Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2006. / Submitted by Natália Cristina Ramos dos Santos (nataliaguilera3@hotmail.com) on 2009-11-01T21:58:58Z No. of bitstreams: 1 2006_Debora Zanutto Velasques.pdf: 4792905 bytes, checksum: c218290ab13db2003da3f87b9dfa911c (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2010-03-05T13:06:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_Debora Zanutto Velasques.pdf: 4792905 bytes, checksum: c218290ab13db2003da3f87b9dfa911c (MD5) / Made available in DSpace on 2010-03-05T13:06:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_Debora Zanutto Velasques.pdf: 4792905 bytes, checksum: c218290ab13db2003da3f87b9dfa911c (MD5) Previous issue date: 2006 / Objetivo: Estudar o efeito da Hidroxiapatita de coral (HA) implantada na derme, em ratos. Métodos: 48 ratos Wistar distribuídos em três grupos de 16 animais cada, onde animais do grupo I receberam implante de HA, do grupo II, ácido hialurônico (AH), do grupo III, Solução Fisiológica (SF). Cada grupo foi dividido em dois subgrupos de acordo com o período de avaliação de 30 ou 90 dias. A avaliação histológica constou da quantificação de fibras colágenas e da analise qualitativa de processo inflamatório. Resultados: Não houve reação inflamatória em nenhum período. Houve aumento da espessura da derme nos grupos onde se injetou AH e HA, aos 30 dias de avaliação, quando comparados com o grupo em que se injetou SF. Aos 90 dias, o grupo HA, ainda mantinha aumento da espessura da derme, quando comparado aos demais. A análise quantitativa das fibras colágenas mostrou que aos 30 dias os grupos AH e HA tinham maior quantidade de fibras colágenas que o grupo SF. Aos 90 dias, o grupo HA apresentou maior quantidade de fibras colágenas que os demais. A análise quantitativa do colágeno tipo I e III mostrou que aos 30 dias o grupo SF manteve as mesmas quantidades e que os grupos AH e HA mostraram prevalência do colágeno tipo I. Aos 90 dias, o grupo SF manteve-se igual, mas os grupos AH e HA mostraram maior quantidade de colágeno tipo III. Conclusão: A HA mostrou-se biocompatível e indutora de neoformação de fibras colágenas, quando implantada na derme de ratos, e mantém esse efeito por período maior que o ácido hialurônico. ___________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Objective: To study the effect of the calcium hydroxylapatita implanted in derm, rats. Methods: 48 Wistar rats distributed in three groups of 16 animals each, where the animals of group I had received implantation from calcium hydroxylapatita (HA), of group II, acid hialuronic (AH) and of group III, Physiological Solution (SF). Each group was redistributed in two sub-groups in accordance with the period of evaluation of 30 or 90 days. The histologic evaluation consisted of the collagens staple fibre quantification and of it analyzes qualitative of inflammatory process. Results: It did not have inflammatory reaction in period of evaluation. It had increase of the thickness of derm reticular in the groups where if it injected AH and HA, to the 30 days of evaluation, when compared with the group where if it injected SF. To the 90 days, the group where if it injected HA, still kept increase of the thickness of derm reticular, when compared with excessively. The quantitative analysis of collagens staple fibres showed that to the 30 days groups AH and HA had greater amount of collagens staple fibres that group SF. To the 90 days, group HA presented greater amount of collagens staple fibres that excessively. The quantitative analysis of collagens staple fibres of type I and III showed that to the 30 days of comment group SF kept a balance between the amounts and in such a way the group AH how much group HA had presented a prevalence of the collagen of type I. To the 90 days, group SF kept standard the same, but in such a way the group AH how much group HA had shown a bigger amount of collagen of type III. Conclusion: The HA revealed biocompatible and inductive of neoformation of collagens staple fibres, when implanted in derm of rats, and keeps this effect for bigger period that the acid hialuronic.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2006. / Texto parcialmente liberado pelo autor. / Submitted by samara castro (sammy_roberta7@hotmail.com) on 2010-10-09T18:16:28Z No. of bitstreams: 1 2006-Alverne Passos Barbosa.pdf: 23453 bytes, checksum: 182320723b268eef364d5240cb8f3322 (MD5) / Approved for entry into archive by Carolina Campos(carolinacamposmaia@gmail.com) on 2010-10-11T15:06:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006-Alverne Passos Barbosa.pdf: 23453 bytes, checksum: 182320723b268eef364d5240cb8f3322 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-10-11T15:06:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006-Alverne Passos Barbosa.pdf: 23453 bytes, checksum: 182320723b268eef364d5240cb8f3322 (MD5) Previous issue date: 2006-09-28 / Lagochilascaris minor (Leiper, 1909) um ascarídeo descrito há quase um século, é o agente etiológico da lagochilascariose humana, uma helmintose emergente, de caráter crônico e às vezes fatal, para a qual ainda não há tratamento satisfatório. Este parasito tem notável capacidade migratória por tecidos do hospedeiro, realizando verdadeiros túneis nos tecidos envolvidos. Neste estudo, a larva de 3o estádio (L3) de L. minor migrou da luz intestinal para musculatura esquelética e tecido subcutâneo de camundongos experimentalmente infectados, atravessando mucosa, membranas basais dos vasos e parênquimas hepático e pulmonar. No hospedeiro definitivo, o parasito realizou incursões pelo tecido de pacientes promovendo tumorações nas regiões retroauricular e cervical, bem como lesões osteolíticas no ouvido médio, mastóide, sistema nervoso central e coluna cervical. Enzimas proteolíticas de helmintos podem facilitar a invasão, migração, evasão da resposta imune, o acesso a nutrientes e o desenvolvimento do parasito no organismo do hospedeiro. A atividade de metaloproteases dos produtos de excreção/secreção (ES) de L3 de L. minor foi avaliada por SDS-PAGE que revelou duas atividades gelatinolíticas principais. A atividade proteolítica ótima ocorreu em pH neutro/alcalino e estava associada à presença de metaloproteases de 59 (SM59Lm) e 114 (SM114Lm) kDa. Posteriormente, os produtos de ES hidrolisaram fibrinogênio e colágeno tipo I em pH neutro, mas não degradaram BSA. Além disto, foi demonstrado que metaloproteases presentes em produtos de ES hidrolisam a estrutura de tripla hélice de fibras de colágeno tipo I (colágeno nativo) presentes em mesentério de camundongo. Estes resultados sugerem que metaloproteases de produtos de ES de L3 podem facilitar a migração de L. minor por tecidos do hospedeiro, através da hidrólise do colágeno da matriz extracelular além de promover a evasão dos mecanismos hemostáticos do hospedeiro, através da degradação do fibrinogênio. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Lagochilascaris minor (Leiper, 1909), an ascarid described almost a century ago, is the causative agent of human lagochilascariosis, an emergent helminthiasis often chronic and sometimes fatal, for which efficacious therapy is not available. This parasite has an impressive migrating capacity through host tissues and its pathways may become real tunnels in the infected tissues. In this study, third stage larvae (L3) of L. minor migrated from intestinal lumen to skeletal muscles and subcutaneous tissues of experimentally infected mice, crossing mucosa, basal membranes of vessels, hepatic and pulmonary parenchyma. In the definitive host, the parasite migrated through patient tissues promoting tumors in the cervical and retroauricular areas and osteolytic lesions in the middle ear, mastoid, central nervous system and cervical spine. Proteolytic enzimes of helminths can facilitate invasion, migration, evasion from immune response, nutrition and parasite development in the host. The activities of metalloprotease in excretory/secretory (ES) products from L3 of L. minor were evaluated by SDS-PAGE, which showed two major gelatinolytic activities. Optimal proteolytic activity was found to occur at neutral/alkaline pH and was associated with two L. minor-secreted metalloproteases of 59 (SM59Lm) and 114 kDa (SM114Lm). It was next showed that ES products of L3 were able to hydrolyze fibrinogen and collagen I at neutral pH, but not BSA. Furthermore, it was demonstrated that ES products of L3 mediate hydrolysis of the triple helical structure of collagen I fibers in mouse mesentery. These results suggest that ES proteases of L3 might facilitate both L. minor migration through host tissues by hydrolyzing collagens of the extracellular matrix and evasion from host hemostatic mechanisms by degrading fibrinogen.

