Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-02-03T19:15:25Z No. of bitstreams: 2 Tese - Cláudia Fabiana Alves Rezende - 2014.pdf: 6705012 bytes, checksum: 1b40d2350a1c7203675ff54a47f37246 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-02-03T19:15:52Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Cláudia Fabiana Alves Rezende - 2014.pdf: 6705012 bytes, checksum: 1b40d2350a1c7203675ff54a47f37246 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-03T19:15:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Cláudia Fabiana Alves Rezende - 2014.pdf: 6705012 bytes, checksum: 1b40d2350a1c7203675ff54a47f37246 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-02-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / One of the most competitive and growth potential of the agribusiness sector is the citrus industry. Citrus nurseries grown in protected cultivation, constitutes one of the foundations of this growth. To achieve high productivity in any culture, there are a number of factors, among which the supply of nutrients, in the manner and in adequate quantity becomes paramount. The Diagnosis and Recommendation Integrated System (DRIS) was developed to provide a diagnosis of the nutritional status of cultivated plants, helping the decision on fertilizer recommendation for crops, being based on the balance of essential nutrients to plants. The objective of this study aimed to obtain a database of foliar analysis for establishment of DRIS and assess the nutritional status of two rootstocks (Rangpur lime and Swingle Citrumelo) and two combinations of citrus seedlings (Orange Pear/Rangpur lime and Orange Christmas /Swingle Citrumelo) grown in ‘Goiás’ collections hundred twenty leaf samples for rootstocks and one hundred and twenty leaf samples for ready seedlings were performed . With the data obtained organized a database. The database was analyzed by the tracks or Critical Levels of Concentration and DRIS method by method. Bands Concentration diagnosed for the Rangpur Lime rootstock , the most limiting nutrient deficiency were Mg and Zn and excess P and Fe. For Citrumelo Swingle, limiting disability K, S, Mn, Cu and Zn, excess Fe and N. For the citrus nurseries K, S and Zn were the nutrients most limiting nutrient deficiency and P, Fe, Mg and N in excess. Zn is the nutrient most often deficiency and Fe excess among rootstocks and citrus nurseries. The DRIS diagnosed S as the most limiting disability and N as the most limiting for excess, and still showed higher sensitivity for diagnosing nutritional problems. / Um dos setores mais competitivos e com potencial de crescimento do agronegócio é a citricultura. As mudas cítricas, cultivadas em cultivo protegido, constitui um dos alicerces desse crescimento. Para se obter alta produtividade em qualquer cultura, existem um conjunto de fatores, dentre os quais o fornecimento de nutrientes, de maneira e em quantidade adequada se torna primordial. O Sistema Integrado de Diagnose e Recomendação (DRIS) foi desenvolvido para fornecer um diagnóstico do estado nutricional de plantas cultivadas, auxiliando na decisão sobre a recomendação de adubação para culturas agrícolas, sendo baseado no balanço de nutrientes essenciais aos vegetais. Este trabalho teve por objetivo obter um banco de dados de análise foliar para estabelecimento do DRIS e avaliar o estado nutricional de dois porta-enxertos (Limão Cravo e Citrumelo Swingle) e duas combinações de mudas cítricas (Laranja Pera/Limão Cravo e Laranja Natal/Citrumelo Swingle) cultivados em Goiás. Foram realizados coletas de cento e vinte amostras de folhas para porta-enxertos e cento e vinte amostras de folhas para as mudas prontas. Com os dados obtidos organizou-se um banco de dados. O banco de dados foi analisado pelo método dos Níveis Críticos ou Faixas de Concentração e pela metodologia DRIS. As Faixas de Concentração diagnosticaram, para o porta-enxerto Limão Cravo, os nutrientes mais limitantes por deficiência foram Mg e Zn e por excesso P e Fe. Para o Citrumelo Swingle, limitante por deficiência K, S, Mn, Cu e Zn e por excesso Fe e N. Para as mudas cítricas os nutrientes K, S e Zn foram os nutrientes mais limitantes por deficiência e o P, Fe, Mg e N por excesso. O Zn é o nutriente com maior frequência de deficiência e o Fe de excesso entre os porta-enxertos e as mudas prontas. O método DRIS diagnosticou o S como o mais limitante por deficiência e o N como o mais limitante por excesso, e ainda apresentou maior sensibilidade para diagnosticar problemas nutricionais.

A leprose dos citros é uma doença de grande importância econômica aos citricultores, devido aos prejuízos por ela causados. A doença provoca lesões localizadas nos ramos, frutos e folhas e pode causar grandes perdas aos pomares não tratados. A leprose dos citros possui etiologia viral sendo o vírus denominado Citrus leprosis virus (CiLV). Atualmente, atribuí-se a leprose dois tipos de vírus que causam sintomas morfológicos e citopatológicos distintos: o tipo nuclear (CiLV-N) e o tipo citoplasmático (CiLV-C). O presente trabalho teve como objetivo investigar as alterações anatômicas e comparar o perfil protéico entre as lesões causadas pelos dois tipos de vírus em laranjeira-doce [Citrus sinensis (L.) Osbeck]. Para as análises anatômicas foram coletadas amostras de tecidos sadios e de tecidos lesionados. As amostras foram fotografadas e em seguida fixadas em solução de Karnovsky, desidratadas em série etílica, infiltradas em resina hidroxi-etil-metacrilato (Leica Historesin), seccionadas em micrótomo rotativo a 5-7 µm de espessura, coradas com azul de Toluidina para as análises histológicas usuais. Também foram realizados testes histoquímicos para fenóis, compostos pécticos, proteína e lipídios. A captura de imagens digitais dos materiais preparados em lâminas foi realizada em microscópio equipado com câmera de vídeo. Para a análise do perfil protéico as amostras coletadas foram imediatamente criofixadas em nitrogênio líquido e armazenadas em refrigerador a - 80ºC para posterior extração protéica. As proteínas extraídas foram quantificadas e depois separadas por eletroforese em gel de policrilamida. As lesões foliares se iniciaram como pontuações necróticas, envolvidas por halos cloróticos que limitam o crescimento da lesão. Nos ramos, ocorreram dois tipos de lesões com fendas. As lesões de ramos e de folhas provenientes do campo com sintomas de CiLV-C apresentaram similaridades com as amostras inoculadas. No caso das lesões foliares causadas pelo CiLV-N observa-se a presença de três regiões distintas: o centro necrótico, o halo intermediário e o halo clorótico. As lesões nos frutos de ambos os tipos de leprose eram distintas. Ductos traumáticos gomosos foram observados nos ramos infectados pelo CiLV-C e nos feixes vasculares de folhas e frutos infectados pelo CiLV-N. Quanto ao perfil protéico, verificou-se um aumento na concentração protéica nos tecidos infectados, em especial, nas lesões causadas pelo CiLV-N. Foi possível observar que havia um padrão anatômico e histoquímico nas lesões causadas pela leprose em laranjeira doce independente do tipo de vírus, pois em todas as lesões foi verificada hipertrofia e hiperplasia celular, plasmólise, a redução de grãos de amido, o acúmulo de compostos lipídicos nas células da área necrosada e a presença