O propósito deste trabalho foi o de elaborar uma revisão com o objetivo de avaliar a importância epidemiológica de Culex subgen. Melanoconion (Diptera, Culicidae). A análise de informações sobre sistemática e distribuição geográfica, mostrou tratar-se de um taxon composto de uma grande diversidade de espécies e amplamente distribuído através do continente americano. Ao se levantar aspectos relativos às propriedades bioecológicas desses mosquitos, ficou evidente que algumas espécies são dotadas de características favoráveis ao desempenho da função vetora. Dados sobre isolamentos de uma ampla variedade de vírus desses culicídeos, indicaram tratar-se de um grupo potencialmente importante em saúde pública. No Estado de São Paulo, sua importância se evidencia por serem freqüentes no Vale do Ribeira, região que parece comportar muitos vírus. Assim sendo, é possível que algumas espécies possam atuar na manutenção de focos naturais de infecção nessa área. / The aim of this study is to evaluate the epidemiological importance of the Culex subgen. Melanoconion (Diptera, Culicidae), through a review of literature. Informations on systematic and geographic distribution show that the taxon in comprised of several species and it is widely distributed on the American Continent. In the analysis of the bioecological aspects of these mosquitos it is evident that some of the species have the appropriate characteristics to develope the functions of a vector. Several species of virus have been isolated from these culicids and that indicate their potential importance in Public Health. In Vale do Ribeira, State of São Paulo this importance is evident because a large number of virus has been isolatedin this area, and it is possible that species of culicids have a role in the maintenance of natural focuses of infection there.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2015-11-16T10:37:27Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1515494 bytes, checksum: bd156721affe3babff6b245f7cc1e560 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-16T10:37:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1515494 bytes, checksum: bd156721affe3babff6b245f7cc1e560 (MD5) Previous issue date: 2015-07-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Na maioria das espécies de mosquitos, as fêmeas precisam se alimentar do sangue de vertebrados para completar o desenvolvimento de seus ovos. No entanto, em mosquitos do gênero Toxorhynchites, os ovos se desenvolvem sem a dieta de sangue, e ambos, fêmeas e machos desse gênero se alimentam exclusivamente de substâncias açucaradas. O intestino médio é um órgão bem conhecido nos mosquitos que se alimentam de sangue, mas pouco se sabe a seu respeito em mosquitos não-hematófagos. No presente trabalho, foi investigada a morfologia detalhada do intestino médio de Toxorhynchites theolbadi utilizando-se métodos histoquímicos e ultraestruturais. O intestino médio de fêmeas e machos adultos de T. theobaldi consiste em um longo e fino do intestino médio anterior (AMG), e um curto e dilatado intestino médio posterior (PMG). O AMG é subdividido em AMG1 (curto, com pregas) e AMG2 (longo, sem pregas). Ramificações neuronais e células enteroendócrinas estão presentes no AMG e PMG, respectivamente. Em comparação com o PMG de mosquitos-fêmeas que se alimentam de sangue, o PMG de T. theobaldi é menor; no entanto, em ambos os mosquitos, o PMG parece ser a principal região de digestão e absorção de alimentos, e secreção de proteínas. As pregas presentes no AMG de T. theobaldi não foram relatadas em outros mosquitos; no entanto, a organização muscular do intestino médio e o controle endócrino do processo digestivo são conservados em ambos T. theobaldi e mosquitos hematófagos. / In most mosquito species, the females require a blood-feeding for complete egg development. However, in Toxorhynchites mosquitoes, the eggs develop without blood- feeding, and both females and males exclusively feed on sugary diets. The midgut is a well-understood organ in blood-feeding mosquitoes, but little is known about it in non- blood-feeding ones. In the present study, the detailed morphology of the midgut of Toxorhynchites theobaldi was investigated using histochemical and ultrastructural methods. The midgut of female and male T. theobaldi adults consists of a long, slender anterior midgut (AMG), and a short, dilated posterior midgut (PMG). The AMG is subdivided into AMG1 (short, with folds) and AMG2 (long, without folds). Nerve branches and enteroendocrine cells are present in AMG and PMG, respectively. Compared with the PMG of blood-feeding female mosquitoes, the PMG of T. theobaldi is smaller; however, in both mosquitoes, PMG seems be the main region of food digestion and absorption, and protein secretion. The epithelial folds present in the AMG of T. theobaldi have not been reported in other mosquitoes; however, the midgut muscle organization and endocrine control of the digestion process are conserved in both T. theobaldi and blood-feeding mosquitoes.

Rondônia apresenta área com rica diversidade de artrópodes, porém pouco se conhece sobre a transmissão de arbovírus por estas espécies. O presente trabalho visou detectar arbovírus, por meio da RT-PCR e da Duplex RT-PCR, nas espécies de dipteros coletados no Estado, bem como caracterizá-los pela reação de sequenciamento. A RT-PCR e a Duplex RT-PCR detectaram as suspensões dos vírus Mayaro e Oropouche até 104 e 101 TCID50/mL, respectivamente, porém o vírus Dengue 2 em pools contendo menos de três mosquitos infectados foi negativa. O controle endógeno foi detectado em 66,8 % das amostras, sendo que, em pools contendo entre um e três mosquitos, a detecção foi aproximadamente metade da detecção nos pools contendo entre 11 e 15. Em 0,66 % dos pools foi encontrado o vírus Oropouche e em outros 0,66 %, o vírus Cacipacoré. O vírus Oropouche foi detectado em Coquillettidia sp. e Deinocerites sp., enquanto o vírus Cacipacoré foi encontrado em Anopheles sp. e Culex sp. As técnicas possibilitaram a detecção dos arbovírus pesquisados nos pools coletados em Rondônia. / The Rondônia state has an area with rich arthropods diversity although the knowledge about the arboviruses transmition for these species is poor. The present work aimed to detect arboviruses through RT-PRC and RT-PCR Duplex in the diptera species collected in the region as well as their characterization through the sequence reaction. The RT-PRC and RT-PCR Duplex detected the Mayaro and Oropouche virus suspensions until 104 e 101 TCID50/mL respectively, although it was negative for the Dengue 2 virus in pools containing less than three infected mosquitoes. The endogenous control was detected in 66,8 % of samples and from pools containing from one to three mosquitoes the detection rate was approximately half from that obtained from pools with 11 to 15 mosquitoes. Oropouche virus was found in 0,66 % of pools and Cacipacore virus also in 0,66 % of pools. Oropouche virus was detected in Coquillettidia sp. and Deinocerites sp. while Cacipacoré virus was found in Anopheles sp. and Culex sp. The techniques allowed the detection of examined arboviruses in the pools collected from Rondonia.

Objetivo. Conhecer os aspectos ecológicos e biológicos da população de Mansonia humeralis em área sob impacto de inundação da Represa Porto Primavera, Município de Presidente Epitácio, Estado de São Paulo, Brasil, visando contribuir no entendimento da capacidade vetora desta população. A dominância dessa população entre outras espécies de culicídeos, que compõem a fauna local, representa preocupação em saúde pública, diante da possibilidade de transmissão de agentes patogênicos e de incômodo à população humana. Métodos. No sítio JB, culicídeos adultos foram coletados mensalmente por 15 meses, em cada um dos períodos anterior e posterior às duas inundações da Represa Porto Primavera, e por 24 meses após a 2ª inundação, na fazenda Santo Antônio. As técnicas de coleta utilizadas foram Aspiração pela manhã, Técnica Atrativa Humana de 24 horas, Armadilha de Shannon, Armadilha CDC e Técnica Atrativa Humana em torno do crepúsculo vespertino. Foram levadas em conta as influências de temperatura e chuva na variabilidade temporal da população estudada. Para a análise do impacto ambiental na população de Ma. humeralis foram utilizados índices de riqueza, diversidade, dominância, abundância e similaridade, testes estatísticos paramétricos, não paramétricos e correlação. Para a atividade hematofágica horária foi calculada a média de Williams, para a dispersão do raio de vôo a média harmônica e o modelo de regressão linear simples e para a paridade o qui-quadrado. Resultados. No sítio JB, no período do pré-impacto, Ma. humeralis representou 3,1%. No período pós-impacto após a 1ª inundação Ma. humeralis representou 59,6% e após a 2ª inundação 53,8%, indicando expressiva dominância dessa espécie e redução da riqueza e diversidade dos outros culicídeos. Houve maior densidade populacional de Ma. humeralis no outono e inverno no pré-enchimento, no inverno e na primavera após a 1ª inundação e na primavera após a 2ª inundação. Ma. humeralis posicionou-se entre as espécies mais abundantes e foi similar na fauna do período pós-impacto. A atividade hematofágica de Ma. humeralis foi nas 24 horas, mas de maior freqüência no intervalo do 1º pós-crepúsculo e das 18:00 às 24:00 horas. Na fazenda Santo Antônio a maior densidade populacional de Ma. humeralis ocorreu no verão e na primavera e as médias de riqueza, diversidade e dominância foram próximas aos valores encontrados no pré-enchimento do sítio JB, com a Armadilha de Shannon no crepúsculo vespertino. Em relação a paridade Ma. humeralis apresentou mais fêmeas oníparas no outono. Ma. humeralis apresentou baixa dispersão no raio de vôo. Conclusões. Com a construção da Usina Hidrelétrica de Porto Primavera e o represamento do Rio Paraná, estudos realizados em Presidente Epitácio, na margem esquerda do mesmo e do Rio do Peixe, mostraram redução na diversidade e riqueza da fauna adulta Culicidae, vista pela aplicação de diferentes técnicas de coleta. A dominância de Ma. humeralis mostrou que o impacto ambiental ocorrido na área favoreceu seu desenvolvimento indicado pela sua abundância e sua permanência na fauna similar, após a inundação. As densidades mais elevadas para Ma. humeralis, associada as plantas aquáticas, parece estar ligada com as águas renováveis dos grandes reservatórios. Evidenciou-se tendência antropofílica e atividades hematofágicas predominantemente crepuscular e noturna para Ma. humeralis. A baixa dispersão no raio de vôo encontrada em Ma. humeralis, não permite concluir que esta população não se dispersaria para maiores distâncias em busca de fontes sangüíneas. É relevante o monitoramento de certas populações de culicídeos favorecidas pela formação de represas, uma vez que há exposição freqüente do homem às margens dos rios, devido às atividades de pesca, caça, lazer e moradia. / Objective. To assess the ecological and biological aspects of the population of Mansonia humeralis, in area under the Porto Primavera Dam flooding impact, Presidente Epitácio municipality, São Paulo State, Brazil, in order to understand the vector capacity of this population. This population dominance over other Culicidae species that constitute the local fauna represents public health concern because of the possibility of transmission of pathogenic agents and nuisance to human populations. Methods. In the JB Ranch adults Culicidae were monthly captured for 15 months, on each of the previous and posterior periods of the two flooding events of the Porto Primavera Dam, and for the 24 months after the second flooding in the Santo Antônio Farm. Captures were undertaken by morning Aspiration, Human Attraction Technique for 24 hours, Shannon traps, CDC light traps and Human Attraction Technique near sunset. Temperature and rainfall were accounted for temporal variation of the studied population. To environmental impact analysis on Ma. humeralis population richness, diversity, dominance, abundance and similarity, indexes and parametric and non-parametric statistics and correlation were used, blood feeding time activity was calculated by the Williams\' Mean, harmonic mean and simple linear regression model to flight range dispersal were used and to parity, chi-square was used. Results. In the JB Ranch, on the pre-impact period, Ma. humeralis represented 3.1%. After the first flooding Ma. humeralis represented 59.6% and after the second flooding it represented 53.8%, indicating significative dominance of this species and richness and diversity reduction of other Culicidae. Larger population densities of Ma. humeralis were found in the autumn and winter on the pre-filling of the Dam, in the winter and the spring after the first flooding and in the spring after the second flooding. Ma. humeralis was among the more abundant species and was similar on the fauna post-impact period. Blood feeding time activity of Ma. humeralis was practically of 24 hours, but its higher frequency was on the first post-crepuscular interval and on the 18:00 to 24:00 hours interval. In the Santo Antônio Farm, the largest populational density of Ma. humeralis occurred in the summer and in the spring and the means for species diversity, richness and dominance were close to the values found in the pre-filling in the JB Ranch, with captures undertaken by Shannon traps during sunset. As for parity, more parous females were found in the autumn. Ma. humeralis presented low flight radius dispersal. Conclusions. The construction of the Porto Primavera Hydroelectric Power Plant and the dam of the Paraná River, in the studies conducted in Presidente Epitácio, on the left margin of this river and the Peixe River, presented a reduction on the diversity and richness of the Culicidae fauna undertaken by different capture techniques. The dominance of Ma. humeralis showed that the environmental impact on the area supported its development as indicated by its abundance and permanence on the similar fauna, after the two flooding events. The highest densities of Ma. humeralis, associated with aquatic plants, seems to be connected with the renewable waters of the great reservoirs. Ma. humeralis showed a tendency to anthropophily, with the blood feeding activity preferably at sunset and at night. The low flight dispersal, does not allow to conclude if Ma. humeralis would not fly higher distances in search of blood sources. It is relevant to monitor some Culicidae populations favoured by dam constructions, once there is frequent man exposition on the rivers\' edges, due to fishing activities, hunting, leisure and dwelling.

Introdução: O mosquito Aedes fluviatilis é um culicídeo encontrado abundantemente pela Cidade de São Paulo, como mostram recentes levantamentos faunísticos em parques municipais. Estas ilhas verdes localizadas na malha urbana da metrópole possuem a capacidade de manter ciclos biológicos de muitos organismos, alguns deles, causadores de doenças. Embora o Aedes fluviatilis não esteja relacionado até o presente momento a doenças que atingem o homem, possui biologia, ecologia, capacidade vetora e padrões populacionais ainda pouco conhecidos. Com a intenção de agregar conhecimento sobre o perfil populacional desta espécie de culicídeo, foi utilizada a ferramenta da morfometria geométrica alar. Objetivos: (1) Avaliar a efetividade da morfometria geométrica alar na descrição das populações de machos e fêmeas de Ae. fluviatilis; (2) Verificar a existência de dimorfismo sexual; (3) Verificar a variabilidade fenotípica das populações e o grau de similaridade na estruturação populacional de cada gênero sexual do mosquito Aedes fluviatilis, no município de São Paulo. Material e Métodos: Foram utilizados 18 marcos anatômicos para determinar a geometria da asa. As variáveis de tamanho e forma foram utilizadas para mensurar o grau de dimorfismo sexual e estruturação populacional dessa espécie, cujos exemplares foram coletados em oito parques urbanos do município de São Paulo. Resultados: Através da variável da forma alar, foi possível determinar o dimorfismo sexual existente em Aedes fluviatilis. A conformação diferenciada das populações aponta para heterogeneidade em machos e homogeneidade em fêmeas. Discussão: Variações ambientais, muitas vezes proporcionadas pela ação do homem, ou hábitos ecológicos, podem direcionar a variabilidade da forma alar de diferentes maneiras em machos e fêmeas. A homogeneidade das populações de fêmeas, como evidenciado em trabalhos anteriores, pode ser um indicativo de rápida adaptação ao meio urbano, enquanto em machos a existência de diferentes padrões pode apontar para algum grau de fluxo gênico. Conclusões: Os padrões de variabilidade alar encontrados em fêmeas e machos sugerem que as pressões ambientais agem de forma distinta para cada gênero. A característica de homogeneidade populacional encontrada nas fêmeas indica a rápida adaptabilidade ao meio urbano, em concordância com outros estudos que apontam para baixo grau de fluxo gênico nesta espécie. A diferente conformação nos machos sugere estudos para a melhor compreensão dos mecanismos que modulam a evolução alar. / The mosquito Aedes fluviatilis is a culicid found abundantly in São Paulo City as shown by recent fauna survey in park\'s city. These green islands located in urban environment have the ability to maintain the life cycle of the many organisms, some of them cause disease or carry etiologic agents. The Ae. fluviatilis, although not incriminated to transmit pathogens to humans, their biology, ecology, vector capacity and population patterns is little known. With the intention of adding knowledge about the population profile of this culicid specie, was used wing morphometric tool. Objectives: (1) Evaluate the effectiveness of wing morphometric for description of the population of males and females of Ae. fluviatilis (2) Check sexual dimorphism in this specie (3) Check the phenotypic variability of the population and the degree of similarity in population structure for each sexual gender of the Ae. fluviatilis in São Paulo urban parks. Methods: Were utilized 18 anatomical landmarks to determine the geometric morphometric of the wing. The size and shape variables were used to measure the degree of sexual dimorphism and population patterns of Ae. fluviatilis collected in 8 urban parks in São Paulo City. Results: Through the wing shape variably, it was possibly to determine sexual dimorphism in Ae. fluviatilis, and different conformation of the population can appoint to heterogeneity in male\'s population and homogeneity in female\'s population. Discussion: Environmental variations, often provided by man or ecological habits can direct the variability of wing shape differently in males and females. The homogeneity of the female\'s population may be indicative rapid adaptation to urban areas, while in males the existence of different patterns of wing shape, may indicative some level of the gene flow. Conclusions: The variability of wing shape founded in males and females suggest that environmental pressures act differently for each gender. The characteristic of population homogenization in females suggest a rapid adaptability to the urban environment, in concordance with other works about low gene flow in this specie. The different conformation in males show the necessity of the studies to better understand the mechanisms involved in the wing evolution.

Lacase 2 é um gene com função majoritária na esclerotinização e pigmentação da cutícula corporal em insetos e evidências sugerem que desenvolva função na esclerotinização do córion dos ovos de mosquitos vetores de patógenos. A literatura registra que quando a expressão do gene é silenciada em adultos de Aedes albopictus suas fêmeas produzem ovos hialinos e inviáveis. Em teoria, este seria um bom gene-candidato à manipulação em iniciativas de controle biológico baseada em organismos geneticamente modificados. No presente estudo, caracterizamos o perfil expressional e a atividade enzimática de lacase 2 durante o desenvolvimento de Aedes aegypti, bem como silenciamos transcritos do gene em fêmeas adultas para testar se havia prejuízo na formação do córion dos ovos. A técnica de RT-PCR não foi sensível suficiente para detectar amplificação do gene lacase 2 em larvas, contudo, detectamos amplificação nos outros estágios de vida. Pupas e fêmeas adultas após repasto sanguíneo apresentaram perfis de expressão similares entre si. Com a técnica de detecção de atividade enzimática por fluorescência foi possível determinar o perfil de atividade enzimática de lacase 2 e o pH ótimo em todos estágios de desenvolvimento. O maior pico de atividade foi registrado em fêmeas adultas 32 horas após repasto sanguíneo. A atividade enzimática de lacase 2 foi confirmada após separação cromatográfica na amostra de fêmeas adultas 24 horas após repasto sanguíneo. Ambas técnicas, RT-PCR e detecção de atividade enzimática, apontam para maior produção de lacase 2 após repasto sanguíneo em fêmeas adultas, denotando sua importância no desenvolvimento do ovo. Para realização dos experimentos de silenciamento de transcritos foram sintetizados RNAs dupla-fita de lacase 2 e da proteína MSP1, utilizado como controle negativo do silenciamento. Ambos RNAs dupla-fita foram microinjetados em três concentrações, 20ng, 200ng e 1700ng, isoladamente em três grupos experimentais de fêmeas de Ae. aegypti. Em todos os experimentos não houve diferença morfológica entre os ovos das fêmeas microinjetadas com RNA dupla-fita de lacase 2 e MSP1. Os ovos dos grupos experimento e controle iniciaram a pigmentação cerca de 30 minutos após a postura. Entretanto, foram observados alguns ovos com início de pigmentação tardio no grupo experimento no lote de fêmeas microinjetadas com 200ng. Este fenômeno pareceu ter sido um incipiente do silenciamento de transcritos de lacase 2. O efeito da inserção do RNA dupla-fita de lacase 2 não resultou no mesmo efeito reportado na literatura para Ae. albopictus. Ainda assim, os resultados obtidos neste trabalho corroboram a hipótese de que lacase 2 desempenhe alguma função no desenvolvimento do ovo em mosquitos. / Laccase 2 is a gene with major role in body cuticle tanning in insects and evidences suggest laccase 2 may play a role in egg chorion tanning in mosquitoes vectors of pathogens. When the expression of the gene is knocked down in adults of Aedes albopictus their females produce hyaline and inviable eggs. Theoretically, this gene would be a good candidate for manipulation in the context of biological control of vectors based on genetically modified organisms. In the present study, we characterized the expressional profile and enzymatic activity of laccase 2 during the development of Aedes aegypti. We also knocked down the gene in adult females hypothesizing that this could jeopardize egg chorion formation. The RT-PCR technique was not sensitive to detect laccase 2 amplification in larvae, however, we detected amplification in other life stages. Pupae and adults females after blood meal exhibited equivalent expressional profiles. Using the technique of enzymatic activity detection by fluorescence, it was possible to determine the laccase 2 enzymatic activity profile and the optimum pH in all stages of development. The highest activity peak was registered in adult females 32 hours after blood meal. The laccase 2 enzymatic activity was confirmed by chromatographic separation in the adults females 24 hours after blood meal sample. Both techniques (RT-PCR and enzymatic activity detection) point to a higher production of laccase 2 after blood meal in adult females, suggesting the importance of laccase 2 for egg development. For the knocking down experiments we synthesized double-stranded RNA of laccase 2 and protein MSP1 (negative control). Both double-stranded RNAs were injected at three concentrations, 20ng, 200ng and 1700ng, in three experimental groups of Ae. aegypti females. No significant morphological differences between eggs from females injected with laccase 2 and MSP1 double-stranded RNA were observed. Pigmentation of the eggs started 30 minutes after they were laid (experimental and control group). However, the pigmentation started slightly later in those eggs of experiment females injected with 200ng. This apparent developmental delay may be related to the silencing of laccase 2. The effect of insertion of double-stranded RNA of laccase 2 did not result in the same effect reported in the literature for Ae. albopictus. Even so, the results obtained in this study corroborate the hypothesis that laccase 2 plays a role in egg development in mosquitoes.

Wolbachia pipientis é uma alfa-protobactéria intracelular obrigatória, endossimbionte de artrópodes e nematódeos que é herdada por via materna ao longo das gerações. A presença desta bactéria nos tecidos germinativos pode provocar nos hospedeiros alterações fenotípicas reprodutivas, como partenogênese, feminização genética de machos, morte de machos, incompatibilidade citoplasmática (IC) e alterações de fitness. Alguns mecanismos moleculares dessas alterações baseiam-se na modulação da expressão gênica do hospedeiro, ou seja, a bactéria pode suprimir ou estimular genes de forma a produzir ambiência favorável à manutenção da endossimbiose. Devido a esse potencial manipulador, Wolbachia tem sido testada como \"ferramenta\" para controle populacional de insetos vetores de patógenos. O mosquito Culex quinquefasciatus, naturalmente infectado por Wolbachia na região Neotropical, é um importante vetor de diversos patógenos que atingem humanos e animais. A presença da bactéria causa IC e altera o fitness no mosquito, mediante alterações temporais na ovogênese, fecundidade e fertilidade reprodutivas. Sabe-se que a presença da Wolbachia altera a expressão do gene grauzone e há fortes indícios de que esta expressão diferencial induza à IC em Cx. quinquefasciatus. Sabe-se também que este gene possui duas cópias parálogas em Cx. quinquefasciatus, porém estudos observaram a relevância de apenas um parálogo como importante regulador dos ciclos celulares da ovogênese e espermatogênese. No entanto, as bases genéticas dos fenótipos IC e \"fitness alterado\" do modelo Wolbachia-Cx. quinquefasciatus Neotropical ainda permanecem desconhecidas. Objetivamos inicialmente neste modelo quantificar e silenciar a expressão do gene grauzone (ambos parálogos) para suportar a hipótese pré-existente de que a superexpressão deste gene em mosquitos infectados por Wolbachia causa as alterações fenotípicas reprodutivas. Durante o desenvolvimento do projeto houve intercorrências que alteraram o rumo do trabalho: a necessidade de substituição da colônia experimental de mosquitos devido a baixas demográficas e à alta variabilidade intraespecífica do gene grauzone. Frente às intercorrências, formulamos como neo-objetivo a comparação filogenética entre as variantes do gene grauzone. Detectamos também variabilidade em um dos parálogos e concluímos que as cópias parálogas do gene encerram proteínas estruturalmente distintas e talvez funcionalmente distintas no tocante à alteração reprodutiva (IC) causada pela presença da Wolbachia. Foi possível observar que fêmeas infectadas apresentam amplificações de grauzone mais intensas quando comparadas com fêmeas não-infectadas no 4° dia de emergência, corroborando dados da literatura. Em conjunto, esses achados indicam que é promissora a continuidade do estudo do papel de grauzone na IC, mas demonstra também que este gene é mais complexo do que se imaginava, o que demandará maior esforço investigativo. A expectativa de uso futuro de Wolbachia como controlador biológico de mosquitos-vetores poderá se beneficiar de estudos como aqui proposto. / Wolbachia pipientis is an obligate intracellular alpha-protobacterium, endosymbiont of arthropods and nematodes, which is inherited through maternal route over generations. The presence of this bacterium in germinative tissues can cause reproductive phenotypic alterations in the hosts, such as parthenogenesis, genetic feminization of males, death of males, cytoplasmic incompatibility (CI) and fitness changes. Some molecular mechanisms of these alterations are based on the modulation of gene expression of the host, that is, the bacterium can suppress or stimulate genes in order to produce favorable environment for the maintenance of the endosymbiosis. Due to this potential manipulator, Wolbachia has been tested as a \"tool\" for population control of pathogen vector insects. The mosquito Culex quinquefasciatus, naturally infected by Wolbachia in the Neotropical region, is an important vector of several pathogens that affect humans and animals. The presence of the bacteria causes CI and changes the fitness in the mosquito, through temporal changes in ovogenesis, reproductive fertility and fertility. The presence of Wolbachia is known to alter the expression of the grauzone gene and there are strong indications that this differential expression induces the CI in Cx. quinquefasciatus. It is known that this gene occurs with two paralogs copies in Cx. quinquefasciatus, but studies have observed the relevance of only one paralog as important regulator of oogenesis and spermatogenesis cell cycles. However, the genetic basis of the phenotypes \"changed fitness\" and CI of Wolbachia-Cx quinquefasciatus Neotropical model remain unknown. We initially aimed at quantifying and knockdown of grauzone gene (both paralogs) to support the preexisting hypothesis that overexpression of this gene in Wolbachia-infected mosquitoes causes reproductive phenotypic changes. During the development of the project there were intercurrences that altered the course of work: the need to replace mosquito populations due to demographic lows and the high intraspecific variability of grauzone gene. In view of the intercurrences we formulated the neo-objective phylogenetic comparison between the variants of the grauzone gene. We also detected variability in one of the paralogs and concluded that the paralogs copies of the gene contain structurally distinct and perhaps functionally distinct proteins with respect to the reproductive alteration (CI) caused by the presence of Wolbachia. It was possible to observe that infected females show more intense grauzone amplifications when compared to uninfected females on the 4th day of emergence, corroborating data from the literature. Taken together, these findings indicate that the continuity of the study of the role of grauzone in CI is promising, but also demonstrates that this gene is more complex than previously thought, which will require more investigative effort. The expectation of future use of Wolbachia as a biological control of mosquito-vectors may benefit from studies as proposed here.

INTRODUÇÃO: O subgrupo Anopheles strodei é pouco estudado apesar de sua importância epidemiológica potencial. Espécies desse subgrupo foram encontradas naturalmente infectadas por parasitos que causam malária em humanos, Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax e Plasmodium malariae, no Brasil. O subgrupo Anopheles strodei compreende oito espécies: An. rondoni (Neiva & Pinto), An. albertoi Unti, An. arthuri Unti, An. strodei Root, An. strodei CP, e três outras espécies que foram propostas por Bourke et al. (2013), mas não foram descritas: An. arthuri B, An. arthuri C e An. arthuri D. OBJETIVOS: A definição e delimitação precisa de espécies que atuam como vetores de agentes infecciosos é um dos objetivos da entomologia da saúde pública. Os objetivos deste estudo foram: 1) Estabelecer as relações filogenéticas entre espécies do Subgrupo Strodei; 2) Estimar a distribuição espacial potencial das espécies do Subgrupo Strodei; 3) Confirmar a presença de quatro espécies sob o nome An. arthuri. MÉTODOS: Sequências de DNA de um gene mitocondrial (fragmento de 658 pares de bases do código de barras do gene COI, citocromo oxidase subunidade I) e de três genes nucleares codificadores de proteínas (White, CAD e CAT) foram empregadas para estabelecer as relações filogenéticas potenciais entre as espécies que compõe o subgrupo An. strodei. As análises filogenéticas foram conduzidas utilizando abordagem Bayesiana das sequências de DNA dos quatro genes. Para estabelecer a distribuição espacial potencial das espécies, utilizou-se abordagem de máxima entropia de nichos ecológicos. Para isso as localidades das coletas, juntamente com os dados climáticos e geográficos foram introduzidos no programa MAXENT. RESULTADOS: Os resultados das análises filogenéticas demonstraram e, portanto, confirmaram o monofiletismo do Subgrupo Strodei, a presença de pelo menos sete espécies sob o nome An. strodei, ou seja, corroborou a validade de An. albertoi, An. arthuri, An. strodei, An. strodei CP, além das espécies denominadas, preliminarmente, como An. arthuri B, An. arthuri C e An. arthuri D. Portanto, como definida atualmente, An. arthuri não representa grupo monofilético, pois inclui táxons que deverão ser formalmente descritos em estudos futuros. CONCLUSÃO: As distribuições potenciais de espécies do Subgrupo Strodei foram propostas pela primeira vez. Cinquenta e cinco sequências do gene nuclear CAT e outras 46 sequências do gene nuclear CAD únicas foram recentemente caracterizadas para espécies do Subgrupo Strodei de Anopheles (Nyssorhynchus), confirmando a presença de pelos menos sete espécies, além de An. rondoni que não foi alvo deste estudo, mas de outros anteriores que confirmaram a validade da mesma. / Introduction Anopheles strodei sensu lato is an understudied subgroup of potential epidemiological importance, having been found naturally infected in Brazil with Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax and Plasmodium malariae. An. strodei s.l. is currently composed on 8 species: An. albertoi Unti, An. CP Form, An. rondoni (Neiva & Pinto), An. strodei Root, An. arthuri Unti and three other unnamed species that have been proposed by Bourke et al. (2013): An. arthuri B, An. arthuri C and An. arthuri D. Objectives As delineating species accurately is an essential goal of public health entomology, the objectives of this study were to: 1) Determine the phylogenetic relationships within the Strodei Subgroup and reaffirm or reject the hypothesis of the 3 new species (An. arthuri B, An. arthuri C and An. arthuri D) 2) Address the potential spatial distribution of species of the An. strodei subgroup to provide support for the candidate species in the Strodei Subgroup Methods Bayesian inference, which included DNA sequences of one mitochondrial and three nuclear protein coding genes: CO1, white, CAD and CAT, was used to determine the phylogenetic relationship within the group. To propose a species distribution, collection localities, along with climatic and geographic data were input into MAXENT. Results When analyzing the four molecular markers employed, support was found for allopatry in the Strodei Subgroup. The paraphyletic clade of An. arthuri was supported. Conclusion Potential species distributions of the Strodei Subgroup were addressed for the first time. Fifty-five unique CAT sequences and 46 unique CAD sequences were newly characterized.

Objetivo. Conhecer os aspectos ecológicos e biológicos da população de Mansonia humeralis em área sob impacto de inundação da Represa Porto Primavera, Município de Presidente Epitácio, Estado de São Paulo, Brasil, visando contribuir no entendimento da capacidade vetora desta população. A dominância dessa população entre outras espécies de culicídeos, que compõem a fauna local, representa preocupação em saúde pública, diante da possibilidade de transmissão de agentes patogênicos e de incômodo à população humana. Métodos. No sítio JB, culicídeos adultos foram coletados mensalmente por 15 meses, em cada um dos períodos anterior e posterior às duas inundações da Represa Porto Primavera, e por 24 meses após a 2ª inundação, na fazenda Santo Antônio. As técnicas de coleta utilizadas foram Aspiração pela manhã, Técnica Atrativa Humana de 24 horas, Armadilha de Shannon, Armadilha CDC e Técnica Atrativa Humana em torno do crepúsculo vespertino. Foram levadas em conta as influências de temperatura e chuva na variabilidade temporal da população estudada. Para a análise do impacto ambiental na população de Ma. humeralis foram utilizados índices de riqueza, diversidade, dominância, abundância e similaridade, testes estatísticos paramétricos, não paramétricos e correlação. Para a atividade hematofágica horária foi calculada a média de Williams, para a dispersão do raio de vôo a média harmônica e o modelo de regressão linear simples e para a paridade o qui-quadrado. Resultados. No sítio JB, no período do pré-impacto, Ma. humeralis representou 3,1%. No período pós-impacto após a 1ª inundação Ma. humeralis representou 59,6% e após a 2ª inundação 53,8%, indicando expressiva dominância dessa espécie e redução da riqueza e diversidade dos outros culicídeos. Houve maior densidade populacional de Ma. humeralis no outono e inverno no pré-enchimento, no inverno e na primavera após a 1ª inundação e na primavera após a 2ª inundação. Ma. humeralis posicionou-se entre as espécies mais abundantes e foi similar na fauna do período pós-impacto. A atividade hematofágica de Ma. humeralis foi nas 24 horas, mas de maior freqüência no intervalo do 1º pós-crepúsculo e das 18:00 às 24:00 horas. Na fazenda Santo Antônio a maior densidade populacional de Ma. humeralis ocorreu no verão e na primavera e as médias de riqueza, diversidade e dominância foram próximas aos valores encontrados no pré-enchimento do sítio JB, com a Armadilha de Shannon no crepúsculo vespertino. Em relação a paridade Ma. humeralis apresentou mais fêmeas oníparas no outono. Ma. humeralis apresentou baixa dispersão no raio de vôo. Conclusões. Com a construção da Usina Hidrelétrica de Porto Primavera e o represamento do Rio Paraná, estudos realizados em Presidente Epitácio, na margem esquerda do mesmo e do Rio do Peixe, mostraram redução na diversidade e riqueza da fauna adulta Culicidae, vista pela aplicação de diferentes técnicas de coleta. A dominância de Ma. humeralis mostrou que o impacto ambiental ocorrido na área favoreceu seu desenvolvimento indicado pela sua abundância e sua permanência na fauna similar, após a inundação. As densidades mais elevadas para Ma. humeralis, associada as plantas aquáticas, parece estar ligada com as águas renováveis dos grandes reservatórios. Evidenciou-se tendência antropofílica e atividades hematofágicas predominantemente crepuscular e noturna para Ma. humeralis. A baixa dispersão no raio de vôo encontrada em Ma. humeralis, não permite concluir que esta população não se dispersaria para maiores distâncias em busca de fontes sangüíneas. É relevante o monitoramento de certas populações de culicídeos favorecidas pela formação de represas, uma vez que há exposição freqüente do homem às margens dos rios, devido às atividades de pesca, caça, lazer e moradia. / Objective. To assess the ecological and biological aspects of the population of Mansonia humeralis, in area under the Porto Primavera Dam flooding impact, Presidente Epitácio municipality, São Paulo State, Brazil, in order to understand the vector capacity of this population. This population dominance over other Culicidae species that constitute the local fauna represents public health concern because of the possibility of transmission of pathogenic agents and nuisance to human populations. Methods. In the JB Ranch adults Culicidae were monthly captured for 15 months, on each of the previous and posterior periods of the two flooding events of the Porto Primavera Dam, and for the 24 months after the second flooding in the Santo Antônio Farm. Captures were undertaken by morning Aspiration, Human Attraction Technique for 24 hours, Shannon traps, CDC light traps and Human Attraction Technique near sunset. Temperature and rainfall were accounted for temporal variation of the studied population. To environmental impact analysis on Ma. humeralis population richness, diversity, dominance, abundance and similarity, indexes and parametric and non-parametric statistics and correlation were used, blood feeding time activity was calculated by the Williams\' Mean, harmonic mean and simple linear regression model to flight range dispersal were used and to parity, chi-square was used. Results. In the JB Ranch, on the pre-impact period, Ma. humeralis represented 3.1%. After the first flooding Ma. humeralis represented 59.6% and after the second flooding it represented 53.8%, indicating significative dominance of this species and richness and diversity reduction of other Culicidae. Larger population densities of Ma. humeralis were found in the autumn and winter on the pre-filling of the Dam, in the winter and the spring after the first flooding and in the spring after the second flooding. Ma. humeralis was among the more abundant species and was similar on the fauna post-impact period. Blood feeding time activity of Ma. humeralis was practically of 24 hours, but its higher frequency was on the first post-crepuscular interval and on the 18:00 to 24:00 hours interval. In the Santo Antônio Farm, the largest populational density of Ma. humeralis occurred in the summer and in the spring and the means for species diversity, richness and dominance were close to the values found in the pre-filling in the JB Ranch, with captures undertaken by Shannon traps during sunset. As for parity, more parous females were found in the autumn. Ma. humeralis presented low flight radius dispersal. Conclusions. The construction of the Porto Primavera Hydroelectric Power Plant and the dam of the Paraná River, in the studies conducted in Presidente Epitácio, on the left margin of this river and the Peixe River, presented a reduction on the diversity and richness of the Culicidae fauna undertaken by different capture techniques. The dominance of Ma. humeralis showed that the environmental impact on the area supported its development as indicated by its abundance and permanence on the similar fauna, after the two flooding events. The highest densities of Ma. humeralis, associated with aquatic plants, seems to be connected with the renewable waters of the great reservoirs. Ma. humeralis showed a tendency to anthropophily, with the blood feeding activity preferably at sunset and at night. The low flight dispersal, does not allow to conclude if Ma. humeralis would not fly higher distances in search of blood sources. It is relevant to monitor some Culicidae populations favoured by dam constructions, once there is frequent man exposition on the rivers\' edges, due to fishing activities, hunting, leisure and dwelling.

Introdução: Várias espécies de culicídeos são vetores de patógenos que causam graves doenças em humanos e outros animais. Objetivos: Investigar a presença e distribuição espacial de insetos vetores na Cidade Universitária, zona Oeste - São Paulo e os fatores ambientais associados a sua ocorrência. Metodologia: A área de estudo foi a Cidade Universitária Armando de Salles Oliveira (CUASO), que foi dividido em quatro partes. As coletas com ovitrampas e adultraps foram realizadas de dezembro de 2013 a novembro de 2014, mensalmente foram sorteados dez pontos de coleta por área, em cada área foram instaladas dez ovitrampas e dez adultraps. As coletas com aspirador ocorreram de janeiro a dezembro de 2014 e mensalmente foram sorteados dois pontos por área para realização das aspirações, totalizando oito pontos de coletas por mês, resultando em 120 minutos/mensal. Todo material coletado foi levado ao Laboratório de Entomologia em Saúde Pública da Faculdade de Saúde Pública da USP para análise. Resultados: De maneira geral as variáveis ambientais influenciaram na presença dos culicídeos coletados. O índice de densidade de ovos sofreu influência significativa da temperatura, enquanto que a pluviosidade afetou mais significativamente a presença do adulto. Em relação à aspiração Culex quinquefasciatus foi a espécie predominante em todas as coletas, seguida de Aedes albopictus e Aedes aegypti. Porém apenas Aedes albopictus e Aedes aegypti apresentaram correlação significativa com as variáveis climáticas. Conclusão: a presença de culicídeos vetores na Cidade universitária foi expressiva praticamente o ano inteiro, tornando esse local um meio propício para propagação de várias arboviroses, necessitando um monitoramento constante da presença desses vetores. / Introduction: Several species of culicidae are vectors of pathogens that cause serious diseases in humans and other animals. Objectives: To investigate the presence and spatial distribution of vector insects in Cidade Universitária, Oeste - São Paulo and the environmental factors associated with its ocurrence. Methodology: The study area was the University City Armando de Salles Oliveira (CUASO), which was divided into four parts. The collections with ovitraps and adultraps were carried out from December 2013 to November 2014, monthly there were drawn ten collection points per area, in each area were installed ten ovitraps and ten adultraps. The collections with eletric aspirators (12V battery) occurred from January to December 2014 and monthly there were drawn two points per area to make the aspirations, totaling eight collection points per month, resulting in 120 minutes / month. All collected material was taken to the Laboratory of Entomology in Public Health of the Faculty of Public Health of USP for analysis. Results: In general the environmental variables influenced the presence of culicids collected. The egg density index was significantly influenced by temperature, while rainfall affected the adult presence more significantly. Regarding aspiration Culex quinquefasciatus was the predominant species in all collections, followed by Aedes albopictus and Aedes aegypti. However, only Aedes albopictus and Aedes aegypti showed a significant correlation with climatic variables. Conclusion: the presence of culicids insects in the University City was expressive practically all year round, making this place a propitious medium for the propagation of several arboviruses, necessitating a constant monitoring of the presence of these vectors.