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-01-22T18:23:00Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE VAGNE OLIVEIRA.pdf: 2880111 bytes, checksum: b546a5ff08a76d89b069ecf859947ecb (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-22T18:23:00Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE VAGNE OLIVEIRA.pdf: 2880111 bytes, checksum: b546a5ff08a76d89b069ecf859947ecb (MD5) Previous issue date: 2015-02-12 / CNPq / Este trabalho objetivou obter proteases com propriedades colagenolíticas a partir dos resíduos de três espécies de peixes neotropicais (arabaiana Seriola dumerili; pescada-branca Cynoscion leiarchus; e tucunaré Cichla ocellaris), através de extração por sistema de duas fases aquosas (SDFA), visando aplicá-lo para produção de peptídeos de colágeno. Inicialmente, serino proteases foram extraídas e caracterizadas físico-quimicamente quanto à temperatura e pH ótimos, bem como estabilidade à variação desses parâmetros e verificação de seus parâmetros cinéticos (Km e Vmáx). A sensibilidade aos íons metálicos e aos inibidores naturais e sintéticos também foi avaliada. Em seguida, a atividade colagenolítica dos extratos foi mensurada, obtendo-se 106,82 U/mg (C. ocellaris), 42,44 U/mg (S. dumerili) e 98,08 U/mg (C. leiarchus). Nos testes com inibidores de serino (PMSF) e metaloproteases (EDTA) obteve-se 18,53 e 23,29 U/mg, 14,09 e 14,94 U/mg e de 37,45 e 15,55 U/mg, como atividades enzimáticas de C. ocellaris, S. dumerili e C. leiarchus, respectivamente. Proteases com propriedades colagenolíticas de C. leiarchus e de C. ocellaris obtiveram pH ótimo de 8,0 e 7,5, mantendo-se estável entre 6,5 e 11,5; temperatura ótima de 55°C, termoestável entre 25 e 60°C, respectivamente. Os íons Ca2+ e Mg2+ funcionaram como ativadores, enquanto Zn2+ e Pb2+ atuaram como inibidores, assim como a ação da Benzamidina e TLCK, inibidores específicos de tripsina. No teste de especificidade ao colágeno, a enzima de C. leiarchus, após 48 horas, clivou todos os tipos de colágeno testados, sendo eficaz na seguinte ordem: colágeno da pele de P. corruscans > colágeno da pele de O. niloticus > colágeno bovino tipo I; enquanto que, para a enzima de C. ocellaris, após 36 horas, colágeno tipo I > colágeno de pele de P. corruscans > colágeno de pele de O. niloticus. As características físico-químicas da colagenases de C. ocellaris mostraram-se mais interessantes para prosseguimento das análises. Dessa forma, foram obtidos o Km e o Vmáx como 5,92 mM e 294,40 U/mg, respectivamente. Esta enzima mostrou especificidade aos colágenos testados, durante o intervalo de 1 h a 55°C, na seguinte condição: colágeno tipo I > colágeno de pele de O. niloticus > colágeno de pele de P. corruscans. A colagenase intestinal de C. ocellaris foi recuperada por meio do sistema de duas fases aquosas (SDFA) para obtenção da enzima purificada, obtendo-se coeficiente de partição de 8.24, usando 20,0% (w/w) de PEG 8000 e 12,5% (w/w) de sal de fosfato a pH 8,0. A enzima PEG-colagenolítica ainda foi capaz de clivar o colágeno do tipo I e do colágeno extraído da pele de C. ocellaris (rendimento 2.9% de peso seco). A técnica de SDFA permitiu a remoção de contaminantes por um processo rápido, simples e econômico e funcionou como etapa principal de purificação capaz satisfazer a necessidade de isolamento para a produção de peptídeos de colágeno, como descritos no presente trabalho. A simplicidade e alto rendimento, somando investimentos mais baixos, tornam o SDFA uma opção promissora de extração de colagenases a partir de resíduos do processamento do pescado para a produção de peptídeos de colágeno, visando aplicação na indústria alimentícia, farmacêutica e de cosméticos. / This study aimed to obtain proteases with collagenolytic properties from the waste of three species of Neotropical fish (greater amberjack Seriola dumerili; hake Cynoscion leiarchus, and peacock bass Cichla ocellaris), through extraction by aqueous two-phase system (ATPS), to apply it in the production of collagen peptides. Initially, serine proteases were extracted and physicochemically characterized for optimum temperature and pH, as well as stability to the variation of these parameters and verification of its kinetic parameters (Km and Vmax). The sensitivity to the metal ions and natural and synthetic inhibitors was also assessed. Then, the collagenolytic activity of the extracts was measured, yielding 106.82 U/mg (C. ocellaris), 42.44 U/mg (S. dumerili) and 98.08 U/mg (C. leiarchus). Tests with inhibitors of serine (PMSF) and metalloproteinases (EDTA) yielded 18.53 and 23.29 U/mg, 14.09 and 14.94 U/mg and 37.45 and 15.55 U/mg such as enzymatic activities of C. ocellaris, S dumerili and C. leiarchus, respectively. Collagenolytic proteases with collagenolytic properties from C. leiarchus and C. ocellaris obtained optimum pH of 8.0 to 7.5, and is stable between 6.5 and 11.5; optimum temperature 55°C, thermostable between 25 and 60°C, respectively. Ca2+ and Mg2+ functioned as activators and Zn2+, and Pb2+ acted as inhibitors, as well as the action of Benzamidine and TLCK, specific inhibitors of trypsin. In the collagen specificity test enzyme of C. leiarchus, after 48 hours, cleaved all collagen types tested being effective in the following order: P. corruscans skin collagen > O. niloticus collagen skin > bovine collagen type I; while for the enzyme from C. ocellaris, after 36 hours, type I collagen > P. corruscans skin collagen > O. niloticus skin collagen. The physicochemical characteristics of the collagenase of C. ocellaris were more interesting for further analysis. Thus, there was obtained a Michaelis-Menten constant (Km) and Vmax, 5.92 mM and 294.40 U/mg, respectively. The enzyme was specific to the tested collagens, during the interval of 1 h at 55°C in the following condition: type I collagen > O. niloticus skin collagen > P. corruscans skin collagen. The intestinal collagenase C. ocellaris was recovered by means of aqueous two-phase system (ATPS) to obtain the enzyme purified to give 8.24 partition coefficient, using 20.0% (w/w) PEG 8000 and 12.5% (w/w) of pH 8.0 phosphate salt. PEG-collagenolytic enzyme was still able to cleave collagen type I and collagen extracted from skin of C. ocellaris (yield 2.9% dry weight). The ATPS allowed the removal of contaminants by a fast, simple and cost effective technique and worked as main stage of purification, meeting the need for isolation, as in the production of collagen peptides, as described in this work. The simplicity and high performance, adding lower investments, make the ATPS a promising option collagenase extraction from waste from the fish processing for the production of collagen peptides, aiming at application in the food industry, pharmaceutical and cosmetics.