de um halo, ao redor dessa área, constituído de células que acumulam proteínas. / The citrus leprosis of citrus has been considered a disease of great economic importance to citrus producers due to the damage that it causes. The disease is responsible for lesions found in the twigs, leaves and fruits, and it may cause great losses to the untreated orchards. The citrus leprosis has viral etiology being the virus called Citrus leprosis virus (CiLV). Currently, there are two types of virus attributed to leprosis that cause different morphological and cythopatological symptoms: the nuclear (CiLV-N) and cytoplasmic type (CiLV-C). This study aimed to investigate the anatomical changes and to compare the proteic profile between the injuries caused by two types of virus in sweet orange [Citrus sinensis (L.) Osbeck]. For anatomical analyses healthy tissue and different lesions were photographed and then fixed in Karnovsky solution, dehydrated in a graded ethylic series, embedded in hidroxy-ethyl methacrylate resin (Leica Historesin), sectioned (5 ?m thick), stained and mounted in synthetic resin. The digital images were capture in a microscope with video camera. For the analysis of protein profiles the samples were collected and immediately cryofixed in liquid nitrogen and stored in the refrigerated - 80 ° C. The proteins were extracted, quantified and then separated by gel electrophoresis of polyacrylamide gel. Foliar lesions began as necrotic spots surrounded by a yellow halo that inhibited the lesion expansion. The twigs presented two different lesions: depressed ones and pustules with ruptures. The collected-field lesions of leaves and twigs showed that symptoms of CiLV-C had a certain similarity with the inoculated samples. In the case of foliar lesions caused by CiLV-N there was the presence of three different regions: the necrotic center, the intermediate halo and chlorotic halo. The fruit lesions caused by both types of leprosis virus were different. Ductos traumáticos gomosos foram observados nos ramos infectados pelo CiLV-C e nos feixes vasculares de folhas e frutos infectados pelo CiLV-N. Gummous traumatic ducts in twigs infected by CiLV-C and in the vascular bundles of fruit and leaves infected with CiLV-N were observed. In the proteic profile, there was an increase in protein concentration in the infected tissues especially for injuries caused by CiLV-N. It was possible to observe that there was an anatomical and histochemical pattern in the lesions caused by leprosis in sweet orange independently of the type of virus, therefore in all the injuries was verified hyperplasia, hypertrophy, cell plasmolisis, the reduction of starch grains, the accumulation of lipids compounds in the cells of the necrotic areas and the presence of a halo, surrounding that area, constituted by cells that accumulate proteins.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The aim of this study was to evaluate the potential anxiolytic effect of sweet orange aroma in healthy volunteers submitted to an anxiogenic situation. For this purpose, forty male volunteers, aged between 18 and 30 years, were allocated to five different groups (n=8) for the inhalation of sweet orange essential oil (test aroma: 2.5, 5 or 10 drops), Melaleuca alternifolia essential oil (control aroma: 2.5 drops) or distilled water (non-aromatic control: 2.5 drops). Immediately after inhalation, each volunteer was submitted to a model of anxiety, the video-monitored version of the Stroop Colour Word Test. Psychological parameters (state-anxiety, subjective tension, tranquilization and sedation) and physiological parameters (heart rate and gastrocnemius electromyogram) were evaluated before the inhalation period and before, during and after the test. The results of the psychological parameters were analyzed by Friedman s ANOVA, for each treatment group, followed by Tukey-type test for post hoc comparisons. The results of the physiological parameters were analyzed using a two-factor analysis of variance (ANOVA) for repeated measures followed by Tukey s test for post hoc comparisons. All significance tests were two-tailed and were performed at the 5% significance level. It s worth calling attention to the fact that the treatment s effect is revealed by the lack of significant alterations in the observed parameters throughout the test. Unlike the control groups, the individuals exposed to the test aroma in the doses of 2.5 drops and 10 drops did not present significant alterations (p > 0.05) in state anxiety, subjective tension and tranquillity levels throughout the anxiogenic situation, revealing an anxiolytic activity of sweet orange essential oil. Physiological alterations along the test were not prevented in any treatment group, as has previously been observed for diazepam. Although more studies are needed to find out the clinical relevance of aromatherapy for anxiety disorders, the present results indicate an acute anxiolytic activity of sweet orange aroma, giving some scientific support to its use as a tranquilizer by aromatherapists. / O presente estudo teve por objetivo avaliar o potencial efeito ansiolítico do aroma de laranja doce (C. sinensis) em voluntários saudáveis submetidos a um modelo experimental de indução de ansiedade. Para tanto, quarenta voluntários do sexo masculino, com idade entre 18 e 30 anos, foram alocados em cinco diferentes grupos (n=8) para inalação do óleo essencial de laranja doce (aroma teste: 2,5, 5 ou 10 gotas), do óleo essencial de Melaleuca alternifolia (controle aromático: 2,5 gotas) ou de água destilada (controle não-aromático: 2,5 gotas). Imediatamente após a inalação, cada voluntário foi submetido à situação ansiogênica do Teste de Stroop Monitorado por Vídeo (TSMV), sendo que antes, durante e depois do TSMV foram realizadas medidas psicológicas (níveis de ansiedade-estado, de tensão subjetiva, de tranquilização e sedação) e fisiológicas (frequência cardíaca e eletromiograma do músculo gastrocnêmio). Todos estes parâmetros também foram avaliados previamente ao tratamento. Os resultados dos parâmetros psicológicos foram analisados por ANOVA de Friedman, para cada grupo de tratamento, seguido de teste a posteriori tipo Tukey. Já os resultados dos parâmetros fisiológicos foram analisados por ANOVA de duas vias para medidas repetidas, seguido de teste a posteriori de Tukey. Ambas as análises estatísticas foram realizadas com nível de significância de 5%. A existência de efeito ansiolítico deveria refletir-se nos resultados na forma de ausência de diferenças significativas entre as situações de teste. Assim sendo, diferentemente dos grupos controles, os grupos tratados com óleo de laranja doce nas doses de 2,5 e 10 gotas não apresentaram alterações significativas (p > 0,05) nos níveis de ansiedadeestado, tensão subjetiva e tranquilização ao longo do TSMV. Já em relação aos parâmetros fisiológicos, este efeito não foi observado, assim como ocorreu com o clássico ansiolítico, diazepam, em estudo anterior. Embora mais estudos sejam necessários para constatar a relevância clínica da aromaterapia no tratamento dos transtornos de ansiedade, os resultados do presente estudo demonstraram um efeito ansiolítico agudo do aroma de laranja doce, trazendo certo apoio científico para sua utilização como tranquilizante pelos aromaterapeutas.

