Submitted by ANA KARLA MIRANDA PRADO null (karlinhamprado@hotmail.com) on 2017-04-24T20:41:26Z No. of bitstreams: 1 DissertaçãoAnaCorrecao final.pdf: 2950511 bytes, checksum: 267c66c96725c6306041b2f73554ba8d (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-04-26T13:59:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 prado_ak_me_sjrp.pdf: 2950511 bytes, checksum: 267c66c96725c6306041b2f73554ba8d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-26T13:59:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 prado_ak_me_sjrp.pdf: 2950511 bytes, checksum: 267c66c96725c6306041b2f73554ba8d (MD5) Previous issue date: 2017-03-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Corynebacterium pseudotuberculosis é uma bactéria gram-positiva causadora da Linfadenite Caseosa (LC) em caprinos e ovinos. A LC é uma doença infectocontagiosa crônica que prejudica a produção de carne, leite e lã em vários países, incluindo o Brasil. Uma vez que o tratamento da doença é muitas vezes inviável e ineficaz, a eliminação dos animais infectados no rebanho tem sido uma das principais medidas de contenção da enfermidade. Vários grupos de pesquisa vem se dedicando ao estudo de C. pseudotuberculosis visando a identificação de fatores moleculares envolvidos na virulência e patogenicidade durante a infecção. Embora alguns destes componentes já tenham sido descritos, como a fosfolipase D, novos estudos são necessários para que seja possível compreender as diversas interações regulatórias que são intrínsecas a esse microrganismo, assim muitos grupos de pesquisas produzem de forma recombinante a enzima transaldolase de C. pseudotuberculosis, envolvida na glicólise e no metabolismo das pentoses-fosfato a fim de buscar inibidores que possam controlar sua ação enzimática. Nesse contexto, os flavonoides são compostos polifenólicos encontrados nas plantas e, em alguns casos, atuam como inibidores de infecções por microrganismos. Assim, a motivação deste trabalho consistiu em identificar e quantificar uma possível interação do flavonoide morina com a enzima transaldolase, a fim de bloquear a atividade de replicação e infecção de LC. Deste modo os objetivos desse estudo foram realizar a expressão, purificação, a caracterização da estrutura secundária e estabilidade térmica por dicroísmo circular e verificação de interação entre transaldolase e morina por espectroscopia de fluorescência da proteína transaldolase. Os resultados da expressão mostram que a proteína transaldolase com 40kDa foi purificada em cromatografia de afinidade seguida de cromatografia de exclusão molecular. A sua estrutura secundária apresentou 74% de alfa hélice, 0% de folha beta, 7,9% de alças e 18,1 % de estruturas aleatórias. A análise da desnaturação térmica mostrou que a temperatura de melting foi de 48°C, indicando que a proteína é estável. A interação entre Morina e Transaldolase apresentou mecanismo de supressão estáticodinâmico, com uma constante de associação moderada e um sítio de interação. A análise termodinâmica mostrou que o processo de interação é espontâneo ∆G<0, endotérmico ∆H>0 e entrópico ∆S<0. Assim, sabendo-se que a proteína Transaldolase é a proteína chave no processo das infecções por Corynebacterium pseudotuberculosis e considerando as propriedades antibacterianas e antiproliferativas do flavonoide morina, sugere-se que este composto possa ser investigado para os seus usos específicos. Sugere-se que a interação da transaldolase com a Morina possa exercer um papel de carreador ou seja, uma forma pela qual a proteína leva a molécula para o local que ela atua, e, assim, a Morina consiga realizar sua função antiproliferativa e bloquear as infecções. / Corynebacterium pseudotuberculosis is a gram-positive bacterium which causes Caseous Lymphadenitis (CL) in small ruminants. CL is a chronic infectious disease which impairs meat, whool and milk production in many countries including Brazil. Once the treatment for CL is not efficient, removing affected animals from herds represents one of the major strategies to prevent the disease from spreading. Many research groups have been looking for molecular components in C. pseudotuberculosis that are involved in virulence and infection, among which phospholipase D stands out as the major one described so far. However, new studies are necessary for the understanding of the microorganism’s biology, including its intrinsic regulation mechanisms. The object of study of this work was the enzyme transaldolase involved in glycolysis and in the metabolism of pentoses-phosphate, necessary for the formation