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-02-25T18:35:43Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE Douglas Henrique de Holanda Andrade.pdf: 1920389 bytes, checksum: 8abacdd980331f1bb47cac33257d4967 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-25T18:35:43Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE Douglas Henrique de Holanda Andrade.pdf: 1920389 bytes, checksum: 8abacdd980331f1bb47cac33257d4967 (MD5) Previous issue date: 2015-02-23 / CNPQ / A presente tese reporta a purificação parcial e caracterização enzimática de uma protease ácida proveniente do estômago do Pseudoplatystoma corruscans, bem como o aproveitamento de resíduos deste peixe para aplicação na extração de colágeno. Neste âmbito, o primeiro capítulo tratou da caracterização enzimática de uma protease ácida do estômago do pintado e aplicação desta enzima na extração de colágeno da pele de Oreochromis niloticus. A caracterização com substratos e inibidores específicos sugere que a protease ácida trata-se de uma pepsina-símile. Esta enzima foi pouco sensível à exposição a íons metálicos como Cu2+, Cd2+, Hg2+, Ca2+, Al3+, K+, Mg2+ e Ba2+. A protease demonstrou características interessantes como alta atividade, estabilidade em pH neutro e elevada temperatura ótima. Adicionalmente colágeno ácido e pepsino-solúvel (ASC e PSC) foram extraídos da pele de O. niloticus. Pepsina comercial e pepsina-símile proveniente do estômago do pintado foram utilizadas no processo de extração e favoreceram para o aumento do rendimento. No capítulo 2, foi realizada uma purificação parcial da protease ácida do estômago do pintado. Após as três etapas da purificação (tramento térmico, fracionamento salino e cromatografia de troca iônica) obteve-se um fator de purificação de 32 vezes. SDS-PAGE mostrou bandas proteicas entre 30,7 and 94 KDa, possivelmente isoformas da pepsina. O zimograma corroborou a presença da enzima. Além disso, o uso de inibidor específico produziu evidências de que a protease trata-se de uma pepsina-símile. A caracterização físico-química da protease ácida mostrou estabilidade da fração frente ao pH neutro, além de elevada temperatura ótima. Finalmente, o capítulo três objetivou a extração de colágeno (ácido e pepsino-solúvel) da pele do pintado, bem como a caracterização dessa proteína, sugerindo o seu uso como fonte alternativa de colágeno frente aos animais terrestres. ASC e PSC foram isolados da pele do pintado, evidenciando o aumento do rendimento da extração com a adição de pepsina. SDS-PAGE e espectro de absorção UV indicaram que o colágeno estudado foi do tipo I. ASC e PSC apresentaram alta solubilidade em pH ácido. Na presença de NaCl, PSC exibiu maior solubilidade em relação ao ASC. Diante dos resultados alcançados neste trabalho, pode-se dizer que os resíduos (pele e vísceras) do pintado apresentam um grande potencial para aplicações industriais, principalmente relacionadas à obtenção de colágeno. / The present work reports on the partial purification and enzymatic characterization of a acid protease from Pseudoplatystoma corruscans stomach as well as the use of this waste for fish collagen extraction. In this context, chapter one treated the enzymatic characterization of an acidic protease from spotted sorubim stomach and application of this enzyme in collagen extraction from Oreochromis niloticus skin. The characterization with substrates and specific inhibitors suggests that it is the acid protease pepsin-like. This enzyme was not sensitive to the exposure to metal ions such as Cu2+, Cd2+, Hg2+, Ca2+, Al3+, K+, Mg2+ and Ba2+. The protease showed interesting features like high activity, stability at neutral pH and high optimum temperature. Additionally, acid and pepsin soluble collagen (ASC and PSC) were extracted from the skin of O. niloticus. Commercial pepsin and pepsin-like from the spotted sorubim stomach were used in the extraction process and favored to increase the yield. In chapter two, it was performed a partial purification of acid protease from the spotted sorubim stomach. After the three steps purification it was obtained a 32 fold purification factor. SDS-PAGE revealed protein bands of 30.7 and 94 kDa, possibly pepsin isoforms. The zymography confirmed the presence of the enzyme. Furthermore, the use of specific inhibitor produced evidence that the protease is pepsin-like. The physicochemical characterization of acid protease showed stable fraction to neutral pH and high optimum temperature. Finally, chapter three brings the collagen extraction (acid and pepsin soluble) from the spotted sorubim skin as well the characterization this protein, suggesting its use as an alternative source of collagen front of land animals. ASC and PSC were isolated from the spotted sorubim skin showing increased extraction yield with the addition of pepsin. SDS-PAGE and UV absorption spectrum indicate that collagen studied is type I. ASC and PSC showed high solubility in acid pH. In the presence of NaCl, PSC exhibited higher solubility compared to ASC. With the results reported in the present thesis, it can be said that spotted sorubim wastes (skin and visceras) show great potential for industrial applications, mainly related to obtaining collagen as an alternative source.