[EN] During the application of pesticides in tree crops with airblast sprayer only a fraction reaches vegetation, while the rest is lost in the atmosphere, soil or surface waters or evaporates quickly. These losses pose a risk to the environment and people. Growing environmental awareness in society and his concern for preserving the health of people and animals have stimulated important legislative actions that promote the improvement of the efficiency of the application of pesticides and reducing the risks associated with their use. The first step to achieve this goal is to quantify the amount of spray volume reaching each substrate (vegetation, soil and atmosphere). To quantify the losses, deposition or the mass balance applications have used different experimental methods carried out under field conditions. However, these tests are very expensive and time consuming. Also, when performed abroad, it is very difficult to control all the factors that influence the distribution of the spray and they are virtually impossible to reproduce. These limitations have prompted the development of physical-mathematical models to simulate the behavior of droplets during applications. The numerical approximation by Computational Fluid Dynamics (CFD) can be a good choice The aim of this thesis was to design a first CFD model to simulate the overall behavior during treatments in citrus tree with airblast sprayer in Mediterranean conditions. First, an experiment was conducted to describe the actual air flow from airblast sprayer fan facing up to the top of an orange tree. It was noted there were two vortexes, one on top and another behind the tree. No such structures have been described in other tree crops. High foliage density produces flow separation and this is the reason for the turbulent structures. Then we proceeded to model the problem by assuming that the tree facing the current fan behaved like a solid. 12 CFD 2D-models were generated to reproduce the behavior of air against the tree, resulting from the combination of three air turbulence models (k- standard, SST k-ω, RSM) and four different geometries for the canopy tree in front of the fan. During the adjustment, it was found that a solid canopy could reproduce the same field vortexes. The SST k-ω model simulated the physical behavior better air than the traditional standard k- and RSM. The model was then validated with the first trial of the thesis. Finally they were introduced in the model 1,500 droplets to simulate the movement and deposition of particles during treatments (Eulerian-Lagrangian model). The simulation was divided into two parts: only air from the fan (from the droplets were in the air to 0,35 s) and air only from wind (after 0,35 s). It were studied the position and variables linked to the droplets (height, velocity etc.) at different times of the simulation, the dynamic behavior of cloud droplets and other parameters associated with the droplets droplets became with the wind during treatments (relaxation time, evaporation ratio etc.) and the final volume in each substrate (vegetation, soil, air) was quantified. The results were compared with an experimental mass balance: 44% volume was deposited in the target tree, 28% on adjacent trees, 20% in ground and 8% was lost by drift. Comparing with test data, model was similar to the target tree deposition and ground losses. / [ES] Durante la aplicación de fitosanitarios con turboatomizador en cultivos arbóreos sólo una fracción del caldo pulverizado alcanza la vegetación, mientras que el resto se pierde en la atmósfera o el suelo principalmente. Estas pérdidas suponen un riesgo para el medio ambiente y las personas. La creciente concienciación medioambiental de la sociedad ha estimulado acciones legislativas para la mejora de la eficiencia de la aplicación de fitosanitarios. El primer paso para lograr este objetivo es cuantificar la cantidad de volumen pulverizado en cada sustrato (vegetación, suelo y atmosfera). Para ello, se han utilizado diferentes métodos experimentales. Sin embargo, estos ensayos son caros, requieren mucho tiempo y son complejos por su dificultad para controlar todos los factores que influyen en la distribución de la pulverización. Estas limitaciones han impulsado el desarrollo de modelos físico-matemáticos para simular el comportamiento de las gotas durante las aplicaciones. La aproximación numérica mediante la Dinámica de Fluidos Computacional (CFD) puede ser una buena opción. Por ello, el objetivo de la presente tesis fue diseñar un modelo CFD para simular el comportamiento global de la pulverización durante los tratamientos en cítricos con turboatomizador en condiciones mediterráneas. En primer lugar, se realizó un experimento para describir el flujo real del aire desde que sale de un turboatomizador hasta que se enfrenta a la copa de un naranjo. Se observó que se formaban dos vórtices, uno sobre la copa y otro detrás del árbol. No se han descrito estas estructuras en otros cultivos. La alta densidad foliar induce una separación del flujo que da lugar a estas estructuras turbulentas. A continuación, se procedió a modelizar el problema asumiendo que el árbol enfrentado a la corriente del ventilador se comportaba como un sólido. Para ello se generaron 12 modelos CFD en 2D para reproducir el comportamiento del aire frente al árbol, resultantes de la combinación de tres modelos de turbulencia del aire (k-estándar, SST k-ω, RSM) y cuatro geometrías diferentes para la copa del árbol frente al ventilador. Durante el ajuste, se comprobó que con una copa sólida el modelo podía reproducir los mismos vórtices que en campo. El modelo SST k-ω simuló mejor el comportamiento físico del aire que el tradicional standard k- y el RSM. El modelo fue posteriormente validado con datos experimentales. Por último, se desarrolló un modelo Euleriano-Lagrangiano para simular el movimiento y deposición de las partículas durante los tratamientos que incluía tanto un modelo de las corrientes de aire generadas por el equipo, como el viento atmosférico, además del comportamiento individual de las gotas. En diferentes instantes de la simulación se estudió la posición y las variables ligadas a las gotas (altura, velocidad etc.), se hizo una estimación del comportamiento dinámico de la nube de gotas y de otros parámetros que se han asociado al comportamiento de las gotas frente al viento durante las aplicaciones fitosanitarias (tiempo de relajación, ratio de evaporación etc.) y se cuantificó el volumen final en cada sustrato. Los resultados predijeron que los porcentajes de caldo respecto al total pulverizado fueron: el 44% en el árbol objetivo, el 28% en los árboles adyacentes, el 20% en el suelo y un 8% se perdió como deriva. Finalmente, el modelo se comparó con un balance experimental de masas, con resultados similares en la deposición sobre la vegetación y el suelo. / [CA] Durant l'aplicació de fitosanitaris amb turboatomizador en cultius arboris només una fracció del caldo polvoritzat aconseguix la vegetació, mentres que la resta es perd en l'atmosfera o el sòl principalment. Estes pèrdues suposen un risc per al medi ambient i les persones. La creixent conscienciació mediambiental de la societat ha estimulat accions legislatives per a la millora de l'eficiència de l'aplicació de fitosanitaris. El primer pas per a aconseguir este objectiu és quantificar la quantitat de volum polvoritzat en cada substrat (vegetació, sòl i atmosfera). Per a això s'han utilitzat diferents mètodes experimentals. No obstant això, estos assajos són cars, requerixen molt de temps i són complexos per la seua dificultat per a controlar tots els factors que influïxen en la distribució de la polvorització. Estes limitacions han impulsat el desenrotllament de models fisicomatemàtics per a simular el comportament de