Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-08-03Bitstream added on 2014-06-13T18:41:12Z : No. of bitstreams: 1 caperucci_d_dr_rcla.pdf: 4394663 bytes, checksum: d9193aa7506e45c78a130332f4fb392f (MD5) / Este estudo trouxe a análise morfológica, histológica, ultraestrutural e citoquímica do intestino médio de fêmeas de Amblyomma cajennense e mostrou que esse órgão passa, por grandes modificações à medida que o processo de alimentação progride, tornando-se acentuadas nos indivíduos reinfestados. Do intestino médio de A. cajennense, partem dois pares de divertículos que se ramificam totalizando 8 ramos. Naquelas em jejum a porção anterior do intestino médio é enrugada devido à forte musculatura. Em algumas regiões do intestino médio, estruturas, descritas pela primeira vez, foram denominadas de nódulos, resultado dos espaços presentes entre as fibras musculares ao redor do intestino. Á medida que progridem as infestações a superfície dos divertículos em jejum, semi e ingurgitados de 1ª e 2ª infestações enruga-se extremamente estando nas semi de 3ª infestação menos enrugada e ingurgitadas de 3ª infestação mais lisa. A histologia do intestino médio em jejum mostrou a presença de epitélio pseudo-estratificado com células: generativas e digestivas. Nas semi e ingurgitadas de 1ª infestação e semi de 2ª infestação o epitélio sofre estratificação. Nas semi de 2ª infestação observou-se no epitélio a presença do terceiro tipo celular: a secretora. Nas ingurgitadas de 2ª infestação e nas semi e ingurgitadas de 3ª infestação o epitélio se desorganizou. No lúmen do intestino das semi submetidas à 1ª infestação, observou-se esferas membranosas; com estruturas fortemente coradas no interior. Outras com seu interior preenchido apenas por restos de citoplasma. A desorganização no epitélio intestinal de fêmeas fixadas em hospedeiros reinfestados sugeriu que os anticorpos liberados pelo hospedeiro contra o intestino dos carrapatos tenham agido nestes. A histoquímica detectou pouca proteína no epitélio intestinal daquelas em jejum... / This study showed the morphological, histological, ultrastructural and cytochemical analysis of the medium intestine of Amblyomma cajennense females since this organ goes through significant modifications as the feeding process progresses and these modifications are stronger in reinfested individuals. Two pairs of diverticulum emerge from A. cajennense medium intestine and are divided in eight branches. In the unfed females ones the anterior portion of the medium intestine is wrinkled due to the strong musculature. In some regions of the medium intestine, structures which were described for the first time were called nodules, resulting from the spaces between the muscular fibers around the intestine. As the infestations progress the surface of unfed, semi and engorged females diverticulum are extremely wrinkled, being smooth in the semi of 3rd infestation and smoother in engorged of 3rd infestation. The histology of the unfed medium intestine showed the presence of a pseudostratified epithelium with generative and digestive cells. In semi and engorged of 1st infestation and semi of 2nd infestation the epithelium suffered stratification. In semi of 2nd infestation the presence of a third cellular type was observed: the secretory one. In engorged of 2nd infestation and in semi and engorged of 3rd infestation the epithelium was disorganized. In semi submitted to 1st infestation the intestine lumen presented membranous spheres, with strongly stained structures. Others were filled by rests of cytoplasm. The disorganization of the intestinal epithelium of females fixed in reinfested hosts suggested that the antibodies released by the host against the ticks’ intestine had acted on them. Histochemistry revealed little protein in the intestinal epithelium in the unfed ones, unlike those of first infestation semi and engorged and of second semi, which had the epithelium strongly stained... (Complete abstract click electronic access below)

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2015-11-16T10:37:27Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1515494 bytes, checksum: bd156721affe3babff6b245f7cc1e560 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-16T10:37:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1515494 bytes, checksum: bd156721affe3babff6b245f7cc1e560 (MD5) Previous issue date: 2015-07-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Na maioria das espécies de mosquitos, as fêmeas precisam se alimentar do sangue de vertebrados para completar o desenvolvimento de seus ovos. No entanto, em mosquitos do gênero Toxorhynchites, os ovos se desenvolvem sem a dieta de sangue, e ambos, fêmeas e machos desse gênero se alimentam exclusivamente de substâncias açucaradas. O intestino médio é um órgão bem conhecido nos mosquitos que se alimentam