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-07-31T22:13:07Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Nathalia Albuquerque Roberto.pdf: 2170710 bytes, checksum: d4675cfd7d221fc806601335f88f71e1 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-02T17:18:18Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Nathalia Albuquerque Roberto.pdf: 2170710 bytes, checksum: d4675cfd7d221fc806601335f88f71e1 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-02T17:18:19Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Nathalia Albuquerque Roberto.pdf: 2170710 bytes, checksum: d4675cfd7d221fc806601335f88f71e1 (MD5) Previous issue date: 2017-02-22 / CAPES / Os resíduos de processamento de peixe são uma importante fonte de recursos subutilizados que apresentam potencial para diversas aplicações biotecnológicas. A espécie Coryphaena hippurus, conhecida no Brasil como dourado, representa um importante recurso pesqueiro com uma ampla distribuição global. O colágeno, é uma proteína fibrosa encontrada em todo o reino animal, que possui uma variedade de aplicações industriais, principalmente nos setores farmacêutico, de cosméticos e alimentos. Devido aos baixos riscos de transmissão de doenças, alto rendimento nos processos de extração e ausência de toxicidade, organismos aquáticos têm se destacado como uma alternativa frente ao colágeno comercial (obtido a partir de animais terrestres). Assim, o presente trabalho teve por objetivo produzir peptídeos bioativos através da hidrólise do colágeno isolado da pele de dourado (C. hippurus), empregando colagenase extraída de suas vísceras intestinais. O rendimento da extração do colágeno ácido solúvel (ASC) e pepsino solúvel (PSC) foi de 43% e 3%, respectivamente. A SDS-PAGE do ASC e PSC apresentaram padrão de bandas semelhante ao encontrado na literatura para amostras de colágeno, com cadeias α 1 e α 2, bem como cadeia β. O espectro de absorção ultravioleta (UV) de ambos colágenos apresentou absorção máxima a 230 nm. A solubilidade de ASC e PSC foi maior na faixa de pH ácida, alcançando seu máximo em pH 1 e 2, respectivamente. A solubilidade do ASC foi superior em baixas concentrações de NaCl, apresentando diminuição da solubilidade em concentrações acima de 1%. Os espectros FTIR do ASC e PSC exibiram picos característicos de Amida I, II, III bem como amida A e B, semelhantes a colágenos do tipo I de outros peixes. Os resultados obtidos neste estudo indicam a possibilidade de obtenção de proteases e colágeno do tipo I a partir da pele do dourado para a produção de peptídeos bioativos. / Fish processing wastes are an important source of underutilized resources that have potential for various biotech applications. The species Coryphaena hippurus, represents an important fishery resource with a wide global distribution. Collagen is a fibrous protein found throughout the animal kingdom, which has a variety of industrial applications, mainly in the pharmaceutical, cosmetics and food industries. Due to the low risks of disease transmission, high yields in the extraction processes and absence of toxicity, aquatic organisms have stood out as an alternative against commercial collagen (obtained from terrestrial animals). Therefore, the present work aimed to produce bioactive peptides through the hydrolysis of collagen isolated from the skin of gold (C. hippurus), using collagenase extracted from its intestinal viscera. The extraction yield of ASC and PSC was 43% and 3%, respectively. The SDS-PAGE of the ASC and PSC presented bands pattern similar to that found in the literature for samples of collagen, with α 1 and α 2 chains, as well as β chain. The ultraviolet (UV) absorption spectrum of both collagens showed maximum absorption at 230 nm. The solubility of ASC and PSC was higher in the acid pH range, reaching its maximum at pH 1 and 2, respectively. The solubility of the ASC was higher at low NaCl concentrations, with a decrease in solubility at concentrations above 1%. FTIR spectra of ASC and PSC exhibited characteristic peaks of Amide I, II, III as well as amide A and B, similar to type I collagens of other fish. The results obtained in this study indicate the possibility of obtaining proteases and type I collagen from the skin of gilt for the production of bioactive peptides.

