Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Purpose: to verify and to compare aerodynamic vocal measures, from protocols of self-assessment, acoustic vocal changes of glottis source, singing voice range and vocal self-perception in women with and without laryngeal disorders who performed intensive short-term therapy through the technique of phonation into glass tube immersed in water; and the immediate effects of glottic source, aerodynamic measures and vocal self-perception. Methods: controlled and randomized clinical essay, with 46 women, in two groups, without laryngeal disorders (15) and with some type of disorders (nine). There was a control group, with the same group division, without disorders (13) and with disorders (nine). It was performed, in maximum phonation time, vital capacity, simple phonic coefficient, composed phonic coefficient, sound pressure level, vocal self-perception and singing voice range, before and after intensive short-term therapy of ten sessions. The technique was performed in six series of 15 repetitions. After the first session, it was collected the maximum phonation time of the vowel /a/, sound pressure level and the participants filled in a protocol of vocal self-perception. Results: in the group without laryngeal disorders, there was significant result in the following aspects: maximum phonation time of /a/, /u/, /z/, voiceless /e/, average of /a,i,u/ and numbers counting; relationships between /s/ and /z/ and obtained and expected maximum phonation time; reduction of the composed phonic coefficient and increase of the sound pressure level; average of frequency perturbation, shimmer in dB and percentage, amplitude perturbation quotient, degree of components and number of sub-harmonic segments and reduction of the lowest pitch in the singing range. In the group with disorders, there was improvement of maximum phonation time of voiceless /i/, /e/, average of /a,i,u/ and numbers counting; increase of sound pressure level; improvement of all perturbation measures of frequency and amplitude, higher fundamental frequency and standard deviation of the fundamental frequency. In the protocols, it was verified improvement of: hospital scale of anxiety and depression (anxiety); profile of participation and vocal activities (self-perception of their own vocal disorder severity, effects in emotion and work); scale of vocal symptoms (limitation, emotional, physical and total); quality of life and voice (emotional and total); voice handicap index (total). In both groups, there was improvement of self-perception. In the immediate effect, it was verified, in the group without disorders, improvement of absolute and percentage jitter, of perturbation relative average, of quotient of pitch perturbation and of degree of sub-harmonic components. There was increase of sound pressure level. In the group with disorders, there was improvement of the highest fundamental frequency; standard deviation of the fundamental frequency, in most frequency perturbation measures; shimmer in dB, soft amplitude perturbation quotient, and amplitude variation coefficient; increase of maximum phonation time of the vowel /a/. Conclusion: The technique provided acoustic improvement of glottic source, in the aerodynamic vocal measures, singing voice range, vocal self-perception and in the protocols of vocal self-assessment in the group with and without laryngeal disorders. / Objetivo: verificar e comparar medidas vocais aerodinâmicas, resultados de protocolos de autoavaliação, modificações vocais acústicas de fonte glótica, extensão cantada e autopercepção vocal antes e após a realização de terapia breve intensiva com a técnica fonação em tubo de vidro imerso em água em mulheres com e sem afecção laríngea, bem como comparar os ganhos entre os grupos de estudo e controle; os efeitos imediatos de fonte glótica, medidas aerodinâmicas e autopercepção vocal. Métodos: ensaio clínico controlado e randomizado com 46 mulheres divididas em dois grupos, sem afecção laríngea (15) e com afecção (nove), com grupo de controle com a mesma divisão de grupos, sem afecção (13) e com afecção (nove). Realizaram-se coleta dos tempos máximo de fonação, capacidade vital forçada, coeficiente fônico simples e composto, nível de pressão sonora, avaliações aerodinâmicas, aplicação de protocolos de autoavaliação e autopercepção vocal e extensão cantada, antes e após terapia breve intensiva de dez sessões, executando a técnica em seis séries de 15 repetições. Após a primeira sessão, coletou-se o tempo máximo de fonação da vogal /a/, nível de pressão sonora, e as participantes preencheram um protocolo de autopercepção vocal. Resultados: no grupo sem afecção, houve melhora significativa nos tempos máximos de fonação de /a/, /u/, /z/, /e/ áfono, média de /a,i,u/ e contagem de números; nas relações entre /s/ e /z/ e tempo máximo de fonação obtido e previsto; na redução do coeficiente fônico composto e no aumento do nível de pressão sonora; melhoras nas medidas de perturbação de frequência, no shimmer em dB e percentual, quociente de perturbação de amplitude, grau de componentes e número de segmentos sub-harmônicos e redução do mais grave na extensão cantada. No grupo com afecção, houve melhora nos tempos máximos de fonação de /i/, /e/ áfono, média de /a,i,u/ e contagem de números; no aumento nível de pressão sonora; em todas as medidas de perturbação de frequência e amplitude, frequência fundamental mais alta e desvio padrão da frequência fundamental. Nos protocolos, verificaram-se melhoras na escala hospitalar de ansiedade e depressão (ansiedade); no perfil de participação e atividades vocais (autopercepção da severidade do seu problema vocal, efeitos na emoção e no trabalho); na escala de sintomas vocais (limitação, emocional, físico e total); na qualidade de vida e voz (emocional e total); no índice de desvantagem vocal (total). Em ambos os grupos, houve melhora na autopercepção vocal. No efeito imediato, verificaram-se, no grupo sem afecção, melhora de jitter absoluto e percentual, média relativa da perturbação, quociente de perturbação de pitch e grau de componentes sub-harmônicos; aumento do nível de pressão sonora. No grupo com afecção, houve melhora na frequência fundamental mais alta; no desvio padrão da frequência fundamental, na maioria das medidas de perturbação de frequência; no shimmer em dB, no quociente de perturbação de amplitude, no quociente de perturbação de amplitude suavizado e no coeficiente da variação da amplitude; aumento no tempo máximo de fonação da vogal /a/. Conclusão: a técnica propiciou melhoras acústicas de fonte glótica, nas medidas vocais aerodinâmicas, extensão cantada, autopercepção vocal e nos protocolos de autoavaliação vocal nos grupos com e sem afecção laríngea.