of nucleic acids that the bacterium uses to replicate in order to find inhibitors that can control its enzymatic action. In this context, flavonoids are polyphenolic compounds found in plants and, in some cases, act as inhibitors of infections by microorganisms. Thus, the purpose of this work is to identify and quantify a possible interaction of the flavonoid morin with the enzyme transaldolase, in order to block LC´s replication activity and infection. The objectives of this study included expression and purification of C. pseudotuberculosis´s transaldolase protein, the characterization of the secondary structure and thermal stability by circular dichroism and the study of the interaction between transaldolase and morin by fluorescence spectroscopy. The transaldolase protein, with approximately 40kDa, was purified on affinity chromatography followed by molecular exclusion chromatography. Its secondary structure had 74% of alpha helix, 0% of beta sheet, 7.9% of loops (turn) and 18.1% of random structures. The thermal denaturation analysis showed that the melting temperature is 48 °C, indicating that the protein is stable. The interaction between Morina and Transaldolase presented a static-dynamic suppression mechanism, with a moderate association constant and one interaction site. The thermodynamic analysis showed that the interaction process is spontaneous ΔG <0, endothermic ΔH> 0 and entropic ΔS <0. Thus, with the knowledge that Transaldolase protein is the key protein in the process of Corynebacterium pseudotuberculosis infections and considering the antibacterial and antiproliferative properties of the flavonoid morine, it is suggested that this compound can be investigated for its specific uses. It is suggested that the interaction of transaldolase with Morina may play a role of carrier, that is, a way in which the protein takes the molecule to the place it acts, and thus Morina can perform its antiproliferative function and block the Infections.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-26T14:20:58Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Ernani Flávio Lopes Barbosa - 2016.pdf: 2105902 bytes, checksum: 07f1df5e2ebb5676e0813d7755d23347 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-26T14:21:16Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Ernani Flávio Lopes Barbosa - 2016.pdf: 2105902 bytes, checksum: 07f1df5e2ebb5676e0813d7755d23347 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-26T14:21:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Ernani Flávio Lopes Barbosa - 2016.pdf: 2105902 bytes, checksum: 07f1df5e2ebb5676e0813d7755d23347 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-08-22 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Corynebacterium pseudotuberculosis is the etiologic agent of Caseous Lymphadenitis (CLA), a chronic infectious disease that is distributed worldwide and affects goats and sheep. The disease is characterized by the development of granulomes in superficial lymph nodes and some organs, as liver, spleen, lungs, and kidneys. The occurrence of CLA in Brazilian small ruminant herds is widely spread, causing economic losses due to a reduction in productive efficiency and in leather economic value, and occasional death of affected animals. The objective of this study was to identify the seroprevalence of specific anti-C. pseudotuberculosis antibodies in goats and sheep in the state of Goiás, and to correlate the infection with breeding procedures. For this, 1815 serum samples from goats at 213 production units and 751 sera samples from sheep at 113 rural properties were analyzed. The state of Goiás was divided in regional agencies, as proposed by the state government. These samples were submitted to an indirect ELISA technique for specific antibodies detection, and a questionnaire was applied to farmers in order to correlate the presence of specific antibodies with the breeding procedures adopted by these breeders. The data were analyzed using the R software. The results showed a CLA seroprevalence of 29.4% for sheep and 51.8% for goats. From the properties included in the study, 84 and 88.2% presented positive goats or sheep, respectively. Positive animals were present in 100% of the state regional agencies. 