Orientador: Cesar C. Santana, Benedicto C. Vidal / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-21T05:19:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arruda_EduardoJosede_M.pdf: 4556664 bytes, checksum: 579c126a805a521c688ea630043f38f8 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: O estudo do comportamento viscoelástico dos géis de colágeno é importante para sua caracterização reológica visando-se aplicações em bioengenharia e práticas clínicas. Neste trabalho, as propriedades viscoelásticas dos géis de colágeno, obtidos a partir do tendão da cauda do rato (RTT), foram avaliadas e correlacionadas em função de variáveis de preparação (tempo de diálise, concentração de colágeno e pH, e da freqüência de oscilação do reômetro (Haake CV20, no modo oscilante e configuração de placas paralelas). Os parâmetros reológicos avaliados foram: módulo de armazenamento (G¿), módulo de dissipação (G¿¿) e viscosidade complexa ('eta POT. *¿). O desenvolvimento da estrutura do gel durante a diálise foi acompanhado por micrografia óptica e correlacionado com os parâmetros reológicos medidos. A concentração de colágeno variou com o tempo de diálise devido à hidratação das fibras. Os géis mostraram estruturas fibrilares características, nas quais as fibras estavam entrelaçadas e formando anéis e/ou arranjos helicoidais. O modelo de Maxwell e de Zenner, mostraram-se apropriados para a descrição das características viscoelásticas dos géis de acordo com suas concentrações de colágeno: o modelo de Maxwell para baixas concentrações de colágeno (menor que 1% em peso) e o de Zenner modificado para concentrações moderadas de colágeno (de 1% até 2,50% em peso) ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The study of the viscoelastic behavior of collagen gels important for its rheological characterization aiming applications in bioengineering and clinical practice. Viscoelastic properties of native and crosslinked collagen gels obtained from rat tail tendon (RTT) were evaluated and correlated as a function of gel preparation variables (dialysis time, collagen concentration, and pH) and oscillation frequency. The rheological parameters evaluated were the storage module (G¿), dissipation module (G¿¿), and complex viscosity ('eta POT. *¿), using a Haake CV20 rheometer operating with two parallel plate configuration in oscillating mode. The development of the fibrilar structure at the gel during dialysis was evaluated by optical photomicrography and correlated with the reological parameters. The collagen concentration changed with dialysis time due to the hydration of the fibers. The gels showed a typical fibrilar structure in which the fibers were interwinned forming either rings and/or helical arrangements. The models of Maxwell and Zenner showed to be appropriate to describe the viscoelastic behavior of the gels. The Maxwell model was in a good aggrement with the experimental rheological parameters for the low range collagen concentration (less than 1% by weight), while moderate collagen concentration range (1.0% to 2.5% by weight) had a good fit by modified Zenner¿s model... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Mestre em Engenharia Química

Orientador: Maria Lucia Furlan Wada / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-22T08:10:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SantosJunior_ArnaldoRodriguesdos_M.pdf: 16235737 bytes, checksum: 253e7da352aa44404b2c338171159327 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Células Vero foram cultivadas sobre géis 3D de colágeno tipo I ou em lamínulas de vidro por 48h com 10% de soro fetal bovino (SFB). Após este tempo de cultivo as células passaram a ser mantidas em meio sem SFB, com 10 % de SFB, com 10 % de SFB mais dexametasona (DEX) e com 20 % de SFB. Amostras foram fixadas após 48h, 120h e 240h de cultivo. Os géis foram incluidos em paraplast e cortados com 7Jlm de espessura. As amostras foram coradas com hematoxilina-eosina (HE), cresil violeta (CV), azul de toluidina (A T) e xylidine ponceau (XP). Foi realizado também imunocitoquímcia para colágeno IV (CaL IV) e para fibronectina (FN). Com as células cultivadas sobre lamínulas foram obtidos os índices mitóticos e as curvas de crescimento da cultura. Células cultivadas em colágeno por 24h, foram analizadas em microscopia eletrônica de varredura (MEV). Um ensaio em microplacas para a adesão celular com 24h de cultivo também foi realizado. As células que foram cultivadas sobre lamínulas e coradas com CV, em todos os casos analisados, mostravam morfologia irregular e com alguns prolongamentos, exceto nas regiões confluentes onde encontramos apenas células com formas poliédricas. Encontramos também a formação de grumos celulares nas amostras tratadas com DEX. Material bem corado com XP foi evidenciado tanto com 120h quanto com 240h de cultivo. Os grumos celulares nas amostras tratadas com DEX foram os pontos onde encontramos coloração mais intensa. O A T mostrou nas primeiras 48h células com citoplasma, núcleo e nucléolo metacromáticos. Com 120h de cultivo foram detectadas células com núcleos ortocromáticos, nucléolo basófilos e citoplasma levemente metacromático em quase todas as amostras, exceto nas tratadas com DEX, onde encontramos citoplasma intensamente metacromático. Com 240h de cultura encontramos células com citoplasma, núcleo e nucléolos metacromáticos (S/SFB e 10% SFB) e células com núcleos ortocromáticos, nucléolos e citoplasma metacromáticos (10% SFB+DEX e com 20% SFB). A imunocitoquímica mostrou a presença de CaL IV nas amostras mantidas S/SFB, com 10% SFB e com 20% SFB, mas não nas células cultivadas com DEX. Encontramos a presença de FN em todos os casos, porém foi encontrado um arranjo mais homogêneo nas células que cresceram na presença de 10% SFB+DEX e 20% SFB. Dados citoquímicos e imunocitoquímicos mostraram que o DEX interfere no padrão de crescimento de células sobre lamínulas. A MEV mostrou um grande espalhamento celular e deposição de material fibrilar, cuja deposição é estimulada pela variação da concentração dos componentes do SFB. O ensaio com microplacas mostrou que a adesão das células ao substrato também é estimulada pelo SFB. A análise morfológica feita com HE mostrou nos géis nas primeiras 48h uma monocamada de células achatadas, embora em alguns pontos as mesmas mostravam-se com duas ou três camadas de células arredondadas. Ambos os casos mostraram-se bem evidenciados pelo XP e as células apresentavam também metacromasia quando corado com AT. Com 120h e 240h em meio S/SFB ou com 10% de SFB, coradas com HE, foram observadas células formando um estrato com várias camadas arredondadas além de vários pontos de infiltração para o interior do substrato. Estas células apresentavam núcleos e citoplasma metacromáticos, quando corados com A T. Também encontramos granulações metacromáticas ao redor das células no interior do gel. Nesses experimentos o XP mostrou células bem coradas tanto no citoplasma como no núcleo. O gel também foi levemente corado pelo XP. As granulações presentes na matriz colagênica junto as células infiltradas também foram coradas pelo XP. A análise imunocitoquímica mostrou deposição de FN mas não de COL IV. Concluimos que nessas condições experimentais, S/SFB ou com 10% de SFB, as células cultivadas nos géis de colágeno, organizam uma estrutura semelhante a um tecido conjuntivo frouxo. Por outro lado, a HE mostrou que as células que foram tratadas com DEX (um inibidor da síntese de colagenases) e com 20% de SFB (que contém <X2-macroglobulina, um inibidor de atuação de colagenases) não invadiram a matriz colagênica, permanecendo com muitas camadas celulares, com forma arredondada na camada basal e achatada nas superiores. O A T mostrou células com núcleos