les gotes durant les aplicacions. L'aproximació numèrica per mitjà de la Dinàmica de Fluids Computacional (CFD) pot ser una bona opció. L'objectiu de la present tesi va ser dissenyar un primer model CFD per a simular el comportament global de la polvorització durant els tractaments en cítrics amb turboatomitzador en condicions mediterrànies. En primer lloc, es va realitzar un experiment per a descriure el comportament real del flux de l'aire des que ix d'un turboatomitzador fins que s'enfronta a la copa d'un taronger. Es va observar que es formaven dos vòrtexs, un sobre la copa i un altre darrere de l'arbre. No s'han descrit aquestes estructures en altres cultius. L'alta densitat foliar causa una separació del flux que dóna lloc a estes estructures turbulentes. A continuació, es va procedir a modelitzar el problema assumint que l'arbre enfrontat al corrent del ventilador es comportava com un sòlid. Per a això es van generar 12 models CFD en 2D per reproduir el comportament de l'aire davant de l'arbre, resultants de la combinació de tres models de turbulència de l'aire (k- estàndard, SST k-ω, RSM) i quatre geometries diferents per a la copa de l'arbre davant del ventilador. Durant l'ajust, es va comprovar que amb una copa sòlida podia reproduir els mateixos vòrtexs que en camp. El model SST k-ω va simular millor el comportament físic de l'aire que el tradicional estàndard k- i el RSM. El model va ser posteriorment validat amb el primer assaig de la tesi. Per últim, es va fer un model Eulerià-Lagrangià per a simular el moviment i deposició de les partícules durant els tractaments que incloïa tant un model dels corrents d'aire (vent i equip). En diferents instants de la simulació es va estudiar la posició i les variables lligades a les gotes (altura, velocitat etc.), es va fer una estimació del comportament dinàmic del núvol de gotes i d'altres paràmetres que s'han associat al comportament de les gotes enfront del vent durant les aplicacions fitosanitàries (temps de relaxació, ràtio d'evaporació etc.) i es va quantificar el volum final en cada substrat. Els resultats van predir que els percentatges de caldo respecte al total polvoritzat van ser: el 44% va acabar en l'arbre objectiu, el 28% en els arbres adjacents, el 20% en el sòl i un 8% es va perdre com a deriva. Finalment, el model es va comparar amb un balanç experimental de masses, amb resultats semblants en la deposició sobre la vegetació i el sòl. / Salcedo Cidoncha, R. (2015). MODELOS CFD PARA EL FLUJO DEL AIRE Y LA DISTRIBUCIÓN DE LAS GOTAS DE UN TURBOATOMIZADOR DURANTE LAS APLICACIONES EN CÍTRICOS [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/59444

O aumento da tolerância aos fungicidas convencionais, observado em diversos gêneros de fungos de interesse, e a preocupação crescente com o meio ambiente têm estimulado o desenvolvimento de novas alternativas para o controle de fitopatógenos. Dentre as novas estratégias antimicrobianas que têm sido avaliadas, o tratamento fotodinâmico antimicrobiano (TFA) é uma das mais promissoras. O TFA baseia-se no uso de um fotossensibilizador (FS) que se acumula seletivamente nas células do microrganismo alvo. A ativação do FS pela luz, na presença de oxigênio molecular, induz à formação de espécies reativas de oxigênio, como o oxigênio singlete, que provocam a morte do microrganismo alvo, com poucos danos ao hospedeiro. Apesar de muito promissor, o TFA ainda não foi explorado para o controle de fitopatógenos. No presente estudo, foi avaliada, in planta, a eficácia do TFA com o fotossensibilizador azul de metileno (MB) e radiação solar em conídios do fungo fitopatogênico Colletotrichum acutatum. Os experimentos foram conduzidos com MB de diferentes fabricantes, em duas concentrações (25 e 50 ?M) e em diferentes formulações, ao longo das diferentes estações do ano, em dias com e sem nebulosidade e em diferentes temperaturas. O TFA com MB e radiação solar foi extremamente eficaz, matando aproximadamente 100% dos conídios em todas as condições avaliadas. Os efeitos da aplicação do MB na planta hospedeira Citrus sinensis também foram avaliados. O FS foi aplicado repetidas vezes em folhas e em flores de mudas de laranjeira. Nenhum dano foi observado nas folhas ou nas pétalas após os tratamentos com o MB. Pela primeira vez, foi feito o estudo mecanístico dos efeitos do TFA com MB em conídios de C. acutatum. Foram avaliados os efeitos do TFA na permeabilidade da membrana plasmática dos conídios e na formação de espécies reativas de oxigênio tardias, por meio da utilização das sondas fluorescentes iodeto de propídio (PI) e dihidroetídio (DHE), respectivamente. O TFA com MB danificou a membrana plasmática, reduzindo a sua permeabilidade seletiva e induziu a formação de espécies reativas de oxigênio tardias nos conídios. Também foi conduzido um estudo de longa duração, no qual foi avaliada a tolerância dos conídios de C. acutatum ao TFA com o novo azul de metileno, após cada um de 45 ciclos sucessivos de TFA, seguido pela seleção dos sobreviventes. Foram observados aumentos gradativos na tolerância ao TFA a partir do 21° ciclo de seleção. Além do aumento na tolerância, também foi observado um aumento da pigmentação dos conídios, provavelmente decorrente da seleção de mutantes que acumulam mais carotenóides. / The increasing tolerance to conventional fungicides observed in several genera of pathogenic fungi and the growing concern about the environment have stimulated the development of new alternatives to control of plant pathogens. Among the new antimicrobial strategies that have been evaluated, antimicrobial photodynamic treatment (APDT) is one of the most promising. APDT is based on the use of a photosensitizer (PS) that selectively accumulates in the target microbial cells. Activation of the PS by light in the presence of molecular oxygen induces the formation of reactive oxygen species, such as singlet oxygen, which cause damages to the target microorganism without significant harm to the host. Although very promising, APDT has not yet been used to control plant-pathogenic fungi. In the present study, the effectiveness of the APDT with the photosensitizer methylene blue (MB) and solar radiation on conidia of the plant-pathogenic fungus Colletotricum acutatum was evaluated in planta. The experiments were conducted with MB from different brands, in two concentrations (25 and 50 ?M) and different formulations, throughout the different seasons of the year, on cloudy and sunny days and at different temperatures. APDT with MB and solar radiation was extremely effective, killing around 100% of conidia in all conditions evaluated. The effects of the MB on the host plant Citrus sinensis were also evaluated. The PS was applied repeatedly on the leaves and flowers of the plants. No damage was observed on the leaves or the petals after treatment with MB. For the first time the mechanistic study evaluating the effects of APDT on C. acutatum conidia was carried out. The effects of APDT on the permeability of the conidial plasma membrane and on the production of secondary reactive oxygen species were evaluated by using the fluorescent probes propidium iodide (PI) and dihydroethidium (DHE), respectively. APDT with MB damaged the plasma membrane, reducing its selective permeability and induced the formation of secondary reactive oxygen species in conidia. It was also conducted a long term study which assessed the tolerance of conidia of C. acutatum to APDT, after each of 45 successive cycles of APDT with new methylene blue followed by the selection of the survivors. A gradual increase in APDT tolerance was observed from the 21st cycle. Besides the increase in tolerance to APDT, it was also observed an increase in the pigmentation of conidia probably due to the selection of mutants that accumulate more carotenoids.

A leprose dos citros, causada por Citrus leprosis vírus (CiLV), é uma doença endêmica nas regiões produtoras do estado de São Paulo que causa sérios prejuízos à produção. O vírus é transmitido exclusivamente pelo ácaro Brevipalpus phoenicis e medidas de controle da doença visam principalmente reduzir a população do vetor através de aplicações de acaricidas. Apesar do controle da doença ser determinado por meio de amostragens da população do ácaro, não há nenhum estudo de longo prazo que correlacione a população do vetor com a incidência da doença. O objetivo deste trabalho foi caracterizar os padrões de crescimento temporal e os padrões espaciais da distribuição do ácaro e da doença e estabelecer uma associação entre as duas populações. A população do ácaro e os sintomas de leprose foram monitorados durante três anos sob condições naturais de epidemia, em um talhão de laranja doce, variedade Valência enxertada sobre limão cravo, A população de B. phoenicis apresentou flutuações, mas com picos crescentes ao longo do período. As oscilações na sua densidade dependeram principalmente da fenologia das plantas e menos das condições climáticas. O crescimento da incidência da doença foi lento e seguiu comportamento logístico. Apesar de não ser sistêmica a leprose dos citros comporta-se como poliética com acúmulo de inoculo de ano para ano. A infecção em ramos é a principal causa do caráter cumulativo da doença. Através de regressão logística, a probabilidade de doença foi modelada em função de covariáveis construídas de forma a captar informação da vizinhança das plantas no tempo passado a respeito da incidência do ácaro e da própria doença. Não houve correlação entre o nível de doença numa avaliação e a quantidade de ácaros em avaliações anteriores, em períodos pregressos de até 70 dias. O padrão espacial de plantas com sintomas foi altamente agregado e não correspondeu à distribuição espacial de plantas infestadas pelo ácaro, que foi fracamente agregada. A probabilidade de infestação e de infecção nas plantas foi modelada como dependente do estado das plantas vizinhas, quanto às próprias características, através de modelos autologísticos. A probabilidade de plantas estarem infestadas pelo ácaro não depende de sua vizinhança estar ou não hospedando a praga, ao mesmo tempo. Já a probabilidade de doença em uma árvore depende de árvores vizinhas estarem doentes naquele momento. O padrão espacial da incidência de plantas com sintomas visíveis provavelmente reflete o padrão de infestação pelos ácaros contaminados por CiLV, pois existe uma subpopulação de vetores inserida na população de B. phoenicis. O controle da doença baseado na população de B. phoenicis, não é portanto, recomendável. A amostragem para a tomada de decisão de controle deve ser pautada pela presença de sintomas e ácaros e não somente pela presença de ácaros. / Citrus leprosis, caused by Citrus leprosis virus (CiLV), is a disease endemic to the producing regions of the state of São Paulo, where it has a heavy impact on production. The virus is transmitted exclusively by the Brevipalpus phoenicis mite and disease control measures aim to reduce the vector population mainly by acaricide applications. Although the disease control is based on mite population samplings, there are no long-term studies available that correlate the vector population with the disease incidence. The objective of this study was to characterize temporal and spatial growth patterns of the mite, disease distribution and the association between the two populations. The mite population and citrus leprosis symptoms were monitored for three years under natural epidemic conditions, in a sweet orange stand of the variety Valencia, grafted unto Citrus limonia Osbeck. The B. phoenicis population presented fluctuations, although with increasing peaks along the study period. The oscillation density depended more on the tree phenology than on climate conditions. The disease incidence increased slowly under a logistic model. Although citrus leprosis is not systemic, it has a polietic performance and builds up inoculum year after year. The infection of branches is the main cause of the cumulative nature of the disease. The disease probability was modeled by a covariable constructed to capture information of the trees surroundings in the past, concerning mite incidence and the disease itself. There was no correlation between the disease level in one evaluation and the mite quantity in earlier evaluations, in antecedent periods of up to 70 days. The spatial pattern of trees with symptoms was highly aggregated and did not correspond to the spatial distribution of miteinfested trees, which was weakly aggregated. The probability of tree infestation and infection was modeled as dependent of the state of the surrounding trees through autologistic models. The probability of mite infestation of a tree does not depend on whether the neighbor trees host the pest or not, but on whether the neighbor trees are diseased at that moment. A vector subpopulation is inserted in the B. phoenicis population. The spatial pattern of tree incidence with visible symptoms probably reflects the infestation pattern by CiLV-contaminated mites. Sampling for decision taking regarding disease control must be based on the presence of symptoms as well as of mites, rather than on the mite population only.