Apesar do grande avanço da laringologia nas últimas décadas, o tratamento da rigidez da prega vocal continua sendo um desafio. A rigidez da prega vocal pode estar associada a alterações estruturais mínimas como no sulco vocal profundo ou decorrente da fibrose cicatricial como nos casos de cicatriz pós-operatória. Em ambos os casos, há perda dos elementos da matriz extracelular da camada superficial da lâmina própria (Espaço de Reinke) que se encontra substituída por tecido cicatricial. O objetivo do tratamento é recuperar a deficiência volumétrica e restabelecer a microarquitetura histológica da prega vocal. O tecido areolar perifascial constitui uma excelente alternativa por suas propriedades viscoelásticas semelhantes à da camada superficial da lâmina própria, por sua fácil obtenção e baixo custo. O objetivo deste estudo foi avaliar as alterações histológicas que ocorrem no enxerto e na prega vocal enxertada e comparar os resultados encontrados com a prega vocal contralateral, submetida apenas à manipulação cirúrgica. Trinta coelhos foram submetidos ao procedimento cirúrgico que consistiu na confecção de um bolsão na lâmina própria de ambas as pregas vocais. O enxerto foi colocado na prega vocal direita e a prega esquerda utilizada como controle. Os animais foram divididos randomicamente em três grupos diferindo no tempo da análise histológica: 15 dias (Grupo I), três meses (Grupo II) e seis meses (Grupo III). As lâminas foram coradas com hematoxicilina-eosina e pelo Sírius-red, uma coloração específica para fibras colágenas. Observou-se uma mudança gradual do enxerto com aumento progressivo da densidade das fibras colágenas no interior do enxerto e uma mudança progressiva do padrão de birrefringência das mesmas, de um predomínio de fibras colágenas amarelo-esverdeadas para um predomínio de fibras laranja-avermelhadas. A laplicação do teste estatístico Anova one-way mostrou um aumento estatisticamente significativo da densidade de colágeno total no interior do enxerto entre os animais dos Grupos I e II (p=0,004) e um aumento significativo da porcentagem de fibras laranja-avermelhadas entre o Grupo II e III (p=0,011). A densidade do colágeno na região adjacente ao enxerto na prega vocal enxertada foi estatisticamente maior que a densidade de colágeno na incisão cirúrgica na prega vocal controle em todos os grupos de estudo (p 0,001). A aplicação do Teste de Fisher na análise semiquantitativa do processo inflamatório não evidenciou diferença estatisticamente significativa entre a prega vocal enxertada e a prega vocal controle em nenhum dos tempos estudados. Entretanto, quando avaliamos o processo inflamatório temporalmente para cada prega vocal evidenciamos uma diminuição significativa do processo inflamatório entre os animais do grupo de 15 dias e três meses (p=0,032 para o grupo enxertado e p=0,035 para o grupo controle). Nossos achados sugerem que o tecido areolar perifascial apresenta baixa tendência a promover reação inflamatória e permanece na prega vocal do coelho por pelo menos seis meses. Entretanto, há uma importante mudança da composição do colágeno dentro do enxerto e no tecido ao redor deste sugerindo não ser um tecido ideal para substituir a lâmina própria. Outros estudos devem ser realizados para avaliar o seu papel no tratamento da rigidez da prega vocal. / Besides the great development of phonosurgery over the previous decades, vocal fold stiffness is a difficult disease that remains a therapeutic challenge. It may be either caused by cicatricial fibrosis or be associated with minor structural alterations of the vocal fold mucosa, mainly represented by deep sulcus vocalis. In both cases, there is loss and disorganization of extracellular matrix components of the superficial layer of the lamina propria (Reinkes Space), which is replaced by fibrotic tissue. The treatment goal is to re-establish the physical volume and the microarchitecture of the vocal folds. The perifascial tissue consists of a loose areolar tissue with viscoelasticity properties close to those of the superficial layer of the lamina propria. Thus, the aim of this experiment was to evaluate the histological changes of the graft and in the host tissue after placing a strip of this tissue into rabbits vocal folds. Thirty rabbits were operated. The graft was implanted in pockets surgically created in the right vocal fold. The left vocal fold was used as control. The animals were randomically divided in three groups for evaluation at 15 days (Group I), 3 months (Group II) and 6 months (Group III) and their larynx reviewed histologically. Histological sections underwent hematoxylin-eosin and specific staining method to quantify collagen fibers (Picrosirius-polarization method). Histological changes of the graft were observed since 15 days post-operatively and were characterized by a progressive increase of the density of collagen fibers and decrease of vascularization. Examination of Picrosirius-red stained section with polarizing microscopy revealed a gradual change of collagen fibers pattern with a predominance of greenish-yellow range observed in the original tissue and in Group I and mostly redish-orange range in the grafts of Group II and III. Statistical analysis (Anova one-way) showed a significant increase of the liitotal collagen density in the graft between Group I and II (p=0.004) and a significant predominance of redish-orange pattern between Groups II e III (p=0.011). The collagen density of the surrounding area of the graft in the implanted vocal fold was significantly increased when compared to control in all periods (p 0.001). The inflammatory process was not statistically different between the implanted vocal folds and controls according to Fisher´s test for any of the studied groups. Nonetheless, when the inflammatory process of each vocal fold was individually assessed on a long-term basis, a significant decrease of the inflammatory process was seen in the host (p=0.032) and control vocal fold (p=0.035) between Group I and II. Our findings suggest that the PAT has some advantages as a substance for vocal fold augmentation: it has low tendency to promote inflammatory response and low rate of absorption since it remains in the vocal fold for at least six months. However, the histological changes that take place in the graft and in the host tissue suggest that the PAT is not an ideal material as a substitute for the lamina propria and new studies are needed to determine its role on the treatment of vocal fold scarring.