e citoplasma metacromáticos, além de evidenciar uma camada acelular entre as células e o substrato. Todos as camadas celulares também foram bem coradas pelo XP. A imunocitoquímica mostrou que quando a infiltração foi bloqueada as células não produziram FN mas sim uma camada de COL IV. Os dados citoquímicos e imunocitoquímicos nos demonstraram que quando usamos inibidores de colagenases, as células Vero formam um tecido com características epiteliais e produzem uma estrutura semelhante à membrana basal / Abstract: The Vero celIs were cultured on a colIagen I gel or a glass coverslip with 10% fetal calf serum (FCS) for 48hs. After this incubation time, samples were cultured without FCS, or with 10% FCS, 10% FCS plus dexamethasone (DEX) or 20% of FCS. Samples were harvested after 48hs, 120hs, and 240hs and fixed. The gels were embedded in paraplast and 7J.lm thick sections were obtained. The samples were stained with hematoxilin-eosin (HE), cresil violet (CV), toluidine blue (TB) and xylidine ponceau (XP). Immunocytochemical tests were carried out for colIagen IV (COL IV) and fibronectin (FN). The mitotic index and the growth curve were obtained for celIs cultured on coverslip. The celIs cultured on colIagen gels for 24hs were studied with scanning electron microscopy (SEM). An assay for celIular adhesion during 24hs was also performed on 96 welIs microplate. The celIs cultured on coverslips, stained by CV, showed an irregular morphology with celIular processes, and a poliedric form on the confluent areas in alI the celIs studied. We also found the formation of many celIular aggregates in the samples treated with DEX. AlI samples were stained with XP, after 120hs or 240hs of culture. The celIular aggregates induced by DEX were stained by XP. The TB staining showed celIs with metachromatic cytoplasm, nuc1ei and nuc1eoli in the first 48hs. With 120hs of culture we found celIs with ortochromatic nuc1ei and light metachromasy in nuc1eoli and cytoplasm. With 240hs we found celIs with metachromatic nuc1ei, nuc1eoli and cytoplasm (without FCS and with 10% FCS) and celIs with ortochromatic nuc1ei, metachromatic nuc1eoli and cytoplasm (with 10% FCS + DEX or 20% FCS). The immunocytochemical experiment showed that COL IV was present in the samples cultured without FCS or with 10% FCS and 20% FCS, but it was not found in the celIs cultured with DEX. FN was present in alI samples but in the celIs cultured with 10% FCS + DEX or 20% FCS we found a more homogeneous arrangement. Cytochemical and immunocytochemical data showed that DEX modifies the growth of Vero celIs cultured on a coverslip. The SEM showed that celIular spreading and the synthesis of fibrillar material was stimulated by FCS. The microplate assay showed that celIular adhesion to the substratum is also stimulated by changes in concentration of the serum component. The morphological study of celIs cultured on a colIagen substratum was made with HE. In the first 48hs of culture we found a monolayer of flattened celIs on the colIagen substratum. We observed also the same celIs with a round morphology growing in 2-3 layers. These celIular layers were stained with XP and showed metachromatic cytoplasm when stained with TB. CelIs cultured during 120hs or 240hs without FCS or with 10% of FCS formed many layers of rounded cells capable of invading the collagen substratum. These cells showed a metachromatic cytoplasm and basophilic nuc1ei and nuc1eoli when stained with TE. We could see some metachromatic granulations surrounding the cells in the collagen gel. In these experiments XP staining showed cells with stained cytoplasm and nuc1ei. The collagen gel was also stained with XP. The granulations present in the matrix surrounding infiltrated cells stained with XP. The immunocytochemical tests showed the prodution of FN but not COL IV. We conc1uded that in these cases, the cells form a loose connective tissue like structure. On the other hand, cells cultured with 10% FCS + DEX, a collagenase synthesis inhibitor, or with 20% FCS, which contains a2­macroglobulin, a collagenase activity inhibitor, did not invade the collagen matrix and formed a multiple cell layers, where round cells occur on the basal layers and flattened cells on higher layers. All cells of these extracts were stained with XP. TB staining showed cells with cytoplasmatic metachromasy and basophilic nuc1ei and nuc1eoli. We could see also an acellular layer stained with TB between the cell and the substratum and with a immunocytochemical method we identified in the same areas a COL IV rich region. FN was not found. These cytochemical and immunocytochemical data showed that when we use collagenase inhibitors the Vero cells form a epitheliallike tissue and produce a structure similar to a basement membrane / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Luiz sergio Leonardi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-27T19:38:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FreitasJunior_Segirson_M.pdf: 15354985 bytes, checksum: d4a68ae7558eafef205f361d98891dd0 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: A cirrose hepática está entre as principais causas de morte no mundo todo, podendo ser provocada por diversas condições, tais como o alcoolismo, hepatite crônica, obstrução biliar, hemossiderose e outras doenças mais raras. Em crianças, a atresia de vias biliares constitui importante causa de cirrose hepática, sendo responsável por mais de 50 % dos transplantes hepáticos, nessa faixa etária. Apesar de apresentar toxicidade clinica, quando administrada cronicamente, a vitamina A tem sido implicada como fator de proteção hepática contra o surgjmento de cirrose em modelos experimentais com tetracloreto de carbono, dimetilnitrosamino,e na cirrose induzida por soro heterólogo em ratos. Foi demonstrado também, que a privação da vitamina A resulta em piora da fibrose hepática nesses modelos experimentais. Com o propósito de determinar se a vitamina A pode mterferir no processo de fibrose hepática por colestase, a mesma foi administrada a ratos submetidos à obstrução biliar, e comparados com ratos submetidos ao mesmo procedimento cirúrgico sem vitaminaA adicional. O presente estudo tem como objetivo a estimativa da fibrose hepática por meio da quantificação estereológica do colágeno e bioquímica da hidroxiprolina tecidual do figado de ratos, submetidos à obstrução biliar que receberam vitaminaA adicional. Foram utilizados 40 ratos, divididos em 3 grupos: Grupo Obstrução Biliar (OB): submetidos à obstrução do ducto biliar comum; Grupo Obstrução Biliar + Vitamina A (OV): submetidos à obstrução do ducto biliar comum e que receberam injeções subcutâneas de vitamina A nos períodos pré e pós - operatórios; Grupo Operação Simulada - sham (OS): submetidos à laparotomia e manipulação suave das vias biliares apenas. Foram feitas análises bioquímicas dos índices de hidroxiprolina hepática e histológicas do colágeno total em ftagmentos hepáticos e também dosagens séricas bioquímicas de fosfatase alcalina, bilirrubmas,GGT, transaminases e eletroforese de proteínas, dentro de 5 semanas do período pós-operatório. Os ratos colestáticos que receberam vitamina A apresentaram índices de hidroxiprolina (µg/100 mg de tec. hepático seco) e volumetria do colágeno (%) menores que seus controles que não receberam vitamina A, sendo as médias +-EPM, respectivamente, do grupo OB: 330,25 ± 28,23 e 12,86 ± 0,86; do grupo OV: 209,38 ± 14,47 (p < 0,001), e 8,72 ± 1,26 (p < 0,01). Não houve diferença entre os níveis séricos de fosfàtase alcalina, bilirrubmas e gamaglutamil transferase dos animais obstruídos que receberam ou não a vitamina A (p < 0,05). Os níveis séricos de alanina aminotransferase e aspartato aminotransferase foram maiores nos ratos