90% of the Goiás studied municipalities presented positive sheep, and CLA positive goats were present in 84.7% of the municipalities included in this survey. From the studied goats, 54.2% of the females showed positive results, and 44.7% of the males had the presence of C. pseudotuberculosis-specific antibodies. From the animalsat more than 36 months of age, the results showed prevalence of 62.5% and 62.8% of positive sheep and goats, respectively. When considering the type of workers at the production units, sheep farms where the owners employed the breeders presented 31.3% prevalence. However, when the owner’s family was the main breeders, the sheep presented 21.7% prevalence. 53.1% of the goats that were acquired from other farms presented positive results. For sheep herds, there was no significant correlation with breeding procedures. On the other hand, 54.4% of the goats that had signalgrass as the main forage were positive at the ELISA. Considering these results, it can be concluded that this study represents the first CLA epidemiological survey in goats and sheep from Goiás state, and the occurrence of the infection with the bacteria is widespread at the state. / A Linfadenite caseosa (LC) é uma doença infectocontagiosa de caráter crônico, causada pela bactéria Corynebacterium pseudotuberculosis. Este patógeno é de distribuição mundial, acomete principalmente caprinos e ovinos e a doença que caracteriza-se pela formação de granuloma em nódulos linfáticos superficiais, podendo acometer órgãos e linfonodos internos. No Brasil, a doença encontra-se presente em grande parte dos rebanhos de pequenos ruminantes, causando danos econômicos, pela perda de valor do couro, perda de eficiência produtiva e, ocasionalmente, morte dos animais infectados. O objetivo do estudo foi identificar a soroprevalência de anticorpos específicos para C. pseudotuberculosis em ovinos e caprinos do estado de Goiás e identificar fatores de risco relacionados à doença. Foram analisadas 1815 amostras de soro de ovinos oriundos de 212 propriedades e 751 amostras de caprinos de 113 propriedades. O estado de Goiás foi estratificado em 18 regionais, conforme estrutura organizacional da Agência Goiana de Defesa Agropecuária. As amostras de soro foram submetidas à técnica de ELISA indireto para a detecção de anticorpos e o questionário aplicado teve as variáveis analisadas quanto ao grau de significância do sistema produtivo, havendo relevância para sexo, faixa etária, tipo de mão de obra, procedência e pastagem. Os dados foram analisados estatisticamente pelo software R. Os resultados obtidos mostraram que 29,4% dos soros de ovinos eram sorologicamente positivos para a bactéria e 51,8% dos caprinos amostrados mostraram-se positivos. Do total de propriedades de ovinos e caprinos, 83,4% e 84,7% tiveram animais positivos em seus rebanhos, respectivamente. Pode-se afirmar que para ovinos, 90% dos 120 municípios tiveram rebanhos positivos e para caprinos, 84,7% dos 85 municípios amostrados. Em relação ao sexo, observou-se maior positividade para fêmeas (31,5%) do que para machos (23,5%), na espécie ovina. No que tange à espécie caprina, 54,2% das fêmeas foram positivas e 44,7% dos machos foram sororreagentes. Para a variável faixa etária com animais acima de 36 meses, observou-se que 62,5% dos ovinos e 62,8% de caprinos tiveram exposição ao patógeno. Analisando a variável tipo de mão de obra, pode-se afirmar que 31,3% dos ovinos manejados por funcionários contratados foram positivos. Por outro lado, ovinos cuja mão de obra correspondeu à familiar apresentaram menor percentual (21,7%). Quanto à procedência dos caprinos, 53,1% cuja origem foi externa mostraram-se positivos. Para o quesito pastagem destinada aos caprinos, observou-se que 54,4% que consumiram braquiária e outras espécies forrageiras explicitaram resultado positivo para o diagnóstico sorológico de linfadenite caseosa. Por tais resultados, pode-se afirmar que este estudo representa a primeira descrição soro epidemiológica para linfadenite caseosa em rebanhos ovinos e caprinos do estado de Goiás, sendo notória a disseminação de Corynebacterium pseudotuberculosis em todas as unidades regionais.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El agente biológico Corynebacterium pseudotuberculosis es un patógeno animal cosmopolita que genera infecciones supurativas crónicas en diversas especies, siendo la linfoadenitis caseosa (LAC) en pequeños rumiantes el cuadro de mayor importancia, pero también se encuentra causando lesiones absedativas en otras especies, como los equinos. En Chile este patógeno se encuentra presente, sin embargo ninguna de las enfermedades que produce son de notificación obligatoria, ya que son cuadros de tipo debilitante, que no provocan mortalidad y las pérdidas económicas asociadas son difíciles de evaluar. Esto se relaciona con un desconocimiento de las características