Submitted by LUMEY PEREZ ARTILES null (lumeyp@yahoo.es) on 2017-03-06T20:53:35Z No. of bitstreams: 1 Tese_Lumey_Perez_Artiles.pdf: 1138570 bytes, checksum: 01f489085bac51420d9c3526e6ac70a8 (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-03-13T18:59:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 artiles_lp_dr_jabo.pdf: 1138570 bytes, checksum: 01f489085bac51420d9c3526e6ac70a8 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-13T18:59:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 artiles_lp_dr_jabo.pdf: 1138570 bytes, checksum: 01f489085bac51420d9c3526e6ac70a8 (MD5) Previous issue date: 2017-01-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A doença huanglongbing (HLB) é considerada um dos maiores problemas fitossanitários da cultura dos citros na atualidade e sua disseminação ocorre principalmente por insetos vectores. Desta forma, o presente trabalho teve por objetivos estudar a biologia e os parâmetros populacionais de Diaphorina citri (vector do HLB) em variedades de citros e determinar o controle natural de Tamarixia radiata sobre as populações de D. citri. A biologia de D. citri foi estudada nos hospedeiros, limão Cravo e Citrumelo ‘Swingle’ e as copas de laranjas Pera, Hamilim e Valência em combinações com estes porta-enxertos. Em cada hospedeiro avaliaram-se a duração das fases de ovo, ninfa e ciclo biológico, viabilidade, fecundidade e razão sexual. Os resultados obtidos do estudo da biologia de D. citri mostram que em Citrumelo ‘Swingle’, a praga apresentou o maior tempo de duração da fase de ovo. A duração do ciclo biológico vario de 15,08 dias em Pêra/Cravo a 16,5 dias em Hamilim/Citrumelo ‘Swingle’, diferenciando-se significativamente. As maiores taxas de sobrevivência e viabilidade para ovo e ciclo biológico foram observadas nas copas de laranjas enxertadas em limoeiro Cravo. Na combinação Valência/limoeiro Cravo o inseto apresentou a maior viabilidade dos ovos (82,02%) e a menor (73,66%) em Hamilim/ Citrumelo ‘Swingle’. Os valores de sobrevivência (ovo-adulto) variaram de 71,07 a 56,16 % entre os hospedeiros avaliados, observando-se que a combinação Pêra/Cravo favorece a sobrevivência do inseto. Com base na tabela de fertilidade, o limoeiro Cravo apresentou a maior taxa liquida de reproduço (160,57) e a menor tempo de duração de cada geração (31,54 dias). Estimativas Jackknife da taxa intrínseca de crescimento (rm) variou de 0,152 em Valencia/Limoeiro Cravo para 0,127 em Citrumelo 'Swingle'. Os resultados indicaram que o porta-enxerto limoeiro Cravo favorece os parâmetros reprodutivos da praga, enquanto o Citrumelo ‘Swingle’ foi menos adequado para o desenvolvimento de D. citri, especialmente na copa Hamilim. Para complementar o segundo objetivo os experimentos sobre o controle natural de T. radiata foram desenvolvidos em Artemisa, Cuba, durante os anos 2007, 2008 e 2009, foram realizadas coletas de 125 brotos jovens em Citrus sinensis com uma frequência quinzenal e foi contabilizada a presença de ninfas de 3o a 5o instar e determinado as porcentagens de parasitismo por T. radiata. Foram determinadas as correlações entre as porcentagens de parasitismo e as variáveis climáticas. Foi encontrada uma correlação positiva (0,545 **, p <0,01) entre o número de ninfas parasitadas por T. radiata e a população total de ninfas de D. citri. Das variáveis climáticas estudadas, as precipitações (-0.388, p = 0,0257), dias com chuva (-0.364, p = 0,0374) e umidade relativa (-0.399, p = 0,0219) foram correlacionadas negativamente com o percentual de parasitismo. A percentagem de parasitismo foi estatisticamente significativa diferente entre estações do ano (p <0,01), sendo maior na primavera e outono e menor durante o verão. Tamarixia radiata mostrou-se ser regulador eficientes das populações de D. citri nas condições avaliadas com porcentagens de parasitismos superiores a 50% na primavera. / Huanglongbing disease (HLB) is considered one of the main phytosanitary problems currently in citrus plantations and its dissemination occurs mainly by insect vectors. Therefore, the present work aims to study the biology and population parameters of Diaphorina citri (vector do HLB) in citrus varieties and to evaluate the natural control of Tamarixia radiata on the populations of D. citri. The biology of D. citri was studied in the hosts Rangpur and Citrumelo ‘Swingle’ and the canopy of oranges Pera, Valencia and Hamilim in the combinations with these rootstocks. In each host the duration of the egg, nymph and biological cycle phases, viability, fertility and sexual proportions were evaluated. As for the biology of D. citri the longer time for the egg phase was obtained in Citrumelo Swingle. The biological cycle duration varied from 15.08 days in Pera/Rangpur to 16.5 in Hamilim/Citrumelo Swingle, differing significantly. The highest survival rates and viability of eggs and biological cycle were observed in the varieties of oranges grafted on lemon Rangpur. In the combination Valencia/Rangpur, the insect has presented the highest viability of eggs (82. 02%) and the lowest viability in Hamilim/Citrumelo Swingle (73. 66%). Survival values (egg-adult) ranged from 71.07 to 56.16% in the evaluated hosts, taking into account that the combination of the Pera/Rangpur favors the survival of the insect. Based on the fertility chart, Rangpur lemon had the highest net reproductive rate (160.57) and the shortest duration of each generation time (31.54 days). Jackknife estimates of rm varied from 0.152 on Valencia/Rangpur to 0.127 on Citrumelo Swingle. The results indicate that the rootstock of Rangpur lemon favors the reproductive parameters of the pest, while Citrumelo Swingle was less suitable for the development of D. citri, especially with Hamilim canopy. To complement the second objective the experiments were carried out in Artemisa, Cuba, during the years 2007, 2008 and 2009. Samples of young shoots of Citrus sinensis (125) were taken with a biweekly frequency and counted the number of nymphs in 3rd and 5th instar and the parasitism of T. radiata was determined. The correlation between climatic variables and parasitism was determined. A positive correlation (0.545 ** p <0.01) between the number of nymphs parasitized by T. radiata and the total population of D. citri nymphs found. Of the climatic variables studied rainfall (-0.388, p = 0.0257), the days with rain (-0.364, p = 0.0374) and relative humidity (-0.399, p = 0.0219) were negatively correlated with the parasitism percentage. Parasitism was statistically different between seasons (p <0.01), being higher in spring and autumn and less during summer. T. radiata proved to be effective in regulating D. citri populations under conditions evaluated with percent parasitisms higher than 50% in spring.