obstruídos que receberam vitamina A do que em seus controles obstruídos que não a receberam (p < 0,05, ep < 0,05, respectivamente). Em vista dos resultados obtidos, conclui-se que a administração de vitamina A diminui de forma significativa a fibrose hepática em ratos submetidos a este modelo de obstrução biliar / Abstract: Hepatic cirrhosis is one of the main causes of death in the world and is due to diverse factors like alcoholism, chronic hepatitis, biliary obstruction, hemosiderosis and other rare diseases. The most important cause of this disease in children is biliary atresia, which is responsible for more than 50% of the liver transplants performed in this age group. Although chronic administration of vitamin A has resulted in clínical toxicity in experimental models with rats, it has proved to be a protective factor against cirrhosis induced by carbon tetrachloride, dimethylnitrosamine,and heterologous serum. Depriving these animaIs of vitamin A worsened hepatic fibrosis. In order to verify if vitamin A really interfered in the hepatic fibrotic process resulting from cholestasis, this vitamin was administered to rats that had undergone biliary obstruction and then compared with rats that had undergone the same surgical process but without any additional vitamin A. The purpose of this study was to estimate hepatic fibrosis in rats, that had undergone biliary obstruction and had received additional vitamin A, based on the stereological quantification of collagen and the biochemistryofthe hydroxyproline liver tissue. The study used 40 rats divided into 3 groups: Biliary Obstruction Group (OB) - underwent common biliary duct obstruction; Biliary Obstruction + Vítamin A Group (OV) - underwent common biliary obstruction and received vitamin A subcutaneously during the pre and postoperative periods; Simulated Obstruction Group - Sham (OS) - underwent laparotomy and discreet manipulation of the biliary ducts. During 5 postoperative weeks, liver fragments were biochemically analyzed for hepatic and histological hydroxyproline indices of total collagen, and also for biochemical serum doses of alkaline phosphatase, bilirubins, GGT, transaminases and protein electrophoresis. The cholestatic rats that were given vitaminA showed lower indices of hydroxyproline (µg/100 mg of dry hepatic tissue) and volumetric collagen (%) than the controls. The respective mean :± SEM for the OB Group were 330.25 ± 28.23 and 12.86 ±0,86; for the OV Group: 209.38 ±14.47 (p < 0,001), and 8.72 ± 1.26 (p < 0,01). There was no difference between the serum levels of alkaline phosphatase, bilirubins and gammaglutamil transferase in the obstructed animals that received vitamin A and those that did not (p<0,05).The serum levels of alanine aminotransferase and aspartate aminotransferase were higher in the obstructed rats that received vitamin A than in the obstructed controls that did not receive vitaminA (p < 0,05, and p < 0,05, respectively).These results led to the conclusion that vitamin A significantly reduced the hepatic fibrosis induced in rats by biliary obstruction / Mestrado / Cirurgia / Mestre em Cirurgia

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-10-04T18:46:18Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Robson Coelho de Araújo Neri.pdf: 1075239 bytes, checksum: ad1cd5939fe1a382b380ff7693f87424 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-11-14T18:52:55Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Robson Coelho de Araújo Neri.pdf: 1075239 bytes, checksum: ad1cd5939fe1a382b380ff7693f87424 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-14T18:52:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Robson Coelho de Araújo Neri.pdf: 1075239 bytes, checksum: ad1cd5939fe1a382b380ff7693f87424 (MD5) Previous issue date: 2013-02-28 / FACEPE / O organismo animal apresenta-se composto por diversas proteínas fibrosas, sendo o colágeno a que ocorre em maior quantidade equivalendo a 30% do conteúdo proteico total do animal. Bovinos e suínos são os organismos animais que apresentam a maior quantidade proporcional de colágeno na pele e ossos, porém devido ao risco de transmissão de zoonoses como Encefalopatia Espongiforme Bovina (EEB), Encefalopatia Espongiforme Transmissível (EET) e a Febre Aftosa (FA), torna-se necessário buscar fontes alternativas dessa proteína tais como os organismos aquáticos. Os peixes devido a sua disponibilidade e baixo risco de transmitir doenças são bastante relatados em recentes estudos científicos. No presente trabalho objetivou-se extrair e caracterizar parcialmente o colágeno obtido a partir das escamas do peixe cioba (Lutjanus analis), e investigar a possibilidade da utilização deste subproduto da indústria pesqueira como fonte alternativa ao colágeno mamífero. Colágeno ácido solúvel (ASC) e pepsino solúvel (PSC) tipo I foram extraídos com rendimentos de 3,85% e 6,15% (peso seco), respectivamente, obtendo um rendimento total da extração de 10%. A SDS-PAGE (7,5%) das amostras de colágeno (ASC e PSC) apresentaram duas cadeias α1 e uma cadeia α2, além de cadeias β. O colágeno PSC foi solúvel na faixa de pH 2 – 6, apresentando máxima solubilidade relativa no pH 3, enquanto que o colágeno ASC foi solúvel na faixa de pH de 1 – 6, apresentando máxima solubilidade relativa no pH 1. Ambos colágenos foram solúveis na faixa de concentração de NaCl de 0-4% (p/v). A temperatura máxima de transição (Tmax) obtida para as amostras de ASC e PSC (respectivamente) foi 76°C e 77°C. O espectro de absorção de raios ultravioleta (UV) ocorreu na mesma faixa para ambos, sendo 236nm e 239nm os pontos de maior absorção para ASC e PSC respectivamente. Os resultados obtidos neste trabalho indicam a possibilidade do uso de escamas da cioba como fonte de biomoléculas com grande potencial de aplicação biotecnológica e industrial. / The animal organism presents composed of several fibrous proteins, being collagen that which occurs in larger amount corresponding to 30% of the total protein content of the animal body. Bovine and porcine are the animals with the greatest proportional amount of collagen in the skin and bones, but due to the risk of transmitting diseases such as Bovine Spongiform Encephalopathy (BSE), Transmissible Spongiform Encephalopathy (TSE) and Foot and Mouth Disease (FMD) it becomes necessary to find alternative sources of this protein such as marine animals. Fishes due to its availability and low risk of transmitting disease are fairly reported in recent scientific studies. The present work aimed to extract and partially characterize the collagen obtained from fish scales of mutton snapper (Lutjanus analis) and investigate the possibility of using this fisheries by-product as an alternative source to mammal collagen. Type I acid soluble (ASC) and pepsin soluble (PSC) collagen were extracted with yields of 3.85% and 6.15% (dry weight), respectively, with a total yield extraction of 10%. Electrophoresis (SDS-PAGE) pattern showed that both ASC and PSC consisted of two α1 and one α2 chains, well as β chains. The collagen PSC was soluble in the pH range 2 – 6, with maximum relative solubility at pH 3, while collagen ASC was soluble in the pH range 1 – 6, with maximum relative solubility at pH 1. Both collagens were soluble in the range of NaCl concentration 0 – 4% (w/v). The maximal transition temperatures (Tmax) for ASC and PSC were 76°C and 83°C, respectively. Both collagen samples had the same range of absorption of ultraviolet (UV) spectrum, being 236nm and 239nm which points to greater absorption of ASC and PSC respectively. The results obtained in this study indicate the possibility of using mutton snapper scales as a source of biomolecules with great potential for biotechnological and industrial application.