que presenta este agente, lo que trae consigo la falta de un diagnóstico adecuado y medidas de control para las enfermedades que este produce. En esta memoria se estudiaron las características fenotípicas, mediante pruebas microbiológicas y bioquímicas, y genotípicas, utilizando la reacción de la polimerasa en cadena (PCR) y la secuenciación de un fragmento del gen rpoB ; de un total de 20 aislados nacionales de C. pseudotuberculosis obtenidas a partir de lesiones absedativas de caprinos y equinos. Se evidenció la existencia de diferencias entre los aislados equinos y caprinos en sus características fenotípicas, en la prueba de reducción de nitratos, todas las cepas caprinas fueron negativas y todas las cepas equinas positivas. También se observaron diferencias genotípicas en la secuencia del gen rpoB entre los aislados caprinos y equinos. La técnica de PCR simple como diagnóstico rápido, a partir de muestras clínicas; bajo las condiciones de este estudio, fue capaz de detectar solo el 15% de las cepas obtenidas por aislamiento bacteriológico. Sin embargo, la técnica de PCR múltiple a partir de cultivos puros, fue capaz de detectar a todas las cepas identificadas por aislamiento bacteriológico y pruebas bioquímicas, y en un menor tiempo que estas pruebas. Por lo tanto esta técnica implementada en el presente estudio se muestra como una eficiente alternativa para el diagnóstico de las enfermedades causadas por C. pseudotuberculosis

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2016-09-01T17:09:28Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Robson Bahia Cerqueira.pdf: 448377 bytes, checksum: 8fd6e1c0b18fb33f9312c9869e1631ed (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-01T17:09:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Robson Bahia Cerqueira.pdf: 448377 bytes, checksum: 8fd6e1c0b18fb33f9312c9869e1631ed (MD5) / Corynebacterium pseudotuberculosis é o agente etiológico da linfadenite caseosa em ovinos e caprinos. Esta doença, de curso crônico, caracteriza-se pela formação de granulomas nos linfonodos e em órgãos internos, como forma de resposta do sistema imune do hospedeiro à penetração deste agente que resiste à ação bactericida das células fagocíticas. Apesar da resposta imune envolver todos os componentes das imunidades inata e adquirida, a natureza dos antígenos protetores ainda é desconhecida. O presente estudo avaliou a resposta imune humoral a partir do soro caprino coletado de grupos de animais infectados com a linhagem atenuada T1, a linhagem virulenta VD 57 e um grupo controle inoculado com PBS-T. Esses grupos foram acompanhados durante 12 semanas e os níveis de anticorpos específicos foram avaliados por cinco diferentes ensaios imunoenzimáticos indiretos utilizando os antígenos MQD, TPP, BHI e as frações Q5 e Q6. A sensibilidade e especificidade do teste ELISA indireto Q5 foram de 97,8% e, 95,6% respectivamente e a sensibilidade e especificidade do teste ELISA indireto Q6 foi de 91,1% e 95,6%. Os testes ELISA indireto MQD, Q5 e Q6 apresentam uma capacidade de discriminação maior entre os animais infectados com uma linhagem selvagem VD 57 comparados aos animais infectados com uma linhagem atenuada T1.

Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-02-14T17:04:39Z No. of bitstreams: 1 TESE-TATIANE SANTANA SALES.pdf: 2251188 bytes, checksum: 871fe88b233e8e23e585f22cc3a33431 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-03-23T12:58:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TESE-TATIANE SANTANA SALES.pdf: 2251188 bytes, checksum: 871fe88b233e8e23e585f22cc3a33431 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-23T12:58:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE-TATIANE SANTANA SALES.pdf: 2251188 bytes, checksum: 871fe88b233e8e23e585f22cc3a33431 (MD5) / FAPESB / Na caprino-ovinocultura do nordeste brasileiro observa-se alta prevalência da infecção por Corynebacterium pseudotuberculosis que resulta na Linfadenite Caseosa, gerando prejuízos econômicos significativos. O nematódeo gastrointestinal Haemonchus contortus também infecta os pequenos ruminantes, resultando em prejuízos econômicos e produtivos. Dessa forma, é importante a compreensão da interferência da infecção pelo H. contortus na possível modulação imune contra C. pseudotuberculosis em caprinos. Uma vez que a infecção por C. pseudotuberculosis desenvolve uma resposta Th1 predominante e que o H. contortus, induz uma expressiva estimulação Th2. O presente estudo avaliou a indução de resposta imune humoral e celular contra o Corynebacterium pseudotuberculosis em caprinos co-infectados pelo nematóide Haemonchus contortus. Assim, nos diferentes grupos experimentais, caprinos foram inoculados ou não com 107 UFC de uma linhagem de alta virulência (C57) de C. pseudotuberculosis, por via subcutânea, e com aproximadamente 10.000 larvas infectante L3 de H. contortus por via oral. Foram acompanhados por um período de oito meses até serem necropsiados. Utilizou-se o teste ELISA e westen blotting para o acompanhamento da cinética da resposta e da reatividade específica por anticorpos da classe IgG e a dosagem de IFN- para avaliação da reatividade in vitro, em culturas de sangue periférico estimuladas com antígenos destes dois patógenos. A técnica parasitológica de OPG e a morfométrica das células inflamatórias na mucosa abomasal foram realizadas para avaliação in loco da infecção pelo nematódeo. Os resultados evidenciaram expressivos níveis de anticorpos e uma reduzida produção da citocina IFN- contra o C. pseudotuberculosis nos animais co-infectados, que manifestaram lesões nos linfonodos internos e em algumas vísceras e alta carga parasitária. Ainda nos animais co-infectados observou-se níveis menos expressivos de IgG anti-H. contortus. Quanto ao reconhecimento antigênico através do wesrtern blotting, identificou-se oito proteínas de C. pseudotuberculosis e cinco proteínas do helminto. A ocorrência da resposta imune inata foi observada através da análise morfométrica da mucosa abomasal, onde foram identificados os linfócitos, eosinófilos, plasmócitos e macrófagos em todos os grupos; e uma população de mastócitos expressiva nos grupos infectados com este verme. Com os resultados obtidos conclui-se que as respostas imunes inata e adaptativa contra o H. contortus implicam numa significativa estimulação de mecanismos Th2. Os resultados também sugerem que tal estimulação module negativamente a resposta Th1 contra o C. pseudotuberculosis, entretanto, torna-se necessário novos estudos para a melhor compreensão desta modulação. / In goat and sheep breeding in northeastern Brazil, observed a high prevalence of infection with Corynebacterium pseudotuberculosis resulting in caseous lymphadenitis, causing significant economic losses. Gastrointestinal nematode Haemonchus contortus also infect small ruminants, resulting in economic and production losses. Thus, it is important to understand the interference of infection with H. contortus in possible immune modulation against C. pseudotuberculosis in goats. Once infection with C. pseudotuberculosis develops a predominantly Th1 response and H. contortus, induces a significant stimulation of Th2. This study evaluated the induction of humoral and cellular immune response against Corynebacterium pseudotuberculosis in co-infected goats by Haemonchus contortus. Thus, the different experimental groups, goats were inoculated with or without 107 CFU of a highly virulent strain (C57) of C. pseudotuberculosis, subcutaneously, and approximately 10.000 infective larvae L3 H. contortus orally. They were followed by a period of eight months before being necropsied. We used ELISA and Westen blotting for monitoring the response kinetics and specific reactivity of antibodies of the IgG and IFN- dosage for evaluation of in vitro reactivity in peripheral blood cultures stimulated with antigens of these two pathogens. The parasitological technique OPG and morphometric of inflammatory cells in the abomasal mucosa were performed to on-site evaluation of nematode infection. The results showed significant levels of antibodies and a reduced production of IFN- cytokine against C. pseudotuberculosis in co-infected animals, which showed lesions in lymph nodes and internal in some viscera and high parasite load. Also in co-infected animals there was less significant levels of IgG anti-H.contortus. As for the antigen recognition by westen blotting, it identified eight proteins of C. pseudotuberculosis and five proteins helminth. The occurrence of the innate immune response was observed using the morphometric analysis of the abomasal mucosa were identified where lymphocytes, eosinophils, plasma cells and macrophages in all groups; and a population of mast cells in significant with this worm groups infected. With the results obtained it is concluded that the innate and adaptive immune responses against H. contortus imply a significant stimulation of Th2 mechanisms. The results also suggest that such stimulation negatively modulates the Th1 response against C. pseudotuberculosis, however, it is necessary to further studies to better understand this negative regulation.

Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-02-14T19:10:47Z No. of bitstreams: 1 tese Danielle versão impressão.pdf: 1369230 bytes, checksum: 604c9e73ccec35bb56dba2e4a42c429b (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-06-07T13:17:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 tese Danielle versão impressão.pdf: 1369230 bytes, checksum: 604c9e73ccec35bb56dba2e4a42c429b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-07T13:17:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese Danielle versão impressão.pdf: 1369230 bytes, checksum: 604c9e73ccec35bb56dba2e4a42c429b (MD5) / FAPESB / Corynebacterium pseudotuberculosis é o agente causador da linfadenite caseosa em caprinos e ovinos caracterizado por formação de granulomas nos linfonodos superficiais e em órgãos internos. Diversas tentativas já foram realizadas para o desenvolvimento de candidatos vacinais que sejam capazes de induzir uma resposta imune protetora eficaz. O presente estudo avaliou indicadores da resposta imune inata e adaptativa em ovinos inoculados com uma linhagem de baixa virulência de C. pseudotuberculosis e a seus antígenos secretados. Cinco ovinos foram inoculados com a dose 109 UFC de uma linhagem de baixa virulência (T1) de C. pseudotuberculosis, cinco com 250μg de antígenos secretados em um meio quimicamente definido (MQD) e três animais foram utilizados para compor o grupo controle. Os animais foram desafiados com uma dose de 2x105 UFC de uma linhagem virulenta de C. pseudotuberculosis, e posteriormente necropsiados. Foram utilizados testes ELISA para identificação de IgM e IgG específica, e dosagem de IFN- para avaliação dos mecanismos humoral e celular. A técnica de PCR em tempo real foi utilizada para avaliação da expressão do RNAm de TNF-α, IL-1β e dos TLRs 2, 4, 9 em células de linfonodos inguinais. Com este experimento, conclui-se que o aumento na produção de IgG e uma maior expressão de RNAm de TNF-α e dos TLRs 2,4 e 9 em células de linfonodos inguinais podem estar associados a uma menor chance de surgimento de lesões em animais inoculados com a cepa de baixa virulência (T1). Os níveis de IFN- estiveram associados à progressão clínica da enfermidade no grupo MQD. / Corynebacterium pseudotuberculosis is the causative agent of caseous lymphadenitis in goats and sheep, which induces the formation of caseous lesions in subcutaneous lymph nodes and in internal organs. Several attempts have already been made for the development of vaccine candidates capable of inducing an effective protective immune response. The present study aimed to evaluate indicators of innate and adaptive immune response in sheep inoculated with a strain of low virulence of C.pseudotuberculosis and their secreted antigens. Five animals were inoculated with a dose 109 CFU of C. pseudotuberculosis of low virulence strain (T1), five with 250μg of secreted antigens in a chemically defined medium (CDM) more 1,5 mg saponins from Quillaja saponaria saponin as adjuvant and three animals were used to compose the control group. Animals were challenged with a dose of 2x105 CFU of virulent strain of C. pseudotuberculosis, and later necropsied. ELISA tests for identification of specific IgM and IgG and dosage of IFN -  were used to evaluate the humoral and cellular response. The technique of real-time PCR was used to evaluate the mRNA expression of TNF - α , IL - 1β and TLRs 2 , 4 , 9 . In this experiment, it was concluded that the increase in IgG production and increased mRNA expression of TNF- α and TLRs 2,4 and 9 may be associated with a lower chance of lesions in animals inoculated with a strain of low virulence of C.pseudotuberculosis. The levels of IFN -  were associated with clinical progression of the disease in MQD group.

Submitted by Barroso Patrícia (barroso.p2010@gmail.com) on 2013-04-04T19:59:26Z No. of bitstreams: 1 Dissertação milton galdino 05062012 - DEFINITIVA.pdf: 2594051 bytes, checksum: 1b7dc66215e94866d37e7c0e7c6430df (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-04T19:59:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação milton galdino 05062012 - DEFINITIVA.pdf: 2594051 bytes, checksum: 1b7dc66215e94866d37e7c0e7c6430df (MD5) Previous issue date: 2011 / A Linfadenite Caseosa, causada por Corynebacterium pseudotuberculosis (C. pseudotuberculosis, é uma enfermidade de alta prevalência nos rebanhos de pequenos ruminantes da região semi-árida brasileira, trazendo grandes prejuízos particularmente para os pequenos produtores, pois a criação desses animais é a principal atividade de subsistência nesta região. O presente trabalho teve como objetivo avaliar aspectos da resposta imune de camundongos da linhagem C57/Black 6 selvagem e C57/Black 6 Knockout para o óxido nítrico (KO-NO), durante a infecção experimental por C. pseudotuberculosis. A utilização de animais Knockout possibilitou a compreensão da atuação de alguns tipos celulares do sistema imune frente ao patógeno, já que se sabe que o óxido nítrico é um importante agente na eliminação de microrganismos intracelulares. Para tanto, foram utilizados e eutanasiados 28 animais em dois tempos (7 e 14 dias), divididos em quatro grupos, a saber: grupo 1 – controle – com 4 animais selvagens; grupo 2 - infectado por C. pseudotuberculosis – com 10 animais selvagens; grupo 3 – controle – com 4 animais KO-NO; e grupo 4 – infectado por C. pseudotuberculosis – com 10 animais KO-NO. Na metodologia avaliamos a suscetibilidade de camundongos KO-NO, na infecção, verificando que animais C57/Black 6 KO-NO são susceptíveis à infecção por C. pseudotuberculosis com mortalidade observada a partir do 4º dia, o que indica a importância dessa molécula na defesa inata contra essa bactéria. No estudo de células do lavado peritoneal os neutrófilos foram as células encontradas em maior número no infiltrado dos animais KO-NO, o que pode indicar um mecanismo compensatório pela ausência do óxido nítrico. Com o estudo do baço observou-se a presença de linfócitos, com predomínio de TCD8 entre as células esplênicas de ambos os grupos, o que sugere a importância dessa sub-população na resposta imune contra esse microorganismo. A partir da presença de granulomas verificou-se a maior presença nos animais KO-NO infectados com 7 dias, sendo os linfonodos os mais afetados, o que aponta também para uma tentativa compensatória de conter a infecção; constatou-se uma maior recuperação bacteriana de linfonodo mesentério nos camundongos KO-NO, provavelmente devido a sua maior capacidade de escape. Foi realizado também o estudo de anticorpos séricos, através da detecção de IgG total e subclasses, o qual foi observado uma produção 14 dias pós infecção, tanto nos animais selvagens como nos KO-NO, similar aos animais controle, o que indica uma resposta humoral tardia por esse tipo de anticorpo para esse microorganismo. Os resultados obtidos sugerem a importância do óxido nítrico no processo de combate à infecção por este microrganismo, posto que os animais KO-NO para esta substância foram os mais afetados pelo processo infeccioso instalado. / Universidade Federal da Bahia, Instituto de Ciências da Saúde

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-06-10T18:39:59Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Italaney Fehlberg.pdf: 1641383 bytes, checksum: 5783529c67edcfba0dd7902fb837f098 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-10T18:39:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Italaney Fehlberg.pdf: 1641383 bytes, checksum: 5783529c67edcfba0dd7902fb837f098 (MD5) / CAPES; FAPEX / Infecções por Corynebacterium pseudotuberculosis, com alta prevalência na Bahia, e Mycobacterium spp., sem dados oficiais de ocorrência neste estado, podem resultar na formação de lesão granulomatosa, tanto em linfonodos superficiais quanto em órgãos internos. Isto pode gerar confusão no diagnóstico clínico de linfadenite caseosa e tuberculose nestes animais, mas que em decorrência da alta prevalência desta primeira acabam sendo diagnosticados clinicamente como linfadenite caseosa. Para estimar a ocorrência destas infecções como causadoras de hipertrofia nos linfonodos superficiais de caprinos é que o presente estudo foi realizado. Mil seiscentos e trinta e nove caprinos de cinco municípios do semi-árido baiano foram examinados quanto à presença destas lesões externas e dos 59 animais (3,6%) que as apresentavam, amostras de sangue total e do conteúdo dos abscessos foram coletadas. O sangue foi destinado para a realização do ELISA indireto anti-Corynebacterium pseudotuberculosis e os materiais de 56 abscessos foram destinados para a cultura de Corynebacterium e extração dos DNAs para identificação direta dos patógenos por PCR. A cultura detectou Corynebacterium pseudotuberculosis em 40 (71,4%) abscessos, enquanto o mPCR detectou em 41(73,2%). Mycobacterium spp. não foi identificado pela técnica molecular em nenhuma das amostras avaliadas. A sorologia para C. pseudotuberculosis identificou 42 (71,2%) dos 59 caprinos como positivos para linfadenite caseosa. Assim, a infecção por Corynebacterium pseudotuberculosis foi responsável pelas hipertrofias superficiais em mais de 71% dos caprinos avaliados pela cultura, sorologia e PCR, confirmando o diagnóstico clínico de linfadenite caseosa nestes animais. Exames adicionais são requeridos para garantir que a tuberculose não ocorre nos caprinos destes municípios da Bahia. / Salvador

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-06-10T21:27:30Z No. of bitstreams: 3 Tese_ICS_ Cláudia Valle dos Santos.pdf: 1227134 bytes, checksum: 3d07c84824756a4fec14e205dd588442 (MD5) Tese_ICS_ Cláudia Valle dos Santos.pdf: 1227134 bytes, checksum: 3d07c84824756a4fec14e205dd588442 (MD5) Tese_ICS_ Cláudia Valle dos Santos.pdf: 1227134 bytes, checksum: 3d07c84824756a4fec14e205dd588442 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-10T21:27:30Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Tese_ICS_ Cláudia Valle dos Santos.pdf: 1227134 bytes, checksum: 3d07c84824756a4fec14e205dd588442 (MD5) Tese_ICS_ Cláudia Valle dos Santos.pdf: 1227134 bytes, checksum: 3d07c84824756a4fec14e205dd588442 (MD5) Tese_ICS_ Cláudia Valle dos Santos.pdf: 1227134 bytes, checksum: 3d07c84824756a4fec14e205dd588442 (MD5) / O Brasil possui grande diversidade genética vegetal. O uso de plantas com finalidades terapêuticas se perpetuou na história da civilização e chegou até os nossos dias amplamente difundido. A Schinus terebinthifolius (Raddi), conhecida por Aroeira, pertence a família Anacardiaceae, de grande plasticidade ecológica ocorrendo em quase todo o território brasileiro. É um dos espécimes mais utilizados na medicina popular da região Nordeste do país. Já foram isolados de várias de suas partes, diversos metabólitos secundários, a exemplo de terpenos, lectinas, saponinas, taninos, compostos fenólicos, flavonóides e alcalóides. Seus constituintes químicos exibem amplo espectro de atividades biológicas tais como ação antibacteriana, antiviral, antifúngica, anti-inflamatória, anticarcinogênica, anti-hipertensiva e hipolipidêmica. A Corynebacterium pseudotuberculosis é o agente etiológico da linfadenite caseosa em caprinos e ovinos, enfermidade de alta prevalência na região Nordeste do Brasil acarretando danos para o criador através da desvalorização das peles, perda de peso e óbito do animal. Neste trabalho foram produzidos extratos aquoso e metanólico obtidos de folhas da Schinus terebinthifolius (Raddi) e analisados seus efeitos no crescimento in vitro de cepas virulentas e atenuadas da Corynebacterium pseudotuberculosis e sobre a proliferação in vitro de esplenócitos de camundongos (Mus musculus). O extrato metanólico foi testado nas concentrações de 2.000, 1500, 1000, 500, 250, 100 e 10 μg/dL, durante 48 horas. Nas quatro primeiras, houve produção de halos de inibição do crescimento do microorganismo de diâmetros variados, demonstrando poder microbicida do extrato da S. terebinthifolius nas concentrações citadas. Os esplenócitos expostos as concentrações de 100, 200 e 500 μg/dL, durante 24 e 72 horas, apresentaram acentuada proliferação celular. A viabilidade, crescimento e ativação celular foi estudada pelo método do brometo de 3-(4,5-dimetil-2-tiazolil)-2,5-difeniltetrazolio (MTT). Verificamos que a proliferação significativa observada pela contagem celular foi acompanhada de um bom desempenho pelo teste do MTT, assim como pela análise da atividade da enzima lactato desidrogenase. A atividade do compartimento lisossômico, assim como a dosagem de proteínas totais, demonstrou valores estatisticamente significantes com 24 e 72 horas de exposição sobre o crescimento celular , principalmente na concentração de 500 μg/dL de fenóis totais. Ao que parece, o aumento da atividade enzimática lisossômica aconteceu pela alta proliferação celular desencadeada pelos extratos da aroeira, de modo similar aos valores encontrados da ação da lactato desidrogenase, bem como a dosagem protéica. Foram medidos os níveis de IFN-gama, IL-2, IL-12, IL-17 e TNF-alfa e IL-6, IL-10, IL-13 e não houve diferença significativa entre os tratamentos, tempo ou linhagem murina. Todos os resultados revelam alta capacidade mitogênica dos extratos de aroeira com preservação da viabilidade celular. / Salvador

Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.