O estudo das relações hídricas em plantas é de fundamental importância para a compreensão da sua fisiologia. Nesse sentido, a determinação do fluxo de seiva tem sido bastante empregada em pesquisas sob condições de campo. As diferentes condições ambientais que ocorrem entre as faces leste e oeste da copa, certamente irão determinar uma resposta fisiológica diferenciada entre ambas as faces da planta. O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência da variação sazonal dos fatores ambientais sobre as relações hídricas das faces leste e oeste da copa de laranjeiras Valência em condições naturais. O estudo foi desenvolvido entre fevereiro e dezembro de 2005, em Cordeirópolis (SP). O espaçamento entre plantas foi de 8 x 5 m, com as linhas de plantio orientadas no sentido norte-sul. As avaliações foram realizadas em quatro épocas: verão, outono, inverno e primavera. Independente da época do ano, o potencial da água no ramo, medido antes do amanhecer, não apresenta diferenças significativas entre as faces leste e oeste da copa de laranjeiras Valência, indicando que a reidratação durante esse período ocorre uniformemente em toda a copa da planta. Por outro lado, às 14:30 h, a face oeste apresenta menor potencial da água no ramo, diferindo significativamente da face leste, em todas as épocas avaliadas. Em dias ensolarados, há uma defasagem entre os cursos diários da densidade de fluxo de seiva (DFS) das faces leste e oeste da copa. Essa defasagem é conseqüência das variações dos fatores ambientais entre as faces ao longo do dia, principalmente da radiação solar. Em dias nublados, os cursos diários de DFS entre as faces são similares, ocasionado pela predominância da radiação difusa. A variação dos fatores ambientais, dependendo da época do ano, promove diferenças significativas de transpiração entre as faces da copa. Na face leste, em dias ensolarados, a partição da transpiração diária ocorre de forma equilibrada entre os períodos da manhã e da tarde, enquanto na face oeste ocorre predominantemente no período da tarde, independente da época do ano. Em dias nublados, e para ambas as faces da copa, a transpiração ocorre mais intensamente no período da tarde. Em dias ensolarados, a DFS da face leste apresenta melhor associação com a radiação solar, em todas as épocas, enquanto na face oeste, a melhor associação se verifica com o déficit de pressão de vapor do ar. Em dias nublados, há melhor associação de DFS com a temperatura do ar, para ambas as faces. A comparação entre os cursos diários da transpiração instantânea (E) e de DFS, expressas em unidades equivalentes, evidencia a defasagem entre ambas, tanto na face leste quanto na oeste, em todas as épocas avaliadas, exceto no inverno, quando os baixos valores da condutância estomática limitaram a transpiração. / The study of water relations in plants is of fundamental importance to understand their physiology. Therefore, determining the sap flow has been frequently used in field researches. The environmental differences between the east and west sides of the canopy surely determines a different physiological response between the two plant sides. This work was aimed at assessing the influence of seasonal variation of environmental factors on the water relations of the east and west sides of the canopy of ´Valencia´ sweet orange plants in natural conditions. The study was conducted between February and December 2005 in Cordeirópolis (SP). Plant spacing was 8 x 5m, with plant rows in north-south orientation. Evaluations were carried out during each season: spring, summer, fall and winter. Regardless of the season, the stem water potentials in the east and west sides of the canopy of Valencia sweet orange plants measured at predawn did not show significant differences, indicating an even rehydration during this period throughout the plant canopy. On the other hand, at 02:30pm, the west side shows lower stem water potential than the east side in all seasons evaluated, differing significantly between them. In sunny days, there is a gap between the daily courses of the sap flow density (SFD) of the east and west sides of the canopy. Such gap is due to differences in the environmental factors, especially solar radiation, between the sides along the day. In cloudy days, the daily SFD courses are similar in both sides due to the predominance of the diffused radiation. Depending on the season, the variations in the environmental factors cause significant differences in the transpiration between the two canopy sides. In sunny days, there is a balanced partition in the daily transpiration between the morning and afternoon periods in the east side, while in the west side, the partition happens predominantly in the afternoon period, regardless of the season. In cloudy days, transpiration is more intense in the afternoon period in both sides of the canopy. In sunny days, in the east side the SFD is best associated with the solar radiation in all seasons, while in the west side the SFD is best associated with the air vapor pressure deficit. In cloudy days, the SFD is best associated with the air temperature in both sides. The comparison of the daily courses of the instantaneous transpiration (E) and of the SFD, expressed in equivalent unities, evidences the gap between them, in both east and west sides, in all seasons except for winter, when the low stomatic conductance limited transpiration.

Citrus paradisi 3-O-glucosyltransferase (Cp3GT, Genbank Protein ID: ACS15351) and Citrus sinensis 3-O-glucosyltransferase (Cs3GT, Genbank Protein ID: AAS00612.2) share 95% amino acid sequence identity. Cp3GT was previously established as a flavonol-specific 3-O-glucosyltransferase by direct enzymatic analysis. Cs3GT is annotated as a flavonoid-3-O-glucosyltransferase and predicted to use anthocyanidins as substrates based on gene expression analysis correlated with the accumulation of anthocyanins in C. sinensis cv. Tarocco, a blood orange variety. Mutant enzymes in which amino acids found in Cs3GT were substituted for position equivalent residues in Cp3GT were generated, heterologously expressed in yeast, and characterized for substrate specificity. Structure–function relationships were investigated for wild type and mutant glucosyltransferases by homology modelling using a crystallized Vitis viniferaanthocyanidin/flavonol 3-O-GT (PDB: 2C9Z) as template and subsequent substrate docking. All enzymes showed similar patterns for optimal temperature, pH, and UDP/metal ion inhibition with differences observed in kinetic parameters. Although changes in the activity of the mutant proteins as compared to wild type were observed, cyanidin was never efficiently accepted as a substrate.

Submitted by DANILO FRANCO null (franco.danilo@gmail.com) on 2018-01-08T23:48:13Z No. of bitstreams: 1 Tese_Danilo_Franco.pdf: 1663923 bytes, checksum: 2d8e6e2bc505a1017e531d2fb608942f (MD5) / Approved for entry into archive by Alexandra Maria Donadon Lusser Segali null (alexmar@fcav.unesp.br) on 2018-01-09T09:37:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 franco_d_dr_jabo.pdf: 1663923 bytes, checksum: 2d8e6e2bc505a1017e531d2fb608942f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-09T09:37:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 franco_d_dr_jabo.pdf: 1663923 bytes, checksum: 2d8e6e2bc505a1017e531d2fb608942f (MD5) Previous issue date: 2017-11-13 / Neste estudo, foram realizados três experimentos (E1, E2 e E3). Os dois primeiros experimentos (E1 e E2) referem-se a avaliações da eficiência dose-resposta dos fungicidas hidróxido de cobre (HC), oxicloreto de cobre (OC) e óxido cuproso (OCp), aplicados nos estádios F1 e F2, no controle de Phyllosticta citricarpa, agente causal da mancha preta dos citros (MPC). E, no terceiro experimento (E3), foi avaliada a influência da aplicação de piraclostrobina em consonância com eventos chuvosos, no controle da MPC. Em E1 e E2 os fungicidas e dosagens avaliadas foram (g de cobre metálico 100 L-1 de calda): HC (43,7; 35,0; e 26,2; OC (100,8; 