A fisiopatologia do edema de Reinke ainda permanece desconhecida e poucos estudos abordam sobre as alterações das proteínas fibrosas, colágeno e elastina, na matriz extracelular da prega vocal com edema de Reinke. Por isso, este estudo foi idealizado para descrever a distribuição das fibras colágenas e do sistema de fibras elásticas do espaço de Reinke com edema de Reinke comparando com a prega vocal normal e com a severidade do edema. Foram obtidas 20 amostras de pregas vocais de indivíduos com edema de Reinke, sendo nove casos com edema de Reinke grau II e 11 casos grau III. Dezessete indivíduos eram do sexo feminino e três do sexo masculino, com idade variando de 47 a 62 anos (55 ± 4,4 anos). Quinze pacientes eram tabagistas e cinco ex-tabagistas, média e desvio padrão de 22 ± 10,7 maço/ano. O tempo de disfonia apresentou média e desvio padrão de 36 ± 16,6 meses. Dez pregas vocais normais de laringes humanas excisadas foram utilizadas como controles. Os métodos da Picrossírius-polarização e da Resorcina-fucsina de Weigert com oxidação prévia pelo oxone 10% foram empregados para visualização das fibras colágenas e do sistema de fibras elásticas, respectivamente. Uma avaliação semiquantitativa foi utilizada para categorizar os resultados histológicos que foram correlacionados com a idade, consumo de cigarro, tempo de disfonia e com a severidade do edema. Evidenciou-se que o arranjo entrelaçado das fibras colágenas semelhante a uma cesta de vime observado em pregas vocais normais estava desestruturado no edema de Reinke. A desestruturação foi caracterizada por um afastamento das fibras, fragmentação, formando áreas esparsas e tomadas por um estroma mixóide de quantidade variável. Todos os casos de edema de Reinke mostraram uma maior preservação do arranjo das fibras colágenas próximo ao epitélio da prega comparada com as fibras da camada mais profunda do espaço de Reinke. O arranjo do sistema de fibras elásticas formado por fibras finas e onduladas paralelas à membrana basal do epitélio e uma rede de fibras mais finas, logo abaixo da membrana basal do epitélio observado em pregas vocais normais estava desestruturado no edema de Reinke. Na avaliação semiquantitativa observou-se que moderada e intensa desestruturação ocorreram em 90% dos casos com relação às fibras colágenas e em todos os casos para o sistema de fibras elásticas. Houve uma correlação estatisticamente significante entre a idade e o grau de desestruturação das fibras colágenas (r=0,47, p=0,037). Houve diferenças estatisticamente significantes entre os edemas grau II e III quanto à desestruturação das fibras colágenas (p=0,007) e quanto à idade (p=0,036). Observamos com este estudo que as alterações nas proteínas fibrosas presentes no edema de Reinke podem contribuir com a deformidade da prega vocal / The physiopathological mechanisms underlying Reinkes edema are still unknown and few studies addressed alterations in the fibrillar proteins, collagen and elastin, in extracellular matrix with Reinkes edema. This study was idealized to describe the distribution of collagen fibers and elastic system fibers in Reinkes space with Reinkes edema, comparing with normal vocal fold and with the severity of Reinkes edema. Twenty surgical vocal fold specimens were obtained from patients with Reinkes edema, nine cases presented grade II severity and 11 cases grade III. Seventeen subjects were females and three were males, ranging in age from 47 to 62 years (mean±SD 55 ± 4.4 years). Fifteen patients were smokers and five ex-smokers, mean±SD of 22 ± 10.7 pack-years. The duration of dysphonia ranged from 6 to 60 months (mean of 36 ± 16.6 months). Ten vocal folds from human larynges of nonsmokers cadavers were used as normal controls. The Picrosirius polarization method and the Weigerts resorcin-fuchsin stain after oxidation with 10% aqueous oxone were used for visualization of collagen fibers and the elastic system fibers, respectively. Findings were categorized semiquantitatively and correlated with age, cigarette smoking, duration of dysphonia and Reinkes edema severity. The intertwined network of collagen fibers resembling a wicker-basket found in normal vocal folds was disarranged in Reinkes edema. Disarrangement of collagen fibers was characterized by loosely arranged and fragmented fibers intermixed with varying amounts of myxoid stroma. All cases showed a better preservation of collagen fibers arrangement closer to the epithelium compared to fibers of the deeper of the Reinkes space. The elastic system fibers arrangement formed by a delicate network of thin and undulated fibers arranged in parallel to the epithelial basement membrane and a network of thinner fibers immediately below the basement membrane was disarranged. The semiquantitatively analysis showed that moderate and large areas of disarrangement of collagen fibers were found in 90% of cases and in all cases for elastic fibers. Age was significantly correlated with collagen fiber disarrangement (r=0.47, p=0.037). There was a statistical difference in collagen disarrangement (p = 0,007) and age (p=0,036) between grade II and grade III severity. In our study, the alterations in the fibrillar proteins observed in Reinkes edema may contribute to the vocal fold deformity

Apesar do grande avanço da laringologia nas últimas décadas, o tratamento da rigidez da prega vocal continua sendo um desafio. A rigidez da prega vocal pode estar associada a alterações estruturais mínimas como no sulco vocal profundo ou decorrente da fibrose cicatricial como nos casos de cicatriz pós-operatória. Em ambos os casos, há perda dos elementos da matriz extracelular da camada superficial da lâmina própria (Espaço de Reinke) que se encontra substituída por tecido cicatricial. O objetivo do tratamento é recuperar a deficiência volumétrica e restabelecer a microarquitetura histológica da prega vocal. O tecido areolar perifascial constitui uma excelente alternativa por suas propriedades viscoelásticas semelhantes à da camada superficial da lâmina própria, por sua fácil obtenção e baixo custo. O objetivo deste estudo foi avaliar as alterações histológicas que ocorrem no enxerto e na prega vocal enxertada e comparar os resultados encontrados com a prega vocal contralateral, submetida apenas à manipulação cirúrgica. Trinta coelhos foram submetidos ao procedimento cirúrgico que consistiu na confecção de um bolsão na lâmina própria de ambas as pregas vocais. O enxerto foi colocado na prega vocal direita e a prega esquerda utilizada como controle. Os animais foram divididos randomicamente em três grupos diferindo no tempo da análise histológica: 15 dias (Grupo I), três meses (Grupo II) e seis meses (Grupo III). As lâminas foram coradas com hematoxicilina-eosina e pelo Sírius-red, uma coloração específica para fibras colágenas. Observou-se uma mudança gradual do enxerto com aumento progressivo da densidade das fibras colágenas no interior do enxerto e uma mudança progressiva do padrão de birrefringência das mesmas, de um predomínio de fibras colágenas amarelo-esverdeadas para um predomínio de fibras laranja-avermelhadas. A laplicação do teste estatístico Anova one-way mostrou um aumento estatisticamente significativo da densidade de colágeno total no interior do enxerto entre os animais dos Grupos I e II (p=0,004) e um aumento significativo da porcentagem de fibras laranja-avermelhadas entre o Grupo II e III (p=0,011). A densidade do colágeno na região adjacente ao enxerto na prega vocal enxertada foi estatisticamente maior que a densidade de colágeno na incisão cirúrgica na prega vocal controle em todos os grupos de estudo (p 0,001). A aplicação do Teste de Fisher na análise semiquantitativa do processo inflamatório não evidenciou diferença estatisticamente significativa entre a prega vocal enxertada e a prega vocal controle em nenhum dos tempos estudados. Entretanto, quando avaliamos o processo inflamatório temporalmente para cada prega vocal evidenciamos uma diminuição significativa do processo inflamatório entre os animais do grupo de 15 dias e três meses (p=0,032 para o grupo enxertado e p=0,035 para o grupo controle). Nossos achados sugerem que o tecido areolar perifascial apresenta baixa tendência a promover reação inflamatória e permanece na prega vocal do coelho por pelo menos seis meses. Entretanto, há uma importante mudança da composição do colágeno dentro do enxerto e no tecido ao redor deste sugerindo não ser um tecido ideal para substituir a lâmina própria. Outros estudos devem ser realizados para avaliar o seu papel no tratamento da rigidez da prega vocal. / Besides the great development of phonosurgery over the previous decades, vocal fold stiffness is a difficult disease that remains a therapeutic challenge. It may be either caused by cicatricial fibrosis or be associated with minor structural alterations of the vocal fold mucosa, mainly represented by deep sulcus vocalis. In both cases, there is loss and disorganization of extracellular matrix components of the superficial layer of the lamina propria (Reinkes Space), which is replaced by fibrotic tissue. The treatment goal is to re-establish the physical volume and the microarchitecture of the vocal folds. The perifascial tissue consists of a loose areolar tissue with viscoelasticity properties close to those of the superficial layer of the lamina propria. Thus, the aim of this experiment was to evaluate the histological changes of the graft and in the host tissue after placing a strip of this tissue into rabbits vocal folds. Thirty rabbits were operated. The graft was implanted in pockets surgically created in the right vocal fold. The left vocal fold was used as control. The animals were randomically divided in three groups for evaluation at 15 days (Group I), 3 months (Group II) and 6 months (Group III) and their larynx reviewed histologically. Histological sections underwent hematoxylin-eosin and specific staining method to quantify collagen fibers (Picrosirius-polarization method). Histological changes of the graft were observed since 15 days post-operatively and were characterized by a progressive increase of the density of collagen fibers and decrease of vascularization. Examination of Picrosirius-red stained section with polarizing microscopy revealed a gradual change of collagen fibers pattern with a predominance of greenish-yellow range observed in the original tissue and in Group I and mostly redish-orange range in the grafts of Group II and III. Statistical analysis (Anova one-way) showed a significant increase of the liitotal collagen density in the graft between Group I and II (p=0.004) and a significant predominance of redish-orange pattern between Groups II e III (p=0.011). The collagen density of the surrounding area of the graft in the implanted vocal fold was significantly increased when compared to control in all periods (p 0.001). The inflammatory process was not statistically different between the implanted vocal folds and controls according to Fisher´s test for any of the studied groups. Nonetheless, when the inflammatory process of each vocal fold was individually assessed on a long-term basis, a significant decrease of the inflammatory process was seen in the host (p=0.032) and control vocal fold (p=0.035) between Group I and II. Our findings suggest that the PAT has some advantages as a substance for vocal fold augmentation: it has low tendency to promote inflammatory response and low rate of absorption since it remains in the vocal fold for at least six months. However, the histological changes that take place in the graft and in the host tissue suggest that the PAT is not an ideal material as a substitute for the lamina propria and new studies are needed to determine its role on the treatment of vocal fold scarring.

Acredita-se que nos humanos, o ligamento vocal se desenvolva após o nascimento. No entanto, não há consenso na literatura sobre qual a faixa etária de seu aparecimento. Muitos estudos indicam que no neonato, a lâmina própria da prega vocal apresenta-se com algumas fibras esparsas sem uma organização particular. O principal objetivo deste estudo foi obter informação a respeito das fibras colagênicas e do sistema elástico (sob a luz dos conhecimentos atuais sobre a matriz extracelular), na lâmina própria de pregas vocais de fetos no período perinatal. Laringes obtidas por autópsia de fetos entre sete a nove meses foram estudadas através de microscopia de luz e eletrônica de transmissão. Fibras contendo colágeno foram identificadas através do Método da Picrossírius-polarização, fibras do sistema elástico foram descritas utilizando-se o método de Resorcina-fucsina de Weigert após oxidação com oxona. Os resultados histoquímicos coincidem com as observações da microscopia eletrônica, evidenciando populações de fibras de colágeno segregadas em diferentes compartimentos na lâmina própria. Assim, em sua região central as fibras de colágeno se mostraram finas, fracamente birrefringentes de coloração esverdeada, enquanto que as regiões superficiais e profundas apresentaram fibras grossas de colágeno com forte birrefringência de cor vermelho-amarelada, quando estudadas através do método da Picrossírius-polarização. Estas características sugerem que as fibras finas da região central são compostas principalmente por colágeno tipo III, enquanto o colágeno tipo I predomina nas regiões superficial e profunda, em concordância com as observações da literatura relacionada com o estudo da prega vocal de adultos. Assim como o componente colagênico, as fibras do sistema elástico mostraram uma distribuição diferencial ao longo da lâmina própria. Em certo sentido, esta distribuição é complementar àquela das fibras de colágeno: a região central, na qual fibras colagênicas eram escassas e finas, apresentou maior densidade de fibras do sistema elástico, em comparação às regiões superficial e profunda. Assim, a presença de um padrão de distribuição diferencial das fibras da matriz extracelular na prega vocal humana fetal equivalente à descrição clássica do ligamento vocal adulto nos permitiu concluir que o ligamento vocal já está presente ao nascimento. As implicações funcionais destes achados foram discutidas. O conceito corrente de que os estímulos externos, como a fonação, são essenciais para a determinação da estrutura em camadas da lâmina própria, faz com que nossos resultados sejam surpreendentes ao evidenciar a presença de uma distribuição complexa e organizada dos componentes do tecido conjuntivo na lâmina própria de pregas vocais de fetos no período perinatal. A idéia de que a contribuição genética poderia desempenhar um papel importante na organização destas camadas, independentemente do estímulo mecânico, poderia explicar melhor a presença das estruturas observadas já ao nascimento, uma vez que o mecanismo genético pode agir antes de qualquer estímulo mecânico externo, como a fonação. / It is currently believed that, in humans, the vocal ligament develops after birth. However, there is no consensus in the literature about the age of its surge. Most papers describe that in the newborn, the lamina propria shows the presence of some sparse fibers without any particular organization. The main purpose of this study was to obtain information regarding collagenous and elastic system fibers (in the light of the current knowledge on extracellular matrix) in the lamina propria of fetal vocal fold. Larynges obtained from autopsy of human fetuses aged seven to nine months were studied by means of light and electron microscopy. Collagen containing fibers were assessed by the Picrosirius-polarization method, elastic system fibers were described using Weigert\'s resorcin-fuchsin with previous oxidation with oxone. The histochemical results coincide with the electron microscope observations in showing collagen populations segregated into different compartments of the lamina propria. Thus, in its central region the collagen shows up as thin, weakly birefringent, greenish fibers while the superficial and deep regions consist of thick collagen fibers which display a strong birefringence of red or yellow color when studied with the aid of the Picrosirius-polarization method. These characteristics strongly suggest that the thin fibers in the central region are composed mainly of type-III collagen, whereas type-I collagen predominates in the superficial and deep regions, in agreement with the observations in the literature pertaining to studies of adult vocal folds. As well as collagen, the elastic system fibers show a differential distribution throughout the lamina propria. This distribution is complementary, in a sense, to that of the collagen fibers: the central region, with thin collagenous fibers, presents the greatest density of elastic system fibers in comparison to the superficial and deep regions. Thus, the presence of a differential distribution of the extracellular matrix fibers in the fetal vocal fold equivalent to the classical description of the adult vocal ligament allowed the conclusion that a vocal ligament is already present in the newborn. The functional implications of the foregoing findings are discussed. Current ideas sustaining that stimuli like phonation are essential to the determination of the layered structure of the lamina propria would make it surprising that a newborn baby could present a complex and organized distribution of connective tissue components as our results show to be the case. The idea that genetic contrivance instead should play a role in the organization of these layers seems to explain better the observed structures once it would act before any mechanical stimulus similar to phonation could take place.

A incompetência glótica ainda representa um desafio para a laringologia. Implantes de biomateriais no espaço de Reinke ou no espaço paraglótico estão entre as opções de tratamento, e suturas e confecção de bolsões subepiteliais são normalmente utilizados para fixação desses implantes. Alternativamente, a cola biológica pode ser usada como adesivo nesses casos. A cola de fibrina (CF) é produto da reação de dois componentes do sistema de coagulação: o fibrinogênio e a trombina, que formam uma rede de fibrina, responsável, entre outros, pela adesão dos tecidos. Entretanto, além do efeito adesivo, a CF e seus componentes podem interferir no processo cicatricial, atuando sobre citocinas como o fator de crescimento transformador-beta (TGF-beta). O objetivo deste estudo é avaliar o efeito da cola de fibrina na deposição de colágeno após enxertia de fáscia em pregas vocais de coelhos. Dezoito coelhos foram submetidos a enxerto de fáscia em ambas as pregas vocais, sendo o lado esquerdo fixado com CF. Os coelhos foram sacrificados após 7, 30 e 90 dias. As laringes foram removidas e as pregas vocais preparadas para estudo histomorfométrico através da coloração picrossirius, a fim de avaliar a deposição de colágeno total em torno do enxerto. Foi observado um aumento estatisticamente significativo na densidade de colágeno em torno dos enxertos de fáscia nas pregas vocais que receberam a CF (p=0,0102) após 90 dias, em comparação com as pregas vocais controles. A aplicação da CF interferiu na deposição de colágeno em torno dos enxertos de fáscia, resultando em um aumento significativo na densidade de colágeno após 90 dias, possivelmente em decorrência da interação de seus componentes com citocinas e células envolvidas no processo de cicatrização / The glottal incompetence is still a challenge in Laryngology. Implants of biomaterials in Reinkes space or paraglottic space are among the treatment options, and sutures and pockets dissections are usually used to set these implants. Alternatively, biological glue can be used as adhesive in these cases. Fibrin glue (FG) is the product reaction of two components of the coagulation system: the fibrinogen and thrombin that form a fibrin net, responsible for the tissues adhesion, among other functions. However, the FG and its components may interfere in wound healing, interacting with cytokines as the transforming growth factor-beta (TGF-beta). The objective is to study the effect of fibrin glue on collagen deposition after fascia grafting on the rabbits vocal folds. Eighteen rabbits were submitted to the fascia graft on both vocal folds, being the left side fixed with FG. The rabbits were sacrificed after 7, 30 and 90 days. The larynx were removed and vocal folds prepared for histomorphometric study through Picrosirius Red stain, in order to evaluate the collagen deposition around the graft. There was a significant increase in collagen density around the grafts on the vocal folds that received FG (p=0.0102) after 90 days, compared with the control. FG application interfered in collagen deposition around fascia grafts, resulting in a significantly increase of collagen density after 90 days, which possibly resulted from the interaction of FG and its components with the cytokines and cells involved in the wound healing

A matriz extracelular apresenta importante papel na fisiologia da fonação sendo necessário o conhecimento de seus componentes. Poucos estudos sobre os componentes da matriz em fetos e a ausência de relatos do versican nesta faixa etária, bem como a necessidade de aprofundar os conhecimentos sobre os componentes da matriz em adultos, resultaram na elaboração deste estudo. Analisar a presença e distribuição do colágeno tipo I, colágeno tipo III e proteoglicano versican na lâmina própria da prega vocal de laringes fetais e adultas é o objetivo do estudo. No grupo fetal foram estudadas 7 laringes obtidas de cadáveres variando de 28 a 36 semanas de idade gestacional. No grupo adulto foram estudadas 20 laringes, 10 do sexo masculino, com média de idade de 66 anos, e 10 do sexo feminino com média de idade de 70 anos, com idades pareadas. Utilizou-se método imunoistoquímico para avaliar a expressão do versican no grupo fetal e adulto. Para a avaliação das fibras colágenas utilizou-se o método da Picrosirius polarização no grupo fetal e imunoistoquímico no grupo adulto. A quantificação das fibras colágenas e do versican foi realizada por meio de análise digital de imagens. Os resultados do grupo fetal mostraram uma distribuição homogênea das fibras colágenas formando uma estrutura monolaminar com um entrelaçamento entre as fibras denominado arranjo em cesta de vime; em relação ao versican, este apresentou uma densidade maior na camada superficial e intermediária da lâmina própria. Os resultados do grupo adulto mostraram uma menor densidade de colágeno tipo I na camada intermediária quando comparado à camada superficial (p<0.001) e camada profunda (p=0.005). O colágeno tipo III apresentou distribuição mais homogênea nas camadas da lâmina própria, com uma densidade estatisticamente menor na camada intermediária quando comparada à camada profunda (p=0.001), mas sem diferença estatística na camada superficial. O versican apresentou densidade menor na camada superficial quando comparado à camada intermediária (p=0.036) e camada profunda (p=0.013). Houve menor densidade de versican nas mulheres quando comparado aos homens, percebida apenas na camada superficial. Quando todas as camadas foram consideradas conjuntamente houve uma correlação positiva entre a densidade de versican e colágeno tipo III (r=0.57; p=0.010). Este estudo mostrou as diferenças na distribuição dos componentes da matriz nas camadas da lâmina própria em dois grupos etários proporcionando uma discussão sobre as implicações destes achados na fisiologia vocal e sugerindo que as estruturas glóticas já estariam preparadas para a vocalização ao nascimento / Extracellular matrix has an important rule in the vocal fold physiology and the knowledge about your components is necessary. Fewer studies about matrix extracellular and no studies about versican in fetuses, and the necessity to improve the knowledge about extracellular matrix components in adults group came us to the elaboration of this study that has the objective to analyze the presence and distribution of collagen type I, type III and versican in human vocal fold lamina propria of fetal and adult larynges. Seven fetal larynges obtained from 28- to 36- week-old cadaveric fetuses were studied. Twenty larynges were obtained from adults (10 males and 10 females). Mean age of males was 66 and 70 from females, without significant statistical difference between groups. For the analysis of versican expression, immunohistochemical reactions were carried out in fetal and adult group. The larynges were analyzed through Picrosirius polarization method and immunohistochemistry to visualize the collagen fibers, in fetal and adult group respectively. Collagen fibers and proteoglycan were quantified using a digital image analysis system. In fetuses, the collagen fibers system exhibited homogeneous distribution pattern in a monolaminar layer and spatial arrangement as in a wicker basket; predominance of versican distribution was found out on the superficial and intermediate layer of vocal fold lamina propria. In adult group, there was a lower collagen type I density in the intermediate layer when compared to the superficial (p<0.001) and the deep layers (p=0.005). Collagen type III presented a lower density in the intermediate layer when compared to the deep layer (p=0.001) but without differences in the superficial layer. There was a lower versican density in the superficial layer when compared to the intermediate layer (p=0.036) and deep layer (p=0.013). There was a lower versican density in the lamina propria of females when compared with males. The difference was noted in the superficial layer only. When all layers are considered together there was a positive correlation between versican and collagen type III densities (r=0.57; p=0.010). This study shows the differences in the extracellular matrix components distribution in lamina propria vocal folds in fetal and adult group permitting a discussion about the implications in vocal fold physiology and suggesting that laryngeal structures will be prepared to vocalization at birth

INTRODUÇÃO: A tireoplastia tipo I é uma cirurgia freqüentemente utilizada para reabilitação de pacientes sintomáticos com paralisia laríngea. Consiste na medialização da prega vocal através da introdução de um implante por uma janela realizada na lâmina da cartilagem tireóidea. O conhecimento preciso da projeção da prega vocal sobre a lâmina da cartilagem tireóidea, para a correta confecção da janela da tireoplastia, é de crítica importância para o sucesso dessa cirurgia. Contudo a localização exata da projeção da prega vocal sobre a lâmina da cartilagem tireóidea é controversa na literatura. Outra etapa importante da cirurgia é a confecção do implante com formato e tamanho adequados para que ele medialize a prega vocal de maneira homogênea, em toda sua extensão, inclusive em sua porção posterior. OBJETIVO: Determinar, através da tomografia computadorizada, o local da projeção da prega vocal sobre a lâmina da cartilagem tireóidea e determinar o formato do implante para que haja uma medialização uniforme da prega vocal. MÉTODOS: Este estudo foi realizado na Disciplina de Otorrinolaringologia da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo. Foram analisadas 11 laringes humanas excisadas e definiu-se uma padronização para obtenção dos dados tomográficos necessários para determinar o local da projeção da comissura anterior sobre a linha média da cartilagem tireóidea e para determinar o local da projeção do terço posterior da borda livre da prega vocal sobre a lâmina da cartilagem tireóidea. Esses são os parâmetros utilizados para localizar a projeção da prega vocal sobre a lâmina da cartilagem tireóidea. Os dados obtidos na tomografia foram comparados a medidas anatômicas. A tomografia computadorizada também foi utilizada para calcular o formato e as dimensões de um implante ideal para cada laringe, cuja eficiência foi avaliada através da tireoplastia tipo I, realizada nas peças anatômicas. Os resultados obtidos com a tomografia e os resultados anatômicos foram analisados estatisticamente através do nível de concordância, calculado pelo método de Bland e Altman. RESULTADOS: As medidas tomográficas da projeção do terço posterior da borda livre da prega vocal apresentaram concordância com a avaliação anatômica em todos os casos. As medidas tomográficas da projeção da comissura anterior apresentaram um alto nível de concordância com as medidas anatômicas, sendo que 70% apresentaram um erro menor que 0,81mm (desvio padrão). O implante, calculado através da tomografia, foi considerado eficiente em todos os casos. CONCLUSÕES: Esse método mostrou-se simples e eficiente em determinar a projeção da prega vocal sobre o arcabouço laríngeo e em determinar um formato de implante individualizado, que medialize a prega vocal homogeneamente, inclusive em sua porção posterior. / Type I Thyroplasty is a common procedure and is indicated for symptomatic patients with vocal fold paralysis. It consists on medialization of the vocal fold by introduction of an implant through a window made in the thyroid cartilage lamina. The precise determination of the projection of the vocal fold upon the external surface of the thyroid cartilage is of great importance for the correct location of the window and, thus, for best postoperative results. However, the exact projection of the vocal fold upon the thyroid cartilage is still controversial in the literature. Another important step of this procedure is the creation of an implant that is appropriate in size and shape in order to uniformly medialize the vocal fold, including its posterior aspect. OBJECTIVE: To determine the vocal fold projection upon the external surface of the thyroid cartilage through computed tomography scan and also determine the implant format in order to satisfactory medialize the vocal fold. METHODS: This study was made in the Otolaryngology Department of the University of São Paulo Medical School. Eleven human cadaveric larynges were analyzed using Computed Tomography scans and the method to determine the projection of the anterior comissure upon the midline of the thyroid cartilage as well as the projection of the posterior third of the free edge of the vocal fold upon the external surface of the thyroid cartilage was estalished. Those parameters were used to determine the exact projection of the vocal fold upon the thyroid cartilage lamina. This data were compared to anatomic measures of the larynges. The Computed tomography was also used to establish the shape and dimensions of the appropriate implant for each larynx and its efficacy was tested through type I thyroplasty individually. The results obtained from Computed Tomography scan measurement were compared to anatomic data and analyzed through the level of agreement, calculated by Bland and Altman´s method. RESULTS: The Computed Tomography scan measurements to determine the projection of the posterior third of the vocal fold were correlated with the anatomic evaluation in all cases. The projection of the anterior comissure presented a high level of accordance, as 70% of cases presented an error less than 0.81mm (standard deviation). CONCLUSIONS: This method showed to be simple and effective to determine the vocal fold projection upon the larynx external surface and also to establish individualized shapes of implants that can medialize uniformly the vocal fold, including its posterior aspect.

A incompetência glótica ainda representa um desafio para a laringologia. Implantes de biomateriais no espaço de Reinke ou no espaço paraglótico estão entre as opções de tratamento, e suturas e confecção de bolsões subepiteliais são normalmente utilizados para fixação desses implantes. Alternativamente, a cola biológica pode ser usada como adesivo nesses casos. A cola de fibrina (CF) é produto da reação de dois componentes do sistema de coagulação: o fibrinogênio e a trombina, que formam uma rede de fibrina, responsável, entre outros, pela adesão dos tecidos. Entretanto, além do efeito adesivo, a CF e seus componentes podem interferir no processo cicatricial, atuando sobre citocinas como o fator de crescimento transformador-beta (TGF-beta). O objetivo deste estudo é avaliar o efeito da cola de fibrina na deposição de colágeno após enxertia de fáscia em pregas vocais de coelhos. Dezoito coelhos foram submetidos a enxerto de fáscia em ambas as pregas vocais, sendo o lado esquerdo fixado com CF. Os coelhos foram sacrificados após 7, 30 e 90 dias. As laringes foram removidas e as pregas vocais preparadas para estudo histomorfométrico através da coloração picrossirius, a fim de avaliar a deposição de colágeno total em torno do enxerto. Foi observado um aumento estatisticamente significativo na densidade de colágeno em torno dos enxertos de fáscia nas pregas vocais que receberam a CF (p=0,0102) após 90 dias, em comparação com as pregas vocais controles. A aplicação da CF interferiu na deposição de colágeno em torno dos enxertos de fáscia, resultando em um aumento significativo na densidade de colágeno após 90 dias, possivelmente em decorrência da interação de seus componentes com citocinas e células envolvidas no processo de cicatrização / The glottal incompetence is still a challenge in Laryngology. Implants of biomaterials in Reinkes space or paraglottic space are among the treatment options, and sutures and pockets dissections are usually used to set these implants. Alternatively, biological glue can be used as adhesive in these cases. Fibrin glue (FG) is the product reaction of two components of the coagulation system: the fibrinogen and thrombin that form a fibrin net, responsible for the tissues adhesion, among other functions. However, the FG and its components may interfere in wound healing, interacting with cytokines as the transforming growth factor-beta (TGF-beta). The objective is to study the effect of fibrin glue on collagen deposition after fascia grafting on the rabbits vocal folds. Eighteen rabbits were submitted to the fascia graft on both vocal folds, being the left side fixed with FG. The rabbits were sacrificed after 7, 30 and 90 days. The larynx were removed and vocal folds prepared for histomorphometric study through Picrosirius Red stain, in order to evaluate the collagen deposition around the graft. There was a significant increase in collagen density around the grafts on the vocal folds that received FG (p=0.0102) after 90 days, compared with the control. FG application interfered in collagen deposition around fascia grafts, resulting in a significantly increase of collagen density after 90 days, which possibly resulted from the interaction of FG and its components with the cytokines and cells involved in the wound healing

INTRODUÇÃO: Apesar dos avanços recentes nas técnicas e instrumentos de fonomicrocirurgia, cicatriz de prega vocal é a principal causa de persistência ou recorrência de disfonia após a microcirurgia de laringe. A cicatriz de prega vocal continua sendo um dos maiores desafios da laringologia, uma vez que ainda não existe um tratamento consistentemente eficaz para restaurar a função vocal adequadamente. Muitos cirurgiões fazem uso empírico de injeções de corticosteroides na prega vocal durante a fonomicrocirurgia, na tentativa de evitar ou reduzir a formação de cicatriz, apesar da inexistência de evidências científicas que justifiquem seu uso. Em estudo prévio realizado na Disciplina de Otorrinolaringologia da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo, a injeção intracordal de corticosteroide intraoperatória levou à redução significativa de deposição de colágeno, sem diferença no número de células inflamatórias, no terceiro e sétimo dia de pós-operatório. Desconhece-se, no entanto, se essas alterações persistem em fases mais tardias da cicatrização da prega vocal. O objetivo deste estudo foi, portanto, investigar a existência de benefícios em longo prazo da injeção intralesional de corticosteroide no processo cicatricial da prega vocal. MÉTODO: catorze coelhos albinos machos da raça New Zealand foram submetidos a incisão em toda extensão das pregas vocais seguida de injeção de dexametasona na prega vocal direita. A prega vocal esquerda não recebeu injeção e serviu como controle. As laringes foram excisadas em dois períodos: sete e 180 dias de pós-operatório. A coloração de hematoxilina-eosina foi utilizada para a análise quantitativa da resposta inflamatória e o método de Picrossírius-polarização para análise quantitativa e descritiva de deposição de colágeno. RESULTADOS: Houve um aumento não significativo na quantidade de células inflamatórias na prega vocal tratada com corticosteroide no grupo sacrificado no 7º dia de pós-operatório. Não foram observadas diferenças significativas na resposta inflamatória entre as pregas vocais do grupo sacrificado no 180º dia de pós-operatório ou quando os grupos sacrificados no 7º e 180º dia foram comparados. Foi observada tendência à redução na deposição de colágeno na prega vocal tratada no 7º dia de pós-operatório, o que não ocorreu na avaliação do 180º dia. Não foram observadas diferenças significativas quando os grupos foram comparados entre si (grupo sacrificado no 7º dia versus grupo sacrificado no 180º dia). As pregas vocais que receberam injeção de dexametasona apresentaram melhor organização e menor espessura das fibras de colágeno do que as pregas vocais controle, tanto na avalição do 7º quanto 180º dia de pós-operatório. CONCLUSÃO: Os resultados deste estudo sugerem que, embora a injeção intracordal de corticosteroide não tenha tido impacto significativo sobre a quantidade de células inflamatórias ou taxa de deposição de colágeno, ela propiciou uma melhor organização e menor espessura das fibras de colágeno na fase crônica da cicatrização / INTRODUCTION: Despite recent advances in phonosurgery techniques and instruments, vocal fold scar is the greatest cause of poor voice outcome following laryngeal surgery. Vocal fold scarring remains one of the most challenging problems in the clinical practice of laryngology, since a consistently effective treatment to restore adequate vocal function has not been established yet. Many surgeons empirically use corticosteroid submucosal injection during phonosurgery in an attempt to prevent scar formation despite the lack of evidence to support its use. In a previous study conducted in the Discipline of Otorhinolaryngology of University of Sao Paulo School of Medicine, intracordal corticosteroid injection immediately after injury led to significantly reduced collagen deposition with no change in number of inflammatory cells at the third e seventh day post-lesion in a rabbit model. It is not known, however, if these findings persist on later phases of wound healing. Thus, the purpose of this study was to investigate the existence of long-term benefits from the use of intracordal corticosteroid injection in the wound healing process of the vocal folds. METHODS: Fourteen male albino New Zealand rabbits underwent bilateral vocal fold incision followed by dexamethasone injection into the right vocal fold. The left vocal fold was not injected and served as control. Larynges were harvested at two time points: seven (group 1) and 180 days (group 2). Hematoxylin-eosin staining was used for quantitative analysis of inflammatory response and Picrosirius polarization method for quantitative and descriptive analysis of collagen deposition. RESULTS: There was a non-significant increase in inflammatory cells in the steroid-treated vocal fold on day 7. No significant differences in the inflammatory response were observed between vocal folds on day 180 or when group 1 was compared with group 2. There was a trend for reduction in collagen deposition in the treated vocal folds on day 7, but no significant difference on day 180. No significant difference was observed when group 1 (day 7) was compared with group 2 (day 180). Collagen fibers were better organized and thinner in the steroid-treated vocal fold in both time points of sacrifice. CONCLUSION: The present results suggest that, although corticosteroid intracordal injection has no significant impact on the number of inflammatory cells or collagen rate deposition, it leads to a better and more organized arrangement of collagen fibers on chronic phase of wound healing _________________________________________