de sangue, mas pouco se sabe a seu respeito em mosquitos não-hematófagos. No presente trabalho, foi investigada a morfologia detalhada do intestino médio de Toxorhynchites theolbadi utilizando-se métodos histoquímicos e ultraestruturais. O intestino médio de fêmeas e machos adultos de T. theobaldi consiste em um longo e fino do intestino médio anterior (AMG), e um curto e dilatado intestino médio posterior (PMG). O AMG é subdividido em AMG1 (curto, com pregas) e AMG2 (longo, sem pregas). Ramificações neuronais e células enteroendócrinas estão presentes no AMG e PMG, respectivamente. Em comparação com o PMG de mosquitos-fêmeas que se alimentam de sangue, o PMG de T. theobaldi é menor; no entanto, em ambos os mosquitos, o PMG parece ser a principal região de digestão e absorção de alimentos, e secreção de proteínas. As pregas presentes no AMG de T. theobaldi não foram relatadas em outros mosquitos; no entanto, a organização muscular do intestino médio e o controle endócrino do processo digestivo são conservados em ambos T. theobaldi e mosquitos hematófagos. / In most mosquito species, the females require a blood-feeding for complete egg development. However, in Toxorhynchites mosquitoes, the eggs develop without blood- feeding, and both females and males exclusively feed on sugary diets. The midgut is a well-understood organ in blood-feeding mosquitoes, but little is known about it in non- blood-feeding ones. In the present study, the detailed morphology of the midgut of Toxorhynchites theobaldi was investigated using histochemical and ultrastructural methods. The midgut of female and male T. theobaldi adults consists of a long, slender anterior midgut (AMG), and a short, dilated posterior midgut (PMG). The AMG is subdivided into AMG1 (short, with folds) and AMG2 (long, without folds). Nerve branches and enteroendocrine cells are present in AMG and PMG, respectively. Compared with the PMG of blood-feeding female mosquitoes, the PMG of T. theobaldi is smaller; however, in both mosquitoes, PMG seems be the main region of food digestion and absorption, and protein secretion. The epithelial folds present in the AMG of T. theobaldi have not been reported in other mosquitoes; however, the midgut muscle organization and endocrine control of the digestion process are conserved in both T. theobaldi and blood-feeding mosquitoes.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-06-12T14:38:25Z No. of bitstreams: 1 Fernanda Marques de Oliveira.pdf: 1318626 bytes, checksum: 025876d0f4a6762bc9bcd56ee26880a5 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-12T14:38:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fernanda Marques de Oliveira.pdf: 1318626 bytes, checksum: 025876d0f4a6762bc9bcd56ee26880a5 (MD5) Previous issue date: 2018-02-28 / Aedes aegypti is the main transmitter of dengue in 128 countries. Approximately 390 million people are infected and 20,000 of those die each year. The monoterpenes are efficient larvicides against this vector, among them the limonene acts in the midgut of the larvae, interfering in its development. The objective of the research was to evaluate the action of limonene, in sublethal concentration, on histology, histochemistry of midle intestine, and levels of neutral carbohydrates and total proteins in Ae. aegypti larvae. Bioassays of 3rd instar larvae were used. Limonene was used at the LC50 of 27 ppm. The treatments were: limonene and control (water and ethanol), analyzed after 12 and 24 h. The midgut of the larvae treated after 12h presented columnar cells, protuberances and cytoplasmic vacuolization and after 24h there was total disorganization of the epithelium. Histochemically, the treated larvae had higher levels of glycogen when compared to the control group as well as for total protein. Biochemically, there was a significant increase in total protein levels in the treated larvae in relation to the 12 h control and reduction in relation to the 24 h control. There was an increase and reduction in glycogen and total sugar levels in the treated larvae in relation to the controls. It is concluded limonene causes pathological changes in histology and histochemistry in the midgut of the Ae. aegypti larvae, besides interfering in proteins level, glycogen and total sugar. / O Aedes aegypti é o principal transmissor da dengue em 128 países. Aproximadamente 390 milhões de pessoas são infectadas e 20.000 dos afetados morrem ao ano. Os monoterpenos são eficientes larvicidas contra esse vetor, dentre eles o limoneno que atua no intestino médio das larvas, interferindo em seu desenvolvimento. O objetivo da pesquisa foi avaliar a ação do limoneno, em concentração subletal, sobre a histologia, histoquímica do intestino médio, e níveis de carboidratos neutros e proteínas totais em larvas do Ae. aegypti. Foram utilizados bioensaios de larvas 3o ínstar. O