Estudos populacionais de Aedes aegypti são de grande importância para o desenvolvimento de estratégias de controle, mas infelizmente o Estado de São Paulo carece desse tipo de estudo. Devido a esse contexto, o objetivo do trabalho foi avaliar a variabilidade genética e fenotípica de 4 populações de Ae. aegypti na área metropolitana de São Paulo. As análises interpopulacionais de forma em ambos os sexos mostraram variabilidade morfológica alar que, no entanto não indica estruturação populacional. Não foi observada correlação entre valores de distância fenética alar e distância geográfica para machos (r =-0,03) e fêmeas (r=0,34). Estruturação populacional foi detectada (Fst global=0,062) e baixo fluxo gênico (Nm=0,47) foi presumido nas quatro localidades. Foi observada correlação entre as distâncias genética e geográfica (r=0,76). Os dois marcadores populacionais aqui empregados aparentemente têm graus de resolução distintos para eventos microevolutivos, tendo sido DNA microssatélite ligeiramente mais sensível para acusar estruturação populacional. / Populational studies of Ae. aegypti are important to develop control strategies, but unfortunately the State of São Paulo lacks such studies. Despite this context, the objective of this work was to evaluate genetic and phenotypic variability of population samples of Ae. aegypti from four collecting sites in the metropolitan area of São Paulo city. The interpopulational analysis of shape for females and males showed morphological variability in wings, but did not indicate population structure. Pairwise fenetic distances among populations were not correlated to the geographic distances for males (r=-0.03) and females (r =0.34). Populational structure was detected (global Fst= 0.062) and low gene flow (Nm= 0.41) was presumed among four locations. Pairwise genetic distances among populations were correlated to the geographic distances (r = 0.76). The two populational markers used here apparently have different degrees of resolution for microevolutionary events, being that microsatellite DNA were slightly more sensitive in revealing populational structure.

Áreas verdes urbanas são ambientes que podem oferecem oportunidade de interação entre reservatórios e vetores dos meios urbano e silvestre, potencializando o risco de transmissão de doenças e de mudanças em seu perfil epidemiológico. Entender como as alterações da paisagem interferem na composição da fauna de culicídeos e conhecer quais espécies de vetores ocorrem nessas áreas, pode auxiliar na predição da distribuição espacial das espécies frente à urbanização, fornecendo importantes ferramentas para o controle de endemias e planejamento urbano. O objetivo desse estudo foi verificar a ocorrência de espécies de mosquitos vetores e avaliar a relação entre os diferentes tipos de uso e cobertura do solo e a composição da fauna de culicídeos. As coletas ocorreram quinzenalmente entre outubro de 2012 a março de 2013 com a utilização de armadilhas de oviposição instaladas em oito áreas verdes com diferentes características de paisagem do município de Porto Alegre, sul do Brasil. Foram coletados 4179 culicídeos de pelo menos 10 espécies. Destas, Aedes albopictus e Limatus durhami foram eudominante/dominantes, juntos representando 90% do total de indivíduos. Esse estudo foi o primeiro registro de ocorrência de Sabethes albiprivus e Li. durhami em Porto Alegre. As espécies de culicídeos demonstraram responder de maneira diversa aos tipos de uso e cobertura do solo, indicando que as afinidades mais evidentes se mantém nas três escalas avaliadas. A abundância relativa de Ae. albopictus foi relacionada às áreas verdes mais urbanizadas, enquanto a de Li. durhami, Haemagogus leucocelaenus e Toxorhynchites sp., à presença da mata nativa. A ocorrência de Aedes aegypti não demonstrou ser influenciada pelo tipo de uso e cobertura do solo. Foram coletadas três espécies relacionadas à transmissão de febre amarela, febre chikungunya e dengue, Ae. albopictus, Hg. leucocelaenus e Ae. aegypti e verificada a ocorrência simultânea dessas em algumas áreas, o que pode representar a oportunidade para o surgimento de surtos epidêmicos e a mudança do perfil epidemiológico dessas doenças. / Urban green areas can offer opportunity for interactions between reservoirs and vectors of urban and wild environments, increasing the risk of disease transition and changes in their epidemiological profile. The understanding of how changes in the landscape affect the composition of culicid fauna and which vector species occur in these areas may help and prediction the spatial distribution of the species along urbanized areas, providing important tools to control endemic disease. This study aimed to verify the occurrence of mosquito vector species and to evaluate the relationship between different types of land cover and land use with the composition of Culicidae fauna. Sampling occurred biweekly, from October 2012 to March 2013, where oviposition traps were installed in eight green areas with different landscape traits, in Porto Alegre, Southern Brazil. 4179 mosquitoes belonging to et least ten species were sampled. Aedes albopictus and Limatus durhami were eudominants/dominant representing together 90% of total individuals. This is the first report of Sabethes albiprivus and Li. durhami occurrence in Porto Alegre. The mosquitos species responded differently to types of land use cover and land use, indicating that the most obvious affinities are maintained in three scales evaluated. The relative abundance of Ae. albopictus was related to the more urbanized green area, while the abundance of Li. durhami , Haemagogus leucocelaenus and Toxorhynchites sp., was related to the presence of preserved areas. The occurrence of Aedes aegypti was not influenced by land use and land cover. Three species related to dengue, chikungunya and yellow fever transmission were sampled, Ae. albopictus, Hg. leucocelaenus and Ae. aegypti. We also verified the simultaneous occurrence of these species, which may represent an opportunity of changes in the epidemiologic of these diseases.

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA09MA049.pdf: 1692123 bytes, checksum: dca50115681c39be93404dcdea64d7b6 (MD5) Previous issue date: 2009-03-31 / Aiming to identify the species of Culicidae in intra and peridomestic environments of the city of Lages, SC., to determine the frequency in these environments and to study the seasonal variation of the fauna of Culicidae were captured, monthly, and then winged insect forms immature at the time of 6 to 10 h in the morning, in intra and peridomestic environments and five homes in Center city and five in a neighborhood of the periphery, from March 2006 to August 2008. Catches were made by suction and automatic light trap. The adults collected by suction with ether were killed and captured in light traps, by freezing. The larvae and pupae were collected in the same environments and the same day, where were the adults, and surveyed with the local accumulation of water by natural conditions and / or artificial. They were caught with plastic shells and nets with mesh of approximately 0.3 mm. After collection, larvae and pupae were placed in test tubes with 70° GL alcohol, with cotton and sealed with rubber stopper and identified. All material was transported to the Laboratory of Parasitology and Parasitic Diseases - Agroveterinárias Science Center at the University of the State of Santa Catarina-CAV-UDESC and proceeded mounted and identified. It collected a total of 658 adult mosquitoes, with 657 species of Culex quinquefasciatus, and a female of Ochlerotatus scapularis (= Aedes scapularis). From a total of 490 females, 267 were collected from the environment and 223 intra peridomiciliary. Of the 168 males, 20 were in households and 148 peridomiciliary. 286 larvae were collected, 268 of Cx. quinquefasciatus, Stegomyia albopictus (=Aedes albopictus) and four of 14 Ochlerotatus fluviatilis (= Aedes fluviatilis). There were kind of Cx. quinquefasciatus, there is monthly variation in the density of culicidae, influenced by fluctuations in temperature / Com os objetivos de identificar as espécies de culicídeos em ambientes intra e peridomiciliares da cidade de Lages, SC., de determinar a freqüência nesses ambientes e de estudar a variação sazonal da fauna de culicídeos, foram capturados, mensalmente, insetos alados e formas imaturas no horário das 6 às 10 h da manhã, em ambientes intra e peridomiciliares de cinco residências do Centro da cidade e de cinco de um bairro da periferia, no período de março de 2006 a agosto de 2008. As capturas foram feitas por sucção e com armadilha luminosa automática. Os adultos coletados por sucção foram mortos com éter e os capturados nas armadilhas luminosas, por congelamento. As larvas e pupas foram coletadas nos mesmos ambientes e nos mesmos dias, em que foram coletados os adultos, sendo vistoriados os locais com acúmulo de água por condições naturais e/ou artificiais. Estas formas imaturas foram capturadas com conchas plásticas e com redes com malha de aproximadamente 0,3 mm. Após a coleta, as larvas e as pupas foram acondicionadas em tubos de ensaio com álcool 70%, fechados com algodão e com rolha de borracha e identificados. Todo material foi transportado ao Laboratório de Parasitologia e Doenças Parasitárias - Centro de Ciências Agroveterinárias da Universidade do Estado de Santa Catarina - CAVUDESC e procedidas montagens e identificação. Foi coletado um total de 658 adultos, sendo 657 da espécie Culex quinquefasciatus, e uma fêmea de Ochlerotatus scapularis (=Aedes scapularis). De um total de 490 fêmeas, 267 foram coletadas do ambiente intradomiciliar e 223 do peridomiciliar. Dos 168 machos, 20 foram obtidos no intradomicílio e 148 no peridomicílio. Foram coletadas 286 larvas, 268 de Cx. quinquefasciatus, quatro de Stegomyia albopictus (=Aedes albopictus) e 14 Ochlerotatus fluviatilis (=Aedes fluviatilis). Houve predomínio da espécie Cx. quinquefasciatus, constatando-se variações mensais na densidade de culicídeos, influenciadas pelas oscilações de temperatura

Áreas verdes urbanas são ambientes que podem oferecem oportunidade de interação entre reservatórios e vetores dos meios urbano e silvestre, potencializando o risco de transmissão de doenças e de mudanças em seu perfil epidemiológico. Entender como as alterações da paisagem interferem na composição da fauna de culicídeos e conhecer quais espécies de vetores ocorrem nessas áreas, pode auxiliar na predição da distribuição espacial das espécies frente à urbanização, fornecendo importantes ferramentas para o controle de endemias e planejamento urbano. O objetivo desse estudo foi verificar a ocorrência de espécies de mosquitos vetores e avaliar a relação entre os diferentes tipos de uso e cobertura do solo e a composição da fauna de culicídeos. As coletas ocorreram quinzenalmente entre outubro de 2012 a março de 2013 com a utilização de armadilhas de oviposição instaladas em oito áreas verdes com diferentes características de paisagem do município de Porto Alegre, sul do Brasil. Foram coletados 4179 culicídeos de pelo menos 10 espécies. Destas, Aedes albopictus e Limatus durhami foram eudominante/dominantes, juntos representando 90% do total de indivíduos. Esse estudo foi o primeiro registro de ocorrência de Sabethes albiprivus e Li. durhami em Porto Alegre. As espécies de culicídeos demonstraram responder de maneira diversa aos tipos de uso e cobertura do solo, indicando que as afinidades mais evidentes se mantém nas três escalas avaliadas. A abundância relativa de Ae. albopictus foi relacionada às áreas verdes mais urbanizadas, enquanto a de Li. durhami, Haemagogus leucocelaenus e Toxorhynchites sp., à presença da mata nativa. A ocorrência de Aedes aegypti não demonstrou ser influenciada pelo tipo de uso e cobertura do solo. Foram coletadas três espécies relacionadas à transmissão de febre amarela, febre chikungunya e dengue, Ae. albopictus, Hg. leucocelaenus e Ae. aegypti e verificada a ocorrência simultânea dessas em algumas áreas, o que pode representar a oportunidade para o surgimento de surtos epidêmicos e a mudança do perfil epidemiológico dessas doenças. / Urban green areas can offer opportunity for interactions between reservoirs and vectors of urban and wild environments, increasing the risk of disease transition and changes in their epidemiological profile. The understanding of how changes in the landscape affect the composition of culicid fauna and which vector species occur in these areas may help and prediction the spatial distribution of the species along urbanized areas, providing important tools to control endemic disease. This study aimed to verify the occurrence of mosquito vector species and to evaluate the relationship between different types of land cover and land use with the composition of Culicidae fauna. Sampling occurred biweekly, from October 2012 to March 2013, where oviposition traps were installed in eight green areas with different landscape traits, in Porto Alegre, Southern Brazil. 4179 mosquitoes belonging to et least ten species were sampled. Aedes albopictus and Limatus durhami were eudominants/dominant representing together 90% of total individuals. This is the first report of Sabethes albiprivus and Li. durhami occurrence in Porto Alegre. The mosquitos species responded differently to types of land use cover and land use, indicating that the most obvious affinities are maintained in three scales evaluated. The relative abundance of Ae. albopictus was related to the more urbanized green area, while the abundance of Li. durhami , Haemagogus leucocelaenus and Toxorhynchites sp., was related to the presence of preserved areas. The occurrence of Aedes aegypti was not influenced by land use and land cover. Three species related to dengue, chikungunya and yellow fever transmission were sampled, Ae. albopictus, Hg. leucocelaenus and Ae. aegypti. We also verified the simultaneous occurrence of these species, which may represent an opportunity of changes in the epidemiologic of these diseases.

INTRODUÇÃO: O subgrupo Anopheles strodei é pouco estudado apesar de sua importância epidemiológica potencial. Espécies desse subgrupo foram encontradas naturalmente infectadas por parasitos que causam malária em humanos, Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax e Plasmodium malariae, no Brasil. O subgrupo Anopheles strodei compreende oito espécies: An. rondoni (Neiva & Pinto), An. albertoi Unti, An. arthuri Unti, An. strodei Root, An. strodei CP, e três outras espécies que foram propostas por Bourke et al. (2013), mas não foram descritas: An. arthuri B, An. arthuri C e An. arthuri D. OBJETIVOS: A definição e delimitação precisa de espécies que atuam como vetores de agentes infecciosos é um dos objetivos da entomologia da saúde pública. Os objetivos deste estudo foram: 1) Estabelecer as relações filogenéticas entre espécies do Subgrupo Strodei; 2) Estimar a distribuição espacial potencial das espécies do Subgrupo Strodei; 3) Confirmar a presença de quatro espécies sob o nome An. arthuri. MÉTODOS: Sequências de DNA de um gene mitocondrial (fragmento de 658 pares de bases do código de barras do gene COI, citocromo oxidase subunidade I) e de três genes nucleares codificadores de proteínas (White, CAD e CAT) foram empregadas para estabelecer as relações filogenéticas potenciais entre as espécies que compõe o subgrupo An. strodei. As análises filogenéticas foram conduzidas utilizando abordagem Bayesiana das sequências de DNA dos quatro genes. Para estabelecer a distribuição espacial potencial das espécies, utilizou-se abordagem de máxima entropia de nichos ecológicos. Para isso as localidades das coletas, juntamente com os dados climáticos e geográficos foram introduzidos no programa MAXENT. RESULTADOS: Os resultados das análises filogenéticas demonstraram e, portanto, confirmaram o monofiletismo do Subgrupo Strodei, a presença de pelo menos sete espécies sob o nome An. strodei, ou seja, corroborou a validade de An. albertoi, An. arthuri, An. strodei, An. strodei CP, além das espécies denominadas, preliminarmente, como An. arthuri B, An. arthuri C e An. arthuri D. Portanto, como definida atualmente, An. arthuri não representa grupo monofilético, pois inclui táxons que deverão ser formalmente descritos em estudos futuros. CONCLUSÃO: As distribuições potenciais de espécies do Subgrupo Strodei foram propostas pela primeira vez. Cinquenta e cinco sequências do gene nuclear CAT e outras 46 sequências do gene nuclear CAD únicas foram recentemente caracterizadas para espécies do Subgrupo Strodei de Anopheles (Nyssorhynchus), confirmando a presença de pelos menos sete espécies, além de An. rondoni que não foi alvo deste estudo, mas de outros anteriores que confirmaram a validade da mesma. / Introduction Anopheles strodei sensu lato is an understudied subgroup of potential epidemiological importance, having been found naturally infected in Brazil with Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax and Plasmodium malariae. An. strodei s.l. is currently composed on 8 species: An. albertoi Unti, An. CP Form, An. rondoni (Neiva & Pinto), An. strodei Root, An. arthuri Unti and three other unnamed species that have been proposed by Bourke et al. (2013): An. arthuri B, An. arthuri C and An. arthuri D. Objectives As delineating species accurately is an essential goal of public health entomology, the objectives of this study were to: 1) Determine the phylogenetic relationships within the Strodei Subgroup and reaffirm or reject the hypothesis of the 3 new species (An. arthuri B, An. arthuri C and An. arthuri D) 2) Address the potential spatial distribution of species of the An. strodei subgroup to provide support for the candidate species in the Strodei Subgroup Methods Bayesian inference, which included DNA sequences of one mitochondrial and three nuclear protein coding genes: CO1, white, CAD and CAT, was used to determine the phylogenetic relationship within the group. To propose a species distribution, collection localities, along with climatic and geographic data were input into MAXENT. Results When analyzing the four molecular markers employed, support was found for allopatry in the Strodei Subgroup. The paraphyletic clade of An. arthuri was supported. Conclusion Potential species distributions of the Strodei Subgroup were addressed for the first time. Fifty-five unique CAT sequences and 46 unique CAD sequences were newly characterized.

Introdução: O mosquito Aedes fluviatilis é um culicídeo encontrado abundantemente pela Cidade de São Paulo, como mostram recentes levantamentos faunísticos em parques municipais. Estas ilhas verdes localizadas na malha urbana da metrópole possuem a capacidade de manter ciclos biológicos de muitos organismos, alguns deles, causadores de doenças. Embora o Aedes fluviatilis não esteja relacionado até o presente momento a doenças que atingem o homem, possui biologia, ecologia, capacidade vetora e padrões populacionais ainda pouco conhecidos. Com a intenção de agregar conhecimento sobre o perfil populacional desta espécie de culicídeo, foi utilizada a ferramenta da morfometria geométrica alar. Objetivos: (1) Avaliar a efetividade da morfometria geométrica alar na descrição das populações de machos e fêmeas de Ae. fluviatilis; (2) Verificar a existência de dimorfismo sexual; (3) Verificar a variabilidade fenotípica das populações e o grau de similaridade na estruturação populacional de cada gênero sexual do mosquito Aedes fluviatilis, no município de São Paulo. Material e Métodos: Foram utilizados 18 marcos anatômicos para determinar a geometria da asa. As variáveis de tamanho e forma foram utilizadas para mensurar o grau de dimorfismo sexual e estruturação populacional dessa espécie, cujos exemplares foram coletados em oito parques urbanos do município de São Paulo. Resultados: Através da variável da forma alar, foi possível determinar o dimorfismo sexual existente em Aedes fluviatilis. A conformação diferenciada das populações aponta para heterogeneidade em machos e homogeneidade em fêmeas. Discussão: Variações ambientais, muitas vezes proporcionadas pela ação do homem, ou hábitos ecológicos, podem direcionar a variabilidade da forma alar de diferentes maneiras em machos e fêmeas. A homogeneidade das populações de fêmeas, como evidenciado em trabalhos anteriores, pode ser um indicativo de rápida adaptação ao meio urbano, enquanto em machos a existência de diferentes padrões pode apontar para algum grau de fluxo gênico. Conclusões: Os padrões de variabilidade alar encontrados em fêmeas e machos sugerem que as pressões ambientais agem de forma distinta para cada gênero. A característica de homogeneidade populacional encontrada nas fêmeas indica a rápida adaptabilidade ao meio urbano, em concordância com outros estudos que apontam para baixo grau de fluxo gênico nesta espécie. A diferente conformação nos machos sugere estudos para a melhor compreensão dos mecanismos que modulam a evolução alar. / The mosquito Aedes fluviatilis is a culicid found abundantly in São Paulo City as shown by recent fauna survey in park\'s city. These green islands located in urban environment have the ability to maintain the life cycle of the many organisms, some of them cause disease or carry etiologic agents. The Ae. fluviatilis, although not incriminated to transmit pathogens to humans, their biology, ecology, vector capacity and population patterns is little known. With the intention of adding knowledge about the population profile of this culicid specie, was used wing morphometric tool. Objectives: (1) Evaluate the effectiveness of wing morphometric for description of the population of males and females of Ae. fluviatilis (2) Check sexual dimorphism in this specie (3) Check the phenotypic variability of the population and the degree of similarity in population structure for each sexual gender of the Ae. fluviatilis in São Paulo urban parks. Methods: Were utilized 18 anatomical landmarks to determine the geometric morphometric of the wing. The size and shape variables were used to measure the degree of sexual dimorphism and population patterns of Ae. fluviatilis collected in 8 urban parks in São Paulo City. Results: Through the wing shape variably, it was possibly to determine sexual dimorphism in Ae. fluviatilis, and different conformation of the population can appoint to heterogeneity in male\'s population and homogeneity in female\'s population. Discussion: Environmental variations, often provided by man or ecological habits can direct the variability of wing shape differently in males and females. The homogeneity of the female\'s population may be indicative rapid adaptation to urban areas, while in males the existence of different patterns of wing shape, may indicative some level of the gene flow. Conclusions: The variability of wing shape founded in males and females suggest that environmental pressures act differently for each gender. The characteristic of population homogenization in females suggest a rapid adaptability to the urban environment, in concordance with other works about low gene flow in this specie. The different conformation in males show the necessity of the studies to better understand the mechanisms involved in the wing evolution.

Lacase 2 é um gene com função majoritária na esclerotinização e pigmentação da cutícula corporal em insetos e evidências sugerem que desenvolva função na esclerotinização do córion dos ovos de mosquitos vetores de patógenos. A literatura registra que quando a expressão do gene é silenciada em adultos de Aedes albopictus suas fêmeas produzem ovos hialinos e inviáveis. Em teoria, este seria um bom gene-candidato à manipulação em iniciativas de controle biológico baseada em organismos geneticamente modificados. No presente estudo, caracterizamos o perfil expressional e a atividade enzimática de lacase 2 durante o desenvolvimento de Aedes aegypti, bem como silenciamos transcritos do gene em fêmeas adultas para testar se havia prejuízo na formação do córion dos ovos. A técnica de RT-PCR não foi sensível suficiente para detectar amplificação do gene lacase 2 em larvas, contudo, detectamos amplificação nos outros estágios de vida. Pupas e fêmeas adultas após repasto sanguíneo apresentaram perfis de expressão similares entre si. Com a técnica de detecção de atividade enzimática por fluorescência foi possível determinar o perfil de atividade enzimática de lacase 2 e o pH ótimo em todos estágios de desenvolvimento. O maior pico de atividade foi registrado em fêmeas adultas 32 horas após repasto sanguíneo. A atividade enzimática de lacase 2 foi confirmada após separação cromatográfica na amostra de fêmeas adultas 24 horas após repasto sanguíneo. Ambas técnicas, RT-PCR e detecção de atividade enzimática, apontam para maior produção de lacase 2 após repasto sanguíneo em fêmeas adultas, denotando sua importância no desenvolvimento do ovo. Para realização dos experimentos de silenciamento de transcritos foram sintetizados RNAs dupla-fita de lacase 2 e da proteína MSP1, utilizado como controle negativo do silenciamento. Ambos RNAs dupla-fita foram microinjetados em três concentrações, 20ng, 200ng e 1700ng, isoladamente em três grupos experimentais de fêmeas de Ae. aegypti. Em todos os experimentos não houve diferença morfológica entre os ovos das fêmeas microinjetadas com RNA dupla-fita de lacase 2 e MSP1. Os ovos dos grupos experimento e controle iniciaram a pigmentação cerca de 30 minutos após a postura. Entretanto, foram observados alguns ovos com início de pigmentação tardio no grupo experimento no lote de fêmeas microinjetadas com 200ng. Este fenômeno pareceu ter sido um incipiente do silenciamento de transcritos de lacase 2. O efeito da inserção do RNA dupla-fita de lacase 2 não resultou no mesmo efeito reportado na literatura para Ae. albopictus. Ainda assim, os resultados obtidos neste trabalho corroboram a hipótese de que lacase 2 desempenhe alguma função no desenvolvimento do ovo em mosquitos. / Laccase 2 is a gene with major role in body cuticle tanning in insects and evidences suggest laccase 2 may play a role in egg chorion tanning in mosquitoes vectors of pathogens. When the expression of the gene is knocked down in adults of Aedes albopictus their females produce hyaline and inviable eggs. Theoretically, this gene would be a good candidate for manipulation in the context of biological control of vectors based on genetically modified organisms. In the present study, we characterized the expressional profile and enzymatic activity of laccase 2 during the development of Aedes aegypti. We also knocked down the gene in adult females hypothesizing that this could jeopardize egg chorion formation. The RT-PCR technique was not sensitive to detect laccase 2 amplification in larvae, however, we detected amplification in other life stages. Pupae and adults females after blood meal exhibited equivalent expressional profiles. Using the technique of enzymatic activity detection by fluorescence, it was possible to determine the laccase 2 enzymatic activity profile and the optimum pH in all stages of development. The highest activity peak was registered in adult females 32 hours after blood meal. The laccase 2 enzymatic activity was confirmed by chromatographic separation in the adults females 24 hours after blood meal sample. Both techniques (RT-PCR and enzymatic activity detection) point to a higher production of laccase 2 after blood meal in adult females, suggesting the importance of laccase 2 for egg development. For the knocking down experiments we synthesized double-stranded RNA of laccase 2 and protein MSP1 (negative control). Both double-stranded RNAs were injected at three concentrations, 20ng, 200ng and 1700ng, in three experimental groups of Ae. aegypti females. No significant morphological differences between eggs from females injected with laccase 2 and MSP1 double-stranded RNA were observed. Pigmentation of the eggs started 30 minutes after they were laid (experimental and control group). However, the pigmentation started slightly later in those eggs of experiment females injected with 200ng. This apparent developmental delay may be related to the silencing of laccase 2. The effect of insertion of double-stranded RNA of laccase 2 did not result in the same effect reported in the literature for Ae. albopictus. Even so, the results obtained in this study corroborate the hypothesis that laccase 2 plays a role in egg development in mosquitoes.

Áreas verdes urbanas são ambientes que podem oferecem oportunidade de interação entre reservatórios e vetores dos meios urbano e silvestre, potencializando o risco de transmissão de doenças e de mudanças em seu perfil epidemiológico. Entender como as alterações da paisagem interferem na composição da fauna de culicídeos e conhecer quais espécies de vetores ocorrem nessas áreas, pode auxiliar na predição da distribuição espacial das espécies frente à urbanização, fornecendo importantes ferramentas para o controle de endemias e planejamento urbano. O objetivo desse estudo foi verificar a ocorrência de espécies de mosquitos vetores e avaliar a relação entre os diferentes tipos de uso e cobertura do solo e a composição da fauna de culicídeos. As coletas ocorreram quinzenalmente entre outubro de 2012 a março de 2013 com a utilização de armadilhas de oviposição instaladas em oito áreas verdes com diferentes características de paisagem do município de Porto Alegre, sul do Brasil. Foram coletados 4179 culicídeos de pelo menos 10 espécies. Destas, Aedes albopictus e Limatus durhami foram eudominante/dominantes, juntos representando 90% do total de indivíduos. Esse estudo foi o primeiro registro de ocorrência de Sabethes albiprivus e Li. durhami em Porto Alegre. As espécies de culicídeos demonstraram responder de maneira diversa aos tipos de uso e cobertura do solo, indicando que as afinidades mais evidentes se mantém nas três escalas avaliadas. A abundância relativa de Ae. albopictus foi relacionada às áreas verdes mais urbanizadas, enquanto a de Li. durhami, Haemagogus leucocelaenus e Toxorhynchites sp., à presença da mata nativa. A ocorrência de Aedes aegypti não demonstrou ser influenciada pelo tipo de uso e cobertura do solo. Foram coletadas três espécies relacionadas à transmissão de febre amarela, febre chikungunya e dengue, Ae. albopictus, Hg. leucocelaenus e Ae. aegypti e verificada a ocorrência simultânea dessas em algumas áreas, o que pode representar a oportunidade para o surgimento de surtos epidêmicos e a mudança do perfil epidemiológico dessas doenças. / Urban green areas can offer opportunity for interactions between reservoirs and vectors of urban and wild environments, increasing the risk of disease transition and changes in their epidemiological profile. The understanding of how changes in the landscape affect the composition of culicid fauna and which vector species occur in these areas may help and prediction the spatial distribution of the species along urbanized areas, providing important tools to control endemic disease. This study aimed to verify the occurrence of mosquito vector species and to evaluate the relationship between different types of land cover and land use with the composition of Culicidae fauna. Sampling occurred biweekly, from October 2012 to March 2013, where oviposition traps were installed in eight green areas with different landscape traits, in Porto Alegre, Southern Brazil. 4179 mosquitoes belonging to et least ten species were sampled. Aedes albopictus and Limatus durhami were eudominants/dominant representing together 90% of total individuals. This is the first report of Sabethes albiprivus and Li. durhami occurrence in Porto Alegre. The mosquitos species responded differently to types of land use cover and land use, indicating that the most obvious affinities are maintained in three scales evaluated. The relative abundance of Ae. albopictus was related to the more urbanized green area, while the abundance of Li. durhami , Haemagogus leucocelaenus and Toxorhynchites sp., was related to the presence of preserved areas. The occurrence of Aedes aegypti was not influenced by land use and land cover. Three species related to dengue, chikungunya and yellow fever transmission were sampled, Ae. albopictus, Hg. leucocelaenus and Ae. aegypti. We also verified the simultaneous occurrence of these species, which may represent an opportunity of changes in the epidemiologic of these diseases.

Rondônia apresenta área com rica diversidade de artrópodes, porém pouco se conhece sobre a transmissão de arbovírus por estas espécies. O presente trabalho visou detectar arbovírus, por meio da RT-PCR e da Duplex RT-PCR, nas espécies de dipteros coletados no Estado, bem como caracterizá-los pela reação de sequenciamento. A RT-PCR e a Duplex RT-PCR detectaram as suspensões dos vírus Mayaro e Oropouche até 104 e 101 TCID50/mL, respectivamente, porém o vírus Dengue 2 em pools contendo menos de três mosquitos infectados foi negativa. O controle endógeno foi detectado em 66,8 % das amostras, sendo que, em pools contendo entre um e três mosquitos, a detecção foi aproximadamente metade da detecção nos pools contendo entre 11 e 15. Em 0,66 % dos pools foi encontrado o vírus Oropouche e em outros 0,66 %, o vírus Cacipacoré. O vírus Oropouche foi detectado em Coquillettidia sp. e Deinocerites sp., enquanto o vírus Cacipacoré foi encontrado em Anopheles sp. e Culex sp. As técnicas possibilitaram a detecção dos arbovírus pesquisados nos pools coletados em Rondônia. / The Rondônia state has an area with rich arthropods diversity although the knowledge about the arboviruses transmition for these species is poor. The present work aimed to detect arboviruses through RT-PRC and RT-PCR Duplex in the diptera species collected in the region as well as their characterization through the sequence reaction. The RT-PRC and RT-PCR Duplex detected the Mayaro and Oropouche virus suspensions until 104 e 101 TCID50/mL respectively, although it was negative for the Dengue 2 virus in pools containing less than three infected mosquitoes. The endogenous control was detected in 66,8 % of samples and from pools containing from one to three mosquitoes the detection rate was approximately half from that obtained from pools with 11 to 15 mosquitoes. Oropouche virus was found in 0,66 % of pools and Cacipacore virus also in 0,66 % of pools. Oropouche virus was detected in Coquillettidia sp. and Deinocerites sp. while Cacipacoré virus was found in Anopheles sp. and Culex sp. The techniques allowed the detection of examined arboviruses in the pools collected from Rondonia.

Wolbachia pipientis é uma alfa-protobactéria intracelular obrigatória, endossimbionte de artrópodes e nematódeos que é herdada por via materna ao longo das gerações. A presença desta bactéria nos tecidos germinativos pode provocar nos hospedeiros alterações fenotípicas reprodutivas, como partenogênese, feminização genética de machos, morte de machos, incompatibilidade citoplasmática (IC) e alterações de fitness. Alguns mecanismos moleculares dessas alterações baseiam-se na modulação da expressão gênica do hospedeiro, ou seja, a bactéria pode suprimir ou estimular genes de forma a produzir ambiência favorável à manutenção da endossimbiose. Devido a esse potencial manipulador, Wolbachia tem sido testada como \"ferramenta\" para controle populacional de insetos vetores de patógenos. O mosquito Culex quinquefasciatus, naturalmente infectado por Wolbachia na região Neotropical, é um importante vetor de diversos patógenos que atingem humanos e animais. A presença da bactéria causa IC e altera o fitness no mosquito, mediante alterações temporais na ovogênese, fecundidade e fertilidade reprodutivas. Sabe-se que a presença da Wolbachia altera a expressão do gene grauzone e há fortes indícios de que esta expressão diferencial induza à IC em Cx. quinquefasciatus. Sabe-se também que este gene possui duas cópias parálogas em Cx. quinquefasciatus, porém estudos observaram a relevância de apenas um parálogo como importante regulador dos ciclos celulares da ovogênese e espermatogênese. No entanto, as bases genéticas dos fenótipos IC e \"fitness alterado\" do modelo Wolbachia-Cx. quinquefasciatus Neotropical ainda permanecem desconhecidas. Objetivamos inicialmente neste modelo quantificar e silenciar a expressão do gene grauzone (ambos parálogos) para suportar a hipótese pré-existente de que a superexpressão deste gene em mosquitos infectados por Wolbachia causa as alterações fenotípicas reprodutivas. Durante o desenvolvimento do projeto houve intercorrências que alteraram o rumo do trabalho: a necessidade de substituição da colônia experimental de mosquitos devido a baixas demográficas e à alta variabilidade intraespecífica do gene grauzone. Frente às intercorrências, formulamos como neo-objetivo a comparação filogenética entre as variantes do gene grauzone. Detectamos também variabilidade em um dos parálogos e concluímos que as cópias parálogas do gene encerram proteínas estruturalmente distintas e talvez funcionalmente distintas no tocante à alteração reprodutiva (IC) causada pela presença da Wolbachia. Foi possível observar que fêmeas infectadas apresentam amplificações de grauzone mais intensas quando comparadas com fêmeas não-infectadas no 4° dia de emergência, corroborando dados da literatura. Em conjunto, esses achados indicam que é promissora a continuidade do estudo do papel de grauzone na IC, mas demonstra também que este gene é mais complexo do que se imaginava, o que demandará maior esforço investigativo. A expectativa de uso futuro de Wolbachia como controlador biológico de mosquitos-vetores poderá se beneficiar de estudos como aqui proposto. / Wolbachia pipientis is an obligate intracellular alpha-protobacterium, endosymbiont of arthropods and nematodes, which is inherited through maternal route over generations. The presence of this bacterium in germinative tissues can cause reproductive phenotypic alterations in the hosts, such as parthenogenesis, genetic feminization of males, death of males, cytoplasmic incompatibility (CI) and fitness changes. Some molecular mechanisms of these alterations are based on the modulation of gene expression of the host, that is, the bacterium can suppress or stimulate genes in order to produce favorable environment for the maintenance of the endosymbiosis. Due to this potential manipulator, Wolbachia has been tested as a \"tool\" for population control of pathogen vector insects. The mosquito Culex quinquefasciatus, naturally infected by Wolbachia in the Neotropical region, is an important vector of several pathogens that affect humans and animals. The presence of the bacteria causes CI and changes the fitness in the mosquito, through temporal changes in ovogenesis, reproductive fertility and fertility. The presence of Wolbachia is known to alter the expression of the grauzone gene and there are strong indications that this differential expression induces the CI in Cx. quinquefasciatus. It is known that this gene occurs with two paralogs copies in Cx. quinquefasciatus, but studies have observed the relevance of only one paralog as important regulator of oogenesis and spermatogenesis cell cycles. However, the genetic basis of the phenotypes \"changed fitness\" and CI of Wolbachia-Cx quinquefasciatus Neotropical model remain unknown. We initially aimed at quantifying and knockdown of grauzone gene (both paralogs) to support the preexisting hypothesis that overexpression of this gene in Wolbachia-infected mosquitoes causes reproductive phenotypic changes. During the development of the project there were intercurrences that altered the course of work: the need to replace mosquito populations due to demographic lows and the high intraspecific variability of grauzone gene. In view of the intercurrences we formulated the neo-objective phylogenetic comparison between the variants of the grauzone gene. We also detected variability in one of the paralogs and concluded that the paralogs copies of the gene contain structurally distinct and perhaps functionally distinct proteins with respect to the reproductive alteration (CI) caused by the presence of Wolbachia. It was possible to observe that infected females show more intense grauzone amplifications when compared to uninfected females on the 4th day of emergence, corroborating data from the literature. Taken together, these findings indicate that the continuity of the study of the role of grauzone in CI is promising, but also demonstrates that this gene is more complex than previously thought, which will require more investigative effort. The expectation of future use of Wolbachia as a biological control of mosquito-vectors may benefit from studies as proposed here.