Orientadores : Olga Maria de Toledo Correa, Paulo Pinto Joazeiro / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-02T04:42:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pinheiro_MonicadeCampos_D.pdf: 13257834 bytes, checksum: 646512b7dd6dc4d93d59b0c98063ce48 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: A sínfise púbica é uma articulação não sinovial, do tipo anfiartrose, que conecta os dois ossos púbicos através de um disco fibrocartilaginoso. Durante a prenhez, a sínfise púbica de camundongos passa por numerosas modificações estruturais, facilitadas por hormônios, a fim de permitir a passagem dos fetos pelo canal de parto. Essas modificações incluem um aumento da flexibilidade dessa articulação e a transformação do disco fibrocartilaginoso em um ligamento interpúbico flexível e elástico. O desenvolvimento do ligamento interpúbico envolve o aumento da biossíntese dos componentes da matriz extracelular, principalmente colágeno, proteoglicanos e glicosaminoglicanos e a mudança na relação entre síntese e degradação dos mesmos. Levando-se em consideração que o tumover destes componentes na sínfise de camundongos foi caracterizado por estudos bioquímicos e de microscopia de luz, pouco se sabe a respeito dos aspectos ultra-estruturais e histoquímicos de componentes da matriz extracelular, tais como os proteoglicanos e o colágeno tipo VI, bem como das interações entre as diferentes macromoléculas extracelulares. Esses aspectos são importantes porque podem ajudar a entender as relações entre os diferentes componentes da matriz extracelular nesse modelo. Nesse sentido, o objetivo desse trabalho foi caracterizar os glicosaminoglicanos, proteoglicanos e colágeno tipo VI na articulação interpúbica de camundongos nos diferentes estágios da prenhez. Atenção especial foi dada para as interações entre proteoglicanos e colágeno VI com outras macromoléculas da matriz. Para isso, foram empregadas análises citoquímica, imunohistoquímica, uso de sonda para detecção de ácido hialurônico, além de análises bioquímica e ultra-estrutural. Os resultados obtidos demonstraram que: 1) os proteoglicanos presentes na sínfise púbica de animais virgens são tecido-específicos e refletem as funções mecânicas de cada um dos tecidos no papel biológico global da sínfise púbica. 2) existe uma variação na quantidade e distribuição dos glicosaminoglicanos e proteoglicanos, como, por exemplo, o aumento de condroitim sulfato e o ácido hialurônico, durante a prenhez. Essas observações indicam que os proteoglicanos e glicosaminoglicanos devem ter um papel importante na formação do ligamento interpúbico e no aumento da extensibilidade desse ligamento no final da prenhez de camundongos. Estas macromoléculas podem ter um efeito importante nas propriedades de tensão do tecido. 3) A distribuição do colágeno tipo VI na sínfise púbica de camundongos virgens e prenhes é diferente nos vários tecidos que compõem essa articulação. Essa diferença pode refletir exigências funcionais diferentes para esse tipo de colágeno. A localização pericelular sugere um papel na regulação da interação célula-matriz, protegendo a célula contra estresse mecânico. Entretanto, a interação do colágeno tipo VI com outros componentes da matriz extracelular tais como colágenos fibrilares pode ter um importante papel na organização do espaço interfibrilar, provavelmente associado às propriedades elásticas do tecido / Abstract: Pubic symphysis is a nonsynovial amphiarthrodial joint that connects the two pubic bones by a fibrocartilaginous disk. During pregnancy, the mouse pubic symphysis undergoes a number of hormonally facilitated structural modifications to enable the passage of the fetuses through the birth canal. These modifications include an enhanced flexibility of the joint and the transformation of the fibrocartilaginous disk into a flexible and elastic interpubic ligament. The development of the interpubic ligament involves an increase of biosynthesis of the extracellular matrix components, mainly collagen, proteoglycans and glycosaminoglycans, in addition to a change in the relation between the synthesis and degradation of such components. The tu mover of these components in mouse symphysis has been well characterized by biochemical studies and light microscopy. H oweve r, relatively little is known about the ultrastructural and histochemical aspects of the extracellular matrix components, such as proteoglycans and type VI collagen, as well as the interactions between different extracellular macromolecules. These aspects are important since they can help in the understanding of the relationship between the different extracellular matrix components in this model. Hence the aim of this study was to characterize the glycosaminoglycans, proteoglycans and type VI collagen in the mouse interpubic joint through the different stages of pregnancy. Special attention was given to the interactions between proteoglycan and type VI collagen with other matrix macromolecules. The methodology used involved cytochemical analysis, immunohystochemistry, hyaluronic acid probes, biochemical and ultrastructural analysis. The results showed the following: 1) Proteoglycans present in virgin pubic symphysis were tissue specific and reflected the mechanical functions of each tissue in the overall biological role of the pubic symphysis. 2) There is a variation in the amount and distribution of the glycosaminoglycans and proteoglycans during pregnancy as, for example, a greater presence of GAGs, such as chondroitin sulphate and hyaluronic acid. These observations indicate that proteoglycans and glycosaminoglycans must play an important role in the formation of the interpubic ligament along with its increased extensibility during Iate pregnancy in the mouse. These macromolecules may have important effect on tensile properties of this tissue. 3) The distribution of type VI collagen in virgin and pregnant mice pubic symphysis is different in various tissues that compose this joint. This may reflect the different functional demands for this collagen. The pericellular localization suggests a role in the regulation of cell-matrix interaction, protecting the cell against mechanical stress. However, the interaction of type VI collagen with other ECM components, such as fibrillar collagens, may also play an important role in the organization of the interfibrillar space, probably associated with elastic properties of the tissue / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural