemicellulose and lignin. Woody plants, in general, have a high lignin content, reaching values above 35% compared to its dry weight. This research aimed to explore the process of lignification in callus culture obtained from Eucalyptus grandis, E. urophylla hybrid E. urograndis and species Lophanthera lactescens Ducke and monitor this process in plants of L. lactescens cultured in vitro. The work is divided in two chapters. The first is related to the species L. lactescens and deals with the determination of a protocol for callus induction and evaluation of the process of lignification in callus and in roots and stems of plants grown in vitro. The process of lignification in plants was accompanied by anatomical characterization. The second chapter, referring to two species of Eucalyptus and the hybrid is the establishment of protocol for callus induction and assessment of the production of lignin in callus produced from different types of explants. To evaluate the process of lignification histochemical tests were made and studies of bright field microscopy, fluorescence microscopy and infrared spectrometry. The best protocol for callus induction in L. lactescens was achieved on MS medium + 9.06 mM 2,4 D. Callus from different explant sources evaluated by infrared spectroscopy showed lignin guaiacyl and syringyl type. Through the microscope and infrared spectroscopy was possible to verify that the lignification in plant L. lactescens in vitro starts at the corners of cells, tissues from young and that plants whose growth was limited by the container germination showed the occurrence of gelatinous fibers. For species of Eucalyptus, the protocol that induced a higher production of callus was MS protocol + 10 mM of 2,4-D + 2.5 mM kinetin + 20 gL-1 sucrose. The species E. urophylla callus showed larger and more friable. Callus from different sources of explants were also evaluated at the infrared signals indicative of the presence of lignin guaiacyl and syringyl type. / A madeira ? o quinto produto mais consumido no mercado mundial e apresenta expectativa de crescimento de consumo de 20% para a pr?xima d?cada. Sua constitui??o estrutural ? formada por celulose, hemicelulose e lignina. Plantas lenhosas, de maneira geral, possuem alto teor de lignina, podendo alcan?ar valores superiores a 35% em rela??o ao seu peso seco. Esta pesquisa teve o objetivo de estudar o processo de lignifica??o em cultura de calos obtidas das esp?cies Eucalyptus grandis, E. urophylla, do h?brido E. urograndis e da esp?cie Lophanthera lactescens Ducke e acompanhar esse processo em plantas de L. lactescens cultivadas in vitro. O trabalho est? dividido em dois cap?tulos. O primeiro ? referente ? esp?cie L. lactescens e trata da determina??o de um protocolo para indu??o da calog?nese e avalia??o do processo de lignifica??o nos calos e em ra?zes e caules de plantas cultivadas in vitro. O processo de lignifica??o nas plantas foi acompanhado atrav?s de caracteriza??o anat?mica. O segundo cap?tulo, referente ?s duas esp?cies de Eucalyptus e o h?brido trata do estabelecimento de protocolo para indu??o da calog?nese e avalia??o da produ??o de lignina nos calos produzidos a partir de diferentes tipos de explantes. Para avalia??o do processo de lignifica??o foram realizados testes histoqu?micos e estudos de microscopia de campo claro, fluoresc?ncia, espectrometria e microscopia no infravermelho. O melhor protocolo de indu??o da calog?nese em L. lactescens foi alcan?ado em meio MS + 9,06 ?M 2,4-D. Os calos oriundos de diferentes fontes de explante avaliados pela espectrometria de infravermelho apresentaram lignina do tipo guaiac?lica e siring?lica. Atrav?s da microscopia e espectrometria de infravermelho foi poss?vel verificar que a lignifica??o em planta de L. lactescens cultivadas in vitro inicia-se nos ?ngulos das c?lulas, desde os tecidos mais jovens e que plantas que tiveram crescimento limitado pelo recipiente de germina??o apresentaram a ocorr?ncia de fibras gelatinosas. Para as esp?cies de Eucalyptus, o protocolo que induziu uma maior produ??o de calos foi o protocolo MS + 10 ?M de 2,4-D, + 2,5 ?M de cinetina + 20 g.L-1 de sacarose. A esp?cie E. urophylla apresentou calos mais fri?veis e maiores. Os calos oriundos de diferentes fontes de explantes avaliados no infravermelho tamb?m apresentaram sinais indicativos da presen?a de lignina do tipo guaiac?lica e siring?lica.

Paralelamente ao modelo Arabidopsis thaliana, o tomateiro (Lycopersicon esculentum) tem sido crescentemente utilizados em abordagens genéticas de questões fisiológicas. Uma das principais vantagens de Arabidopsis como "planta de laboratório" tem sido seu pequeno porte e ciclo de vida curto. Contudo, a cultivar Micro-Tom (MT) de tomateiro possui tamanho muito reduzido (8 cm) e pode produzir até 5 gerações por ano. Mutantes fotomorfogenéticos em tomateiro deficientes na síntese do cromóforo do fitocromo (au), mutantes deficientes na síntese das apoproteínas PHYA e PHYB1 (fri e tri, respectivamente) e mutantes superexpressando o fitocromo (hp, atv e Ip) constituem-se em um modelo para estudos da fotomorfogênese. No que se refere à capacidade de regeneração in vitro como uma resposta fotomorfogenética, poucos trabalhos têm sido realizados. O presente trabalho teve como objetivo transferir as mutações au, fri, tri, hp, Ip e atv, bem como o locus de regeneração (Rg1) da cultivar MsK, para a cultivar Micro-Tom. As linhagens obtidas foram utilizadas para verificar o efeito da fotomorfogênese na competência para regeneração in vitro. Para tanto, foram realizados tratamentos com luz branca, vermelho (V) e vermelho-extremo (VE) em explantes radiculares, caulinares e foliares do genótipo micro-MsK em meio MS mais 5mM de BAP e tratamentos com luz branca em explantes radiculares, caulinares e foliares de micro-mutantes fotomorfogenéticos também em meio MS mais 5mM de BAP. Para todos os tratamentos utilizou-se a cultivar MT como controle. Sob V, as raízes de micro-MsK apresentaram-se diferenciadas, enquanto sob VE não ocorreu diferenciação. O maior número de gemas formadas tanto para caule quanto para folhas de micro-MsK ocorreu sob V, enquanto sob VE foi observado um decréscimo na formação de gemas. A partir destes resultados sugere-se que a forma ativa do fitocromo, induzida pelo V, interage com o Rg1 na aquisição de competência para regeneração. Nos tratamentos com luz branca, raízes de micro-MsK e de mutantes micro-hp, micro-atv e micro-Ip apresentaram-se diferenciadas, enquanto não houve diferenciação para o mutante micro-au ou para o controle MT. O número de gemas formadas alcançou maiores valores para folhas de micro-hp e micro-Ip e a para caules de micro-atv. Apenas um número muito reduzido de gemas foi formado a partir de folhas de micro-au. Com base na alta competência para regeneração de micro-MsK e de mutantes que superexpressam o fitocromo, sugere-se que o fitocromo promove, em uma via de sinalização, a indução de fatores de regeneração (Rg1). Alternativamente, o locus Rg1 poderia promover a alta capacidade regenerativa tornando os explantes mais competentes ao efeito da superexpressão do fitocromo, o qual poderia induzir outros fatores de regeneração. / Parallel to Arabidopsis thaliana model, the tomato (Lycopersicon esculentum) has been increasingly used as a genetic approach to address physiological questions. One of the main advantages of Arabidopsis as a "laboratory plant" has been its small size and short life cycle. However, the tomato cultivar Micro-Tom (MT) possesses reduced size (8 cm) and can produce up to 5 generations per year. Tomato photomorphogenic mutants deficient for the synthesis of phytochrome chromophore (au) or the apoprotein PHYA and PHYB1 (fri and tri, respectively), as well as mutants superexpressing phytochrome (hp, atv and Ip) consist on a model to study photomorphogenesis. Concerning the in vitro regeneration capacity as a photomorphogenic response, fewer works have been carried through. The current work aimed at transfering the mutations au, fri, tri, hp, Ip and atv, as well as the regeneration locus (Rg1) of cv MsK to the cv Micro-Tom (MT). The genotypes obtained were used to verify the effect of photomorphogenesis on the competence for in vitro regeneration. Root, stem and leaf explants from MT and Micro-MsK were incubated in MS plus 5mM BAP under white, red (R) and far-red (FR) light. Root, stem and leaf explants from MT and photomorphogenic micro-mutants were incubated in MS plus 5mM BAP under white light. Under R, roots of micro-MsK were presented differentiation, while under FR the differentiation did not occur. Under R, stem explants from micro-MsK formed more shoots than did leaf explants, while under FR was observed a decrease in shoot formation for all types of explants. These results suggest that the active form of phytochrome, induced by R, interacts with the Rg1 in the acquisition of competence for regeneration. In the treatments with white light, roots of micro-MsK and of mutants micro-hp, micro-atv and micro-Ip presented differentiation, while no differentiation was observed for the mutant micron-au or control MT. The number of shoots formed reached the highest values for leaf explants of micro-hp and micro-Ip and for stem explants of micron -atv. Only a low number of shoots was formed from micro-au leaf explants. On the basis of the high competence for regeneration of micro-MsK and mutants that super express phytochrome, it is suggested that the phytochrome promotes, in a signaling pathway, the induction of regeneration factors ( Rg1 ). Alternatively, the Rg1 locus may turn the explant most competent to respond to phytochrome, which could induces others regeneration factors.