90,7; e 68,0) e; OCp (90,0; 56,3; e 42,2). No experimento E1 foram utilizadas plantas de laranjeira ‘Pera’, sob condições naturais de infecção, em Olímpia/SP. Foi adotado o delineamento experimental de blocos ao acaso, com quatro repetições. Cada parcela foi constituída de 33 plantas. Os fungicidas foram aplicados mediante turbopulverizador e vazão de 135 mL de calda m-3 de copa. Posteriormente, em todos os tratamentos, a partir do estádio F4 foram realizadas quatro aplicações de azoxistrobina a 75 g de i.a. 2.000 L-1, em intervalo de 42 dias. Foram realizadas quatro avaliações mensais, de agosto a novembro, amostrando-se casualmente 100 frutos nas seis plantas centrais da parcela, determinando-se a incidência (I) e severidade dos sintomas mediante escala de notas. A partir dos dados de severidade dos sintomas foi determinado o índice de doença (ID). Com os dados de ID, ao longo do tempo, calculou-se a área abaixo da curva de progresso da doença (AACPD). Em E2 foram empregadas plantas de laranjeira ‘Pera‘, também em Olímpia/SP. Os tratamentos avaliados foram semelhantes aos anteriormente citados, sendo, porém, aplicados com pulverizador manual do tipo “De Vilbs”, com volume suficiente para cobertura uniforme dos frutos. Foi adotado o delineamento de blocos ao acaso, em arranjo fatorial 10 tratamentos, sendo nove combinações de fungicidas cúpricos e uma testemunha, sem fungicida) x 5 (épocas de inoculação) e 4 (repetições). Cada parcela foi constituída por 20 frutos previamente ensacados com papel semi-kraft, no estádio F1. Posteriormente, no estádio F4, procedeu-se remoção dos sacos de papel, seguido do tratamento dos frutos exclusivamente com fungicidas cúpricos. O tratamento dos frutos deu-se mediante sua imersão, durante x segundos, na calda fungicida acrescida de óleo mineral a x%. Posteriormente, após secagem da calda procedeu-se o reensacamento dos frutos. A seguir, em intervalo semanal, entre 0 a 28 dias após o tratamento, foi realizada inoculação mediante aspersão de suspensão contendo 104 conídios mL-1. Na avaliação, realizada quando da colheita da maturação dos frutos, foram determinados os valores de I e ID. O experimento E3 foi realizado em pomar comercial de laranjeira ‘Folha Murcha’, no município de Paraíso/SP. Inicialmente, nos estádios F1 e F2 foram realizadas duas aplicações de oxicloreto de cobre (90 g de cobre metálico 100 L-1 de calda). Os tratamentos avaliados foram: aplicação do fungicida piraclostrobina em intervalo de 14 dias entre si, na dose de 25 g 2000 L-1; aplicação de piraclostrobina, na dose de 75 g 2000L-1 após o primeiro evento de chuva ocorrido 14 dias após a última aplicação do tratamento; aplicação de piraclostrobina, na dose de 75 g 2000L-1 após o primeiro evento de chuva, ocorrido 35 dias após a última aplicação do tratamento; aplicação de piraclostrobina, com intervalo de 42 dias entre si nas doses de 50 e 75 g 2000L-1. Esses tratamentos foram comparados com o tratamento padrão de azoxistrobina, na dose de 75 g 2000L-1, aplicado em intervalo de 42 dias. Foi utilizado o delineamento de blocos casualizados, e cada parcela foi constituída por 66 plantas. As condições operacionais adotadas para aplicação dos fungicidas foram semelhantes às adotadas em E1, porém com 150 mL de calda m-3 de copa. Os critérios de avaliações foram semelhantes aos citados em E1, em intervalos mensais, de setembro a janeiro. Concluiu-se que os fungicidas HC, OC e OCp nas doses de 43,7, 90,7 e 56,3 g de cobre metálico 100 L-1, respectivamente, aplicados nos estádios F1 e F2, complementado por aplicações de azoxistrobina, foram igualmente eficientes no controle de MPC. A eficiência do efeito protetor dos fungicidas cúpricos foi constatada por pelo menos 28 dias após a sua aplicação. Porém, a maior eficiência dos fungicidas cúpricos deu-se quando da sua aplicação previamente à inoculação de P. citricarpa. Aplicações de piraclostrobina a 75 g de i.a. 2000L-1 em intervalo de no mínimo 14 dias entre eventos chuvosos resultaram em maior controle da doença, quando comparado aos demais intervalos e doses de piraclostrobina e a azoxistrobina, na dose de 75 g 2.000 L-1, em intervalo fixo de 42 dias, com consequente redução da incidência e severidade de sintomas de MPC. / In this study, three experiments were performed (E1, E2 and E3). The first two experiments refer to the rate-response efficiency of the fungicides copper hydroxide (HC), copper oxychloride (OC) and cuprous oxide (OCp) in the control of Phyllosticta citricarpa, causal agent of citrus black spot (CBS). And the third (E3) the influence of pyraclostrobin application was evaluated in consonance with rainy events. In E1 and E2 the evaluated rates were: HC (43.7; 35.0; and 26.2 g of metallic copper 100L-1); OC (100.8, 90.7, and 68.0 g of metallic copper 100L-1); OCp (90.0, 56.3, and 42.2 g of metallic copper 100L-1). The experiment (E1) was conducted under natural infection by P. citricarpa in 'Pera' sweet orange planted in Olímpia/SP. A randomized blocks design was used, with four replications. Each plot was represented by 33 plants. The fungicides were applied in stages F1 and F2 by turbosprayer and 135 ml m-3 of the tree canopy. Subsequently, in F4 stage, all treatments were treated with azoxystrobin at 75 g 2000 L-1, four times in a 42-day interval. Four monthly evaluations were performed, from August to November, evaluating 100 fruits to determining the incidence and symptoms severity. Data were used to determined area under disease progress curve (AUDPC). In E2, a 'Pera' sweet orange plants were used, also located in Olímpia/SP. The treatments evaluated were similar those previously in E1, but were applied by a manual "De Vilbs" sprayer, with sufficient volum for uniform fruit coverage. A randomized blocks design were used in a factorial arrangement of 10 treatments (9 copper fungicides treatments and one untreated check) x 5 (inoculation times) and 4 (replicates). Each plot was formed by 20 pre-bagged fruits with semi-kraft paper in the F1 stage. In the F4 stage the bags were removed and the fruits sprayed exclusively with copper fungicides. Subsequently, in a weekly interval from 0 to 28 days after application at inoculation with suspension spray containing 104 conidia mL-1 was performed. In the harvest time an evaluation was performed and the values of I and DI were determined. E3 was carried out in a commercial 'Folha Murcha' sweet orange orchard, in Paraíso/SP. Initially, in stages F1 and F2, two applications of copper oxychloride based on 90 g of metallic copper 100 L-1 were perfomed. The treatments evaluated were: application with 14 days fixed interval in the pyraclostrobin rate of 25 g 2000L-1; application of 75 g 2000L-1 after the first rain event occurred 14 days after the last fungicide application; application of 75 g 2000L-1 after the first rain event occurred 35 days after the last fungicide application; application with 42 days fixed interval of 50 and 75 g 2000L-1. These treatments were compared with the standard treatment with 42 days fixed interval of azoxystrobin at rate 75 g 2000L-1. A randomized blocks design was used with 66 plants per plot. The fungicides applications were similar that in E1, but with 150 mL m-3 of canopy volume. The evaluations were similar that in E1, in monthly intervals, from September to January, in the ten central plants per plots. It was concluded that the fungicides HC, OC and OCp in the rates of 43.7, 90.7 and 56.3 g of metallic copper 100 L-1, respectively, applied in stages F1 and F2, complemented by applications of azoxystrobin, were equally efficient to control CBS. The protective effect of the copper fungicides was maintained until 28 days after treatment. However, the best response was obtained when inoculating P. citricarpa immediately after copper fungicides treatment. The 75 g 2000L-1 of pyraclostrobin application after the first rainy event occurred at least 14 days from the last fungicide application resulted in a greater reduction in the incidence and severity of CBS symptoms.