limoneno foi usado na CL50 de 27 ppm. Formaram-se os tratamentos: limoneno e controle (água e etanol), analisados após 12 e 24h. O intestino médio das larvas tratadas após 12h apresentou células colunares, protuberâncias e vacuolização citoplasmática e após 24h houve total desorganização do epitélio. Histoquimicamente as larvas tratadas apresentaram níveis superiores de glicogênio quando comparadas ao grupo controle, assim como para proteína total. Bioquimicamente, houve aumento significativo dos níveis de proteína total nas larvas tratadas em relação ao controle 12 h e redução em relação ao controle 24 h. Verificou-se, respectivamente, aumento e redução dos níveis de glicogênio e açúcar total nas larvas tratadas em relação aos controles. Conclui-se que o limoneno provoca alterações na histologia e histoquímica no intestino médio de larvas de Ae. aegypti, além de interferir nos níveis de proteínas, glicogênio e açúcar total.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-12-15T15:47:47Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 838499 bytes, checksum: 205879d615c3eb53836a006b577f876e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-15T15:47:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 838499 bytes, checksum: 205879d615c3eb53836a006b577f876e (MD5) Previous issue date: 2016-08-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A matriz peritrófica é formada por camadas não celulares de fibrilas de quitina associadas à glicoproteínas e proteoglicanas revestindo o alimento no intestino médio dos artrópodes, servindo como uma barreira entre o conteúdo alimentar e o epitélio do intestino médio. A permeabilidade da matriz peritrófica depende da presença de poros, que é uma das características funcionais. O objetivo foi determinar se a permeabilidade da matriz peritrófica altera ao longo do intestino médio e na presença do anticorpo antiperitrofina 55 em abelhas Melipona quadrifasciata (Apidae: Meliponini) e Apis mellifera (Apidae: Apini). A matriz peritrófica tem espessura média variável entre as regiões anterior e posterior do intestino médio de A. mellifera com 0.71 ±0.01 μm e 0.83 ±0.02 μm em nutridoras e 0.84 ±0.02 μm e 0.99 ±0.04 μm em campeiras, respectivamente. Em M. quadrifasciata a espessura foi de 0.66 ±0.02 μm na região anterior e 0,90 ±0.02 μm na região posterior de nutridoras, 0.68 ±0.01 μm na região anterior e 0.96 ±0.04 μm na região posterior de campeiras. Em operárias de A. mellifera, moléculas de dextran com peso molecular de 40 KDa atravessam a matriz peritrófica, enquanto aquelas ≥ 70 KDa não atravessam a matriz. Em M. quadrifasciata o limite de passagem ficou entre as moléculas de 4 e 40 KDa, sendo as de peso molecular 4 KDa, as únicas evidenciadas no espaço ectoperitrófico. Abelhas alimentadas com anticorpo anti-peritrofina 55 apresentaram aumento na permeabilidade das moléculas de dextran em ambas as espécies. A matriz peritrófica possui diferenças morfométricas quanto as regiões do intestino médio mas não apresenta diferença na porosidade ao longo do intestino, tendo porém, alteração na permeabilidade da matriz quando em presença do anticorpo anti-peritrofina 55. / The peritrophic matrix is formed by non-cell layers of chitin fibrils associated with glycoproteins and proteoglycans lining the food in the arthropods midgut, serving as a barrier between the food and the midgut epithelium. The permeability of the peritrophic matrix depends on the presence of pores, which is one of its functional features. The objective of this work was to determine the permeability of the matrix peritrophic and changes over midgut in the presence of antibody anti-peritrophin 55 in Melipona quadrifasciata (Apidae: Meliponini) and Apis mellifera (Apidae: Apini). The peritrophic matrix has average variable thickness between the anterior and posterior regions of the midgut of A. mellifera with 0.71 ± 0.01 μm and 0.83 ± 0.02 μm in nurturing and 0.84 ± 0.02 μm and 0.99 ± 0.04 μm in foragers, respectively. In M. quadrifasciata the thickness was 0.66 ± 0:02 μm in the anterior and 0.90 ± 0:02 μm in the posterior region of nurturing, 0.68 ± 0.01 μm in the anterior and 0.96 ± 0:04 μm in the posterior region of foragers. In workers of A. mellifera, dextran molecules with molecular mass of 40 KDa cross the peritrophic matrix, while those ≥ 70 KDa do not pass through the matrix. In M. quadrifasciata, the passage limit was among molecules of 4 and 40 KDa, being the 4 KDa, the only evident in ectoperitrophic space. Bees fed with the antibody anti- peritrophin 55 show an increase in the permeability of dextran molecules in both species. The peritrophic matrix has morphological differences in the midgut regions but shows no difference in porosity throughout the intestine, and however, show changes in permeability of the matrix in presence of antibody anti-peritrophin 55.

Esse trabalho investigou as principais carboidrases já descritas em Lepidoptera e principalmente as enzimas relacionadas com hidrólise de sacarose presentes na hemolinfa e no intestino do sexto instar larval de Lonomia obliqua. Avaliou também o efeito das diferentes dietas Eriobotrya japonica, Psidium guajava, Mangifera indica e Alchornea ssp sobre as atividades das carboidrases presentes no sistema circulatório e no sistema digestório dessa lagarta. As pectinases e celulases foram identificadas somente no intestino, porém a amilase, a α-glucosidase, a β-glucosidase, a α-fucosidase e a β-fructosidase foram detectadas também na hemolinfa dessa lagarta. Os géis nativos e os pHs ótimos indicam que há distintas carboidrases na hemolinfa e no intestino de Lonomia obliqua. Alterações nas dietas afetam somente as carboidrases intestinais. A sacarose das folhas foi hidrolisada pela ação conjunta da α-glucosidase e da β-frucosidase. A investigação das carboidrases de Lonomia obliqua contribuirão para o desenvolvimento de medidas de controle desse inseto. / This work investigated the main carbohydrases already described in Lepidoptera and especially the enzymes present in the hemolymph and intestine of the 6th instar of Lonomia obliqua related to the hydrolysis of sucrose. It has also evaluated the effect of different diets Alchornea ssp, Eriobotrya japonica, Mangifera indica and Psidium guajava, on the activities of the carbohydrases present in the circulatory and digestive system of this caterpillar. Pectinases and cellulases were identified in the midgut only, but amylase, α-glucosidase, β-glucosidase, α-fucosidase and β-fructosidase were detected in both hemolymph and midgut of this caterpillar. Native gels and effect of pH indicated that there are distinct carboidrases in the hemolymph and the midgut of Lonomia obliqua. Diet change have affected the digestive carbohydrases only. The sucrose in the leaves was hydrolyzed by the combined action of α-glucosidase and β-frucosidase. The investigation of the carboidrases of Lonomia obliqua can contribute to the development of control strategies to this insect.

Orientador: Daniela Carvalho dos Santos / Banca: Hélio Conte / Banca: Daniela Oliveira Pinheiro / Resumo: Ceraeochrysa claveri, popularmente conhecido como bicho lixeiro, é um inseto predador de ovos e larvas de insetos pragas encontrados em diferentes ecossistemas agrícolas. O bicho lixeiro se destaca por apresentar potencial para ser utilizado em programas de Controle Biológico, uma vez que é predador na fase de larva, apresenta curto tempo de desenvolvimento, fácil criação massal e alto potencial reprodutivo na fase adulta. Com o propósito de aprofundar o conhecimento na morfologia e ultraestrutura do intestino médio de C. claveri, o objetivo deste trabalho foi caracterizar histológica e ultraestruturalmente o intestino médio de C. claveri no terceiro ínstar de larva, pupa e adulto. Objetivamos, ainda, avaliar o efeito da ingestão do óleo de nim (Azadirachta indica A. Juss) (Meliaceae) sobre as células epiteliais do intestino médio de larva de terceiro ínstar, pupa e adulto de C. claveri. Ovos de Diatraea saccharalis foram tratados com óleo de nim em três diferentes concentrações (0,5; 1 e 2%) e oferecidos como alimento a larvas de C. claveri durante todo período larval. Após coleta e fixação do intestino médio de larva, pupa e adulto (grupos controle e tratados com óleo de nim), as regiões do mesêntero (anterior, média e posterior) foram processadas para análise histológica (citoquímica e imunocitoquímica) e para análise ultraestrutural. Nossos resultados mostraram que o intestino médio de C. claveri, para as três fases do ciclo de vida, é do tipo pseudoestratificado, composto por células colunares, regenerativas e endócrinas; diferenças morfológicas e ultraestruturais no epitélio permitem caracterizar duas regiões, anterior e posterior, atuando respectivamente na secreção e absorção; região média apresenta características... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Ceraeochrysa claveri, popularly known as trash-carriers is a predator insect of eggs and larvae of insect pests found in different agroecosystems. The trash-carriers stands out because it has the potential to be used in biological control programs, once it is a predator in the larval stage; it has short developmental times, easy mass-rearing and high reproductive potential in adult stage. In order to deepen the knowledge on the morphology and ultrastructure of the midgut of C. claveri, the aim of this study was to characterize histological and ultrastructurally the midgut of C. claveri in the third instar larva, pupa and adult. We also evaluate the effect of ingestion of neem oil (Azadirachta indica A. Juss) (Meliaceae) on the midgut epithelial cells of third instar larva, pupa and adult of C. claveri. Diatraea saccharalis eggs were treated with neem oil at three different concentrations (0.5, 1 and 2%) and provided as food to larvae of C. claveri throughout the larval period. After collected and fixed the midgut of larva, pupa and adult (control and treated groups with neem oil), the midgut regions (anterior, middle and posterior) were processed for histological (cytochemistry and immunocytochemistry) and for ultrastructural analysis. Our results showed that the midgut of C. claveri for the three phases of the life cycle is of pseudostratified type, consisting of columnar cells, regenerative cells, and endocrine cells, morphological and ultrastructural differences in the epithelium allowed to characterize two regions, the anterior and posterior, they working mainly in the secretion and absorption respectively; the middle region has intermediate characteristics, and it is considered a transitional area. The ingestion of neem oil in the larval stage of C. claveri showed to be toxic to this predator, causing ultrastructural alterations... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-24Bitstream added on 2014-06-13T18:59:57Z : No. of bitstreams: 1 scudeler_el_me_botib.pdf: 6021367 bytes, checksum: 931a3db0cfc7da410cba6a737f5365bf (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Ceraeochrysa claveri, popularmente conhecido como bicho lixeiro, é um inseto predador de ovos e larvas de insetos pragas encontrados em diferentes ecossistemas agrícolas. O bicho lixeiro se destaca por apresentar potencial para ser utilizado em programas de Controle Biológico, uma vez que é predador na fase de larva, apresenta curto tempo de desenvolvimento, fácil criação massal e alto potencial reprodutivo na fase adulta. Com o propósito de aprofundar o conhecimento na morfologia e ultraestrutura do intestino médio de C. claveri, o objetivo deste trabalho foi caracterizar histológica e ultraestruturalmente o intestino médio de C. claveri no terceiro ínstar de larva, pupa e adulto. Objetivamos, ainda, avaliar o efeito da ingestão do óleo de nim (Azadirachta indica A. Juss) (Meliaceae) sobre as células epiteliais do intestino médio de larva de terceiro ínstar, pupa e adulto de C. claveri. Ovos de Diatraea saccharalis foram tratados com óleo de nim em três diferentes concentrações (0,5; 1 e 2%) e oferecidos como alimento a larvas de C. claveri durante todo período larval. Após coleta e fixação do intestino médio de larva, pupa e adulto (grupos controle e tratados com óleo de nim), as regiões do mesêntero (anterior, média e posterior) foram processadas para análise histológica (citoquímica e imunocitoquímica) e para análise ultraestrutural. Nossos resultados mostraram que o intestino médio de C. claveri, para as três fases do ciclo de vida, é do tipo pseudoestratificado, composto por células colunares, regenerativas e endócrinas; diferenças morfológicas e ultraestruturais no epitélio permitem caracterizar duas regiões, anterior e posterior, atuando respectivamente na secreção e absorção; região média apresenta características... / Ceraeochrysa claveri, popularly known as trash-carriers is a predator insect of eggs and larvae of insect pests found in different agroecosystems. The trash-carriers stands out because it has the potential to be used in biological control programs, once it is a predator in the larval stage; it has short developmental times, easy mass-rearing and high reproductive potential in adult stage. In order to deepen the knowledge on the morphology and ultrastructure of the midgut of C. claveri, the aim of this study was to characterize histological and ultrastructurally the midgut of C. claveri in the third instar larva, pupa and adult. We also evaluate the effect of ingestion of neem oil (Azadirachta indica A. Juss) (Meliaceae) on the midgut epithelial cells of third instar larva, pupa and adult of C. claveri. Diatraea saccharalis eggs were treated with neem oil at three different concentrations (0.5, 1 and 2%) and provided as food to larvae of C. claveri throughout the larval period. After collected and fixed the midgut of larva, pupa and adult (control and treated groups with neem oil), the midgut regions (anterior, middle and posterior) were processed for histological (cytochemistry and immunocytochemistry) and for ultrastructural analysis. Our results showed that the midgut of C. claveri for the three phases of the life cycle is of pseudostratified type, consisting of columnar cells, regenerative cells, and endocrine cells, morphological and ultrastructural differences in the epithelium allowed to characterize two regions, the anterior and posterior, they working mainly in the secretion and absorption respectively; the middle region has intermediate characteristics, and it is considered a transitional area. The ingestion of neem oil in the larval stage of C. claveri showed to be toxic to this predator, causing ultrastructural alterations... (Complete abstract click electronic access below)

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-12-16T15:29:37Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2828448 bytes, checksum: 513da0881e21261964c7b5d328b7b603 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-16T15:29:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2828448 bytes, checksum: 513da0881e21261964c7b5d328b7b603 (MD5) Previous issue date: 2016-07-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Flebotomíneos (Diptera: Psychodidae: Phlebotominae) são importantes vetores das leishmanioses, doenças causadas por protozoários do gênero Leishmania, distribuídos em dois grandes gêneros de importância médica: Phlebotomus no Velho Mundo e Lutzomyia no Novo Mundo. Após a ingestão de sangue o bolo alimentar é envolto por uma matriz quitino-proteica, chamada matriz peritrófica (MP). Em uma infecção por Leishmania, o intestino do vetor tem papel crucial, pois, para se estabelecer, o protozoário deve escapar do espaço endoperitrófico e se fixar na parede do intestino para evitar sua eliminação durante a excreção. Nesse sentido, a MP funciona como barreira ao desenvolvimento do parasito, sendo um componente importante na competência vetorial de flebotomíneos. Neste trabalho foi estudado o efeito da alimentação com células sanguíneas reconstituídas com anti-soros específicos para duas proteínas associadas à MP, a quitinase PpChit1 e a peritrofina PpPer2, na morfologia da MP de fêmeas de Phebotomus papatasi. A MP foi avaliada por microscopia de luz (ML) e microscopia eletrônica de transmissão (MET) (24, 42–46, 48 e 72 h após a alimentação), microscopia de força atômica (MFA) (30 h após a alimentação) e microscopia confocal (WGA-FITC) (72 horas após a alimentação). Nesta mesma espécie, também foi estudado a inibição da expressão de PpChit1 pela técnica de RNA de interferência (RNAi) após a injeção de dsPpChit1 (24, 48, 72 e 96 h após a alimentação sanguínea). Adicionalmente, o desenvolvimento pós embrionário do intestino médio foi investigado nas seguintes fases/estágios: larvas de 4o instar com três dias (L4-3) e com cinco dias (L4-5) após a ecdise, pré-pupa, pupa 24 horas e 72 horas após início da metamorfose e adulto recém-emergido, nos flebotomíneos Lutzomyia longipalpis e P. papatasi. Amostras de intestinos médios dissecados de cada fase foram avaliados por microscopias de luz (ML), eletrônica de transmissão (MET) e fluorescência. Verificamos que a alimentação de fêmeas de P. papatasi com antisoros específicos para PpChit1 e PpPer1, levou a um aumento na espessura da MP 72 h após a alimentação, bem como um aumento na amplitude da rugosidade na superfície da MP 30 h após a alimentação. A detecção de quitina com WGA-FITC, identificou que 72 h após a alimentação com anti-PpChit1, o conteúdo de quitina associada a MP no intestino médio do inseto era maior que nos insetos alimentados com soro naïve. A alimentação com antisoros específicos contra as proteínas associadas a MP (PpChit1 e PpPer2) afetam a cinética de maturação e degradação da MP, evidenciando o papel dessas proteínas na estruturação da MP de P. papatasi. A injeção de dsPpChit1 levou a uma reducão nos níveis de transcritos em todos os horários analisados, sendo esses resultados o primeiro passo para contribuir futuramente para o entendimento do papel de PpChit1 na MP P. papatasi. As mudanças morfológicas no intestino médio das duas espécies tiveram início no quarto instar larval, no entanto, em P. papatasi o processo degenerativo das células epiteliais iniciou um pouco antes em L4-3 enquanto que em L. longipalpis em L4-5. Durante a metamorfose, células regerativas foram vistas na base do epitélio, nas duas espécies. Além disso, as marcações positivas para a histona fosforilada H3, em ambas, sugerem que as células regenerativas se dividem durante o processo de remodelamento do intestino médio em flebotomíneos. A histólise do epitélio intestinal larval se dá possivelmente por autofagia, pela presença de numerosos vacúolos autofágicos, bem como por marcações positivas para a proteína LC3, entretanto, a detecção de caspase-3 sugere que a apoptose possa acontecer durante o processo de troca do epitélio larval pelo do adulto. Finalmente, o estudo do remodelamento do intestino médio em P. papatasi e L. longipalpis mostrou de forma inédita que o processo é conservado nas duas espécies, se diferenciando apenas no tempo do início do processo degenerativo entre as duas espécies. Os conhecimentos relacionados as proteínas da MP, bem como ao desenvolvimento pós-embrionário do intestino médio em flebotomíneos, o qual tem papel fundamental na transmissão de Leishmania, são importantes para uma melhor compreensão do inseto vetor. / Sand flies (Diptera: Psychodidae: Phlebotominae) are vectors of Leishmaniasis, a disease caused by parasitic protozoa of the genus Leishmania. They are distributed in two large medical importance genus: Phlebotomus from the Old World, and Lutzomyia from the New World. Leishmania suprapilarian life cycle in the vector midgut begins when insect females intake infected blood with amastigotes forms from the vertebrate host. After the blood meal, the food bolus is surrounded by a chitin-protein layer, called peritrophic matrix (PM). Sand fly midgut plays a crucial role during a Leishmania infection. In order to survive and develop, Leishmania parasites must escape from endoperitrophic space and attach themselves in the intestinal epithelium, preventing excretion with the fecal pellets. The PM can act as a barrier to parasite development, working as a relevant component in the vector competence. This study investigated the effects of reconstituted blood cells feeding with specific antisera targeting two PM associated proteins, chitinase PpChit1 and peritrophin PpPer2 in the PM formation. The PM was studied under light (LM) and transmission electron (TEM) microscopies (24, 42-46 , 48 and 72 h after blood meal), under atomic force microscopy (AFM) (30 h after blood meal) and under confocal microscopy (WGA–FITC) (72 hours after blood meal) in Phlebotomus papatasi. PpChit1 knockdown was performed in P. papatasi by means RNA interference technique (RNAi) after dsPpChit1 injection (24, 48, 72 and 96 h after blood meal). Additionally, the post-embryonic development of the midgut was investigated in the following life-stages: 4th instar larvae three days (L4-3) and five days (L4-5) after molting, pré-pupae, pupae 24 hours and 72 hours, and newly emerged adult in Lutzomyia longipalpis and P. papatasi. Midgut samples from each stage were dissected and assessed by LM, TEM and immunofluorescence. P. papatasi females feeding with anti-PpChit1 and anti-PpPer1 had the PM thickness increased at 72 h after blood meal, as well as a PM roughnes’s amplitude increase at 30 hr after feeding. WGA-FITC staining indicates that PM chitin content on insect midgut was higher in treated individuals than those treated with naïve serum. The feeding of P. papatasi females with red blood cells reconstituted with antisera targeting PM associated proteins (PpChit1 and PpPer2) affected the PM maturation and degradation, indicating the role of these proteins on PM structure. Injection of dsPpChit1 led to significant decrease in corresponding mRNA levels. These results are the first step on contribution to understand PpChit1 role in P. papatasi PM. The midgut metamorphosis in of the two species begins in the 4th instar, however, in P. papatasi, epithelial cells degeneration started shortly, in L4-3, while in L. longipalpis it began in L4-5. Larval gut epithelium degeneration was intensified in pré-pupa in both species by the presence of numerous autophagic vacuoles. During metamorphosis, midgut remodeling occurs by differentiation of stem or regenerative cells to replace larval digestive cells. Regenerative cells were seen at the epithelium basal region in both species. Furthermore, the detection of phosphohistone H3- positive cells suggested that the stem cells can divide during the remodeling process of the midgut. Stem cells in proliferation and differentiation were seen forming the new digestive epithelium in the pupae. Larval midgut replacement possibly occurs by autophagy by the presence of numerous autophagic vacuoles, as well as by the detection of LC3-positive cells. Additionally, cells positive for caspase-3 suggested that the apoptosis may occur during the elimination of larval epithelium. Finally, the study of midgut remodeling in P. papatasi and L. longipalpis was showed for the first time, and this process is conserved in these species, differing only in the time of th beginning of the degenerative processof the midgut epithelium. The study of MP formation as well as the post-embryonic development of the midgut of sandflies represent important steps for a better vector biology understanding.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:30:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3514510 bytes, checksum: 25d1dc8edd8426770340b8188e8a7bec (MD5) Previous issue date: 2007-02-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This work evaluated ultrastrucural alterations in the midgut of Brontocoris tabidus Signoret (Heteroptera: Pentatomidae) caused by the starvig or feeding in differents periods, this condition can occur in its natural enviroment, being those important factors for the understanding the evolution of the alimentary habit of that predator. Adults of the B. tabidus received differents treatments (starvation or feeding with plant and prey) and their midgut were dissected and divided in anterior, medium and posterior, which were processed and analyzed in light and trasmission eletronic microscope. The epitelium of the midgut of B. tabidus is formed by digestive and regenerative cells. The anterior portion of the midgut of B. tabidus starved or feeding on eucalyptus leaves, didn t present glycogen storage. Brontocoris tabidus fed on plant have multivesicular bodies in this region and spherocrystals after six hour the feeding with prey. The microvilli of the medium midgut of B. tabidus are longer than ones of the anterior and posterior midgut. The posterior midgut differs of the other two parts, for presenting great amount the mitochondria, rough endoplasmatic reticule and double membrane vesicules in the apical region six hours after feeding. The anterior, medium and posterior regions of the midgut of B. tabidus synthesize digestive enzimes, absorb eletrolytes and nutrients, stored and excrete substances. / Este trabalho avaliou alterações ultra-estruturais no intestino médio de Brontocoris tabidus Signoret (Heteroptera: Pentatomidae) causado pelo jejum ou alimentação em diferentes períodos, condição esta que pode ocorrer em seu ambiente natural, sendo esses fatores importantes para o entendimento da evolução do hábito alimentar desse predador. Adultos de B. tabidus receberam diferentes tratamentos (jejum ou alimentado com planta e presa) e seu intestino médio foi dissecado e dividido em anterior, mediano e posterior, as quais foram processadas e analisadas em microscópio de luz e eletrônico de transmissão. O epitélio do intestino médio de B. tabidus é formado por células digestivas e regenerativas. A porção anterior do intestino médio de B. tabidus em jejum ou alimentado com folhas de eucalipto, não apresentou reservas de glicogênio. B. tabidus alimentado com planta apresentou corpos multivesiculares nessa região e esferocristais seis horas após a alimentação com presa. As microvilosidades do intestino médio mediano de B. tabidus são mais longas que as da região anterior e posterior. O intestino médio posterior difere das outras duas partes, por apresentar grande quantidade de mitocôndrias, retículo endoplasmático rugoso e vesículas de dupla membrana na região apical após seis horas de alimentação. As regiões anterior, mediana e posterior do intestino médio de B. tabidus sintetizam enzimas digestivas, absorvem eletrólitos, nutrientes, estocam e excretam substâncias.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-03-21T11:45:18Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1176471 bytes, checksum: 070e4cf7c2176f1dece9bc1c70cfe745 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-21T11:45:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1176471 bytes, checksum: 070e4cf7c2176f1dece9bc1c70cfe745 (MD5) Previous issue date: 2003-07-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Este trabalho identificou os sítios de síntese da membrana peritrófica larvas da abelha Melipona quadrifasciata anthidioides (Lepeletier) (Hymenoptera, Meliponini). Para isto uma peritrofina de larvas de 4o instar foi isolada e usada para produzir anticorpo policlonal em camundongos. Os anticorpos foram utilizados em experimentos para imunolocalizações desta peritrofina na membrana peritrófica e no ventrículo através de técnicas de imunohistoquímica e imunocitoquímica com o auxílio de microscopia de luz e eletrônica. Foi realizado também um experimento para detecção de quitina na composição química da membrana peritrófica de larvas através da técnica WGA/FITC. Os resultados mostraram que a membrana peritrófica de larvas de 4o instar possui o aspecto de um filme peritrófico, entretanto apresentando um material gelatinoso sobre sua superfície externa. Quanto à imunolocalização da peritrofina no ventrículo de larvas pôde-se evidenciar que a mesma é secretada através das microvilosidades das células epiteliais ao longo de todo o ventrículo, porém sendo a porção anterior deste órgão o principal sítio de produção. Os mesmos experimentos acima foram realizados com ventrículos de abelhas adultas, mas os resultados foram negativos em relação à reação antígeno-anticorpo anti-peritrofina. Os resultados obtidos na detecção de quitina foram positivos somente na membrana peritrófica, pois este polissacarídeo no interior da célula possui constituição diferente daquela após ser secretado. Finalmente, considerando a presença da peritrofina em todo o epitélio ventricular, conclui-se que a membrana peritrófica em larvas de Melipona quadrifasciata anthidioides corresponde ao tipo-I. / This work identified the synthesis sites of the peritrophic membrane in larvae of the stingless bee Melipona quadrifasciata anthidioides (Lepeletier) (Hymenoptera, Meliponini). A peritrophin from 4th instar larvae was isolated and used to produce polyclonal antibody in mouse. This antibody was used in immunolocalization tests of this peritrophin in the peritrophic membrane and midgut epithelium for both light and electron microscopies. Detection of chitin in the peritrophic membrane was performed with WGA/FITC. Results showed that the peritrophic membrane from 4th instar larvae has the aspect of a peritrophic film, but with a gelatinous material on its outer surface. The peritrophin-55 kDa, in the midgut larvae, was found to be secreted through epithelial cells microvilli along the whole midgut, even so being the anterior end of the midgut the main production site. The same experiments were performed with midgut of adult bees, but the results were negative in relation to the antibody anti-peritrophins. The results to chitin detection were only positive in the peritrophic membrane. These results are discussed in relation to peritrophic membrane data available to the insects. Finally, considering the peritrophin presence in the whole midgut epithelium, it is addressed that the peritrophic membrane in larvae of Melipona quadrifasciata anthidioides is of the type-I.